CN103088107A - 一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法及测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。该方法避免了传统筛选方法效率低，筛选劳动强度大等缺点，大大提高了絮凝剂产生菌的筛选效率，利用该方法从样品中筛选得到高效产絮凝剂的菌株。
Description
技术领域
本发明属于生物絮凝领域，具体涉及一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法及测定方法。
背景技术
絮凝技术是目前国内外一种既经济又简便的高效水处理技术，生物絮凝剂因其具有超强的絮凝能力，而受到广泛的关注，因此是一种有着良好发展前景的新型絮凝剂。目前国内外的生物絮凝剂主要通过筛选高产絮凝剂菌株获得，我国生物絮凝剂的开发仍处于一个相对落后的阶段，生物絮凝剂的生产成本较高，针对性不强，环境适应性差，因此筛选高产絮凝剂菌株从而获得生物絮凝剂应用的前景广阔。
目前关于絮凝剂产生菌的筛选，主要将分离得到的菌株进行摇瓶发酵，并在利用高岭土悬浮液在三角瓶中筛选菌株。此方法，需要配置大量的絮凝剂发酵培养基和高岭土悬浮液，消耗大量的人力物力。筛选的过程中，通常利用分光光度计逐一检测样品的絮凝效果，耗时长，检测效率低。因此，为了提高凝剂产生菌的筛选效率，必须建立一种絮凝剂产生菌的高效筛选方法。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法。
本发明提供的筛选方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。
同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。絮凝活性计算公式为：絮凝率=(OD对照－OD样品)/OD对照×100%。
其中，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl2。
在本发明一个实施方案中，利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-10mL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。
其中，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH2PO41-3g/L，K2HPO43-7g/L，尿素0.2-1g/L，酵母膏0.2-1g/L，(NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4·7H2O0.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L，pH7.0-7.4。
另一方面，本发明还提供一种水产用絮凝剂产生菌絮凝率的测定方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。
同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。絮凝活性计算公式为：絮凝率=(OD对照－OD样品)/OD对照×100%。
其中，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl2。
在本发明一个实施方案中，利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-10mL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。
其中，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH2PO41-3g/L，K2HPO43-7g/L，尿素0.2-1g/L，酵母膏0.2-1g/L，(NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4·7H2O0.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L，pH7.0-7.4。
本发明对现有絮凝剂产生菌的筛选方法或水产用絮凝剂产生菌絮凝率的测定方法进行改进，建立了一种快速、高效、经济的获得絮凝剂产生菌的方法。该方法的产絮凝剂发酵培养过程和絮凝剂产生菌筛选过程，全部采用1-10mL EP管代替传统三角瓶，采用96孔板和酶标仪替代传统的分光光度计测定光密度值。本发明方法避免了传统筛选方法效率低，成本大，筛选劳动强度大等缺点，大大提高了絮凝剂产生菌的筛选效率，利用该方法从样品中可以筛选得到高效产絮凝剂的菌株。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
将50株从污泥中分离到的菌株，分别接种于装有1mL絮凝剂发酵培养基（葡萄糖20g/L，KH2PO42g/L，K2HPO45g/L，尿素0.5g/L，酵母膏0.5g/L，(NH4)2SO40.2g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，NaCl0.1g/L，pH7.0-7.4。）的2mL EP管中，37℃，180r/min进行发酵培养24小时。用无菌水将培养后的50株菌的OD值调节一致。利用高岭土制成高岭土悬浮液(蒸馏水1L，高岭土4g，CaCl20.2g)，将20μL发酵液加入装有1mL高岭土悬浮液的2mL EP管中，在200r/min的摇床中震荡2min，静置10min，用移液枪吸取1/2处深度的液层100μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性，絮凝活性以絮凝率表示。絮凝率=(OD对照－OD样品)/OD对照×100%。
实验结果如下表：
表150株不同来源的菌株絮凝活性
通过本方法快速高效的筛选出高产絮凝剂的菌株，在50株菌中筛选出了5株（8#，17#，34#，41#，48#）絮凝率在60%以上的菌株。使用本方法的操作过程全部采用1-10mL EP管代替传统三角瓶，采用96孔板和酶标仪替代传统的分光光度计测定光密度值，大大提高了筛选效率，降低劳动强度，节省了成本，为快速筛选高产絮凝剂菌株进而获得生物絮凝剂提供基础。
实施例2
将实施例1筛选出的5株（8#，17#，34#，41#，48#）高产絮凝剂的菌株和市售的具有絮凝能力的菌株CICC10487，分别接种于装有5mL絮凝剂发酵培养基（葡萄糖20g/L，KH2PO42g/L，K2HPO45g/L，尿素0.5g/L，酵母膏0.5g/L，(NH4)2SO40.2g/L，MgSO4·7H2O0.2g/L，NaCl0.1g/L，pH7.0-7.4。）的10mL EP管中，37℃，180r/min进行发酵培养24小时。用无菌水将培养后的6株菌的OD值调节一致。利用高岭土制成高岭土悬浮液(蒸馏水1L，高岭土4g，CaCl20.2g)，将100μL发酵液加入装有5mL高岭土悬浮液的10mL EP管中，在200r/min的摇床中震荡2min，静置10min，用移液枪吸取1/2处深度的液层100μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。实验结果如下表：
表25株高产絮凝剂的菌株和市售絮凝剂产生菌株絮凝活性比较
通过本方法快速高效的将筛选出的高产絮凝剂的菌株与市售的絮凝剂产生菌CICC10487产絮凝剂能力进行了比较，本方法筛选效率高，大大提高了筛选效率，降低劳动强度。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。
2.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl2。
3.如权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，发酵液的培养方法为：利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-10mL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。
4.如权利要求3所述的筛选方法，其特征在于，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH2PO41-3g/L，K2HPO43-7g/L，尿素0.2-1g/L，酵母膏0.2-1g/L，(NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4·7H2O0.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L，pH7.0-7.4。
5.一种水产用絮凝剂产生菌絮凝率的测定方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。
6.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl2。
7.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于，发酵液的培养方法为：利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-10mL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。
8.如权利要求7所述的测定方法，其特征在于，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH2PO41-3g/L，K2HPO43-7g/L，尿素0.2-1g/L，酵母膏0.2-1g/L，(NH4)2SO40.1-0.5g/L，MgSO4·7H2O0.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L，pH7.0-7.4。
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| CN104990878A (zh) * | 2015-07-02 | 2015-10-21 | 上海应用技术学院 | 一种绿色微囊藻细胞抑制率的测定方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103173378A (zh) * | 2012-12-24 | 2013-06-26 | 新疆德蓝股份有限公司 | 一种快速筛选微生物絮凝剂产生菌的方法 |
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| 王镇: "几株絮凝剂产生菌的特性研究", 《微生物学报》 * |
| 陶然 等: "微生物絮凝剂产生菌的筛选、鉴定及其培养条件的优化研究", 《中国生物工程杂志》 * |
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| CN104990878A (zh) * | 2015-07-02 | 2015-10-21 | 上海应用技术学院 | 一种绿色微囊藻细胞抑制率的测定方法 |
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