CN103088093A - 一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法 - Google Patents
一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103088093A CN103088093A CN2013100061744A CN201310006174A CN103088093A CN 103088093 A CN103088093 A CN 103088093A CN 2013100061744 A CN2013100061744 A CN 2013100061744A CN 201310006174 A CN201310006174 A CN 201310006174A CN 103088093 A CN103088093 A CN 103088093A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus cereus
- antibacterial
- antibacterial albumen
- albumen
- crude product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 67
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title abstract description 12
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 20
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 17
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 8
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 7
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 claims description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 5
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims description 5
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 abstract description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 abstract 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 8
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 3
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 3
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 3
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 3
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 229940032362 superoxide dismutase Drugs 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 206010070545 Bacterial translocation Diseases 0.000 description 1
- 241001660259 Cereus <cactus> Species 0.000 description 1
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 1
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 1
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 1
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 1
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000003570 air Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003453 ammonium sulfate precipitation method Methods 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007375 bacterial translocation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法，利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus(CGMCC NO.4348），通过微生物发酵培养出蜡样芽孢杆菌发酵液，并利用硫酸铵分级沉淀方法提取出抑菌蛋白粗品；再利用葡聚糖凝胶柱来进一步纯化抑菌蛋白粗品，并将其对真菌病害进行抑菌活性检测。本发明操作方便、工艺简单、成本低廉，可以显著提高其发酵液中抑菌蛋白的抑菌能力。
Description
技术领域
本发明属于生物工程领域，具体涉及微生物发酵，生物制药，发酵产物的提取、分离和纯化工艺，特别涉及一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法。
背景技术
蜡样芽孢杆菌（Bacillus.cereus简称B.cereus）广泛地分布在在自然界中，在空气、尘埃、土壤、水及植物中都可以分离出蜡样芽孢杆菌。蜡样芽孢杆菌活菌制剂是我国农业部正式批准生产的微生物制品，具有调节宿主微生态平衡的功能，广泛应用于农业、饲料、医药保健和食品等领域。然而，此制剂也和其他微生态制剂一样，存在以下几个问题：生产过程中温度、压片等因素导致活菌数减少有效期内活菌量不稳定，产品有效期不长、货架期短等。因此，提高蜡样芽孢杆菌制剂的活菌数对产品质量的提高具有重大意义，也为工业化生产蜡样芽孢杆菌活菌制剂奠定了基础。蜡样芽孢杆菌可单独制成微生态制剂，用于胃肠道疾病的防治、降血脂、抗衰老、防止细菌移位、抗肿瘤及自身免疫性疾病防治，如能效改善肝硬化患者肠道菌群失调，并可降低血清LBP浓度，可以作为肝硬化患者的辅助治疗措施。
蜡样芽孢杆菌不但其本身可以被制成微生物菌剂和微生物肥料，它还能通过体内的SOD酶，调节作物细胞微生境，维持细胞正常的生理代谢和生化反应，提高抗逆性，加速生长，提高产量和品质。有益蜡样芽孢杆菌具有分泌各种蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、超氧化物歧化酶（SOD）、抗菌素及多种氨基酸、维生素等营养物质的能力，因此可以被广泛应用于饲料、农业、医药保健和食品等各领域。研究表明：蜡样芽孢杆菌的抑菌活性物质主要是其活菌的生理与代谢活动而产生的抗菌蛋白、多肽类及几丁质酶等多种物质。但蜡样芽孢杆菌制剂普遍存在产品有效期不长、货架期短等问题。
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有的技术中存在的缺陷或者不足，提供一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法。
本发明的技术方案为：利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCGMCC NO.4348，通过微生物发酵培养出蜡样芽孢杆菌发酵液，并利用硫酸铵分级沉淀方法提取出抑菌蛋白粗品，具体培养及提取方法见本发明人申请的专利（申请号为201210056365.7）；利用葡聚糖凝胶柱来进一步纯化抑菌蛋白粗品，并将其对真菌病害进行抑菌活性检测。本发明操作方便、工艺简单、成本低廉，可以显著提高其发酵液中抑菌蛋白的抑菌能力。
本发明的具体技术方案：一种纯化蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCGMCC4348发酵液中抑菌蛋白的方法，其具体步骤如下：
（1）抑菌蛋白的提取：利用蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC No.4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品；
（2）装柱：称取葡聚糖凝胶用蒸馏水以15-20mL/g的比例进行装柱前的溶胀3-5h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；上柱后用缓冲液进行充分平衡；
（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白粗品配成15-20mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；
（4）洗脱收集：用缓冲液进行洗脱，其中缓冲液的流速为0.5-1.0mL/min，每2-5min收集一次洗脱液；将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度，保存具有吸收峰的洗脱液，浓缩干燥后得到抑菌蛋白。
本发明中抑菌活性测定：把抑菌蛋白用无菌水配成5.0-10.0ug/mL的蛋白溶液。培养出中心接有棉花枯萎病病菌和黄瓜枯萎病病菌菌碟的PDA平板培养48h后，于平板上下左右距离培养皿边缘2cm处各用打孔器（d=6mm）各打一个圆孔，在其中三个孔内注入10-20uL的抑菌蛋白溶液，另一个圆孔中以无菌水作为对照。27~32℃培养42~48h，观察发现纯化的抑菌蛋白具有显著的拮抗作用。
本发明步骤（1）中所述的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC4348抑菌蛋白粗品的提取的方法详见本发明人申请的专利（申请号为201210056365.7），本发明是在此基础上进一步研究得到的。
优选上述的葡聚糖凝胶型号为：Sephadex G-150、Sephadex G-100或Sephadex G-75；凝胶柱的径高比为：1：（10-15）。
优选步骤（2）和（4）中所述的缓冲液为：0.02-0.05mol/L的Tris-HCl，pH为7.1-8.5；步骤（2）中充分平衡凝胶柱的时间为2-5h。
优选步骤（3）中所述的注入到凝胶柱上的抑菌蛋白粗品溶液的体积为凝胶柱柱床体积的10%-15%；
本专利选用的蜡样芽孢杆菌，其分类命名为蜡状芽孢杆菌，菌种的拉丁学名是Bacillus cereus，参据的微生物：NJYH63305，保藏日期是2010年11月15日，保藏中心登记入册的编号是CGMCC No.4348。
有益效果：
采用本发明的微生物发酵提纯发酵液中的抑菌蛋白的方法，利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC No.4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，采用硫酸铵分级沉淀来获取抑菌蛋白的；利用葡聚糖凝胶柱来进一步纯化抑菌蛋白，并将其对真菌病害进行抑菌活性检测。本发明操作方便、工艺简单、成本低廉，可以显著提高其发酵液中抑菌蛋白的抑菌能力。
保藏信息
上述蜡样芽孢杆菌Bacillus cerreus CGMCC No.4348是由本实验室选育并保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），其简称为CGMCC，登记入册的编号是CGMCCNo.4348，保藏日期是：2010年11月15日（见本发明人申请的专利，申请号为201010579133.0）。
具体实施方式
实施例1
（1）抑菌蛋白的提取：利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCGMCC4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品，参见本发明人申请专利（申请号为201210056365.7）中的实例1中提取的抑菌蛋白组分A，其对棉花枯萎病病菌的抑菌率为62%；
（2）装柱：称取葡聚糖凝胶Sephadex G-100用蒸馏水以16mL/g的比例进行装柱前的溶胀3h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；柱的径高比为：1：15，上柱后用0.02mol/L pH为7.1的Tris-HCl缓冲液进行充分平衡3h；
（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白配成15mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；上样的抑菌蛋白粗品溶液的体积为凝胶柱柱床体积的14%；
（4）洗脱收集：用0.02mol/L pH为7.1的Tris-HCl缓冲液进行洗脱，其中，缓冲液的流速为0.8mL/min，每3min收集一次洗脱液，将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度，保存具有吸收峰的洗脱液，浓缩干燥后得到抑菌蛋白。
（5）活性测定：把步骤（4）中纯化的抑菌蛋白用无菌水配成6.0ug/mL的蛋白溶液。培养出中心接有棉花枯萎病病菌的PDA平板培养48h后，于平板上下左右距离培养皿边缘2cm处各用打孔器（d=6mm）各打一个圆孔，在其中三个孔内注入15uL的抑菌蛋白溶液，另一个圆孔中以无菌水作为对照。28℃培养47h，观察发现纯化的抑菌蛋白组分A的抑菌率达到73%。
实施例2
（1）抑菌蛋白的提取：利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCGMCC4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品；参见本发明人申请专利（申请号为201210056365.7）中的实例2中提取的抑菌蛋白组分B，其对黄瓜枯萎病病菌的抑菌率为42%；
（2）装柱：称取葡聚糖凝胶Sephadex G-150用蒸馏水以20mL/g的比例进行装柱前的溶胀5h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；柱的径高比为：1：15，上柱后用0.03mol/L pH为7.5的Tris-HCl缓冲液进行充分平衡4h；
（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白配成18mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；上样的抑菌蛋白粗品溶液的体积为凝胶柱柱床体积的15%；
（4）洗脱收集：用0.03mol/L pH为7.5的Tris-HCl缓冲液进行洗脱，其中，缓冲液的流速为0.6mL/min，每2min收集一次洗脱液，将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度，保存具有吸收峰的洗脱液，浓缩干燥后得到抑菌蛋白。
（5）活性测定：把步骤（4）中纯化的抑菌蛋白用无菌水配成10.0ug/mL的蛋白溶液。培养出中心接有黄瓜枯萎病病菌的PDA平板培养48h后，于平板上下左右距离培养皿边缘2cm处各用打孔器（d=6mm）各打一个圆孔，在其中三个孔内注入20uL的抑菌蛋白溶液，另一个圆孔中以无菌水作为对照。30℃培养45h，观察发现纯化的抑菌蛋白组分B的抑菌率达到59%。
实施例3
（1）抑菌蛋白的提取：利用自主筛选鉴定的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereusCGMCC4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品；参见本发明人申请专利（申请号为201210056365.7）中的实例3中提取的抑菌蛋白组分A，其对棉花枯萎病病菌的抑菌率为59%；
（2）装柱：称取葡聚糖凝胶Sephadex G-75用蒸馏水以18mL/g的比例进行装柱前的溶胀4h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；柱的径高比为：1：10，上柱后用0.04mol/L pH为8.5的Tris-HCl缓冲液进行充分平衡2h；
（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白配成20mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；上样的抑菌蛋白粗品溶液的体积为凝胶柱柱床体积的10%；
（4）洗脱收集：用0.04mol/L pH为8.5的Tris-HCl缓冲液进行洗脱，其中，缓冲液的流速为1.0mL/min，每5min收集一次洗脱液，将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度，保存具有吸收峰的洗脱液，浓缩干燥后得到抑菌蛋白；
（5）活性测定：把步骤（4）中纯化的抑菌蛋白用无菌水配成8.0ug/mL的蛋白溶液。培养出中心接有棉花枯萎病病菌的PDA平板培养42h后，于平板上下左右距离培养皿边缘2cm处各用打孔器（d=6mm）各打一个圆孔，在其中三个孔内注入10uL的抑菌蛋白溶液，另一个圆孔中以无菌水作为对照。32℃培养42h，观察发现纯化的抑菌蛋白组分A的抑菌率达到71%。
Claims (4)
1.一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法，其具体步骤如下：
（1）抑菌蛋白的提取：利用蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus CGMCC No.4348，通过微生物发酵培养出含有抑菌蛋白的发酵液，并将此发酵液采用硫酸铵分级沉淀以提取获得抑菌蛋白粗品；
（2）装柱：称取葡聚糖凝胶用蒸馏水以15-20mL/g的比例进行装柱前的溶胀3-5h；将处理好的葡聚糖凝胶用湿法上柱；上柱后用缓冲液进行充分平衡；
（3）上样：将步骤（1）中获得的抑菌蛋白粗品配成15-20mg/ml样品溶液，注入到平衡好的凝胶柱上；
（4）洗脱收集：用缓冲液进行洗脱，其中缓冲液的流速为0.5-1.0mL/min，每2-5min收集一次洗脱液；将收集的洗脱液分别在波长为280nm下测定其吸光度，保存具有吸收峰的洗脱液，浓缩干燥后得到抑菌蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的葡聚糖凝胶型号为：Sephadex G-150、Sephadex G-100或Sephadex G-75；凝胶柱的径高比为：1：（10-15）。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）和（4）所述的缓冲液均为：0.02-0.05mol/L的Tris-HCl，pH为7.1-8.5；步骤（2）中充分平衡凝胶柱的时间为2-5h。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的注入到凝胶柱上的抑菌蛋白粗品溶液的体积为凝胶柱柱床体积的10-15%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310006174.4A CN103088093B (zh) | 2013-01-08 | 2013-01-08 | 一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310006174.4A CN103088093B (zh) | 2013-01-08 | 2013-01-08 | 一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103088093A true CN103088093A (zh) | 2013-05-08 |
| CN103088093B CN103088093B (zh) | 2014-10-29 |
Family
ID=48201220
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310006174.4A Active CN103088093B (zh) | 2013-01-08 | 2013-01-08 | 一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103088093B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102703550A (zh) * | 2012-03-06 | 2012-10-03 | 南京工业大学 | 一种从蜡样芽孢杆菌高密度发酵液中提取蛋白质的方法 |
| CN104830821A (zh) * | 2015-05-13 | 2015-08-12 | 天津商业大学 | 一种蜡样芽胞杆菌胶原酶的纯化方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6066986A (ja) * | 1983-09-21 | 1985-04-17 | Kibun Kk | 昆虫寄生菌群微生物静菌物質含有組成物 |
| CN1082605A (zh) * | 1993-04-21 | 1994-02-23 | 北京农业大学 | 一种产生超氧化物歧化酶的芽孢杆菌及其生产方法 |
| CN1374399A (zh) * | 2002-04-11 | 2002-10-16 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种蜡状芽孢杆菌及其制备方法 |
| CN101265459A (zh) * | 2008-03-25 | 2008-09-17 | 吕炜锋 | 一种蜡状芽孢杆菌cpu0029菌株及用它制备石斛类生物碱的方法 |
| CN102093974A (zh) * | 2010-12-08 | 2011-06-15 | 南京工业大学 | 一种蜡样芽孢杆菌及其多阶段发酵方法 |
| CN102703550A (zh) * | 2012-03-06 | 2012-10-03 | 南京工业大学 | 一种从蜡样芽孢杆菌高密度发酵液中提取蛋白质的方法 |
-
2013
- 2013-01-08 CN CN201310006174.4A patent/CN103088093B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6066986A (ja) * | 1983-09-21 | 1985-04-17 | Kibun Kk | 昆虫寄生菌群微生物静菌物質含有組成物 |
| CN1082605A (zh) * | 1993-04-21 | 1994-02-23 | 北京农业大学 | 一种产生超氧化物歧化酶的芽孢杆菌及其生产方法 |
| CN1374399A (zh) * | 2002-04-11 | 2002-10-16 | 中国科学院武汉病毒研究所 | 一种蜡状芽孢杆菌及其制备方法 |
| CN101265459A (zh) * | 2008-03-25 | 2008-09-17 | 吕炜锋 | 一种蜡状芽孢杆菌cpu0029菌株及用它制备石斛类生物碱的方法 |
| CN102093974A (zh) * | 2010-12-08 | 2011-06-15 | 南京工业大学 | 一种蜡样芽孢杆菌及其多阶段发酵方法 |
| CN102703550A (zh) * | 2012-03-06 | 2012-10-03 | 南京工业大学 | 一种从蜡样芽孢杆菌高密度发酵液中提取蛋白质的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 裴炎等: "抗菌多肽APS-1的分离纯化和特性", 《微生物学报》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102703550A (zh) * | 2012-03-06 | 2012-10-03 | 南京工业大学 | 一种从蜡样芽孢杆菌高密度发酵液中提取蛋白质的方法 |
| CN104830821A (zh) * | 2015-05-13 | 2015-08-12 | 天津商业大学 | 一种蜡样芽胞杆菌胶原酶的纯化方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103088093B (zh) | 2014-10-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102160595B (zh) | 一种复合微生物发酵活性饲料的制备工艺 | |
| CN101831481B (zh) | 一种新的伊枯草菌素a及其同系物的制备方法 | |
| CN103667117B (zh) | 一种用于好氧发酵阶段的复合微生物菌 | |
| CN103483040B (zh) | 冬虫夏草规模化液体深层发酵用培养基及其发酵生产方法 | |
| CN101955902B (zh) | 一种新的短短芽孢杆菌菌株及其应用 | |
| CN106834141B (zh) | 一种厌氧真菌及用其发酵水稻秸秆生产甲酸的方法 | |
| CN106434401B (zh) | 一种富含麦角甾醇的酵母菌株及麦角酵母粉的制备方法 | |
| CN105925616A (zh) | 药食用真菌的果蔬培养及益生菌发酵 | |
| CN103614323B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌的培养基及应用 | |
| CN103483021A (zh) | 一种利用em菌群转化冬虫夏草发酵残液制备液体肥料的方法 | |
| CN106497842B (zh) | 一种乳酸菌与黑曲霉混合固态发酵制剂的制备方法与应用 | |
| CN101961013B (zh) | 丰加霉素在防治番茄灰霉病中的应用 | |
| CN103011918A (zh) | 一种防治三七枯萎病的微生物有机磷肥 | |
| CN103088093B (zh) | 一种纯化蜡样芽孢杆菌发酵液中抑菌蛋白的方法 | |
| CN105296357B (zh) | 一种通过补料提高冬虫夏草菌液体发酵菌丝体产量的方法 | |
| CN102399839B (zh) | 一种冷解糖芽孢杆菌胞外多糖的生产工艺 | |
| CN103468591A (zh) | 一株耐盐侧耳木霉及其应用 | |
| CN102550294B (zh) | 一种姬菇菌种的液体发酵培养方法 | |
| CN102382771B (zh) | 一种β-葡萄糖苷酶产生菌及利用该菌转化制备京尼平的方法 | |
| CN104341235A (zh) | 一种生物性肥料菌粒剂的制造方法 | |
| CN104031863B (zh) | 一株用于拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌的枯草芽孢杆菌 | |
| TW201139662A (en) | A formula of culturing medium for Cordyceps spp. | |
| CN104543402A (zh) | 一种发酵态铁饲料添加剂的制备方法 | |
| CN104164383B (zh) | 一株用于拮抗太子参专化型尖孢镰刀菌的解淀粉芽孢杆菌 | |
| CN105018409A (zh) | 甲基营养型芽孢杆菌产芽孢发酵培养基及其培养方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hu Yonghong Inventor after: Yang Wenge Inventor after: Jiang Xinmin Inventor after: Tang Rongrong Inventor after: Shen Fei Inventor after: Zhou Yi Inventor after: Zhu Wenjun Inventor after: Feng Jing Inventor before: Hu Yonghong Inventor before: Yang Wenge Inventor before: Jiang Xinmin Inventor before: Tang Rongrong Inventor before: Shen Fei Inventor before: Zhu Wenjun Inventor before: Feng Jing |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20210309 Address after: No.68, Xingang Avenue, Nanjing Economic and Technological Development Zone, Nanjing, Jiangsu 210038 Patentee after: NANJING XINBAI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 211816 Puzhu South Road, Pukou District, Nanjing, Jiangsu Province, No. 30 Patentee before: NANJING TECH University |