CN103054803A - 包含弹性蛋白样多肽、致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体及其用途 - Google Patents

包含弹性蛋白样多肽、致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体及其用途 Download PDF

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Abstract

包括脂质双层、与疏水性基元偶联的弹性蛋白样多肽(ELP)、致化学敏感剂、和抗癌剂的脂质体，包括该脂质体的药物组合物，及使用该脂质体将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的方法。

Description

包含弹性蛋白样多肽、致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体及其用途
相关申请的交叉引用 
本申请要求在韩国知识产权局于2011年10月19日提交的韩国专利申请No.10-2011-0107055和于2012年9月27日提交的韩国专利申请No.10-2012-0108269的权益，其公开内容全部通过参考引入本文。 
技术领域
本公开内容涉及包括与含疏水性基团的基元(moieties)偶联的弹性蛋白样多肽、致化学敏感剂、和抗癌剂的脂质体，包括这些脂质体的药物组合物，及使用这些脂质体将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的方法。 
背景技术
脂质体具有至少一层封闭含水内部区室的脂质膜。脂质体可以根据膜的类型进行鉴别，也可以根据大小进行鉴别。小单层泡囊(small unilamellarvesicle,SUV)有单层膜，直径通常在20-50nm范围内。大单层泡囊(largeunilamellar vesicle,LUV)可具有至少50nm的直径。寡层大泡囊(oligolamellarlarge vesicle)和多层泡囊具有多层、通常为同心的膜，并且可具有至少100nm的直径。具有若干个非同心膜(即，较大泡囊内包含若干个较小泡囊)的脂质体称作多泡泡囊。 
脂质体经过配制后能携带药物或其它活性剂，所述药物或其它活性剂可以包含在含水内部空间中(水溶性活性剂或脂溶性活性剂)或分配到脂质双层中(脂溶性活性剂)。另外，疏水性材料诸如胆固醇包含在微团(micelle)中，所述微团可以包含在脂质体内部空间中。 
在血流中具有短半衰期的活性剂特别适合于经由脂质体递送。例如，已知许多抗肿瘤剂在血流中具有短的半衰期，并且因此，它们的胃肠外使用是不可行的。然而，脂质体将活性剂经血流递送至特异性部位的用途因脂质体被网状内皮系统(RES)的细胞从血液中快速清除而受到重大限制。 
脂质体在正常情况下是不渗漏的，除非脂质体膜中形成洞，除非膜降解或溶解，或者除非膜温度升高至相变温度。受试者中靶部位的温度升高(过热)可以将脂质体的温度提高到相变温度或更高，并因此可以释放脂质体内容物。该方法可用于治疗剂的选择性递送。然而，在脂质体的相变温度显著高于正常组织温度的情况下，此技术是受限的。 
因此，设计能够有效递送活性剂的脂质体配制剂(formulation)是合乎需要的。 
发明内容
本发明提供了脂质体，其包括与含疏水性基团的基元偶联的弹性蛋白样多肽、致化学敏感剂、和抗癌剂。 
本发明提供了药物组合物，其包括脂质体。 
本发明提供了用脂质体将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的方法。 
附图说明
由以下对实施方案的描述，结合附图，本发明的这些和/或其它方面将变得明晰和更容易理解，其中： 
图1的图像显示，依照一个实施方案，NCI/ADR-RES细胞在有多柔比星存在的条件下培养时的存活力； 
图2的图像显示，依照一个实施方案，肿瘤细胞中耐药基因的表达； 
图3的图像显示，依照一个实施方案，多柔比星从含多柔比星的脂质体中的温度依赖性释放谱(profile)； 
图4的图像显示，依照一个实施方案，在37℃的贮藏温度时药物的贮藏时间依赖性释放； 
图5的图像显示，依照一个实施方案，在42℃的贮藏温度时药物的贮藏时间依赖性释放； 
图6的图像显示，依照一个实施方案，游离多柔比星、以及将多柔比星和维拉帕米一同加载的脂质体在37℃对NCI/ADR-RES细胞的细胞毒性； 
图7A和7B的图像显示，依照多个实施方案，游离多柔比星(7A)、以及将多柔比星和维拉帕米一同加载的脂质体(7B)在45℃的细胞毒性；及 
图8的图像显示，依照一个实施方案，药物的类型对细胞存活力的影响。 
具体实施方式
现在会详细提到各实施方案，附图中举例说明了它们的实例，其中同样的参考号指代全文上下的相同要素。在这点上，当前的实施方案可以具有不同的形式且不应解释为限于本文中所列的描述。因而，下文仅仅为了解释本说明书的各方面参照附图来描述各实施方案。如本文中所使用的，术语“和/或”包括一个或多个所列项的任何和所有组合。 
根据本发明的一个实施方案，脂质体包括脂质双层；与疏水性基元(hydrophobic moiety)偶联的弹性蛋白样多肽(ELP)；致化学敏感剂；和抗癌剂，其中与疏水性基元偶联的ELP包装在脂质双层中。 
如本文中所使用的术语“脂质双层”指由两层脂质分子构成的膜。脂质层可以具有与天然存在的双层例如细胞膜、核膜或病毒包膜相似的厚度。例如，脂质双层的厚度可以是10nm或更小，例如约1nm至约9nm、约2nm至约8nm、约2nm至约6nm、约2nm至约4nm、或约2.5nm至约3.5nm。脂质双层是将此类分子保持在需要它们的地方并且防止它们扩散到它们不应出现的区域中的屏障。天然脂质双层通常主要由磷脂构成。磷脂具有亲水性头部和两个疏水性尾部。当磷脂暴露于水时，它们自我排列成两层的片层(双层)，其中它们所有的尾部指向片层中央。此双层的中央几乎不含水，而且还排除象糖或盐这样的溶于水但不溶于油的分子。具有某些头部基团的磷脂可以改变所述双层的表面化学性质。此外，脂质尾部可以影响膜性质，例如通过决定所述双层的相来影响。所述双层可以在较低温度时采取固体凝胶相态，但是在较高温度时经历向流体态的相变。在所述双层内包装脂质也影响其机械性质，包括其对伸展和弯曲的阻力。生物膜通常包括除磷脂以外的数种脂质。动物细胞中特别重要的例子是胆固醇，其帮助加强所述双层并降低其通透性(permeability)。 
用于构建脂质双层的“脂质分子”可以是具有亲水性头部和疏水性尾部的分子。例如，脂质分子可以具有14至50个碳原子。脂质分子可以是磷脂。磷脂可以具有16至24个碳原子。例如，合适的磷脂可以是磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合。在一些实施方案中，至少一种磷脂可具有两个酰基基团。此外，磷脂可以具有约10℃至约70℃， 例如约20℃至约70℃、约30℃至约70℃、约40℃至约70℃、约50℃至约70℃、约60℃至约70℃、约10℃至约60℃、约10℃至约50℃、约10℃至约40℃、约10℃至约39℃、约30℃至约60℃、约30℃至约50℃、约30℃至约40℃、约30℃至约42℃、约30℃至约40℃、约30℃至约39℃、约35℃至约60℃、约35℃至约55℃、约35℃至约50℃、约35℃至约45℃、约35℃至约42℃、约35℃至约40℃、约35℃至约39℃、约38℃至约50℃、约38℃至约45℃、约38℃至约42℃、约38℃至约40℃、或约39℃至约45℃的相变温度。磷脂的酰基基团可以是饱和的或不饱和的。磷脂可以是两种或更多种不同磷脂分子的混合物。具有不同相变温度的脂质双层可以因两种或更多种不同磷脂分子的混合而生成。 
磷脂分子可以具有两个酰基基团，例如选自如下的酰基基团：C12饱和链磷脂(Tc=10℃)、C14饱和链磷脂(Tc=24℃)、C16饱和链磷脂(Tc=41℃)、C18饱和链磷脂(Tc=55℃)、C20饱和链磷脂(Tc=65℃)、C22饱和链磷脂(Tc=70℃)、及其组合。类似地，可以使用的其它常见的磷脂包括磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和神经节苷脂，它们象磷脂酰胆碱那样，具有依赖于酰基链长而不同的相变温度。Tc指相变温度。 
C16饱和链磷脂可以是二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)。DPPC是具有约41.5℃的双层转变温度的饱和链(C16)磷脂。C18饱和链磷脂的例子可以是1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)。DSPC是具有约55.10℃的双层转变温度的饱和链(C18)磷脂。 
可以使用不是磷脂的其它成膜的脂质材料。可以形成固相膜的示例性材料包括勃拉脂质(bola lipid)或细菌脂质。另外，可以采用包括水溶性聚合物(例如，聚乙二醇)和水不溶性聚合物(例如，聚环氧丙烷和聚乙基乙烯(polyethylethylene))的嵌段共聚物。 
如本文中所使用的，脂质体双层中的“主要脂质(primary lipid)”是脂质体双层材料的主要脂质组分。因此，例如，在由70摩尔%磷脂和30摩尔%胆固醇构成的脂质体双层中，磷脂是主要脂质。 
脂质双层可以具有随温度而变化的不同相行为。在给定的温度，脂质双层可以呈液相或凝胶(固)相。脂质分子都具有从凝胶相转变到液相的特征性温度。在这两种相中，脂质分子被阻止而不能使双层翻转(flip-flop)，但是在液相双层中，给定的脂质将与其相邻物交换位置。此随机移步交换(walk exchange)允许脂质扩散，并因此移行跨过膜表面。与液相双层不同，在凝胶相双层中脂质的位置是锁定的。 
脂质双层的相行为可以很大程度上由相邻的脂质分子之间的范德华相互作用的引力的强度决定。有较长尾部的脂质分子具有更多的相互作用面积，提高该相互作用的强度且因此降低脂质分子移动性。因此，在给定的温度下，短尾部脂质分子将比其它方面相同的(otherwise identical)长尾部脂质分子更具流动性。转变温度还可受到脂质分子尾部的不饱和程度的影响。不饱和的双键可以在烷烃链中产生结，破坏脂质的包装。这种破坏在双层内产生额外的自由空间，其允许相邻链有额外的柔性。 
大多数天然的膜是不同脂质分子的复杂混合物。如果这些组分中的一些在给定的温度下是液体，而其它处于凝胶相，则两个相可以在空间上分开的区域中共存，很像飘浮于海洋中的冰山。 
如本文中所使用的，术语“相变温度”或“Tc”指材料从固相变成液相(也称作熔解温度)或从液相变成固相的温度。所述材料包括脂质分子、不含与疏水性基元偶联的ELP的脂质双层或脂质体、或含有与疏水性基元偶联的ELP的脂质双层或脂质体。脂质膜的相变温度可以通过差示扫描量热术(DSC)、电子自旋共振(ESR)等等来测定。差示扫描量热术可以用Hart Scientific的4207型热流量热仪来实施。样品可以如下制备，扫描速率可以是10°/h。转变焓可以使用与该仪器一起提供的峰积分软件来估算。转变熵可以由转变焓来估算，依据表达式ΔHt=TtΔSt假设一级转变，其中ΔHt、ΔSt、和Tt分别可以是转变焓、熵、和转变温度。用于差示扫描量热术的样品可以通过在DSC样品安瓿中称取约3至约8mg所述脂质并添加0.5ml 10mM HEPES缓冲液、1mM EDTA(pH 7.4)、有或无1M NaCl来制备。然后可以用螺帽将安瓿密封并放置在量热仪中。参照安瓿仅仅装有等体积的缓冲液。可以如下实现液体的水合，在量热仪中将样品加热到解链相变温度以上(至95℃)，温育20分钟，然后冷却至20℃或更低的温度并再温育20分钟。在此水合过程后，可以对样品进行两次加热和冷却扫描。 
脂质体包括与疏水性基元偶联的ELP，其中疏水性基元可包装在脂质双层中。 
疏水性基元通过被包装在脂质双层中可构成脂质双层。疏水性基元可以是具有将与其偶联的ELP固定于脂质双层的性质，例如疏水性质的分子。疏 水性基元可以与构成脂质双层的脂质分子相同或不同。 
疏水性基元可以由仅含有疏水区的分子提供，或由含有亲水区和疏水区两者的两亲性分子提供。在含有亲水区和疏水区两者的两亲性分子中，疏水区可以朝向脂质双层内部排列，而亲水区可以朝向脂质双层外部排列并与ELP连接。在这里，“朝向脂质双层外部”指远离脂质双层中心，也就是说，向脂质体内或向脂质体外的方向。 
疏水性基元可以是天然存在于生物膜中的脂质分子、或不天然存在于生物膜中且构成脂质双层的脂质分子。 
天然存在于生物膜中的脂质分子可以选自磷脂或其衍生物、固醇或其衍生物、鞘脂或其衍生物、及它们的组合。磷脂或其衍生物可以选自磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、及其组合。固醇或其衍生物可以是胆固醇或其衍生物、或鲨烯(squalenes)或其衍生物。鞘脂可以是鞘磷脂或其衍生物、或神经节苷脂或其衍生物。磷脂、固醇、或鞘脂包括在体内合成过程中生成的中间体或前体。例如，疏水性基元包括磷酸甘油酯、鞘氨醇、神经酰胺、或脑苷脂。 
疏水性基元可以是饱和或不饱和的烃、饱和或不饱和的酰基分子、或饱和或不饱和的烷氧基分子。 
疏水性基元和ELP的偶联可以由在生理学和病理学条件下不可切割的连接来介导，或者通过可切割的连接来介导。可切割连接的例子可以是由pH可切割接头(linker)、热可切割接头、辐射可切割接头、或在水溶液中切割的接头介导的连接。 
疏水性基元可以通过与ELP的N端氮原子或ELP的C端羰基(-C(O)-)基团结合而偶联到ELP。或者，疏水性基元可以通过与选自如下的官能团的相互作用来偶联到ELP：氨基基团、羰基基团、羟基基团、硫醇基团、或其组合。疏水性基元可以通过与ELP的氮原子形成胺键或酰胺键、或通过与ELP的C端羰基基团形成酰胺或酯键而与ELP偶联。 
疏水性基元可以具有4至30个碳原子，例如，14至24个碳原子或16至24个碳原子。例如，疏水性基元可以是肉豆蔻酰基(C14)、棕榈酰基(C16)、硬脂酰基(C 18)、花生四烯酰基(arachidonyl)(C20)、山萮酰基(behenonyl)(C22)或木蜡酰基(lignoceroyl)(C24)。疏水性基元可以通过疏水效应而包装在脂质双层中，并且因此，与疏水性基元偶联的ELP可以固定于脂质体上。 
如本文中所使用的，术语“弹性蛋白样多肽(ELP)”指一类依赖于温度而经历构象变化的氨基酸聚合物。在一个实施方案中，ELP可以是呈现出反向相变行为的聚合物。反向相变行为表明，ELP在低于反向转变温度(Tt)的水溶液中是可溶的，但是当温度高于Tt时不可溶。通过升高温度，ELP从高度可溶的长链转变成溶解度大大降低的紧密折叠的聚集体。这样的反向相变可以随温度升高由具有更多β-转角结构和扭曲的β-结构的ELP结构诱导。在一些情况中，ELP可以基于相变温度来定义。例如，在一些情况中，相变可以在约10至约70℃的温度发生。 
当ELP与脂质双层的组分连接时，由于ELP随温度从低于ELP的Tt的温度升高到更高的温度而收缩和自我组装(self-assembly)，反向相变行为可以破坏脂质双层。破坏脂质双层可以提高脂质双层的通透性。因此，包括脂质双层的脂质体中所包含的活性剂可以以较高的通透性从脂质体释放。然而，本发明的一个或多个实施方案不限于任何特定的机制。 
因ELP反向相变行为所致的对脂质体中脂质双层的破坏可以依该脂质双层的脂质分子或该脂质双层的相变温度而不同。脂质双层在相变温度或之下呈凝胶相，而在相变温度或之上呈液(晶)相。当脂质双层呈凝胶相时，虽然ELP结构由于反向相变行为而改变为具有β-转角结构，但是脂质双层的破坏可以不发生或者可以是有限的。另一方面，当脂质双层呈液相时，因为ELP结构由于反向相变行为而改变为具有β-转角结构，所以可以诱导脂质双层的破坏。换言之，当脂质双层呈液相而不是凝胶相时，反向相变更有效地诱导脂质双层的破坏。因此，可以通过调节脂质体的脂质双层的相变温度或ELP的反向相变温度来控制包含于脂质体中的活性剂的释放温度。例如，包括ELP的脂质双层或脂质体的相变温度可以是约10℃至约70℃，例如约39℃至约45℃。 
与疏水性基元偶联的ELP可以与疏水性基元的末端而不是侧链进行偶联。而且，由于与疏水性基元偶联的ELP与末端而非侧链偶联，因此ELP可以与具有一条链的疏水性基元偶联。例如，疏水性基元可以通过与N端的氮原子或C端的羰基(-C(O)-)基团结合而与ELP偶联。疏水性基元可以通过与ELP的氮原子形成胺键或酰胺键或者通过与ELP的C端羰基基团形成酰胺或酯键而与ELP偶联。在这里，疏水性基元可以具有4至30个碳原子，例如，14至24个碳原子或16至24个碳原子。在与疏水性基元偶联的ELP 中，ELP可以与具有一条链的疏水性基元偶联。 
根据一个或多个实施方案的包括ELP的脂质体可以用于比不包括ELP但仅是脂质双层的脂质体更有效地释放脂质体中包含的活性剂。当仅利用脂质双层的脂质分子的相变时，通过脂质分子的分散来诱导脂质体中的活性剂的释放。而当使用包括ELP的脂质体时，可以通过ELP的反向相变行为诱导活性剂的进一步释放，换言之，可以通过因ELP收缩和组装所致的受损脂质双层来诱导活性剂的进一步释放。在这里，活性剂可以包含在脂质体的内部空间中、脂质双层的内部、或者二者中。 
在一个实施方案中，部分或整个ELP可以包括一或多个重复单元，该重复单元可以选自VPGXG(SEQ NO:1)、PGXGV(SEQ NO:2)、GXGVP(SEQNO:3)、XGVPG(SEQ NO:4)、GVPGX(SEQ NO:5)、及其组合，其中V是缬氨酸，P是脯氨酸，G是甘氨酸，且X是除了脯氨酸外的任何天然的或非天然的氨基酸。在这里，各重复单元中的X可以是相同或不同的氨基酸。重复单元可以通过不消除所得ELP的相变性质的一或多个氨基酸而分隔，或者末端部分可以变为一个或多个氨基酸或其它接头基元。重复单元相对于其它氨基酸或接头基元的比率可以是，重复单元占重复单元与其它氨基酸之总和的约0.1至约99.9%。选定的重复单元可以重复两次或更多次，例如，2至200次。 
在一个实施方案中，ELP可以本身是嵌段(blocks)，其中一或多个VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合串联重复，或者ELP可以包括嵌段，其中VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合串联重复。ELP可包括具有下述式之一的重复单元：[VPGXG]n，[PGXGV]n，[GXGVP]n，[XGVPG]n，[GVPGX]n，或两种或更多种本文所述重复单元的任何组合。与疏水性基元偶联的ELP可具有式：C8-C24脂肪腺-[VPGXG]n，[PGXGV]n，[GXGVP]n，[XGVPG]n，[GVPGX]n，或两种或更多种本文所述重复单元的任何组合。在式中，n可以是至少1的整数，诸如1至200、2至200、2至100、2至80、2至60、2至40、2至12、2至10、2至8、2至6、4至100、8至80、10至60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6。例如，与疏水性基元偶联的ELP可以是硬脂酰-VPGVGVPGVG VPGVG VPGVG VPGVG VPGVG-NH2(SEQ ID NO:6，以下称作“SA-V6-NH2”)。 
只要维持反向相变行为，ELP可以由VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX或其组合构成，并且可以在分子中包括另一部分，例如接头和封闭基团(blocking group)。ELP的N端或C端可以与疏水性基元连接。此外，疏水性基元可以通过与ELP的氨基酸残基侧链中的反应性基团连接而与ELP偶联。反应性基团可以是氨基基团、羟基基团、硫醇基团、或羧基基团。不与疏水性基元连接的另一末端可以是封闭的或未封闭的。例如，当疏水性基元和ELP经由ELP的N端连接时，ELP的C端的羧基基团可以是封闭的或未封闭的。封闭可以通过与材料连接或相互作用来实现，所述材料可以是生物相容的、非免疫原性的、有助于特异性递送、或者逃避生物学降解系统的材料。例如，封闭可以通过酰胺键实现，所述酰胺键因结合氨基基团和ELP的C端羧基基团而形成。氨基基团可以是氨分子、伯胺、仲胺、或叔胺。伯、仲或叔胺可以各自具有1至10个碳原子，例如，1至6个碳原子。X可以是缬氨酸或丙氨酸。 
重复单元可以以一次或多次整数重复次数各自独立地包括在ELP中。重复次数可以各自独立地是2至200、2至100、2至80、2至60、2至40、2至10、2至12、2至8、2至6、4至100、8至80、10至60、12至40、20至40、4至10、4至8、或4至6的整数。 
在脂质体中，脂质双层的主要脂质分子:与疏水性基元偶联的ELP的摩尔比可以根据所选择的脂质双层的性质和与疏水性基元偶联的ELP的性质适当地选择。例如，主要脂质分子:与疏水性基元偶联的ELP的摩尔比可以是约50至约99.9:约0.1至约50。例如，主要脂质分子(DPPC或DPPC和DSPC的混合物):与疏水性基元(棕榈酰(VPGXG)n或硬脂酰(VPGXG)n，其中n是2至12)偶联的ELP的摩尔比可以是约50至约99.0:约0.1至约50。 
如本文中所使用的，术语“致化学敏感剂”意图包括使肿瘤细胞对化疗的作用更加敏感的药物。致化学敏感剂可以是赋予耐药性的蛋白质抑制剂。致化学敏感剂可选自下组：多药耐性蛋白-1(MDR1)抑制剂，MDR-2抑制剂，多药耐性相关蛋白-1(MRP-1)抑制剂，乳腺癌耐性蛋白(BCRP)抑制剂，及其组合。致化学敏感剂可选自下组：环孢菌素(cyclosporin)A，维拉帕米(verapamil)，比立考达(bricodar)，美卡拉明(reversan)，及其组合。 
致化学敏感剂可具有脂质双层稳定剂的活性。例如，致化学敏感剂可以是苯乙胺或其衍生物。苯乙胺或其衍生物的例子包括维拉帕米(即(RS)-2-(3,4- 二甲氧基苯基)-5-{[2-(3,4-二甲氧基苯基)乙基]-(甲基)氨基}-2-丙-2-基戊腈))及其衍生物。或者，脂质体可以包括致化学敏感剂但不包括脂质双层稳定剂。例如，脂质体可以不包括类固醇或其衍生物(包括胆固醇)。 
抗癌剂可以是基于蒽环类药的抗癌剂。基于蒽环类药的抗癌剂可以是多柔比星(doxorubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、或其组合。 
致化学敏感剂可以包含在脂质体的内部空间中、脂质双层的内部空间中、或二者中。另外，致化学敏感剂和抗癌剂可以包含在脂质双层中，而且它们自身具有稳定脂质双层的活性且因此可以在有或无脂质双层稳定剂时包含在其中。脂质体可以具有约39℃至约45℃的相变温度。脂质体在室温可以呈凝胶相。 
脂质体可以进一步包括脂质双层稳定剂。脂质双层稳定剂可以是具有比脂质双层的相变温度更高的相变温度的脂质。脂质双层稳定剂可以选自下组：类固醇、鞘脂或其衍生物、及其组合。脂质双层稳定剂可以是能插入脂质双层的类固醇、其衍生物、或其组合。如本文中所使用的，术语“类固醇”指一类有甾烷核心或由其衍生的骨架的有机化合物，所述核心或骨架含有彼此连接且特定排列的4个环烷烃环，换言之，3个从左到右称为环A、B和C的环己烷环和1个环戊烷环(D环)。在这里，“由其衍生的骨架”包括插入甾烷骨架中的不饱和键。类固醇依据附着至4环核心的官能团、以及这些环的氧化状态而有不同。例如，类固醇可以在环上包括亲水性官能团。例如，类固醇可以在环上具有羟基基团。类固醇可以是固醇。术语“固醇”是一类在C-3位有羟基且有从胆甾烷衍生的骨架的类固醇。在这里，术语“衍生的骨架”包括插入胆甾烷骨架中的不饱和键。类固醇包括植物、动物和真菌中找到的类固醇。例如，所有类固醇可以在细胞中生成，如在动物和真菌中自羊毛固醇生成，或如在植物中自环阿屯醇生成。类固醇包括胆固醇或其衍生物。在这里，“衍生物”意指维持一种需要引入脂质双层中的性质的胆固醇衍生物。稳定剂可以选自下组：胆固醇、谷固醇(sitosterols)、麦角固醇(ergosterols)、豆固醇(stigmasterols)、4,22-豆甾二烯-3-酮、豆固醇乙酸酯、羊毛固醇、环阿屯醇、及其组合。脂质双层稳定剂可以以有效量来包含，使得脂质体在37℃稳定维持但在某温度或更高温度(例如39℃或更高温度)遭到破坏。例如，脂质双层稳定剂可以以有效量来包含，使得脂质体在37℃稳定维持30分钟或 更久，但至少50%的脂质体在39℃或更高温度时在30分钟内遭到破坏。 
主要脂质分子：稳定剂(例如胆固醇)的摩尔比可以是约50至约99.9：约0.1至约50。主要脂质分子：稳定剂的比可以是约50至约99.9：约0.1至约50，例如约50至约99.9：约1至约50、约50至约99.9：约3至约50、约50至约99.9：约5至约50、约50至约99.9：约7至约50、约50至约99.9：约9至约50、约50至约99.9：约11至约50、约50至约99.9：约15至约50、约50至约99.9：约20至约50、约50至约99.9：约20至约35、约50至约99.9：约20至约30、约50至约99.9：约25至约30、约50至约99.9：约25至约50、约50至约99.9：约30至约50、约50至约99.9：约35至约50、约50至约99.9：约1至约35、约50至约99.9：约3至约30、约50至约99.9：约5至约25、约50至约99.9：约7至约20、或约50至约99.9：约9至约15。 
脂质体因被肝和脾(内皮系统或网状内皮系统(RES)的器官)的巨噬细胞快速摄取而在血液循环中具有相对较短的半衰期，因此可能不能在渗漏的肿瘤组织中积累。可以设计脂质体制剂来避免快速的RES摄取，并且因此增加循环时间。术语“渗漏”或“渗漏特性”用在本文中是指，使材料相比于正常组织或细胞而增加通透性的特性。靶位点可以是肿瘤位点，在该位点，肿瘤中血管的材料通透性因肿瘤血管的渗漏而增加。脂质双层可以含有，例如，用亲水性聚合物衍生化(derivatize)的脂质衍生物，例如磷脂衍生物。亲水性聚合物可以选自聚乙二醇(PEG)、聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、寡糖、及其混合物。所述衍生物可以是与PEG偶联的C4-C30，例如C16-C24的磷脂。所述衍生物可以是DPPC-PEG或DSPE-PEG。PEG可以具有约180至约50,000Da的重量平均分子量。 
脂质体可以是单层泡囊(SUV)或多泡泡囊。脂质体的直径可以是约50nm至约500nm，例如约50nm至约400nm、约50nm至约300nm、约50nm至约200nm、约100nm至约500nm、约100nm至约400nm、约100nm至约300nm、或约100nm至约200nm。 
在一个实施方案中，脂质体可以包括磷脂质双层、与疏水性基元偶联的ELP、致化学敏感剂、和抗癌剂，其中与疏水性基元偶联的ELP包装在磷脂质双层中。磷脂质双层包括磷脂作为主要脂质分子。磷脂可以是DPPC、1,2- 二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、或其组合。磷脂质双层可以包括用亲水性聚合物衍生化的磷脂脂质衍生物，例如1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DSPE)和PEG的偶联物。DSPE和PEG的偶联物可以包括1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](铵盐)。磷脂质双层可以包括胆固醇。 
在一个具体实施方案中，脂质体可以包括DPPC、DSPC、或其组合的磷脂质双层、硬脂酰-VPGVG VPGVG VPGVG-NH2、维拉帕米、和多柔比星，其中硬脂酰-VPGVG VPGVG VPGVG-NH2包装在磷脂质双层中。磷脂质双层中DPPC与DSPC的摩尔比可以是约1:约0至约0.5，例如约1:约0.1至约0.5。磷脂质双层可以包括用亲水性聚合物衍生化的磷脂脂质衍生物，例如DSPE和PEG的偶联物。DSPE和PEG的偶联物可以包括1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](铵盐)。磷脂质双层可以包括胆固醇。 
脂质体可以具有约10℃至约70℃，例如约10℃至约60℃、约10℃至约55℃、约10℃至约45℃、约20℃至约60℃、约20℃至约55℃、约25℃至约45℃、约30℃至约45℃、约35℃至约45℃、约39℃至约45℃的相变温度。可以通过主要脂质分子的碳链长度、不饱和键的数目、多种脂质分子的混合、及它们的组合调节相变温度。例如，当将具有比DPPC的相变温度高的相变温度的DSPC与具有较低相变温度的DPPC混合时，由DPPC和DSPC混合物构成的脂质体可以具有比仅由DPPC构成的脂质体的相变温度高的相变温度。脂质体在室温下可以处于凝胶相。 
根据本发明的另一个实施方案，用于将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的药物组合物包括脂质体和可药用载体或稀释剂，其中所述脂质体包括脂质双层，与疏水性基元偶联的ELP，致化学敏感剂，和抗癌剂，且与疏水性基元偶联的ELP包装在脂质双层中。 
可药用载体或稀释剂可以是本领域中公知的。载体或稀释剂可以选自水，例如盐水或无菌水，林格氏(Ringer’s)溶液、缓冲盐水、右旋糖溶液、麦芽右旋糖(maltodextose)溶液、甘油、乙醇、及其组合。 
已经记载了脂质体的详细描述。 
脂质体可以分散于水性介质中。水性介质可以包括生理盐水或PBS。 
根据本发明的另一个实施方案，将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者 靶部位的方法包括：对受试者施用脂质体，其中所述脂质体包括脂质双层、与疏水性基元偶联的ELP、致化学敏感剂、和抗癌剂，且与疏水性基元偶联的ELP包装在脂质双层中；并加热受试者的靶部位以从靶部位的脂质体中释放致化学敏感剂和抗癌剂。 
所述方法包括对受试者施用脂质体，其中所述脂质体包括脂质双层、与疏水性基元偶联的ELP、致化学敏感剂、和抗癌剂，且与疏水性基元偶联的ELP包装在脂质双层中。已经记载了脂质体的详细描述。 
给药可以是胃肠外给药。例如，胃肠外给药可以是静脉内、皮内、肌肉内、(腹腔、关节或眼)腔内，或直接注射。直接注射可以涉及直接注射到患病部位诸如肿瘤部位中。可以静脉内施用脂质体，并且由此通过血流带到靶部位诸如肿瘤部位。靶部位可以具有渗漏性质。 
所述方法包括加热受试者的靶部位以在靶部位从脂质体中释放致化学敏感剂和抗癌剂。加热可归因于临床上诱导体温过高(hyperthermia)的方法，或者可以涉及躯体发炎部位比其它部位固有地更高的温度。临床上诱导体温过高的方法可以通过直接传热，例如，盆中的热液体介质，例如在水中接触身体，照射超声，例如集中对靶部位进行高强度超声，施加磁场例如放大的磁场，施加微波和/或射频。靶部位可以是有病理症状的区域，例如，肿瘤部位(即，实体瘤)，或有炎症的区域。加热可以是加热至约39℃至约45℃的温度。 
根据一个实施方案，脂质体的通透性可以通过与疏水性基元偶联的ELP依赖于温度的收缩和自我组装来调节。因此，可以使用脂质体作为媒介物将致化学敏感剂和抗癌剂有效地递送到受试者靶部位。 
本发明还提供了包含致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体的制备方法，所述方法包括，将一或多种能形成双层的脂质、以及一或多种弹性蛋白样多肽(ELP)组合以便提供脂质体，其中每一种所述ELP与疏水性基元偶联；且，将致化学敏感剂和抗癌剂与所述脂质体组合以便提供含致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体。所述方法中用到的脂质体可以包含脂质双层，而且，与一或多种ELP偶联的疏水性基元位于该双层中。所述一或多种能形成双层的脂质可包含磷脂。 
所述方法可包括，将提供在第一溶剂中的一或多种能形成双层的脂质与第二溶剂中的、每一种都偶联疏水性基元的、一或多种弹性蛋白样多肽(ELP) 组合；将组合的溶剂蒸发以便提供脂质双层；用水性溶剂使该脂质双层水合；将水合的脂质层过滤以便提供脂质体；且，在所述脂质体的内侧和外侧之间存在pH梯度或硫酸铵梯度的情况下，将致化学敏感剂和抗癌剂与所述脂质体组合。所述水性溶剂可包括水或以水为溶剂的溶液，例如，生理盐水，PBS，300mM柠檬酸盐溶液(pH 4.0)，以及250mM硫酸铵溶液。 
根据用于将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的药物组合物，可以将致化学敏感剂和抗癌剂有效地递送到受试者靶部位。 
根据将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的方法，可以将致化学敏感剂和抗癌剂有效地递送到受试者靶部位。 
本发明的一个或多个实施方案现在将对下述实施例进行更充分的描述。然而，提供这些实施例仅仅是出于例示目的，并非意图限制本发明的范围。 
实施例1：制备脂质体并向其中引入药物
使用下文表1中显示的成分以及组成比率制备脂质体。 
<表1> 
*1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-N-[甲氧基(聚乙二醇)-2000](铵盐) 
**硬脂酰-VPGVG VPGVG VPGVG-NH2(SEQ ID NO:7，以下称作SA-V3-NH2) 
具体地，将SA-V3-NH2在乙醇中溶解，并将DPPC(或DPPC/DSPC)、DSPE-PEG和胆固醇在氯仿中溶解。在圆底烧瓶中混合乙醇和氯仿溶液后，用旋转式蒸发器在减压条件下室温蒸发溶剂，从而在烧瓶的内壁上形成脂质薄层。 
接着，在室温向烧瓶中添加150mM硫酸铵溶液，从而使脂质薄层水合。对水合溶液进行漩涡震动和超声处理。所得溶液用装有孔径100nm的聚碳酸酯膜的
Figure BDA00002281839700151
Mini-Extruder(Avanti Polar Lipids,Inc.)挤压，制得单层泡囊型脂质体。通过用PBS流动过柱，使所得脂质体溶液的溶剂流过PD-10(GEHealthcare)脱盐柱，从而用PBS交换该溶液的溶剂。 
在必要时，在脂质体中加载两类药物，即多柔比星和维拉帕米。加载过程使用硫酸铵梯度法(J.Control.Release 2009,139,73-80)或pH梯度法(Biochimica et Biophysica Acta 1985,816,294-302)来实施。在用硫酸铵梯度法进行加载的过程中，将药物添加到脂质体溶液中，所述脂质体溶液是由内部有250mM或150mM磷酸铵、且外部有25mM Tris-HCl缓冲液的多个脂质体形成的。加载过程在37°C实施60分钟。在用pH梯度法进行加载的过程中，将药物添加至脂质体溶液中，所述脂质体溶液是由内部有300mM柠檬酸盐缓冲液(pH 4.0)、且外部有20mM HEPES缓冲液(150mM NaCl,pH 7.4)的多个脂质体形成的。加载过程在37°C实施60分钟。 
通过用生理盐水流动过柱，使所得脂质体溶液流过PD-10(GE Healthcare)脱盐柱，以除去未被捕捉的药物。结果，制得了脂质体，它们在含水内部或脂质双层中加载所述药物。 
所制备的脂质体的大小用Zeta粒度仪(Malvern inst.)测量。这些脂质体具有约100nm至约1,000nm的平均直径。另外，通过调节这些脂质体各个成分的组成比率来调节这些脂质体的大小。例如，当ELP的量较低时，脂质体的大小变得更小，而当胆固醇的量较大时，脂质体的大小变得更小。 
这些脂质体中加载的多柔比星和维拉帕米通过高效液相层析(HPLC)来分析。 
将一并加载了一定量的多柔比星和维拉帕米的脂质体稀释，并溶于二甲亚砜(DMSO)，然后导入HPLC柱。通过将药物用KH2PO4/MeCN作为洗脱 剂来洗脱，并测量其在280nm的吸光度，来进行HPLC分析。结果，观察到多柔比星和维拉帕米的固有峰，这表明，这些脂质体中加载有多柔比星和维拉帕米。 
另外，药物的加载量根据药物的加载方法来确认。在加载过程中，基于1mL脂质体溶液，多柔比星和维拉帕米的初始浓度分别为500μg和250μg。 
表2显示了硫酸铵梯度法和pH梯度法加载的药物的量。 
<表2> 
Figure BDA00002281839700161
如表2所示，在使用硫酸铵(150mM)梯度法时，多柔比星和维拉帕米被同时加载到脂质体中。 
另外，加载过程前后这些脂质体的粒径和多分散度(polydispersity)也被确认。多柔比星和维拉帕米被加载至所得脂质体上。加载过程使用硫酸铵(150mM)梯度法来实施。多柔比星和维拉帕米分别以相对于主要脂质的质量比1:0.1和相对于主要脂质的质量比1:0.05同时添加至脂质体溶液，并在37°C温育1小时。 
<表3> 
Figure BDA00002281839700162
Figure BDA00002281839700171
如表3所示，尽管一种脂质体加载两种药物，脂质体的粒径和多分散度变化很小。换言之，尽管引入疏水性药物，没有观察到聚集。 
实施例2：加载有多柔比星和维拉帕米的脂质体及其效果
具有多柔比星耐药性的肿瘤细胞，即NCI/ADR-RES细胞(得自NationalInstitute of Health(NIH))在有多柔比星存在的条件下培养，对细胞的存活力进行评估。NCI/ADR-RES细胞是自OVCAR-8衍生的肿瘤细胞。 
将NCI/ADR-RES细胞在含不同浓度的多柔比星(0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10或20ug/mL)、10%(体积百分比)胎牛血清(FBS)、和1%(重量百分比)青霉素-链霉素(PS)的极限必需培养基(MEM)中37°C温育2小时。用新鲜培养基替换MEM后，将细胞在37°C温育2天。通过水溶性四唑(WST)测定法来评估细胞的存活力。图1显示在有多柔比星存在的条件下培养时NCI/ADR-RES细胞的存活力。如图1所示，尽管用20ug/mL多柔比星处理，超过约70%的NCI/ADR-RES细胞存活。 
接着，确认耐药基因是否在NCI/ADR-RES细胞和其它肿瘤细胞中表达。所使用的耐药基因是MRP1、MDR1、和BCRP。 
图2的图像显示肿瘤细胞中耐药基因的表达。如图2所示，证实至少两种耐药基因在肿瘤细胞中表达。图2的电泳结果显示以每种细胞的RNA样品作模板、经逆转录(RT)-聚合酶链式反应(PCR)获得的产物。 
另外，评估了药物从含药物的脂质体中的温度依赖性释放谱。图3显示多柔比星从含多柔比星的脂质体中的温度依赖性释放谱。图3中的脂质体具有表1所示8号脂质体的组成。如图3所示，在温度升至37°C之前，不释放药物，因为脂质体是稳定的，而在温度升至39°C时，开始快速释放药物。 
另外，评估了将多柔比星和维拉帕米一并加载的脂质体的温度敏感性。该脂质体中装有占50%多柔比星重量的维拉帕米。图4显示药物在37°C的贮藏温度下的贮藏时间依赖性释放。如图4所示，药物在37°C的温度稳定地加载在脂质体中，没有药物释放。图5显示药物在42°C的贮藏温度下的贮藏时间依赖性释放。如图5所示，药物在42°C于短时间内快速释放。脂质体中加载的药物的释放用读板仪来测量。温育后，经适当稀释，在激发波长(λex)=485nm和发射波长(λem)=635nm处测量样品的荧光强度，以确定从 脂质体释放的多柔比星的量。通过与添加1% Triton X-100(乙醇)来破坏脂质体样品后获得的加载材料的总释放进行比较，算出因在特定温度温育所致的相对百分比荧光强度。图4和5中使用的脂质体具有表1中所示8号脂质体的组成。 
另外，确认了有加载多柔比星和维拉帕米的脂质体对NCI/ADR-RES细胞的细胞毒性。图6显示游离多柔比星、以及将多柔比星和维拉帕米一并加载的脂质体在37°C时对NCI/ADR-RES细胞的细胞毒性。该脂质体中含有占50%多柔比星重量的维拉帕米。如图6所示，NCI/ADR-RES细胞的存活力在加载有多柔比星和维拉帕米的脂质体中比在游离多柔比星中要低。在该实验中，NCI/ADR-RES细胞分别在含有游离多柔比星的MEM和含有加载了多柔比星和维拉帕米的脂质体、10%(体积)FBS、和1%(重量)PS的MEM中在37°C温育48小时。具体地，将NCI/ADR-RES细胞(5.0x104个细胞)在含有10%(v/v)FBS和1%青霉素/链霉素的MEM中在24孔板的孔中培养48小时。将培养的NCI/ADR-RES细胞用含有不同浓度的多柔比星和维拉帕米的脂质体处理，立即放置在加热摇床中，然后在37°C温育10分钟。接着，将NCI/ADR-RES细胞在37°C培养2小时，然后用新鲜培养基替换MEM。此后，将NCI/ADR-RES细胞在37°C培养48小时，NCI/ADR-RES细胞的存活力用CCK-8测定法试剂盒(Dojindo)通过WST(水溶性四唑
Figure BDA00002281839700181
测定法测量。图6中使用的脂质体具有表1中所示8号脂质体的组成。 
图7A和7B显示游离多柔比星(7A)、以及将多柔比星和维拉帕米一并加载的脂质体(7B)在45°C的细胞毒性。将NCI/ADR-RES细胞(5.0x104个细胞)在含有10%(v/v)FBS和1%青霉素/链霉素的MEM中在24孔板的孔中培养48小时。将培养的NCI/ADR-RES细胞用含有不同浓度的多柔比星和维拉帕米的脂质体处理，立即放置在加热摇床中，然后在45°C温育10分钟。该脂质体中含有占多柔比星重量50%的维拉帕米。接着，将NCI/ADR-RES细胞在37°C培养2小时，然后用新鲜培养基替换MEM。此后，将NCI/ADR-RES细胞在37°C培养46小时，并使用CCK-8测定法试剂盒(Dojindo)通过WST测定法测量NCI/ADR-RES细胞的存活力。图7中使用的脂质体具有表1中所示8号脂质体的组成。如图7A所示，在用高浓度(20ug/mL)的游离多柔比星处理NCI/ADR-RES细胞时，细胞存活力为50%。另一方面，如图7B所示，在用多柔比星和维拉帕米处理NCI/ADR-RES细胞时，细胞存活力在 含有多柔比星和维拉帕米的脂质体的浓度为10ug多柔比星(+5ug维拉帕米)/mL时为大约30%。在用相同浓度(10ug/mL)的游离多柔比星处理NCI/ADR-RES细胞时，细胞存活力为约70%。 
另外，确认了游离多柔比星处理的细胞和用游离多柔比星和游离维拉帕米同时处理的细胞的细胞毒性。图8显示药物的类型对细胞存活力的影响。如图8所示，用多柔比星和维拉帕米同时处理的组的细胞存活力比用多柔比星单独处理的组的细胞存活力要低。在该实验中，将NCI/ADR-RES细胞(5.0x104个细胞)在含有10%(v/v)FBS和1%青霉素/链霉素的MEM中在24孔板的孔中培养48小时。将培养的NCI/ADR-RES细胞用不同浓度的多柔比星和维拉帕米处理，立即放置在加热摇床中，然后在37°C或45°C温育10分钟。接着，将NCI/ADR-RES细胞在37°C培养2小时，然后用新鲜培养基替换MEM。此后，将NCI/ADR-RES细胞在37°C培养46小时，并使用CCK-8测定法试剂盒(Dojindo)通过WST测定法测量NCI/ADR-RES细胞的存活力。 
实验结果是，确认了抗癌剂的效果通过用致化学敏感剂和抗癌剂一起处理肿瘤细胞得到了改善。在用未加载在脂质体中的多柔比星和维拉帕米体内处理肿瘤细胞时，这两种药物不能同时作用于肿瘤细胞(归因于药物吸收部位和药物量，体内半衰期，等等原因)，因此抗癌剂的效果得到低水平的改善。然而，多柔比星和维拉帕米通过热刺激从一并加载它们的脂质体同时释放至肿瘤部位，并因此可以在肿瘤部位积累，这导致抗癌剂的效果得到改善。依照一个或多个实施方案的脂质体可用于一并递送抗癌剂和致化学敏感剂。 
应当理解，本文中所描述的示例性的实施方案应当仅在描述的意义上而不是出于限制目的考虑。通常应当认为每个实施方案内的特征或方面的描述可用于其它实施方案中的其它类似特征或方面。 
Figure IDA00002281840200011
Figure IDA00002281840200021
Figure IDA00002281840200031
Figure IDA00002281840200041

Claims (18)

1.脂质体，其包括：
脂质双层；
与疏水性基元偶联的弹性蛋白样多肽(ELP)；
致化学敏感剂；和
抗癌剂，
其中所述疏水性基元包装在所述脂质双层中。
2.权利要求1的脂质体，其中所述致化学敏感剂选自下组：多药耐性蛋白-1(MDR1)抑制剂，MDR-2抑制剂，多药耐性相关蛋白-1(MRP-1)抑制剂，乳腺癌耐性蛋白(BCRP)抑制剂，及其组合。
3.权利要求1的脂质体，其中所述致化学敏感剂选自下组：环孢菌素(cyclosporin)A，维拉帕米(verapamil)，比立考达(bricodar)，美卡拉明(reversan)，及其组合。
4.权利要求1的脂质体，其中所述抗癌剂是基于蒽环类药的抗癌剂。
5.权利要求1的脂质体，其进一步包括脂质双层稳定剂。
6.权利要求5的脂质体，其中所述脂质双层稳定剂包括类固醇或其衍生物。
7.权利要求1的脂质体，其中所述ELP包括一或多个重复单元，该重复单元为VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX、或其组合，其中V是缬氨酸，P是脯氨酸，G是甘氨酸，且X是除了脯氨酸外的任何氨基酸。
8.权利要求7的脂质体，其中所述重复单元重复2至200次。
9.用于将致化学敏感剂和抗癌剂递送到受试者靶部位的药物组合物，所述药物组合物包括脂质体和可药用载体或稀释剂，其中所述脂质体包括脂质双层、与疏水性基元偶联的ELP、致化学敏感剂、和抗癌剂，而且与疏水性基元偶联的ELP包装在脂质双层中。
10.权利要求9的药物组合物，其中所述致化学敏感剂选自下组：MDR1抑制剂，MDR-2抑制剂，MRP-1抑制剂，BCRP抑制剂，及其组合。
11.权利要求9的药物组合物，其中所述致化学敏感剂选自下组：环孢菌素A，维拉帕米，比立考达，美卡拉明，及其组合。
12.权利要求9的药物组合物，其中所述抗癌剂是基于蒽环类药的抗癌剂。
13.权利要求9的药物组合物，进一步包括脂质双层稳定剂。
14.权利要求13的药物组合物，其中所述脂质双层稳定剂包括类固醇或其衍生物。
15.权利要求9的药物组合物，其中所述ELP包括一或多个重复单元，该重复单元为VPGXG、PGXGV、GXGVP、XGVPG、GVPGX、或其组合，其中V是缬氨酸，P是脯氨酸，G是甘氨酸，且X是除了脯氨酸外的任何氨基酸。
16.权利要求15的药物组合物，其中所述重复单元重复2至200次。
17.制备包含致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体的方法，其包括
将一或多种能形成双层的脂质、以及一或多种弹性蛋白样多肽(ELP)组合以便提供脂质体，其中每一种所述ELP与疏水性基元偶联；且，
将致化学敏感剂和抗癌剂与所述脂质体组合以便提供含致化学敏感剂和抗癌剂的脂质体。
18.权利要求17所述的方法，其包括，将提供在第一溶剂中的一或多种能形成双层的脂质与第二溶剂中的、每一种都偶联疏水性基元的、一或多种弹性蛋白样多肽(ELP)组合；
将组合的溶剂蒸发以便提供脂质双层；
用水性溶剂使该脂质双层水合；
将水合的脂质层过滤以便提供脂质体；且，
在所述脂质体的内侧和外侧之间存在pH梯度或硫酸铵梯度的情况下，将致化学敏感剂和抗癌剂与所述脂质体组合。
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