CN103044541A - 一种磷酸化胶原蛋白的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其步骤包括：一、磷酸化；二、盐析；三、纯化；四、干燥；所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率≥87.5％，磷酸化程度15.2磷／mol。本发明比传统胶原蛋白具有更好的生理活性，能更好的促进人体对钙铁等的吸收和利用。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白的制备方法，尤其涉及一种磷酸化胶原蛋白的制备方法。
背景技术
合适条件下，用化学试剂与水解胶原蛋白分子中特定基团发生化学反应，生成水解胶原蛋白化学修饰物。如进行磷酸化，生成水解胶原蛋白；进行季铵化，生成季铵化水解胶原蛋白。由于新基团加入，改变了水解胶原蛋白的物理化学及功能性质，使之更适合于特殊用途。在三聚磷酸钠作用下，胶原蛋白分子中的羟基发生非酶磷酸化，形成磷酸化胶原蛋白质。磷酸化的胶原蛋白带负电荷，与钙、铁等离子形成离子配位化合物，即使在微碱性条件下也呈溶解状态，从而有利于上述离子的吸收利用。磷酸化胶原蛋白的作用类似于酪蛋白磷酸肽，但是其价格远低于酪蛋白磷酸肽，是一种值得开发的钙离子强化剂。
因此，要想获得一种磷酸化胶原蛋白，就必须一种磷酸化胶原蛋白的制备方法。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种磷酸化胶原蛋白的制备方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术手段是：
一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其步骤包括：
一、磷酸化：称取定量水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为0.25％，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8.0-9.0，向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70℃，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ，反应2.5h；
二、盐析：完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8℃以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85％时止；
三、纯化：静置处理30min后离心，离心机转速为l3000r／min ，温度4℃，离心时间8min，弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85％的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对pH值为8.5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液； 四、干燥：将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-50～-45℃，真空度为80～100Pa，时间为12～16h。
进一步的，所述步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率≥87.5％，磷酸化程度15.2磷／mol胶原蛋白。
本发明的有益效果在于：通过本方法制备高纯度的磷酸化胶原蛋白，白色粉末，磷酸化胶原蛋白收得率≥87.5％，磷酸化程度15.2磷／mol 胶原蛋白，比传统胶原蛋白具有更好的生理活性，能更好的促进人体对钙铁等的吸收和利用。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。
实施例1
一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其步骤包括：
一、磷酸化：称取1kg水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为0.25％，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8.0，向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70℃，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ，反应2.5h；
二、盐析：完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8℃以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85％时止；
三、纯化：静置处理30min后离心，离心机转速为l3000r／min ，温度4℃，离心时间8min，弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85％的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对pH值为8.5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液； 四、干燥：将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-50℃，真空度为80Pa，时间为12h。
步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率为87.8％，磷酸化程度15.2磷／mol胶原蛋白。
实施例2
一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其步骤包括：
一、磷酸化：称取1.5kg水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为0.25％，用氢氧化钠溶液调节其pH值为9.0，向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70℃，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ，反应2.5h；
二、盐析：完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8℃以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85％时止；
三、纯化：静置处理30min后离心，离心机转速为l3000r／min ，温度4℃，离心时间8min，弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85％的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对pH值为8.5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液； 四、干燥：将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-45℃，真空度为100Pa，时间为16h。
步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率为88.0％，磷酸化程度15.2磷／mol胶原蛋白。
本发明的实施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种磷酸化胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤包括：
一、磷酸化：称取定量水解胶原蛋白液，置于反应釜中，在搅拌下用蒸馏水稀释至蛋白质质量浓度为0.25％，用氢氧化钠溶液调节其pH值为8.0-9.0，向反应釜夹层通入蒸汽，使稀释胶原蛋白液升温至70℃，在保温状态下加入三聚磷酸钠进行磷酸化反应，三聚磷酸钠用量为胶原蛋白质量的1/1 ，反应2.5h；
二、盐析：完成反应后，向反应釜夹层通入冷却水，降温至8℃以下，泵入沉淀罐，然后，在搅拌下向反应釜中泵入饱和硫酸铵溶液盐析沉淀磷酸化胶原蛋白，直至盐析液中硫酸被饱和度达到85％时止；
三、纯化：静置处理30min后离心，离心机转速为l3000r／min ，温度4℃，离心时间8min，弃上清液，沉淀物再次用饱和度为85％的硫酸铵溶液充分洗涤数次，冷冻离心，获得脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀，将脱无机磷的磷酸化胶原蛋白沉淀置于透析袋中，对pH值为8.5的碳酸钠溶液进行过夜透析脱盐，获得脱盐磷酸化胶原蛋白液； 四、干燥：将脱盐磷酸化胶原蛋白液进行冷冻干燥，获得磷酸化胶原蛋白冻干粉，冷冻干燥条件为温度-50～-45℃，真空度为80～100Pa，时间为12～16h。
2.根据权力要求1所述的磷酸化胶原蛋白的制备方法，其特征在于:所述步骤四中所得磷酸化胶原蛋白为白色粉末，其收得率≥87.5％，磷酸化程度15.2磷／mol胶原蛋白。
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