CN103040907A

CN103040907A - 一种醋制雷公藤的炮制方法

Info

Publication number: CN103040907A
Application number: CN2012105807412A
Authority: CN
Inventors: 范永升; 沈炜; 石森林; 寿旗扬; 屠珏; 魏颖慧; 吴佳
Original assignee: Zhejiang Chinese Medicine University ZCMU
Current assignee: Zhejiang Chinese Medicine University ZCMU
Priority date: 2012-12-27
Filing date: 2012-12-27
Publication date: 2013-04-17
Anticipated expiration: 2032-12-27
Also published as: CN103040907B

Abstract

本发明提供了一种醋制雷公藤的炮制方法，所述方法包括：（1）取雷公藤的根，除去非药用部位，切片后加入质量为药材质量10~40%的米醋，置于适宜容器中，闷润4~24小时；（2）将上述药材置于适宜容器内隔水蒸制，时间1~6小时；（3）将蒸制后的药材置适宜干燥设备中于50~150℃干燥1~9小时，干燥至药材含水量为5~15%，取出、冷却，即得所述醋制雷公藤。本发明炮制方法简单，易于操作，适合大生产，能有效满足临床需要，制得的醋制雷公藤（饮片）经体外细胞实验验证，既能保持雷公藤显著的免疫抑制活性，又能降低雷公藤所致的肝肾毒性。

Description

一种醋制雷公藤的炮制方法

（一）技术领域

本发明涉及一种醋雷公藤的炮制方法。

（二）背景技术

雷公藤为卫矛科雷公藤属植物雷公藤（TriptergiumwilfordiiHook.F）的根，又名断肠草、黄藤根等，性苦味寒，有大毒，归心、肝经。具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛、杀虫解毒之功效。临床运用始见于《本草纲目拾遗》中的《汪连仕方》，主要用作杀虫剂及治疗类风湿性关节炎等疾病。

由于临床疗效确切，雷公藤是目前治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮等自身免疫性疾病最常用的中药之一，但是其毒性也很大，极易造成肝脏、肾脏和生殖系统的毒副作用，所以《中国药典》迄今未收载雷公藤饮片。目前缺乏能有效降低雷公藤毒副作用的炮制方法，因此研究一种成分变化明确，免疫活性显著，肝肾毒性小的炮制方法对雷公藤的临床应用具有较大的意义。

（三）发明内容

本发明目的是提供一种成分变化明确，免疫活性显著，肝肾毒性小的醋制雷公藤的炮制方法。

本发明采用的技术方案是：

一种醋制雷公藤的炮制方法，所述方法包括：

（1）取雷公藤的根，除去非药用部位，切片后加入质量为药材（切片后的药用部位）质量10~40%的米醋（w/w），置于适宜容器中，闷润4~24小时，使米醋被药材吸吸收完全；

（2）将上述药材置于适宜容器内隔水蒸制，时间1~6小时；

（3）将蒸制后的药材置适宜干燥设备中于50~150℃干燥1~9小时，至饮片中含水量为5~15%（w/w），取出、冷却，即得所述醋制雷公藤。

优选的，所述方法如下：

（1）取雷公藤的根，除去非药用部位，切片后加入质量为药材质量15~25%的米醋，置于适宜容器中，闷润8~16小时；

（2）将上述药材置于适宜容器内隔水蒸制，时间2~3小时；

（3）将蒸制后的药材置适宜干燥设备中于60~90℃干燥3~6小时，至饮片中含水量为7~13%，取出、冷却，即得所述醋制雷公藤。

优选的，步骤（1）米醋用量为药材质量的15~25%，最佳用量为20%。

优选的，步骤（1）闷润时间为4~24小时，最佳时间为12小时。

优选的，步骤（2）药材蒸制时间为2~3小时，最佳时间为2小时。

优选的，步骤（3）于60~90℃温度干燥时间3~6小时，至饮片中含水量为5~15%（w/w）；最佳干燥条件为，于70~80℃温度条件下，干燥4~5小时，至药材含水量约为9~11%。

本发明的有益效果主要体现在：本发明炮制方法简单，易于操作，适合大生产，能有效满足临床需要，制得醋制雷公藤饮片经体外细胞实验验证，既能保持雷公藤显著的免疫抑制活性，又能降低雷公藤所致的肝肾毒性。

（四）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，置于托盘内，取辅料米醋10g，加入雷公藤药材中，拌匀，上覆盖子，闷润4小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制1小时后，取出，置80℃热风循环烘箱内干燥4小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例2：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，置于托盘内，取辅料米醋20g，加入雷公藤药材中，拌匀，上覆盖子，闷润4小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制2小时后，取出，置60℃热风循环烘箱内干燥8小时取出放凉，密封包装，既得。

实施例3：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋30g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润4小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制4小时后，取出，置90℃热风循环烘箱内干燥3小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例4：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋20g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润8小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制1小时后，取出，置80℃热风循环烘箱内干燥4小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例5：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋30g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润8小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制2小时后，取出，置70℃热风循环烘箱内干燥5小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例6：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋10g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润8小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制4小时后，取出，置100℃热风循环烘箱内干燥2小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例7：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋30g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润12小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制1小时后，取出，置70℃热风循环烘箱内干燥5小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例8：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋10g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润12小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制2小时后，取出，置110℃热风循环烘箱内干燥1小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例9：

取去除根皮等非药用部位后的雷公藤药材100g，切片，取辅料米醋20g，加入雷公藤药材中，拌匀，置于托盘内，上覆盖子，闷润12小时，取出，置于笼屉内，隔水蒸制4小时后，取出，置80℃热风循环烘箱内干燥4小时，取出放凉，密封包装，既得。

实施例10：雷公藤不同醋制方法炮制品中雷公藤红素含量的比较试验

本实验采用高效液相色谱法比较测定了雷公藤不同醋制品中所含雷公藤红素的含量，从成分含量上对雷公藤不同炮制品进行比较，为雷公藤的醋制规范化研究提供了一定的科学依据。

雷公藤红素的含量测定方法：取各种雷公藤醋制品粉末（粉碎后过40目筛）10g，精密称定，加入甲醇回流提取2次，过滤，合并滤液，浓缩至浸膏。用3倍量的硅胶拌样，氯仿超声，静置后，滤取上清液，合并浓缩至5mL。取4.0g硅胶干法装柱（10cm×1.5cm），样品上柱，氯仿-甲醇（97∶3）50mL洗脱，洗脱液浓缩至干。残渣用甲醇溶解，移入量瓶中，稀释定容，过0.22μm的有机滤膜，即得供试品溶液。取供试品20μl注入Agilent Zorbax SB-C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱中，流动相为磷酸（0.1%）-三乙胺（0.2%）水溶液（A）-乙腈（B）；梯度洗脱：0~15min，10%~35% B；15~22min，35%~35% B；22~30min，35%~55% B；30～35min，55% B；35~40min，55%~60% B；40~70min，60%~85% B；70~75min，85%~95% B；75min~80min，95%~10% B；检测波长：0- 65min为225nm，65min时切换为210nm；柱温：35℃；流速：0.75mL·min-1。结果见表1。

表1：雷公藤样品中雷公藤红素的含量（μg.ml^-1）（n =2）

样品	1号	2号	3号	4号	5号	6号	7号	8号	9号
										含量	1.216	1.394	0.756	0.478	0.458	0.891	0.119	0.305	0.142

实验结果表明，雷公藤各炮制品中，雷公藤红素的含量有较大差异，通过方差分析，闷润时间对雷公藤红素含量的差异影响最为显著，有统计学意义（p<0.05），而蒸制时间、辅料醋的用量对雷公藤红素含量的差异没有统计学意义。因此，本发明制定的雷公藤醋制最佳工艺为：雷公藤药材与辅料米醋的质量比为100：20，闷润时间为12小时，蒸制2小时，70~80℃热风循环烘箱烘4~5小时，放凉后密封包装，既得。

实施例11：雷公藤醋制品水提物体外肝肾细胞毒性的比较

1. 取按优选后的醋制工艺（实施例8）炮制后的雷公藤醋制饮片100克，加入800毫升水，回流2小时，滤过，滤渣再加800毫升水回流2小时，合并滤液，常压浓缩至100毫升，得到细胞实验的供试品。用不含血清的1640细胞培养液，将药液分别稀释至每毫升培养液含雷公藤醋制饮片0.6毫克、3毫克和15毫克。

取雷公藤传统炮制饮片（传统炮制方法为净选后，取出根皮、枝叶等非药用部位后，切斜片，烘干既得）100克，加入800毫升水，回流2小时，滤过，滤渣再加800毫升水回流2小时，合并滤液，常压浓缩至100毫升，得到细胞实验的供试品。用不含血清的1640细胞培养液，将药液分别稀释至每毫升培养液含雷公藤传统炮制饮片0.6毫克、3毫克和15毫克。

选用正常的L-02人肝细胞作为实验细胞株，按照《细胞试验指南》中的MTT法，在酶联免疫检测仪570纳米波长下检测肝细胞的增值情况，试验结果见表2。

表2：雷公藤不同饮片三个浓度下对肝细胞抑制率的数据(n=10)

炮制方法	0.6mg/mL抑制率%	3mg/mL抑制率%	15mg/mL抑制率%
				雷公藤醋蒸饮片	-10.086±7.562**	-4.467±5.582**	0.674±10.235*
雷公藤传统炮制饮片	-4.145±3.330	0.668±3.003	6.914±6.037

通过两个样本均数的方差分析，在0.6mg/mL、3mg/mL和15mg/mL三个浓度下，雷公藤醋制饮片和雷公藤传统炮制饮片对肝细胞的毒性有明显差异；在0.6mg/mL和3mg/mL两个浓度下，两种饮片对肝细胞的毒性有统计学意义（p<0.01），醋制饮片对肝细胞的毒性显著小于雷公藤传统炮制饮片；在15 mg/mL浓度下，两种饮片对肝细胞的毒性有统计学意义（p<0.05），醋制饮片对肝细胞的毒性明显小于雷公藤传统炮制饮片。

2. 取按优选后的醋制工艺（实施例8）炮制后的雷公藤醋制饮片100克，加入800毫升水，回流2小时，滤过，滤渣再加800毫升水回流2小时，合并滤液，常压浓缩至100毫升，得到细胞实验的供试品。用不含血清的1640细胞培养液，将药分别液稀释至每毫升培养液含雷公藤醋制饮片0.6毫克、3毫克和15毫克。雷公藤传统炮制饮片按相同方法进行处理。

绿猴肾细胞作为实验细胞株，按照《细胞试验指南》中的MTT法，在酶联免疫检测仪570纳米波长下检测肝细胞的增值情况，试验结果见表3。

表3：雷公藤不同饮片三个浓度下对绿猴肾细胞抑制率的数据(n=10)

炮制方法	0.6mg/mL抑制率%	3mg/mL抑制率%	15mg/mL抑制率%
				雷公藤醋蒸饮片	-10.200±5.566	-3.980±5.582**	0.985±3.977**
雷公藤传统炮制饮片	-13.308±8.122	6.801±3.004	42.929±5.363

通过两个样本均数的方差分析，在0.6mg/mL、3mg/mL和15mg/mL三个浓度下，雷公藤醋制饮片和雷公藤传统炮制饮片对绿猴肾细胞的毒性有差异；在0.6mg/mL浓度下，雷公藤的两种饮片对绿猴肾细胞的毒性没有统计学意义（p>0.5），两者之间无明显差异；在3mg/mL和15 mg/mL三个浓度下，两种饮片对绿猴肾细胞的毒性有统计学意义（p<0.01），醋制饮片的毒性显著小于雷公藤传统炮制饮片。

Claims

1.一种醋制雷公藤的炮制方法，所述方法包括：

（1）取雷公藤的根，除去非药用部位，切片后加入质量为药材质量10~40%的米醋，置于容器中，闷润4~24小时；

（2）将上述药材置于容器内隔水蒸制，时间1~6小时；

（3）将蒸制后的药材置干燥设备中于50~150℃干燥1~9小时，至饮片中含水量为5~15%，取出、冷却，即得所述醋制雷公藤。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下：

（1）取雷公藤的根，除去非药用部位，切片后加入质量为药材质量15~25%的米醋，置于容器中，闷润8~16小时；

（2）将上述药材置于容器内隔水蒸制，时间2~3小时；

（3）将蒸制后的药材置干燥设备中于60~90℃干燥3~6小时，至饮片中含水量为7~13%，取出、冷却，即得所述醋制雷公藤。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（1）闷润时间为12小时。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（1）米醋用量为药材质量的20%。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（2）药材蒸制时间为2小时。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（3）中干燥条件为于70~80℃下干燥4~5小时，至饮片中含水量为9~11%。