CN103040854A - 獐牙菜苦苷及其苷元的医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药学领域，特别是涉及一种结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物的医药用途：

Description

獐牙菜苦苷及其苷元的医药用途

技术领域

本发明属于药学领域，特别是涉及一种獐牙菜苦苷及其苷元的医药用途。

背景技术

肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生，导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程。轻者称为肝纤维化，重者使肝小叶结构改建，假小叶及结节，成为肝硬化。肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）位于肝窦周间隙（Disse间隙）内，紧贴着肝窦内皮细胞（sinusoidalendothelialcells,SEC）和肝细胞。其形态不规则，胞体呈圆形或不规则形，常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。正常情况下肝星状细胞处于静止状态。当肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时，肝星状细胞被激活，其表型由静止型转变为激活型。激活的肝星状细胞一方面通过增生和分泌以胶原为主的细胞外基质（ECM）参与肝纤维化的形成和肝内结构的重建，另一方面通过细胞收缩使肝窦内压升高。这两类变化最终奠定了肝纤维化、门静脉高压症发病的病理学基础。

獐牙菜苦苷（Swertiamarin）是一种天然的环烯醚萜类的成分，存在于木犀科、龙胆科和茜草科等双子叶植物中，其化学名为：[4aR-(4aα,5β,6α)]-5-Ethenyl-6-(β-D-glucopyranosyloxy)-4,4a,5,6-tetrahydro-4a-hydroxy-1H，3Hpyrano[3,4-c]pyran-1-one；其分子量为374.34；分子式为：C₁₆H₂₂O₁₀。獐牙菜苦苷苷元是脱掉葡萄糖后的苷元。獐牙菜苦苷具有保肝、解毒、降酶、减轻肝脾肿大、增强肝区巨噬细胞的吞噬功能等作用。

发明内容

本发明首先提供了一种结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备防治肝纤维化和肝硬化药物中的应用，其中结构式（Ⅰ）为：

其中R选自羟基或葡萄糖基。

本发明还包括上述化合物的相应的所有药学上可以接受的盐、水合物或前药。这些盐可以由化合物中带正电荷的部分（例如，胺基）与具有相反电性的带负电荷（例如，三氟醋酸）形成；或者由化合物中带负电荷的部分（例如，竣基）与正电荷（例如，钠、钾、钙、镁）形成。化合物可以含有一个非芳香性的双键，具有一个或多个不对称中心。所以，这些化合物可以作为外消旋的混合物、单独的对映异构体、单独的非对映异构体、非对映异构体混合物、顺式或反式异构体存在。所有这些异构体都是可预期的。所述的“结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物的前药”通常指一种物质，当用适当的方法施用后，可在受试者体内进行代谢或化学反应而转变成结构式（Ⅰ）的至少一种化合物或其盐。

较优选的，本发明的上述化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药是作为唯一的原料药应用于制备防治肝纤维化和肝硬化的药物中。

本发明的结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物可通过本领域的常规方法如醇提、层析等从獐牙菜等植物中提取获得，亦可通过商业途径购买或者利用市售原料，通过现有技术中传统的化合物合成方法合成获得。本发明的环烯醚萜类化合物的结构式如下：

本领域的普通技术人员根据现有公知技术可以合成本发明的化合物。合成的化合物可以进一步通过柱色谱法、高效液相色谱法或结晶等方式进一步纯化。

合成化学改造、保护官能团方法学（保护或去保护）对合成应用化合物是很有帮助的，并且是现有技术中公知的技术，如R.Larock,Comprehensive OrganicTransformations,VCH Publishers(1989);T.W.Greene and P.G.M.Wuts,ProtectiveGroups in Organic Synthesis,3^rd Ed.,John Wiley and Sons(1999);L.Fieser and M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994);and L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,JohnWiley and Sons(1995)中都有公开。

本发明的结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药可以显著抑制肝星状细胞增殖以及拮抗肝细胞损伤。故而本发明的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药可用于制备预防或者治疗肝纤维化和肝硬化的药物。

本发明的结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药可以制备成药物组合物，该组合物包括一种或几种本发明的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药，与药学上可接受的载体，该组合物可用于治疗肝纤维化和肝硬化。

本发明的结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药可以制备成药物制剂，该药物制剂包括一种或几种本发明的结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药，该药物制剂可用于治疗肝纤维化和肝硬化。

所述结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药在组合物或药物制剂中的含量例如0.0001-50wt%；较佳的0.001-30wt%；更佳的0.01-20wt%。

治疗有效量（即：可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量）的本发明的结构式（Ⅰ）的化合物与药学上可以接受的载体（用于治疗给药的载体，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性）可以组成药物制剂，这些药物制剂可以制备成口服制剂、注射剂、片剂、粉制剂、胶囊剂、分散片、缓释制剂等。

治疗有效量的本发明的药物组合物的用量介于0.001-500mg/kg体重/天之间，任何介于上述范围之内的用量皆为本发明的有效量。优选的，本发明的组合物的用量介于0.005-300mg/kg体重/天之间；更优选的，本发明的组合物的用量介于0.0l-100mg/kg体重/天之间。所述的“治疗有效量”可用于相关疾病的单一用药或联合用药治疗。本领域的专业人员能够理解，在实际给药时的用量可高于或低于上述剂量范围。针对某一对象（如哺乳动物一人）的“治疗有效量”和具体治疗方案可受诸多因素的影响，包括所用化合物或其前药的药效活性、给药对象的年龄、体重、一般情况、性别、饮食、给药时间、疾病易感性、疾病进程以及收治医师的判断等。所述的“治疗”指的是给予机体（含有肿瘤、具有肿瘤的症状、或者具有肿瘤的前兆）一种或几种本发明的结构式（Ⅰ）的环烯醚萜类化合物，以治疗、减轻、减缓、改变、治愈、影响、改善其肝纤维化和肝硬化、肝纤维化和肝硬化的症状或肝纤维化和肝硬化的前兆。

本发明的结构式（Ⅰ）的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或前药或其组合物或其药物制剂可以通过口服、静脉内、肌肉内、皮下、鼻腔内、直肠内等途径给药。固体载体如：淀粉、乳糖、磷酸二醇、微晶纤维素、黑糖和白陶土，而液态载体如：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油（如玉米油、花生油和芝麻油），只要适合活性成分的特性和所需要的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，如，调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂（如羟丙基纤维素）的水中制备这些活性化合物（作为游离碱或药学上可接受的盐）的溶液或悬浮液。还可在甘油、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物的生长。

适用于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉（用于临时制备无菌注射液或分散液）。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物如细菌和真菌的污染和影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇、它们的适当混合物和植物油。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1肝组织天狼星红胶原染色（×200）

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

实施例1

运用DMN诱导的大鼠肝纤维化模型，以不同剂量的獐牙菜苦苷治疗大鼠肝纤维化。

实验对象

Wistar雄性大鼠，清洁级，体重（160±10）g。

实验方案

分组与给药：70只大鼠随机分正常组（8只）及造模组（62只）。造模组每周连续3天腹腔注射0.5％DMN2ml·kg^-1，4周后造模组大鼠死亡3只，造模组余59只大鼠随机按分为5组：模型组、N-乙酰半胱氨酸对照组（NAC）、獐牙菜苦苷低剂量组（ZYC-L）、獐牙菜苦苷中剂量组（ZYC-M）、獐牙菜苦苷高剂量组（ZYC-H），每组11-12只，见表1。药物剂量分别按10ml·Kg^-1体重腹腔注射，每周6次，共2周；正常组与模型组腹腔注射等剂量生理盐水。治疗2周后，全部大鼠以2％戊巴比妥钠按2ml·Kg^-1剂量腹腔注射麻醉，下腔静脉采血，离心分离血清，取肝组织备检。

表1大鼠分组及给药情况一览表

药效指标：大鼠死亡率、血清肝功能、肝组织天狼星红胶原染色与肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量（Jamall氏法）；数据均采用SPSS12.0软件包进行统计分析。计量资料以

表示，采用单因素方差分析；等级资料采用Ridit分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

结果显示：6周后，模型组大鼠死亡3只（死亡率25%），体重明显下降，腹水形成；血清ALT水平与肝组织Hyp含量较正常组均显著升高（P<0.01）；而模型组血清Alb含量较正常组Alb含量显著降低（P<0.01）；肝组织天狼星红胶原染色（图1）示，正常组大鼠肝组织仅在汇管区和中央静脉壁见少量胶原纤维。而模型组大鼠可见胶原纤维大量增生沉积，形成多个假小叶。獐牙菜苦苷的低、中、高剂量组与N-乙酰半胱氨酸肝组织胶原纤维明显减少。獐牙菜苦苷的低、中、高剂量组肝组织Hyp含量和血清ALT均显著低于模型组，而Alb含量显著高于模型组，作用类似于阳性对照药N-乙酰半胱氨酸，且各治疗组间疗效无统计学差异，结果见表2。

结果证实：低、中、高剂量组獐牙菜苦苷对DMN诱导的大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用。

表2各组大鼠死亡率、ALT、Alb、Hyp比较

注：与正常组比较,^#p＜0.05,^##p＜0.01；与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01.N：正常组；M：模型组；ODG-L：獐牙菜苦苷低剂量组；ODG-M：獐牙菜苦苷中剂量组；ODG-H：獐牙菜苦苷高剂量组；NAC：N-乙酰半胱氨酸对照组。

实施例2：獐牙菜苦苷对肝星状细胞增殖的抑制作用

实验对象：

人肝星状细胞系（LX-2）

实验方案

目的：獐牙菜苦苷对TGF-β₁诱导的肝星状细胞（LX-2）增殖的作用。

实验步骤：LX-2细胞以4000个/孔接种于96孔板，长至亚单层，分为Control组、TGF-β1组、獐牙菜苦苷不同浓度（2μmol·L^-1,10μmol·L^-1,50μmol·L^-1）组，Control组以0.5%FBS/DMED，TGF-β₁组以2.5ng·ml^-1TGF-β₁，獐牙菜苦苷组以2.5ng·ml^-1TGF-β₁并分别给予相应浓度的獐牙菜苦苷药物共孵育24h，每组设5个复孔。孵育结束后，以MTT法检测细胞增殖情况，测定各组的OD值。抑制率计算公式：

实验结果：2.5ng·ml^-1TGF-β₁可显著诱导LX-2细胞增殖（P<0.01）；而獐牙菜苦苷在2.5μmol·L^-1，5μmol·L^-1和20μmol·L^-1均能显著抑制TGF-β₁诱导的细胞增殖（P<0.05），实验结果见表3。

结果证实：獐牙菜苦苷对TGF-β₁诱导的肝星状细胞增殖有良好的拮抗作用。

表3獐牙菜苦苷对肝星状细胞增殖的影响（n=5）

注：^##与正常组比较，P<0.01；^**与模型组比较，P<0.01

实施例3：獐牙菜苦苷对肝细胞损伤的拮抗作用

实验对象

正常人肝细胞系（HL-7702细胞）

实验方案

目的：獐牙菜苦苷对H₂O₂诱导的肝细胞损伤的拮抗作用。

实验步骤：正常人肝细胞系（HL-7702细胞）传代后以3000个/孔种于96孔板，长至亚单层后，取獐牙菜苦苷进行实验，实验分为正常组、模型组、獐牙菜苦苷低中高三个浓度（2.5、5、20μmol·L^-1）进行给药，每个组5个复孔，与HL-7702细胞孵育24h，孵育结束后，再以3.2mmol·L^-1H₂O₂作用1.5h诱导细胞损伤，CCK-8法测定各给药组的OD值，再分别与模型组比较。

实验结果：以3.2mmol/l H₂O₂作用后，细胞活力较正常组比较下降80%（P<0.01），表明肝细胞损伤模型成立，适合实验研究。而欧当归内酯A在2.5μmol·L^-1，5μmol·L^-1和20μmol·L^-1均能显著拮抗H₂O₂对肝细胞的损伤作用（P<0.05），实验结果见表4。

实验证实：獐牙菜苦苷对H₂O₂诱导的肝细胞损伤有较好的拮抗作用。

表4獐牙菜苦苷对肝细胞损伤的影响（n=5）

注：^##与正常组比较，P<0.01；^*与模型组比较，P<0.05；^**与模型组比较，P<0.01

本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本专利申请之权利要求的覆盖范围。

Claims (2)

1.一种结构式（Ⅰ）的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药在制备防治肝纤维化和肝硬化药物中的应用：

其中R选自羟基或葡萄糖基。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述结构式（Ⅰ）的化合物，或其药学上可接受的盐、水合物或前药是作为唯一的原料药应用于防治肝纤维化和肝硬化的药物的制备中。

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