CN103012671B

CN103012671B - 具有抗肿瘤活性的香豆素类高分子聚合物及其制备方法

Info

Publication number: CN103012671B
Application number: CN201210577506.XA
Authority: CN
Inventors: 袁建超; 宋凤英; 谢小利; 贾宗; 栗静; 袁兵年; 王福州
Original assignee: Northwest Normal University
Current assignee: Northwest Normal University
Priority date: 2012-12-27
Filing date: 2012-12-27
Publication date: 2015-07-29
Anticipated expiration: 2032-12-27
Also published as: CN103012671A

Abstract

本发明提供了一种具有抗肿瘤活性的香豆素类高聚物，是将7-羟基香豆素或7-羟基香豆素与磺胺嘧啶通过聚合的方式连接到N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上而形成的生物相容良好的高分子共聚物。本发明的高分子共聚物将具有抗肿瘤活性的7-羟基香豆素、磺胺嘧啶连接到作为肿瘤靶向药物载体N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上，使其抗肿瘤活性进行叠加，进一步促进了高分子聚合物对肿瘤的抑制作用，同时大大延长了抗癌药物在肿瘤的停留时间。而且高分子载体HPMA也降低了抗癌药物的毒性，减少了对正常组织的伤害。可以用于预防和治疗胃癌，结肠癌，肝细胞瘤等癌症。

Description

具有抗肿瘤活性的香豆素类高分子聚合物及其制备方法

技术领域

本发明属于化合物合成及应用领域，涉及一种具有抗肿瘤活性的香豆素类聚合物；本发明同时还涉及该香豆素类聚合物的制备方法。

背景技术

癌症已经成为人类健康的主要威胁之一，且呈明显上升趋势。现如今治疗癌症的主要方法包括放疗、化疗、手术疗法和基因疗法。其中放疗和化疗是极其重要的非手术疗法，但是放疗和化疗在杀死肿瘤细胞的同时也对机体正常细胞产生严重损伤。而现有的抗癌药物都是小分子药物，在体内循环过程中很快地排出体外，达不到预期治疗效果。到目前为止，还没有预防和治疗癌症或者肿瘤的特效药。

香豆素类化合物在结构上可以看成是顺式邻羟基桂皮酸脱水而形成的内酯类化合物。自1812年Vanquelin从植物Daphnealpina中首次得到香豆素类化合物瑞香苷(daph-nin)，至今已研究数百种香豆素类化合物。此类化合物广泛存在于植物界，特别是在伞形科、芸香科、菊科、豆科、茄科等植物中分布广泛。如蛇床子、独活、白芷、枳壳、前胡、秦皮、茵陈、补骨脂、续随子等中药均含有这类成分。由于香豆素类化合物生物学活性的多样性，为国内外学者研究一直所重视。WeberUS等对一些具有抗肿瘤作用的香豆素类化合物的体内代谢产物7-羟基香豆素（伞形花内酯，skimmetin）类化合物进行了研究，但尚未见任何对该化合物进行修饰用于高分子药物治疗肿瘤的研究。

N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)高分子药物由于具有良好的生物相容性，作为肿瘤靶向药物载体已应用于临床。它不仅能够降低药物的毒副作用，减少抗药性，提高药物体内的稳定性，还能增加药物在肿瘤部位的累积，使药效得到更好的发挥。

磺胺嘧啶在肿瘤组织病灶的选择性聚集现象在50年代由stevens 首先报道，之后在60年代Calvert 等进一步证实磺胺类药物的亲肿瘤特性。

但是，到目前为主，尚未见将上述两种抗癌药物连接到高分子药物高分子载体HPMA上制备抗癌药物的报道。

发明内容

本发明的目的之一：是提供一种具有抗肿瘤活性的香豆素类高分子聚合物。

本发明的目的之二：提供上述具有抗肿瘤活性的香豆素类高分子聚合物的制备方法。

（一）具有抗肿瘤活性的香豆素类高分子聚合物

具有抗癌活性的香豆素类化合物，是将7-羟基香豆素或7-羟基香豆素与磺胺嘧啶通过聚合的方式连接到N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上而形成的生物相容良好的高分子共聚物。其结构如下：

式（1）中，m = 55 ~ 64，n = 3 ~ 10； Mn：1.1× 10⁴~ 2.0 × 10⁴，Mw/Mn=1.10 ~ 3.00；

式（2）中，o = 4~7，p = 52 ~ 3，q = 4 ~14；Mn：1.4× 10⁴~ 2.0 × 10⁴，Mw/Mn=1.04 ~ 3.00。

本发明的高分子共聚物将具有抗肿瘤活性的7-羟基香豆素、磺胺嘧啶连接到作为肿瘤靶向药物载体N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上，使其抗肿瘤活性进行叠加，进一步促进了高分子聚合物对肿瘤的抑制作用，同时大大延长了抗癌药物在肿瘤的停留时间。而且高分子载体HPMA也降低了抗癌药物的毒性，减少了对正常组织的伤害；同时高分子聚合物体现出良好的生物相溶性，进而增强了对肿瘤的抑制作用。

本发明具有抗肿瘤活性的高分子共聚物的制备，包括以下工艺步骤：

（1）7-羟基香豆素单体的制备：将7-羟基香豆素溶解在二氯甲烷中，冷却至-5 ~ 5℃，加入甲基丙烯酰氯，缚酸剂三乙胺，搅拌反应1.5 ~ 3小时，得到澄清的深红色溶液，蒸除溶剂得到浅红色固体，用硅胶柱分离，收集产物组分，蒸去溶剂，得到白色固体，即为7-羟基香豆素单体；

所述7-羟基香豆素、甲基丙烯酰氯、三乙胺的摩尔投料比为：1:1.5:0.2 ~ 1:2:0.5。

（2）磺胺嘧啶单体的制备：将磺胺嘧啶溶解于丙酮与氢氧化钠的混合液中，冷却至-5 ~ 5℃中，加入甲基丙烯酰氯，搅拌反应6 ~ 12小时，反应后出现黄色沉淀，抽滤、干燥，用甲醇-水混合溶剂重结晶，得黄色晶体；洗涤，抽滤，于40 ~ 50℃的真空干燥箱内干燥24 ~ 72h，得到浅黄色固体即为磺胺嘧啶单体；

所述磺胺嘧啶、甲基丙烯酰氯的摩尔投料比为：1:1.5 ~ 1:2。

所述丙酮与氢氧化钠溶液的体积比为：1:1.5 ~ 1:3，氢氧化钠的浓度为0.08~1mol/L。

（3）香豆素类高聚物的制备：将7-羟基香豆素单体与HPMA两种单体或将7-羟基香豆素单体、磺胺嘧啶单体、HPMA三种单体加入到反应器中，用DMSO和丙酮的混合液溶解；加入引发剂偶氮二异丁腈，氮气保护，50 ~ 60℃下反应16 ~ 24h；反应液用丙酮沉淀，甲醇溶解（重复操作3次），过滤，然后用无水乙醇溶解沉淀物，最后用分子量为3000的超滤浓缩离心管离心，除去小分子，得到香豆素类高聚物；

所述7-羟基香豆素单体与HPMA的摩尔特投料比为1:9 ~ 1:19。

所述7-羟基香豆素单体、磺胺嘧啶单体、HPMA单体摩尔投料比为1:1:10 ~ 1:1:18。

所述引发剂偶氮二异丁腈的用量为单体总质量的5% ~ 10%。

所述DMSO和丙酮的混合液中，DMSO和丙酮的体积比为：1:2 ~ 1:2.5。

图1、2分别为本发明制备的香豆素类高聚物(1)、(2)的核磁共振氢谱。通过核磁共振氢谱分析可以得出，共聚得到的高分子聚合物，化学位移在6-8 ppm之间有化合物7-羟基香豆素中芳环上氢的出峰以及在7-9 ppm之间有化合物磺胺嘧啶的芳环和杂环上氢的出峰，化学位移在3.70 ppm和2.80 ppm左右会出现HPMA上的特征峰-CH-（和-OH相连）和-CH₂（和-NH-相连），同时化学位移在5-6 ppm之间没有双键氢的出峰，说明用上述方法共聚得到的产物与前面设计的结构一致。

（二）抗肿瘤活性实验

1、体内抑制肿瘤细胞生长实验

采用直接注射对昆明小鼠接种的H22实体瘤进行试验：荷瘤小鼠用可他命（100 mg/kg）和甲苯噻嗪（7 mg/kg）的混合液进行麻醉，在尾部静脉处和瘤体处分别注射0.1 mL 100 μCi（3.7 MBq）的生理盐水，香聚₁（结构式1表达的香豆素类聚合物），香聚₂（结构式2表达的香豆素类聚合物），7-羟基香豆素（结构式3表达的香豆素类聚合物），每日给药1次，连续18天，共计18次。给药期间每2日用游标卡尺测量移植瘤最长径(L)和最短径(W)，计算移植瘤体积V = (L×W²)/2，瘤重抑制率(%)IR = (对照组肿瘤平均体积﹣给药组肿瘤平均体积)／对照组肿瘤体积×100。试验结果见表1及图1、2。

表1 香聚₁(1)、香聚₂(2)、7-羟基香豆素(3)对肿瘤的抑制率（%）

表1的试验结果显示，本发明的香豆素类高分子聚合物都具有良好的抗肿瘤活性，其抗肿瘤活性：香聚₂>香聚₁>7-羟基香豆素。

2、体外抑制肿瘤细胞生长实验

（1）细胞培养：H22细胞，按常规方法复苏，在含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，37 ℃，5％ CO₂，饱和湿度培养。分别按1:3、l:2比例传代。

（2）实验组：采用四氮唑盐还原法（MTT）对H22细胞株进行试验：取处于对数生长期的肝癌H22细胞，将细胞浓度调为2×10⁴个／ml，在96孔培养板中加入90 μl/孔，边缘孔用无菌PBS填充。在5% CO₂，37℃孵育，培养箱中放置待贴壁后再加药。对于具有式 (1)、(2)结构的目标高分子聚合物和式 (3) 的7-羟基香豆素，均分别设定浓度为0.2、1、5、25、125 μg／ml 5个梯度。实验组与对照组均设4个复孔，加药后细胞在温度37℃的二氧化碳培养箱内继续分别培养24，48，72 h后，取出先离心，后弃去96孔板内的上清培养液，小心用PBS冲洗2-3遍后，每孔加人20 μl MTT (四氮唑，5 mg/ml，即0.5% MTT) 溶液，置于37℃的二氧化碳培养箱内继续培养4h。终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150 μl的DMSO，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。在酶标仪570 nm测定各孔的吸光OD值。实验重复3次。根据下式计算药物对瘤细胞的抑制率：

抑制率(％)= [(1－实验组平均OD值)/对照组平均OD值]×100

采用Logit法计算IC50值。亦可计算：

LgIC50 = LgX- I×(P-(3-Pm-Pn)/4)

（X是最大浓度，I是稀释倍数的对数，P是抑制率的总和，Pm和Pn分别为最大值和最小值）

本发明涉及的化合物的部分抗癌活性测试结果见表2、图3、4、5 。

表2 香聚₁(1)、香聚₂(2)、7-羟基香豆素(3)对肿瘤的抑制率（%）

表2及图3、4、5的试验结果显示，本发明的香豆素类高分子聚合物随着时间的增加和浓度的递增其IC50值均呈现逐渐减小的趋势，足以说明香豆素类的衍生物都具有良好的抗肿瘤活性，其肿瘤抑制率为：香聚₂>香聚₁>7-羟基香豆素。可以用于预防和治疗胃癌，结肠癌，肝细胞瘤等癌症。

综上所述，本发明成功的制备和表征了两种新型的香豆素类高分子聚合物，并后续进行了动物实验和细胞试验，结果显示：香聚₁对肿瘤细胞的抑制率大于7-羟基香豆素而小于香聚₂对肿瘤细胞的抑制率，原因可能是：首先，N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)高分子药物的良好生物相容性，降低了药物的毒副作用，减少了抗药性，提高了药物体内的稳定性，同时增加了药物在肿瘤部位的累积，使药效得到了更好的发挥。其次，7-羟基香豆素具有一定的抗肿瘤活性。另外，磺胺嘧啶在肿瘤组织病灶内能够选择性的聚集也具有亲肿瘤特性。本发明为制备抗肿瘤药物提供了一种新的思路。

附图说明

图1为本发明制备的香豆素类高聚物(1)的核磁共振氢谱。

图2为本发明制备的香豆素类高聚物(2)的核磁共振氢谱。

图3为本发明高分子共聚物与7-羟基香豆素体内静脉注射抗癌活性曲线。

图4为本发明高分子共聚物与7-羟基香豆素体内瘤体注射抗癌活性曲线。

图5为本发明高分子共聚物与7-羟基香豆素体外24h抗癌活性曲线。

图6为本发明高分子共聚物与7-羟基香豆素体外48h抗癌活性曲线。

图7为本发明高分子共聚物与7-羟基香豆素体外72h抗癌活性曲线。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明高分子共聚物的合成及结构表征作进一步的说明。

实施例1

7-羟基香豆素单体的制备：称取7-羟基香豆素（1 mmol，160 mg），溶解在20 ml二氯甲烷中，冷却至0℃左右；称取甲基丙烯酰氯（1.5 mmol，150 mg），滴加到7-羟基香豆素的二氯甲烷溶液中；称取三乙胺（0.2 mmol，0.02 g），逐滴加入到上述溶液中，然后在冰水浴中搅拌过夜，得澄清的深红色溶液；将反应液在旋转蒸发仪上蒸掉溶剂得到浅红色固体，柱层析（乙酸乙酯:石油醚=1:8（v/v）），得到白色固体，即为7-羟基香豆素单体。产率为 193 mg (85 %)。

¹H NMR (400 MHz, D₂O, δ, ppm): 7.73 (d, 1H, Ar-H); 7.52 (d, 1H, Ar-H ); 7.27 (s, 1H, Ar-H ); 7.08-7.16 (m, 1H, Ar-H ); 6.42 (s, 1H, H-CH = C); 6.39 (s, 1H，Ar-H ); 5.83 (s, 1H, H-CH = C); 2.08 (s, 3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400MHz, DMSO, δ, ppm ): 165.07; 160.35; 154.64; 153.42; 142.86; 135.23; 128.51; 128.26; 118.44; 116.56; 115.96; 110.44; 18.28。

香豆素类高分子共聚物（1）的制备：称取7-羟基香豆素单体（5%，23 mg，0.1 mmol），HPMA （95%，272 mg，1.9 mmol）于反应瓶中，加入0.5ml 的DMSO，搅拌使其完全溶解后加入1ml的丙酮搅拌均匀；再加入偶氮二异丁腈（5%, wt，15 mg,）；抽真空后充入氮气，在60℃下聚合24小时。将聚合反应液用丙酮沉淀甲醇溶解（2:1（v/v））重复操作3次后过滤沉淀得到白色固体，用无水乙醇溶解澄清透明后，用分子量为3000的超滤浓缩离心管进行离心，除去小分子，离心后的液体烘干，得到白色固体即为高分子药物（1）。产率为 (238 mg，81 %)。

¹H NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 8.10 (1H, Ar-H of UMB), 7.88 (1H, Ar-H of UMB), 7.25 (1H. Ar-H of UMB), 7.21 (1H, Ar-H of UMB), 6.53 (1H, Ar-H of UMB), 3.71 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 2.90 (2H, CH₃CH(OH)CH ₂NH- of HPMA), 2.12 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 1.57-1.79 (2H, -CH ₂- of polymer backbone), 0.79-1.03 (3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 176.53, 145.93, 142.32, 134.95, 128.68, 127.38, 126.96, 124.19, 120.82, 119.85, 77.31, 76.67, 47.56, 40.39, 32.45, 22.14, 20.59, 12.97. Mn: 1.1× 10⁴, Mw/Mn: 1.42。

实施例2

7-羟基香豆素单体的制备：同实施例1。

磺胺嘧啶单体的制备：称取磺胺嘧啶（1 mmol，250 mg），溶解在丙酮与氢氧化钠（1:1.5（v/v））的混合溶液中，冷却至0℃左右；甲基丙烯酰氯（1.5 mmol，150 mg）逐滴滴加到上述冷却的溶液中，在冰盐浴中搅拌过夜，得到黄色沉淀；抽滤干燥后用甲醇-水混合溶剂（2:0.5（v/v））重结晶，然后抽滤，于40 ℃的真空干燥箱内干燥72h，得到浅黄色固体即为磺胺嘧啶单体（B）。产率为（230 mg，72%）。

¹H NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm )：11.69 (s, 1H, -CO-NH-), 10.14 (s, 1H, -SO_2-NH-), 8.48-8.49 (d, 2H, pyrimidine-H), 7.92 (q, 4H, Ar-H), 7.0 (s, 1H, pyrimidine-H), 5.82 (s, 1H, H-CH = C), 5.56 (s, 1H, H-CH = C), 1.92 (s, 3H, CH₂= C-CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ，ppm )：167.30，158.40, 156.95, 143.07, 140.02, 134.23, 128.66, 120.90, 119.36, 115.85, 18.62。

香豆素类高分子共聚物（2）的制备：称取7-羟基香豆素单体（5%，23 mg，0.1 mmol），磺胺嘧啶单体（5%，31.8 mg，0.1 mmol），HPMA （90%，257 mg，1.8 mmol）于反应瓶中，加入0.5 ml 的DMSO，搅拌使其完全溶解后加入1 ml的丙酮搅拌均匀；再加入偶氮二异丁腈（5%, wt，16 mg），抽真空后充入氮气，在60℃下聚合24小时。将聚合反应液用丙酮沉淀甲醇溶解（2:1（v/v））重复操作3次后过滤沉淀得到白色固体，用无水乙醇溶解澄清透明后，用分子量为3000的超滤浓缩离心管进行离心，除去小分子，离心后的液体烘干，得到淡黄色固体即为高分子药物（2）。产率为 (229 mg, 73%)。

¹H NMR (400 MHz, D₂O, δ, ppm): 8.49 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 8.29 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 8.02 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 7.89 (1H, Ar-H of UMB), 7.71 (1H, Ar-H of Sulfadiazine), 7.23 (1H, Ar-H of UMB), 7.16 (1H, Ar-H of UMB), 7.03 (1H, Ar-H of UMB), 6.43 (1H, Ar-H of UMB), 3.65 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 2.87 (2H, CH₃CH(OH)CH ₂NH- of HPMA), 2.03 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 1.45-1.74 (2H, -CH ₂- of polymer backbone), 0.72-0.99 (3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 182.39, 180.75, 171.34, 169.32, 165.35, 157.12, 142.66, 133.56, 132.35, 132.08, 130.71, 119.84, 116.42, 114.79, 111.41, 111.18, 111.04, 110.80, 104.19, 61.38, 54.45, 47.46, 41.42, 34.34, 25.12, 22.72, 19.31. Mn: 1.4× 10⁴, Mw/Mn: 1.04。

实施例3

7-羟基香豆素单体的制备：同实施例1。

香豆素类高分子共聚物（1）的制备：称取7-羟基香豆素单体（8%，23 mg，0.1 mmol），HPMA （92%，165 mg，1.15 mmol）于反应瓶中，加入0.5ml 的DMSO，搅拌使其完全溶解后加入1ml的丙酮搅拌均匀；再加入偶氮二异丁腈（8%, wt，15 mg,）；抽真空后充入氮气，在60℃下聚合24小时。将聚合反应液用丙酮沉淀甲醇溶解（2:1（v/v））重复操作3次后过滤沉淀得到白色固体，用无水乙醇溶解澄清透明后，用分子量为3000的超滤浓缩离心管进行离心，除去小分子，离心后的液体烘干，得到白色固体即为高分子药物（1）。产率为 (138 mg，73 %)。

¹H NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 8.10 (1H, Ar-H of UMB), 7.88 (1H, Ar-H of UMB), 7.25 (1H. Ar-H of UMB), 7.21 (1H, Ar-H of UMB), 6.53 (1H, Ar-H of UMB), 3.71 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 2.90 (2H, CH₃CH(OH)CH ₂NH- of HPMA), 2.12 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 1.57-1.79 (2H, -CH ₂- of polymer backbone), 0.79-1.03 (3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 176.53, 145.93, 142.32, 134.95, 128.68, 127.38, 126.96, 124.19, 120.82, 119.85, 77.31, 76.67, 47.56, 40.39, 32.45, 22.14, 20.59, 12.97. Mn: 1.5× 10⁴, Mw/Mn: 2.48。

实施例4

7-羟基香豆素单体的制备：同实施例1。

磺胺嘧啶单体的制备：称取磺胺嘧啶（1 mmol，250 mg），溶解在丙酮与氢氧化钠（1:3（v/v））的混合溶液中，冷却至0℃左右；甲基丙烯酰氯（2 mmol，200 mg）逐滴滴加到上述冷却的溶液中，在冰水浴中搅拌过夜，得到黄色沉淀；抽滤干燥后用甲醇-水混合溶剂（2:1（v/v））重结晶，然后抽滤，于50℃的真空干燥箱内干燥24h，得到浅黄色固体即为磺胺嘧啶单体（B）。产率为（230 mg，72%）。¹H NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm )：11.69 (s, 1H, -CO-NH-), 10.14 (s, 1H, -SO_2-NH-), 8.48-8.49 (d, 2H, pyrimidine-H), 7.92 (q, 4H, Ar-H), 7.0 (s, 1H, pyrimidine-H), 5.82 (s, 1H, H-CH = C), 5.56 (s, 1H, H-CH = C), 1.92 (s, 3H, CH₂= C-CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ，ppm )：167.30，158.40, 156.95, 143.07, 140.02, 134.23, 128.66, 120.90, 119.36, 115.85, 18.62。

香豆素类高分子共聚物（2）的制备：称取7-羟基香豆素单体（8%，23 mg，0.1 mmol），磺胺嘧啶单体（8%，31.8 mg，0.1 mmol），HPMA （84%，300 mg，2.1 mmol）于反应瓶中，加入0.5 ml 的DMSO，搅拌使其完全溶解后加入1 ml的丙酮搅拌均匀；再加入偶氮二异丁腈（8%, wt，28 mg），抽真空后充入氮气，在60℃下聚合24小时。将聚合反应液用丙酮沉淀甲醇溶解（2:1（v/v））重复操作3次后过滤沉淀得到白色固体，用无水乙醇溶解澄清透明后，用分子量为3000的超滤浓缩离心管进行离心，除去小分子，离心后的液体烘干，得到淡黄色固体即为高分子药物（2）。产率为 (258 mg, 73%)。

¹H NMR (400 MHz, D₂O, δ, ppm): 8.49 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 8.29 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 8.02 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 7.89 (1H, Ar-H of UMB), 7.71 (1H, Ar-H of Sulfadiazine), 7.23 (1H, Ar-H of UMB), 7.16 (1H, Ar-H of UMB), 7.03 (1H, Ar-H of UMB), 6.43 (1H, Ar-H of UMB), 3.65 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 2.87 (2H, CH₃CH(OH)CH ₂NH- of HPMA), 2.03 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 1.45-1.74 (2H, -CH ₂- of polymer backbone), 0.72-0.99 (3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 182.39, 180.75, 171.34, 169.32, 165.35, 157.12, 142.66, 133.56, 132.35, 132.08, 130.71, 119.84, 116.42, 114.79, 111.41, 111.18, 111.04, 110.80, 104.19, 61.38, 54.45, 47.46, 41.42, 34.34, 25.12, 22.72, 19.31. Mn: 1.7× 10⁴, Mw/Mn: 2.04。

实施例5

7-羟基香豆素单体的制备：同实施例1。

香豆素类高分子共聚物（1）的制备：称取7-羟基香豆素单体（10%，23 mg，0.1 mmol），HPMA （90%，129 mg，0.9 mmol）于反应瓶中，加入1.5 ml 的DMSO，搅拌使其完全溶解后待溶液冷却至室温时加入偶氮二异丁腈（10%, wt，15 mg）；抽真空后充入氮气，在45℃下聚合24小时。将聚合反应液用丙酮沉淀甲醇溶解（2:0.5（v/v））重复操作3次后过滤沉淀得到白色固体，用无水乙醇溶解澄清透明后，用分子量为3000的超滤浓缩离心管进行离心，除去小分子，离心后的液体烘干，得到白色固体即为高分子药物（1）。产率为 (129 mg，85 %)。

¹H NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 8.10 (1H, Ar-H of UMB), 7.88 (1H, Ar-H of UMB), 7.25 (1H. Ar-H of UMB), 7.21 (1H, Ar-H of UMB), 6.53 (1H, Ar-H of UMB), 3.71 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 2.90 (2H, CH₃CH(OH)CH ₂NH- of HPMA), 2.12 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 1.57-1.79 (2H, -CH ₂- of polymer backbone), 0.79-1.03 (3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 176.53, 145.93, 142.32, 134.95, 128.68, 127.38, 126.96, 124.19, 120.82, 119.85, 77.31, 76.67, 47.56, 40.39, 32.45, 22.14, 20.59, 12.97. Mn:2.0× 10⁴, Mw/Mn: 2.32。

实施例6

7-羟基香豆素单体的制备：同实施例1。

磺胺嘧啶单体的制备：同实施例2。

香豆素类高分子共聚物（2）的制备：称取7-羟基香豆素单体（10%, 23 mg，0.1 mmol），磺胺嘧啶单体（10%, 32 mg，0.1 mmol），HPMA （80%, 115 mg，0.8 mmol）于反应瓶中，加入2.5 ml 的DMSO搅拌使其完全溶解冷却至室温后加入偶氮二异丁腈（10%, wt，17 mg），抽真空后充入氮气，在60℃下聚合16小时；将聚合反应液用丙酮沉淀甲醇溶解（2:0.5（v/v））重复操作3次后过滤沉淀得到白色固体，用无水乙醇溶解澄清透明后，用分子量为3000的超滤浓缩离心管进行离心，除去小分子,离心后的液体烘干，得到淡黄色固体即为高分子药物（2）。产率为 (145 mg, 85 %)。

¹H NMR (400 MHz, D₂O, δ, ppm): 8.49 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 8.29 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 8.02 (2H, Ar-H of Sulfadiazine), 7.89 (1H, Ar-H of UMB), 7.71 (1H, Ar-H of Sulfadiazine), 7.23 (1H, Ar-H of UMB), 7.16 (1H, Ar-H of UMB), 7.03 (1H, Ar-H of UMB), 6.43 (1H, Ar-H of UMB), 3.65 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 2.87 (2H, CH₃CH(OH)CH ₂NH- of HPMA), 2.03 (1H, CH₃CH(OH)CH₂NH- of HPMA), 1.45-1.74 (2H, -CH ₂- of polymer backbone), 0.72-0.99 (3H, -CH ₃). ¹³C NMR (400 MHz, DMSO, δ, ppm): 182.39, 180.75, 171.34, 169.32, 165.35, 157.12, 142.66, 133.56, 132.35, 132.08, 130.71, 119.84, 116.42, 114.79, 111.41, 111.18, 111.04, 110.80, 104.19, 61.38, 54.45, 47.46, 41.42, 34.34, 25.12, 22.72, 19.31. Mn: 1.7× 10⁴, Mw/Mn: 2.94。

Claims

1.具有抗癌活性的香豆素类高聚物，是将7-羟基香豆素与磺胺嘧啶通过聚合的方式连接到N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺上而形成的生物相容良好的高分子共聚物；其制备工艺如下：

（2）磺胺嘧啶单体的制备：将磺胺嘧啶溶解于丙酮与氢氧化钠的混合液中，冷却至-5 ~ 5℃中，加入甲基丙烯酰氯，搅拌反应6 ~ 12小时，反应后出现黄色沉淀，抽滤、干燥，用甲醇-水混合溶剂重结晶，得黄色晶体；洗涤，抽滤，于40 ~ 50℃的真空干燥箱内干燥24 ~ 72h，得到浅黄色固体，即为磺胺嘧啶单体；

（3）香豆素类高聚物的制备：将7-羟基香豆素单体、磺胺嘧啶单体、HPMA三种单体加入到反应器中，用DMSO-丙酮的混合液溶解；加入引发剂偶氮二异丁腈，氮气保护，50 ~ 60℃下反应16 ~ 24h；反应液用丙酮沉淀，甲醇溶解，过滤，然后用无水乙醇溶解沉淀物，最后用分子量为3000的超滤浓缩离心管离心，除去小分子物质，得到香豆素类高聚物；

所得香豆素类高聚物的结构如下：

式（2）中，o = 4 ~ 7，p = 52 ~ 73，q = 4 ~ 14。

2.如权利要求1所述具有抗癌活性的香豆素类高聚物，其特征在于：步骤（1）中，所述7-羟基香豆素、甲基丙烯酰氯、三乙胺的摩尔投料比为：1:1.5:0.2 ~ 1:2:0.5。

3.如权利要求1所述具有抗癌活性的香豆素类高聚物，其特征在于：步骤（2）中，所述磺胺嘧啶、甲基丙烯酰氯的摩尔投料比为：1:1.5 ~ 1:2。

4.如权利要求1所述具有抗癌活性的香豆素类高聚物，其特征在于：步骤（2）中，所述氢氧化钠的浓度为0.08 ~ 1mol/L，丙酮与氢氧化钠溶液的体积比为：1:1.5 ~ 1:3。

5.如权利要求1所述具有抗癌活性的香豆素类高聚物，其特征在于：步骤（3）中，7-羟基香豆素单体、磺胺嘧啶单体、HPMA单体摩尔投料比为1:1:10 ~ 1:1:18。

6.如权利要求1所述具有抗癌活性的香豆素类高聚物，其特征在于：步骤（3）中，引发剂偶氮二异丁腈的用量为单体总质量的5% ~ 10%。

7.如权利要求1所述具有抗癌活性的香豆素类高聚物，其特征在于：步骤（3）所述DMSO-丙酮的混合液中，DMSO和丙酮的体积比为1:2 ~ 1:2.5。