CN103012523A

CN103012523A - 一种从清开灵中分离获得的黄酮类化合物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN103012523A
Application number: CN2012105857799A
Authority: CN
Inventors: 刘军锋; 张自然; 杨学林; 郭沛鑫; 张志伟; 刑云涛; 姜海
Original assignee: HEBEI SHINEWAY PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: Hebei Shineway Pharmaceutical Co., Ltd.; Shenwei Pharmaceutical Group Co Ltd
Priority date: 2012-12-27
Filing date: 2012-12-27
Publication date: 2013-04-03
Anticipated expiration: 2032-12-27
Also published as: CN103012523B

Abstract

本发明涉及一种式（I）黄酮类化合物或其药学上可接受的前体药物，其中R1是丙基或2-甲基-1-丁基。本发明还涉及这些化合物的制备方法，是从清开灵中提取获得。本发明的化合物具有比黄芩苷更强的活性，可用于制备抗炎症药物。

Description

一种从清开灵中分离获得的黄酮类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及植物药材中提取的化合物及其制备方法和用途，具体地说是一种新的黄酮类化合物其制备方法和其在药物制剂中的应用。

背景技术

黄酮类化合物是一类具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物，具有很多显著的生物活性。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。传统的黄酮类化合物的制备方法通常是采用水提酸沉法，碱提酸沉法或乙醇直接提取法。如黄芩苷即是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，它具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，并具有较强的抗氧化、抗癌等生理效能。黄酮类化合物在临床医药研究中越来越被更多的研究人员所重视。

发明内容

本发明的目的就是要提供一种新的黄酮类化合物，同时提供一种该化合物的制备方法以及该化合物在制备药物制剂中的应用，以期为临床用药提供更多的用药选择。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

本发明提供了一种式（I）所示黄酮类化合物或其药学上可接受的前体药物，

式（I）

其中，R1是丙基或2-甲基-1-丁基。

本文中，所述“前体药物”是指那些经化学修饰后在体外没有活性或活性很低，但经过生物体新陈代谢作用又转化成具有生物活性、并发挥与母体化合物相同药效的一系列或何物。例如，羧酸酯、磺酰酯等酯类化合物。这些前体药物也包含在本发明的保护范围内。更进一步地，本发明的化合物选自5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸丙酯，或5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸异丁酯。

在本发明的一些实施方案中，本发明的化合物的提取制备方法，包括以下步骤：

a、按照常规方法制备清开灵流浸膏，备用；

b、将清开灵流浸膏，用乙酸乙酯溶液萃取，收集有机相，回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物，备用；

c、将所得乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，用体积比50:1~1:50的氯仿：甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比50:3部分的洗脱液，回收溶剂，得浓缩物I，备用；

d、将c步所得浓缩物I经聚酰胺柱层析，用体积比20:1的甲醇：水洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得浓缩物II，备用；

e、将步骤d所得浓缩物II经硅胶柱层析，并用体积比10:1的氯仿：甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，得淡黄色固体，即5，6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸异丙酯。

在本发明的另一一些实施方案中，本发明的化合物的提取制备方法，包括以下步骤：

a、按照常规方法制备清开灵流浸膏，备用；

b、将清开灵流浸膏，用乙酸乙酯萃，收集有机相，回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物，备用；

c、将所得乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，用体积比50:1~1:50的氯仿-甲醇梯度洗脱，收集氯仿-甲醇体积比50:2部分的洗脱液，回收溶剂，得浓缩物III，备用；

d、将c步所得浓缩物III经过聚酰胺柱层析，用体积比15:1的甲醇：水系统洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得浓缩物IV，备用；

e、将所得浓缩物IV经硅胶柱层析，用体积比40:2:1的乙酸乙酯：甲醇：水洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥，得淡黄色固体，即5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸异丁酯。

按照本发明的提取制备方法，从清开灵中分离纯化具有提取工艺简化、收率高、产品纯度高的特点。本发明的化合物在分离纯化时的柱层析填料不限于聚酰胺和硅胶，洗脱剂也不仅限于所述的几种洗脱剂，其可根据本发明化合物的性质依据本领域常用的分离纯化方法进行选择。或者，还可以采用气相色谱法、液相色谱法、高效液相色谱法等方法进行分离纯化。

本发明的黄酮类化合物，具有较黄芩苷更优异的抗炎活性，因此本发明完成了该化合物在制备抗炎症药物制剂中的应用。

同时，本发明还提供了以该化合物为活性成份的抗炎药物组合物，即含有所述化合物及其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的辅料组成的抗炎药物组合物。

以本发明所述化合物为活性成分制备成的药物制剂可以经口给药或不经口，例如静脉注射，肌肉注射，眼部、鼻腔、局部（如皮肤，局部用药物组合物、化妆品）等途径给药。经口服给药时，可以使用适宜的药学上可接受的辅料，如赋形剂、辅助剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、调味剂、增甜剂、表面活性剂等，按照常规的制剂技术制成颗粒剂、胶囊、滴丸、片剂、口服液等剂型。经注射给药时，可以使用如增溶剂、助溶剂、抗氧化剂、抗光解剂、pH调节剂、乳化剂、防腐剂、局部止痛剂或络合剂等药学上可接受的辅料，按照常规的制剂技术制成注射液、冻干粉针、滴注液等。还可以使用适宜的药学上可接受的辅料，按照常规的制剂技术制成滴眼液、喷雾剂、涂抹剂、乳剂、霜剂、膏剂、凝胶等。

本发明的药物组合物还可以含有其它的活性成分，特别是作为药品和/或化妆品。另外，本发明的化合物也可以作为食品补充剂，用于食品或保健品领域，发挥其生物活性。

进一步地，本发明还提供了本发明的化合物或药物组合物在制备药物中的应用。

再进一步地，本发明还提供了所述化合物或药物组合物在制备药物中的应用，优选抗炎症药物。

动物试验发现，中高低给药剂量的本发明化合物能够明显地抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血管的通透性、蛋清所致的大鼠足肿胀和大鼠棉球肉芽肿，并且抑制作用均优于更高剂量的黄芩苷，从而表明本发明化合物抗炎效果优于黄芩苷，可用于治疗炎症及其相关疾病。

本文中“药学上可接受的”是指通常意义上被接受用于动物身上，尤其是用于人身上。本文中，“药学上可接受的辅料”分别指的是可与至少一种本发明的化合物一起施用于治疗对象的任意辅料、载体或辅剂，如防腐剂、抗氧化剂、稳定剂、增溶剂、着色剂、调味剂、成膜剂、增稠剂、湿润剂等。

本发明的化合物在用于临床时可参考的人体的有效剂量是10～20mg/人/日10～20mg/kg/d，每日2～3次。医师也可依据患者个体差异，拟定服用剂量。

具体实施方案

下述是实施例可以更详细地解释和说明本发明，但不以任何形式限制本发明。

实施例1

5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸丙酯的提取分离与结构鉴定

按照常规方法制备清开灵流浸膏，如：

取胆酸260g、珍珠母4kg、猪去氧胆酸300g、栀子2kg、水牛角2kg、板蓝根16kg、黄芩苷400g、金银花4.8kg，备用；

将板蓝根加水煎煮2次，每次1hr，合并煎液，滤过，滤液浓缩至200mL，加乙醇使含醇量达60%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，加水，冷藏，得板蓝根提取液，备用；将栀子加水煎煮2次，第一次1hr，第二次0.5hr，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量达60%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，加水，冷藏，得栀子提液，备用；将水牛角粉用氢氧化钡溶液，珍珠母用硫酸分别水解7~9hr，滤过，合并滤液，调节pH值至3.5-4.0，滤过，滤液加乙醇使含醇量达60%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，加水，冷藏，备用；将金银花加水煎煮2次，每次0.5hr，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加乙醇使含醇量达75%，滤过，滤液调pH值至8.0，冷藏，得金银花提取液，备用；

将板蓝根提取液、栀子提取物原、水牛角和珍珠母的水解混合液混合后，加入胆酸、猪去氧胆酸的75%乙醇溶液中，混匀，加乙醇使含醇量达75%。调节pH值至7.0，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，加水，冷藏，得混合药液I，备用；

将黄芩苷用注射用水溶解，调节pH值至7.5，加入金银花提取液，混匀，与上述混合药液合并，混匀，减压浓缩成比重为1.1～1.2，得清开灵流浸膏。

取清开灵流浸膏适量（含固形物约为2.25kg），折合生药为18.6kg，用乙酸乙酯萃取4～5次，收集有机相，回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物560g。将所得乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇系统（体积比50:1~1:50）梯度洗脱，收集氯仿-甲醇系统（体积比50:3）部分的洗脱液，回收溶剂，得浓缩物I。所得浓缩物I经聚酰胺柱层析，洗脱剂为甲醇：水（体积比20:1），收集洗脱液，回收溶剂，得浓缩液II。所得浓缩液II经硅胶柱层析，洗脱剂为氯仿：甲醇（体积比10:1），收集洗脱液，浓缩干燥，得淡黄色固体。

分子量：488.03。

MS:999.06[2M+Na]。¹H-NMR:(DMSO-d₆,300MHz)d:12.59(s,1H),8.70(s,1H),8.05-8.08(m,2H),7.577.62(m,3H),7.06(s,1H),7.02(s,1H),5.54(s,1H),5.50(s,1H),5.33(s,1H),5.29-5.27(d,1H,J=6Hz),4.16–4.13(d,1H,J=9Hz),4.07-4.05(s,2H),3.47-3.41(3H,m),1.46-1.43(m,2H),0.98-0.96(s,3H)。

实施例2

5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸异丁酯的提取分离与结构鉴定

按照实施例1的方法制备清开灵流浸膏。取清开灵流浸膏适量（含固形物约为2.25kg），折合生药为18.6kg，用乙酸乙酯萃取4～5次，收集有机相，回收溶剂，得乙酸乙酯萃取物560g。将所得乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，用氯仿-甲醇系统（体积比50:1~1:50）梯度洗脱，收集氯仿-甲醇系统（体积比50:2）部分的洗脱液，回收溶剂，得浓缩物III。所得浓缩物III经过聚酰胺柱层析，洗脱剂为甲醇-水系统（体积比15:1），收集洗脱液，回收溶剂，得浓缩物IV。所得浓缩物IV经硅胶柱层析，洗脱剂为乙酸乙酯：甲醇：水（体积比40:2:1），收集洗脱液，浓缩干燥，得淡黄色固体。分子量：502.1

MS:1027.10[2M+Na]。¹H-NMR:(DMSO-d₆,300MHz)d:12.62(s,1H),8.72(s,1H),8.08–8.09(m,2H),7.59–7.64(m,3H),7.08(s,1H),7.04(s,1H),5.58(s,1H),5.53(s,1H),5.36(s,1H),5.31–5.29(d,1H,J=6Hz),4.21–4.19(d,1H,J=9Hz),4.10-4.08(s,2H),3.49-3.46(3H,m),1.76–1.74(m,1H),1.01–0.99(d,6H).

试验例1效果试验

实验材料：黄芩苷市售；主要实验仪器：YLS-7C足趾容积测量仪（济南益延科技发展有限公司生产）。

1、本发明化合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

取健康雄性昆明种小鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只，即模型对照组、黄芩苷组（100mg/kg）、本发明化合物高剂量组（200mg/kg）、本发明化合物中剂量组（100mg/kg）、本发明化合物低剂量组（50mg/kg）。分组及剂量见表1，各组动物每日ig给药一次，给药体积为10ml/kg（模型对照组给相同体积的蒸馏水），连续给药3d。末次给药30min，各组动物用二甲苯0.03ml/只涂于小鼠右耳廓两面致炎，左耳不涂作为正常耳。致炎30min后处死动物，用直径8mm的打孔器打下双耳相同部位耳片，于分析天平上称重，按下式计算肿胀度和肿胀抑制率。实验结果见表1。

肿胀度=致炎侧耳片重一非致炎侧耳片重

表1本发明化合物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与黄芩苷组比较，△P＜0.05

实验结果表明，与模型对照组比较，本发明化合物的高、中、低剂量及黄芩苷均能明显地抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀，其差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01），且作用优于黄芩苷。

2、本发明化合物对小鼠腹腔通透性的影响

取健康雄性昆明种小鼠50只，按体重随机分成5组，每组10只，即模型对照组、黄芩苷组（100mg/kg）、本发明化合物高剂量组（200mg/kg）、本发明化合物中剂量组（100mg/kg）、本发明化合物低剂量组（50mg/kg）。分组及剂量见表2，各组动物每日ig给药1次，给药体积为10ml/kg（模型对照组给相同体积的蒸馏水），连续给药3d。末次给药后40min，各组动物尾静脉注射0.5%伊文思蓝0.1ml/10g体重，同时腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，20min后脱椎处死小鼠，用5ml蒸馏水冲洗腹腔，收集冲洗液，3000rpm离心5min，取上清液于分光光度计590nm处比色，以吸光度（OD）值表示小鼠腹腔毛细血管通透性。实验结果见表2。

表2本发明化合物对小鼠腹腔通透性的影响

实验结果表明，与模型对照组比较，本发明的化合物高、中、低剂量及黄芩苷均能明显地抑制小鼠腹腔毛细血管的通透性，其差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01），且作用优于黄芩苷。

3、本发明化合物对蛋清所致大鼠足肿胀的影响

取健康雄性SD大鼠50只，体重180～200g，按体重随机分成5组，每组10只，即模型对照组、黄芩苷组（70mg/kg）、本发明化合物高剂量组（140mg/kg）、本发明化合物中剂量组（70mg/kg）、本发明化合物低剂量组（35mg/kg）。分组及剂量见表3，各组动物每日ig给药一次，每次10ml/kg体重（模型对照组给相同体积的蒸馏水），连续给药3d。实验前在各鼠右后足踝关节处作标记，用足容积测定仪测定各鼠足容积两次，取平均值作为正常足容积。末次给药后30min，每只大鼠右后足跖部皮下进针穿过肌层至踝关节附近皮下，注射10%新鲜蛋清生理盐水溶液0.1ml致炎，分别于致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h测定致炎足容积，计算各组大鼠致炎前后右后足跖容积变化值，以足肿胀度和足肿抑制百分率表示药物的抗炎效应。

足肿胀度=致炎后足容积-正常足容积

表3本发明化合物对蛋清所致大鼠足肿胀的影响

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与黄芩苷组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

实验结果表明，本发明化合物高、中、低剂量及黄芩苷在致炎后0.5h、1h、2h、4h、6h能明显抑制蛋清所致的大鼠足肿胀（P<0.05或P<0.01），且作用优于黄芩苷。

4、本发明化合物对大鼠棉球肉芽肿的影响

取健康雄性SD大鼠50只，体重180~220g，按体重随机分成5组，每组10只，即模型对照组、黄芩苷组（70mg/kg）、本发明化合物高剂量组（140mg/kg）、本发明化合物中剂量组（70mg/kg）、本发明化合物低剂量组（35mg/kg）。分组及剂量见表4。给药当日于大鼠腋窝皮下手术植入灭菌棉球（100mg±5mg）。各组动物每日灌胃给药一次，每次10ml/kg体重，连续灌胃7d（模型对照组给相同体积的蒸馏水）。7d后处死大鼠，剥离肉芽组织，于60℃烘干，称重，计算肉芽肿重及抑制率。

表4本发明化合物对大鼠棉球肉芽肿的影响

实验结果表明，与模型对照组比较，本发明的化合物高、中、低剂量及黄芩苷连续给药7d均能显著抑制大鼠棉球肉芽肿（*P＜0.05，**P＜0.01），且作用优于黄芩苷。

综上所述，本发明的化合物具有良好抗炎效果，并且其抗炎效果优于黄芩苷。

Claims

1.一种式（I）所示黄酮类化合物或其药学上可接受的前体药物，

式（I）

其中，R1是丙基或2-甲基-1-丁基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物选自：

5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸丙酯；

或5,6-二羟基-4-氧-2-苯基-4H-1-苯并吡喃-7-吡喃葡萄糖酸异丁酯。

3.权利要求1所述化合物或其药学上可接受的前体药物在制备抗炎症药物制剂中的应用。

4.一种抗炎药物组合物，其特征在于含有权利要求1所述化合物或其药学上可接受的前体药物和至少一种药学上可接受的辅料。