CN103004326B - 一种促进化血胆种子萌发的引发方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种促进化血胆［Melasma arvense (Benth.) Hand.-Mazz. ]种子萌发的引发方法，属中药材栽培技术领域。本发明A种子采集、B温水浸种、C种子消毒、D引发剂引发和 E控制种子萌发条件五个相结合步骤，有效提高化血胆种子发芽率，使化血胆种子自然萌发率不足0.3%，稳定提高到65%以上。这对于保护野生化血胆资源，提高繁殖系数，促进化血胆资源可持续利用及产业化具有现实意义。

Description

一种促进化血胆种子萌发的引发方法

技术领域

本发明涉及一种促进化血胆［Melasma arvense (Benth.) Hand.-Mazz. ]种子萌发的方法，属中药材栽培技术领域。

背景技术

化血胆为玄参科植物黑蒴[Melasma arvense (Benth.) Hand.-Mazz. ]的根，系多年生草本植物，主要分布于云南省南部地区，为云南省苗族、彝族、拉祜族等民族民间珍稀药材，云南多家医院主要用于治疗白血病、肿瘤、心脑血管病、黄疸型肝炎、肝肿大、跌打伤瘀肿、痛经等疾病。化血胆具有可开发为治疗早期白血病、抗肿瘤和化血、溶血特效药品的潜力。长期以来，化血胆药材来源全部依赖于野生植物资源，随着天然药品市场的需求量与日俱增，化血胆野生资源受到严重破坏，目前野生资源已经很难找到。

化血胆地域分布狭窄，种子自然萌发率极低（小于0.3%），加之近年来掠夺式过度采挖，目前全草鲜品已经超过4000元/公斤，处于有价无货，极度珍稀、濒临灭绝。急需对其进行资源保护和人工种苗快速繁殖技术研究。

经文献检索，还未见到任何有关化血胆野生资源调查、种子萌发、种苗快速繁殖、人工种植等公开发表的内容。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种能有效提高化血胆种子发芽率的引发方法，本方法对化血胆种子进行温水浸种、消毒、引发处理和控制萌发条件，从而使化血胆种子自然萌发率不足0.3%，稳定的提高到65%。

本发明一种促进化血胆［Melasma arvense (Benth.) Hand.-Mazz. ]种子萌发的引发方法，是通过以下技术方案实现的：包含下列步骤：

A.种子采集：将采集到的成熟化血胆果实，晒干后剥开果壳，获得种子去除杂质后备用；

B.温水浸种：取储藏的种子用纱布包好，25℃温水浸泡2 h；

C．种子消毒：用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h ，随后用清水洗净种子；

D.引发剂引发：将清洗干净的种子，于25℃条件下置于300mg/L GA3溶液中引发12h，取出，用蒸馏水冲洗2min，用吸水纸吸干后备用；

E．控制种子萌发条件：

将引发处理后的种子置于恒温光照箱中的改良泥炭土上培养，培养温度25-26℃，光强4000lx,光暗周期10h-14h；每天定时喷洒适量蒸馏水，种子经10-15天萌发，萌发率达65%以上；

所述的改良泥炭土，是指将泥炭、草木灰、细砂3：1：1混合后，过120目筛后高温消毒处理的基质。

所述的引发处理所用的引发方法是用20%～30% 聚乙二醇( PEG),200～400mg/L GA3赤霉素( GA3 )对消毒后的种子浸泡时间为8-16h。

所述的种子萌发条件控制是引发处理后的种子置于恒温光照箱中的改良泥炭土上培养，培养温度25-26℃，光强4000lx,光暗周期10h-14h，每天定时喷洒适量蒸馏水，10-15天种子萌发。

本发明的优点在于：通过采用温水浸种、消毒、引发处理和控制萌发条件相结合，能有效提高化血胆种子发芽率，使化血胆种子自然萌发率不足0.3%，稳定提高到65%以上。

本发明属首次对化血胆种子繁育技术的研究成果，本发明技术方法简单，成本较低，便于操作，适宜于实际生产应用。

具体实施方式：

为了使本发明的目的、技术方案更清楚明白，本发明用具体实例对温水浸种、种子消毒、赤霉素引发、控制种子萌发条件等技术的研究筛选过程进行了充分的说明，以证明本研究成果的正确性，但并非说明本发明仅限用于这些例子。

一种促进化血胆种子萌发的引发方法，其特征在于包含下列步骤：

A.种子采集：

将采集到的成熟化血胆果实，晒干后剥开果壳，获得种子去除杂质后备用。

B.温水浸种：

取储藏的种子用纱布包好，25℃温水浸泡2 h。

C．种子消毒：

用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h ，随后用清水洗净种子。

D.引发剂处理：

将清洗干净的种子，于25℃条件下置于300mg/L GA3溶液中引发12h，取出，用蒸馏水冲洗2min，用吸水纸吸干后备用。

E．控制种子萌发条件：

将引发处理后的种子置于恒温光照箱中的改良泥炭土上培养，培养温度25℃，光强4000lx,光暗周期10h/14h。每天定时喷洒适量蒸馏水，种子经10-15天萌发，萌发率达65%以上。上述所指的改良泥炭土，是指将泥炭、草木灰、细砂3：1：1混合后，过120目筛后高温消毒处理的基质。

化血胆种子自然萌发试验研究

为了摸清化血胆种子自然萌发率的高低，本试验将采集到的成熟种子用水浸泡12h后，设置7个不同的发芽温度（18℃、20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃）进行发芽试验。所有发芽试验都在光照恒温培养箱中进行纸质发芽培养，光照恒温培养箱的光照时间都统一设置为10h/d，每处理设5次重复, 每重复1000 粒种子。每天观察和记数1次，必要时添加适量水分，直到全部种子发芽结束为止（当连续３ｄ无新发芽种子出现时即视为发芽过程结束）。发芽种子是根据胚根长出后有一定的根长（≥5ｍｍ），根尖长而细，且有次生根，双子叶张开具有一定面积为标志，计为正常发芽种子数。发芽势是指种子发芽初期能正常发芽的种子粒数占供检种子粒数的百分率，通常根据种子发芽过程中的第一个发芽高峰为确定时间，是判断种子发芽快慢和速率的指标；本试验中第14d时化血胆种子萌发到达了最高峰，因此试验确定在第14d测定其发芽势。发芽率是指种子从发芽开始至发芽终期，即全部正常发芽种子粒数占供检种子粒数的百分率，是用以判断种子最终发芽率。

发芽势（%）=14d正常发芽的种子数/供试种子数×100；

发芽率（%）=20d正常发芽的种子数/供试种子数×100；

在试验期间，每天观察和记数1次，统计最早发芽时间、发芽高峰期、发芽势和发芽率。研究结果表明化血胆自然萌发率极低，其自然萌发率在低于0.3%；在所有处理中，处理4和处理5 发芽率和发芽势都显著高于其它处理，说明化血胆种子适宜的发芽温度为24-26℃，且其第一发芽高峰期在14天。

表1 化血胆种子自然萌发率试验

注: 同一列上不同的字母,分别表示在P<0.05水平上的差异显著性；表中数据为5个重复的平均数。

化血胆种子引发剂种类的筛选试验研究

化血胆种子自然萌发率极低。为了提高其种子萌发率，本试验采用不同药剂对化血胆种子进行引发处理，以期寻找到时化血胆种子适宜的引发剂种类。本试验采取3种引发剂（PEG-6000、GA₃、KNO₃）、2种不同处理浓度对化血胆种子。所有发芽试验的操作都是先将成熟种子用水浸泡12h后，然后用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h ，随后用清水洗净后再用不同种类、不同深度的引发药剂浸泡8h后，用蒸馏水洗净后在光照恒温培养箱中进行纸质发芽培养。所有处理发芽试验条件都为：发芽温度24℃，光照时间12h/d，每处理设5次重复, 每重复100粒种子。

在试验期间，每天观察和记数1次，统计最早发芽时间、发芽势和发芽率。研究结果表明20%～30% 聚乙二醇( PEG), 200～400mg/L GA3赤霉素( GA3 )能显著促进化血胆种子萌发，而0.1～0.5%的KNO₃对化血胆种子的萌发提高不大；在所有处理中处理3和处理4能显著提高化血胆种子的发芽效果，其对化血胆种子发芽的影响显著好于其它处理，化血胆种子经200～400mg/L赤霉素处理后，能使种子发芽率由自然状态下不足0.3%提高到时40%。

表2 不同药剂处理对化血胆种子发芽的影响

注: 同一列上不同的字母,分别表示在P<0.05水平上的差异显著性；表中数据为5个重复的平均数。

赤霉素对化血胆种子引发的试验研究

经前期研究发现赤霉素对化血胆种子萌发具有很好的促进作用。为了摸清其引发处理的最适浓度，本试验采用6种不同的赤霉素浓度（0mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L、400 mg/L、500 mg/L）对化血胆种子进行引发处理后进行发芽试验。所有发芽试验的操作都是先将成熟种子用水浸泡12h后，然后用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h，随后用清水洗净后再用不同浓度赤霉素( GA3 )的浸泡8h后，用蒸馏水洗净后在光照恒温培养箱中进行纸质发芽培养。所有发芽试验都在的光照恒温培养箱的光照时间都统一设置为12h/d，每处理设5次重复, 每重复100 粒种子。本试验采取的发芽率和发芽势和试验例1完全相同，采取的发芽指数和活力指数统计方式如下所示：

发芽指数（GI）=∑（Gt/Dt） (Gt为在Dt对应的发芽数；Dt为对应的发芽日数；∑为总数）。

活力指数（VI）=GI×S [S为14d幼苗长度(cm)]

在试验期间，每天观察和记数1次，统计发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数。研究结果表明所有处理中，处理3发芽效果最好，其发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数者显著高于其它处理，其发芽率可达60.3%；效果较好的是处理2和处理4,其发芽率在45-50%,其二者无显著差异。由以上结果说明，利用赤霉素( GA3 )的浸泡化血胆种子，能显著促进其种子萌发特性，且处理较适宜浓度为300 mg/L。

表3 不同赤霉素浓度对化血胆种子发芽的影响

注: 同一列上不同的字母,分别表示在P<0.05水平上的差异显著性；表中数据为5个重复的平均数。

赤霉素处理化血胆种子处理时间的筛选试验研究

经前期研究发现利用300 mg/L赤霉素对化血胆种子进行浸泡，能显著促进其萌发。为了摸清其引发处理的最适时间，本试验采用300 mg/L赤霉素对化血胆种子进行引发试验，试验采取6种不同的处理时间（4h、8h、12h、16h、20h、24 h）对化血胆种子进行引发处理后进行发芽试验。所有发芽试验的操作都是先将成熟种子用水浸泡12h后，然后用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h ，随后用清水洗净，再用300 mg/LGA3 浸泡处理。所有处理发芽试验都在光照恒温培养箱中进行纸质发芽培养。所有发芽试验都在的光照恒温培养箱的光照时间都统一设置为12h/d，每处理设5次重复, 每重复100 粒种子。

在试验期间，每天观察和记数1次，统计发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数，本试验采用的发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数统计与试验3完全相同。研究结果表明所有处理中，处理3、4和2发芽效果最好，其发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数都显著高于其它处理，其发芽率均在60%-65%，显示出较好的处理效果，三者之间处理效果无显著差异；效果最差的是处理1，其发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数都显著低于其它处理。由以上结果说明，利用300 mg/L赤霉素( GA3 )的浸泡化血胆种子适宜的浸泡时间为8-16h。

表4 300 mg/L赤霉素不同处理时间对化血胆种子发芽的影响

注: 同一列上不同的字母,分别表示在P<0.05水平上的差异显著性；表中数据为5个重复的平均数。

化血胆播种基质选择试验研究

为了筛选出最适宜的化血胆播种育苗基质，本试验选择6种不同基质（泥炭、细砂、腐殖土、草木灰：泥土5：1、腐殖土：垤石4：1、泥炭：草木灰：细砂3：1：1） 对经引发处理后的化血胆种子进行播种。所有发芽试验的操作都是先将成熟种子用水浸泡12h后，然后用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h ，随后用清水洗净，再用300 mg/LGA3 浸泡12h后，再用蒸馏水洗净，所有处理发芽试验都在光照恒温培养箱中进行发芽培养。所有发芽试验都在的光照恒温培养箱的光照时间都统一设置为12h/d，温度都设置为25℃，每处理设5次重复, 每重复100粒种子。

在试验期间，每天观察和记数1次，发芽20d后，将苗取出清洗干净基质，测量根长和苗长，统计发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数，本试验采用的发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数统计与试验4完全相同。研究结果表明所有处理中，处理6发芽效果最好，其发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、幼苗根长和苗长都显著高于其它处理，其发芽率均在60%-65%，显示出较好的处理效果；发芽效果较好的是处理4，通过对处理6和处理4进行比较，发现处理6要好于处理4，其发芽率、发芽势、发芽指数和活力指数都显著高于处理4；效果最差的是处理1和处理2，其发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数都显著低于其它处理。由以上结果说明，在化血胆种子播种育苗中，基适宜的基质为泥炭、草木灰和细砂的混合物。

表5 不同基质对化血胆种子发芽的影响

注: 同一列上不同的字母,分别表示在P<0.05水平上的差异显著性；表中数据为5个重复的平均数。

采用本发明一种促进化血胆种子萌发的引发方法，可使化血胆种子自然萌发率不足0.3%提高到65%以上。对于保护野生化血胆资源，提高繁殖系数，促进化血胆资源可持续利具有现实意义。

Claims (2)

1.一种促进化血胆种子萌发的引发方法，其特征在于包含下列步骤：

A.种子采集：将采集到的成熟化血胆果实，晒干后剥开果壳，获得种子去除杂质后备用；

B.温水浸种：取储藏的种子用纱布包好，25℃温水浸泡12 h；

C．种子消毒：用2000倍多菌灵溶液浸泡12 h ，随后用清水洗净种子；

D.引发剂引发：将清洗干净的种子，于25℃条件下置于引发剂溶液中浸泡时间8-16h，取出后用蒸馏水冲洗2min，用吸水纸吸干后备用；

E．控制种子萌发条件：

将引发处理后的种子置于恒温光照箱中的改良泥炭土上培养，培养温度25-26℃，光强4000lx,光暗周期10h-14h；每天定时喷洒适量蒸馏水，种子经10-15天萌发，萌发率最高达65.1%；

所述改良泥炭土是指将泥炭、草木灰、细砂3：1：1混合后，过120目筛后高温消毒处理的基质；

所述引发剂是浓度为20%～30% 聚乙二醇, 或者浓度为200～400mg/L赤霉素。

2.根据权利要求1所述的促进化血胆种子萌发的引发方法，其特征在于所述聚乙二醇为PEG-6000。