CN103002899A

CN103002899A - 作为pi3k抑制剂用于治疗抗增殖障碍的哌嗪子基三嗪化合物

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Publication number: CN103002899A
Application number: CN2011800215135A
Authority: CN
Inventors: V.克米尔贾诺维奇; N.克米尔加诺维奇; B.吉泽; M.维曼
Original assignee: Universitaet Basel
Current assignee: Universitaet Basel
Priority date: 2010-04-30
Filing date: 2011-04-27
Publication date: 2013-03-27
Also published as: ZA201206898B; GB201007227D0; IL222692A0; RU2012151201A; US20130040912A1; WO2011135520A8; MX2012012560A; BR112012027813A2; AU2011246952A1; JP2013525419A; SG185067A1; KR20130118731A; CA2797808A1; EP2563368A1; WO2011135520A1; NZ603859A

Abstract

本发明涉及式(I)化合物，R¹是甲基、正己基、氨基乙基、甲基氨基乙基、乙基氨基乙基、二甲基氨基乙基、丙烯酰基氨基乙基、甲丙烯酰基氨基乙基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、C₁-C₄-烷基-磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基；或者R¹是携带连接基和标记的氨基乙基、丙烯酰基或丙烯酰基氨基乙基，R²和R³，相互独立地为氢或C₁-C₄-烷基，或者R²和R³共同形成亚甲基桥或亚乙基桥；及其互变异构体、溶剂合物和药学上可接受的盐。这些化合物有效预防或治疗受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或障碍，具体为治疗高增殖障碍。

Description

作为PI3K抑制剂用于治疗抗增殖障碍的哌嗪子基三嗪化合物

发明领域

本发明涉及新的携带苯并咪唑基(benzimidazo)、吗啉代和4-取代的哌嗪子基(piperazino)取代基的三嗪，其抑制磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、DNA-PK和ATM激酶，和涉及其药学上可接受的盐。本发明还涉及使用所述化合物治疗相关病理状况的方法。

发明背景

蛋白激酶参与信号传导事件，其控制细胞的活化、生长、分化、存活和迁移，以响应细胞外介质或刺激物，包括生长因子、细胞因子或趋化因子。通常，这些激酶分为两组，优先磷酸化酪氨酸残基的那些和优先磷酸化丝氨酸和/或苏氨酸残基的那些。酪氨酸激酶包括跨膜生长因子受体，例如表皮生长因子受体(EGFR)和胞质非受体激酶，包括Src家族激酶、Syk家族激酶和Tec家族激酶。

不适当的高蛋白激酶活性涉及多种疾病，包括癌症、代谢疾病、免疫学疾病和炎性障碍。由于酶的突变、过度表达或不适当的激活，这可能直接或间接地由控制机制的失效引起。

已经公认磷酸肌醇3-激酶(PI3Ks)调节范围广泛的细胞活动，并对生长和代谢控制是重要的。基因修饰的小鼠靶向PI3K通道和人遗传疾病如Cowden氏综合征、结节状硬化、运动失调性毛细血管扩张症、X连锁的肌管性肌病和进行性神经性腓骨肌萎缩症的阐明已经提供对磷酸肌醇信号传导的细胞和全身作用的进一步的洞察。磷酸肌醇，具体为I类PI3Ks产物，PtdIns (3,4,5)P3水平的失调涉及癌症、慢性炎症、变态反应、代谢病、糖尿病和心血管问题的发病机理。

PI3激酶/Akt/PTEN通道对癌症药物开发是有吸引力的靶标，因为希望这类药物抑制增殖、逆转细胞凋亡的抑制和克服癌细胞中对细胞毒性剂的耐药性。已经报道PI3激酶抑制剂[尤其参见Marone等, Biochimica et Biophysica Acta 1784：159-185 (2008)]。

已知某些嘧啶化合物(WO 2008/032033)和三嗪化合物(WO 02/088112、WO 2004/03782、WO 2006/095906)具有PI3K和/或mTOR抑制剂活性并抑制癌细胞的生长。三嗪化合物ZSTK474 (Zenyaku Kogyo)是第一种抗PI3Ks的高活性的口服三嗪化合物，其表现出对小鼠的人癌异种移植物的有效的抗肿瘤活性，没有严重毒性的迹象[Yaguchi等, Journal of the National Cancer Institute, 98：545-556, (2006)]。ZSTK474是I型磷脂酰肌醇3-激酶亚型的ATP竞争性抑制剂[Kong等, Cancer Sci, 98：1638-1642 (2007)]。

发明概述

本发明涉及式(I)化合物

(I)

其中

R¹是甲基、正己基、氨基乙基、甲基氨基乙基、乙基氨基乙基、二甲基氨基乙基、丙烯酰基氨基乙基、甲基丙烯酰基氨基乙基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、C₁-C₄-烷基磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基；或者R¹是携带连接基(linker)和标记的氨基乙基、丙烯酰基或丙烯酰基氨基乙基，和

R²和R³，相互独立地为氢或C₁-C₄-烷基，或者R²和R³共同形成亚甲基桥或亚乙基桥；

及其互变异构体、溶剂合物和药学上可接受的盐。

本发明进一步涉及含有式(I)化合物的药用组合物，和预防或治疗受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或障碍，特别是治疗高增殖障碍的方法，其包括给予需要这样治疗的哺乳动物有效量的式(I)化合物。本发明的又一方面是式(I)化合物在治疗或预防哺乳动物受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或病症方面的用途，和式(I)化合物在制备治疗或预防哺乳动物受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或病症的药物方面的用途。

本发明的另一方面包括式(I)化合物、用于制备如前文定义的式(I)化合物的新的中间体的制备方法、分离方法和纯化方法、以及用于筛选脂质激酶抑制剂的筛选方法。

发明详述

如本文用的术语“C₁-C₄-烷基”指1-4个碳原子的饱和直链或支链单价烃基团。C₁-C₄-烷基的实例有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。

术语“C₁-C₄-烷基磺酰基”指连接至–SO₂–基团的如上定义的C₁-C₄-烷基，其连接于式(I)中表示的哌嗪的4位。

在氨基乙基、甲基氨基乙基、乙基氨基乙基、二甲基氨基乙基、丙烯酰基氨基乙基、甲基丙烯酰基氨基乙基、甲氧基乙基、乙氧基乙基和丙烯酰基氨基乙基中，氨基或烷氧基官能团优选连接至乙基的2位。

如指向吗啉中心而并不连接至特定位置的键表明的，R²和R³取代基可连接至式(I)中表示的吗啉的任何碳原子。这样的碳原子的实例有在2、3、5和6位中的那些。R²和R³取代基可位于不同的碳原子上，或者位于相同的碳原子上，产生双取代。取代基R²/R³位置的实例有2/2、2/3、2/5、2/6、3/3和3/5。如果R²和R³共同表示亚乙基，则相同位置是可能的，从而偕取代生成螺环丙基官能团，连位取代(vicinal substitution)生成有环的环丁烷，或者优选的2/5、2/6和3/5取代生成真正桥接的化合物。如果R²和R³共同表示亚甲基，则位置2/3、2/5、2/6和3/5是可能的，从而连位取代生成有环的环丙烷，或者优选的2/5、2/6 和3/5取代生成真正桥接的化合物。

术语“手性”指具有非全同的镜像性质的分子，而术语“非手性”指其镜像重合的分子。

术语“立体异构体”指具有相同的化学构成但原子或基团的空间排布不同的化合物。“非对映异构体”指带两个或更多个手性中心的立体异构体。非对映异构体相互不为镜像，但它们具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。可用结晶或用高拆分分析程序诸如电泳法和层析法，分离各非对映异构体的混合物。“对映异构体”指相互不能重叠的镜像的化合物的两种立体异构体。

本文采用的立体化学定义和惯例通常遵循S. P. Parker, 编辑, 化学术语的McRaw-Hill 词典(1984) McGraw-Hill Book Company, 纽约；和Eliel, E和Wilen, S., “有机化合物的立体化学”, John Wiley & Sons, Inc., 纽约, 1994。本发明化合物可含有不对称或手性中心，从而以不同的立体异构形式存在。本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于，非对映异构体、对映异构体和阻转异构体及其混合物诸如外消旋混合物打算形成本发明的部分。许多有机化合物以光学活性形式存在，即，它们有旋转平面偏振光的平面的能力。在描述光学活性化合物时，前缀D和L，或R和S，用来指围绕其手性中性的分子的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用来指化合物旋转的平面偏振光的标记，用(-)或l表示化合物是左旋的。以(+)或d作前缀的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，除了它们相互呈镜像外。特定立体异构体也可被称为对映异构体，这类异构体的混合物常常被称为对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物被称为外消旋混合物或外消旋体。

术语“互变异构体”或“互变异构形式”指具有不同能量的结构异构体，它们经过低能垒互相转化。例如，质子互变异构体包括经质子迁移的互变现象，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。

如本文用的术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物的药学上可接受的有机或无机盐。示例的盐包括，但不限于，硫酸盐、柠檬酸盐、醋酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐(acid citrate)、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐。药学上可接受的盐可能涉及另一种分子的内含物诸如醋酸根离子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子。抗衡离子可能是稳定母体化合物上的电荷的任何有机或无机部分。而且，药学上可接受的盐可在其结构中具有不止一个带电原子。其中多个带电原子为药学上可接受的盐的一部分的实例可能具有多个抗衡离子。因此，药学上可接受的盐可具有一个或多个带电原子和/或一个或多个抗衡离子。

可通过本领域可得到的任何适用方法，例如，用无机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等，或用有机酸，诸如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸(pyranosidyl acid)诸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸诸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸诸如天冬氨酸或谷氨酸、芳酸诸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸诸如对甲苯磺酸或乙磺酸等，处理游离碱，制备想要的药学上可接受的盐。

术语“药学上可接受的”指必须与构成制剂的其它成分和/或以其治疗的哺乳动物在化学和/或毒理学上相容的物质或组合物。

“溶剂合物”指一个或多个溶剂分子与本发明化合物的缔合物或复合物。形成溶剂合物的溶剂的实例包括，但不限于，水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”指其中的溶剂分子是水的复合物。

术语“保护基”指通常用来阻断或保护化合物上的特定官能团同时使其它官能团反应的取代基。例如，“氨基-保护基”是阻断或保护化合物中的氨基官能团、连接于氨基的取代基。适用的氨基-保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄氧基羰基和9-芴基亚甲基氧基羰基(Fmoc)。对于保护基及其用途的一般性描述，参见T. W. Greene, 有机化学中的保护基, John Wiley & Sons, 纽约, 1991。

术语“连接基”包括，但不限于，1-20，优选2-6个任选取代的亚甲基的链，或者这类链，其中一个或多个亚甲基被氧、羰基氧基、任选取代的氮、甲酰胺基(carboxamide group)、脲基、硫、硫醚基团(disulfide group)或它们的组合取代。考虑的取代基有氧代基(生成羰基官能团)、C₁-C₆烷基、生成三官能团连接基的1-6个亚甲基的链、苯基、生成三官能团连接基的亚苯基或天然生成的氨基酸的残基。具体的连接基有，例如，聚亚甲基、包含一个或两个酰胺官能团的聚亚甲基、聚氧乙烯基或由1-6个天然生成的20个必需氨基酸组成的小肽。连接基连接至丙烯酰基的β碳原子，或连接至氨基乙基中的氨基。“带标记的连接基”指连接基一端连接至丙烯酰基的β碳原子或连接至氨基乙基中的氨基和另一端连接至标记的连接基，或者是带两个不同标记的三个官能团的连接基。

术语“标记”包括，但不限于生物素、抗生物素蛋白、抗生物素蛋白链菌素(streptavidin)、荧光标记物或固相，例如聚合物珠或载塑片(plastic slide)或载玻片。考虑的荧光标记物的实例有4,4-二氟-1,3,5,7-四甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省(indacene)-8-丙酸(BODIPY® 493/503, SE)、4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(BODIPY® FL)、4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(BODIPY® FL, SE)、6-((4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酰基)氨基)己酸(BODIPY® FL-X, SE)、4,4-二氟-5-苯基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(BODIPY® R6G, SE)、4,4-二氟-5,7-二苯基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(BODIPY® 530/550, SE)、6-((4,4-二氟-1,3-二甲基-5-(4-甲氧基苯基)-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-2-丙酰基)氨基)己酸(BODIPY® TMR-X, SE)、4,4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(BODIPY® 558/568, SE)、4,4-二氟-5-苯乙烯基-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸(BODIPY® 564/570, SE)、6-(((4-(4,4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s-引达省-3-基)苯氧基)乙酰基)氨基)己酸(BODIPY® TR-X, SE)、6-(((4,4-二氟-5-(2-噻吩基)-4-硼杂-3a,4a-二氮杂-s- 引达省-3-基)苯乙烯基氧基)乙酰基)氨基己酸(BODIPY® 630/650-X, SE)、Alexa Fluor® 350羧酸、5-羧基罗丹明6G (5-CR 6G, SE)、罗丹明绿™羧酸、氢氯化物(5(6)-CR 110, SE)，它们通常作为琥珀酰亚胺酯使用，与一端含有胺官能团的连接基反应。

术语“治疗”和“处理”指治疗性处理和预防性(prophylactic)或预防(preventative)措施，其中的目的是预防或减缓(减轻)不想要的病理学变化或障碍，诸如癌症的发展或扩散。对于本发明的用途，有益或想要的临床结果包括，但不限于，减轻症状、减轻疾病的程度、稳定(即，不恶化)疾病状态、延缓或减慢疾病的进展、减轻或缓解病情和部分或全部减轻，无论是否可被发觉。“治疗”也可指与如果未接受治疗而期望的存活相比的延长的存活。需要治疗的那些包括已经患有疾病或障碍的那些以及倾向患上疾病或障碍的那些或要预防疾病或障碍的那些患者。

短语“治疗有效量” (i) 治疗或预防特定疾病、病情或障碍，(ii) 减轻、改善或消除特定疾病、病情或障碍的一种或多种症状，(iii) 预防或延缓本文描述的特定疾病、病情或障碍的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。在癌症的情况下，药物的治疗有效量可减少癌细胞的数量；减小肿瘤尺寸；抑制(即，减慢至某种程度地，优选停止)癌细胞渗透进周围器官；抑制(即，减慢至某种程度，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或缓解与癌症有关的一种或多种症状至某种程度。药物可一定程度地预防现有的癌细胞生长和/或将其杀死，其可为抑制细胞生长和/或细胞毒素的。针对癌症治疗，例如，可通过评价疾病发展时间(TTP)和/或确定响应速度(RR)，测定疗效。

术语“癌症”和“癌”提及或描述典型地以不规则细胞生长为特征的哺乳动物的生理学状态。“肿瘤”包括一种或多种癌细胞。癌症的实例包括，但不限于，癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病或恶性淋巴瘤。这类癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如，鳞状上皮细胞癌)、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞、肺癌(“NSCLC”)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌或胃部癌包括胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、子宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤(hepatome)、乳癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾腺癌、肾癌或肾脏癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌以及头颈癌。

“化疗药”是用于治疗癌症的化学化合物。已知化疗药的实例包括曲妥珠单抗、培妥珠单抗、厄洛替尼(erlotinib)、硼替佐米(bortezomib)、氟维司群、舒尼替尼(sunitib)、来曲唑、甲磺酸伊马替尼、finasunate、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、雷帕霉素、拉帕替尼、氯那法尼、索拉非尼、吉非替尼、AG1478、烷基化药诸如塞替派、环磷酰胺；烷基磺酸酯类诸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；吖丙啶类诸如苯佐替派、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替派；乙撑亚胺类和三聚氰胺类，包括六甲蜜胺、三亚乙基三聚氰胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基噻替派和三羟甲密胺；多聚乙酰(acetogenins)；喜树碱(包括合成类似物托泊替康)；薯司他丁(bryostatin)；多烯酮类化合物(callystatin)；CC-1065 (包括合成类似物阿多来新、卡折来新和比折来新)；隐藻素类(cryptophycins)；多拉司他汀；倍癌霉素(duocarmycin) (包括合成类似物 KW-2189和CB1-TM1)；艾榴素；水鬼蕉碱(pancratistatin)；二萜类化合物(sarcodictyin)；海绵素(spongistatin)；氮芥诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯代磷酰胺(chlorophosphamide)、雌氮芥、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥；亚硝基脲类诸如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀；抗生素诸如烯二炔(enediyne)抗生素(例如，卡奇霉素，特别是卡奇霉素γ1和卡奇霉素ω1；烯二炔蒽环类抗生素类，包括烯二炔蒽环抗生素A；双膦酸盐类，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素；以及新制癌菌素发色团和相关色素蛋白enediyne抗生素发色团)、阿克拉霉素、放线菌素、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡柔比星(carabicin)、洋红霉素、嗜癌菌素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、地托比星(detorubicin)、6-二唑-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉基(pyrrolino)-多柔比星和去氧多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、马塞罗霉素、丝裂霉素诸如丝裂霉素C、麦考酚酸、诺加霉素、橄榄霉素、培洛霉素、紫菜霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑菌素、链佐星、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢药诸如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶；叶酸类似物诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物诸如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物诸如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷；雄性激素类诸如卡鲁睾酮、丙酸屈他雄酮、环硫雄醇、美雄烷、睾内脂；抗肾上腺素能药诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充物诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯；醛磷酰胺配糖；氨基乙酰丙酸；恩尿嘧啶；安吖啶；bestrabucil；比生群；依达曲沙；defofamine；地美可辛；地吖醌；elfornithine；依利醋铵；埃坡霉素；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；美坦生类化合物诸如美登素和安丝菌素；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；尼曲吖啶；喷司他丁；异丙嗪；吡柔比星；洛索蒽醌；鬼臼酸；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；PSK多糖复合物；雷佐生；利索新；西佐喃；螺旋锗；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；单端孢霉烯族化合物；尿烷；长春地辛；氮烯唑胺；甘露氮芥；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿拉伯糖苷；紫杉烷类，例如、紫杉醇、紫杉醇的白蛋白工程改造的纳米粒制剂(albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel)和多西他赛、多西他赛(doxetaxel)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物诸如顺铂和卡波铂；长春碱；依托泊苷；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺安托；替尼泊苷；依达曲沙；道诺霉素；氨基蝶呤；卡培他滨；伊班膦酸盐；CP-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；维甲类诸如维甲酸；和上述任一种的药学上可接受的盐；酸和衍生物。

还包括在“化疗药”的定义中的有：(i) 起调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药，诸如抗雌激素药和选择性受体调节剂(SERMs)，包括，例如，他莫昔芬、枸橼酸它莫昔芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和枸橼酸托瑞米芬；(ii) 抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂，其调节肾上腺中的雌激素生成，例如，4(5)-咪唑、醋酸甲地孕酮；依西美坦；福美坦、法倔唑、伏氯唑、来曲唑和阿那曲挫；(iii) 抗雄激素类诸如氟他胺、尼鲁米特；(iv) 蛋白激酶抑制剂；(v) 脂质激酶抑制剂；(vi) 反义寡核苷酸，例如，特别是抑制在涉及异常细胞增殖的信号传导通路中的基因诸如，PKC-α、Rafl和H-Ras表达的那些；(vii) 核酶诸如VEGF表达抑制剂和HER2表达抑制剂；(viii) 疫苗诸如基因治疗疫苗，例如，含有DNA序列编码的HLA-B7和ß2微球蛋白或DNA序列编码的白细胞介素-2、阿地白介素(rIL-2)的质粒/脂质复合物；拓扑异构酶1抑制剂诸如勒托替康或阿巴瑞克；(ix) 抗血管生成药诸如贝伐单抗；和(x)上述任一种的药学上可接受的盐、酸和衍生物。

“脂质体”是由多种类型的脂质、磷脂和/或表面活性剂组成的小囊泡，其用于递药(诸如本文公开的PI3K和mTOR激酶抑制剂，和任选的化疗药)至哺乳动物。脂质体的各组分通常排成双层构成，类似于生物膜的脂质排列。

术语“药品说明书”用来指通常包括在治疗产品的商业包装内的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、服法、关于使用这类治疗产品的禁忌和/或警告的信息。

术语“哺乳动物”包括，但不限于，人、小鼠、大鼠、豚鼠、猪、猴、犬、猫、马、牛、猪和羊。

本发明涉及式(I)化合物

(I)

其中

R¹是甲基、正己基、氨基乙基、甲基氨基乙基、乙基氨基乙基、二甲基氨基乙基、丙烯酰基氨基乙基、甲基丙烯酰基氨基乙基、甲氧基乙基、乙氧基乙基、C₁-C₄-烷基磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基；或者R¹是携带连接基和标记的氨基乙基、丙烯酰基或丙烯酰基氨基乙基，和

及其互变异构体、溶剂合物和药学上可接受的盐。

优选这样的化合物，其中R¹是甲基、正己基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(乙基氨基)乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、C₁-C₄-烷基磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基；或者R¹是各自携带连接基和标记的2-氨基乙基、丙烯酰基或2-(丙烯酰基氨基)乙基。

更优选这样的化合物，其中R¹是甲基、2-氨基乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-乙氧基乙基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、异丙基磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基，特别是甲基、2-氨基乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-乙氧基乙基、甲基磺酰基、乙基磺酰基或丙烯酰基，更特别是甲基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、甲基磺酰基或丙烯酰基。

也优选这样的化合物，其中R¹是各自携带连接基和标记的2-氨基乙基或丙烯酰基，特别地其中标记是生物素、荧光团或聚合物珠。

还优选这样的化合物，其中R²和R³，相互独立地为氢、甲基、乙基或异丙基，或R²和R³共同形成亚甲基桥或亚乙基桥。特别地，R²和R³都为氢，一个氢和一个甲基或两个都是甲基，或一起形成亚乙基桥。

更优选地，R²是(S)-2-甲基、(R)-2-甲基、(R)-3-甲基或(S)-3-甲基，R³是氢，或R²和R³是(2R,6S)-2,6-二甲基、(2R,6R)-2,6-二甲基、(2R,3R)-2,3-二甲基、(2S,5S)-2,5-二甲基、(3S,5R)-3,5-二甲基、(3S,5S)-3,5-二甲基、2,5-亚乙基桥、2,6-亚乙基桥、3,5-亚乙基桥或两者都是氢。最优选地，R²和R³都为氢。

最优选这样的式(I)化合物，其中R¹是甲基、正己基、2-氨基乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-乙氧基乙基、甲基磺酰基、乙基磺酰基或丙烯酰基，R²和R³为氢，特别是其中R¹是甲基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、甲基磺酰基或丙烯酰基，R²和R³为氢的式(I)化合物，例如其中R¹是甲基或甲基磺酰基，R²和R³为氢的化合物。

同样优选这样的式(I)化合物，其中R¹是携带连接基和生物素、荧光团或聚合物珠的2-氨基乙基，以及R²和R³为氢。

最优选各实施例的化合物。

在本文表示的结构中，其中任何特定手性原子的立体化学并未指定，预期和包括作为本发明化合物的所有立体异构体。

本发明化合物可以以溶剂化形式以及与药学上可接受的溶剂诸如水、乙醇等的溶剂化形式存在，本发明打算涵盖溶剂化和非溶剂化形式。本发明化合物也可以不同的互变异构形式(互变异构体)存在，全部这类形式都涵盖在本发明范围内。

合成方法

可通过包括类似于化学领域熟知的那些方法的合成途径，特别是按照本文包含的描述，合成本发明化合物。起始原料通常可得自商业途径或易于采用本领域技术人员熟知的方法制备。为说明的目的，流程1表示制备本发明化合物以及关键中间体的通用方法。通过相应的仲胺相继置换卤素(Hal)，例如氯或溴，将取代基引入三嗪核。被这样的仲胺置换的反应顺序原则上可自由交换，并可通过表示于流程1中的任何中间体对进行，最初以2,4,6-三卤代三嗪(氰尿酰氯或氰尿酰溴)开始。而且，可在反应程序的任何步骤修饰取代基R¹。

流程 1

例如，为将哌嗪取代基引入三嗪核，哌嗪的一个氮原子可带有氨基保护基，然后其随后被分离，生成其中R¹是氢的化合物，然后通过与重氮甲烷或卤代甲烷反应，进一步修饰，使R¹转化为甲基，通过与卤代正己烷反应，使R¹转化为正己基，通过与保护和/或取代的2-氨基乙基卤化物反应，使R¹转化为任选取代的2-氨基乙基，通过与2-乙氧基-或2-甲氧基乙基卤化物反应使R¹转化为2-乙氧基-或2-甲氧基乙基，通过与C₁-C₄-烷基磺酰卤反应使R¹转化为C₁-C₄-烷基磺酰基，或者通过与任选取代的丙烯酰卤或酸酐反应使R¹转化为在一端携带含有任选保护的氨基官能团或标记的连接基的丙烯酰基、甲基丙烯酰基或丙烯酰基。可通过与重氮甲烷、甲基或乙基卤、丙烯酰卤或丙烯酰酸酐(acryloyl anhydride)或在一端携带卤化物和在另一端携带标记或被保护氨基官能团的连接基反应，将含有称谓2-氨基乙基的R¹进一步加工成想要的衍生物。连接基的氨基官能团可在程序的最后步骤与标记的N-羟基琥珀酰亚胺酯反应，生成想要的带标记的连接基。作为选择，用来与卤代取代的三嗪反应的哌嗪可能已经携带最终的取代基R¹。

为更详尽地描述各反应步骤，参见下文的实施例。本领域技术人员会意识到，可采用其它合成途径合成本发明化合物。尽管在流程中描述和下文中讨论具体的起始原料和试剂，但可容易地以其它起始原料和试剂替代，以提供多种衍生物和/或反应条件。此外，可根据本公开，采用本领域技术人员熟知的常规化学，进一步修饰经以下描述的方法制备的许多化合物。

在制备本发明化合物的方法中，相互间分离和/或自起始原料中分离反应产物可以是有利的。通过本领域常见的技术，将各步骤或一系列步骤的想要的产物分离和/或纯化至想要的程度的均匀性。代表性的这类分离涉及自溶剂或溶剂混合物的多相萃取、结晶，蒸馏，升华或层析。层析可涉及许多方法，包括，例如：反相和正相；粒度排除；离子交换；高、中和低压液相层析法和装置；小规模分析；模拟移动床(SMB)和制备型薄层或厚层层析法，以及小规模薄层和快速层析法技术。另一类分离方法涉及用选自活性碳、分子筛、离子交换介质等的试剂处理混合物。

可根据其物理化学差异，通过本领域技术人员熟知的方法，诸如通过层析法和/或分级结晶，使非对映异构体混合物分离为其个别的非对映异构体。可通过与适当的光学活性化合物(例如，手性助剂诸如手性醇或Mosher氏酸氯化物)反应，使对映异构体混合物转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体和使各非对映异构体转化(例如，水解)为相应的纯对映异构体，分离对映异构体。而且，某些本发明化合物可为阻转异构体并被认为是本发明的一部分。也可采用手性HPLC柱分离对映异构体。

治疗方法

可以适于要治疗的疾病的任何途径给予本发明化合物。适用的途径包括经口、胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜上)、经皮、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。针对局部免疫抑制治疗，可经损害部位内给药给予化合物，包括输注或以其它方式在移植前使移植物与抑制剂接触。应意识到，优选途径可随例如接受者的条件而变化。在口服化合物的情况下，可用药学上可接受的载体或赋形剂将其配制成丸剂、胶囊剂、片剂等。在胃肠外给予化合物的情况下，可如以下详述的，用药学上可接受的胃肠外赋形剂配制，并呈单位剂量的可注射的形式。

治疗病人的剂量可介于约10 mg-约1000 mg本发明化合物范围。代表性的剂量可为约100 mg-约300 mg化合物。可根据药物代谢动力学和药效学性质，包括具体化合物的吸收、分布、代谢和排泄，每日一次(QID)、每日两次(BID)或更多次地给予剂量。此外，毒性因素可影响剂量和给药方案。当口服时，可每日或更不频繁地服用丸剂、胶囊剂或片剂一个特定时间段。方案可重复多个治疗周期。

本发明化合物可用来治疗疾病、病症和/或障碍，包括，但不限于，以脂质激酶，例如PI3激酶的过度表达为特征的那些。因此，本发明的另一方面包括治疗或预防可通过抑制脂质激酶，包括PI3K和mTOR治疗或预防的疾病或病症的方法。在一个实施方案中，该方法包括给予有需要的哺乳动物治疗有效量的本发明化合物或包含它的药用组合物。

可根据本发明的方法治疗的疾病和病症包括，但不限于，患者的癌症、中风、糖尿病、肝肿大、心血管疾病、阿尔茨海默氏病、囊性纤维化、自体免疫疾病、动脉粥样硬化、再狭窄、银屑病、变应性紊乱、炎症、神经学障碍、涉及激素的疾病、与器官移植相关的疾病、免疫缺陷障碍、破坏性骨障碍、增殖障碍、传染病、与细胞死亡相关的疾病、凝血酶介导的血小板聚集、慢性骨髓性白血病(CML)、肝病、涉及T细胞活化的病理免疫病症和CNS障碍。

可根据本发明方法治疗的癌症包括，但不限于以下癌症：乳房、卵巢、子宫颈、前列腺、睾丸、生殖泌尿道、食管、喉、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃、皮肤、角化棘皮瘤、肺、鳞状细胞癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨、结肠、腺瘤、胰腺、腺癌、甲状腺、滤胞癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞癌、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道、肾癌、骨髓障碍、淋巴障碍、多毛细胞、口腔和咽(口)、唇、舌、口、咽、小肠、结肠-直肠、大肠、直肠、大脑和中枢神经系统、何杰金氏病和白血病. 可根据本发明方法治疗的心血管疾病包括，但不限于，再狭窄、心肥大、动脉粥样硬化、心肌梗死和充血性心力衰竭。可根据本发明方法治疗的神经退化性疾病包括，但不限于，阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化、亨廷顿氏病和脑缺血，和由外伤性损伤、谷氨酸盐神经毒性和缺氧造成的神经退行性疾病。可根据本发明方法治疗的炎性疾病包括，但不限于，类风湿性关节炎、银屑病、结触性皮炎和迟发型过敏反应。

本发明的另一方面提供用于在患有这类疾病或病症的哺乳动物，例如，人中治疗本文描述的疾病或病症中的本发明化合物。还提供本发明化合物在制备治疗患有这类障碍的温血动物，诸如哺乳动物，例如人的本文描述的疾病和病症的药物方面的用途。

药用组合物

为采用本发明化合物治疗性处理(包括预防性治疗)哺乳动物包括人，通常根据标准制药实践，将其配制成药用组合物。根据本发明的该方面，提供包含与药学上可接受的稀释剂或载体在一起的本发明化合物的药用组合物。

通过使本发明化合物和载体、稀释剂或赋形剂混合，制备代表性的制剂。适用的载体、稀释剂和赋形剂为本领域技术人员熟知并包括原料诸如碳水化合物、蜡、水溶性和/或可溶胀性聚合物、亲水或疏水材料、明胶、油、溶剂、水等。采用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用本发明化合物的方法和目的。通常根据本领域技术人员公认的溶剂，按照给予哺乳动物的安全性(GRAS)，选择溶剂。通常，安全溶剂是无毒的水性溶剂诸如水和可溶解或易与水溶混的其它无毒溶剂。适用的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400、PEG 300)等，及其混合物。制剂也可包含一种或多种缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、湿润剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂和其它已知添加剂。

可采用常规溶解和混合程序制备制剂。例如，在一种或多种上述赋形剂的存在下，使原料药物质溶解于适用的溶剂。将本发明化合物典型地配制成药物剂型，以提供易于控制剂量的药物，并使患者依从制定的方案。

可根据采用的给药方法，以多种方式包装要使用的药用组合物。通常，分发用的物品包括已经将呈适当形式的药用制剂放置其中的容器。适用的容器为本领域技术人员熟知，包括材料诸如瓶(塑料和玻璃)、小药囊、安瓿、塑料袋、金属筒等。容器还可包括防伪装置，以防止轻率地接触包装内容物。此外，容器具有置于其上的标记，它描述容器的容量。标记也可包括适当的警示。

可针对各种给药途径和类型制备本发明化合物的药用制剂。例如，在呈冻干制剂、粉碎散剂或水溶液剂的形式中，具有所需纯度的本发明化合物可任选与药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合，可在环境温度、适当pH和想要纯度下，通过与生理学上可接受的载体，即，在采用的剂量和浓度下对接受者无毒的载体混合，进行配制。制剂的pH主要取决于具体用途和化合物的浓度，但可能介于约3至约8。pH 5的醋酸缓冲液中的制剂是适用的实施方案。

本文采用的本发明化合物优选为无菌的。具体说来，将要用于体内给药的制剂必须是无菌的。通过灭菌过滤膜过滤易于实现这样的灭菌。通常可作为固体组合物、冻干制剂或作为水溶液贮存化合物。应以符合良好的医学实践的方式配制、定量或给予本发明药用组合物，即，量、浓度、时间表、疗程、介质和给药途径。本上下文中要考虑的因素包括要治疗的具体障碍、要治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床病情、障碍的起因、递药部位、给药方法、给药时间表和医学从业者已知的其它因素。待给予的化合物的"治疗有效量"受这类考虑的控制，并且是需要预防、改善或治疗凝血因子介导的障碍的最少的量。这样的量优选低于对宿主有毒或使宿主对出血显著更加敏感的量。作为一般性建议，胃肠外给予的抑制剂的最初的药学有效量每剂应在约0.01-100 mg/kg，即约0.1-20 mg/kg患者体重每天范围内，采用的化合物的代表性最初范围为0.3-15 mg/kg/日。

可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在采用的剂量和浓度下对接受者无毒，且包括缓冲剂诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲铵；氯化苄烷铵、苄索氯铵；酚、丁基醇或苄基醇；烷基对羟基苯甲酸酯诸如甲基或丙基对羟基苯甲酸酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸诸如甘氨酸、谷氨酸、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖类、二糖类和其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂诸如EDTA；糖类诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子诸如钠；金属络合物(例如、Zn-蛋白络合物)；和/或非离子表面活性剂诸如TWEEN™、PLURONICS™或聚乙二醇(PEG)。也可在胶质递药系统(例如，脂质体、白蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米囊)或在粗乳剂(macroemulsions)中，将活性药物成分装入例如，通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微囊中，例如，分别为羟甲基纤维素或明胶微囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊。

可制备本发明化合物的持续释放制剂。持续释放制剂的适用实例包括含有本发明化合物的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质呈有形制品，例如，薄膜或微囊的形式。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟基乙基-甲基丙烯酸酯)或聚乙烯醇))、聚交酯, L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的亚乙基-乙酸乙烯酯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。

适用于口服的本发明化合物的制剂可被制备成各自含有预定量的本发明化合物的分离单位，诸如丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。可通过用适用的机器压缩任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合的呈自由流动形式诸如粉末或颗粒的活性成分，制备压缩片剂。可用适用的机器模塑用惰性液体稀释剂湿润的粉末状活性成分的混合物，制备模塑片剂。片剂可任选被包衣或刻痕和任选被配制，以从中提供缓慢或控制释放的活性成分。可制备片剂，药片，锭剂，水性或油性混悬剂，可分散散剂或颗粒剂，乳剂，硬或软胶囊剂，例如，明胶胶囊剂，糖浆剂或酏剂以供口服使用。可根据药用组合物制备领域已知的任何方法制备打算口服使用的本发明化合物的制剂，这类组合物可含有一种或多种试剂，包括甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供适口的制剂。含有与适于制备片剂的、无毒的药学上可接受的赋形剂混合在一起的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可为，例如，惰性稀释剂，诸如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；粒化剂和崩解剂，诸如玉米淀粉或藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可不包衣或可经已知技术包括微胶囊化包衣，以延缓崩解和胃肠道的吸收，从而提供经历更长时间的持续作用。例如，可采用延时材料诸如单独或与蜡一起的甘油一硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。

为治疗眼或其它外部组织，例如，口和皮肤，优选采用含有例如，0.075-20% w/w的量的活性成分的作为局部软膏剂或霜剂的制剂。当配制成软膏剂时，可采用与石蜡或水溶性的软膏基质一起的活性成分。作为选择，可用水包油型霜剂基质将活性成分配制成霜剂。如想要，霜剂基质的含水相可包括多元醇，即，具有两个或多个羟基的醇，诸如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)和它们的混合物。局部制剂可理想地包括促进活性成分透过皮肤或其它有影响的区域的吸收或渗透的化合物。这类皮肤渗透促进剂的实例包括二甲亚砜和相关类似物。可按已知方式由已知成分构成本发明乳剂的油相。尽管该相可能仅仅包含一种乳化剂，它仍合乎需要地包含至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪和油二者的混合物。优选地，亲水乳化剂与担当稳定剂的亲脂乳化剂包括在一起。还优选包括油和脂肪二者。同时，带或不带稳定剂的乳化剂组成所谓的乳化蜡，蜡与油和脂肪一起组成所谓的乳化软膏基质，其形成霜剂的油性分散相。适用于本发明制剂的乳化剂和乳剂稳定剂包括Tween® 60、Span® 80、十六醇十八醇混合物、苄醇、肉豆寇醇、甘油一硬脂酸酯和月桂基硫酸钠。

本发明化合物的含水混悬剂含有与适用于制备含水混悬剂的赋形剂混合在一起的活性原料。这类赋形剂包括助悬剂，诸如羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素、聚烯吡酮(povidone)、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶，和分散剂或湿润剂诸如天然生成的磷脂(例如，卵磷脂)、烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如, 聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷与长链脂肪族醇的缩合产物(例如，十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如，聚氧化乙烯失水山梨醇单油酸酯)。含水混悬剂也可含有一种或多种防腐剂诸如对-羟基苯甲酸乙基酯或正丙基酯，一种或多种着色剂，一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，诸如蔗糖或糖精。

本发明化合物的药用组合物可呈无菌可注射制剂，诸如无菌可注射水性或油性混悬剂的形式。根据已知工艺，采用以上已经介绍的那些适用的分散剂或湿润剂和助悬剂，可配制该混悬剂。无菌可注射制剂也可为在无毒胃肠外的可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液剂或混悬剂，诸如在1,3-丁二醇中的溶液或被制备为冻干粉针剂。在可采用的可接受的介质和溶剂中有水、Ringer氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油可按惯例用作溶剂或助悬介质。为此目的，可采用任何无刺激性的不挥发油，包括合成的单或双甘油酯。此外，脂肪酸诸如油酸同样可用于注射剂的制备。含水或不含水无菌注射溶液剂可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与计划的接受者血液等渗的溶质。含水和不含水无菌混悬液可包括助悬剂和增稠剂。

适用于局部给予眼的制剂还包括滴眼剂，其中的活性成分溶解或悬浮于适用的载体，尤其是针对活性成分的水性溶剂。活性成分优选以呈约0.5-20% w/w，例如约0.5-10% w/w，例如约1.5% w/w的浓度的这类制剂存在。

适用于口腔局部给药的制剂包括含有在矫味基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中的活性成分的锭剂；包含在惰性基质诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶中的活性成分的软锭剂；和包含在适用的液体载体中的活性成分的漱口剂。

直肠给药的制剂可呈现为含有适用的基质包括例如可可油或水杨酸酯的栓剂。适用于肺内或经鼻给药的制剂具有例如在0.1-500微米范围内的粒度(包括介于0.1和500微米之间，按微米增加的微米诸如0.5、1、30微米、35微米等粒度)，其经鼻通道快速吸入或经口腔吸入给药，以达到肺泡囊。适用的制剂包括活性成分的含水或含油溶液剂。适用于气雾剂或干粉剂给药的制剂可根据常规方法制备，并可与其它治疗剂诸如如下所述的在此之前用于治疗或预防障碍的化合物一起递药。适用于阴道给药的制剂可呈现为除活性成分之外还含有如本领域已知适合的这类载体的阴道栓剂、卫生棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂。

制剂可包装在单位剂量或多剂量容器，例如密封安瓿和小瓶中，并在可在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，在临用前仅需要加入无菌液体载体，例如水，以即刻注射。从先前描述的那类无菌粉末剂、颗粒剂和片剂制备临时制作的注射溶液剂和混悬剂。如上文列举的，优选的单位剂量制剂是含有日剂量或单位日分剂量，或其适当部分的活性成分的那些。

本发明进一步提供包含与兽医载体一起的至少一种如上定义的活性成分的兽医组合物。兽医载体是可用于组合物给药的用途的材料，并可为固体、液体或气态材料，其在兽医领域是惰性或可接受的，并与活性成分适配。可经胃肠外、经口或通过其它任何想要的途径给予这些兽医组合物。

联合治疗

本发明化合物可单独或与其它治疗药联合使用，以治疗本文描述的疾病或障碍，诸如高增殖障碍(例如，癌症)。在某些实施方案中，在药用组合物制剂，或者作为联合治疗的剂量方案中，本发明化合物与具有抗增殖性质或用于治疗高增殖障碍(例如，癌症)的第二种化合物联合。药用组合制剂或剂量方案的第二种化合物优选具有对本发明化合物的补充活性，以便它们不会相互产生不利影响。这类化合物以对打算的用途有效的量适当地存在于组合物中。在一个实施方案中，本发明组合物包括与诸如本文描述的化疗药联合的本发明化合物。

可作为同时或相继方案给予联合治疗。当相继给予时，可按两次或更多次给药进行联合治疗。联合给药包括采用单独的制剂或单一药物制剂，按任一种次序连续给药的共同给药，其中优选在两种(或全部)活性剂同时发挥其生物学活性期间有一个时间段。上述共同给予的药物中的任一种适用剂量为目前使用的那些，并可因新鉴别的药物和其它化疗药或治疗的联合作用(协同作用)而有所降低。

在抗癌治疗的具体实施方案中，本发明化合物可与其它化学治疗药、激素或抗体药诸如本文描述的那些联合，以及与手术治疗或放射治疗联合。因此根据本发明的联合治疗包括给予至少一种本发明化合物和采用至少一种其它癌症治疗方法。应选择本发明化合物的量和其它药学活性化疗药和相关的给药时机，以达到想要的联合治疗效果。

筛选方法

本发明进一步涉及结合至脂质激酶的化合物的筛选方法，其包括

(a) 使式(I)化合物，其中R¹是携带连接基和标记的氨基乙基、丙烯酰基或丙烯酰基氨基乙基，结合至脂质激酶；

(b) 与要筛选来结合至所述脂质激酶的化合物混合；

(c) 根据标记的性质，测定所述式(I)化合物的替换；和

(d) 从测得的替代结果计算要被筛选的化合物的结合。

脂质激酶可为任何前述激酶，特别是磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、DNA-PK和ATM激酶，更特别是PI3K亚型。

可用许多不同的实验方法根据步骤(b)与要筛选的化合物混合。例如要筛选的化合物可经滴定，以一批过量地，或少于等摩尔量的一批加至根据步骤(a)从脂质激酶和根据本发明的式(I)化合物形成的复合物中，根据标记的性质和时间依赖的方式用各种方法确定替换。如果标记是荧光团，可测定荧光团的量，或者可测定携带荧光团的化合物的衍射，这取决于携带荧光团化合物的分子量及其与其它分子的相互作用。也可能采用带荧光猝灭剂的FRET系统和本领域熟知的分光镜的其它方法。如果标记是生物素，可通过与抗生物素蛋白结合连接任何可测量的标记物，然后使抗生物素蛋白结合至生物素。用这类附带步骤，可在本发明筛选方法中采用任何这类可测标记物。

实施例

按照流程2中的程序合成化合物5-7、11和12：

流程 2

-50℃下，在二氯甲烷中，用吗啉取代氰尿酰氯(Cyanuric chloride) 1历经20 min，生成中间体2。-5℃下，在DMF中的K₂CO₃的存在下，用2-二氟甲基-1H-苯并咪唑替换第二种氯化物30 min，室温下进一步搅拌4 h，生成中间体3。室温下通过在K₂CO₃和DMF的存在下，使中间体3经氨基化45分钟，最终步骤生成产物4-7 、 11和12。化合物4是为比较目的而制备的已知化合物ZSTK474。

用BOC保护的哌嗪氨基化，随后BOC去保护并与丙烯酸酐反应，由中间体3得到化合物8。通过用2-(2-(哌嗪-1-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮氨基化，随后与肼反应，分裂出邻苯二甲酰亚胺保护基，由中间体3得到化合物9。然后用丙烯酸酐处理化合物9，生成化合物10。

对黑素瘤细胞系A2058和TSC2-/-MEFs细胞系的细胞Western抑制试验测定本发明化合物的抑制效力和细胞渗透性。而且，测定体外PI3Kα抑制(表1)。将结果与现有技术最接近的化合物相比较：ZSTK474 (4)，Zenyaku的开发化合物(EP 1 864 665的化合物4)和无二氟甲基的化合物17 (EP 1 020 462的化合物39)。

采用N-甲基哌嗪，生成化合物5和采用含有磺酰基的哌嗪，生成化合物6和7对其针对PI3K的抑制剂活性具有意外的积极作用。化合物5对PI3K的抑制剂活性增加，但减小了对mTOR的选择性。用更加酸性和更加可溶的1-(甲基磺酰基)哌嗪代替，生成6，对黑素瘤癌细胞系产生优异的抑制剂活性。当引入1-(乙磺酰基)哌嗪，生成化合物7时，与ZSTK474 (4)相比，对PI3K的生物学活性略有下降，而对mTOR的选择性有显著的减少。

也可将化合物5的活性与现有技术的结构上最接近的化合物，化合物17相比较。化合物5比化合物17实质上更具活性。

根据分子模化实验，磺酰基的氧原子具有与靶蛋白形成其它氢键的趋势，使该化合物效力更大。此外，由于磺酰基的极性，这些化合物比ZSTK474 (4)具有更好的水溶解性。

当引入N-正己基哌嗪，生成化合物11，引入N-(2-氨基乙基)哌嗪和N-(2-乙氧基乙基)哌嗪，生成化合物9和12，或引入N-丙烯酰基哌嗪和N-(2-丙烯酰基氨基乙基)哌嗪，分别生成化合物8和10时，进一步发现积极作用。引入带有连接至N-(2-氨基乙基)哌嗪的荧光团的延长的链还生成活性化合物13。

4-(4,6- 二氯 -1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (2)

-50℃ 下，使氰尿酰氯(10.0 g, 54.2 mmol, 1.0 eq.)溶解于二氯甲烷 (60 ml)，将吗啉(4.70 ml, 54.2 mmol, 1.0 eq.)逐滴加至反应混合物中，相同温度下搅拌20 min并倒入水中。在用二氯甲烷和乙酸乙酯萃取(两次)后，有机层经MgSO₄干燥并浓缩。用硅胶快速柱层析法进一步纯化(70%己烷/乙酸乙酯)，得到呈无色固体的标题化合物(3.60 g, 28 %). R _F：0.72 (己烷/乙酸乙酯，1:1 v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400 MHz) δ 3.89-3.87 (m, 4H), 3.76-3.74 (m, 4H)；¹³C NMR (CDCl₃,100 MHz) δ 170.85, 164.50, 66.79, 44.87.

4-(4- 氯 -6-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (3)

使化合物2 (425 μmol, 1.0 eq.)溶解于DMF (2 ml)并冷却至-5℃，用无水碳酸钾和2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑(1.4 eq.)处理(1.44 eq.)，搅拌30 min，室温下进一步搅拌4 h。用水稀释反应混合物，过滤沉淀，并用少量水洗涤。经硅胶快速柱层析法纯化。R _F：0.72 (二氯甲烷/甲醇，95:5 v/v)；¹H NMR(CDCl₃,400 MHz) δ 8.43 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.71-7.43 (m, 3H), 4.00-3.95 (m, 4H), 3.86-3.80 (m, 4H)；

¹⁹F NMR (CDCl₃,400 MHz) δ -119.20 (d, J = 53.9 Hz, 2F).

中间体 3 与仲胺反应的通用程序

使中间体3 (270 μmol, 1.0 eq.)溶解于DMF (5.4 ml)。加入K₂CO₃ (3.2 eq.)和环状仲胺(1.2 eq.)，室温下搅拌反应混合物45 min至2 h。在减压下浓缩反应混合物。使得到的残余物溶解于二氯甲烷，并用水萃取。用水洗涤分离的有机层，并经MgSO₄干燥。降压下除去溶剂，得到的残余物经硅胶快速柱层析法纯化。

4,4'-(6-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2,4- 二基 ) 二吗啉 (4), ZSTK474

按照通用程序，使中间体3 (100 mg, 270 μmol, 1.0 eq.)与吗啉(28.0 μl, 320 μmol, 1.2 eq.)偶合45 min。用二氯甲烷和水萃取，得到呈无色固体的标题化合物(110 mg, 96%). R _F：0.45 (二氯甲烷/甲醇，95:5 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.34-8.32 (m, 1H), 7.90-7.88 (m, 1H), 7.56 (t, J = 53.6 Hz, 1H), 7.46-7.37 (m, 2H), 3.88-3.79 (m, 16H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.41, 162.41, 146.60, 142.36, 133.97, 126.19, 124.81, 121.76, 116.23, 108.83, 106.44, 67.04, 44.46, 44.37；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -118.41 (d, J = 53.9 Hz, 2F).

4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6-(4- 甲基哌嗪 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (5)

按照通用程序，使中间体3 (100 mg, 270 μmol, 1.0 eq.)与N-甲基哌嗪(36.0 μl, 320 μmol, 1.2 eq.)偶合45 min。得到的残余物经硅胶快速柱层析法纯化(5%甲醇/二氯甲烷)，得到呈无色固体的标题化合物(100 mg, 85%)。R _F：0.11 (二氯甲烷/甲醇, 97:3 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.33 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.71-7.37 (m, 3H), 3.93-3.87 (m, 8H), 3.79-3.78 (m, 4H), 2.52 (br. s, 4H), 2.38 (s, 3H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.46, 165.17, 142.36, 126.15, 124.76, 121.73, 116.25, 67.08, 55.12, 46.48；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -118.43 (d, J = 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₀H₂₄F₂N₈O)：计算值431.21 (M⁺), 实测值431.40.

4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6-(4-( 甲基磺酰基 ) 哌嗪 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (6)

按照通用程序，使中间体3 (70.0 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)与1-甲磺酰基哌嗪(37.6 mg, 229 μmol, 1.2 eq.)偶合45 min。用二氯甲烷萃取，得到呈无色固体的标题化合物，其无需进一步纯化而使用(90.0 mg, 95%)。R _F 0.60 (二氯甲烷/甲醇97:3 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.29 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 7.64-7.36 (m, 3H), 4.01 (br. s, 4H), 3.87-3.78 (m, 8H), 3.33-3.32 (m, 4H), 2.80 (s, 3H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.38, 165.36, 162.44, 146.50, 146.24, 145.97, 142.32, 133.90, 126.30, 124.90, 121.77, 116.17, 111.25, 108.87, 106.48, 67.02, 47.12, 45.94, 44.52, 44.40, 35.15；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -117.47 (d, J = 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₀H₂₄F₂N₈O₃S)：计算值495.18 (M⁺), 实测值495.10.

4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6-(4-( 乙基磺酰基 ) 哌嗪 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (7)

按照通用程序，使中间体3 (70.0 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)与1-(乙磺酰基)哌嗪(40.8 mg, 229 μmol, 1.2 eq.)偶合45 min。用二氯甲烷和水萃取，得到呈无色固体的标题化合物，其无需进一步纯化而使用(95.0 mg, 98%)。R _F：0.50 (二氯甲烷/甲醇97:3 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.32-8.29 (m, 1H), 7.90-7.88 (m, 1H), 7.66-7.38 (m, 3H), 3.99 (br. s, 4H), 3.88-3.79 (m, 8H), 3.41-3.39 (m, 4H), 3.02-2.97 (m, 2H), 1.39 (t, J = 7.4 Hz, 3H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.41, 142.36, 126.29, 124.91, 121.83, 116.14, 110.48, 67.03, 44.71, 26.92, 8.23；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -117.48 (d, J = 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₁H₂₆F₂N₈O₃S)：计算值509.19 (M⁺), 531.18 (M+Na)⁺, 实测值509.10, 531.00.

根据流程3制备化合物8：

流程 3

1-(4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6- 吗啉代 -1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙 -2- 烯 -1- 酮 (8)

向4-(4-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-6-(哌嗪-1-基)-1,3,5-三嗪-2-基)吗啉(15) (100 mg, 240 μmol, 1.0 eq., 根据通用程序，随后去保护，由中间体3和BOC保护的哌嗪得到)的二氯甲烷(4.0 ml)溶液加入 N,N-二异丙基乙胺(46.0 μl, 264 μmol, 1.1 eq.)和丙烯酸酐(27.7 μl, 240 μmol, 1.0 eq.)。室温下搅拌反应混合物2 h。蒸发溶剂，并经硅胶快速柱层析法纯化(2%甲醇/二氯甲烷)，生成呈无色固体的标题化合物(100 mg, 88%)。R _F：0.20 (二氯甲烷/甲醇，97:3 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.30 (d, J = 7.58 Hz, 1H), 7.87-7.85 (m, 1H), 7.66-7.35 (m, 3H), 6.63-6.56 (m, 1H), 6.34 (dd, J = 1.8, 16.7 Hz, 1H), 5.75 (dd, J = 1.8, 10.6 Hz, 1H), 3.90-3.86 (m, 8H), 3.79-3.67 (m, 8H)；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ；ESI-MS (C₂₂H₂₄F₂N₈O₂)：计算值493.20 (M+Na)⁺, 实测值493.20.

根据流程4制备化合物9和10。

流程 4

2-(4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6- 吗啉代 -1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 乙胺 (9)

将2-(2-(4-(4-(2-(二氟甲基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)-6-吗啉代-1,3,5-三嗪-2-基)哌嗪-1-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮(16) (70 mg, 119 μmol, 1.0 eq., 得自中间体3和2-(2-(哌嗪-1-基)乙基)异吲哚啉-1,3-二酮)溶于乙醇(326 μl)中，并用肼一水合物(6.4 μl, 130 μmol, 1.1 eq.)处理。100℃下，回流生成的混合物5 h，由此形成白色沉淀。冷却糊状物，然后用浓盐酸(28.4 μl)处理，随后再次回流1 h。冷却糊状物至室温，滤去白色固体。真空蒸发滤液，将残余物溶于水(1.5 ml)中，用1 M NaOH使溶液呈pH 11。用NaCl饱和含水相，并用二氯甲烷萃取。合并的有机相经MgSO₄干燥，蒸发，真空干燥，得到呈无色固体的标题化合物。R _F：0.00 (乙酸乙酯/二氯甲烷，1:1 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.33 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.57 (t, J = 53.6 Hz, 1H), 7.44-7.36 (m, 2H), 3.88-3.85 (m, 8H), 3.78-3.77 (m, 4H), 2.84 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.53-2.47 (m, 6H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.45, 165.08, 162.38, 146.36, 142.34, 133.98, 126.12, 124.73, 121.69, 116.27, 108.82, 72.98, 70.91, 70.32, 67.11, 67.05, 62.17, 53.37, 39.07；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -118.44 (d, J = 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₁H₂₇F₂N₉O)：计算值460.24 (M⁺), 实测值460.20.

N-(2-(4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6- 吗啉代 -1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 乙基 ) 丙烯酰胺 (10)

向化合物9 (100 mg, 218 μmol, 1.0 eq.)的二氯甲烷(4.0 ml)溶液加入N,N-二异丙基乙胺(46.0 μl, 264 μmol, 1.1 eq.)和丙烯酸酐(38.0 μl, 218 μmol, 1.0 eq.)。室温下搅拌反应混合物2 h。蒸发溶剂，经制备型薄层层析法(10%甲醇/乙酸乙酯)进一步纯化，生成呈无色固体的标题化合物(53 mg, 47%). R _F：0.40 (乙酸乙酯/甲醇, 9:1 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 8.32 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.66-7.36 (m, 3H), 6.31-6.28 (m, 2H), 6.17-6.11 (m, 1H), 5.65 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 3.89-3.86 (m, 8H), 3.77 (br. s, 4H), 3.52-3.49 (m, 2H), 2.62-2.57 (m, 6H)；¹³C NMR (CDCl₃, 125 MHz) δ 165.62, 165.05, 164.77, 162.02, 146.17, 145.96, 145.75, 141.94, 133.58, 130.80, 128.20, 126.54, 125.81, 124.42, 121.31, 115.88, 110.36, 108.45, 106.54, 66.66, 56.65, 52.68, 52.52, 44.07, 43.95, 43.47, 43.26, 35.90；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -117.49 (d, J= 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₄H₂₉F₂N₉O₂)：计算值514.25 (M⁺), 实测值514.30和536.24 (M+Na)⁺, 实测值536.20.

4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6-(4- 己基哌嗪 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (11)

按照通用程序，使中间体3 (70 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)与1-己基哌嗪(44.5 μl, 229 μmol, 1.2 eq.)偶合45 min。用二氯甲烷和水萃取，得到呈无色固体的标题化合物(90.0 mg, 94%). R _F：0.44 (二氯甲烷/甲醇, 95:5 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.35-8.33 (m, 1H), 7.90-7.88 (m, 1H), 7.58 (t, J = 53.5 Hz, 1H), 7.45-7.37 (m, 2H), 3.89-3.87 (m, 8H), 3.79-3.77 (m, 4H), 2.51 (s, 4H), 2.38 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 1.54-1.49 (m, 2H), 1.34-1.28 (m, 6H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.48, 165.06, 162.39, 126.11, 124.72, 121.71, 116.28, 67.07, 59.19, 53.38, 44.89, 32.19, 27.63, 27.24, 23.02, 14.47；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -118.44 (d, J = 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₅H₃₄F₂N₈O)：计算值501.29 (M⁺), 实测值501.30.

4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6-(4-(2- 乙氧基乙基 ) 哌嗪 -1- 基 )-1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 吗啉 (12)

按照通用程序，使中间体3 (70 mg, 191 μmol, 1.0 eq.)与1-(2-乙氧基乙基)哌嗪 (38.5 μl, 229 μmol, 1.2 eq.)偶合45 min。用二氯甲烷和水萃取，得到呈无色油的标题化合物(90.0 mg, 96%). R _F：0.28 (二氯甲烷/甲醇, 95:5 v/v)；¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 8.35-8.33 (m, 1H), 7.89-7.87 (m, 1H), 7.58 (t, J = 53.7 Hz, 1H), 7.45-7.37 (m, 2H), 3.90-3.86 (m, 8H), 3.79-3.77 (m, 4H), 3.60 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.55-3.50 (m, 2H), 2.65 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.60-2.59 (m, 4H), 1.22 (t, J = 7.1 Hz, 3H)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 165.46, 165.06, 162.39, 142.36, 134.00, 126.11, 124.73, 121.70, 116.27, 108.82, 68.47, 66.96, 58.37. 53.71, 15.57；¹⁹F (CDCl₃,400 MHz) δ -118.43 (d, J = 53.9 Hz, 2F)；ESI-MS (C₂₃H₃₀F₂N₈O₂)：计算值489.26 (M⁺), 实测值489.20.

(E)-3-(4-(2-((6-((2-(4-(4-(2-( 二氟甲基 )-1H- 苯并 [d] 咪唑 -1- 基 )-6- 吗啉代 -1,3,5- 三嗪 -2- 基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 乙基 ) 氨基 )-6- 氧代己基 ) 氨基 )-2- 氧代乙氧基 ) 苯乙烯基 )-5,5- 二氟 -7-( 噻吩 -2- 基 )-5H- 二吡咯并 [1,2-c:2',1'-f][1,3,2] 二氮杂硼杂环戊烯 (borinin-4-ium-5-uide) (13)

室温下向化合物9 (1.0 eq., 6.88 μmol, 3.16 mg)的abs. DMSO-d₆ (100 μl)溶液加入溶解于200 μl DMSO-d₆的Bodipy 630/650-X (Invitrogen, D10000) (5.00 mg, 7.57 μmol, 1.1 eq.)。将反应混合物置于NMR-管经NMR 控制。ESI-MS (C₅₀H₅₃BF₄N₁₂O₄S)：计算值1005 (M⁺), 实测值1005.

含荧光团化合物 13 作为 PI3K γ同工型的参考抑制剂的作用

可经荧光相关谱实验将含荧光团的化合物13用作参考抑制剂，其中测定新抑制剂的结合常数。化合物13结合至PI3Kγ亚型，这导致扩散时间的增加。当酶被化合物13饱和时，可通过观察化合物13的释放测试新的可能配体。这导致扩散时间的减少。

Claims

1. 一种式(I)化合物

(I)

其中

R²和R³，相互独立地为氢或C₁-C₄-烷基，或R²和R³共同形成亚乙基桥；

及其互变异构体、溶剂合物和药学上可接受的盐。

2. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基、正己基、2-氨基乙基、2-(甲基氨基)乙基、2-(乙基氨基)乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基、C₁-C₄-烷基磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基。

3. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是各自携带连接基和标记的2-氨基乙基、丙烯酰基或2-(丙烯酰基氨基)乙基。

4. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基、2-氨基乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-乙氧基乙基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、异丙基磺酰基、丙烯酰基或甲基丙烯酰基。

5. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基、2-氨基乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-乙氧基乙基、甲基磺酰基、乙基磺酰基或丙烯酰基。

6. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、甲基磺酰基或丙烯酰基。

7. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是各自携带连接基和选自生物素、荧光团或聚合物珠的标签的2-氨基乙基或丙烯酰基。

8. 根据权利要求1-7中任一项的式(I)化合物，其中R²和R³，相互独立地为氢、甲基、乙基或异丙基，或者R²和R³共同形成亚甲基桥或亚乙基桥。

9. 根据权利要求1-7中任一项的式(I)化合物，其中R²和R³都为氢、一个氢和一个甲基，或者二者都为甲基，或者一起形成亚乙基桥。

10. 根据权利要求1-7中任一项的式(I)化合物，其中R²是(S)-2-甲基、(R)-2-甲基、(R)-3-甲基或(S)-3-甲基，和R³是氢，或R²和R³为(2R,6S)-2,6-二甲基、(2R,6R)-2,6-二甲基, (2R,3R)-2,3-二甲基、(2S,5S)-2,5-二甲基、(3S,5R)-3,5-二甲基、(3S,5S)-3,5-二甲基、2,5-亚乙基桥、2,6-亚乙基桥、3,5-亚乙基桥，或者二者都为氢。

11. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基、正己基、2-氨基乙基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、2-乙氧基乙基、甲基磺酰基、乙基磺酰基或丙烯酰基，及R²和R³为氢。

12. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基、2-(丙烯酰基氨基)乙基、甲基磺酰基或丙烯酰基，及R²和R³为氢。

13. 根据权利要求1的式(I)化合物，其中R¹是甲基或甲基磺酰基，及R²和R³为氢。

14. 一种药用组合物，其包含根据权利要求1-13中任一项的式(I)化合物。

15. 一种预防或治疗受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或障碍的方法，其包括给予需要这样治疗的哺乳动物有效量的根据权利要求1-13中任一项的式(I)化合物。

16. 一种治疗根据权利要求15的高增殖障碍的方法，其包括给予需要这样治疗的哺乳动物有效量的式(I)化合物。

17. 作为治疗或预防哺乳动物受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或病症的药物的根据权利要求1-13中任一项的式(I)化合物。

18. 根据权利要求1-13中任一项的式(I)化合物，其用于制备治疗或预防哺乳动物受PI3激酶和/或mTOR调节的疾病或病症的药物。

19. 一种筛选结合至脂质激酶的化合物的方法，其包括

(b) 与要筛选来结合至所述脂质激酶的化合物混合；

(c) 根据标记的性质，测定所述式(I)化合物的替换；和

(d) 从测定的替换结果计算要筛选的化合物的结合。