CN102994494A - 硅胶膜处理方法 - Google Patents
硅胶膜处理方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102994494A CN102994494A CN2012104795615A CN201210479561A CN102994494A CN 102994494 A CN102994494 A CN 102994494A CN 2012104795615 A CN2012104795615 A CN 2012104795615A CN 201210479561 A CN201210479561 A CN 201210479561A CN 102994494 A CN102994494 A CN 102994494A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pellosil
- solution
- fully
- gel film
- silicon gel
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了硅胶膜处理方法，它包括以下步骤：S1、将硅胶膜与处理液接触，使处理液完全浸透硅胶膜；S2、将浸透完全的硅胶膜置于62～67℃烘箱中，完全烘干硅胶膜上的水分，即得处理后的硅胶膜；所述的处理液为Na2CO3溶液或NaHCO3溶液，且Na2CO3溶液或NaHCO3溶液的浓度为5mM～饱和浓度。本发明的有益效果是：经处理后的硅胶膜对DNA高特异性吸附，核酸提取产量和回收得率均有较大程度的提高，且使得硅胶膜具有良好的均一性和稳定性，提高了其生物利用度，更有效的发挥其核酸提取功能。
Description
技术领域
本发明涉及提取纯化DNA的方法技术领域，特别是硅胶膜处理方法。
背景技术
DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，将会影响后续整个实验的结果，甚至导致实验失败。
DNA提取的原则是：
1、根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；
2、尽量排除其它大分子成分的污染（蛋白质、多糖及RNA等）；
3、保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。
硅胶膜技术是目前流行的DNA纯化方法中的关键技术。如今分子、细胞生物学科研和商业应用对于DNA样品的快速纯化的需求越来越多，硅胶膜纯化DNA技术能够达到较高的纯度，与简化操作，因此具有很高的应用前景。
硅胶膜由硅胶颗粒和纸浆采用成膜技术压制而成，可用于DNA，RNA的吸附，是制作DNA纯化柱的推荐材料。硅胶膜柱纯化DNA的原理为DNA或RNA在高盐低PH的条件下，能吸附到膜表面，在低盐和高PH的条件下，DNA或RNA可以被洗脱下来。但是直接使用硅胶膜方法用于核酸分离存在硅胶膜不稳定、不均一及与核酸结合能力下降等缺点。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种提高硅胶膜DNA吸附性能、降低产物杂质、提高提取效率的硅胶膜处理方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：硅胶膜处理方法，它包括以下步骤：
S1、将硅胶膜与处理液接触，使处理液完全浸透硅胶膜；
S2、将浸透完全的硅胶膜置于62～67℃烘箱中，完全烘干硅胶膜上的水分，即得处理后的硅胶膜；
所述的处理液为Na2CO3溶液或NaHCO3溶液，且Na2CO3溶液或NaHCO3溶液的浓度为5mM～饱和浓度。
所述的步骤S1的具体操作为将硅胶膜完全浸泡在处理液中；所述的步骤S2的具体操作为待硅胶膜完全浸泡后取出硅胶膜，将硅胶膜置于62～67℃烘箱中，完全烘干硅胶膜上的水分。
所述的步骤S1的具体操作为将处理液滴加到装填于纯化柱中的硅胶膜上，直到纯化柱内的硅胶膜完全浸透；所述的S2的具体操作为将处理好的纯化柱放置于62～67℃烘箱中，完全烘干纯化柱内硅胶膜上的水分。
本发明具有以下优点：经处理后的硅胶膜对DNA高特异性吸附，核酸提取产量和回收得率均有较大程度的提高，且使得硅胶膜具有良好的均一性和稳定性，提高了其生物利用度，更有效的发挥其核酸提取功能。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：
实施例1：
硅胶膜处理方法，它包括以下步骤：
首先配置处理液，分别配置浓度分别为5mM、10mM和饱和浓度的Na2CO3溶液；
S1、将10cm×10cm的硅胶膜分别完全浸泡在上述三种浓度的Na2CO3溶液中；
S2、待完全浸泡后取出硅胶膜，置于65℃烘箱中完全烘干硅胶膜上的水分，即得三种经不同浓度Na2CO3溶液处理后的硅胶膜。
将上述三种处理后的硅胶膜分别以20层，7.2mm直径填装在2.0ml核酸纯化柱中，搭配Foregene试剂盒检测处理后对核酸提取得率的影响。
测试结果表明，在5mM和10mM的Na2CO3溶液中处理过的硅胶膜，对于核酸提取的得率或回收率有5～10%左右的提高，饱和浓度的Na2CO3溶液处理的硅胶膜对于核酸提取的得率或回收率有15～20%的提高。而核酸的OD230/280更接近2.0；OD260/280更接近1.80。
实施例2：
硅胶膜处理方法，它包括以下步骤：
首先配置处理液，分别配置浓度分别为5mM、10mM和饱和浓度的NaHCO3溶液；
S1、将10cm×10cm的硅胶膜分别完全浸泡在上述三种浓度的NaHCO3溶液中；
S2、待完全浸泡后取出硅胶膜，置于62℃烘箱中完全烘干硅胶膜上的水分，即得三种经不同浓度NaHCO3溶液处理后的硅胶膜。
将上述三种处理后的硅胶膜分别以20层，7.2mm直径填装在2.0ml核酸纯化柱中，搭配Foregene试剂盒检测处理后对核酸提取得率的影响。
测试结果表明，在5mM和10mM的NaHCO3溶液中处理过的硅胶膜，对于核酸提取的得率或回收率有10～15%左右的提高，饱和浓度的NaHCO3溶液处理的硅胶膜对于核酸提取的得率或回收率有20～30%的提高。而核酸的OD230/280更接近2.0；OD260/280更接近1.80。
结合实施例1和实施例2可知，Na2CO3溶液和NaHCO3溶液在5mM～饱和浓度的浓度范围内均能较大程度上提升硅胶膜对核酸的吸附能力；相同条件下，NaHCO3溶液的处理效果比Na2CO3溶液更为明显。
实施例3：
硅胶膜处理方法，它包括以下步骤：
首先配置处理液，分别配置浓度分别为5mM、10mM和饱和浓度的NaHCO3溶液，以及浓度分别为5mM、10mM和饱和浓度的NaHCO3溶液；然后准备6个装填有20层，7.2mm直径的硅胶膜的纯化柱。
S1、使用配制好的浓度为5mM、10mM和饱和浓度的Na2CO3溶液和NaHCO3溶液分别滴加到纯化柱的硅胶膜上，直到硅胶膜完全浸透为止；
S2、将处理好的纯化柱放置于67℃烘箱中，直到完全烘干硅胶膜上的水分，即得六种经不同浓度的Na2CO3溶液和NaHCO3溶液处理后的硅胶膜。
将分别装填有上述处理后的硅胶膜的纯化柱搭配Foregene试剂盒检测处理后对核酸提取得率的影响。
测试结果表明，经5mM和10mM浓度的NaHCO3溶液处理的硅胶膜，对于核酸提取的得率或回收率有10～15%左右的提高，经饱和浓度的NaHCO3溶液处理的硅胶膜对于核酸提取的得率或回收率有20～30%的提高；而核酸的OD230/280更接近2.0；OD260/280更接近1.80。经5mM和10mM浓度的Na2CO3溶液处理过的硅胶膜，对于核酸提取的得率或回收率有5～10%左右的提高，经饱和浓度的Na2CO3溶液处理的硅胶膜对于核酸提取的得率或回收率有15～20%的提高；而核酸的OD230/280更接近2.0；OD260/280更接近1.80。表明，核酸纯化柱预先填装好硅胶膜再用NaHCO3溶液或Na2CO3溶液进行处理，同样能达到提高核酸产量和提升纯化核酸质量的能力。
下面结合试验对本发明作进一步描述：
首先配制0.1M、0.2M、0.4M、0.8M、1M的NaHCO3溶液对制备好的核酸纯化柱进行处理，其处理方式按下：使用微量移液器取相应的NaHCO3溶液滴加到纯化柱硅胶膜中间位置，之后放置于65℃的烘箱进行干燥处理。
NaHCO3的用量及干燥时间见下表：
以上处理量均在0.1M～饱和液完全浸泡硅胶膜的范围内。
结果
1、搭配Foregene质粒提取试剂盒发现：0.2M 60μl 12h处理的硅胶膜纯化柱对于质粒DNA的吸附能力提升效果最为明显，为30～35%；OD230/280≈1.8～2.0，OD260/280≈1.7～1.9。
2、搭配Foregene植物基因组提取试剂盒发现：0.8M 60μl 12h处理的硅胶膜纯化柱对于植物基因组DNA的吸附能力提升效果最为明显，为20～30%；OD230/280≈1.8～2.0，OD260/280≈1.7～1.9。
3、搭配Foregene土壤基因组提取试剂盒发现：饱和60μl 12h处理的硅胶膜纯化柱对于土壤基因组DNA的吸附能力提升效果最为明显，为25～30%；OD230/280≈1.8～2.0，OD260/280≈1.7～1.9。
4、搭配Foregene PCR产物纯化试剂盒发现：0.8M 30μl 12h处理的硅胶膜纯化柱对于DNA片段的吸附能力提升效果最为明显，为30～35%；OD230/280≈1.8～2.0，OD260/280≈1.7～1.9。
5、搭配Foregene RNA提取试剂盒发现：0.8M 60μl 12h处理的硅胶膜纯化柱对于普通RNA的吸附能力提升效果最为明显，为20～30%；OD230/280≈1.8～2.0，OD260/280≈1.7～1.9。
6、搭配Foregene MicroRNA提取试剂盒发现：0.8M 60μl 12h处理的硅胶膜纯化柱对于MicroRNA的吸附能力提升效果最为明显，为20～30%；OD230/280≈1.8～2.0，OD260/280≈1.7～1.9。
Claims (3)
1.硅胶膜处理方法，其特征在于：它包括以下步骤：
S1、将硅胶膜与处理液接触，使处理液完全浸透硅胶膜；
S2、将浸透完全的硅胶膜置于62～67℃烘箱中，完全烘干硅胶膜上的水分，即得处理后的硅胶膜；
所述的处理液为Na2CO3溶液或NaHCO3溶液，且Na2CO3溶液或NaHCO3溶液的浓度为5mM～饱和浓度。
2.根据权利要求1所述的硅胶膜处理方法，其特征在于：所述的步骤S1的具体操作为将硅胶膜完全浸泡在处理液中；所述的步骤S2的具体操作为待硅胶膜完全浸泡后取出硅胶膜，将硅胶膜置于62～67℃烘箱中，完全烘干硅胶膜上的水分。
3.根据权利要求1所述的硅胶膜处理方法，其特征在于：所述的步骤S1的具体操作为将处理液滴加到装填于纯化柱中的硅胶膜上，直到纯化柱内的硅胶膜完全浸透；所述的S2的具体操作为将处理好的纯化柱放置于62～67℃烘箱中，完全烘干纯化柱内硅胶膜上的水分。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012104795615A CN102994494A (zh) | 2012-11-22 | 2012-11-22 | 硅胶膜处理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012104795615A CN102994494A (zh) | 2012-11-22 | 2012-11-22 | 硅胶膜处理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102994494A true CN102994494A (zh) | 2013-03-27 |
Family
ID=47923605
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012104795615A Pending CN102994494A (zh) | 2012-11-22 | 2012-11-22 | 硅胶膜处理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102994494A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107130470A (zh) * | 2016-02-29 | 2017-09-05 | 新材料与产业技术北京研究院 | 一种复合过滤膜及其制备方法和应用 |
| CN107653242A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-02-02 | 上海捷瑞生物工程有限公司 | 一种硅胶膜处理液及其制备方法 |
| CN112057898A (zh) * | 2020-09-18 | 2020-12-11 | 简石生物技术(北京)有限公司 | 一种多糖多酚植物核酸吸附柱 |
| WO2021258713A1 (zh) * | 2020-06-23 | 2021-12-30 | 广州洁特生物过滤股份有限公司 | 核酸纯化柱半自动装配装置与方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995006652A1 (en) * | 1993-08-30 | 1995-03-09 | Promega Corporation | Nucleic acid purification compositions and methods |
| CN101338312A (zh) * | 2008-07-03 | 2009-01-07 | 天根生化科技（北京）有限公司 | 硅胶膜活化液及其在核酸提取中的应用 |
| CN101684463A (zh) * | 2008-09-28 | 2010-03-31 | 杭州优思达生物技术有限公司 | 微量临床样本中核酸的快速提取方法及其试剂盒 |
-
2012
- 2012-11-22 CN CN2012104795615A patent/CN102994494A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995006652A1 (en) * | 1993-08-30 | 1995-03-09 | Promega Corporation | Nucleic acid purification compositions and methods |
| CN101338312A (zh) * | 2008-07-03 | 2009-01-07 | 天根生化科技（北京）有限公司 | 硅胶膜活化液及其在核酸提取中的应用 |
| CN101684463A (zh) * | 2008-09-28 | 2010-03-31 | 杭州优思达生物技术有限公司 | 微量临床样本中核酸的快速提取方法及其试剂盒 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 孙朕 等: "家禽血液基因组DNA的快速提取", 《安徽农业科学》, vol. 38, no. 16, 1 June 2010 (2010-06-01) * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107130470A (zh) * | 2016-02-29 | 2017-09-05 | 新材料与产业技术北京研究院 | 一种复合过滤膜及其制备方法和应用 |
| CN107653242A (zh) * | 2017-10-30 | 2018-02-02 | 上海捷瑞生物工程有限公司 | 一种硅胶膜处理液及其制备方法 |
| WO2021258713A1 (zh) * | 2020-06-23 | 2021-12-30 | 广州洁特生物过滤股份有限公司 | 核酸纯化柱半自动装配装置与方法 |
| CN112057898A (zh) * | 2020-09-18 | 2020-12-11 | 简石生物技术(北京)有限公司 | 一种多糖多酚植物核酸吸附柱 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6847365B2 (ja) | 核酸の抽出及び貯蔵のための方法及び組成物 | |
| US9040675B2 (en) | Formulations for nucleic acid stabilization on solid substrates | |
| CN101153263B (zh) | 一种血液dna保存卡及其制作方法 | |
| CN102994494A (zh) | 硅胶膜处理方法 | |
| JP2007500008A5 (zh) | ||
| US9333463B2 (en) | Devices and systems for elution of biomolecules | |
| WO2006113198A3 (en) | Methods of enhancing isolation of rna from biological samples | |
| CN102618532A (zh) | 基于磁珠法从植物叶片中提取基因组dna的试剂盒及其提取方法 | |
| MXPA04004243A (es) | Prueba intraoperativa del ganglio linfatico. | |
| CN104178480B (zh) | 利用dna吸附柱快速提取植物dna的试剂盒及方法 | |
| Köse et al. | PolyAdenine cryogels for fast and effective RNA purification | |
| Roslan et al. | High quality DNA from peat soil for metagenomic studies a minireview on dna extraction methods | |
| WO2011103163A3 (en) | Nucleic acid extraction from complex matrices | |
| JP2016505262A (ja) | 固体基材上での核酸安定化のための配合物 | |
| CN104465008A (zh) | 一种用于dna纯化的磁流体的制备方法 | |
| CN104045725A (zh) | 采用d301g阴离子树脂精制桦褐孔菌粗多糖的方法 | |
| CN110904095B (zh) | 一种提高小片段核酸纯化得率的方法 | |
| KR101380909B1 (ko) | 핵산 정제용 흡착제 및 그 흡착제를 이용한 정제방법 | |
| CN105063014A (zh) | 一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法 | |
| CN110669759A (zh) | 一种适用于纳米孔测序的真菌高纯度长片段基因组dna提取方法 | |
| CN112646806A (zh) | 一种土壤dna快速提取方法及试剂盒 | |
| CN100395257C (zh) | 钾离子酸性水溶液和利用这种溶液的dna提取方法和试剂盒 | |
| CN104841359A (zh) | 一种硅胶膜的处理方法 | |
| CN204765660U (zh) | Fta采血卡 | |
| CN102936592A (zh) | 一种快速高效玉米线粒体dna的提取及纯化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20130327 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |