CN102988611A - 一种降压片的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种降压片的制备方法，由黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g作为原料药制成，采用超临界萃取和微波萃取制备而成，使得黄芩素含量有很大提高，本发明还提供了降压片在制备抑制人巨细胞性肺癌细胞801-D细胞增殖药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种降压片的制备方法及应用。
背景技术
降压片记载于卫生部标准WS3-B-0760-91，由黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g作为原料药制成，能降压。用于高血压。
现有技术中，尚未有降压片在提取制备方面采用超临界和微波技术的报道，而采用打粉和水煎煮的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本品在临床上应用。
发明内容
发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种降压片的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种降压片在制备抑制人肺腺癌801-D细胞增殖药物中的应用。
技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
一种降压片的制备方法，由黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g作为原料药制成，所述的方法由下列步骤组成：取黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次48分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。
上述一种降压片的制备方法，所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
上述一种降压片的制备方法，所述微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。
上述一种降压片的制备方法，所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
上述降压片在制备抑制人肺腺癌801-D细胞增殖药物中的应用。
现有技术中，降压片每片0.5g，每次2-4片，一日2次，采用本发明制备成的降压片每片0.5g，每次仅需1片，一日服用2次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。
试验一、不同方法制备的降压片中黄芩素含量的比较
1、仪器及试药本发明降压片：按实施例3方法制备，使用1150g原料药，经提取制成1000片，每片重0.5g。原降压片，按部颁标准方法制备，使用1150g原料药，经提取制成1000片，每片重0.5g。Agilent 1200高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平；黄芩素对照品(中国药品生物制品检定所)。
2、方法
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸（40：60：0.2）为流动相；检测波长为280nm。理论板数按黄芩素峰计算，应不低于3000。
对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩素对照品适量，加甲醇制成每1ml含18μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本发明降压片和原降压片，研细，混匀，取1g，精密称定，精密加入70%乙醇20ml，密塞，超声处理10分钟，离心，取上清液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3、结果
结果表明，本发明降压片中黄芩素的含量为1.36mg/片；而原降压片中黄芩素的含量为0.15mg/片，在服用量减少的情况下，黄芩素含量有很大提高。
上述研究表明，采用本发明制备的降压片，有效成分含量高于部颁标准法制备的降压片。
具体实施方式
以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1
取黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g，将黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力15MPa，温度30℃，CO2流量1m1/g生药 ·min，萃取时间150min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。
经检测，成品中黄芩素的含量为1.35mg/片。
实施例2
取黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g，将黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力30MPa，温度50℃，CO2流量3m1/g生药·min，萃取时间180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率600W，萃取2次，每次8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。
经检测，成品中黄芩素的含量为1.41mg/片。
实施例3
取黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g，将黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2m1/g生药·min，萃取时间160min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次6分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。
经检测，成品中黄芩素的含量为1.36mg/片。
实施例4：降压片抑制801-D细胞增殖的实验研究资料
1实验材料
1.1实验用细胞株
人肺腺癌801-D细胞，南京正宽医药科技有限公司实验室细胞库，DMEM+10%FBS常规培养。
1.2实验药物
研究药物：本发明降压片：按实施例3方法制备。
药液储液：称取100mg降压片，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μl doff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
1.3实验试剂
DMEM（GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137）；胎牛血清（浙江天杭生物科技有限公司Lot.No.100419）；NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司Cat.No.11810-033 Lot.No.1088387）；Trypsin（AMRESCO公司批号：2010/04）；EDTA（AMRESCO公司批号：2009/10）；Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO公司批号：2010242）；Streptomycin Sulfate（AMRESCO公司批号：2010382）；无水乙醇（南京化学试剂有限公司批号：080310182）；MTT(Biosharp批号：0793);PBS（实验室自配）；
1.4实验器材
莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L）；可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：SPECTRAMAX 190）；CO2培养箱（FORMA型号：3111）；超净台（苏净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579）；精密移液器（法国吉尔森公司型号：P2）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S）；全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020）；台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型号：DHG9123A）；冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI）；液氮罐（CBS型号：2001）；低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000）；0.2μm滤器（MILLIPORE型号：SLGP033RB）；10cm培养皿(NEST公司)、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。
2实验方法
1）801-D细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml 0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个/ml。
2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。
3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入降压片溶液，继续培养24h。
4）24h后加入20μl MTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。
6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。
7）结果以药物对细胞的抑制率表示：
细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值×100%。实验重复3次。
3统计处理
采用Microsoft Excel 2003软件中的相关分析和Student t检验，数据以mean±S.D.表示。
4实验结果
MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对801-D细胞增殖抑制有差异（P<0.05），剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P<0.01），当剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0.001）。
表1降压片对801-D细胞增殖抑制影响研究 
注：与对照组比较，*P<0.01；**P<0.001
5实验结论
降压片可以抑制801-D细胞增殖，减少801-D细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
Claims (5)
1.一种降压片的制备方法，由黄芩200g、决明子150g、山楂150g、槲寄生300g、臭梧桐叶150g、桑白皮100g、地龙100g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取黄芩、地龙，加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50℃，CO2流量1-3m1/g生药·min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，备用；取其余中药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，备用；将上述超临界萃取物和微波提取物混合，加入淀粉，70%乙醇制颗粒，干燥，压片，制成1000片，每片重0.5g。
2.根据权利要求1所述一种降压片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
3.根据权利要求1所述一种降压片的制备方法，其特征在于所述微波萃取功率500W，每次萃取6分钟。
4.根据权利要求1所述一种降压片的制备方法，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40℃，CO2流量2ml/g生药·min，萃取时间160min。
5.根据权利要求1所述一种降压片在制备抑制人巨细胞性肺癌细胞801-D细胞增殖药物中的应用。
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