CN102971627A - 连续取样装置和相关方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及测定溶液组分数目的方法，其包括引入第一数目的溶液组分到第一测试位置，为引入的第一数目的溶液组分建立第一结合环境，通过结合第一多元溶液组分建立第一残余数目的溶液组分，为第一残余数目的溶液组分建立第二结合环境，通过从第一残余数目的溶液组分结合第二多元溶液组分来建立第二残余数目的溶液组分，获得与结合的第一多元溶液组分相关的第一信号，获得与结合的第二多元溶液组分相关的第二信号，并基于所获得的第一信号和所获得的第二信号，确定感兴趣的第一溶液组分的第二数目。

Description

连续取样装置和相关方法

技术领域

本发明涉及诊断测试以及更具体地涉及基于亲和性的诊断测试。

背景技术

在生物化学和医药领域的大量科学研究(特别是近几十年来)显示出这样的事实：大范围的疾病和身体状况是由人体内的分子变化来表现的。在很多情况下，分子变化的早期检测能够促使较早的病情诊断，这大大地增加了有效治疗状况的可能性。

很多分子变化是通过测定法来识别，所述测定法检测和量化分析物分子，例如DNA、RNA或蛋白。这些测定法是基于分析物分子对捕获分子的特定结合，一般已结合的分析物分子与测试溶液中的分析物分子的总数目成正比。这个类型的检测方法被描述为“亲和测定”并经常始于将含有待检测或定量的分析物的测试溶液与捕获分子(也称为探针点)组接触。当测试溶液与捕获分子接触时，一定百分比的分析物将与捕获分子结合。经过充足的时间之后，移除测试溶液并检测与捕获分子结合的分析物分子的存在(或量)。

通常亲和测定受这一事实的限制：每组捕获分子通常只产生单一的数据点。单一数据点通常不足以计算精准的结果，特别是当系统中有未知。这些未知可以是存在交叉反应分子、与感兴趣分析物不同的但可结合至捕获分子的分子，因而会导致定量结果无用和引起假阳性。

另一未知的可能是环境温度或捕获分子的密度。举例来说，分子通常由捕获分子固定在表面上。用捕获分子制备测试位点的一个方法是接触印刷(contact printing)。用接触印刷，沉积在表面上的捕获分子密度从一批次到下一批次常以2的因数(a factor of 2)而变化。由Peterson等报导，“Theeffect of surface probe density on DNA hybridization”,Nucleic Acids Research,Vol 29,No 24,pp.5163-5168,Oxford University Press,捕获分子密度强烈地影响结合分析物的量。因此，使用通过接触印刷的捕获分子的测定，依赖于繁重的外部校准方法(例如标准曲线)以提供有效的和有意义的结果。

存在对进行亲和测定法的装置和方法的需求。进一步的需求存在于低成本测定法，包括多段测定法、蛋白阵列、测流装置、夹层(sandwich)测定法、竞争测验、或基于株的阵列，所述基于株的阵列提供准确结果和使用该阵列的方法。能够使得测定测试溶液内的分析物数目的亲和测验的方法和系统将是有利的。

发明内容

根据一个实施方案，某一溶液组分的数目的测定方法包括如下：引入第一数目的溶液组分到第一测试位置，为引入的第一数目的溶液组分建立第一结合环境，通过结合第一多元溶液组分建立第一残余数目的溶液组分，为第一残余数目的溶液组分建立第二结合环境，通过从第一残余数目的溶液组分中结合第二多元溶液组分来建立第二残余数目的溶液组分，获得与已结合的第一多元溶液组分相关的第一信号,获得与已结合的第二多元溶液组分相关的第二信号，并且基于所获得的第一信号和第二信号来确定感兴趣组分的第二数目。

在另一个实施方案中，参与分析物捕获系统的分子的数目的测定方法包括：引入第一数目的溶液组分到第一测试位置，通过将第一多元溶液组分结合至在第一测试位置的第一百分比的多元捕获探针来建立第一残余数目的溶液组分，通过从第一残余数目的溶液组分结合第二多元溶液组分到第二测试位置的第二百分比的多元捕获探针来建立第二残余数目的溶液组分，获得与结合的第一多元溶液组分相关的第一信号,获得与结合的第二多元溶液组分相关的第二信号，并且基于所获得的第一信号和第二信号确定感兴趣组分的第二数目。

在又一实施方案中，连续取样系统包括如下：多元第一捕获探针，多元第二捕获探针，将第一数目的感兴趣分析物在溶液中从靠近所述多元第一捕获探针的位置移动到靠近所述多元第二捕获探针的位置的运送系统，储存命令指令的存储器，和设置成执行命令指令以获得与第一多元已结合的第一多元溶液组分相关的第一信号，获得与第二多元已结合的第二捕获探针相关的第二信号，和基于所获得的第一信号和所获得的第二信号确定感兴趣组分的第一数目的处理器。

附图说明

图1描述了连续取样系统，设置该取样系统使得单一样品暴露于连续取样，从而可以测定在包含增大检测信号的其他分子的样品里感兴趣分子的数目；

图2描述了以微阵列形式提供一定量不同测试位点的平台；

图3描述了可用于平台上在多种测试位点连续对测试溶液取样的程序，以将样品暴露于多重捕获探针点；

图4描述了在阵列上的测试位点的示意图，所述阵列被控制以将测试溶液里的感兴趣分析物运送到邻近第一组捕获探针的位置；

图5描述了在图4的阵列上的第二测试位点的示意图，所述阵列被控制以将测试溶液里的在第一测试位点未结合的感兴趣分析物运送到邻近第二组捕获探针的位置；

图6描述了连续取样系统的示意图，所述系统中加入了侧流技术以在测试溶液流过不同的捕获探针位点时，从测试溶液中捕获感兴趣分析物；

图7-11描述了连续取样系统，其中测试溶液中已捕获的感兴趣分析物用于提供残余数目的分析物，所述分析物被取样以提供用于测定测试溶液中分析物的初始数目的数据。

具体实施方案

为了促进理解本发明原理的目的，参考附图阐明的和下列说明中描述的实施方案。应理解为其无意限制本发明的范围。另外，应理解为本发明包括对阐明的实施例的任意改动或修改，也包括本领域技术人员显而易见的本发明原理在本发明有关的进一步的应用。

质量作用定律预示对于给定的亲和常数和探针密度，与探针结合的分析物的百分比是恒定的，而不是分析物浓度的函数，大范围的亲和测验作用符合该定律。所述的质量作用定律表达为：

$\frac{b_{\mathrm{analyte}}}{n_{\mathrm{analyte}}}=\frac{n_{\mathrm{probes}}{k}_a}{n_{\mathrm{probes}}{k}_a+N_{A}V}=a_{\mathrm{analyte}}$

其中

b_analyte是结合的分析物分子的数目，

n_analyte是测试溶液中总的分析物分子的数目，

n_probes是总的探针分子的数目，

k_a是分析物分子和探针分子之间的结合常数

N_A是阿伏伽德罗常数，

V是测试溶液的体积，和

a_analyte是已结合的分析物的百分比。

参照图1描述了大致标记为100的连续取样系统的代表。所述取样系统100包含I/O装置102，处理电路104和存储器106。所述I/O装置102可包含用户界面、图形用户界面、键盘、指点装置(pointing device)、遥控和/或本地通讯连接、显示器、和其它能够将外部产生的信息提供给取样系统100和允许将取样系统100的内部信息对外沟通的装置。

所述处理电路104可适当地是通用目的的计算机处理电路，例如微处理机及其附加的电路。所述的处理电路104是可操作的以进行属于该电路的操作。

在存储器106里是多种程序指令108。一些所述的程序指令108在下面更全面地描述，其可由处理电路104和/或合适的任意其他的部件执行。关联数据库110(association databases 110)也位于存储器106内。

所述取样系统100进一步包含运送控制系统112和环境检测器套装114。设置所述运送控制系统112以移动测试溶液，在该实施例中至图2描述的微阵列120。可以使用多种方法以形成微阵列平台120。举例来说，美国专利5807522公开了形成微阵列的一种方法。所述微阵列平台120包含一些不同的子阵列122。所述子阵列122包含一些由分析物探针组成的测试位点124。在本发明的范畴里，子阵列122的数目可不同，在各子阵列122中的测试位点124的数目可不同。在该实施方案中，通过检测器或套装114，在测试位点124的测试溶液的精确温度可检测。

系统100进一步包含传感器116。所述传感器116可与其他系统100的部件被包含于单个装置中。或者，可将一个或多个系统100的部件提供作为单独的装置，所述单独的装置可以相对其他系统100的部件远程设置。用捕获剂或能有效捕获感兴趣分析物的分析物探针制备测试位点124。参照图3的步骤130提供取样系统100的更多细节。处理器104执行程序指令108以执行至少一部分图3的步骤130。在不同的实施方案中，根据特定的标准，可将步骤130改造以包含更多或更少步骤。

在程序块132，感兴趣分析物被识别，获得感兴趣分析物和在微阵列120上的探针分子的k_a(程序块134)，并将k_a储存于关联数据库110中(程序块136)。然后识别可能在已测试的样品中存在的干扰或噪音的潜在来源(程序块138)。信号干扰的识别可包括，例如，样品中对于已识别的探针分子有亲和性的可能的分子或潜在的分子的识别。然后识别噪音各来源与探针分子的所述k_a(程序块140)，并且储存在亲和数据库110之一中(程序块142)。

在程序块144，由沉积所需量的所选探针分子在各测试位点124来制备微阵列平台120。在另外的实施方案中，可用第一探针分子制备测试位点124的子组，而另一测试位点124的子组可用第二探针分子制备，从而允许在单一微阵列平台120伤实施两个独立的测试。在单一微阵列120中可使用另外的设置。举例来说，在子阵列122之一中的各测试位点可用相同的探针分子制备，而子阵列122中的另一包含不同的探针分子。在该实施方案中，选择用特定探针分子制备的测试位点124的数目，以使得该数目与上述识别的潜在干扰分子类型加上感兴趣分析物的数目至少相同。

一旦制备了微阵列平台120，引入测试样品到所选测试位点124组(程序块146)。所述测试样品包含一些感兴趣分析物和一些干扰性分析物。如果不是已建立，控制各所选测试位点124组内的环境以使得样品内的感兴趣分析物在所希望的测试位点124或测试位点124组局部化(程序块148)。在该实施例中，使感兴趣分析物带电，并使用运送控制系统112在样品内建立电学力。运送控制系统因而在测试样品中运送感兴趣分子到所需的测试位点124，如图4中所描述的。

图4描述了由测试样品150覆盖的测试位点124₁和测试位点124₂。感兴趣分析物152带负电，干扰性分析物154也是。运送控制系统112使测试位点124₁带正电，这使得带负电的感兴趣分析物152和干扰性分析物154从测试位点124₂移离，并且浓缩在测试位点124₁上。

然后将测试样品150培育预定的时间(程序块156)。在培育期间，各所选测试位点124中的实际测试环境由环境检测或套装114控制，并且将指示已建立的测试环境的数据提供至处理电路104(程序块158)。在一些实施方案中，所述环境可能是不被控制的。该环境数据可包含温度和测试位点124₁和124₂之间的电势不同。在培育期间，一些感兴趣分析物152和一些干扰性分析物154被测试位点124₁上的测试探针160结合。

当样品150被充分培育时，运送控制系统112使测试位点124₂正电荷，这使得带负电的和未被结合的感兴趣分析物152和干扰性分析物移离测试位点124₁并在测试位点124₂上浓缩(程序块160)，如图5中所描述。然后将测试样品150培育一段预定的时间(程序块162)。在培育期间，各所选测试位点124组中的实际测试环境由环境检测器套装114控制，并且将指示已建立的测试环境的数据提供至处理电路104(程序块164)。该环境数据可包含温度和测试位点124₁和124₂之间的电势不同。在培育期间，一些感兴趣分析物152和一些干扰性分析物154被测试位点124₂上的测试探针160结合。

当将样品150充分培育时，清洗测试位点124(程序块166)，并且使用传感器116检测已结合的感兴趣分析物152和已结合的干扰性分析物154(程序块168)。可以使用多种感应方法(sensing method)来量化在亲和测验中结合的分析物。这些感应方法包括发光法、荧光法、比色法、电化学法、电阻法和磁性法示值读数。所述感应方法优选提供已结合的探针数目的高精确度的指示。基于与测试位点124₁和124₂上结合的探针数目相关的信号，由处理电路104计算样品内的一种或多种感兴趣分析物的数目(程序块170).

一种或多种感兴趣分析物的数目的计算是可能的，因为由传感器116获得的特定一个所选测试位点124组的信号是信号贡献者(contributor)的总和，包括感兴趣分子和各噪音来源，例如干扰性分子。归因于各贡献者的信号相关部分依赖于特定贡献者的量、其他贡献者的量、和对最初沉积的各贡献者的捕获探针的相对亲和性。下式反映出该关系：

S₁＝a_1-1n_1-1+a_1-2n_1-2+....a_1-xn_1-x

其中

S₁是测试位点124₁与已结合的探针160相关的信号，

a_1-1是124₁上的探针160已结合的分析物数目结合的分析物的百分比(1至x)，和

n_1-1是样品中在测试位点124₁上已识别的分析物的数目(1至x)。

类似地，下式反映测试位点124₂上的信号的关系：

S₂＝a_2-1n_2-1+a_2-2n_2-2+....a_2-xn_2-x

其中

S₂是测试位点124₂中与已结合的探针160相关的信号，

a_2-1是与测试位点124₂中的探针160结合的分析物的百分比(1至x)，和

n_2-1是样品中在测试位点124₂上已识别的分析物的数目(1至x)。

由于在测试位点124₂上的分析物的数目与测试样品中的分析物的原始数目减去在测试位点124₁上结合的分析物数目相等，测试位点124₂上的信号的等式可重写为：

S₂＝a_2-1(1-a_1-1)n_1-1+a_2-2(1-a_1-2)n_1-2+....a_2-x(1-a_1-x)n_1-x对于两种分析物的情况，前述等式可解为：

$n_{1-1}=\frac{(S_1-a_{1-2}{S}_1-S_2)}{a_{1-1}(a_{1-1}-a_{1-2})}$

相应地，由于控制了探针分子数目，对于各分析物结合的分析物的百分比可以确定为亲和常数和探针密度的函数。因而，在初始测试溶液150中的各分析物的数目可确定。

举例来说，在一个情境中，测试样品150包含10⁶数目的感兴趣分析物分子和10⁶的与感兴趣分析物非常相似因而具有交叉反应性的另一分析物分子。亲和常数(k_a)和探针密度预示了40%的感兴趣分析物分子和60%的其他分析物将与捕获分子结合。相应地，400000分子感兴趣分析物和600000分子其他分析物将在测试位点124₁被捕获，和带来对应应于1000000已结合探针(S₁).的信号。

当移动残余数目的感兴趣分析物和其他分析物到测试位点124₁，将有400000感兴趣分析物分子和600000感兴趣分析物分子留在测试溶液150中。相应地，培育后，240000感兴趣分析物分子和240000其他分析物分子将在测试位点124₂上结合。然后所述信号S₂将对应于480000已结合探针。在上述等式中替换所计算的结合百分比和所得的信号可得：

$n_{1-1}=\frac{(\mathrm{1,000,000}-0.60\left(\mathrm{1,000,000}\right)-\mathrm{480,000})}{0.40(0.40-0.60)}={10}^6$

多位点连续取样系统因而可在印制电路板、玻璃、塑料基材、或CMOS芯片上或甚至在孔板例如96孔板中，施行，所述CMOS芯片有金、玻璃、环氧物、聚合物、或胶涂覆。若需要，可在印制电路板或CMOS芯片中提供控制、示值读数、和对控制的传感。这辅助保持测试位点间非控制环境因素的一致性。所需要，所述信号评价和测验数据可在CMOS芯片上硬编码。

上述的实施方案中的运送控制系统112加入电场以在测试样品中移动分析物。当在溶液中时，运送带有净电荷的分析物，例如蛋白或DNA链，电场是很有用的(见例如，Dalibor Hodko et al.,“CMOS ElectronicMicroarrays in Diagnostics and Nanotechnology”,CMOS Biotechnology2007)。

通过使用移液管或液体操作设备，带电的和电中和的分析物可被大量移动。对于带电的和电中和的分析物，其他运送控制系统可用于连续地取样测试溶液。在运送控制系统中具体有用的技术包括微观流体，其中总测试溶液在芯片水平上被从一个探针点移动到另一探针点。微观流体路径包含连续流微观流体，所述连续流微观流体使得由外部或内部微泵或微阀控制液体能流动通过制造的微通道，如AJ

所报道的：“Trends inminiaturized total analysis systems for point-of-care testing in clinicalchemistry”,Lab on a Chip,2001。连续流系统200如图6中所述。

参见图6，测试样品202由连续流运送系统引流过捕获探针204。设置传感器206_1-3沿着流动路径，并将其设置以检测已捕获分析物208的探针204的数目。由于分析物的捕获是测试溶液中的分析物数目的函数，当测试溶液中的分析物数目减小时，捕获速率减小。相应地，由传感器206₁获得的信号比由传感器206₂产生的信号大。因而在图6的实施方案中分析物分子的数目计算以上述的实施例中计算分析物分子数目类似的方式计算。

其他可用于运送系统的技术包括分离的微观流体，例如，如VijaySrinivasan在“An integrated digital microfluidic lab-on-a-chip for clinicaldiagnostics on human physiological fluids”,Lab Chip,2004,4,310-315中所报导的电介质上的电润湿(EWOD)，或如Achim Wixforth在“Flat Fluidics:Acoustically driven planar microfluidic devices for biological and chemicalapplication”中所报导的表面声波，变换器05。在液体测试溶液转移通过孔状膜处也可加入侧流系统，所述侧流系统含有几个报告区或捕获分子区。除了电场，溶液中可使用磁场运送分析物。可用磁性粒子或带电标签来标记分析物分子以协助运送分析物。

当图4的实施方案产生残余数目的溶液组分(其中的分析物是那些没有被结合的分析物)时，残余数目的溶液组分也可使用已结合的分析物产生，例如由图7-11的取样体系220完成。

图7描述了包含一定量分析物224的测试溶液222。通过将带有一定量探针228的测试条226A放置在溶液222中，如箭头230所示，产生溶液组分的残余数目。然后将测试条226取出，一些分析物224结合在探针228上(图8)。第一信号可由指示结合到探针228的分析物数目的测试条226获得。获得信号之前，可清洗测试条226以除去贴在测试条226上的而不是结合到探针228上的分析物。

然后将测试条226浸入图9所示的溶液232中。可选择所述溶液232以使得分析物224从探针228脱离，或者可控制溶液232中的环境以破坏分析物224与探针228之间的结合。溶液232中的所述分析物224因而形成残余数目的溶液组分。

然后将带有一定量探针242的第二测试条240暴露于溶液232，如图10中的箭头244所示。然后将测试条240取出，带有一些分析物224结合在探针242上(图11)。第二信号可由指示结合到探针242的分析物数目的测试条240获得。获得信号之前，可清洗测试条240以除去贴在测试条240上的而不是结合到探针242上的分析物。测定溶液222中分析物的数目，可以使用探针和分析物的亲和常数和探针密度以及所获得的信号计算。

在取样系统220的实施方案中，控制环境以破坏分析物224和探针228之间的结合，在结合被破坏后可以移去测试条226。然后可以控制溶液232中的环境以允许结合，测试条226可以再引入。在溶液230中分析物224到探针238的结合将是溶液230中分析物224的数目的函数。因而，从溶液230中结合的分析物224的数目将比从溶液232中结合的分析物224的数目少。

可改变图3的程序以适应多种情境。举例来说，该系统可运送液体而不是探针。在该情境中，运送测试溶液以与探针点接触并培育。然后将初始溶液去除并获得对已结合的分析物的测量。然后将没有分析物或干扰组分的液体与探针点接触并培育，以使得一些已结合的分析物进入溶液中。然后将该液体去除，并测量探针点的减少数目的已结合的分析物。

在另一情境中，可以测定有一定量干扰性分析物且干扰性分析物比感兴趣分析物的数目大得多的溶液，甚至在干扰性分析物的结合效率未知的情况下。具体地，只要结合效率小，可假设干扰性分析物分子的数目是恒定的，甚至在一些干扰性分析物已结合到捕获探针上的情况下。因而，在连续性样品中的第一和第二信号之间的信号的减弱仅归因于感兴趣分析物的数目改变。相应地，根据下式测定测试溶液中分析物数目：

可进一步改变图3的程序以校准不同批次的测试平台。通过使用只含有单一结合性分析物的测试溶液，可以例如图3的程序的方式获得所述分析物的残余数目。然后可根据下式，与从初始溶液中和从残余溶液中结合的分析物相关的信号可用于确定初始溶液中分析物的数目：

$n_{\mathrm{analyte}}=\frac{S_1^2}{S_1-S_2}$

该式中，不需要结合效率。因此，该式可用于结合效率未知的情境。

因此，使用例如在上面第9页第二段中中所提到的等式，根据下式确定从测试溶液(S₁)和残余溶液(S₂)获得的信号：

S₁＝a₁n₁

$S_1=a_1^2{n}_1$

其中n₁=n_analyte.

因而，对于结合到捕获分子的分析物分子的百分比未知的情境，溶液中分析物的数目可以根据下式确定：

$n_1=\frac{S_1^2}{S_2}$

上面第9页第二段中提到的等式在干扰性分析物存在于溶液中的情境中也是有用的。在该情境中，根据下式确定从测试溶液(S₁)和残余溶液(S₂)获得的信号：S₁＝a₁n₁+a₂n₂

$S_2=a_1^2{n}_1+a_2^2{n}_2$

因而，对于结合到捕获分子的分析物分子的百分比未知的情境，溶液中分析物的数目，包括干扰性种类，可以根据下式确定：

$n_1=\frac{S_2-a_2{S}_1}{a_1^2-a_1{a}_2}$

一旦确定原始溶液中分析物的数目，捕获探针分子的数目可用上述的质量作用定律确定。可改变该方法以补偿其他影响分析物与捕获探针具体结合的结合效率的未知因素，例如温度。

在附图和上述描述中已阐明和详细描述本发明，其在性质上应被理解为解说性的而不是限制性的。应理解只是优选的实施方案已被展示，所有在本发明的精神内的改变、更改和进一步的应用都被要求保护。

Claims (18)

1.确定溶液组分数目的方法，其包括：

引入第一数目的溶液组分到第一测试位置；

通过在第一测试位置结合第一多元溶液组分，来建立第一残余数目的溶液组分；

通过从第一残余数目的溶液组分结合第二多元溶液组分，来建立第二残余数目的溶液组分；

获得与结合的第一多元溶液组分相关的第一信号；

获得与结合的第二多元溶液组分相关的第二信号；和

基于所获得的第一信号和所获得的第二信号，来确定感兴趣的第一溶液组分的第二数目。

2.如权利要求1所述的方法，其还包括：

将第一残余数目的溶液组分从第一测试位点运送到第二测试位点。

3.如权利要求2所述的方法，其中运送第一残余数目的溶液组分包括：

从第一测试位点向第二测试位点运送结合到各自的多元捕获探针上的多元分析物。

4.如权利要求3所述的方法，其还包括：

从各自的多元捕获探针释放已运送的多元已结合分析物。

5.如权利要求4所述的方法，其中释放已运送的多元已结合分析物包括：

通过改变已运送的多元已结合分析物的温度来释放已运送的多元已结合分析物。

6.如权利要求4所述的方法，其中释放已运送的多元已结合分析物包括：

通过将已运送的多元已结合分析物暴露于去杂交（dehybridation）溶液来释放已运送的多元已结合分析物。

7.如权利要求2所述的方法，其中运送第一残余数目的溶液组分包括：

使用微观流体技术运送第一残余数目的溶液组分。

8.如权利要求2所述的方法，其中运送第一残余数目的溶液组分包括：

使用毛细管流运送第一残余数目的溶液组分。

9.如权利要求2所述的方法，其中运送第一残余数目的溶液组分包括：

使用磁性珠运送第一残余数目的溶液组分。

10.如权利要求2所述的方法，其中运送第一残余数目的溶液组分包括：

通过改变作用于第一残余数目的溶液组分的电荷来运送第一残余数目的溶液组分。

11.如权利要求1所述的方法，其还包括：

通过从第二残余数目的溶液组分中结合第三多元溶液组分来建立第三残余数目的溶液组分；

获得与结合的第三多元溶液组分相关的第三信号；和

基于所获得的第一信号、所获得的第二信号、和所获得的第三信号，确定感兴趣的第二溶液组分的第三数目。

12.确定参与分析物捕获系统的分子数目的方法，其包括：

引入第一数目的溶液组分到第一测试位置；

通过在第一测试位置结合第一多元溶液组分到第一百分比的多元捕获探针，来建立第一残余数目的溶液组分；

通过在第二测试位置从第一残余数目的溶液组分中将第二多元溶液组分结合到第二百分比的多元捕获探针，来建立第二残余数目的溶液组分；

获得与结合的第一多元溶液组分相关的第一信号；

获得与结合的第二多元溶液组分相关的第二信号；和

基于所获得的第一信号和所获得的第二信号，确定感兴趣分子的第二数目。

13.如权利要求12所述的方法，其中第一多元溶液组分由感兴趣的分子组成。

14.如权利要求12所述的方法，其中多元捕获探针由感兴趣的分子组成。

15.连续取样系统，其包括：

多元的第一捕获探针；

多元的第二捕获探针；

运送系统，其用于将溶液中第一数目的分析物从邻近多元的第一捕获探针的位置移动到邻近多元的第二捕获探针的位置；

存储器，其中储存命令指令；和

经设置以执行所述命令指令的处理器，从而

获得与第一多元已结合第一捕获探针相关的第一信号，

获得与第二多元已结合第二捕获探针相关的第二信号，和

基于所获得的第一信号和所获得的第二信号确定第一感兴趣组分的第一数目。

16.如权利要求15所述的系统，其还包括：

多元的第三捕获探针，其中进一步设置所述的处理器以执行命令指令，从而

获得与第三多元已结合第三捕获探针相关的第三信号，和

基于所获得的第一信号、所获得的第二信号、和所获得的第三信号确定第二感兴趣组分的第二数目。

17.如权利要求15所述的系统，其中第一感兴趣组分是捕获探针。

18.如权利要求15所述的系统，其中第一感兴趣组分是溶液中的分析物。

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