CN102971341A

CN102971341A - 针对异二聚体细胞因子IL-23的p19亚基的纳米抗体的氨基酸序列

Info

Publication number: CN102971341A
Application number: CN2011800323727A
Authority: CN
Inventors: 韦罗妮克·德布拉邦德里; 马克·约瑟夫·劳韦里斯; 埃丽卡·莫里齐奥; 海蒂·罗梅拉尔; 安·尤尼奥; 格特·费尓海登
Original assignee: Ablynx NV
Current assignee: Ablynx NV
Priority date: 2010-04-30
Filing date: 2011-04-28
Publication date: 2013-03-13
Also published as: CA2800292A1; WO2011135026A1; AU2011247612A1; US20130109842A1; JP2013525408A; EP2563814A1

Abstract

本发明涉及针对IL-23的p19亚基的氨基酸序列；以及包含所述氨基酸序列的蛋白、构建体和化合物；并且还涉及编码所述氨基酸序列的核酸。

Description

针对异二聚体细胞因子IL-23的p19亚基的纳米抗体的氨基酸序列

本发明的其他方面、实施方案、特征、优势、用途、应用和优点将通过本文的进一步描述而变得清楚。

本申请人的题目为“Amino acid sequences directed againstheterodimeric cytokines and/or their receptors and polypeptides comprisingthe same(针对异二聚体细胞因子和/或其受体的氨基酸序列以及包括所述氨基酸序列的多肽)”的国际申请WO 09/068627描述了针对异二聚体细胞因子IL-23的称为p19(还称为IL-30B，Genbank登记号NM 016584。还参考WO 09/068627中引用的关于异二聚体细胞因子的现有技术，例如，在第2页和第3页之间的连接段)的亚基的氨基酸序列。

除非在本文中另外清楚地指明，本文提及的所有术语具有WO09/068627(或WO 09/068627中引用的现有技术)中给出的意思。并且，当本文没有具体描述某种方法或技术时，可以如WO 09/068627(或WO09/068627中引用的现有技术)所述那样进行。例如，术语“纳米抗体”如在WO 09/068627中那样定义，并且因此，在一个具体的方面中，通常表示VHH、人源化的VHH或骆驼源化的VH(诸如骆驼源化的人VH)。

WO 09/068627记述了多种针对(如在WO 09/068627中定义的)p19的氨基酸序列(例如，参见WO 09/068627中表A-2中提及的“P19+”和“P19-”序列，以及WO 09/068627的图20-21和实施例)。WO 09/068627还记述了这些P19序列的人源化变体，以及针对IL-23(中存在的p19亚基)并且包含至少一个这样的p19序列的多价、多特异性和/或双互补位构建体。例如，参考WO 09/068627第173页(最后一段)到第175页(第一段)、以及WO 09/068627的图30，31，32和33和WO 09/068627的实施例提到的构建体。

来自WO 09/068627的针对P19亚基的氨基酸序列的一个特别优选的实例是称为119A3的序列(参见WO 09/068627中的SEQ ID NO：1898)：EVQLVESGGGLVQAGGSLRLSCAASGRIFSLPASGNIFNLLTIAWHRQAPGMQRELVATINSGSRTNYADSVKGRFTISRDNAQKTVYLQMNNLKPEDTAVYYCQTSGSGSPNFWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO：1)

WO 09/068627还记述了119A3的多种变体，并且特别是变体P23IL119A3(H37Y)(WO 09/068627中的SEQ ID NO：2559)，P23IL 119A3(M43K)(WO 09/068627中的SEQ ID NO：2560)，P23IL119A3(H37Y-M43K)(WO 09/068627中的SEQ ID NO：2560，还在所附的序列表中作为SEQ ID NO：2给出)和119A3的一系列的人源化变体(具有H37Y和M43K突变)，所述人源化变体称为P23IL 119A3-BASIC和P23IL119A3V1至P23IL119A3V17(WO 09/068627中的SEQ ID NOs：2561至2579。P23IL119A3V17的序列在后附的序列表中还作为SEQ IDNO：3给出)。

WO 09/068627还给出了包含119A3或其人源化变体的多价、多特异性和/或双互补位的构建体的一些非限制性的实例(例如，参见SEQ IDNO’s：2151至2159，2533，2537，2539，2541至2547和2615至2628)。

由埃博灵克斯股份有限公司(Ablynx N.V.)于2009年5月27日提交的题目为“Biparatopic protein constructs directed against IL-23(针对IL-23的双互补位蛋白构建体)”的美国临时申请61/181,384记述了针对IL-23的双互补位蛋白构建体，包括包含119A3及其人源化变体的构建体。该申请在实施例1中还记述了119A3与IL-23的p19亚基的结合相互作用。

通常，来自WO 09/068627和美国临时申请61/181,384的抗p19序列和构建体表现出极好的生物活性和其他需要的特性。然而，这不意味着具有(甚至进一步)改善的性质的抗p19序列不是对本领域的有价值的增加。

本发明提供这样改善的p19结合剂，并且特别是序列119A3(SEQ IDNO：1)，P23IL119A3(H37Y-M43K)(SEQ ID NO：2)和PMP119A3v17(SEQID NO：3)的(甚至进一步)改善的变体。

本发明提供的氨基酸序列是119A3的人源化变体，其在位置78(按照WO 09/068627编号)包含缬氨酸残基。在一个优选的方面中，本发明的氨基酸序列可以是P23IL119A3(H37Y-M43K)(SEQ ID NO：2)的人源化变体，其在位置78(按照WO 09/068627编号)包含缬氨酸残基。在这一方面，应该注意，尽管“野生型”PMP119A3在位置78自然包含V，并且尽管WO 09/068627也记述了PMP119A3的三种变体----分别称为P23IL119A3(H37Y)(参见SEQ ID NO：2559)P23IL119A3(M43K)(参见SEQ ID NO：2560)；和P23IL119A3(H37Y-M43K)(参见SEQ ID NO：2561)----其在位置78包含V，但是这些变体无一包含如本文所定义的任何人源化置换(如下文所述，突变H37Y是在“标志残基”处的突变，突变M43K是用另一个“骆驼科动物残基”替代一个“骆驼科动物残基”)。还应该注意，WO 09/068627中所述的119A3的所有人源化变体(在WO09/068627中称为“P23IL119A3Basic”到“P23IL119A3v17”)除两个突变H37Y和M43K以及至少一个人源化置换(诸如A14P，Q75K或N82bS)之外还包含在位置78的亮氨酸。

通常，氨基酸序列的“人源化变体”是包含如本文定义的一个或多个“人源化”置换的变体。优选地，与野生型序列119A3相比较，本发明的氨基酸序列包含至少一个这样的人源化置换，且优选至少两个这样的人源化置换，优选至少三个人源化置换。并且，同样与野生型序列119A3相比较，本发明的氨基酸序列优选包含最多七个人源化置换，优选总共三个、四个或五个人源化置换(尽管在一些情形中，取决于所选择的人源化置换，最大数目不是至关重要的)。所述人源化置换的一些优选的但非限制性的实例将通过本文进一步的描述变得清楚，并且例如，包括但不限于A14P，Q75K，N82bS和/或A49S。

此外，如本文进一步所述，本发明的氨基酸序列可以包含一个或多个其他/另外的置换。同样地，所述其他/另外的置换的一些优选的但非限制性的实例将通过本文的进一步描述变得清楚，并且例如，可以包括一个或多个下述置换(在本文中还称为“置换(a)-(c)”)(并且优选地基本上由其组成)：

(a)一个或多个保守氨基酸置换；和/或

(b)一个或多个这样的置换，其中在特定位置的“骆驼科动物”氨基酸残基被在所述位置出现的不同的“骆驼科动物”氨基酸残基替换(对于此，例如，参考图1-4)。所述置换的一些非限制性实例是V5L，M43K(在人VH’s以及VHH’s中，在该位置的残基置换是最普遍的)，S49A和/或A74S；和/或

(c)一个或多个改善蛋白的(其他)性质的置换，诸如提高蛋白的长期稳定性和/或保存性质的置换。例如但非限制性地，这些可以是防止或减少氧化事件(例如，甲硫氨酸残基的氧化事件)的置换；防止或减少焦谷氨酸形成的置换；和/或防止或减少天冬氨酸或天冬酰胺(例如，DG，DS，NG或NS基序)的异构化或脱酰胺作用的置换。对于这样的置换，例如，参考国际申请WO 09/095235，其通常涉及通过这样的置换稳定单免疫球蛋白可变结构域的方法，并且还给出了适当的置换的一些特定的实例(例如，参见第4页和第5页和第10-15页)。这样的置换的一个实例可以是用NN基序替代位置82a和82b的NS基序；

或前述置换(a)-(c)中任一项的两项或更多项的任意适当的组合。

从本文的公开内容应该清楚，分别与119A3、P23IL119A3(H37Y-M43K)和119A3v17的序列中的每一个相比较，本发明的氨基酸序列包含至少一个“氨基酸差异”(其中术语“氨基酸差异”在本文中以与WO 09/068627定义的相同的意思使用，即，与第二序列相比较，在第一序列的某一位置的单个氨基酸残基的插入、缺失或置换；应该理解，两个氨基酸序列可以包含一个、两个或更多个这样的氨基酸差异。在本发明的情形中，任意氨基酸差异优选是置换)。

特别地，与119A3和P23IL119A3(H37Y-M43K)的序列相比较，本发明的氨基酸序列包含至少一个人源化置换(如本文定义)，并且可以任选地包含一个或多个其他置换(诸如如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合)。

与119A3v17的人源化序列相比较，本发明的氨基酸序列包含至少置换L78V，并且可以任选地包含一个或多个其他人源化置换(如本文所述)和/或可以任选地包含一个或多个其他的置换(诸如如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合)；或所述人源化置换和所述其他置换的适当的组合。

在一个优选的方面中，与119A3的野生型序列相比较，本发明的氨基酸序列包含总共7-15个、优选9-13个、诸如10、11或12个氨基酸差异(如本文参考WO 09/068627中所用的定义而定义)。如所提及，这些差异优选至少包括置换H37Y和/或M43K中的至少一个并且优选包含二者，和至少一个、优选至少两个、如三个、四个或五个人源化置换，并且可以任选地包含一个或多个其他置换(诸如如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合)。同样地，基于本文的公开内容以及任选地在有限程度的试错(trial and error)后，技术人员能够选择一个或多个所述适当的人源化置换和/或其他置换(的适当组合)。

在另一个具体方面中，与119A3v17的序列相比较，本发明的氨基酸序列包含总共1-5个、如一个、两个或三个氨基酸差异，其中这些氨基酸差异中的至少一个是置换L78V，并且其他置换可以是，例如，并且优选地是一个或多个其他人源化置换(与119A3v17中已经存在的人源化置换相比较)和/或一个或多个其他置换(诸如如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合)。同样地，基于本文的公开内容以及任选地在有限程度的试错后，技术人员能够选择一个或多个所述适当的人源化置换和/或其他置换(的适当组合)。

此外，最优选地，与119A3和/或119Av17相比较，这些氨基酸差异最优选地位于构架区(根据Kabat定义，同样参考WO 09/068627)，尽管不完全排除非常有限数量的这些氨基酸差异(诸如例如仅一个或两个)可以存在于CDR’s中(只要这些不使所需要的亲和性、结合速率(on-rate)或解离速率(off-rate)减损(太多)(例如，位于CDR’s中的所述氨基酸差异可以作为亲和性成熟的结果引入))。在CDR’s之一中的适当的置换的一个优选的但非限制性的实例可以是置换N52E。

本发明的氨基酸序列的一个优选的但非限制性的实例是序列119A3v18，其对应于序列119A3v17，但是在位置78具有缬氨酸(119A3v17在位置78包含亮氨酸)。

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRIFSLPASGNIFNLLTIAWYRQAPGKGRELVATINSGSRTYYADSVKGRFTISRDNSKKTVYLQMNSLRPEDTAVYYCQTSGSGSPNFWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：4)

例如，与119A3v18的序列相比较(在位置78保留缬氨酸同时)，本发明的其他氨基酸序列可以例如包含总共1-5个、诸如一个、两个或三个氨基酸差异，其中所述氨基酸差异可以例如是，且最优选是一个或多个其他人源化置换(诸如例如人源化置换A49S)和/或如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合(诸如例如，置换N52E和/或S82bN)。所述119A3v18的变体的一些优选的但非限制性的实例是119A3v20(SEQ ID NO：5)、119A3v21(SEQ ID NO：6)和119A3v22(SEQ ID NO：7)，并且这些具体的变体(以及包含其的本发明的多肽，如本文进一步所述)形成本发明的其他方面。

在本发明中，通常，已经发现与119A3的在位置78包含亮氨酸的(相应的)人源化变体相比较，119A3的在位置78包含缬氨酸的人源化变体(并且其优选如本文进一步所述)是更稳定的，可以给出更高的表达或产率和/或可以具有其他益处。不限于任何具体的解释或假说，据信这可能是由于119A3的在位置78包含缬氨酸的人源化变体(的构架序列)允许纳米抗体更好地能够折叠成所需要的免疫球蛋白结构域结构和/或119A3的在位置78包含缬氨酸的人源化变体在折叠后采取更稳定的免疫球蛋白结构域结构。

因此，在一个具体但非限制性的方面，本发明涉及作为PMP119A3(SEQ ID NO：1)的(人源化)变体的氨基酸序列(即，本发明的氨基酸序列)，与PMP119A3的氨基酸序列相比较，其包含：(i)突变H37Y和M43K中的至少一个且优选两个；(ii)在位置78的缬氨酸残基；(iii)至少一个、优选至少两个、且更优选三个、四个或(of)五个人源化置换(如本文定义)；(iv)以及任选地一个或多个其他适当的氨基酸置换(优选地，如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合)。

如所提及，这样的119A3的变体优选包含：(i)与119A3的野生型序列相比较，总共7-15个、优选9-13个、如10、11或12个氨基酸差异；和(ii)最多七个人源化置换，优选总共三个、四个或五个人源化置换(尽管在一些情形中，取决于所选的人源化置换，最大数目可能不是至关重要的)。

在另一个方面中，本发明涉及作为119A3(H37Y-M43K)(SEQ IDNO：2)的(人源化)变体的氨基酸序列(即，本发明的氨基酸序列)，与PMP119A3(H37Y-M43K)的氨基酸序列相比较，其包含：(i)在位置78的缬氨酸残基；(ii)至少一个、优选至少两个、更优选三个、四个或五个人源化置换(如本文定义)；(iii)以及任选地一个或多个其他适当的氨基酸置换(优选地，如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合)。这样的119A3(H37Y-M43K)的变体优选包含：(i)与119A3(H37Y-M43K)的序列相比较，总共5-13个、优选7-11个、诸如9个、10个或11个氨基酸差异；和(ii)最多七个人源化置换，优选总共三个、四个或五个人源化置换(尽管在一些情形中，取决于所选的人源化置换，最大数目可能不是至关重要的)。

在另一个方面中，本发明涉及作为119A3v17的变体的氨基酸序列(即，本发明的氨基酸序列)，与119A3v17的氨基酸序列相比较，其包含：(i)在位置78的缬氨酸残基；(ii)与119A3v17的序列相比较，任选1-5个、诸如一个、两个或三个其他氨基酸差异，其中所述氨基酸差异优选是置换，且更优选是选自一个或多个其他人源化置换(与在119A3v17中已经存在的人源化置换相比较)的置换和/或来自如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合的置换。

本发明的氨基酸序列的一些优选的但非限制性的实例(并且特别地，所述119A3v17的变体的一些优选的但非限制性的实例)包括，但不限于119A3v18、119A3v20、119A3v21和119A3v22(SEQ ID NO’s：4-7)，并且这些形成本发明的进一步优选的方面。

本发明还涉及包含本发明的氨基酸序列或基本上由本发明的氨基酸序列组成的蛋白和多肽。

119A3(WO 09/068627)、119A3v16(WO 09/068627)和119A3v18(本发明)的比对提供在图5中。

关于可以存在于本发明的氨基酸序列中的任何人源化置换(即，与119A3、119A3(H37Y-M43K)和/或119A3v17相比较)，解释如下：如WO09/068627中所述，人源化置换通常可以定义为这样的置换，即，在骆驼科动物V_HH结构域的构架区中存在的氨基酸残基被替换为在人V_H结构域(且优选地，人V_H3结构域)的构架区中同一位置存在的不同的氨基酸。因此，基于本发明的公开内容、WO 09/068627的公开内容，以及对给定的V_HH序列与一个或多个人V_H序列的氨基酸序列比较，技术人员应该清楚适当的人源化置换。

例如，参考附图1-4(其取自WO 09/068627的表A-6至A-9)，其列出了已经发现在骆驼科动物VHH结构域的构架区存在的一些氨基酸残基，以及在人V_H3序列(诸如例如，种系序列DP-47、DP-51或DP-29)的构架区最经常存在的对应氨基酸残基。可以取自这些附图的人源化置换也是用于本发明的一些优选的人源化置换；然而，还可以使用通过与其他种系序列(来自V_H3种类或有时还来自其他V_H种类)比较获得的人源化置换。如由WO 09/068627通常已知(并且由申请人的专利申请和在WO09/068627中提及的其他现有技术可知)，基于这样的序列比较，特别适当的和/或最适合的人源化置换(及其组合)通常可以通过有限次试错确定，即，通过引入一个或多个所考虑的人源化置换，并且检测这样得到的人源化变体的一种或多种所需要的性质，诸如熔解温度、亲和力、效力、格式化后性质(properties upon formatting)、在所需要的宿主生物体中的表达水平、和/或关于VHH结构域或包含其的纳米抗体或蛋白/多肽的其他所需要的性质，对于此，同样参考WO 09/068627以及其中提及的本申请人的其他专利申请。

例如，但非限制性地，与119A3和119A3(H37Y-M43K)的序列相比较，本发明的氨基酸序列可以包含置换A14P、Q75K和/或N82bS中的一个、任意两个且优选所有三个(尽管如提及那样，可能需要在位置82a/82b具有NN基序而不是NS基序)，它们均存在于119A3v17(WO 09/068627)和119A3v18(本发明)中；并且例如，还可以包含置换A49S(例如，与119A3v18相比较)。

关于人源化置换，应该注意到，为了本申请的目的，在骆驼科动物“标志残基”(同样参见WO09/068627，以及图1-4)的任一个的任意置换不应该计算为“人源化置换”。在任意标志残基的这样的置换可以存在或可以不存在，并且当存在时，其可以是或可以不是其中VHH中的氨基酸残基被在人V_H序列的相同位置存在的氨基酸残基替换的置换。例如，在标志残基的这样的置换可以例如还是这样的置换，其中在所述标志残基存在的氨基酸残基被在骆驼科动物V_HH序列的所述位置存在的另一个氨基酸残基替换(同样参考图1-4)。

与119A3的序列相比较，可以存在于本发明的氨基酸序列中的标志残基处的这样的置换的实例是H37Y、Q44G、K84R和/或Q108L中的一种、任意两个、任意三个且优选是全部四个。例如，这些全部存在于119A3v17(WO 09/068627)和119A3v18(本发明)中。

与例如119A3、119A3v17和/或119A3v18的序列相比较，可以存在的其他/另外的置换的适当的实例是如本文提及的其他置换(a)-(c)中的任一个，或任意两个或更多个的任意适当组合，和/或例如还有置换N52E。

从本文的公开内容，技术人员应该清楚本发明的氨基酸序列针对IL-23(且具体是IL-23的p19亚基)，并且是119A3及其在WO 09/068627中所述的(人源化)变体的改善的变体。因此，本发明的氨基酸序列可以用于与WO 09/068627所述相同的目的、用途和应用，例如，调节由IL-23和/或其受体介导的信号传导；和/或预防或治疗与IL-23相关和/或与由IL-23介导的信号传导相关的疾病，诸如例如，炎症和炎性病症，如肠病(结肠炎、局限性回肠炎(Crohn’disease)，IBD)，传染病，银屑病(psioriasis)，癌症，自身免疫病(诸如MS)，carcoidis，移植排斥，囊性纤维化(cysticfibrosis)，哮喘(asthma)，慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonarydisease)，类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis)，病毒感染，普通可变型免疫缺陷，和本文引用的现有技术中提到的各种疾病和病症。进一步参考WO 09/068627。

特别地，本发明的氨基酸序列是“p19+”序列(如WO 09/068627中定义)，并且因此可以特别用于如WO 09/068627中关于其他“p19+序列”所述的相同目的。例如，参考WO 09/068627的第15页和第16页，以及WO 09/068627的进一步的概述内容。更具体地，本发明的氨基酸序列可以用作119A3及其人源化变体的改善的替代方案，并且因此可以特别用于与WO 09/068627中关于119A3及其人源化变体所述的相同目的。

如在WO 09/068627中已经提及的那样，p19+序列和/或119A3及其人源化变体(并且因此对于本发明的氨基酸序列)的这些应用中的一种是作为化合物或构建体的结构单元，所述化合物或构建体紧接着一种或多种本发明的氨基酸序列，包含一种或多种其他基团、残基、结构部分、结合结构域或结合单位(如WO 09/068627中所述)。例如，如WO 09/068627中所述，所述一种或多种其他结合结构域或结合单位可以是其他的免疫球蛋白单可变结构域，VHH’s，(单)结构域抗体，纳米抗体或dAb’s，并且例如，这些可以针对p19或针对IL-12/IL-23家族的异二聚体细胞因子的另一个亚基，如p40。

特别地，如在WO 09/068627中所述，这样的化合物或构建体可以是二价的或多价的、双特异性的或多特异性的和/或双互补位构建体(如在WO 09/068627中所述)，其除了包含一种或多种(且优选一种)本发明的氨基酸序列之外，还包含一种或多种其他纳米抗体，诸如，例如且不限于，WO 09/068627中描述、提及和/或引用的一种或多种纳米抗体。例如，参考WO 09/068627的第12-16页、第27-20页和参考在第31页提及的包含至少一个p19+序列的构建体。如其中提及，例如，这样的另一种纳米抗体可以是另一种针对p19的纳米抗体或针对p40的纳米抗体，或是任意其他适当的纳米抗体。还如WO 09/068627中所述，例如，参见第172-173页，这样的化合物或构建体还可以被修饰以增加它们的半衰期(例如，通过循环的半衰期)或可以包含和/或可以融合到提供增加的半衰期的蛋白或结合单位上(例如，白蛋白或可以结合血清蛋白如白蛋白的结合单位或结合肽)。

这样的化合物和(二价或多价、双特异性或多特异性和/或双互补位)构建体优选是蛋白和多肽(即，由核酸序列编码和/或能够由宿主或宿主细胞表达)，也如WO 09/068627中概括所述。在本文中它们也通常称为“本发明的多肽”。本发明这样的多肽的一些优选但非限制性的实例以SEQ ID NO’s 8-40给出，并且这些多肽形成本发明的一些优选的方面。

因此，如本文所述的“本发明的多肽”可以基本上如WO 09/068627中关于“本发明的多肽”所述，但是包含至少一种本发明的氨基酸序列(即，替代可能存在于如WO 09/068627中所述的“本发明的多肽”中的另一种P19+序列)。

特别地，并且优选地，如本文所述的“本发明的多肽”可以基本上如WO 09/068627中关于“本发明的多肽”所述，其包含WO 09/068627中所述的p119A3或其一种变体，但是包含本发明的氨基酸序列，其中如WO 09/068627中所述的“本发明的多肽”包含WO 09/068627中所述的p119A3或其一种变体。换言之，本发明的多肽的一些优选的实例可以这样简单获得：选取一种如WO 09/068627中所述的包含WO 09/068627中所述的119A3或其一种变体的本发明的多肽，并且用本发明的氨基酸序列(例如，并且优选地，用119A3v18，119A3v20，119A3v21或119A3v22)替换119A3或所述变体。

例如，WO 09/068627，其序列表及其实验部分给出包含119A3或其一种变体的二价或多价、双特异性或多特异性、和/或双互补位的构建体(例如，参见SEQ ID NO’s：2151-2159；2533；2537；2539；2541-2547；和2615-2628；实施例12-15，24，25和28-46；以及附图4，7，8，9，42和45)的具体实例。考虑本发明的氨基酸序列可以替代所述构建体中的119A3或其变体，以提供作为本发明的多肽的多价、双特异性或多特异性、和/或双互补位的构建体。

在一个具体的方面中，这样的构建体(即，本发明的多肽)是包含至少一种(且优选仅一种)本发明的氨基酸序列和至少一种(且优选仅一种)可以结合p19亚基的其他纳米抗体(例如，WO 09/068627中所述的一种纳米抗体)的双互补位构建体。例如，所述其他纳米抗体可以是p19+序列，但是优选是p19-序列。在一个具体的方面中，这样的双互补位构建体包含本发明的氨基酸序列和另一种纳米抗体，所述另一种纳米抗体是81A12(WO 09/068627的SEQ ID NO’s：1936)、或其(人源化)变体，如81A2v12至81A12v5(WO 09/068627中的SEQ ID NO’s：2580至2585)中的一种，或其甚至进一步人源化的变体。这样的81A12的(人源化的)变体可以任选地还包含一种或多种基本上类似于上述置换(a)-(c)中的一种或多种的置换。在另一个具体的方面，这样的双互补位构建体包含本发明的氨基酸序列和另一种纳米抗体，所述另一种纳米抗体是81G2(WO09/068627的SEQ ID NO’s：1930)，或其(人源化)变体，诸如81G2v1至81G2v11(WO 09/068627的SEQ ID NO’s：2586至2597)中的一种，或其甚至进一步人源化的变体。这样的81G2的(人源化的)变体还可以任选地包含一种或多种基本上类似于上述置换(a)-(c)中的一种或多种的置换。这样的构建体同样可以包含一种或多种其他纳米抗体或其他结合单位，以及适当的接头和其他官能团，所有均如WO 09/068627中所述。例如，这样的构建体可以被提供增加的半衰期，例如，通过适当的修饰，如通过聚乙二醇化，通过与白蛋白融合，通过包括可以结合血清白蛋白的纳米抗体(诸如WO 09/068627中所述的纳米抗体Alb-1或Alb-8，或WO08/028977中所述的其他血清-白蛋白结合纳米抗体中的一种)，或通过连接血清白蛋白结合肽，诸如WO 08/068280、WO 09/127691中所述的那些或所述肽的进一步改善的变体。

因此，本发明的一种优选的多肽基本上由本发明的氨基酸序列(诸如，优选地，119A3v18，119A3v20，119A3v21或119A3v22)和81G2的人源化变体(诸如81G2v11)组成。为了增加其半衰期，这样的多肽可以适当地聚乙二醇化，可以适当地与人血清白蛋白融合，或者可以包含可以结合人血清白蛋白的纳米抗体(诸如，优选Alb-8)；全部基本上如WO08/028977中所述。在这样的本发明的多肽中存在的纳米抗体可以适当地彼此连接，任选地通过一个或多个适当的接头连接，同样基本上如WO08/028977中所述。这样的本发明的多肽的一些优选的但非限制性的实例提供在序列表中；并且这些多肽形成本发明的优选方面。

本发明的另一种优选的多肽基本上由本发明的氨基酸序列(诸如，优选地119A3v18，119A3v20，119A3v21或119A3v22)和81A12的人源化变体(诸如81A12v5)组成。为了增加其半衰期，这样的多肽可以适当地聚乙二醇化，可以适当地与人血清白蛋白融合，或者可以包含可以结合人血清白蛋白的纳米抗体(诸如，优选Alb-8)；全部基本上如WO 08/028977中所述。在这样的本发明的多肽中存在的纳米抗体可以适当地彼此连接，任选地通过一个或多个适当的接头连接，同样基本上如WO 08/028977中所述。这样的本发明的多肽的一些优选的但非限制性的实例提供在序列表中；并且这些多肽形成本发明的优选方面。

如本文所述的一些(其他)特别优选的“本发明的多肽”可以基本上如在由埃博灵克斯股份有限公司于2009年5月27日提交的且题目为“Biparatopic protein constructs directed against IL-23(针对IL-23的双互补位蛋白构建体)”的美国临时申请号61/181,384中关于包括119A3或其变体的双互补位构建体所述，但是包含本发明的氨基酸序列，其中按照US61/181,384所述的这样的双互补位构建体包含WO 09/068627中所述的119A3或其变体之一。换言之，本发明的多肽的一些特别优选的实例可以这样简单获得：选取一种如US 61/181,384中所述的包含119A3或其变体的双互补位构建体，并且用本发明的氨基酸序列(例如，并且优选地，用119A3v18，119A3v20，119A3v21或119A3v22)替换119A3或所述变体。

在一个具体的但非限制性的方面，本发明的双互补位蛋白或多肽可以包含一个作为119A3的变体或类似物(且特别是人源化变体119A3，例如，其可以如本文进一步所述)的结合结构域和一个作为81A12的变体或类似物(且特别是人源化变体81A12，例如，其可以如本文进一步所述)的结合结构域，其中与作为119A3的变体或类似物(且特别是人源化变体119A3，例如，其可以如本文进一步所述)的结合结构域相比较，作为81A12的变体或类似物(且特别是人源化变体81A12)的结合结构域是接近于(towards)所述蛋白或多肽的N-端(即，“上游”)。所述具有接近于N-端的基于81A12的结合单位的双互补位构建体可以进一步基本上如在PCT/EP2008/066365中所述；并且例如，可以包含一种或多种其他纳米抗体或其他结合单位，以及适当的接头和其他官能团，全部均如WO09/068627中所述。例如，所述构建体可以被提供增加的半衰期，例如，通过适当的修饰，如通过聚乙二醇化，通过与白蛋白融合，通过包含可以结合血清白蛋白的纳米抗体(诸如WO 09/068627中所述的纳米抗体Alb-1或Alb-8，或WO 08/028977中所述的其他血清-白蛋白结合纳米抗体中的一种)，或通过连接血清白蛋白结合肽，诸如WO 08/068280、WO09/127691中所述的那些或所述肽的其他改善的变体。

接近于N-端具有基于81A12的结合单位的所述蛋白和多肽的一些非限制性的实例可以如下所示(多肽的N-端朝右，C-端朝左)：

-[基于81A12的结合结构域]-接头-[基于119A3的结合结构域]，所述构建体可以任选地被聚乙二醇化以增加半衰期；

-[基于81A12的结合结构域]-接头-[结合血清白蛋白的纳米抗体，诸如Alb-1或Alb-8]-接头-[基于119A3的结合结构域]；

-[血清白蛋白]-接头-[基于81A12的结合结构域]-接头-[基于119A3的结合结构域]；

-[基于81A12的结合结构域]-接头-[基于119A3的结合结构域]-接头-[血清白蛋白]

-[血清白蛋白结合肽(单价的或串体的)]-[基于81A12的结合结构域]-接头-[基于119A3的结合结构域]；

-[基于81A12的结合结构域]-接头-[基于119A3的结合结构域]-[血清白蛋白结合肽(单价的或串联的)]。

可能是这样的：与其中基于119A3的结合结构域位于接近于N-端(即，相对于基于81A12的结合结构域)的相应构建体相比较，其中基于81A12的结合结构域位于接近于N-端(即，相对于基于119A3的结合结构域)的本发明的多肽可以具有一种或多种有利性质。例如，与其中基于119A3的结合结构域位于接近于N-端的相应构建体相比较，其中基于81A12的结合结构域位于接近于N-端的多肽可以表现出较高的表达或生产产率。参考实验部分。

例如，在接近于N-端具有基于119A3的结合单位的构建体可以如下格式化：

-[基于119A3的结合结构域]-接头-[基于81A12的结合结构域]，所述构建体可以任选地被聚乙二醇化以增加半衰期；

-[基于119A3的结合结构域]-接头-[结合血清白蛋白的纳米抗体，诸如Alb-1或Alb-8]-接头-[基于81A12的结合结构域]；

-[血清白蛋白]-接头-[基于119A3的结合结构域]-接头-[基于81A12的结合结构域]；

-[基于119A3的结合结构域]-接头-[基于81A12的结合结构域]-接头-[血清白蛋白]

-[血清白蛋白结合肽(单价的或串联的)]-[基于119A3的结合结构域]-接头-[基于81A12的结合结构域]；

-[基于119A3的结合结构域]-接头-[基于81A12的结合结构域]-[血清白蛋白结合肽(单价的或串联的)]。

优选地，所有本发明的氨基酸序列和本发明的多肽都能够进行如美国临时申请61/181,384关于119A3、119A3的变体和包含119A3或其变体的多肽所述的基本上相同的结合相互作用。例如，参考实施例1。

本发明的多肽优选具有用DSC(在实验部分中列出的条件下)确定的大于60℃的熔点(Tm)。

此外，本发明的氨基酸序列优选具有基本上与119A3针对p19的亲和力相同或更好的针对p19的亲和力(如用WO 09/068627的实施例12中所述的BIACORE测定法所测量的)，并且更优选地针对p19的亲和力基本上与119A3v17针对p19的亲和力相同或更好。

此外，本发明的氨基酸序列优选具有基本上与119A3的功效相同或更好的功效(如用WO 09/068627的实施例22中所述的α-筛选测定法所测量的)，并且更优选具有基本上与119A3v17的功效相同或更好的功效。

此外，本发明的氨基酸序列优选在小鼠脾细胞测定法中具有基本上与119A3的中和活性相同或更好的中和活性(参见WO 09/068627的实施例15和23)，并且更优选具有基本上与119A3v17的中和活性相同或更好的中和活性。

本发明的多肽优选在使用hIL-23的小鼠脾细胞测定法中(参见WO09/068627的实施例30)具有好于(即，小于)50pM、优选好于20pM、更优选好于10pM、如8至1pM或以下的中和活性(表示为IC50)。

本发明的氨基酸序列和多肽(以及包含其的组合物)的可能的应用和用途在整个WO 09/068627中提及(例如，参见WO 09/068627的第7/8页，第32页和第328-337页)。所述构建体的其他方面、实施方案、应用和用途在整个WO 09/068627的公开内容中描述(例如，参见第49-51页上的p19+序列)，并且除包含一种或多种本发明的氨基酸序列外的所述二价或多价、双特异性或多特异性、和/或双互补位构建体形成本发明的另一个方面。

通常，这些可以包括在预防和/或治疗与异二聚体细胞因子及其受体(且特别是与IL-23或IL-23介导的信号传导)相关的疾病和病症(用于预防和/或治疗所述疾病和病症的药物组合物)的应用，所述疾病和病症如在WO 09/068627中提及，是可以分别通过给需要其的受试者(即，患有所述疾病或病症或具有至少其一种症状和/或有易于或发展所述疾病或病症的危险)适当施用本发明的多肽或组合物(且特别是其药物活性量)和/或已知的针对异二聚体细胞因子(且特别是IL-23)和/或其受体或其中涉及异二聚体细胞因子(且特别是IL-23)和/或其受体的生物途径或机制的活性成分活性物质(且特别是其药物活性量)。技术人员基于本文的公开内容，将清楚所述与异二聚体细胞因子及其受体相关的疾病和病症的实例，并且例如，所述疾病和病症包括下述疾病和病症：炎症和炎性病症，如肠病(结肠炎、局限性回肠炎，IBD)，传染病，银屑病，癌症，自身免疫病(诸如MS)，carcoidis，移植排斥，囊性纤维化，哮喘，慢性阻塞性肺病，类风湿性关节炎，病毒感染，普通可变型免疫缺陷，和本文引用的现有技术中提到的各种疾病和病症。基于此，技术人员还将清楚异二聚体细胞因子(和/或其受体)参与哪些具体的疾病和病症。

例如，如WO 09/068627的第4-5页所提及，显示IL23负责在炎性肠病中观察到的慢性炎症。这得到IL23R基因鉴定为参与炎性肠病的事实的证实。还已经发现p19敲除小鼠抗胶原-诱发的关节炎和结肠炎，而发现可比较的p35敲除小鼠更容易受胶原-诱发的关节炎的影响。此外，当p19敲除小鼠与IL-10敲除小鼠杂交时，得到的后代抗结肠炎，而p19敲除小鼠与IL-10敲除小鼠的相似的杂交产生易受结肠炎影响的后代。进一步发现针对p19的单克隆抗体抑制EAE(一种多发性硬化的临床前动物模型)的发展，并且降低IL-17(其不受IL-12调节)的血清水平。此外，IL-23(而不是IL-12)似乎是CNS自身炎症中的关键细胞因子。所有这些结果表明，IL-23/p19可以是用于治疗结肠炎、局限性回肠炎、IBD、多发性硬化、类风湿性关节炎和本文提及的一些其他的疾病和病症的有吸引力的靶标。此外，IL23和IL27----来自IL-12家族的两种其他的异二聚体细胞因子----虽然具有不同的功能，但是它们也调节TH1-细胞应答。IL-23刺激CD4+T细胞产生IL-17的能力也被描述为在自身炎症的发展和维持中具有主要的作用。

此外，WO 09/068627的实施例45表明，WO 09/068627的多肽(并且因此，延伸至本发明的多肽)还可以在银屑病的预防和治疗中是有价值的(通过全身/肠胃外给药或通过局部治疗，例如，施用药膏或洗液(参见WO 09/068627的第328页和第331-332页))。

在另一个方面，本发明涉及编码本发明的氨基酸序列或本发明的多肽(或其适当的片段)的核酸。这样的核酸在本文中还称为“本发明的核酸”，并且例如，可以如在WO 09/068627中进一步所述；并且可以特别是以基因构建体的形式存在，同样如WO 09/068627中进一步所述(例如，参见第316-320页)。

在另一个方面，本发明涉及表达(或在适当的环境下能够表达)本发明的氨基酸序列和/或本发明的多肽的宿主或宿主细胞；和/或包含本发明的核酸的宿主或宿主细胞。这样的宿主或宿主细胞同样可以通常如WO09/068627中所述(例如，参见第315-328页)。

本发明还涉及用于生产/表达本发明的氨基酸序列和多肽的方法。所述方法可以通常包括以下步骤：(i)在适当的宿主细胞或宿主生物体或在另一种适当的表达系统中表达编码本发明的氨基酸序列或多肽的核酸，任选地接着进行：(ii)分离和/或纯化这样得到的本发明的氨基酸序列或多肽。具体地，这样的方法可以包括下述步骤：(i)在使本发明的所述宿主表达和/或产生至少一种本发明的氨基酸序列和/或多肽的条件下培育和/或维持本发明的宿主；任选地接着进行：(ii)分离和/或纯化这样得到的本发明的氨基酸序列、纳米抗体或多肽。这些方法再次可以基本上如WO09/068627所述进行(例如，参见第315-328页)。

用于生产/表达本发明的氨基酸序列和多肽的一个具体的方法记述在埃博灵克斯股份有限公司的题目为“Method for the production of domainantibodies(产生结构域抗体的方法)”的国际申请中(国际申请日为2010年4月30日)。

本发明还涉及一种产品或组合物，其包含或包括至少一种本发明的氨基酸序列、至少一种本发明的多肽(或其适当的片段)和/或至少一种本发明的核酸、以及任选地一种或多种本身已知的这样的组合物的其他成分，即，这取决于所述组合物的目的应用。例如，这样的产品或组合物可以是药用组合物(如本文所述)、兽医用组合物或用于诊断应用的产品或组合物(也如本文所述)。这样的产品或组合物同样可以通常如WO09/068627中所述(例如，参见第329-337页)。

本发明还涉及本发明的氨基酸序列或多肽、或包含其的组合物在体外(例如，在体外或细胞测定中)或体内(例如，在单细胞或多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，更特别是在人中，如在有危险患有或已经患有与异二聚体细胞因子及其受体相关的疾病或病症的人中)调节(如WO09/068627中定义)IL-23和/或IL-23-介导的信号传导(如WO 09/068627中定义)的应用。

本发明还涉及用于体外(例如，在体外或细胞测定中)或体内(例如，在单细胞或多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，更特别是在人中，如在有危险患有或已经患有与IL-23和/或其受体相关的疾病或病症的人中)调节(如WO 09/068627中定义)IL-23和/或IL-23-介导的信号传导(如WO 09/068627中定义)的方法，所述方法至少包括使IL-23与至少一种本发明的氨基酸序列或多肽、或包含其的组合物以适于调节IL-23和/或IL-23-介导的信号传导的方式和量接触的步骤。

本发明还涉及本发明的一种氨基酸序列或多肽在制备组合物(诸如，但不限于，如本文进一步所述的药物组合物或制剂)中的应用，所述组合物用于在体外(例如，在体外或细胞测定中)或体内(例如，在单细胞或多细胞生物体中，且特别是在哺乳动物中，更特别是在人中，如在有危险患有或已经患有与异二聚体细胞因子及其受体相关的疾病或病症的人中)调节(如WO 09/068627中所定义)IL-23和/或IL-23-介导的信号传导(如WO 09/068627中所定义)。

现在将通过参考下述非限制性实验部分或附上的非限制性序列表和非限制性附图进一步描述本发明，其中：

-图1至4是给出人V_H3结构域和V_HH序列的构架区的序列比较的表格(数据来源于WO 09/068627)。

-图5给出119A3(WO 09/068627)，119A3v16(WO 09/068627)和119A3v18(本发明)的比对。

-图6给出通过TSA在不同pH值(x-轴)确定的119A3的两种人源化变体(119A3v16-WO 09/068627；和119A3v18-本发明)的熔解温度(y-轴，Tm，单位为℃)。

实验部分

基于晶体结构和分子建模，猜测人源化变体119A3v16(参见WO09/068627，SEQ ID NO：2578)的物理稳定性可以通过突变L78V提高。

实验证实回复突变L78V之后的增加的稳定性：制备少量的His-myc标记的119A3v18(包含突变L78V)，并且通过热位移测定法(thermal shiftassay，TSA)确定熔解温度，与119A3v16比较。图6清楚显示的确可以观察到熔解温度显著增加12℃，因此证实在蛋白核心的L78V突变提高该纳米抗体

的稳定性。在所测的pH范围内的相对稳定性(Tm)是可比较的。

对于基于119A3v18结构单元和81A12结构单元的双互补位构建体(同样，与基于119A3v16的结构单元的相似的构建体相比较)用差式扫描量热法也获得熔解曲线，并且这些证实，同样当结构单元以双互补位形式结合时，在119A3中的突变L78V提供清楚的热稳定性提高(数据未显示)。数据还显示，所测试的在接近于N-端具有基于81A12的结构单元的构建体(SEQ ID NO：s 35和38)比所测试的在接近于N-端具有基于119A3的结构单元的构建体具有更高的熔解温度。

为了研究其他置换对本发明的氨基酸序列的性质的影响，在化学应力后进行119A3v18的肽图谱分析(同样，与119A3v16比较)。

例如，发现参照双互补位构建体119A3v16-9GS-Alb8-9GS-81A12v5(其基于结构单元119A3v16和81A12v5，如在WO 09/068627中所述)表现出一定程度的N52(Kabat N°)脱酰胺化，N52位于119A3v16结构单元的CDR2中。这种变体在样品的cIEF分析中解析，所述样品以25mg/mL配制在具有0.05％(v:v)吐温80和10％(w:v)蔗糖的L-组氨酸缓冲液(pH6)中，在37和25℃保存6周后进行分析，并且通过由LC/MS肽图谱分析法分析强迫脱酰胺(forced deamidation)样品进行验证(在碳酸铵缓冲液(pH9)中保存；在RT 3天期间)。

因此，设计称为119A3v20，119A3v21和119A3v22的119A3v18的其他变体(本发明)，所述变体与119A3v18相比较包含置换N52E或S82bN中的一个或两个。确定这些变体在化学应力(在RT在pH9下3天)后的肽图谱(数据未显示)，并且这表明N52可能比N82a对脱酰胺作用更敏感。

令人惊讶地，119A3v16(WO 09/068627)与119A3v18(本发明)的肽图谱的比较表明，在119A3v18中，N52的脱酰胺速率降低，这证明通过L78V突变获得了增加的热力学稳定性(没有其他的N52E或S82bN突变)，其还已经导致该分子的增加的化学稳定性。

将包含本发明的氨基酸序列的双互补位构建体的功效与WO09/068627所述的包含119A3v16结构单元的可比较的双互补位构建体的功效进行比较。所测试的构建体为SEQ ID NO’s：35，36，37和38的构建体。这些与参照构建体119A3v16-9GS-Alb8-9GS-81A12v5(其基于如在WO 09/068627中所述的结构单元119A3v16和81A12v5)相比较。所用的测定法是基本上如在WO 09/068627的实施例15和25中所述的小鼠脾细胞测定法。在第一个实验中，当SEQ ID NO’s：35，36和37的构建体与参照比较时，它们表现出可比较的功效(对于SEQ ID NO’s：35，36和37的IC50分别为0.033，0.028和0.032(nm)，相比而言参照构建体为0.028)。在第二个实验中，SEQ ID NO：38的构建体表现出0.039的IC50，相比而言参照构建体为0.030。这表明，与WO 09/068627所述的1193b16结构单元相比较，在本发明的氨基酸序列(且在包含其的构建体)中的L78V置换对功效没有主要的影响。

为了确定突变L78V对表达水平的影响，使用在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株X-33(Invitrogen)中的通用的高细胞密度发酵工艺，将SEQ ID NO’s 35，36，37和38的构建体的表达水平与参照构建体119A3v16-9GS-Alb8-9GS-81A12v5的表达水平进行比较。使用Ably1培养基(包含蛋白胨作为复合成分的丰富培养基)和标准发酵参数如30℃、pH5和30％的溶解氧。在分批培养(batch)阶段后，应用甘油补料分批培养(fed-batch)，直到获得约400g/L的湿细胞重量。然后，通过向培养物中添加MeOH开始诱导。为了使培养物适应将MeOH作为C-源，进行适应阶段(2小时1.5mL/L.h，接着3mL/L.h 2小时)，然后是4ml/h/L的恒定喂养速率直到发酵结束(总诱导时间为114小时)。清除蛋白质A样品后，通过RPC分析来分析发酵样品，以检验产品相关的变体。简言之：将澄清的培养物上清与固定量的ProtA树脂混合，并且在包含TFA 0.1％的MQ中洗脱，并且按原样准备上样到RPC上。结果显示在下表中，其显示了本发明的氨基酸序列/多肽的DSC中增加的Tm对应于表达产量的显著增加。

表：在不含细胞的培养基的蛋白质A清除和Cu2+处理后通过RPC分析确定的完整的蛋白的纯度和产量的估测。

^*基于在用于完全形成所有二硫键的Cu2+处理和蛋白质A清除后的RPC结果。

^**在这些样品中存在的主要杂质是具有连接在N端的一部分漏切的信号序列的蛋白，其可以通过改变发酵条件而避免。

Claims

1.氨基酸序列，所述氨基酸序列为PMP119A3(SEQ ID NO：1)的变体，与PMP119A3的氨基酸序列相比较，所述变体包含：(i)突变H37Y和M43K中的至少一个且优选两个；(ii)在位置78的缬氨酸残基；(iii)至少一个、优选至少两个、且更优选三个、四个或五个人源化置换；(iv)以及任选地一个或多个其他适当的氨基酸置换。

2.氨基酸序列，所述氨基酸序列为119A3(H37Y-M43K)(SEQ IDNO：2)的变体，与PMP119A3(H37Y-M43K)的氨基酸序列相比较，所述变体包含：(i)在位置78的缬氨酸残基；(ii)至少一个、优选至少两个、且更优选三个、四个或五个人源化置换；(iii)以及任选地一个或多个其他适当的氨基酸置换。

3.氨基酸序列，所述氨基酸序列为119A3v17(SEQ ID NO：3)的变体，与119A3v17的氨基酸序列相比较，所述变体包含：(i)在位置78的缬氨酸残基；(ii)与119A3v17的序列相比较，任选地1至5个，诸如一个、两个或三个其他的氨基酸差异。

4.氨基酸序列，所述氨基酸序列选自119A3v18(SEQ ID NO：4)，119A3v20(SEQ ID NO：5)，119A3v21(SEQ ID NO：6)或119A3v22(SEQ IDNO’s：7)。

5.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽基本上由权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列组成。

6.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列。

7.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和一种或多种其他基团、残基、结构部分、结合结构域或结合单位。

8.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和一种或多种其他的免疫球蛋白单可变结构域、VHH’s、(单)结构域抗体、纳米抗体或dAb’s。

9.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和一种或多种针对IL-23的p19亚基的其他的免疫球蛋白单可变结构域、VHH’s、(单)结构域抗体、纳米抗体或dAb’s。

10.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和一种或多种针对IL-23的p40亚基的其他的免疫球蛋白单可变结构域、VHH’s、(单)结构域抗体、纳米抗体或dAb’s。

11.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和作为针对IL-23的p40亚基的纳米抗体的另一种纳米抗体。

12.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和作为针对IL-23的p19亚基的纳米抗体的另一种纳米抗体。

13.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和作为针对IL-23的p19亚基的纳米抗体的另一种纳米抗体。

14.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和另一种纳米抗体，所述另一种纳米抗体是81A12(WO09/068627的SEQ ID NO’s：1936)或其(人源化)变体，所述(人源化)变体诸如81A2v12至81A12v5(WO 09/068627的SEQ ID NO’s：2580至2585)中的一种或其甚至进一步人源化的变体。

15.蛋白或多肽，所述蛋白或多肽包含权利要求1-4中任一项所述的氨基酸序列和另一种纳米抗体，所述另一种纳米抗体是81G2(WO09/068627的SEQ ID NO’s：1930)或其(人源化)变体，所述(人源化)变体诸如81G2v1至81G2v11(WO 09/068627的SEQ ID NO’s：2586至2597)中的一种或其甚至进一步人源化的变体。

16.按照权利要求5-15中任一项所述的蛋白或多肽，例如，通过适当的修饰，诸如通过聚乙二醇化，通过与白蛋白融合，通过包括可以结合血清白蛋白的纳米抗体，或通过连接血清白蛋白结合肽，所述蛋白或多肽已经被提供了增加的半衰期。