CN102942619B - 禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法 - Google Patents
禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102942619B CN102942619B CN201210489259.8A CN201210489259A CN102942619B CN 102942619 B CN102942619 B CN 102942619B CN 201210489259 A CN201210489259 A CN 201210489259A CN 102942619 B CN102942619 B CN 102942619B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blastochyle
- avian influenza
- influenza hemagglutinin
- bird flu
- stability
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明公开一种禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，本发明的禽流感血凝素抗原保护剂由多种氨基酸、多糖结合白蛋白、明胶、甘油、葡聚糖配制而成，添加到胚液中，达到延长胚液中的禽流感病毒血凝素的保存期限，相对于未添加保护剂的胚液，在37℃保存时禽流感病毒血凝素保存时间延长至少35天以上。
Description
技术领域
本发明涉及兽用生药制品，具体涉及一种禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法。
背景技术
禽流感是一种由A型流感病毒引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫局定为A类传染病。按病原性的致病力，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致病性三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下降，出现零星死亡。高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率高。根据抗原的不同，我国商品化的禽流感疫苗分为H5亚型禽流感疫苗、H9亚型禽流感疫苗和H5-H9亚型二价禽流感疫苗三大类。
禽流感血凝素HA是禽流感病毒的主要抗原基因，也刺激禽类产生免疫保护的重要抗原。目前禽流感疫苗均是灭活疫苗，禽流感灭活疫苗免疫禽类之后，在临床上评价免疫效果的重要方法就是测定抗血凝素HA特异性抗体的滴度。其方法是使用禽流感标准抗原中和血清中抗血凝素HA特异性抗体之后，测定剩余血凝素对鸡红细胞的凝集作用。因此，血凝素HA不论是对于禽流感疫苗还是对禽流感标准抗原都具有十分重要的作用。维持禽流感病毒血凝素HA的稳定性具有重要意义。目前禽流感疫苗的半成品即含禽流感病毒的胚液在2℃-8℃保存时间不超过1个月，而禽流感病毒抗原保存在-20℃。国内活疫苗的保护剂主要成分为脱脂牛奶、蔗糖、明胶等，保护剂组方简单、配制简便，抗原对温度敏感，如果在2℃-8℃条件下，保存期只有4个月-6个月，多数疫苗需要在-15℃以下保存。另外我国也有不少关于活疫苗的耐热保护剂的研究报道，而针对提高禽流感病毒血凝素HA稳定性的研究还未见任何报道。
发明内容
为克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种禽流感血凝素抗原保护剂，用于保护胚液中的禽流感病毒血凝素，极大的提高了胚液中禽流感病毒血凝素的稳定性，延长其保存期限。
本发明的另一目的在于提供一种提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，添加本发明的禽流感病毒血凝素保护剂，达到延长胚液中的禽流感病毒血凝素的保存期限。
为实现上述目的本发明所采用的技术方案如下：
一种禽流感血凝素抗原保护剂，其是由以重量百分比计的以下组分配制而成：
甘氨酸0.5-1% 异亮氨酸0.5-3% 丝氨酸0-7%
丙氨酸0.5-1% 苯丙氨酸1-5% 酪氨酸0-6%
缬氨酸1-2% 脯氨酸1-6% 半胱氨酸0.5-8%
亮氨酸0-3% 色氨酸0.5-4% 蛋氨酸0.5-5%
天冬酰胺0.5-4% 谷氨酰胺0.5-5% 苏氨酸0-3%
天冬氨酸0.5-6% 谷氨酸0-0.5% 赖氨酸0.5-2%
精氨酸1-10% 组氨酸0-5% 亚精胺1-20%
精胺0-10%； 葡萄糖0.5-20% 果糖5-40%
蔗糖 乳糖2-30% 白蛋白5-30%
甘油1-30% 明胶0-20% 葡聚糖0-2%；
各组分的重量百分比之和为100%。
一种提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，其包括以下步骤：
1）按照权利要求1的配方配制禽流感血凝素抗原保护剂；
2）在灭活的含有禽流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；
3）将步骤2）处理后的混合液中加入0.1-0.3ml甲醛溶液，并混合均匀；
4）在步骤3）处理后的混合液中加入粉末型PBS缓冲对使PBS缓冲盐浓度达到0.8-1.2mM/L，混匀；
5）将步骤4）处理后的混合液置于35-40℃的培养箱中保存即可。
本发明优选的方案中，步骤2）按照100ml禽流感胚液中加入8-12g禽流感血凝素抗原保护剂混合均匀。较佳的方案中，按照100ml禽流感胚液中加入10g禽流感血凝素抗原保护剂混合。
本发明一个优选的方案中，步骤4）中控制混合液的pH值为7.0-7.4。因为禽流感血液凝集素在pH较低时降解速度比较快，因此当维持pH值在上述范围之内有利于其保存。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明的提禽流感血凝素抗原保护剂高胚液中禽流感病毒稳定性，通过本发明所述的方法处理之后，使得胚液中禽流感病毒在37℃时间延长至少35天以上。
下面结合具体的实施方式对本发明作进一步详细说明。
具体实施方式
以下是本发明优选的实施例。
实施例1
按照表1中的配比配制禽流感血凝素抗原保护剂，并按照以下方法对含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液进行处理：在灭活的含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；处理后的混合液中加入0.2ml甲醛溶液，并混合均匀；然后在混合液中加入粉末型PBS缓冲对使PBS缓冲盐浓度达到1mM/L，混匀，最后将混合液置于37℃的培养箱中保存即可。
表1
| 成份 | 比例(%) | 成份 | 比例(%) | 成份 | 比例(%) |
| 甘氨酸 | 0.5 | 异亮氨酸 | 1 | 丝氨酸 | 3 |
| 丙氨酸 | 1 | 苯丙氨酸 | 2 | 酪氨酸 | 3 |
| 缬氨酸 | 1.5 | 脯氨酸 | 2 | 半胱氨酸 | 1 |
| 亮氨酸 | 1 | 色氨酸 | 0.5 | 蛋氨酸 | 1.5 |
| 天冬酰胺 | 1 | 谷氨酰胺 | 0.5 | 苏氨酸 | 1 |
| 天冬氨酸 | 0.5 | 谷氨酸 | 0.5 | 赖氨酸 | 0.5 |
| 精氨酸 | 10 | 组氨酸 | 1 | 亚精胺 | 2 |
| 精胺 | 2 | 葡萄糖 | 0.5 | 果糖 | 20 |
| 蔗糖 | 5 | 乳糖 | 2 | 甘油 | 10 |
| 白蛋白 | 20 | 明胶 | 5 | 葡聚糖 | 0.5 |
实施例2
按照表2中的配比配制禽流感血凝素抗原保护剂，并按照以下方法对含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液进行处理：在灭活的含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；处理后的混合液中加入0.1ml甲醛溶液，并混合均匀；然后在混合液中加入粉末型PBS缓冲对使PBS缓冲盐浓度达到0.8mM/L，混匀，最后将混合液置于35℃的培养箱中保存即可。
表2
| 成份 | 比例(%) | 成份 | 比例(%) | 成份 | 比例(%) |
| 甘氨酸 | 1 | 异亮氨酸 | 0.5 | 丝氨酸 | 0 |
| 丙氨酸 | 0.5 | 苯丙氨酸 | 5 | 酪氨酸 | 6 |
| 缬氨酸 | 1 | 脯氨酸 | 1 | 半胱氨酸 | 8 |
| 亮氨酸 | 0 | 色氨酸 | 0.5 | 蛋氨酸 | 0.5 |
| 天冬酰胺 | 4 | 谷氨酰胺 | 0.5 | 苏氨酸 | 3 |
| 天冬氨酸 | 0.5 | 谷氨酸 | 0 | 赖氨酸 | 0.5 |
| 精氨酸 | 10 | 组氨酸 | 5 | 亚精胺 | 20 |
| 精胺 | 0 | 葡萄糖 | 10 | 果糖 | 5 |
| 蔗糖 | 5 | 乳糖 | 2 | 甘油 | 1 |
| 白蛋白 | 8 | 明胶 | 1.5 | 葡聚糖 | 0 |
实施例3
按照表3中的配比配制禽流感血凝素抗原保护剂，并按照以下方法对含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液进行处理：在灭活的含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；处理后的混合液中加入0.3ml甲醛溶液，并混合均匀；然后在混合液中加入粉末型PBS缓冲对使PBS缓冲盐浓度达到1.2mM/L，混匀，最后将混合液置于40℃的培养箱中保存即可。
表3
| 成份 | 比例(%) | 成份 | 比例(%) | 成份 | 比例(%) |
| 甘氨酸 | 0.5 | 异亮氨酸 | 0.5 | 丝氨酸 | 7 |
| 丙氨酸 | 1 | 苯丙氨酸 | 1 | 酪氨酸 | 0 |
| 缬氨酸 | 2 | 脯氨酸 | 6 | 半胱氨酸 | 0.5 |
| 亮氨酸 | 3 | 色氨酸 | 4 | 蛋氨酸 | 0.5 |
| 天冬酰胺 | 0.5 | 谷氨酰胺 | 5 | 苏氨酸 | 0 |
| 天冬氨酸 | 6 | 谷氨酸 | 0.5 | 赖氨酸 | 2 |
| 精氨酸 | 1 | 组氨酸 | 0 | 亚精胺 | 1 |
| 精胺 | 10 | 葡萄糖 | 1 | 果糖 | 20 |
| 蔗糖 | 10 | 乳糖 | 2 | 甘油 | 5 |
| 白蛋白 | 5 | 明胶 | 3 | 葡聚糖 | 2 |
对比实施例1
在100毫升灭活的含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液中加入10毫升纯水，并且加入粉末型PBS缓冲对使其盐浓度达到1mM/L，同时加入0.2毫升甲醛溶液，混匀，并且放入37℃培养箱培养，作为对照组。检测本发明实施例1-3和对照组的禽流感病毒滴度（即HA价）；比较结果见表4。
表4
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (5)
1.一种禽流感血凝素抗原保护剂，其特征在于其是由以重量百分比计的以下组分配制而成：
甘氨酸1% 异亮氨酸0.5% 丙氨酸0.5%
苯丙氨酸5% 酪氨酸6% 缬氨酸1 %
脯氨酸1% 半胱氨酸8% 色氨酸0.5%
蛋氨酸0.5% 天冬酰胺4% 谷氨酰胺0.5%
苏氨酸3% 天冬氨酸0.5% 赖氨酸0.5%
精氨酸10% 组氨酸5% 亚精胺20%
葡萄糖10% 果糖5% 蔗糖5%
乳糖2% 白蛋白8% 甘油1%
明胶1.5%
各组分的重量百分比之和为100%。
2.一种提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，其特征在于其包括以下步骤：
1）按照权利要求1的配方配制禽流感血凝素抗原保护剂；
2）在灭活的禽流感胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；
3）将步骤2）处理后的混合液中加入0.1-0.3ml甲醛溶液，并混合均匀；
4）在步骤3）处理后的混合液中加入粉末型PBS缓冲对使PBS缓冲盐浓度达到0.8-1.2mM/L，混匀；
5）将步骤4）处理后的混合液置于35-40℃的培养箱中保存即可。
3.根据权利要求2所述的提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，其特征在于：步骤2）按照100ml禽流感胚液中加入8-12g禽流感血凝素抗原保护剂混合均匀。
4.根据权利要求3所述的提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，其特征在于：步骤2）按照100ml禽流感胚液中加入10g禽流感血凝素抗原保护剂混合。
5.根据权利要求2所述的提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，其特征在于：步骤4）中控制混合液的pH值为7.0-7.4。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210489259.8A CN102942619B (zh) | 2012-11-26 | 2012-11-26 | 禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210489259.8A CN102942619B (zh) | 2012-11-26 | 2012-11-26 | 禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102942619A CN102942619A (zh) | 2013-02-27 |
| CN102942619B true CN102942619B (zh) | 2014-06-04 |
Family
ID=47725628
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210489259.8A Active CN102942619B (zh) | 2012-11-26 | 2012-11-26 | 禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102942619B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130315955A1 (en) * | 2012-04-13 | 2013-11-28 | Protein Sciences Corporation | Stability and potency of hemagglutinin |
| CN108018210B (zh) * | 2017-12-30 | 2020-11-06 | 华中农业大学 | 一种猪霍乱沙门氏菌疫苗菌株的保藏方法及其专用保护剂 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101623994B1 (ko) * | 2007-12-26 | 2016-05-24 | 기타사토 다이이치 산쿄 백신 가부시키가이샤 | 안정하게 장기간 보존할 수 있는 일본뇌염 백신의 제조방법 및 그 백신의 용도 |
-
2012
- 2012-11-26 CN CN201210489259.8A patent/CN102942619B/zh active Active
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 禽流感疫苗生产中抗原保存方法研究;赵春红 等;《中国优秀硕士学位论文全文数据库》;20081231;全文 * |
| 禽流感疫苗研究进展;陈全姣 等;《中国生物工程杂志》;20040430;第24卷(第4期);34-38 * |
| 赵春红 等.禽流感疫苗生产中抗原保存方法研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库》.2008,全文. |
| 陈全姣 等.禽流感疫苗研究进展.《中国生物工程杂志》.2004,第24卷(第4期),34-38. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102942619A (zh) | 2013-02-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Capua et al. | Avian influenza: recent developments | |
| CN103555670B (zh) | 用于病毒增殖的非致瘤性mdck细胞系 | |
| CN102215865B (zh) | 病毒纯化方法 | |
| Cox et al. | A fast track influenza virus vaccine produced in insect cells | |
| JP5388842B2 (ja) | インフルエンザワクチン含有凍結乾燥製剤、及びその製造方法 | |
| Terregino et al. | Evaluation of the protection induced by avian influenza vaccines containing a 1994 Mexican H5N2 LPAI seed strain against a 2008 Egyptian H5N1 HPAI virus belonging to clade 2.2. 1 by means of serological and in vivo tests | |
| Meghrous et al. | Development of a simple and high-yielding fed-batch process for the production of influenza vaccines | |
| CN102942619B (zh) | 禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法 | |
| US20180243405A1 (en) | Inactivated virus compositions and methods of preparing such compositions | |
| EP3305328A1 (en) | Non-gelatin vaccine protectant composition and live attenuated influenza vaccine | |
| CN102631672B (zh) | 一种冻干灭活乙型脑炎疫苗 | |
| CN109055255B (zh) | 猪肺炎支原体培养基及制备方法和其在疫苗中的应用 | |
| CN103110943B (zh) | 一种可替代氢氧化铝的新型疫苗佐剂 | |
| CN103209707A (zh) | 病毒疫苗以及其制备工艺 | |
| CN103656660A (zh) | 一种动物活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用 | |
| CN103232976A (zh) | 用于病毒生产的培养基补充物 | |
| CN105462911A (zh) | 用于培养病毒的无血清培养液及其制备方法 | |
| CN105441376B (zh) | 一种用于培养病毒的无血清培养基及其制备方法 | |
| CN103705935B (zh) | 一种耐热冻干保护剂及其制备方法和应用 | |
| Yang et al. | Type I hypersensitivity is induced in cattle PBMC during Bluetongue virus Taiwan isolate infection | |
| CN100553676C (zh) | H9亚型禽流感hi稳定抗原 | |
| A Babizhayev et al. | L-carnosine modulates respiratory burst and reactive oxygen species production in neutrophil biochemistry and function: may oral dosage form of non-hydrolized dipeptide L-carnosine complement anti-infective anti-influenza flu treatment, prevention and self-care as an alternative to the conventional vaccination? | |
| CN102671207B (zh) | 一种鸡新城疫和鸡传染性支气管炎二联活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法 | |
| Tang et al. | Avian and swine influenza viruses | |
| CN111057683A (zh) | 一种鸡胚接种用病毒稀释液及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20160613 Address after: 526238 Guangdong Province Wang Zhaoqing City Economic Development Zone Industrial Park abundance Patentee after: Zhaoqing Dahuanong Biological Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee after: GUANGDONG WENS DAHUANONG BIOTECHNOLOGY CO., LTD. Address before: 527400 Guangdong Province Wang Zhaoqing City Economic Development Zone Industrial Park abundance Patentee before: Zhaoqing Dahuanong Biological Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee before: Guangdong Dahuanong Animal Health Products Co., Ltd. |