CN102924602B

CN102924602B - 金离子吸附蛋白表面展示系统及富集并回收金离子的方法

Info

Publication number: CN102924602B
Application number: CN201110226028.3A
Authority: CN
Inventors: 陈鹏; 赵劲; 魏炜; 陈兴
Original assignee: SHENZHEN IPI BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: Shenzhen Y Gene Biotech Co ltd
Priority date: 2011-08-08
Filing date: 2011-08-08
Publication date: 2015-06-17
Anticipated expiration: 2031-08-08
Also published as: CN102924602A

Abstract

本发明提供一种金离子吸附蛋白表面展示系统及富集并回收金离子的方法。其中所述金离子吸附蛋白表面展示系统包含大肠杆菌外膜蛋白A片段和金离子结合蛋白GolB片段；本发明还提供一种金离子回收系统，其除了包含上述的金离子吸附蛋白表面展示系统外，进一步包含金离子诱导蛋白片段和antigen43片段。本发明所述的金离子吸附蛋白表面展示系统及富集并回收金离子的方法能够克服现有技术的缺点，不会造成二次污染；其在存在多种重金属离子时仍能高效吸附其中的金离子；而且是环境友好型的，不会造成对环境的影响；且所述的金离子吸附蛋白容易制备、成本较低、操作方便。

Description

金离子吸附蛋白表面展示系统及富集并回收金离子的方法

技术领域

本发明涉及生物工程学领域，尤其涉及通过基因与蛋白质工程改造细菌的技术，具体涉及金离子吸附蛋白表面展示系统及富集并回收金离子的方法。

背景技术

如何合理地将自然界中的重金属应用到人类的生产生活中，使之与生态环境保护可持续性和谐发展是目前科技工作者面临的重大挑战。一方面，一些重金属在很低浓度时就会对生物体具有极强的毒性，且与有机化合物不同，重金属具有富集性，在自然环境中很难被降解。近年来，随着我国经济建设的迅猛发展，对重金属的开采、冶炼、加工及商业制造活动日益增多，造成不少如铅、汞、镉等的重金属进入大气、水、土壤中，引发了一系列严重的污染事件，对生态环境造成了极大的危害。重金属造成的急性中毒和各类人体慢性疾病如老年痴呆症，也正在时刻威胁着人类的健康。而另一方面，随着科技水平的日新月异，那些化学性质稳定、物理属性优良的重金属如金、银、铜、铂、钯等，被广泛应用在了电子、通讯、航空航天、化工、医疗等部门及与人们日常生活相关的各类生活日用品中。但是，由于生产工艺的限制，在这一系列生产活动所产生的废弃物，例如工业废水中仍然含有大量的重金属离子，这既会对生态环境造成破坏，也使得生产成本居高不下。目前对于工业废水中重金属离子的检测和富集主要采用的都是物理吸附和化学试剂法，这些方法一般检测灵敏度较低，尤其是对各种性质相近的重金属离子的区分度较差，无法实现对某种特定重金属离子的特异识别与去除。而采用大型分析设备如ICP-MS(电感耦合等离子体质谱)，虽然其对重金属离子的检测灵敏度更高，但是操作手段繁琐，耗时较长，必须要将样品送到指定部门由专业人员进行检测，难以实现现场的快速检验和实时监测，且在检测的基础之上再利用这些大型仪器实现重金属的特异吸附就更加的困难。除此之外，化学检测手段中所使用的各类化学试剂通常会对环境造成二次污染，不是一种环境友好的水体中重金属离子的处理方式。因此，如何开发一种对重金属离子具有高灵敏度，强特异吸附性，且不需大型仪器设备，同时又不产生任何二次污染的环境友好的手段，是目前该领域亟需解决的关键问题。

利用生物体内的金属特异结合蛋白来达到对某种金属的特异识别，是近年来迅速崛起的一种先进的检测手段，以其检测灵敏度高、特异性强，操作简单方便，尤其适用于生物样品的检测等优点，日益得到人们的青睐。在重金属离子检测方面，由于很多重金属离子的电子层、结构、价态等物理和化学性质极为接近，目前科学家们很难设计出选择性很强，能够仅仅特异识别某种重金属离子的化学试剂，这使得该类检测的选择性通常都比较低。与此相反，自然界中存在有多种选择性极高、对金属离子特异识别性极强的金属蛋白质。铁、铜等是自然界微生物赖以生存的物质基础，而对于铅、镉、汞、金、银等重金属离子富集的环境，微生物必须具备识别和排异这类重金属离子的能力才可以生存下来。因此，经过亿万年的选择进化，很多微生物都具备了相应的金属调控蛋白质，用以检测和调节各种重金属离子在体内的含量。这些金属蛋白对重金属离子的特异结合能力远远超过了化学家所能设计的极限。近年来，以这类金属蛋白为模板，开发相应的生物传感器是重金属离子检测领域的热点方向。而进一步的，如何在这些金属传感器的基础上，达到检测识别与特异吸附同时实现的目的，对这一领域提出了更高的要求。一种解决这一挑战的方法，是把金属识别蛋白与微生物体分别作为“检测单元”和“吸附单元”同时加以利用。当目标金属存在时，“检测单元”将首先开始工作，并有效地激活后续“吸附单元”-工程化的微生物菌株，这些特殊的菌株将实现特异吸附目标金属的能力。

现有的重金属离子的处理回收方法主要是化学方法，通过加入化学试剂与重金属离子形成沉淀或者悬浮的方法达到回收重金属的目的。但是化学方法有三个缺点。第一是化学方法有可能由于加入的化学试剂的量不合适而造成二次污染；第二是化学方法选择性不够高，尤其是处理性质极相近的各种重金属效果不好，即使回收得到了一定的目的金属，纯度也不高，还需要进一步处理；第三是化学方法回收工业废水中的重金属，所产生污水对于环境不友好，沉淀剂等化学试剂可能对于自然环境造成更大的破坏。

金是重金属中少有的化学、物理、电子性能优异的金属，应用领域非常广。而作为生产材料，金本身所具有的货币金属性质又使其成为控制生产成本，实现利润最大化的重要因素。但是现有的方法很难实现对工业废水中金离子的高效选择性富集和回收。

发明内容

本发明的目的在于提供一种金离子吸附蛋白表面展示系统，其包含大肠杆菌外膜蛋白A片段和金离子结合蛋白GolB片段。

所述大肠杆菌外膜蛋白A片段的DNA序列如SEQ ID NO:3所示；所述金离子结合蛋白GolB片段的DNA序列如SEQ ID NO:6所示。

优选地，所述金离子吸附蛋白表面展示系统的DNA序列如SEQ IDNO:7所示。

本发明还提供上述的金离子吸附蛋白表面展示系统的制备方法，其特征在于，主要包含步骤：

1)从大肠杆菌基因组DNA中扩增出编码大肠杆菌外膜蛋白A片段的DNA序列；

2)从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中扩增出编码金离子结合蛋白GolB片段的DNA序列；

3)以步骤1)和2)的扩增产物为模板，扩增出编码OmpA-GolB融合蛋白的DNA序列；

4)将步骤3)的扩增产物连接到表达载体上，转化到宿主菌进行表达，即获得所述的金离子吸附蛋白表面展示系统。

上述制备方法中，步骤1)中进行扩增时使用SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2所示的引物；步骤2)中进行扩增时使用SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示的引物；步骤3)中进行扩增时使用SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:5所示的引物。

上述制备方法中，步骤1)所述大肠杆菌外膜蛋白A片段的DNA序列如SEQ ID NO:3所示，步骤2)所述金离子结合蛋白GolB片段的DNA序列如SEQ ID NO:6所示，步骤3)所述金离子吸附蛋白表面展示系统的DNA序列如SEQ ID NO:7所示。

上述制备方法中，步骤4)所述表达载体为pBAD大肠杆菌表达载体。

本发明还提供一种表达上述的金离子吸附蛋白表面展示系统的宿主菌，该宿主菌优选为含pBAD表达载体的大肠杆菌。

本发明还提供一种金离子回收系统，其除了包含上述的金离子吸附蛋白表面展示系统外，还进一步包含金离子诱导蛋白片段和antigen43片段(SEQ ID NO:11所示)。

所述金离子诱导蛋白片段的DNA序列如SEQ ID NO:10所示。

本发明还提提供上述的金离子回收系统的制备方法，其除了包含上述的步骤1)至4)外，还进一步包含下述步骤：

5)从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA中扩增出编码金离子诱导蛋白片段的DNA序列；

6)使用DNA限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切步骤1)的扩增产物，并将酶切片段连接到含有antigen43基因的表达载体上，转化到宿主菌进行表达。

上述制备方法中，步骤5)中进行扩增时使用SEQ ID NO:8、SEQ IDNO:9所示的引物；步骤6)所述表达载体为含有antigen43基因的pSB1C3大肠杆菌表达载体。

本发明还提供一种表达上述金离子回收系统的宿主菌，该宿主菌为含pSB1C3表达载体的大肠杆菌。

本发明还有一个目的是提供一种应用上述的两种宿主菌富集并回收废水中的金离子的方法，其主要包含步骤：

1)培养表达上述金离子吸附蛋白表面展示系统的第一宿主菌；

2)培养表达上述金离子回收系统的第二宿主菌；

3)将步骤1)培养的第一宿主菌加入到含金离子的废水中，加入诱导剂并充分混合，静置；

4)将步骤2)培养的第二宿主菌加入步骤3)所得的混合液中，当水体中底部产生沉淀后，过滤水体，回收吸附有金离子的菌体；

5)用酶制剂处理步骤4)回收的菌体，分离得到回收的金离子；

6)处理后的菌体作为菌种循环使用，重复步骤1)至5)。

根据上述的方法，步骤3)所述的诱导剂优选是阿拉伯糖；步骤5)所述的酶制剂为木瓜蛋白酶。

本发明所述金离子吸附蛋白表面展示系统能够克服现有技术的三个缺点。首先，菌体在吸附金离子之后能够自动聚沉，可以通过过滤等方法回收，不会造成二次污染。第二，本发明是针对重金属性质相近的特点，选择了可高效特异吸附金离子的模型，其在存在多种重金属离子时仍能高效吸附金离子。最后，本发明是环境友好型的，不会造成环境的影响。另外，菌体采用的是非致病性的大肠杆菌，既不会对人体造成影响，甚至在自然环境下也难以生存，所以不会造成微生物污染。另外，传统的离子交换法和膜过滤法等等进行比较，本发明具备价格便宜，操作方便等的优点。

为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下。

附图说明

图1是OmpA-GolB融合蛋白表达质粒构建图谱。

图2是OmpA-GolB融合蛋白表达质粒的电泳鉴定图,其中M是DNA分子量标准，泳道1是OmpA-Golb融合蛋白表达质粒。

图3是Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene with antigen43)融合蛋白表达质粒构建图谱。

图4是Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene with antigen43)融合蛋白表达质粒的电泳鉴定图，其中M是DNA分子量标准，泳道1是Antigen43-金离子诱导基因融合蛋白表达质粒。

图5是OmpA-GolB融合蛋白表达质粒测序图谱。

图6是Antigen43-金离子诱导基因融合蛋白表达质粒测序图谱。

图7是水体中金离子的吸附效率示意图。

图8A-8B分别是菌体金离子回收效率及循环使用后菌体生长水平示意图。

图9是水体中存在多种重金属离子时对金离子的选择性吸附示意图。

具体实施方式

实施例1 OmpA-GolB融合蛋白的构建及鉴定

1.大肠杆菌外膜蛋白A(OmpA)片段的基因扩增

根据所需扩增目的DNA序列和碱基互配原理，设计特异引物Ompa1(SEQ ID NO:1)和Ompa2(SEQ ID NO:2)，从大肠杆菌基因组DNA(NCBI中的引用位置：NC_000913)中扩增出编码大肠杆菌外膜蛋白A(OmpA)第1位至第159位氨基酸的DNA序列(SEQ ID NO:3)。

反应条件如下：

PCR条件：

第一步 95℃ 2分钟

第二步 95℃ 0.5分钟

第三步 63℃ 0.5分钟

第四步 72℃ 0.5分钟

第五步重复第二步至第四步，29个循环

第六步 72℃ 10分钟

第七步 4℃保温。

回收PCR产物，备用。

2.金离子结合蛋白GolB片段的基因扩增

根据所需扩增目的DNA序列和碱基互配原理，设计特异引物Golb1(SEQ ID NO:4)和Golb2(SEQ ID NO:5)从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA(NCBI中的引用位置：NC_003197)中扩增出编码金离子结合蛋白GolB的DNA序列(SEQ ID NO:6)，并在其C端加上编码FLAG-tag的序列：

反应条件如下：

PCR条件：

第一步 95℃ 2分钟

第二步 95℃ 0.5分钟

第三步 60℃ 0.5分钟

第四步 72℃ 0.5分钟

第五步重复第二步至第四步，29个循环

第六步 72℃ 10分钟

第七步 4℃保温

回收PCR产物，备用。

3.OmpA-GolB融合蛋白的基因扩增

使用特异引物Ompa1(SEQ ID NO:1)和Golb2(SEQ ID NO:5)以上述第1和2点回收的PCR产物为模板，采用重叠PCR扩增出编码用于大肠杆菌表面展示的OmpA-GolB融合蛋白的DNA序列(SEQ ID NO:7)：

反应条件如下：

PCR条件：

第一步 95℃ 2分钟

第二步 95℃ 0.5分钟

第三步 60℃ 0.5分钟

第四步 72℃ 0.5分钟

第五步重复第二步至第四步，29个循环

第六步 72℃ 10分钟

第七步 4℃保温

回收PCR产物，备用。

4.OmpA-GolB融合蛋白表达质粒的构建及鉴定

1)使用DNA限制性内切酶NcoI和HindIII酶解上述第3点中得到的DNA片段(即SEQ ID NO:7)，然后使用T4DNA连接酶插入含有可由阿拉伯糖诱导启动的araBAD启动子的大肠杆菌表达载体pBAD(由北京大学生命科学学院昌增益教授实验室葛曦博士馈赠)中，OmpA-GolB融合蛋白表达质粒构建图谱请详见图1。

反应条件：

37℃水浴10小时。

反应条件：

16℃水浴16小时。

2)OmpA-GolB融合蛋白表达质粒的提取与鉴定，结果请见图2。

实施例2 Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene withantigen43)融合蛋白表达质粒的构建及鉴定

1.金离子诱导基因的扩增

使用特异引物pGolts1(SEQ ID NO:8)和pGolb2(SEQ ID NO:9)从鼠伤寒沙门氏菌基因组DNA(NCBI中的引用位置：NC_003197)中扩增出编码Gold inductive gene的DNA序列(SEQ ID NO:10)。

反应条件如下：

PCR条件：

第一步 95℃ 3分钟

第二步 95℃ 1分钟

第三步 60℃ 2分钟

第四步 72℃ 4分钟

第五步重复第二步至第四步，29个循环

第六步 72℃ 10分钟

第七步 4℃保温

回收PCR产物，备用。

2.Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene with antigen43)融合蛋白表达质粒的构建与鉴定

1)使用DNA限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切上述第1点得到的DNA片段(SEQ ID NO:10)，然后使用T4DNA连接酶插入含有antigen43基因的大肠杆菌表达载体pSB1C3(由2010iGEM大赛总部馈赠)中，Antigen43-金离子诱导基因融合蛋白表达质粒构建图谱请详见图3。

反应条件：

37℃水浴10小时。

反应条件：

16℃水浴16小时。

2)Antigen43-金离子诱导基因融合蛋白表达质粒的提取与鉴定，结果请见图4。

实施例3 OmpA-GolB融合蛋白、Antigen43-金离子诱导基因(Goldinductive gene with antigen43)融合蛋白转入宿主菌及宿主菌的培养

1.OmpA-GolB融合蛋白转入宿主菌

1)将用于表达OmpA-GolB融合蛋白的质粒通过化学转化方法导入大肠杆菌细胞DH10b中，通过在含有氨苄青霉素(50μg mL^-1)的LB固体培养基上于37℃中培养16小时，从中筛选出阳性克隆并加以保存。

感受态细胞的热激转化和稀释涂布步骤如下：

①将连接反应的产物于感受态细胞(DH10b)中，手指轻弹混匀；

②冰浴30分钟后42℃热激95秒，快速转移至冰上；

③冰浴2分钟后每管加入事先37℃预热好的LB培养基900μl，37℃，200rpm培养1小时使其复苏；

④3000rpm离心30秒，移去0.9ml上清后，取下层0.1ml涂布相应的抗性平板，37℃培养10小时。

2)重组菌的筛选和鉴定

采用常规菌落PCR法和抽提阳性克隆的质粒后酶切鉴定法，具体可参见《TAKARA限制性内切酶采购目录和技术指南》。测序由上海生物工程技术服务公司完成。OmpA-GolB融合蛋白表达质粒测序图谱请见图5。

2.Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene with antigen43)融合蛋白转入宿主菌

1)将用于表达Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene withantigen43)融合蛋白的质粒通过化学转化方法导入大肠杆菌细胞DH10b中，通过在含有氯霉素(34μg mL^-1)的LB固体培养基上于37℃中培养16小时，从中筛选出阳性克隆并加以保存。

感受态细胞的热激转化和稀释涂布步骤如下：

①将连接反应的产物于感受态细胞(DH10b)中，手指轻弹混匀；

②冰浴30分钟后42℃热激95s，快速转移至冰上；

2)重组菌的筛选和鉴定

采用常规菌落PCR法和抽提阳性克隆的质粒后酶切鉴定法，具体可参见《TAKARA限制性内切酶采购目录和技术指南》。测序由上海生物工程技术服务公司完成。Antigen43-金离子诱导基因融合蛋白表达质粒测序图谱请见图6。

3.诱导培养

1)将用于表达OmpA-GolB融合蛋白的大肠杆菌菌种接入适量含有氨苄青霉素(50μg mL^-1)的LB液体培养基中于37℃中培养过夜；将过夜培养菌液1:100稀释入适量含有氨苄青霉素(50μg mL^-1)LB液体培养基中于37℃中培养至培养液OD₆₀₀＝0.6，向培养液中加入终浓度为0.002％的阿拉伯糖进行诱导，培养液在37℃中继续培养过夜。

2)将用于表达Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene withantigen43)融合蛋白的大肠杆菌菌种接入适量含有氯霉素(34μg mL^-1)的LB液体培养基中于37℃中培养过夜；将过夜培养菌液1:100稀释入适量含有氯霉素(34μg mL^-1)LB液体培养基中于37℃中培养过夜。

实施例4 OmpA-GolB融合蛋白的金离子吸附能力的检测

1.将用于表达OmpA-GolB融合蛋白的大肠杆菌菌种接入适量含有氨苄青霉素(50μg mL^-1)的LB液体培养基中于37℃中培养过夜；将过夜培养菌液1:100稀释入适量含有氨苄青霉素(50μg mL^-1)LB液体培养基中于37℃中培养至培养液OD₆₀₀＝0.6，向培养液中同时加入终浓度为0.002％的阿拉伯糖和终浓度为50μM的金离子进行诱导培养和金离子吸附，培养液在37℃中继续培养过夜；

2.培养过夜的细菌培养液通过离心(8000转/分钟，10min)收集后，用去离子水清洗至少3次；

3.清洗后的菌体经过真空冻干成粉末状固体，称重；

4.采用ICP-AES标准流程灰化消解后，通过电感偶和等离子体发射光谱仪对金离子结合情况进行检测。

具体检测结果请见图7，与未经改造的对照菌株相比，其对水体中金离子的吸附能力提高了近12倍，达到干重每克菌体可吸附金约2.4毫克。

实施例5 菌体的分离和金离子的回收

1.吸附有金离子的大肠杆菌工程菌体细胞可通过离心(8000转/分钟，10min)的方式，从液体中分离获得；

2.从吸附有金离子的大肠杆菌工程细胞回收金离子，将离心分离得到的大肠杆菌工程菌体细胞重悬于适量含有5mg mL^-1木瓜蛋白酶Papain的PBS(pH7.4)缓冲溶液中，反应液于30℃反应3小时；

3.经过木瓜蛋白酶处理后的反应液通过离心(8000转/分钟，10min)，将液体上清与可循环使用的大肠杆菌工程菌体细胞分离开来。液体上清中含有从菌体细胞上回收得到的金离子。

采用酶降解法对吸附有金离子的菌体进行处理后，金(离子)的有效回收效率可达到近40％(图8A-8B)。其在存在多种重金属离子时仍能高效吸附金离子(图9)。

实施例6 金离子诱导表达Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductivegene with antigen43)融合蛋白的大肠杆菌菌体沉聚的检测方法

1.将用于表达Antigen43-金离子诱导基因(Gold inductive gene withantigen43)融合蛋白的大肠杆菌菌种接入适量含有氯霉素(34μg mL^-1)的LB液体培养基中于37℃中培养过夜；将过夜培养菌液1:100稀释入适量含有氯霉素(34μg mL^-1)LB液体培养基中于37℃中培养过夜；

2.将培养过夜的菌体用磷酸缓冲液(PBS pH7.4)重新悬浮均匀，至OD₆₀₀＝1.00，加入终浓度为0.15mM的氯化钠，充分混匀；

3.向反应液中加入终浓度为50μM的金离子，随着时间的增加，反应液中的菌体会聚集沉淀下来。

本发明基于一系列能够和金离子特异结合的MerR家族蛋白：GolS和GolB蛋白，其中在宿主菌中，GolB蛋白的表达还可以通过GolS蛋白来进行调控。通过上述的示例性实施例，将GolB蛋白与细胞外膜表达蛋白相融合，并在前端加入araBAD的启动子，连接到质粒中后导入非致病性的大肠杆菌细胞体内，使得融合蛋白能够在微量阿拉伯糖的诱导下大量表达，该种蛋白的特点是能够在细菌的外膜表面上实现对金离子的高效特异性结合。因此该种经过改造后的工程菌对金离子的吸附效果很好，而且经过回收处理的菌体还可以作为菌种进行二次循环利用，其吸附效率与处理前没有显著差异。另一方面，利用GolS蛋白和antigen43抗体蛋白结合，并在两者之间加入了GolB蛋白的启动子，使得这个抗体蛋白也能够在金离子的诱导下表达使得菌体聚沉。

这样，将上述两者相结合的工程菌可以作含金工业废水的处理用：将菌液加入到废水中，在诱导剂的诱导下，菌体能够在细胞膜外大量表达GolB蛋白，将废水中的金离子结合。随后，在完成金离子的结合吸附后，细菌还能通过表达antigen43蛋白，自主性地聚集和沉淀，方便对菌体的回收。通过对菌体的酶处理和二次使用，本项发明最终能够通过生物手段实现对工业废水中重金属——金的可循环富集和回收。

虽然本发明已以较佳实施例披露如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域的技术人员，在不脱离本发明之精神和范围内，当可作些许之更动与改进，因此本发明之保护范围当视权利要求所界定者为准。

Claims

1.一种金离子吸附蛋白表面展示系统，其特征在于，包含大肠杆菌外膜蛋白A片段和金离子结合蛋白GolB片段，其中所述大肠杆菌外膜蛋白A片段的DNA序列如SEQ ID NO:3所示；所述金离子结合蛋白GolB片段的DNA序列如SEQ ID NO:6所示。

2.根据权利要求1所述的金离子吸附蛋白表面展示系统，其特征在于，所述金离子吸附蛋白表面展示系统的DNA序列如SEQ ID NO:7所示。

3.一种权利要求1至2任一项所述的金离子吸附蛋白表面展示系统的制备方法，其特征在于，包含步骤：

4.根据权利要求3所述的金离子吸附蛋白表面展示系统的制备方法，其特征在于，步骤1)中进行扩增时使用SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示的引物；步骤2)中进行扩增时使用SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示的引物；步骤3)中进行扩增时使用SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:5所示的引物。

5.根据权利要求3所述的金离子吸附蛋白表面展示系统的制备方法，其特征在于，步骤1)所述大肠杆菌外膜蛋白A片段的DNA序列如SEQ IDNO:3所示，步骤2)所述金离子结合蛋白GolB片段的DNA序列如SEQ IDNO:6所示，步骤3)所述金离子吸附蛋白表面展示系统的DNA序列如SEQID NO:7所示。

6.根据权利要求3所述的金离子吸附蛋白表面展示系统的制备方法，其特征在于，步骤4)所述表达载体为pBAD大肠杆菌表达载体。

7.一种宿主菌，其特征在于，表达权利要求1所述的金离子吸附蛋白表面展示系统。

8.根据权利要求7所述的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌为含pBAD表达载体的大肠杆菌。