CN102895264B - 红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其有效成分为红色诺卡氏菌细胞壁骨架，辅料是海藻糖、甘氨酸、木糖醇、羧甲基纤维素钠、赤藓糖醇、明胶粉和硬脂酸镁。

Description

红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药生物工程技术领域，特别是涉及利用红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）制备口含片及其制备方法。

背景技术

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）是红色诺卡氏菌03-PO-8经生物发酵、细胞破碎、蛋白酶处理和溶媒提取后制备而成的，目前市场上有注射剂产品上市。

红色诺卡氏菌细胞壁骨架是从红色诺卡氏菌(Nocardia rubra )经发酵、细胞破碎、酶处理、溶媒提取等制备而成的，为白色粉末 ,性质稳定 ,不溶于水、甲醇等有机溶媒。含有类脂化合物 (1 7 1 %)、多糖 (阿拉伯半乳聚糖 46 3 % )、粘肽 (主要为丙氨酸、谷氨酸、二氨基庚二酸、葡萄糖胺、胞壁酸 )作用与生物制品BCG、CP、干扰素、胸腺因子D等类似，同属生物反应调节剂，能增强体内T细胞、巨噬细胞和自然杀伤细胞的活性，促进细胞因子产生，与同类生物制剂比较具有免疫活性强、副作用小的特点，是一种非特异性的免疫调节剂，通过释放免疫调节信号，激活机体的非特异免疫调节系统，提高巨噬细胞、T细胞、NK细胞的活性；尤其是对巨噬细胞的增强作用较强，活化的巨噬细胞能够迅速消灭病原体，并能够增强机体的免疫力，与同类生物制剂比较具有免疫活性强、副作用小的特点。目前国内已开发成功2个剂型，均获批新生物制品Ⅱ类新药注册：①红色诺卡氏菌细胞壁骨架冻干粉针剂（商品名：胞必佳），于1998年批准上市，在抗肿瘤方面得到应用。②红色诺卡氏菌细胞壁骨架擦剂（商品名：纳可佳），应用于抗真菌感染、抗人乳头瘤病毒和治疗宫颈糜烂方面，其中国发明专利申请号200510077407.5和200510105533.7。近期的研究发现，红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）口服给药对治疗慢性萎缩性胃炎有效，对于乙肝病毒、人乳头病毒等均有显著抑制效果，临床应用价值高，值得进一步研究开发。

但红色诺卡氏菌细胞壁骨架口服吸收要求高，即要求吸收迅速，又要求口感好，稳定性好，现有口服制剂难以达到要求。本发明经过研究，发现用适当的辅料成分将其制备成口含片，具有外观平整，吸收好、疗效高、副作用小，口感好，稳定性好的特点，为此本发明提供一种含红色诺卡氏菌细胞壁骨架的口含片及其制造方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种吸收好、疗效高、副作用小的含红色诺卡氏菌细胞壁骨架为原料的口含片及其制备方法。

本发明红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其有效成分为红色诺卡氏菌细胞壁骨架，辅料是海藻糖、甘氨酸、木糖醇、羧甲基纤维素钠、赤藓糖醇、明胶粉和硬脂酸镁。

本发明红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，

其中每片含红色诺卡氏菌细胞壁骨架为100-1000μg。

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

海藻糖1-12%、

甘氨酸1-12%、

木糖醇35-50%、

羧甲基纤维素钠2-15%、

赤藓糖醇30-45%、

明胶粉1-3%、

硬脂酸镁0.5-2%。

优选的，本发明红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，

其中每片含红色诺卡氏菌细胞壁骨架为100-1000μg。

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

本发明所采用红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）属于现有技术，购买自福建省微生物研究所。

上述辅料中，海藻糖、甘氨酸对红色诺卡氏菌细胞壁骨架具有保护剂和赋形剂的作用，以增强红色诺卡氏菌细胞壁骨架的稳定性。

上述辅料中，木糖醇用作矫味剂，可增加口含片的硬度，且具有甜味适合口含。

上述辅料中，羧甲基纤维素钠用作粘合剂和崩解剂，可增加口含片硬度，同时促进口含片在口腔中的释放。

上述辅料中，赤藓糖醇用作填充剂和赋形剂。

上述辅料中，明胶粉用作口含片的粘合剂，以增加片剂硬度，延长含化时间，利于吸收。

上述辅料中，硬脂酸镁用作润滑剂，且具有良好的附着性，易于颗粒混匀，压片后光滑美观。

本发明的上述红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其配方组成是经过筛选获得的，筛选过程如下：

1、填充剂的选择

填充剂的作用是稀释和吸收红色诺卡氏菌细胞壁骨架、便于黏合压片成型和在口腔中融化，填充剂可以为：甘露醇、糖粉、赤藓糖醇、淀粉、乳糖。根据填充剂与主药（1:1）混合匀后制成颗粒的成型性、溶化性来选择最佳填充剂。结果如下表：

辅料	成型率（%）	溶化率（%）
			甘露醇	32.87	94.05
糖粉	56.80	94.32
			赤藓糖醇	69.11	43.18
淀粉	57.59	43.20
			乳糖	52.01	93.65

根据上述试验结果：成型率高利于压片，溶化率低延长含化时间利于舌下吸收。因此本发明选择赤藓糖醇作为最佳填充剂。

2、稳定剂的选择

稳定剂的作用是用来保护红色诺卡氏菌细胞壁骨架在药品保存期内稳定存在和避免其降低活性，稳定剂可为下列之一或其中两种以上的混合：甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、羟乙基淀粉、羟甲基淀粉、海藻糖、葡聚糖。本发明选择甘氨酸与海藻糖混合作为稳定剂，所制得的口含片稳定性考察结果符合要求，结果见表1、表2。但也不排除有其他更优方案。

3、矫味剂的选择

矫味剂的作用是改善药物制剂在含化时的口味以便于患者愉快接受及使用，常用的矫味剂有蔗糖、单糖浆、糖精钠、阿斯巴甜、山梨醇、木糖醇、甘露醇、甘油等，如果合用效果也很好。本发明出于患者和存储方面的考虑，为避免糖尿病患者食用蔗糖而不利健康，本发明选择木糖醇作为矫味剂。

4、粘合剂的选择

粘合剂的作用是增加制剂所用物料的粘性。本发明使用的粘合剂主要是在下列之一或其中两种的混合物筛选：羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、明胶。分别参照实施例1和实施例2的工艺条件，将羧甲基纤维素钠替换成羟丙甲纤维素与明胶配合使用制成相应的片剂，比对其片剂硬度如下表：

从上表可以看出，两种粘合剂都不影响外观，可根据口含片对硬度要求较大的性质，粘合剂选择羧甲基纤维素钠与明胶配合使用，所压含片硬度更符合要求。此外，羧甲基纤维素钠同时也起到崩解剂作用，促进口含片主药在口腔中的释放。

5、润滑剂的选择

润滑剂的作用是降低制剂与冲模壁间摩擦力的辅料，以防止摩擦力大而使压片困难。常用润滑剂有滑石粉、硬脂酸镁、微粉硅胶等，对比试验以相同用量（1%）加入N-CWS冻干粉中，测定其休止角，考察其对压片过程的影响，结果见下表。

润滑剂种类	滑石粉	硬脂酸镁	微粉硅胶
				休止角 / °	42.5	38.5	39.5

可见，硬脂酸镁润滑效果较好，故选定硬脂酸镁作为本品的润滑剂。

基于上述的工艺处方筛选，本发明最终确定配方辅料组成为：海藻糖、甘氨酸、木糖醇、羧甲基纤维素钠、赤藓糖醇、明胶粉和硬脂酸镁。

本发明的上述红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片的制备方法，系采用冻干粉末室温直接压片法，其压片工艺，依次含下列工序：

（1）将辅料组分中的明胶粉，在0℃以下粉碎，过80～100目筛备用。

（2）将木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇按组分重量配比称重，混匀。

（3）将配方量的红色诺卡氏菌细胞壁骨架加适量蒸馏水，采用超声波技术使药物充分分散在介质中，加入配方量海藻糖和甘氨酸，混匀，得N-CWS浆。

（4）将N-CWS浆在搅拌下加入到上述木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇的混合物中，搅拌均匀。

（5）将上述（4）的混合液，在-45～30℃温度下，冷冻干燥，得红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）冻干粉。

（6）在上述N-CWS的冻干粉中，加入配方量的明胶粉和硬脂酸镁，经12-16目筛混合，得冻干粉末。

（7）将N-CWS冻干粉末，在室温下直接压成圆片状，制得红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片。

本发明红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片及其制备方法，与现有技术相比具有如下显著优点和明显效果：

1. 红色诺卡氏菌细胞壁骨架与同类生物制剂比较有增强机体免疫活力强、副作用小的特点。同类生物制剂：卡介苗（BCG）、短小棒状杆菌（CP）、沙培林（OK432，也叫康赛宁）、胞代佳（PVI）等，它们由细菌培养经灭活后的菌体制成的制剂或冻干品，菌体未经破碎处理，副作用较大，会引起寒战、高烧、恶心、呕吐、头痛、关节痛，甚至出现白血球、血小板下降，血压降低，有的暂时性肾功能不全等。红色诺卡氏菌细胞壁骨架不但没有出现这些副作用，还能诱导机体产生干扰素（为干扰素的诱生剂）、NO，白介素-2、LAK细胞和肿瘤坏死因子，与IL-2联合用药能提高免疫活性，即有协同作用。

2. 本发明为红色诺卡氏菌细胞壁骨架的口含片，填补在现有技术和市场上无口服红色诺卡氏菌细胞壁骨架的空白，在取得红色诺卡氏菌细胞壁骨架疗效的同时，克服注射带来的不便和痛苦。

3. 在人口腔和舌下含有丰富的淋巴组织，口含给药后，口含片在唾液中缓慢溶解释药，通过口腔粘膜快速吸收，激活淋巴系统，并进一步放大此免疫激活效应，从而迅速发挥抗肿瘤、抗感染的免疫调节作用。口腔粘膜吸收还可避免胃肠道pH及酶的不良影响，避免肝脏对药物的破坏，故其吸收效果好。

4. 本发明口含片可用于多种病毒性疾病如乙型肝炎、流感、人乳头瘤病毒感染等治疗的药物，对口腔溃疡、咽炎、喉炎、慢性萎缩性胃炎等都有一定的治疗效果，并可用于某些肿瘤的辅助治疗。

5. 本发明红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，剂量准确，使用、携带、运输、贮存方便，适于自动化生产，质量易于控制。

6. 本发明的红色诺卡氏菌细胞壁骨架冻干粉末常温压片的方法，生产工艺简便易于操作。不使用任何有害物质，制造过程安全，无三废排放。采用冷冻干燥制备红色诺卡氏菌细胞壁骨架粉末，成品稳定性高。

为更好说明本发明产品在稳定性和存储方面的优势，故而取按照实施例1、实施例2方法制备的红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，按模拟上市小包装，置于温度25℃±2℃、RH60%±10%的稳定性箱中，分别于3、6、9、12个月取样，测定各项指标，结果见表1、表2。

表1：实施例1  N-CWS（100μg）口含片稳定性试验结果

考察项目	0月	3月	6月	9月	12月
						水分（%）	1.7	1.8	2.0	2.2	2.3
糖含量（μg）	39	38.8	38.7	38.6	38.6
						抑瘤率（%）	70.8	70.8	70.5	70.4	70.4

表2：实施例2  N-CWS（200μg）口含片稳定性试验结果

考察项目	0月	3月	6月	9月	12月
						水分（%）	1.6	1.8	1.9	2.0	2.2
糖含量（μg）	76	75.8	75.6	75.6	75.5
						抑瘤率（%）	78	77.6	77.5	77.8	77.4

结果表明红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片在25℃±2℃、RH60%±10%条件下放置12个月，其糖含量和药物活性基本未发生变化，稳定性良好。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

本发明的一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其配方为：

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）100μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

其制备过程如下：

（1）取明胶粉在0℃以下粉碎，过100目筛备用。

（2）将木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇按配方重量配比称重，混匀。

（3）将配方量的红色诺卡氏菌细胞壁骨架加适量蒸馏水，采用超声波技术使药物充分分散在介质中，加入配方量海藻糖和甘氨酸，混匀，得N-CWS浆。

（4）将N-CWS浆在搅拌下加入到上述木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇的混合物中，适当稀释至成含固体成分量约为45-55%的混合浆。

（5）将上述混合浆在-45～30℃温度下，冷冻干燥16-20小时，水分控制在不高于3%，得红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）冻干粉。

（6）在上述N-CWS的冻干粉中，加入配方量的明胶粉和硬脂酸镁，经12-16目筛混合，得冻干粉末。

（7）将N-CWS冻干粉末，在室温下直接压成圆片状，制得每片1g的红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）口含片。

（8）经质量检测，包装后得红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）口含片成品。

实施例2

本发明的一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其配方为：

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）200μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

制备方法与实施例1相同。

实施例3

本发明的一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其配方为：

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）400μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

制备方法与实施例1相同。

实施例4

本发明的一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其配方为：

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）800μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

制备方法与实施例1相同。

实施例5

本发明的一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其配方为：

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）1000μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

制备方法与实施例1相同。

实施例6

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）200μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

海藻糖1%、

甘氨酸1%、

木糖醇50%、

羧甲基纤维素钠15%、

赤藓糖醇30%、

明胶粉2%、

硬脂酸镁1%。

制备方法与实施例1相同。

实施例7

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）200μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

制备方法与实施例1相同。

实施例8

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）200μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

海藻糖12%、

甘氨酸12%、

木糖醇35%、

羧甲基纤维素钠6%、

赤藓糖醇30%、

明胶粉3%、

硬脂酸镁2%。

制备方法与实施例1相同。

实施例9

红色诺卡氏菌细胞壁骨架（N-CWS）200μg

其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

制备方法与实施例1相同。

Claims (4)

1.一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片，其中每片含红色诺卡氏菌细胞壁骨架为100-1000μg，其余为药物辅料，所述辅料的重量比是：

2.根据权利要求1所述的口含片，其中每片含红色诺卡氏菌细胞壁骨架为100μg，其余为药物辅料，所述辅料的重量比是：

3.根据权利要求1所述的口含片，其中每片含红色诺卡氏菌细胞壁骨架为200μg，其余为药物辅料，所述辅料的重量比是，

其制备过程如下：

（1） 取明胶粉在0℃以下粉碎，过100目筛备用；

（2） 将木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇按配方重量配比称重，混匀；

（3） 将配方量的红色诺卡氏菌细胞壁骨架加适量蒸馏水，采用超声波技术使药物充分分散在介质中，加入配方量海藻糖和甘氨酸，混匀，得N-CWS浆；

（4） 将N-CWS浆在搅拌下加入到上述木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇的混合物中，适当稀释至成含固体成分量为45-55%的混合浆；

（5） 将上述混合浆在-45～30℃温度下，冷冻干燥16-20小时，水分控制在不高于3%，得红色诺卡氏菌细胞壁骨架冻干粉；

（6） 在上述N-CWS的冻干粉中，加入配方量的明胶粉和硬脂酸镁，经12-16目筛混合，得冻干粉末；

（7） 将N-CWS冻干粉末，在室温下直接压成圆片状，制得每片1g的红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片；

（8） 经质量检测，包装后得红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片成品。

4.根据权利要求1所述的口含片的制备方法，系采用冻干粉末室温直接压片法，其压片工艺，依次含下列工序：

（1） 将辅料组分中的明胶粉，在0℃以下粉碎，过80～100目筛备用，

（2） 将木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇按组分重量配比称重，混匀，

（3） 将配方量的红色诺卡氏菌细胞壁骨架加适量蒸馏水，采用超声波技术使药物充分分散在介质中，加入配方量海藻糖和甘氨酸，混匀，得N-CWS浆，

（4） 将N-CWS浆在搅拌下加入到上述木糖醇、羧甲基纤维素钠与赤藓糖醇的混合物中，搅拌均匀，

（5） 将上述（4）的混合液，在-45～30℃温度下，冷冻干燥，得红色诺卡氏菌细胞壁骨架冻干粉，

（6） 在上述N-CWS的冻干粉中，加入配方量的明胶粉和硬脂酸镁，经12-16目筛混合，得冻干粉末，

（7） 将N-CWS冻干粉末，在室温下直接压成圆片状，制得红色诺卡氏菌细胞壁骨架口含片。