CN102861328A

CN102861328A - 一种新型口蹄疫疫苗及其制备方法

Info

Publication number: CN102861328A
Application number: CN2012103982741A
Authority: CN
Inventors: 李冬; 刘在新; 周春雪; 卢曾军; 陈应理; 孙普; 谢宝霞; 曹轶梅; 付元芳; 包慧芳; 李平花; 白兴文
Original assignee: Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Current assignee: Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority date: 2012-10-12
Filing date: 2012-10-12
Publication date: 2013-01-09

Abstract

本发明公开了一种新型口蹄疫疫苗及其制备方法，该疫苗包含2种Toll样受体激动剂Pol yI:C和R848，其含量均为200μg/ml抗原。将2种激动剂Pol yI:C和R848，与口蹄疫灭活抗原混合后，再与矿物油佐剂乳化，并免疫猪，发现该疫苗的效力明显优于不加这2种激动剂的口蹄疫常规灭活疫苗。说明这2种Toll样受体激动剂可增强口蹄疫疫苗的免疫效力。

Description

一种新型口蹄疫疫苗及其制备方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种新型口蹄疫疫苗及其制备方法。

背景技术

口蹄疫(foot-and-mouth disease，FMD)是危害偶蹄动物的烈性传染病，尤其对主要畜种猪、牛、羊的危害特别严重。因该病传染性极强，世界动物卫生组织(FAO/OIE)将其列为头号必报烈性传染病，国际贸易予以严格限制。我国将该病列为一类动物传染病之首。在世界上许多国家，尤其是亚非拉国家，该病发生次数频繁，流行严重。此外，不时出现全球的流行性爆发。

疫苗是预防和控制口蹄疫采取的重要措施。口蹄疫免疫常用疫苗是油佐剂灭活疫苗。该苗的生产采用的是病毒接种细胞、组织培养物，病毒增殖后，收获培养物，加化学灭活剂(如二乙烯亚胺，BEI)使病毒失去感染性，与矿物油佐剂混合乳化制成疫苗。

天然免疫应答不仅是机体抵抗病毒和其他病原侵染的第一道防线，也是启动获得性免疫应答的前提。Toll样受体(Toll-like receptors，TLRs)是近年来发现的在宿主抗病原微生物的免疫应答中起重要作用的细胞表面受体分子。迄今为止，在哺乳动物中已发现有10～15种TLR及其相应的配体或激动剂。TLRs广泛表达在各种免疫细胞，尤其是先天免疫细胞的表面，如巨噬细胞和树突状细胞等，主要介导细胞免疫。

TLRs通过识别病原微生物及其特殊结构(TLRs激动剂一般是这种结构的类似物)，介导宿主相关细胞因子的分泌和天然免疫应答的产生。TLR3识别具有双链RNA的病毒感染，而单链RNA病毒在复制时能产生双链RNA，也能通过TLRs识别。病毒单链RNA的相应识别受体是TLR7和TLR8。TLR9是识别带有CpG DNA病毒的受体。一些TLRs激动剂，聚肌胞(polyI:C)是TLR3的激动剂。R-848(Resquimod)是TLR7和TLR8的激动剂。

口蹄疫病毒是一种单链小RNA病毒，其复制时能形成双链RNA。所以我们选择TLR7和TLR8的激动剂R-848，以及TLR3的激动剂PolyI:C作为口蹄疫疫苗的添加剂或称免疫增强剂，以提高其免疫效力。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种新型口蹄疫疫苗及其制备方法，该疫苗中添加2种Toll样受体激动剂(或称免疫增强剂)，目的是提高常规口蹄疫疫苗的免疫效果。

其技术方案如下：

一种新型口蹄疫疫苗，包含2种Toll样受体激动剂PolyI:C和R848，其含量均为200μg/ml抗原。

一种新型口蹄疫疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)制备并灭活口蹄疫抗原；

2)抗原中分别加入过滤灭菌的PolyI:C和R848，浓度均为200μg/ml；

3)再将抗原与矿物油佐剂乳化，制成兽用疫苗。

本发明的有益效果：用本发明方法得到的疫苗免疫猪后，经PD₅₀试验，其效果要明显优于不加这2种Toll样受体激动剂的常规口蹄疫疫苗。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1两种矿物油佐剂ISA201和ISA206制备的口蹄疫疫苗免疫效果比较

选45-60日龄的健康易感猪(口蹄疫液相阻断ELISA抗体滴度小于或等于1∶4，3ABC抗体为阴性)作为实验动物。将灭活的等量口蹄疫抗原分别按说明书与ISA 206或ISA201乳化，经安检合格后分别免疫15头猪进行PD₅₀检测。免疫4周后用常规方法攻毒，逐日观察10天，记录每头猪毒发病情况。对照2头猪(315#、339#)全部发病，说明试验成立。表1是免疫攻毒后结果。用ISA201佐剂乳化的疫苗免疫攻毒后15头猪全部保护，经计算，PD50是15.59，但是用ISA206佐剂乳化的疫苗免疫攻毒后1/9原剂量的2头猪(345#、354#)发病，PD₅₀等于10.05。因此，ISA201的佐剂性要强于ISA206。

实施例2添加或不添加2种激动剂的口蹄疫疫苗免疫效果比较

选45-60日龄的健康易感猪32头(口蹄疫液相阻断ELISA抗体滴度小于或等于1∶4，3ABC抗体为阴性)作为实验动物。将灭活的等量口蹄疫抗原分别按说明书与ISA 206或ISA201乳化，但是与ISA206乳化的抗原中含有2种激动剂，经安检合格后分别免疫15头猪进行PD50检测。免疫4周后用常规方法攻毒，逐日观察10天，记录每头猪毒发病情况。对照2头猪(3547#、3508#)全部发病，说明试验成立。表1是免疫攻毒后结果。用ISA201佐剂乳化的疫苗免疫攻毒后15头猪全部保护，经计算，PD₅₀是15.59；用ISA206佐剂乳化的疫苗(抗原以及抗原量与ISA201的均相同，但是添加了2种激动剂)免疫攻毒后15头猪也全部保护，经计算，PD50也是15.59。说明添加了2种激动剂的ISA206佐剂乳化的口蹄疫疫苗效果已经与ISA201的口蹄疫疫苗效果类似了。由此推测，若含有2种激动剂的抗原与ISA201乳化所得的口蹄疫疫苗，其免疫效果将更好。

表1用ISA201佐剂与ISA206佐剂乳化的口蹄疫疫苗免疫4周后的攻毒结果

ISA201佐剂乳化	ISA206佐剂乳化
			猪号	攻毒结果	猪号	攻毒结果
310#-	305#-
			311#-		306#-
312#-	307#-
			314#-		308#-
321#-	309#-
			322#-		317#-
325#-	318#-
			333#-		319#-
335#-	326#-
			336#-		328#-
337#-	329#-
			347#-		330#-
350#-	345#	+
			351#-		353#-
360#-	354#	+

表2用ISA201佐剂与ISA206佐剂(添加了2种激动剂)乳化的口蹄疫疫苗免疫4周后的攻毒结果

表1用ISA201佐剂与ISA206佐剂乳化的口蹄疫疫苗免疫4周后的攻毒结果。每种疫苗各选择15头猪检测并计算PD50。加上对照2头，两组共32头猪。其中前5头为原剂量2ml、中间5头为1/3原剂量即0.67ml、最后5头为1/9原剂量即0.22ml。用ISA201佐剂乳化的疫苗免疫攻毒后15头猪全部保护，经计算，PD₅₀是15.59；但是用ISA206佐剂乳化的疫苗免疫攻毒后1/9原剂量的2头猪(345#、354#)发病，PD₅₀等于10.05。对照2头猪(315#、339#)全部发病。

表2用ISA201佐剂与ISA206佐剂(添加了2种激动剂)乳化的口蹄疫疫苗免疫4周后的攻毒结果。每种疫苗各选择15头猪检测并计算PD50。加上对照2头，两组共32头猪。其中前5头为原剂量2ml、中间5头为1/3原剂量即0.67ml、最后5头为1/9原剂量即0.22ml。用ISA201佐剂乳化的疫苗免疫攻毒后15头猪全部保护，经计算，PD₅₀是15.59；用ISA206佐剂乳化的疫苗(抗原以及抗原量与ISA201的均相同，但是添加了2种激动剂)免疫攻毒后15头猪也全部保护，经计算，PD₅₀是15.59。对照2头猪(3547#、3508#)全部发病。

以上所述，仅为本发明最佳实施方式，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

Claims

1.一种新型口蹄疫疫苗，其特征在于，包含2种Toll样受体激动剂PolyI:C和R848，其含量均为200μg/ml抗原。

2.一种权利要求1所述新型口蹄疫疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备并灭活口蹄疫抗原；

2)抗原中分别加入过滤灭菌的PolyI:C和R848，浓度均为200μg/ml；

3)再将抗原与矿物油佐剂乳化，制成兽用疫苗。