CN102836463A - 异种结膜移植片及其制作方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种异种结膜移植片，所述异种结膜移植片的原料为去细胞化的牲畜胎盘羊膜。本发明还公开了一种结膜移植片的制作方法，该方法包括：将牲畜胎盘羊膜使用去污剂进行浸泡；将去污剂浸泡后的牲畜胎盘羊膜在胰蛋白酶抑制剂中浸泡；将所述抑制剂中浸泡后的牲畜胎盘羊膜在非离子型表面活性剂中浸泡。本发明的结膜移植片能够替代人胎盘羊膜制成的结膜移植片，其原料不受供体限制，来源广泛，成本低。

Description

异种结膜移植片及其制作方法

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，特别涉及一种异种结膜移植片及其制作方法。

背景技术

在眼科治疗眼表表面创伤的结膜重建手术中，会遇到酸碱化学烧伤和热烧伤、眼球粘连、翼状胬肉等眼病，需要用使用结膜移植片加以覆盖治疗。

现有的结膜移植片大多以人的胎盘羊膜或唇粘膜为材料，通过将人胎盘羊膜或唇粘膜在酒精中浸泡一定时间，将人胎盘羊膜中的细胞组织破坏，即去细胞化，之后将浸泡酒精后的人胎盘羊膜晾干，制成结膜移植片；使用时将结膜移植片放入生理盐水中进行复水，使之湿润柔软后即可使用于患者眼疾处。

然而现有的结膜移植片，由于使用人胎盘羊膜或唇粘膜为原料，原料来源受到供体限制，成本很高。

发明内容

本发明提供了一种异种结膜移植片及其制作方法，原料来源广泛，成本低。

为达上述目的，本发明的技术方案具体是这样实现的：

一种异种结膜移植片，所述异种结膜移植片的原料为去细胞化的牲畜胎盘羊膜。

优选地，所述去细胞化的牲畜胎盘羊膜厚度为0.1~0.5毫米。

一种异种结膜移植片的制作方法，该方法包括：

将牲畜胎盘羊膜使用去污剂进行浸泡；

将去污剂浸泡后的牲畜胎盘羊膜在胰蛋白酶抑制剂中浸泡；

将所述抑制剂中浸泡后的牲畜胎盘羊膜在非离子型表面活性剂中浸泡。

优选地，所述将牲畜胎盘羊膜使用去污剂进行浸泡之前，该方法进一步包括：

将牲畜新鲜的胎盘通过剥离子剥离海绵层组织，得到牲畜胎盘羊膜。

优选地，所述在非离子型表面活性剂中浸泡之后，该方法进一步包括：

将非离子型表面活性剂中浸泡后的牲畜胎盘羊膜在消毒剂中浸泡。

优选地，所述消毒杀菌之后，该方法进一步包括：

将所述消毒杀菌之后的牲畜胎盘羊膜置于乙醇溶液中保存。

优选地，所述使用去污剂进行浸泡，包括：

使用氯己定浸泡30-40分钟。

优选地，所述在胰蛋白酶抑制剂中浸泡，包括：

在浓度为0.2%~5%的胰蛋白酶溶液中浸泡震荡1-5小时。

优选地，所述在非离子型表面活性剂中浸泡，包括：

在浓度为0.5%~2%的聚乙二醇辛基苯基醚溶液中浸泡震荡24~36小时。

优选地，所述在消毒剂中浸泡包括：

在戊二醛溶液中，浸泡20-40分钟。

由上述技术方案可见，本发明的这种异种结膜移植片及其制作方法，利用去细胞化的牲畜胎盘羊膜作为原料，去细胞化的牲畜胎盘羊膜失去细胞活力，只起到支架作用的载体，没有血管、无细胞、无神经和淋巴管，韧性好，薄，与人眼结膜组织结构相似，不仅能抗感染、防治瘢痕形成、抑制新生血管，而且，还能刺激细胞分化、阻止细胞凋亡，由于其同样具有抗原性低，控制纤维组织增生和新生血管形成等作用，不仅可以覆盖创面，减少感染，抑制瘢痕形成以及减少新生血管生成，可代替胶原膜来重建结膜和角膜促进眼表上皮化，减轻炎症反应，所以能够替代人胎盘羊膜作为结膜移植片使用。相比人胎盘羊膜，牲畜胎盘羊膜不受供体的限制，材料来源广泛，成本低。

另外，人的胎盘羊膜一般在0.02-0.05毫米，比较薄，且在使用时需要复水，复水后的人胎盘羊膜太薄而且无色透明，医生手术时，在透明的生理盐水中很难找到该人胎盘羊膜，而以牲畜胎盘羊膜制成异种结膜移植片厚度可以控制在0.1-0.5毫米，相比人胎盘羊膜制成的结膜移植片，使手术中的取用操作更方便。

而且由于本发明的牲畜胎盘羊膜制成后在乙醇中保存，而非晾干，因此无需复水，使用更加方便。

再有，由于人的胎盘羊膜在手术后会很快降解，对于所需恢复期长的患者，修复效果较差，而本发明的结膜移植片制作过程中，通过控制牲畜胎盘羊膜在胰蛋白酶抑制剂中浸泡的时间，以及牲畜胎盘羊膜在非离子型表面活性剂中浸泡的时间，可以有效控制结膜移植片的降解时间，在需要时，使其降解时间延长，从而得到更好的修复效果。

附图说明

图1为本发明实施例一的结膜移植片制作方法流程图。

图2为本发明实施例二的结膜移植片制作方法流程图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下参照附图并举实施例，对本发明进一步详细说明。

本发明实施例的结膜移植片，是以去细胞化的牲畜胎盘羊膜为原料制成，例如牛、羊、猪等的胎盘羊膜，因原材料与人在生物学中属于不同种类，因此本发明实施例的结膜移植片也可以称为异种结膜移植片。采用牲畜胎盘羊膜为原料制，其原料可以从牛、羊、猪等牲畜中得到，来源非常广泛，成本低廉。另外，去细胞化的方法任意，可以采用现有成熟的去细胞化（或称脱细胞）的工艺，使用牲畜胎盘羊膜去细胞化后制成的异种结膜移植片，其厚度一般为0.1~0.5毫米，比用人的胎盘羊膜制成的结膜移植片厚，因此在手术操作时更加方便。

图1为本发明实施例一的结膜移植片制作方法流程图，如图1所示，该方法包括如下步骤：

步骤101、将牲畜胎盘羊膜使用去污剂进行浸泡；

本步骤主要是为了破坏牲畜胎盘羊膜的细胞膜脂和脂蛋白，从而将将胎盘羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞破坏掉。

具体的去污剂可以采用氯己定（别名洗必泰，学名双氯苯双胍己烷）或者ASAP洗液抗菌剂等，而牲畜胎盘羊膜可以通过牲畜新鲜的胎盘通过剥离子剥离海绵层组织得到。

步骤102、将去污剂浸泡后的牲畜胎盘羊膜在胰蛋白酶抑制剂中浸泡；

本步骤主要是为了将细胞膜上的蛋白消化掉，细胞膜就失去细胞的特性了，从而有效地去除组织中的细胞成分，实现去细胞化，去细胞化的具体方式可以采用现有任意方式。

步骤103、将所述抑制剂中浸泡后的牲畜胎盘羊膜在非离子型表面活性剂中浸泡。

本步骤通过非离子型表面活性剂将细胞进行裂解，从而使细胞丧失活性。具体的非离子型表面活性剂可以采用聚乙二醇辛基苯基醚（C₁₄H₂₂O(C₂H₄O)n，又称TritonX-100）等。

通过上述步骤，即可制成异种结膜移植片，从而代替人胎盘羊膜制成的异种结膜移植片。另外，步骤103之后，还可以进一步对牲畜胎盘羊膜进行消毒杀菌，以增加其使用安全性，例如使用消毒剂进行浸泡。消毒后的牲畜胎盘羊膜可以置于乙醇溶液中保存。

图2为本发明实施例二的结膜移植片制作方法流程图，该实施例以牛胎盘羊膜为原料详细描述了制作过程，如图2所示，该方法包括如下步骤：

步骤201，将牛新鲜的胎盘剥离海绵层组织，得到牛胎盘羊膜；

原材料取自牛的新鲜正常的胎盘，冲洗干净后，用剥离子剥离海绵层组织从而得到牛胎盘羊膜。

步骤202，用氯己定浸泡牛胎盘羊膜30-40分钟。

利用氯己定对细胞膜脂和脂蛋白的破坏作用，将羊膜上皮细胞层的上皮细胞和纤维母细胞层的纤维母细胞破坏掉。

步骤203，采用胰蛋白酶消化法使牛胎盘羊膜去细胞化。

胰蛋白酶抑制剂对细胞核具有水解作用，可以有效地去除组织中的细胞成分。因此本步骤中可以选用0.2-5%的胰蛋白酶溶液，在37℃温度下浸泡振荡1-5小时，从而将牛胎盘羊膜去细胞化。

步骤204，将去细胞化的牛胎盘羊膜以0.5-2%的TritonX-100溶液振荡浸泡24-36小时，进行细胞裂解；

经过该处理的牛胎盘羊膜可以保持天然胶原的结构，蛋白结构保持稳定状态，而经过裂解的细胞将失去活性。

步骤205，将细胞裂解后的牛胎盘羊膜进行消毒杀菌；

可以通过戊二醛溶液（C₅H₈O₂）浸泡20-40分钟实现消毒杀菌，其中，戊二醛能与蛋白质发生反应，从而将牛胎盘羊膜的各种微生物杀灭。

步骤206，置于乙醇溶液中保存。

消毒杀菌后的牛胎盘羊膜可以放置在浓度75%的乙醇溶液中保存。

另外，步骤203中，胰蛋白酶溶液的浓度和浸泡时间，以及步骤204中TritonX-100溶液的浓度和浸泡时间，可以控制制成的结膜移植片的降解时间，经试验，胰蛋白酶溶液的浓度和浸泡时间与结膜移植片的降解时间的关系如下表所示：

表一、胰蛋白酶溶液浓度和浸泡时间与结膜移植片的降解时间关系表

其中，永久表示不会降解。

TritonX-100溶液的浓度和浸泡时间与结膜移植片的降解时间的关系如下表所示：

表二、TritonX-100溶液浓度和浸泡时间与结膜移植片的降解时间关系表

其中，永久表示不会降解。

参考上述表格即可有效控制结膜移植片的降解时间从而适用不同患者不同病情的治疗需要。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。

Claims (10)

1.异种结膜移植片，其特征在于，所述异种结膜移植片的原料为去细胞化的牲畜胎盘羊膜。

2.如权利要求1所述的异种结膜移植片，其特征在于，所述去细胞化的牲畜胎盘羊膜厚度为0.1~0.5毫米。

3.异种结膜移植片的制作方法，其特征在于，该方法包括：

将牲畜胎盘羊膜使用去污剂进行浸泡；

将去污剂浸泡后的牲畜胎盘羊膜在胰蛋白酶抑制剂中浸泡；

将所述抑制剂中浸泡后的牲畜胎盘羊膜在非离子型表面活性剂中浸泡。

4.如权利要求3所述的制作方法，其特征在于，所述将牲畜胎盘羊膜使用去污剂进行浸泡之前，该方法进一步包括：

将牲畜新鲜的胎盘剥离海绵层组织，得到牲畜胎盘羊膜。

5.如权利要求3所述的制作方法，其特征在于，所述在非离子型表面活性剂中浸泡之后，该方法进一步包括：

将非离子型表面活性剂中浸泡后的牲畜胎盘羊膜在消毒剂中浸泡。

6.如权利要求5所述的制作方法，其特征在于，所述消毒杀菌之后，该方法进一步包括：

将所述消毒杀菌之后的牲畜胎盘羊膜置于乙醇溶液中保存。

7.如权利要求3所述的制作方法，其特征在于，所述使用去污剂进行浸泡，包括：使用氯己定浸泡30-40分钟。

8.如权利要求3所述的制作方法，其特征在于，所述在胰蛋白酶抑制剂中浸泡，包括：

在浓度为0.2%~5%的胰蛋白酶溶液中浸泡震荡1-5小时。

9.如权利要求3所述的制作方法，其特征在于，所述在非离子型表面活性剂中浸泡，包括：

在浓度为0.5%~2%的聚乙二醇辛基苯基醚溶液中浸泡震荡24~36小时。

10.如权利要求5所述的制作方法，其特征在于，所述在消毒剂中浸泡包括：

在戊二醛溶液中，浸泡20-40分钟。

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