CN102827116B

CN102827116B - 含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物及其合成方法和用途

Info

Publication number: CN102827116B
Application number: CN201210358666.5A
Authority: CN
Inventors: 徐海伟; 刘宏民; 车雪萍; 赵玲洁; 陈广威; 刘文省; 范子祺
Original assignee: Zhengzhou University
Current assignee: Zhengzhou University
Priority date: 2012-09-25
Filing date: 2012-09-25
Publication date: 2015-02-04
Anticipated expiration: 2032-09-25
Also published as: CN102827116A

Abstract

本发明公开了一类含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物化合物及其合成方法和用途，具有如下结构通式：，式Ⅰ中：R₁为氢、单取代或多取代的甲基、甲氧基、氟、氯、溴、羟基、氨基、三氟甲基等，R₂为OR₃、NR₄R₅中的一种，其中R₃为C_1-5-烷基，R₄、R₅为含N或O五元及六元杂环基、苄胺基等。此类化合物是一种新型的小分子微管蛋白抑制剂，对多种肿瘤细胞有较好的抑制作用，因此可用于制备抗肿瘤药物，具有开发新型作用机制的抗肿瘤药物的潜力。

Description

含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物及其合成方法和用途

技术领域

本发明涉及一类含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物及其合成方法和用途，属药物化学领域。

背景技术

癌症是严重危害人类生命健康的重大疾病之一。虽然全世界每年在肿瘤的发病原因、预防控制、新药研发方面均投入数百亿资金，肿瘤的发病率及年死亡人数仍在逐年上升。由于恶性肿瘤的病因至今尚未完全清楚，因此，目前临床上恶性肿瘤的治疗主要是采用手术、放疗、化疗、生物治疗（包括免疫治疗）等综合治疗手段，其中化疗已经成为各种晚期恶性肿瘤有效治疗的基础，因此抗肿瘤药物的研究与发现任重而道远。

随着CombretastatinA-4（CA-4）等种新型作用机制的小分子抗微管天然产物的发现，以微观蛋白为靶点的新一代小分子抗肿瘤药物已成为了近些年世界抗肿瘤药物研发的一大热点。丁烯内酯是一个很重要的结构单元，它广泛地存在于天然产物中，大约有10%的天然化合物的骨架中含有丁内酯的结构，其中的大部分化合物及其衍生物或者类似物都表现出了各种不同的生物活性，如：抗菌、杀虫、植物性毒素以及抗炎、抗病毒活性、抗人体六大肿瘤等。我们通过对丁烯内酯类化合物进行构效关系的研究过程中发现，α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物（通式I）具有良好的抗肿瘤活性。

基于上述研究背景以及课题组的前期研究结果，发现该类化合物是一种新型的小分子微管蛋白抑制剂，具有开发新型作用机制的抗肿瘤药物的潜力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有较好抗肿瘤活性，含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯结构的化合物。

本发明的另一个目的是提供一种合成此类含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯结构的化合物的新方法。

本发明再一个目的是提供所述的化合物的药物用途。

本发明的技术方案如下：

一类α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物，它们具有如下结构通式：

式Ⅰ中：

R₁为氢、单取代或多取代的甲基、甲氧基、氟、氯、溴、羟基、氨基、三氟甲基等，R₂为OR₃、NR₄R₅中的一种，其中R₃为C_1-5-烷基，R₄、R₅为含N或O五元及六元杂环基、苄胺基等。

优选如下化合物： R₁为氢、单取代或多取代的甲基、甲氧基、氟、氯、溴等，R₂为OR₃、NR₄R₅中的一种，其中R₃为C_1-5-烷基，R₄、R₅为含N或O五元及六元杂环基、苄胺基等。

一种制备上述化合物α-芳基-β-烷氧基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的方法，它包括下列步骤:

步骤1：将化合物1溶于溶剂中，在缚酸剂的存在下与氯乙酸乙酯反应，后处理得到化合物2，其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、EtOAc、丙酮、甲醇、乙醇中的一种，所用的缚酸剂为吡啶、无水K₂CO₃、无水Na₂CO₃、三乙胺。优选如下条件：反应时间为5-10h，反应的温度为30-100℃，原料的投料摩尔比为：化合物1：氯乙酸乙酯：缚酸剂=1:1.2:1.2，反应完毕，经处理得化合物2。

步骤2：取化合物2 溶于溶剂中，冰浴下加入碱，加入完毕后放置室温下搅拌反应，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物3即α-芳基-β-羟基丁烯内酯。其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、DMF、DMSO、甲醇中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种，优选如下条件：反应时间为10-20 h，原料的投料摩尔比为：化合物2：碱=1：1.5～3。

步骤3：将化合物3溶于溶剂中，在碱的存在下加入烷基化试剂，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物4即α-芳基-β-烷氧基丁烯内酯。其中所用的烷基化试剂为硫酸二甲酯、碘甲烷、溴乙烷等，所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、EtOAc、丙酮的一种，所用的碱为CH₃ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃中的一种。优选如下条件：原料的物质的量之比为：化合物3：碱：烷基化剂=1：1.1～2：1.1～2，反应时间为5-15h，反应温度为20-50℃。

步骤4：化合物4溶于溶剂中，室温下在碱的存在下加入多聚甲醛，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物5即α-芳基-β-烷氧基-γ-羟甲基丁烯内酯。其中所用得溶剂为CH₂Cl₂、THF、CH₃OH、C₂H₅OH中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种。优选如下条件：反应原料的摩尔比为：化合物4：多聚甲醛：碱=1:1.1～3:0.5～3，反应经历的时间为10-30h，反应温度为20-100℃。

步骤5：取化合物5溶于溶剂中，加入对甲苯磺酰氯或甲基磺酰氯或者乙酸酐、缚酸剂，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物Ⅰ即α-芳基-β-烷氧基-γ-亚甲基丁烯内酯。其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF，CHCl₃中的一种，所用的缚酸剂为吡啶、无水K₂CO₃、无水Na₂CO₃、三乙胺中的一种。优选如下条件：反应原料摩尔比为：化合物5：酰氯：缚酸剂=1:1.5～5:3～7，反应经历的时间为5-10h，反应温度为20-100℃。

一种制备上述化合物α-芳基-β-氨基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的方法，它是将上述制备方法中的步骤3用如下步骤3^，替代，步骤4用如下步骤4^，替代，步骤5用如下步骤5^，替代：

步骤3^，：将化合物3加入溶剂中，冰浴下滴加草酰氯，滴加完毕后加热反应，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物4-a即α-芳基-β-氯代丁烯内酯。将化合物4-a溶于溶剂中，在碱的存在下加入胺，TLC监测反应完毕，处理得到化合物4-b即α-芳基-β-氨基丁烯内酯。其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、EtOAc、丙酮的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种，所述的胺是含氮或氧六元杂环或C_1-5伯胺、仲胺、叔胺。优选如下条件：反应投料摩尔比为：4-a：胺：碱=1：1.1～2:：1.1～2，反应经历时间为1-5h，反应温度为30-70℃。

步骤4^，：化合物4-b溶于溶剂中，室温下在碱的存在下加入多聚甲醛，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物5-a即α-芳基-β-氨基-γ-羟甲基丁烯内酯。

其中所用溶剂为CH₂Cl₂、THF、CH₃OH、C₂H₅OH中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种。优选如下条件：反应原料摩尔比为：化合物4-b：多聚甲醛：碱=1:1.1～3:1.1～3，反应时间为10-30h，反应温度为20-100℃。

步骤5^，：取化合物5-a溶于溶剂中，加入对甲苯磺酰氯或甲基磺酰氯或者乙酸酐、缚酸剂，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物Ⅱ即α-芳基-β-烷氧基-γ-亚甲基丁烯内酯。其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、CH₃OH、C₂H₅OH中的一种，所用的缚酸剂为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种。优选如下条件：反应原料摩尔比为：化合物5-a：甲基磺酰氯：缚酸剂=1：1.1～5:1：1.1～7，反应时间为5-10h，反应温度为20-100℃。

本发明所述的含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯结构的化合物是一种新型的小分子微管蛋白抑制剂，对多种肿瘤细胞有较好的抑制作用，因此可用于制备抗肿瘤药物，具有开发新型作用机制的抗肿瘤药物的潜力。合成方法简便，收率较高。

具体实施方式

通过一下实例进一步详细说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。

实施例1：α-(3，4-二氟苯基)-β-甲氧基-γ-亚甲基丁烯内酯的制备

步骤1：将5.000 g （29mmol） 3，4-二氟苯乙酸α-乙酸溶于50mL四氢呋喃中，室温下加入 4.273g（35mmol）氯乙酸乙酯、3.523g（35mmol）三乙胺，升温至60-70℃之间反应6h，薄层跟踪监测，反应完毕，抽滤，浓缩，得黄色油状物即化合物2粗品。

步骤2：取化合物2粗品6.06g（29mmol）溶于80 mL DMF中，冰浴下分6次加入叔丁醇钾共5.271 g（58mmol），加入完毕，继续在冰浴中搅拌0.5h，然后放置室温下搅拌反应12 h，TLC监测反应进行完毕。处理反应，先用10mL水稀释体系，再用稀盐酸调体系pH值3-4，后向体系中加入约200mL水，在加入的过程中可以看到有大量的白色固体析出，放置到冰箱里冷冻析出固体3h，取出抽滤，滤饼用水洗三次(3×30mL)，得到淡黄色固体，烘干称重得化合物3 即α-(3，4-二氟苯基)-β-羟基丁烯内酯4.431g，收率89.6％。滤液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩液用乙酸乙酯(20mL)稀释，然后用饱和食盐水洗涤10次(10×10mL)，用无水硫酸钠干燥有机相，旋蒸，得到淡黄色固体0.359 g，总的收率为95.1％。mp:178.2-180.5℃。¹H NMR (400MHz，DMSO，TMS)δ：7.88—7.67(m，2H，ArH)。7.11-7.09(m，1H，ArH)，4.61(d，J=0.5Hz，2H，CH₂)。¹³C NMR(101 MHz，DMSO，TMS)δ：173.03，123.06，116.87，116.69，115.52，115.29，100.02，6632．

步骤3：取化合物3即α-(3，4-二氟苯基)-β-羟基丁烯内酯 4.241g（20mmol），4.551g（28mmol）无水K₂CO₃溶于30mL丙酮中，室温下滴加 2.7mL（24mmol）硫酸二甲酯（用5mL丙酮稀释），反应7h，薄层跟踪监测，反应完毕，加入30 mL水，盐酸酸化至pH=3-4，旋蒸除去丙酮，析出沉淀，抽滤，得淡黄色α-(4-二氟代苯基)-β-甲氧基丁烯内酯固体4.01g，收率91%。mp.94.2．96.1℃。¹H NMR (400MHz，CDCl₃，TMS) δ：7.86-7.80(m，1H，ArH)，7.76-7.68(m，1H，ArH)，7.75-7.72(m，1H，ArH)，4.89(s，2H，CH₂)，4.04(s，3H，CH₃)．¹³CNMR(101MHz，CDCl3)δ：173.35，171.96，151.27，151.16，150.72，150.60，148.83，148.72，148.24，148.12，126.23，126.19，126.12，123.67，123.63，123.61，123.57，117.06，116.89，116.42，116.23，100.82，64.24，58.00．

步骤4：取1g化合物4即α-(3，4-二氟苯基)-β-甲氧基丁烯内酯固体溶于甲醇，室温下加入多聚甲醛，无水碳酸钠，升温至40-60℃之间，反应3h，反应完毕，除去甲醇，加水，酸化，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，干燥，用柱硅胶层析，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯（石油醚与乙酸乙酯的体积比为1.5：1），得到白色固体α-(3,4-二氟苯基)-β-甲氧基-γ-羟甲基丁烯内酯0.52g。Mp：121.4-122.6℃．¹H NMR(400MHz，CDCl₃，TMS)δ：7.49-7.46(m，1H，ArH)，7.44-7.35(m，1H，ArH)，7.20-7.13(m，1H，ArH)，4.97-4.95(m，1H，CH)，4.16-4.12(m，1H，CH)，3.93-3.90(m，1H，CH)，3.92(s，3H，CH₃)．¹³C NMR(101

MHz，CDCl₃，TMS)δ：172.35，172.10，151.08，148.91，126.19，128.88，118.67，117.17，103.72，77.89，61.55，60.16。

步骤5：取 200mgα-(3,4-二氟苯基)-β-甲氧基γ-羟甲基丁烯内酯溶于CH₂Cl₂，加入对甲苯磺酰氯、三乙胺，反应8-12h，旋蒸除去CH₂Cl₂，析出固体，加入乙酸乙酯，过滤，滤液用酸水洗三次，饱和食盐水洗三次，干燥，柱层析，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯（石油醚与乙酸乙酯的体积比为4:1），得到 100mg淡黄色α-(3,4-二氟苯基)-β-甲氧基-γ-亚甲基丁烯内酯。Mp:94.7-95.7。¹H NMR(400MHz，CDCl₃，TMS)δ：7.48-7.43(m，1H，ArH)，7.38-7．31(m，1H，ArH)，7.25-7.18(m，1H，ArH)，5.22(d，J=2.9Hz，1H，=CH)，5.19(d，J=2.9Hz，1H，=CH)，3.93(s，3H，CH₃)．¹³C NMR(101MHz，CDCl₃，TMS)δ:167.79，162.33，151.19，149.26，126.23，125.66，118.89，118.80，l17.40，117.23，105.47，94.43，60.84．）

实施例2：α-(4-氟代苯基)-β-吗啉-γ-亚甲基丁烯内酯的制备

步骤1：将5.000 g （32mmol） 4-氟代苯乙酸溶于50mL四氢呋喃中，室温下加入 4.772g（38mmol）氯乙酸乙酯、3.935g（38mmol）三乙胺，升温至60-70℃之间反应6h，薄层跟踪监测，反应完毕，抽滤，浓缩，得黄色油状物即化合物2-a粗品。

步骤2：取化合物2-a粗品8.512g（32mmol）溶于80 mL DMF中，冰浴下分6次加入叔丁醇钾共7.286g（64mmol），加入完毕，继续在冰浴中搅拌0.5h，然后放置室温下搅拌反应12 h，TLC监测反应进行完毕。处理反应，先用10mL水稀释体系，再用稀盐酸调体系pH值3-4，后向体系中加入约200mL水，在加入的过程中可以看到有大量的白色固体析出，放置到冰箱里冷冻析出固体3h，取出抽滤，滤饼用水洗三次(3×30mL)，得到淡黄色固体，烘干称重得化合物3-a 即α-(4-氟代苯基)-β-羟基丁烯内酯5.643g，收率89.6％。滤液用旋转蒸发仪浓缩，浓缩液用乙酸乙酯(20mL)稀释，然后用饱和食盐水洗涤10次(10×10mL)，用无水硫酸钠干燥有机相，旋蒸，得到淡黄色固体0.312g，总的收率为94.3％，208.5-210.8℃．1HNMR(400MHz，CDCl3，TMS) δ：7.91-7.87(m，2H，ArH)，7.11-7.06(m，2H，ArH)，4.88(s，2H，CH2)．¹³C NMR(101MHz，CDCl3，TMS)

δ：172.48，163.18，160.72，129.42，125.25，115.28，115.07，101.99，64.42．。

步骤3^，：取化合物3-a即α-(4-氟代苯基)-β-羟基丁烯内酯 4.24g（22mmol）溶于10 mL DMF和CH₂Cl₂的混合溶剂中(体积比为1:1)，，冰浴下滴加5.548g（44mmol）草酰氯，滴加完毕后撤去冰浴，30℃反应5h，薄层跟踪监测，反应完毕后冰浴下向体系中加入饱和NaHCO₃溶液，猝灭反应，体系用CH₂Cl₂萃取两次（2×30mL），后用饱和食盐水洗两次（2×15mL），无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析，得到化合物4-a-1即α-(4-氟代苯基)-β-氯代丁烯内酯。将400mg(1.75mmol)化合物4-a-1用2mL THF溶解后，加入305mg(3.5mmol)吗啉、241mg(1.75mmol)无水K₂CO₃，40℃反应5h，薄层跟踪监测，反应完毕后除去THF，向体系加入10mL水，析出固体，抽滤，水洗，干燥得到黄色固体化合物4-b-1，即α-(4-氟代苯基)-β-吗啉丁烯内酯496mg，产率100%。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ:7.27-7.23(2H,ArH),7.09-7.03(2H,ArH), 4.77(2H,CH2), 3.68-3.65(4H,CH2), 3.19-3.16(4H,CH2).¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 174.75, 163.35, 160.91, 132.25, 132.17, 128.13, 128.10, 115.52, 115.30, 96.30, 77.37, 77.05, 76.73, 66.23, 66.13, 47.68.

步骤4^，：取400mg化合物4-b-1即α-(4-氟代苯基)-β-吗啉丁烯内酯固体溶于甲醇，室温下加入27mg多聚甲醛，28mg甲醇钠，升温至40℃，反应20h，停止反应，旋蒸除去甲醇，加水、乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，干燥，用柱硅胶层析，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯（石油醚与乙酸乙酯的体积比为1：1），得到白色固体α-(4-氟代苯基)-β-吗啉-γ-羟甲基丁烯内酯200mg。

步骤5^，：取150mg 5-a即α-(4-氟代苯基)-β-吗啉-γ-羟甲基丁烯内酯（0.5mmol）溶于CH₂Cl₂，加入234mg甲基磺酰氯（2mmol）、310mg三乙胺（3mmol），反应4-8h，旋蒸除去CH₂Cl₂，析出固体，加入乙酸乙酯，过滤，滤液用酸水洗三次，饱和食盐水洗三次，干燥，柱层析，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯（石油醚与乙酸乙酯的体积比为1:1），得到 120mg淡黄色固体化合物Ⅱ即α-(4-氟代苯基)-β-吗啉-γ-亚甲基丁烯内酯。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.41- 7.38(2H,ArH), 7.14-7.10(2H,ArH), 5.32, 5.04(2H,CH2), 3.76-3.73(4H,CH₂), 3.31- 3.284H,CH₂).

¹³C NMR (101 MHz, DMSO) δ 168.57, 163.17, 160.73, 154.27, 150.31, 132.45, 132.37, 127.74, 127.71, 115.57, 115.36, 103.83, 97.09, 66.14, 50.58.

按实施实例1、2相似的方法，用不同的取代苯乙酸为原料，合成了如下表1所列的Ⅰ系列Ⅰ-A即 α-芳基-β-烷氧基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物， Ⅰ-B即α-芳基-β-氨基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物，并筛选了其抗肿瘤活性。

表1 所合成的部分化合物结构

Ⅰ-A-a

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.46 (dd, J = 11.1, 7.6, 2.1 Hz, 1H), 7.37 – 7.32 (m, 1H), 7.21 (d, J = 10.0, 8.4 Hz, 1H), 5.22 (s, 1H), 5.19 (s, 1H), 3.93 (s, 3H).

¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 167.7,162.3,149.0,126.2,126.2,126.2,126.1,118.9, 118.7,117.3,117.2,105.4,94.4,60.8.

Ⅰ-A-b

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.46 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.38 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.16 (dd, J = 6.1, 2.8 Hz, 2H), 3.86 (s, 3H).

¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 168.2,162.2,149.2,134.7,131.2,128.5,127.2,105.8, 93.8,60.5,42.0,21.3,14.16.

Ⅰ-A-c

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.39 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 5.14 (s, 1H), 5.13 (s, 1H), 3.85 (s, 3H).

¹³CNMR (101 MHz, CDCl₃) δ 168.8,161.7,149.7,138.6,129.9,129.0,106.8,92.6,60.5, 42.0,21.3,14.16.

Ⅰ-A-d

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.48 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.12 (dd, J = 10.4, 2.3 Hz, 2H), 3.86 (d, J = 6.2 Hz, 6H).

¹³CNMR (101 MHz, CDCl₃) δ 168.8,161.4,159.8,149.7,131.2,120.9,113.8,107.0,92.8, 60.5,55.3.

Ⅰ-B-b

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18 (q, J = 8.2 Hz, 4H), 4.68 – 4.60 (m, 1H), 4.39 (dd, J = 12.0, 5.3 Hz, 1H), 3.67 (d, J = 5.7, 3.6 Hz, 4H), 3.17 – 3.12 (m, 4H), 2.37 (s, 3H).

¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ168.7,159.7,155.3,137.6,134.5,130.8,128.9,101.4,98.0,67.2,67.2,53.3,53.3,21.3.

Ⅰ-B-c

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.29 (dd, J = 9.6, 5.9 Hz, 2H), 7.20 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 5.23 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 5.01 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H), 1.62 (d, J = 9.0 Hz, 8H), 1.14 (t, J = 7.2 Hz, 2H).

¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ168.7,155.3,159.7,130.8,137.6,134.5,128.9,134.5,128.9,101.4,53.8,26.4,26.4,24.6,98.0,21.3.

Ⅰ-B-d

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.18-7.26 (m, 4H), 5.14 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.92 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.0(s,1H)

¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ168.7,166.0,155.3,156.7,105.4,130.8,137.6,134.5,126.9,128.9,134.5,128.9,126.9,128.5,128.5,126.7,98.0,49.3,24.3,21.3. 。

实施例4：通式I所示化合物体外抗肿瘤活性筛选实验

1 实验细胞株和药物人食管鳞癌细胞(EC9706)，人胃癌细胞（MGC-803）均由中国科学院上海细胞库提供。将待测样品（实施例所示化合物）溶于DMSO，配制成10mg/ml的溶液，4℃冰箱中保存供实验使用。

2 培养基

RPMI 1640培养基：直接购买，加入血清及青霉素和链霉素后用于抗肿瘤活

性测试。

3 实验方法

采用MTT染色法测定药物对两种肿瘤细胞的体外抗肿瘤活性。将样品储备液以1、2、4、8、16、32、64、128μg/mL的终浓度加入96孔板中；对照药5-氟尿嘧啶的设置同上。培养48h后，测其吸光度值，利用SPSS软件求其IC₅₀值。

4 实验结果

表2 目标化合物抗肿瘤活性数据

实验结果表明：所测试的大部分化合物表现出良好的的抗肿瘤细胞活性，是一种新型的微管蛋白抑制剂，具有开发成新型抗肿瘤药物的巨大潜力，为进一步研究开发奠定了良好的基础。将其作为活性成份或与其它药物组合，与制药中可以接受的辅助和/或添加成份混合后，按常规的制药方法和工艺要求，制成用于治疗或预防抗肿瘤的口服型制剂、注射型制剂药物。口服型制剂为片剂、丸剂、胶囊、冲剂或糖浆；注射型制剂为注射液或冻干粉针剂型。

Claims

1.一类含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物，其特征是，具有如下结构通式

式Ⅰ中：

R₁为氢、单取代或多取代的甲基、甲氧基、氟、氯或溴；R₂为OR₃其中R₃为C_1-5-烷基。

2.如权利要求1所述的含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物，其特征是，为如下化合物之一：

。

3.一类含α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物，其特征是，为如下化合物之一：

。

4.一种制备权利要求1所述的α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的方法，其特征是，包括以下步骤：

步骤1：将化合物1溶于溶剂中，在缚酸剂存在下与氯乙酸乙酯反应，得到化合物2，其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、EtOAc、丙酮、甲醇、乙醇中的一种，所用的缚酸剂为吡啶、无水K₂CO₃、无水Na₂CO₃或三乙胺，反应完毕，经处理得化合物2；

步骤2：取化合物2 溶于溶剂中，冰浴下加入碱，加入完毕后放置室温下搅拌反应，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物3即α-芳基-β-羟基丁烯内酯；其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、DMF、DMSO、甲醇中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种；

步骤3：将化合物3溶于溶剂中，在碱的存在下加入烷基化试剂，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物4即α-芳基-β-烷氧基丁烯内酯；其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、EtOAc、丙酮的一种，所用的碱为CH₃ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃中的一种；

步骤4：化合物4溶于溶剂中，在碱的存在下加入多聚甲醛，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物5即α-芳基-β-烷氧基-γ-羟甲基丁烯内酯；其中所用溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、CHCl₃中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种；

步骤5：取化合物5溶于溶剂中，加入对甲苯磺酰氯或甲基磺酰氯或者乙酸酐、缚酸剂，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物Ⅰ即α-芳基-β-烷氧基-γ-亚甲基丁烯内酯；其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、CH₃OH、C₂H₅OH中的一种，所用缚酸剂为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种；

。

5.一种制备权利要求3所述的α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的方法，其

特征是，包括以下步骤：

步骤1：将化合物3加入溶剂中，冰浴下滴加草酰氯，滴加完毕后加热反应，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物4-a即α-芳基-β-氯代丁烯内酯；将化合物4-a溶于溶剂中，在碱的存在下加入胺，TLC监测反应完毕，处理得到化合物4-b即α-芳基-β-氨基丁烯内酯；其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、DMF、EtOAc、丙酮的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种；所述的胺是吗啉、哌啶或4-甲基苄胺；R为甲基或氟；

R与R₁为相同的取代基；

步骤2：化合物4-b溶于溶剂中，在碱的存在下加入多聚甲醛，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物5-a即α-芳基-β-氨基-γ-羟甲基丁烯内酯；其中所用溶剂为CH₂Cl₂、THF、CH₃OH、C₂H₅OH中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种；

R为甲基或氟；

步骤3：取化合物5-a溶于溶剂中，加入对甲苯磺酰氯或甲基磺酰氯、缚酸剂，TLC监测反应完毕，后处理得到化合物I即α-芳基-β-氨基-γ-亚甲基丁烯内酯；其中所用的溶剂为CH₂Cl₂、THF、CH₃OH、C₂H₅OH中的一种，所用的碱为CH₃ONa、C₂H₅ONa、NaOH、NaHCO₃、NaH、K₂CO₃、Na₂CO₃、t-BuOK中的一种，

，

NR₄R₅为。

6.根据权利要求5所述的α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的制备方法，其特征在于，步骤1所用的胺优选吗啉。

7.根据权利要求1-3其中之一所述的α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的药物用途，其特征在于，将其作为活性成份，用于制备抗肿瘤药物中。

8.根据权利要求7所述的α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的药物用途，其特征在于，将其作为活性成份或与其它药物组合，与制药中可以接受的辅助和/或添加成份混合后，按常规的制药方法和工艺要求，制成用于治疗或预防抗肿瘤的口服型制剂、注射型制剂药物。

9.如权利要求8所述的α-芳基-γ-亚甲基丁烯内酯类化合物的药物用途，其特征在于，口服型制剂为片剂、丸剂、胶囊、冲剂或糖浆；注射型制剂为注射液或冻干粉针剂型。