CN102816243A - 水稻转录因子Os06g08400基因的应用 - Google Patents
水稻转录因子Os06g08400基因的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102816243A CN102816243A CN201210276322XA CN201210276322A CN102816243A CN 102816243 A CN102816243 A CN 102816243A CN 201210276322X A CN201210276322X A CN 201210276322XA CN 201210276322 A CN201210276322 A CN 201210276322A CN 102816243 A CN102816243 A CN 102816243A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- rice
- transcription factor
- gene
- os06g08400
- grain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 title claims abstract description 99
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 title claims abstract description 97
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 title claims abstract description 41
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 title description 87
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 108010068250 Herpes Simplex Virus Protein Vmw65 Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims abstract 14
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 27
- 230000006872 improvement Effects 0.000 claims description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008117 seed development Effects 0.000 abstract description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 abstract 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 101000951145 Homo sapiens Succinate dehydrogenase [ubiquinone] cytochrome b small subunit, mitochondrial Proteins 0.000 description 6
- 102100038014 Succinate dehydrogenase [ubiquinone] cytochrome b small subunit, mitochondrial Human genes 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 5
- 239000012297 crystallization seed Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 3
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 3
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 3
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- ZBMRKNMTMPPMMK-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-[hydroxy(methyl)phosphoryl]butanoic acid;azane Chemical compound [NH4+].CP(O)(=O)CCC(N)C([O-])=O ZBMRKNMTMPPMMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010027344 Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000018720 Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factors Human genes 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N Kinetin Natural products N=1C=NC=2N=CNC=2C=1N(C)C1=CC=CO1 FAIXYKHYOGVFKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N kinetin Chemical compound N=1C=NC=2N=CNC=2C=1NCC1=CC=CO1 QANMHLXAZMSUEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001669 kinetin Drugs 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N (2E,4E)-2,4-hexadien-1-ol Chemical compound C\C=C\C=C\CO MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N 0.000 description 1
- IXVMHGVQKLDRKH-VRESXRICSA-N Brassinolide Natural products O=C1OC[C@@H]2[C@@H]3[C@@](C)([C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(C)C)C)C)CC3)CC[C@@H]2[C@]2(C)[C@@H]1C[C@H](O)[C@H](O)C2 IXVMHGVQKLDRKH-VRESXRICSA-N 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 235000005043 Oryza sativa Japonica Group Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 208000037065 Subacute sclerosing leukoencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010042297 Subacute sclerosing panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009412 basement excavation Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N bilanafos Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCP(C)(O)=O GINJFDRNADDBIN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IXVMHGVQKLDRKH-KNBKMWSGSA-N brassinolide Chemical compound C1OC(=O)[C@H]2C[C@H](O)[C@H](O)C[C@]2(C)[C@H]2CC[C@]3(C)[C@@H]([C@H](C)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)C(C)C)CC[C@H]3[C@@H]21 IXVMHGVQKLDRKH-KNBKMWSGSA-N 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 1
- 235000021305 genetically modified rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-FWAVGLHBSA-N hygromycin A Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](C(=O)C)O[C@@H]1Oc1ccc(\C=C(/C)C(=O)N[C@@H]2[C@@H]([C@H]3OCO[C@H]3[C@@H](O)[C@@H]2O)O)cc1O YQYJSBFKSSDGFO-FWAVGLHBSA-N 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N parathion Chemical compound CCOP(=S)(OCC)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 LCCNCVORNKJIRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000002512 suppressor factor Substances 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明涉及水稻转录因子Os06g08400基因的应用，其是利用转录因子激活基序VP64（即4个转录因子激活基序VP16）与水稻转录因子Os06g08400基因融合构建得到组成型转录因子，并转化到农作物如水稻中，从而改良水稻籽粒性状，如水稻籽粒明显变宽变厚。对于详细阐明调控种子发育机理具有重要的理论价值，并且可以通过转基因手段，改良水稻的粒型，因此在生产实践中也具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于遗传工程领域，具体地说，涉及水稻转录因子Os06g08400基因的应用。
背景技术
水稻(Oryza sativa L.)是最重要的三大粮食作物之一，是世界一半以上人口的主食。当前水稻增产的研究较依赖于有限的水稻种质资源，传统的杂交育种优势正在逐渐减弱，而水稻转基因技术有可能发掘水稻进一步增产的潜力。
禾谷类作物的产量很大程度上取决于其籽粒的大小，因此水稻籽粒性状的基因调控是重要的研究领域。近年来，已经通过基因克隆、QTL等技术手段揭示了至少8个基因在控制粒型方面具有重要作用。SG1基因编码一个功能未知的蛋白，主要在水稻根和发育的穗中表达，该蛋白的过量表达出现短粒和矮化表型。SG1降低了对油菜素内酯BR的应答，通过减少细胞增殖从而降低诸如种子、穗轴节间等器官的伸长。SGL1是一个类SG1蛋白，具有与SG1类似的功能，通过RNAi下调SG1及其同源基因SGL1的表达，水稻粒长和穗轴的节间较野生型变长（Nakagawa等，2012）。GS3位点是控制水稻粒重和粒长的主效QTL，同时也是控制水稻粒宽和籽粒充实度的微效QTL(Fan,Xing等，2006;Mao,Sun等，2010)。PGL1是一个非典型的不结合DNA的碱性螺旋-环-螺旋蛋白(bHLH)，过量表达PGL1增加了籽粒长度和重量。APG是PGL1的拮抗性互作因子，两者都定位在核内。PGL1/APG介导的籽粒长度增加是由于内颖细胞长度增加引起的。APG和PGL1不影响已知籽粒长度调控基因GS3和SRS3的表达。PGL1-APG代表了一个新的籽粒长度和重量调控途径，APG是一个负向调节子，其功能受到PGL1的抑制（Heang等，2012）。Mi3(t)基因，来源于籼型水稻Y34，该基因能使粒长缩短35.7%～47.4%，千粒重降低45.9%～62.4%，它主要控制籽粒长度，产生小粒(刘明伟等，2005)。此外，控制水稻籽粒性状的基因还有gGL7和gGL7-2。总之，控制水稻籽粒发育是一个复杂过程，涉及到多基因多条途径的协调控制，目前发现调控该性状的基因不多，调控籽粒发育的分子机理尚未阐明，因此，寻找控制籽粒性状发育的基因和新的发掘手段对作物改良并提高作物产量具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供水稻转录因子Os06g08400基因的应用。
为了实现本发明目的，本发明首先提供一种融合蛋白，该融合蛋白为（VP16）n-Linker-Os06g08400；其中，n为≥1的整数；Linker由1~20个柔性氨基酸串联而成（例如，GGGGG，GPPPG，或Gatway载体重组位点编码的氨基酸序列DPAFLYKVVPR）；VP16为来自单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus）的VP16蛋白；Os06g08400为水稻转录因子Os06g08400，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
本发明还提供一种用于扩增水稻转录因子Os06g08400基因的引物对，其为正向引物F：5′-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGGTTGGTTGACCAAATTTTTTAGA-3′和反向引物R：5′-CAAGAAAGCTGGGTCAAATGGGAAAGTCCCTGTTAACCG-3′。
优选地，前述融合蛋白中n为4，即前述融合蛋白为(VP16)4-Linker-Os06g08400。其中，(VP16)4即VP64，是由4个VP16功能域基序融合在一起组成的增强子，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。
本发明还提供编码所述融合蛋白的基因，以及在严格条件下，可与该基因的核苷酸序列杂交的核苷酸序列；其中，所述严格条件为65℃，在0.1×SSPE或0.1×SSC、0.1%SDS的溶液中杂交并洗膜。
本发明还提供含有编码所述融合蛋白的基因的载体。所述载体为任一种可引导外源基因在宿主中表达的载体。优选地，所述载体为植物双元表达载体（例如，pCAMBIA1301）。在将本发明编码所述融合蛋白的基因构建到植物表达载体中时，可在其转录起始核苷酸前添加任一种强启动子（例如，玉米强启动子Ubiquitin）或诱导型启动子。此外，在将本发明编码所述融合蛋白的基因构建到植物表达载体中时，还可以使用增强子，且这些增强子区域必须与编码序列的阅读框相同，以确保整条序列的翻译。
本发明还提供含有编码所述融合蛋白的基因的转基因细胞系。
本发明还提供含有编码所述融合蛋白的基因的工程菌。
本发明还提供编码所述融合蛋白的基因在改良水稻籽粒性状（如增加水稻籽粒的宽度和厚度）中的应用。
本发明进一步提供水稻转录因子Os06g08400基因的应用，其是将水稻转录因子Os06g08400基因的CDS序列（完整翻译区）构建到4个转录因子激活基序VP16的下游，转化植物，筛选并最终获得转基因植物。
前述的应用，其是将水稻转录因子Os06g08400基因的CDS序列通过Gateway系统构建到4个转录因子激活基序VP16的下游，转化水稻（例如，水稻品种‘kitaake’），从而改良转基因水稻籽粒的性状（如增加水稻籽粒的宽度和厚度）。其中，水稻转录因子Os06g08400基因是水稻转录因子Orphan家族成员之一，命名为OsOrphan40。水稻转录因子Os06g08400基因的CDS序列如SEQ ID No.3所示，4个转录因子激活基序VP16的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。
携带有编码所述融合蛋白的基因的表达载体可通过使用Ti质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电穿孔等常规生物技术方法导入植物细胞中（Weissbach，1998，Method for Plant Molecular BiologyVIII，Academy Press，New York，第411-463页；Geiserson和Corey，1998，Plant Molecular Biology，2nd Edition）。
本发明不同于QTL技术，而是利用VP64增强水稻转录因子的功能。其特点在于：VP64是由4个VP16功能域基序融合在一起组成的一类增强子，可增强融合转录因子的功能。OsOrphan40是水稻转录因子Orphan家族成员之一，当在其N-端融合VP64基序后，其表达的融合蛋白可增强OsOrphan40转录因子的功能。本发明通过基因工程手段将VP64融合到OsOrphan40的N-端，转化水稻品种‘kitaake’后，能够增加籽粒宽度发育。
本发明首次利用转录因子激活基序VP64（即4个转录因子激活基序VP16）与水稻转录因子Os06g08400基因融合构建得到组成型转录因子，并转化到农作物，如水稻中，从而改良水稻籽粒性状，如水稻籽粒宽度和厚度增加。对于详细阐明调控种子发育机理具有重要的理论价值，并且可以通过转基因手段，改良水稻的粒型，因此在生产实践中也具有重要意义。
附图说明
图1为本发明实施例1中nVP64-bar-asRED载体图谱。
图2为本发明实施例1中ubi:VP64-OsOrphan40载体图谱。
图3为本发明实施例3中PCR检测转基因阳性水稻株系的结果；其中，WT为野生型水稻‘kitaake’，Orphan40为VP64-Orphan40转基因水稻株系。
图4为本发明实施例3中Western Blot检测转基因阳性水稻株系的结果；其中，WT为野生型水稻‘kitaake’，Orphan40-1、Orphan40-2、Orphan40-3、Orphan40-4和Orphan40-5为VP64-Orphan40转基因水稻株系。
图5为本发明实施例4中VP64-Orphan40转基因水稻籽粒粒型（左）及米粒粒型的分析结果；其中，WT为野生型水稻‘kitaake’，Orphan40为VP64-Orphan40转基因水稻。
图6为本发明实施例4中VP64-Orphan40转基因水稻籽粒性状的考种统计数据分析结果；其中，WT为野生型水稻‘kitaake’，Orphan40-1、Orphan40-2、Orphan40-3、Orphan40-4和Orphan40-5为VP64-Orphan40转基因水稻株系。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。
实施例1 水稻转录因子Os06g08400基因的获得及植物表达载体的构建
在植物转录因子数据库（http://plntfdb.bio.uni-potsdam.de/v3.0/fam_mem.php?family_id=Orphans&sp_id=OSAJ）中找到水稻转录因子OsOrphan40基因，或者在MSU Rice Genome Annotation ProjectDatabase中查找编号Os06g08400，根据其CDS序列设计PCR扩增引物：正向引物F1：5′-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGGTTGGTTGACCAAATTTTTTAGA-3′和反向引物R1：5′-CAAGAAAGCTGGGTCAAATGGGAAAGTCCCTGTTAACCG-3′。
以水稻‘日本晴’（Oryza sativa subsp.japonica）叶片为材料，TRIzol法提取总RNA，反转录得cDNA，反应步骤如下：（1）在冰上向不含核酸酶的PCR反应管中依次加入下列物质：总RNA 6μl(0.1ng-5μg)，Oligo(dT)18引物1μl，不含核酸酶的ddH2O5μl，置于PCR仪中65℃反应5min；(2)然后再加入下列物质：5×反应缓冲液4μl，RNase抑制剂1μl，10mM dNTP 2μl，M-MμlV反转录酶1μl，轻轻混匀，在PCR仪中45℃反应60min；（3）PCR仪中，70℃5min，终止反应。以总cDNA为模板，进行PCR扩增，获得OsOrphan40基因全序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
第一轮PCR反应总体系为25μL,包括水稻cDNA（50ng）1μL，dNTP（2.5mM）2.5μL，引物F1(10μM)1μL，引物R1(10μM)1μL，PrimeSTAR Taq酶（5U/μL）0.3μL，10×反应缓冲液2.5μL，ddH2O16.7μL，共25μL。PCR反应程序为:98℃预变性3min；98℃ 10s，56℃15s，72℃ 1.5min，共35个循环；最后72℃ 5min。
第二轮PCR反应总体系为50μL,包括第一轮PCR产物（50ng）1μL，dNTP（2.5mM）5μL，引物F1(10μM)1.5μL，引物R1(10μM)1.5μL，PrimeSTAR Taq酶（5U/μL）1μL，10×反应缓冲液5μL，加ddH2O补足至50μL。PCR反应程序为:98℃预变性3min；98℃ 10s，56℃ 15s，72℃ 1.5min，共35个循环；最后72℃ 5min。
将第二轮PCR产物通过BP反应连接到pDONRzeo载体(Invitrogen)上，经测序鉴定阳性克隆。然后通过LR反应将OsOrphan40构建到其目的基因的N端融合了VP64标签的植物表达载体nVP64-hyg-asRED上（图1），获得载体ubi：VP64-OsOrphan40（图2，载体全序列如SEQID NO.6所示）。
其中，植物表达载体nVP64-bar-asRED的构建过程为：以双元表达载体pCAMBIA1300左右边界包含的序列为骨架序列，通过体外重组，将ubi promoter-VP64-Gateway表达单元、35S promoter-asRED表达单元和35S promoter-bar表达单元与之融合构建得到，载体nVP64-bar-asRED的全序列如SEQ ID No.5所示。
实施例2 转基因水稻植株的获得
取水稻‘kitaake’成熟种子，人工或机械脱壳，挑选饱满光洁无菌斑的种子经消毒之后接种到诱导培养基上进行诱导培养。选择外观良好，生长力好的水稻愈伤组织为受体材料，采用农杆菌介导法将载体ubi：VP64-OsOrphan40转入水稻愈伤组织中，用含有100μM的乙酰丁香酮和O.D.值为0.7的农杆菌的AAM转化液进行转化，将转化液浸泡过的愈伤组织置于共培养基上进行共培养，25℃暗培养3d后置于筛选培养基上培养约30d，每10d继代一次。然后将筛出的抗性愈伤转移到分化培养基上分化约20d，每10d继代一次。将分化出绿色小苗的抗性愈伤转移到生根培养基上生根，待约7d长出发达根系后炼苗，并计算转化所获转基因苗数。炼苗7d后转移至大田生长。用Basta筛选转基因水稻，长出4片幼叶后开始喷洒Basta(1:1000，v:v)，隔1天喷1次，共喷洒3次。共获得转基因水稻20株。
其中，诱导培养基配方为：N6大量+B5微量+NB有机+铁盐+铜钴母液+2.5mg/L 2,4D+0.6g/L酸水解酪蛋白+2.878g/L脯氨酸+0.5g/L谷氨酰胺+30g/L蔗糖，以水配制，调pH至5.8~5.9后加入植物凝胶4g/L。
共培养基配方为：N6大量+B5微量+NB有机+铁盐+2.5mg/L 2,4D+0.5g/L谷氨酰胺+0.6g/L酸水解酪蛋白+10g/L葡萄糖+30g/L蔗糖，以水配制，调pH至5.2后加入植物凝胶4g/L。灭菌后，50℃左右加入AS（乙酰丁香酮）100~200μg/mL。
筛选培养基配方为：N6大量+B5微量+NB有机+铁盐+铜钴母液+2.5mg/L 2,4D+0.6g/L酸水解酪蛋白+2.878g/L脯氨酸+0.5g/L谷氨酰胺+30g/L蔗糖，以水配制，调pH至5.8~5.9后加入植物凝胶4g/L。灭菌后加入35mg/L潮霉素（购自上海纽津生物技术有限公司）或5mg/L Bialaphos（购自北京拜尔迪生物技术公司）。
分化培养基配方为：MS无机+MS-B5微量+MS有机+铁盐+MS-铜钴母液+0.05mg/L NAA+2.0mg/L Kinetin（激动素）+30g/L山梨醇+2g/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖，以水配制，调pH至5.8~5.9后加入植物凝胶4g/L。
实施例3 Os06g08400-VP64转基因水稻的鉴定
为检测Os06g08400基因的CDS序列是否整合至水稻基因组DNA中，首先采用CTAB法分别提取野生型和转基因水稻叶片总DNA，设计检测引物序列，上游引物：5′-ATTTTTTTAGCCCTGCCTTCATACG-3′，下游引物：5′-CCAAATGTTTGAACGATCGATCCA-3′，进行PCR，扩增体系为：反应缓冲液5μl，dNTP 1μl，ddH2O 2.2μl，Taq DNA聚合酶0.2μl，上下游引物各0.3μl，DNA模板1μl，反应条件为热启动96℃ 5min；95℃30s，55℃ 30s，72℃ 2min，共32个循环；72℃延伸10min，最后25℃反应结束。鉴定转基因植株，对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳结果表明，转基因水稻均扩增出目的条带，而野生型水稻中未扩增出目的条带（图3），初步确定Os06g08400基因的CDS序列已通过农杆菌介导的方法插入到水稻基因组中，PCR产物经测序后，测序结果如SEQ ID No.3所示。
由于过表达载体带有FLAG标签，在转基因水稻中将与目的蛋白融合，因此利用该FLAG抗体可以鉴定转基因水稻中目的基因的蛋白表达情况，经过SDS-PAGE蛋白电泳→免疫印记→免疫荧光反应，Western Blot鉴定结果表明转基因植株存在目的蛋白，而野生型未杂出条带（图4）。
具体的Western Blot实验流程如下：
将适量样品放入液氮冰冻后研磨成粉末，加入适量上样缓冲液混匀，12000rpm离心10分钟；取5μl上清加样，以90V电压SDS-PAGE电泳30分钟后，120V电泳60-90分钟，当溴酚蓝到达凝胶的底端即可停止电泳；电泳后采用半干转移法转膜，并用丽春红染色液对膜进行染色，观察转膜效果；转膜完毕后，将膜放入含5%的脱脂奶粉的PBST溶液中封闭室温封闭60分钟或4℃过夜；室温下加入一抗(FLAG抗体，购自Abmart，货号M20008L)孵育1小时或4℃孵育过夜，然后用PBST洗涤3次，每次5分钟；室温下加入二抗（羊抗鼠，购自Abmart，货号M21001S）孵育1小时，然后用PBST洗涤3次，每次5分钟；在膜上加入底物，进行曝光。
实施例4 转基因水稻表型分析和考种分析
与野生型水稻‘kitaake’相比，VP64-Os06g08400（即VP64-Orphan40）转基因水稻的籽粒（带颖壳的稻粒）及米粒（脱去颖壳的稻粒）明显变宽（图5）。根据考种数据分析结果，可以明显看出VP64-Os06g08400转基因水稻的籽粒性状较野生型差异显著（图6），从图6可以看出，转基因的水稻籽粒和米粒表现出显著的粒宽和粒厚增加。
以上提供的实施例是将水稻转录因子Os06g08400基因的CDS序列通过Gateway系统构建到4个转录因子激活基序VP16的下游，转化水稻品种‘kitaake’，从而改良水稻籽粒性状，如水稻籽粒宽度和厚度增加、粒重增加。同样地，将水稻转录因子Os06g08400基因的CDS序列通过Gateway系统构建到1~3个或4个以上转录因子激活基序VP16的下游，转化水稻品种，也能够达到改良水稻籽粒性状的效果。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种融合蛋白，其特征在于，该融合蛋白为（VP16）n-Linker-Os06g08400；
其中，n为≥1的整数；Linker由1~20个柔性氨基酸串联而成；VP16为来自单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus）的VP16蛋白；Os06g08400为水稻转录因子Os06g08400。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，n为4。
3.编码权利要求1或2所述融合蛋白的基因。
4.含有权利要求3所述基因的载体。
5.含有权利要求3所述基因的转基因细胞系。
6.含有权利要求3所述基因的工程菌。
7.权利要求3所述的基因在改良水稻籽粒性状中的应用。
8.用于扩增水稻转录因子Os06g08400基因的引物对，其为正向引物F：5′-CAAAAAAGCAGGCTTCATGGGTTGGTTGACCAAATTTTTTAGA-3′和反向引物R：5′-CAAGAAAGCTGGGTCAAATGGGAAAGTCCCTGTTAACCG-3′。
9.水稻转录因子Os06g08400基因在调控水稻籽粒性状中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，其是将水稻转录因子Os06g08400基因的CDS序列通过Gateway系统构建到4个转录因子激活基序VP16的下游，转化水稻，从而改良转基因水稻籽粒的性状。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210276322XA CN102816243B (zh) | 2012-08-03 | 2012-08-03 | 水稻转录因子Os06g08400基因的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210276322XA CN102816243B (zh) | 2012-08-03 | 2012-08-03 | 水稻转录因子Os06g08400基因的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102816243A true CN102816243A (zh) | 2012-12-12 |
| CN102816243B CN102816243B (zh) | 2013-11-13 |
Family
ID=47300718
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210276322XA Expired - Fee Related CN102816243B (zh) | 2012-08-03 | 2012-08-03 | 水稻转录因子Os06g08400基因的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102816243B (zh) |
Cited By (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103214581A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-07-24 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用 |
| CN103224563A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-07-31 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64- Os01g63510的应用 |
| CN103421120A (zh) * | 2013-08-23 | 2013-12-04 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g02540基因的应用 |
| CN104046643A (zh) * | 2014-06-03 | 2014-09-17 | 吉林大学 | 水稻转录因子Os01g60810基因CDS序列的应用 |
| CN104073503A (zh) * | 2013-03-26 | 2014-10-01 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g01130基因的应用 |
| CN104211809A (zh) * | 2013-05-31 | 2014-12-17 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64-linker-Os03g11370在改良水稻籽粒性状方面的应用 |
| CN104211813A (zh) * | 2013-06-03 | 2014-12-17 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os02g49250基因的应用 |
| CN104341512A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g32270.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341515A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g42290.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341509A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g35030.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341525A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os02g47744基因CDS序列的应用 |
| CN104341527A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g12350基因CDS序列的应用 |
| CN104341510A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os04g55590.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341520A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g09550.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341519A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g45090.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341516A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g46780基因CDS序列的应用 |
| CN104341526A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os07g38240基因CDS序列的应用 |
| CN104341514A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g05590.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341511A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os12g06630.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341528A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os04g08740基因CDS序列的应用 |
| CN104341522A (zh) * | 2013-08-02 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g27980基因CDS序列的应用 |
| CN104341513A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g10670.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341521A (zh) * | 2013-08-02 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os09g11480.2基因CDS序列的应用 |
| CN104341507A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g62514.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341517A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os09g14040基因CDS序列的应用 |
| CN104341518A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os08g32085.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341508A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g31340.1基因CDS序列的应用 |
| CN104371023A (zh) * | 2013-08-13 | 2015-02-25 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g36630基因CDS序列的应用 |
| CN104371022A (zh) * | 2013-08-13 | 2015-02-25 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os06g06970基因CDS序列的应用 |
| CN104418953B (zh) * | 2013-08-21 | 2017-08-25 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os02g19804基因CDS序列的应用 |
| CN112553245A (zh) * | 2019-09-25 | 2021-03-26 | 扬州大学 | OsPIL16基因的新用途 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101855353A (zh) * | 2007-10-11 | 2010-10-06 | 植物生物科学有限公司 | 植物种子和器官的尺寸的控制方法 |
| CN102190731A (zh) * | 2010-03-09 | 2011-09-21 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 用人工转录因子诱导产生多能干细胞 |
-
2012
- 2012-08-03 CN CN201210276322XA patent/CN102816243B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101855353A (zh) * | 2007-10-11 | 2010-10-06 | 植物生物科学有限公司 | 植物种子和器官的尺寸的控制方法 |
| CN102190731A (zh) * | 2010-03-09 | 2011-09-21 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 用人工转录因子诱导产生多能干细胞 |
Cited By (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104073503A (zh) * | 2013-03-26 | 2014-10-01 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g01130基因的应用 |
| CN103214581B (zh) * | 2013-03-29 | 2014-12-10 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用 |
| CN103224563A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-07-31 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64- Os01g63510的应用 |
| CN103214581A (zh) * | 2013-03-29 | 2013-07-24 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用 |
| CN103224563B (zh) * | 2013-03-29 | 2014-09-03 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64- Os01g63510的应用 |
| CN104211809A (zh) * | 2013-05-31 | 2014-12-17 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 合成型转录因子VP64-linker-Os03g11370在改良水稻籽粒性状方面的应用 |
| CN104211813A (zh) * | 2013-06-03 | 2014-12-17 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os02g49250基因的应用 |
| CN104341507B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-09-15 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g62514.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341514B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-11-07 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g05590.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341513B (zh) * | 2013-07-31 | 2018-05-01 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g10670.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341512A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g32270.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341515A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g42290.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341509A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g35030.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341516B (zh) * | 2013-07-31 | 2018-04-27 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g46780基因CDS序列的应用 |
| CN104341517B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-12-12 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os09g14040基因CDS序列的应用 |
| CN104341510A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os04g55590.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341520A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g09550.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341519A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g45090.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341516A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g46780基因CDS序列的应用 |
| CN104341518B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-11-07 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os08g32085.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341514A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g05590.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341511A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os12g06630.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341520B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-09-05 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g09550.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341510B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-09-05 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os04g55590.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341513A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g10670.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341519B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-05-17 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g45090.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341507A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g62514.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341517A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os09g14040基因CDS序列的应用 |
| CN104341518A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os08g32085.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341508A (zh) * | 2013-07-31 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g31340.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341509B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-11-07 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g35030.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341508B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-10-13 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g31340.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341512B (zh) * | 2013-07-31 | 2017-10-13 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g32270.1基因CDS序列的应用 |
| CN104341521A (zh) * | 2013-08-02 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os09g11480.2基因CDS序列的应用 |
| CN104341522A (zh) * | 2013-08-02 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os05g27980基因CDS序列的应用 |
| CN104341521B (zh) * | 2013-08-02 | 2017-08-01 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os09g11480.2基因CDS序列的应用 |
| CN104341526A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os07g38240基因CDS序列的应用 |
| CN104341526B (zh) * | 2013-08-09 | 2018-01-02 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os07g38240基因CDS序列的应用 |
| CN104341527B (zh) * | 2013-08-09 | 2017-09-05 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g12350基因CDS序列的应用 |
| CN104341525A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os02g47744基因CDS序列的应用 |
| CN104341528B (zh) * | 2013-08-09 | 2018-03-06 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os04g08740基因CDS序列的应用 |
| CN104341528A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os04g08740基因CDS序列的应用 |
| CN104341527A (zh) * | 2013-08-09 | 2015-02-11 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os03g12350基因CDS序列的应用 |
| CN104371022B (zh) * | 2013-08-13 | 2017-06-20 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os06g06970基因CDS序列的应用 |
| CN104371022A (zh) * | 2013-08-13 | 2015-02-25 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os06g06970基因CDS序列的应用 |
| CN104371023A (zh) * | 2013-08-13 | 2015-02-25 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os01g36630基因CDS序列的应用 |
| CN104418953B (zh) * | 2013-08-21 | 2017-08-25 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os02g19804基因CDS序列的应用 |
| CN103421120B (zh) * | 2013-08-23 | 2014-11-05 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g02540基因的应用 |
| CN103421120A (zh) * | 2013-08-23 | 2013-12-04 | 中国农业科学院作物科学研究所 | 水稻转录因子Os11g02540基因的应用 |
| CN104046643B (zh) * | 2014-06-03 | 2017-01-18 | 吉林大学 | 水稻转录因子Os01g60810基因CDS序列的应用 |
| CN104046643A (zh) * | 2014-06-03 | 2014-09-17 | 吉林大学 | 水稻转录因子Os01g60810基因CDS序列的应用 |
| CN112553245A (zh) * | 2019-09-25 | 2021-03-26 | 扬州大学 | OsPIL16基因的新用途 |
| CN112553245B (zh) * | 2019-09-25 | 2022-06-07 | 扬州大学 | OsPIL16基因的新用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102816243B (zh) | 2013-11-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102816243B (zh) | 水稻转录因子Os06g08400基因的应用 | |
| CN103214581B (zh) | 合成型转录因子VP64-Os03g57670的应用 | |
| CN102786599B (zh) | 水稻转录因子Os05g39950基因的应用 | |
| CN103224563B (zh) | 合成型转录因子VP64- Os01g63510的应用 | |
| CN102775499B (zh) | 水稻转录因子Os01g64730基因的应用 | |
| CN102775498B (zh) | 水稻转录因子Os05g41070基因的应用 | |
| CN103725692A (zh) | 水稻育性控制锌指蛋白基因 | |
| CN104211809B (zh) | 合成型转录因子VP64‑linker‑Os03g11370在改良水稻籽粒性状方面的应用 | |
| CN103254314A (zh) | 水稻转录因子Os05g41070基因的应用 | |
| CN103421121B (zh) | 水稻转录因子Os02g07780基因的应用 | |
| CN104341514B (zh) | 水稻转录因子Os03g05590.1基因CDS序列的应用 | |
| CN103265634B (zh) | 水稻转录因子Os01g64730基因的应用 | |
| CN104292336A (zh) | 水稻转录因子Os03g50310基因的应用 | |
| CN104341527A (zh) | 水稻转录因子Os03g12350基因CDS序列的应用 | |
| CN104211812A (zh) | 水稻转录因子Os02g49370基因的应用 | |
| CN104341513A (zh) | 水稻转录因子Os05g10670.1基因CDS序列的应用 | |
| CN104341521A (zh) | 水稻转录因子Os09g11480.2基因CDS序列的应用 | |
| CN104250303A (zh) | 转录因子Os11g39000.2在改变水稻籽粒性状中的应用 | |
| CN104341520A (zh) | 水稻转录因子Os01g09550.1基因CDS序列的应用 | |
| CN104341522A (zh) | 水稻转录因子Os05g27980基因CDS序列的应用 | |
| CN103408670A (zh) | 水稻转录因子Os05g09480基因的应用 | |
| CN104418954A (zh) | 水稻转录因子Os06g07010基因CDS序列的应用 | |
| CN103266114A (zh) | 水稻转录因子Os01g23760基因的应用 | |
| CN104341512A (zh) | 水稻转录因子Os05g32270.1基因CDS序列的应用 | |
| CN103255148A (zh) | 水稻转录因子Os01g18440基因的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20131113 |