CN102813704B

CN102813704B - 莲子用于制备ace抑制剂的应用

Info

Publication number: CN102813704B
Application number: CN201210137731.1A
Authority: CN
Inventors: 谢静莉; 方明; 张旭晟; 邓高静; 吴燕玲; 王波; 束雯婷; 李莹; 杜磊; 李鹏
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2012-05-04
Filing date: 2012-05-04
Publication date: 2014-06-04
Anticipated expiration: 2032-05-04
Also published as: CN102813704A

Abstract

本发明公开了一种莲子用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。优选的，所述莲子为莲子的果仁经蛋白酶水解后的产物。本发明为莲子的开发利用开辟了一条全新的途径，具有非常广泛的应用前景。

Description

莲子用于制备ACE抑制剂的应用

技术领域

本发明属于食品领域，具体地说，是关于莲子用于制备血管紧张素转化酶(Angiotensin Converting Enzyme，ACE)抑制剂的应用。

背景技术

莲子(Nelumbo nucifera Gaertn.)，是莲属(Nelumbo)睡莲科(Nymphaeaceae)的多年水生草本的种子，又称莲实、莲米、莲肉。味甘、涩，性平，是一种常用中草药，也用于东亚一些国家的菜肴中。

每100克去芯莲子果仁中蛋白质含量为19.99％，粗脂肪含量为6.82％，水分含量为9.43％。莲子中氨基酸含量为178.05mg/g，氨基酸总量占粗蛋白的89.1％；必需氨基酸占氨基酸总量的36.34％。从各种氨基酸组分来看，谷氨酸的含量最高，为39.25mg/g，其次为天冬氨酸，为18.90mg/g，甲硫氨酸最低，为3.23mg/g。

ACE(血管紧张素转化酶，Angiotensin Converting Enzyme)在人体内的作用是将血管紧张素I(Angiotensin I Converting Enzyme)转化成血管紧张素II(Angiotensin II Converting Enzyme)，而血管紧张素II为强烈的血管收缩物质，可使血管收缩，从而使体内血压升高。此外，ACE还可以失活体内调节血压的舒缓激肽，也从而使体内血压升高。

ACE是一种金属肽酶，含有2个结合Zn²⁺的位点，即所谓“必须结合位点(Obligatory Binding Site)”。Zn²⁺结合位点是ACE催化反应的活性基团所在部位。各种ACE抑制物的共同作用是与ACE活性部位的Zn²⁺结合，使之失活。

降血压肽是由数个氨基酸组成的肽，是对ACE活性区域亲和力较强的竞争性抑制剂，它们与ACE的亲和力比血管紧张素转化酶I(AngI)或舒缓激肽更强，而且也较不容易从ACE结合区释放，降低ACE活性或使其失去活性，从而阻碍ACE催化血管紧张素Ⅰ转化成血管紧张素II，使血管不收缩，以及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程，起到降血压的作用。

到目前为止，未发现有关于利用莲子制备ACE抑制物或降血压药物的报道。

发明内容

本申请的发明人在长期研究莲子的用途的过程中发现，莲子果仁的水解产物具有明显的血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性。

因此，本发明的目的在于提供一种莲子用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用。

根据本发明，所述莲子为莲子的果仁经蛋白酶水解后的产物。

根据本发明的优选实施例，所述莲子的果仁为莲子去除绿色莲子心的白色果实部分。

根据本发明的优选实施例，所述蛋白酶选自：胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它们的组合。

基于莲子具有抑制血管紧张素转化酶活性的作用，莲子可进一步用于开发具有降血压功能的食品或保健品。

本发明为莲子的开发利用开辟了一条全新的途径，具有非常广泛的应用前景。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明的降血压多肽的制备方法作进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于实施本发明而非用于限定本发明的范围。

以下实施例中，ACE抑制活性的测定原理及方法步骤如下：

莲子果仁的蛋白水解物(多肽)的ACE抑制活性测定采用体外模拟测定，体外ACE抑制率测试原理为：底物马尿酰组氨酰亮氨酸(HHL)在ACE酶的催化作用下，可以生产马尿酸(Hip)和二肽，通过液相的方法测定马尿酸的含量，进而可以间接测定ACE酶的酶活；而ACE抑制剂的存在可以抑制ACE酶的活性，致使Hip的生成减少，从而间接反映了ACE抑制肽的活性。

测试ACE抑制率的方法步骤如下：选取EP管作为反应器，编号0、1、2、3等。0号管加入15μL去离子水为对照，1、2、3等管加入15μL的ACE抑制剂。然后各管内均加入15μL的底物HHL，37℃温浴5min后，加入5μL的ACE酶启动反应，在37℃水浴中反应40min。反应结束后，加入300L 1M HCl终止反应。反应液进行高速离心，过4.5μm的滤头，然后进行高效液相色谱(HPLC)测定。HPLC条件是：10％乙腈：90％水(0.1％TFA)，检测波长228nm，柱温30℃，上样量20μL。

ACE抑制率(X)按下式计算：

X=(A对照-A1)/A对照×100％

式中：X--ACE抑制率(％)

A对照--对照组生成Hip的峰面积

A1--实验组生成Hip的峰面积

实施例1-8、莲子多肽水解物的制备

取莲子，去莲子心，取白色果仁部分，洗净后捣碎研磨，收集，取一定量的莲子粉末，进行干燥，得干燥的莲子果仁粉。

按表1所示，对获得的干燥莲子果仁粉分别用不同组合的蛋白酶进行处理，具体如下：

称取2g粉末，配制成20mg/ml的溶液，按照表1的蛋白酶水解条件，调pH值至相应的酶反应pH条件，加入相应的酶0.1％(w/v)，在相应的反应温度下水浴酶解0.17～8小时，搅拌。当使用两种不同蛋白酶处理时，在第一种蛋白酶酶解结束后，煮沸10min灭酶活，再进行第二种蛋白酶的处理步骤。终止反应后，调节pH至7，水解物离心(12000r/min，10min)，取上清液，在-40℃冷冻干燥，收集水解物粉末。

表1、不同蛋白酶水解条件

实施例

酶的组合

温度(℃)

pH

时间(hr)

1	胃蛋白酶	37	1.5	0.17
					2	胃蛋白酶	37	1.5	2
3	胃蛋白酶	37	1.5	4
					4	胃蛋白酶	37	1.5	6
5	胃蛋白酶+胰蛋白酶	37	1.5+8	0.085+0.085
					6	胃蛋白酶+胰蛋白酶	37	1.5+8	2+2
7	胃蛋白酶+胰蛋白酶	37	1.5+8	3+4
					8	胃蛋白酶+胰蛋白酶	37	1.5+8	4+6

实施例9-15、莲子多肽水解物的制备

取莲子，去莲子心，取白色果仁部分，捣碎研磨，收集，取一定量的莲子粉末，进行干燥，得干燥的莲子果仁粉。

按表2所示，对获得的干燥莲子果仁粉配制成不同浓度的水解液，然后用胃蛋白酶和胰蛋白酶的组合进行处理，具体如下：

取莲子粉末，按照表2的莲子水解液浓度，配制成0.1～10mg/ml的溶液，调pH值至相应的酶反应的pH条件，加入相应的酶0.1％(w/v)，在相应的反应温度下水浴消化，在第一种蛋白酶酶解结束后，煮沸10min灭酶活，再进行第二种蛋白酶的处理步骤，两种酶分别酶解4小时，最后煮沸10min灭酶活，终止反应。调节pH至7，水解物离心(12000r/min，10min)，取上清液，在-40℃冷冻干燥，收集水解物粉末。

表2、不同浓度莲子水解液的水解条件

实施例16-30、ACE抑制活性的测定

分别取实施例1-8和9-15获得的莲子果仁水解物粉末，配制成不同浓度的溶液，采取体外模拟测定方法对ACE抑制活性进行测定，结果分别如以下表3和表4所示：

表3、ACE抑制活性-1

表4、ACE抑制活性-2

由表3的结果可见，莲子果仁经胃蛋白酶水解、胃蛋白酶和胰蛋白酶组合水解后的产物均具有明显的ACE抑制活性，并且随着反应时间的延长，ACE抑制率增加。胃蛋白酶和胰蛋白酶组合水解产物的ACE抑制活性最强，达到了90.6％。

由表4的结果可见，不同浓度的莲子水解物经胃蛋白酶和胰蛋白酶组合水解后的产物也均具有明显的ACE抑制活性，根据计算，莲子经胃蛋白酶和胰蛋白酶组合水解产物的ACE抑制率的IC₅₀值为1.092mg/ml。

综上所述，本发明提供的莲子果仁的蛋白酶水解物对血管紧张素转化酶(ACE)具有明显的抑制活性。因而可以用于制备ACE抑制剂，或者进一步用于制成具有降血压功能的食品或保健品，这对于本领域的技术人员来说是显而易见的。

Claims

1.莲子用于制备血管紧张素转化酶抑制剂的应用，所述莲子为莲子的果仁经蛋白酶水解后的产物，所述蛋白酶选自：胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它们的组合。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述莲子的果仁为莲子去除绿色莲子心的白色果实部分。

3.莲子用于制备降血压食品或保健品的应用，其特征在于，所述降血压食品或保健品用于抑制血管紧张素转化酶的活性，所述莲子为莲子的果仁经蛋白酶水解后的产物，所述蛋白酶选自：胃蛋白酶，胰蛋白酶，或者它们的组合。