CN102802618B - 烟酸和米曲肼的治疗组合 - Google Patents

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Abstract

本发明包括烟酸和米曲肼的协同组合，其特征在于增加治疗病症的效率，所述病症包括：血小板聚集，血脂异常，高脂血和动脉粥样硬化，选自心绞痛和心肌梗死的冠心病，包括脑血管意外和中风的暂时性和永久性的脑缺血发作，以及周围动脉闭塞性疾病，以及其特征在于降低的潮红效应和/或血糖水平的增加，所述组合包括对于所述目的有效的、作为活性成分烟酸或其药学上可接受的盐以及米曲肼或其药学上可接受的盐。

Description

烟酸和米曲肼的治疗组合
发明领域
本发明涉及预防和/或治疗烟酸和米曲肼的新的治疗组合和/或预防选自以下病症以及预防血小板聚集和血栓形成方法，所述病症包括：血脂异常，高脂血，动脉粥样硬化，选自心绞痛和心肌梗死的冠心病，包括脑血管意外和中风的暂时性和永久性的脑缺血发作以及周围动脉闭塞性疾病。 
更确切而言，本发明涉及含有烟酸和米曲肼(meldonium)的新的治疗组合，其协同地增强烟酸的治疗效果和改良烟酸的某些不良的副作用，特别是周围血管扩张(潮红)和血糖水平升高。本发明也涉及包括这种组合药品的药物组合物，以及其在制备预防和/或治疗前述病症药物中的用途。 
使用的缩写 
为了简便，在本说明书中进一步使用下列缩写： 
ATP–腺苷三磷酸 
C–胆固醇 
GL–葡萄糖 
HDL-C–高密度脂蛋白-胆固醇 
I/R–局部缺血/再灌注 
LDL-C–低密度脂蛋白-胆固醇 
MD–米曲肼(INN) 
NA–烟酸 
NAMg–烟酸镁盐 
PI–吡乙酰胺 
RPP-心率血压乘积=平均血压x心率x1000-1
SI-辛伐他汀 
TG–甘油三酯 
TR–Triton WR1339(泰洛沙泊Tyloxapol) 
VF–心室颤动 
VT–心室性心动过速 
发明的背景技术 
NA是治疗血脂异常的重要药物，且是当前唯一可得的有利地影响血脂分析的所有成分的药物：降低血液中总胆固醇、TG和LDL-C的浓度，且在多种脂质改变剂中具有最显著的提高HDL-C活性(Pieper JA，Am J Manag Care 2002；8(12Suppl)：S308-14)。 
早在1955年(Altshul R，Hoffer A，Stephen JD，Arch Biochem Biophys 1955；54：558-559)及1959年(Parsons Jr WB，Flinn JH，AMA Arch Intern Med 1959；103：783-790)，已有人报道NA用于治疗血脂异常。 
因为NA有效地提高HDL-C水平(McKenney J，Arch Intern Med 2004；164(7)：697-705.Carlson LA，J Intern Med 2005；258：94-114)，目前NA与其他脂质修饰剂结合，其大多对LDL-C水平起作用，为了增加HDL-C水平(Rosenson RS，Am J Med 2005；118(10)：1067-77)。 
NA是有效的改变脂质剂，其通过提高HDL-C水平预防动脉粥样硬化进展和减少临床心血管事件(Savel’ev AA，Shershevskii MG，Klin Med(Rus)1996；74：48-52.Drexel H，European Heart Journal Supplements 2006；Vol 8，Suppl F：F23-F29.Brown BG，Zhao XQ，Am J Cardiol 2008；101(8A)：58B-62B)。NA减少了具高血脂症患者的发病率和死亡率(Canner PL等人，J Am Coll Cardiol 1986；8：1245-55)。在治疗高脂血症的案例中，NA是用于增加HDL-C最有效的药物(Ellingworth DR等人，Arch Intern Med 1994；154：1586-95.Schectman G等人，Am J Cardiol 1993；71：758-65)。NA减弱血栓形成，降低血液黏度且具有心脏保护效果，其可限制局部缺血-再灌注的伤害(Lamping KA等人，Pharm Exp Ther 1984；231(3)：532-538.Trueblood NA等人，Am J Physiol Heart Circ Physiol 2000；279(2)，H764-H771.Rosenson RS Atherosclerosis 2003；171(1)：87-96)。 
因为低HDL-C是中风的危险因子(Wannamethee SG，Shaper AG，Ebrahim S，Stroke 2000；31：1882.Sacco RL，Benson RT，Kargman DE JAMA 2001；285：2729-2735.Rizos E，Mikhailidis DP，Cardiovasc Res 2001；52(2)，199-207.Sanossian N，Tarlov NE，Curr Treatmt Opt Cardiov Med 2008；10(3)，195-206.)，NA作为药物提高HDL-C((Carlson LA，Curr Opin Cardiol 2006；21(4)336-344)，用于预防中风及中风后遗症状况是有用的(Koniukov SG，Liberzon SP，Klin Med(Mosk)1975；53(9)：38-41.)。已被确认的是，在急性缺血性中风时，HDL-C水平降低(Russman AN等人，J Neurol Sci 2009；279(1-2)：53-56)。NA已显示其改善中风后功能恢复(Chen J等人，Ann Neurol 2007；62(1)：49-58)。HDL-C本身已被提议用于治疗中风及其他缺血性状况(Kapur NK等人，Vasc Health Risk Manag 2008；4(1)：39-57.EP 1 425 031)。 
NA可有3种制剂(立即释放、延长释放和长效作用)。立即释放型NA与不良潮红及血糖浓度升高有关。长效作用型NA与减少潮红有关，但亦有肝毒性影响的危险。延长释放型与较少的潮红及低肝毒性危险有关(Pieper JA，Am J Health Syst Pharm 2003；60(13Suppl 2)：S9-14.McKenney J，Arch Intern Med 2004；164(7)：697-705.Knopp RH，Am J Cardiol 2008；86(Suppl)；51L-56L)。NA的钠盐、钾盐和镁盐的使用 亦被描述。 
NA的主要缺点是，必须给与大剂量以实质改变血脂浓度。几乎100％的用NA治疗的对象都会经历不舒服的潮红副作用，其在多种情况下阻碍了用NA治疗。经皮释放的前列腺素D2被确定为由NA诱发的潮红的直接原因(Morrow JD等人，J Invest Dermatol 1992；98：812-5)。由于NA有关的潮红是前列腺素活性的结果，乙酰水杨酸，其作为公认的前列腺素合成的抑制剂，被提出来，并用于控制潮红。除了乙酰水杨酸，其他NSAIDS也是有效的(Oberwittler H，Baccara-Dinet M，Int J Clin Pract 2006；60(6)：707-715)。然而NSAIDS本身并非完全没有副作用，且会导致胃肠刺激和溃疡。 
最近，有人提出前列腺素D2受体亚型1的特异性拮抗剂拉罗匹仑(laropiprant)(Parhofer KG，Vascular Health and Risk Management 2009；5：901-908)，作为用于降低由NA诱发的潮红的药物(Lai E等人，Clin Pharm Ther 2007；81：849-857.Davidson MH，Am J Cardiol 2008；101(suppl)：14B-19B)。虽然添加拉罗匹仑将降低潮红的频率，其并不完全消除此副作用。拉罗匹仑并不改变烟酸对脂质的影响或其它的烟酸的副作用。因此，烟酸与拉罗匹仑的组合可使烟酸的较高的剂量使用，并因此开发了此药物的全部潜能(Parhofer KG，Vascular Health and Risk Management 2009；5：901-908，Olsson AG，Expert Opinion on Pharmacotherapy 2010；11(10)：1715-1726)。 
2型糖尿病患者常具有血脂异常改变，其特征在于，TG水平的升高以及HDL-C水平的降低。考虑到NA对脂质代谢的药理作用，NA应抵消2型糖尿病患者中的血脂异常改变。然而，数个报道出，NA增加了胰岛素抗性(Garg A，Grundy SM，JAMA 1990；264：723-6.Kahn SE等人，Diabetes 1989；38：562-8)并提高葡萄糖水平((Elam，MB等人，JAMA 2000；284(10)：1263-1270)。因此，对糖尿病患者推荐只给予有限的NA剂量(＜2g/天)(Shepher J，Betteridge J，Van Gaal L，Curr Med Res Op2005；21(5)：665-682)。明显的是，需要有能改善使用NA的糖尿病患者的血糖控制的新的药物。临床上，有发现米曲肼的降低血糖能力(Statsenko ME等人，Klin Med(Rus)2007；85(7)：39-42)，因此期待该药物可以结合NA作为另外的临床优势。 
冠心病期间，血小板在动脉粥样硬化和致命的血栓形成的发展中，扮演了关键性的角色。抗血小板药物已成为预防及管理多种涉及心血管、脑血管、和周围动脉系统相关的疾病的首选(Meadows TA等人，Circ Res 2007；100(9)：1261-75)。NA是有效的改变脂质剂，其预防动脉粥样硬化并减少心血管事件。NA具有多种的脂蛋白和抗动脉粥样血栓形成效果，其改善内皮功能，减少炎症，增加血小板稳定性，并降低血栓形成(Rosenson RS，Atherosclerosis 2003；171：87-96)。 
NA抑制了血小板聚集(Lakin KM，Farmakol Toksikol，1980；43(5)：581-5)。NA在体外通过温和地抑制血小板聚集影响血小板的活性，并刺激显著的前列腺素释放，其中大部分完整的主要血小板受体表达。NA的效力是独特的，不同于其他已 知的抗血小板药物，且暗示了治疗组合的潜在机会(Serebruany VL等人，Thrombosis and Haemostasis，2010(在印刷中)。 
NA几乎完全预防由促凝血酶原激酶和垂体激素诱导的血管内血凝固，显示了其具有溶解血栓的效果(Baluda VP，Kardiologija 1974；14(11)：105-7(Rus)。数名作者说明了NA的抗血栓的性质(Shestakov VA，Probl Gematol Pereliv Krovi，1977；22(8)：29-35.Chekalina SI，Sov Med 1982(5)：105-8)。烟酸减少了减少了血凝块的风险(Chesney CM等人，Am Heart J，2000；140：631-36)。 
MD是具有某些对心脏和血管有益影响的药物。某些期望的MD活性已在动脉粥样硬化的动物模型中发现(Veveris M，Smilsaraja B，Baltic J Lab Anim Sci2000；10，194-199.Veveris M等人，Baltic J Lab Anim Sci 2002；12：116-122.OkunevichIV，Ryzhenkov VE，Patol Fiziol Eksp Ter 2002；(2)：24-7)，以及在临床上被观察到(Karpov RS等人，Ter Arkh 1991；63(4)：90-3)，因此期待此药物可结合NA作为另外的临床优势。 
也已被注意的是，MD抑制血小板聚集(TsirkinVI，Ros Kardiol Zh 2002；1：45-52)。在试验的动脉血栓形成后经口给与于兔与狗两周的MD治疗使用，显示了溶解血栓的效果(Logunova L等人，Experim Clin Pharmacoter 1991；19：91-98(Rus)。MD在控制或预防血栓形成的预防效果方面并无已知的数据。 
现有技术
发展组合药品以治疗脂质代谢相关的病症的当前趋势可以改善临床照料的效率(Black DM，Curr Ther Rep 2003；5：39-32)。因为贝特类、NA和他汀类各可依不同机制调节血清脂质，组合疗法比起单一疗法对患者可提供特別期望的益处。因为发展用于降低LDL-C水平的新的药物的进展已逐渐缓慢，研究已转向发展提高HDL-C浓度的更好药物。愈來愈多使用包含NA、贝特类、他汀类和胆汁酸螯合剂的组合疗法来治疗脂质代谢相关病症，因为组合产物的附加情形(additive profiles)(Miller M，Mayo Clin Proc 2003；78(6)：735-42.Backes JM等人，Vasc Health Risk Manag 2005；1(4)：317-331.Belsey L等人，Curr Med Res Opin 2008；24(9)，2703-9.Rosenson RS，Pitt B，Nat Clin Pract Cardiovasc Med 2009；6(2)：98-100)。愈來愈多使用包含NA和其他药物如乙酰水杨酸和作为血小板抑制剂的其他NSAIDs的组合疗法(USP 5,981,555)。然而这些组合并没有增加NA的活性，即，没有协同作用被报道。因此任何可增强NA在脂质代谢相关疾病中的疗效、而不增加NA的不良副作用的药物，将具有有益的临床上效用。 
发明的目的 
本发明的目的是提供用于预防和/或治疗脂质代谢相关病症的治疗组合，和预防和/或治疗需要其的对象中的脂质代谢相关病症的方法，通过使用NA结合MD， 其具有缓和NA不良的副作用的进一步有利的影响。本发明的治疗组合预期具有在脂质代谢相关疾病的治疗和/或预防方法中协同效果，代谢相关疾病包括：血脂异常，高脂血，动脉粥样硬化，选自心绞痛和心肌梗死的冠心病，包括脑血管意外和中风的暂时性和永久性的脑缺血发作以及周围动脉闭塞性疾病，预防血小板聚集和血栓形成。 
根据本发明，治疗组合如果效果治疗上优于NA或MD的分开的效果，被定义为具有协同效果。应当理解的是，如本文使用的治疗组合意指，同时、顺序或分开地给与该组合的药物。本发明另外的目的是提供包括NA和MD两者用于前述目的的药物组合物。本发明的进一步目的在下文中更为明显，且其他的目的对于本领域技术人员将是显而易见的。 
具体实施方式
本发明包括NA和MD的组合，其提供治疗脂质答谢相关病症的有效的协同组合，优选为以单一剂量单位形式。可选地，该二成分可分开同时或以任何次序依序给与。其中给与活性成分的确切形式并不重要，只要能得到本发明的期望效果。活性成分可采用下列形式：胶囊、悬浮液、分散体、酊剂、糖浆等等，不论分开或以单一组合物给与。 
现在我们已出人意外地发现，NA和MD对脂质代谢相关病症具有协同作用，及其他有益的效果。出人意料地发现，MD是第一个增强NA的有益效果的药物，即降低TG和LDL-C水平并提高HDL-C水平，增强NA的抗聚合效果，并改善NA的不良的副作用，特別是潮红和血糖水平的提高。 
因此所述组合物预期为用于治疗糖尿病患者的血脂异常的优选药物。我们也出人意外地发现，本发明的组合改良了试验性梗塞和中风的后果。 
现在我们已出人意外地发现，NA和MD对血小板聚集具有协同作用。出人意料地发现，MD是第一个增强NA的抗血小板效果的药物。 
本发明的组合可以以适合于口服的形式(例如作为片剂、胶囊、水状悬浮剂或可分散的粉剂或颗粒剂)，用于肠胃道外给与(例如作为用于静脉注射、皮下的、或肌肉注射给药的无菌水溶液)或作为用于直肠给药的栓剂。优选地是，本发明的治疗组合是以适合于口服使用的形式，例如作为片剂或胶囊。 
根据本发明的治疗组合也包括活性药物的分开的药物组合物的组合，其包括NA或其药学上可接受盐以及药学上可接受的赋形剂或载体的第一组合物，以及包含MD或其药学上可接受盐和药学上可接受的赋形剂或载体的第二组合物。此药物组合物的组合提供了本发明的治疗组合用于同时或顺序使用。此组合的优点是优点在于，医生可以为单独患者调整活性剂的比例。本发明的治疗组合也预期包括NA以及NA的药学上可接受盐(钠、钾或镁)与MD和其盐的持续释放或延长释放制剂。 
本发明的治疗组合也可包括其他具有脂质代谢相关病症的已知活性的药品，即他汀类，特別是辛伐他汀。 
本发明的药物组合物可以通过使用常规的药物学上可接受赋形剂或载体和技术的常规步骤得到。 
提供下列实例以说明本发明但不限制发明。 
实施例 
试验：通过现有技术中使用的标准方法来研究测试物质的药理学活性。在22±1℃、相对湿度60±5％的气候调节室中将动物以6只一组置于适当的笼中，给与12/12小时光照/黑夜循环，及可自由取用食物与水。所有试验都依据1986年11月24日欧洲共同体议会指令(86/609/EEC)有关实验动物照料的规定实施。所有的努力都为将动物的痛苦减到最小并减少动物的使用数量而做。 
物质：胆固醇(Acros Organics)、米曲肼(Grindex)、动物营养(R 70Lactamin)、奶油(商业可得的)、胆酸钠(Acros Organics)、NA(Acros Organics)、拉罗匹仑(MK0524，Cayman Chemicals).所有其它化学品都是商业来源的。 
实施例1-抗动脉粥样硬化活性的测定
方法：使用动脉粥样硬化基因易感的C57BL/6J小鼠的动脉粥样硬化模型，如文献中提出(Smith J D，Breslow JL，J Intern Med 1997；242：99-109)。对照组接受标准实验室动物营养。通过添加1.25％胆固醇、15％奶厂制的奶油和0.5％胆酸钠至标准营养中，诱导出试验性动脉粥样硬化(Nishina P等人，J Lipid Res 1993；34：1413-1422)。试验组接受以由前导试验所建立的有效剂量的分开和组合地接受测试物质。添加测试物质至饮用水。根据试验期间实际消耗的水量来校正剂量的制备。在22周时，通过标准方法和标准以形态、生化和组织学评估动脉粥样硬化改变的水平(Paigen B等人，Atherosclerosis 1987；68：231-240)。以商业测试试剂盒测定血清中的总C、HDL-C、LDL-C和TG。LDL-C/HDL-C比被接受为标准工具以评估心血管风险(Fernandez ML，Webb D，J Am Coll Nutr，2008；27(1)：1-5)。 
动脉粥样硬化指数(反映出动脉粥样硬化和外周动脉粥样硬化的鉴别器)由下式计算出：指数＝LDL-C/HDL-C。 
动脉粥样硬化指数(反映出冠状动脉粥样硬化)由下式计算出：系数＝总C/HDL-C。 
统计：7至10只分开的动物/测量的数据以平均数±标准差表示。使用单向ANOVA分析与重复比较(塔基检验)来比较各实验组之间差别。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：安排第一系列的试验以测定组合的药物的不同比例及剂量的效果。如表1所示，在22周后，接受富含脂质和C的营养的C对照组动物在主动脉中， 特別是主动脉弓，形成了动脉粥样硬化的改变。NA和MD，当分开被使用时，显示了降低损害区域的趋势。出人意外地，NA和MD的组合比每个分开物质，造成更高和统计上显著的对动脉粥样硬化损害的保护效果，即，其具有协同效果。 
表1NA和MD对主动脉的动脉粥样硬化损害的影响；n＝7-10；平均数±标准差 
  组   损害区域，mkm2，主动脉弓   损害区域，主动脉区域％
  对照   44±25.8**   0.02±0.01**
  C对照   6076±1282   5.44±1.12
  NA 50毫克/公斤   5867±975   5.21±1.07
  NA200毫克/公斤   4153±742   3.39±0.69
  MD 50毫克/公斤   4741±786   3.87±0.64
  MD 150毫克/公斤   3801±573   3.30±0.49
  MD 200毫克/公斤   3098±547   2.74±0.47*
  NA50+MD50   3106±368$   2.58±0.31*$
  NA50+MD150   2231±390*$&   1.93±0.40*$&
  NA200+MD200   1602±404*$&   1.29±0.38*$&
NA50+MD50＝NA 50毫克/公斤+MD 50毫克/公斤 
NA50+MD150＝NA 50毫克/公斤+MD 150毫克/公斤 
NA200+MD200＝NA 200毫克/公斤+MD 200毫克/公斤 
*P＜0.05对对照 
**P＜0.005对对照 
$P＜0.05对NA同剂量 
&P＜0.05对MD同剂量 
如下表2所示，NA和MD的组合表现出降低LDL-C和TG水平以及增加HDL-C水平的统计学上显著的效果。在剂量组合NA50+MD150，其中NA是以自身不对脂质浓度有显著效果的剂量而被使用，概括效果(summary effect)出人意外地高于每个单独物质的效果。此在动脉样硬化指数和总C/HDL-C比特別明显，其中NA和MD的协同效果是可观察到的。 
表2测试物质对血清中脂质的影响；n＝7-10；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400071
Figure GPA00001481762400081
NA50+MD50＝NA 50毫克/公斤+MD 50毫克/公斤 
NA50+MD150＝NA 50毫克/公斤+MD 150毫克/公斤 
NA200+MD200＝NA 200毫克/公斤+MD 200毫克/公斤 
*P＜0.05对C对照组 
**P＜0.005对C对照组 
#P＜0.0005对C对照组 
$P＜0.05对NA同剂量 
&P＜0.05对MD同剂量 
在另一系列试验中，更详细地评估本发明的组合的抗动脉粥样硬化活性，并进一步添加已知的抗血脂剂SI至该组合中。NA和MD，当分开使用时，显示了降低损害区域的趋势(表3)。出人意外地，NA+MD的组合比起每个分开的物质，造成更高及统计上显著的对动脉样硬化损害的保护效果。添加本发明组合至SI进一步增加其动脉粥样化损害保护效果。 
表3测试物质在主动脉的动脉粥样硬化损害的影响；n＝7-9；平均数±标准差 
  组   损害区域，mkm2，主动脉弓   损害区域，主动脉区域的％
  对照   29.4±14.8**   0.01±0.01#
  C对照   6416±860   5.97±0.89
  NA 50毫克/公斤   5001±726   4.52±0.64
  MD 150毫克/公斤   4189±628   3.58±0.67*
  SI 10毫克/公斤   2819±447**   2.67±0.36**
  NA50+MD150   2413±442**&$   2.28±0.40**$
  NA50+MD50+SI10   2263±314**$&   2.19±0.30**$&
NA50+MD150＝NA 50毫克/公斤+MD 150毫克/公斤 
NA50+MD50+SI10＝NA 50毫克/公斤+MD 50毫克/公斤+SI 10毫克/公斤 
*P＜0.05对C对照 
**P＜0.005对C对照 
#P＜0.0005对C对照 
$P＜0.05对NA 
&P＜0.05对MD 
在同一系列试验中，测定了血清中的总C、HDL-C、LDL-C和TG。如下表4所示，NA和MD，当分开被使用时，仅轻微地改善胆固醇分数的比率及动脉粥样硬化指数，没有统计学上的意义。出人意外地，NA和MD的组合相当地改善了胆固醇含量的比率及统计学上显著地地降低了动脉粥样硬化指数及总C/HDL-C比。组合也防止血清中LDL-C和TG的增加。因此本发明的组合比分开使用的其成分， 对改变脂质代谢具有显著较高的保护作用。具SI的三重组合也保持显著的保护效果。 
表4测试物质对血清中脂质的影响；n＝7-9；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400091
NA50+MD150＝NA 50毫克/公斤+MD 150毫克/公斤 
NA50+MD50+SI10＝NA 50毫克/公斤+MD50毫克/公斤+SI 10毫克/公斤) 
*P＜0.05对C控制组 
#P＜0.0005对C控制组 
$P＜0.05对NA 
在还另一系列的试验中，NAMg与NA+SI组合被包括在比较评估中(表5)。已有人比较公鸡中的NAMg与NA(Burstein J，Telkka A，Acta Pathol Microbiol Scand 1962；56：261-265)。基于临床经验所使用的比例，NA(50毫克/公斤)和MD(150毫克/公斤)的组合对主动脉具有最显著的有益效果，比NA和NAMg更好，且超过SI和NA的组合(Pandian A等人，Vasc Health Risk Manag 2008；4(5)：1001-1009)。 
表5测试物质对主动脉的动脉粥样硬化损害的影响；n＝7-9；平均数±标准差 
  组   损害区域，毫平方公里，主动脉弓   损害区域，主动脉区域的％
  对照   35±19.8***   0.02±0.01***
  C对照   6216±839   5.75±0.82
  NA 50毫克/公斤   4978±688   4.23±0.67
  NAMg 60毫克/公斤   4053±518*   3.39±0.44*
  MD 150毫克/公斤   3904±489*   3.47±0.45*
  NA50+MD150   2105±215**$#&   1.95±0.30**$#&
  NA50+SI2   3068±297*   2.67±0.48*
NA50+MD150＝NA 50毫克/公斤+MD 150毫克/公斤 
NA50+SI2＝NA 50毫克/公斤+SI 2毫克/公斤 
*P＜0.05对C对照 
**P＜0.005对C对照 
***P＜0.0005对C对照 
$P＜0.05对NA 
P＜0.05对NAMg 
&P＜0.05对MD 
#P＜0.05对NA50+SI2 
类似于形态学数据，生化的测试确认了，NA+MD的组合在使脂质水平正常化方面，明显的优于NA或NAMg(表6)。 
表6测试物质对血清中脂质的影响；n＝7-9；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400101
NA50+MD150＝NA 50毫克/公斤+MD 150毫克/公斤 
NA50+SI2＝NA 50毫克/公斤+SI 2毫克/公斤 
*P＜0.05对C对照 
**P＜0.005对C对照 
***P＜0.0005对C对照 
$P＜0.05对NA 
P＜0.05对NAMg 
&P＜0.05对MD 
在降低总C和LDL-C方面，NA+MD的组合类似于NA+SI的组合，但在对HDL-C和TG水平有益效果的影响上，则实质上超过它，以及在动脉粥样硬化的指数和总C/HDL-C比上具有更显著的效果。 
此系列的测试确认了，试验性动脉粥样硬化方面，NA和MD组合比NA或NAMg具有显著更佳的有益效果，且也优于临床上使用的NA和SI的组合。 
实施例2-NA和MD在大鼠高血脂模型的脂质方面分开以及组合地影响
方法：使用Levine和Saltzman描述的方法(Levine S，SaltzmanA，J Pharmacol Toxicol Meth 2007；55：224-226)通过TR诱导试验性慢性高脂血/高胆固醇血症。动物经由尾静脉接受250毫克/公斤TR溶液，一周三次共三周。每天一次在注射TR溶液或采血液样品前一小时经口引入用于实验组的测试物质的溶液或用于对照的水。 
体重220-240克的雄性Wistar大鼠被分配至下列8个组(组，n的动物)： 
Figure GPA00001481762400102
在1、2、3周后(在TR注射后隔天起算)在乙醚麻醉下通过心脏穿刺得到用于 生化分析的血液。通过离心分离出血清，并以商业试剂盒分析总C、HDL-C、LDL-C和TG水平。 
统计：通过使用Microsoft Excel程序数学处理得当的数据，且结果以平均数±平均标准差(SEM)表示。使用单向ANOVA和t检验来比较不同组的平均结果。在P＜0.05，结果的差异被认为是显著的。 
结果：重复注射TR形成了明显且稳定的高胆固醇血症和高血脂，其特征在于与对照相比，总的C、LDL-C和TG的浓度显著增加。NA疗法，更显著地在第一周，限制了总C、LDL-C和TG的增加，但仅在2和3周时显著地增加HDL-C水平。MD就降低总C和LDL-C浓度及增加HDL-C水平方面的活性稍为较弱，但并不阻止TG水平的增加。出人意外地，NA+MD的组合使用，相较于个别成分，在降低LDL-C和TG水平方面和进一步增加HDL-C浓度方面，更有效。而且，延长NA+MD的使用(在我们试验中为2或3周)证明了，相对于使用NA+SI，在降低LDL-C和TG水平方面和增加HDL-C发明方面，实质上更为显著(参见以下)。因此，预期NA+MD的组合对于预防和/或治疗高胆固醇血症和高脂血在临床上是有用的。 
以剂量10毫克/公斤使用SI，明显地降低了由TR诱发的总C和LDL-C的增加，但对HDL-C和TG水平仅有稍微地影响。以临床上可接受的比例结合使用SI和NA，证明了对抗血清中总C、LDL-C和TG增加的明显保护，并增加了HDL-C水平。出人意外地，NA、SI和MD的组合使用，相较于各成分分开使用，仍证明了对抗TR诱发的改变更佳的保护，且在降低TG和LDL-C水平方面，显著地比NA+SI更佳。对于临床实践特別重要的是，NA、SI和MD的组合在增加HDL-C水平方面，显著地比SI或NA单独地更好，此是所观察到的事实。因此，预期NA+MD和NA+SI+MD的组合在临床上预防和/或治疗高胆固醇血症和高脂血是有用的。 
表7NA、SI和MD在大鼠高血脂症模型的脂质方面分开地以及组合地影响；n＝9-14；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400111
表7(续) 
Figure GPA00001481762400112
Figure GPA00001481762400121
表7(续) 
Figure GPA00001481762400122
表7(续) 
Figure GPA00001481762400123
*P＜0.05对TR 
**P＜0.005对TR 
***P＜0.0005对TR 
$P＜0.05对NA 
&P＜0.05对MD 
#P＜0.05对NA+SI 
实施例3-心脏保护性质的测定
方法：雄性Wistar大鼠被分配成6组(每组12至16只动物)： 
1)对照组经口接受0.9％盐水； 
2)NA50组经口接受50毫克/公斤/天的NA； 
3)MD50组经口接受50毫克/公斤/天的MD； 
4)NA50+MD50组经口接受50毫克/公斤/天的NA加上50毫克/公斤的MD； 
5)MD150组经口接受150毫克/公斤/天的MD； 
6)NA50+MD150组经口接受50毫克/公斤/天的NA加上150毫克/公斤/天的MD。 
在试验之前48、24和1小时，测试组的动物经由胃导管接受试验物质的水溶液。对照组的动物接受等体积的盐水。动物被麻醉(腹腔注射戊巴比妥钠60毫克/公斤)并在机械通气下，以准备阻塞左冠状动脉。通过闭塞冠状动脉45分钟长，接着再灌注2小时长，来诱发试验性梗塞。记录下列数据：具有VT、VF的动物的数量、致死率、平均动脉压、RPP，该RPP表征心肌的功能状况、反映心肌中ATP的产量，且是临床的和试验数据分析广泛使用的指数(Broderick TL，Drugs R D 2008；9(2)：83-91)。试验之后，通过三苯四唑-伊文思蓝灌注染色方法检测缺血和坏死区域。切开左心室并称重，计算形态的标准：左心室的缺血区域的百分比、左心室的坏死区域的百分比，以及坏死区域与缺血区域的比(坏死指数)。 
统计：各组的结果以平均数±标准差表示。组内的统计分析以学生t检验进行。从局部缺血-再灌注试验中存活的动物中，计算由所记录的血压和心率的得到的数据。计算所有动物中的心律不齐(VT和VF)的事件数量和致死率。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比较各试验组间的不同。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：在对照组16只动物中，心脏局部缺血接着再灌注造成严重的心律紊乱，其中有7只死亡。NA组在心律紊乱方面相较于对照组并无显著地不同。MD和NA+MD组相对于对照具有较不显著的危及生命的心律紊乱(VF和VT)，但致死率仅有在NA50+MD50组和NA50+MD150组显著较低(下表8)。 
表8冠状动脉闭塞和再灌注期间，测试物质对心律不齐及致死率的效果 
Figure GPA00001481762400131
*P＜0.05对I/R对照 
再灌注期间，在所有试验组中平均动脉压和心率相似，但在对照组中观察到的RPP的降低，仅有在NA50+MD50组和NA50+MD150组统计上显著地被预防(表9)。此指出了，用本发明组合药品做一短暂(3天长)的前处理，即已具备对抗梗塞造成的功能性枯竭相当的保护。 
表9冠状动脉闭塞和再灌注期间，测试物质对心率血压乘积(RPP)的效果；n＝9-12；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400141
*P＜0.05对I/R对照 
**P＜0.005对I/R对照 
&P＜0.05对初始 
#P＜0.01对初始 
对于组合药品，含有两种剂量组合的NA+MD，通过统计学上显著地降低了对左心室和对缺血区域的坏死区域百分比(表10)，这个被确认。 
表10对大鼠冠状动脉闭塞与再灌注期间，测试物质对心脏形态学上的效果； 
n＝9-12；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400142
*P＜0.05对I/R对照 
**P＜0.005对I/R对照 
#P＜0.0005对I/R对照 
&P＜0.05对MD同剂量 
$P＜0.05对NA 
坏死指数＝坏死区域/缺血区域x 100 
因此我们已出人意外地发现，通过NA和MD的组合药物的协同作用对抗心肌梗塞发病的高程度保护。NA+MD组合显著地维持了心肌的功能，增加动物的存活率(表8、9)，且比单独的NA和MD，其更显著地避免心肌因局部缺血与再灌注而坏死(表10)。 
实施例4-对脑部的抗缺氧和抗局部缺血效果的测定
进行进一步试验，以测定在试验性CNS局部缺血、缺氧和中风模型中，NA和MD组合药品与分开成分的效用相比较于分开成分的效用。 
4.1.小鼠脑循环缺氧模型
方法：通过在3秒内导入MgCl2(2％MgCl2，剂量200毫克/公斤)至雄性ICR小鼠的尾静脉诱发的试验性循环缺氧(Berga P等人，Arzneimittelforschung 1986；36(9)：1314-1320)。动物以单一剂量或相同剂量每日一次共7日接受测试物质。通过胃内导管导入测试物质。随机地将动物分为7组(每组6至10只动物)： 
对照组接受水0.01毫升/克 
PI500组(主动对照)接受500毫克/公斤剂量的吡乙酰胺 
NA50组接受50毫克/公斤剂量的NA 
MD50组接受50毫克/公斤剂量的MD 
MD150组接受150毫克/公斤剂量的MD 
NA50+MD50组接受50毫克/公斤NA加上50毫克/公斤MD的剂量 
NA50+MD150组接受50毫克/公斤NA加上150毫克/公斤MD的剂量 
在试验前1小时给予测试物质的最后剂量。在MgCl2注射的结束和最后呼吸动作的停止期间，被记录为存活时间。 
统计：各组的结果以平均数±标准差表示。组内的统计分析以学生t检验进行。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比较各试验组间的差异。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：结果在表11中总结。当重复导入时，通过临床使用的PI和MD药物显示了保护性抗缺氧效果(表11)。意想不到地，NA+MD的组合在单一施用后，即已显示了明显的保护效果，特別是剂量NA50+MD150，其中该效果是优于每一个分开的物质。重复施加这种组合仍然具有显著的效果。在此试验中所得的结果指出，NA+MD的组合用于临床上治疗缺氧状况的可能用途。 
表11测试物质在小鼠脑循环缺氧模型中的效果；n＝6-10；平均数±标准差 
Figure GPA00001481762400151
*P＜0.05对对照 
#P＜0.005对对照 
P＜0.0005对对照 
$P＜0.05对MD同剂量 
&P＜0.05对NA 
§P＜0.005对NA 
4.2.大脑中动脉闭塞模型
方法：使用体重21至25克雄性ICR小鼠。根据适用于小鼠的、由Zhang Q等(Behavioural Brain Research 2006；169：66-74)的已知方法以腔内细丝技术闭塞大脑中动脉(MCA)源(Behavioural Brain Research 2006；169：66-74)。使用预防性(每天一次共7天，用于永久MCA闭塞模型)和治疗性(在暂时性MCA闭塞后开始治疗)处理方案。 
对照动物仅接受盐水。此测试是临床情形上真正的脑损伤和中风(其常遇到大脑中动脉闭塞)的好的模型。根据2个方案继续进一步的试验。在第一个方案中，闭塞是永久的。在第二个方案中，以管腔内细丝的闭塞是暂时性的，且该细丝在2小时后被去除，并导入再灌注。在闭塞后24小时，评估所有动物的神经状态。以等级尺度评估，给予不具病理的动物0点，给予无法自发性活动的动物4点(Longa EZ等人，Stroke 1989；20：84-91)。在评估神经功能缺陷后，动物接受过量的戊巴比妥钠，将脑分离并切片成6层，每层厚度约1.5毫米。以2％三苯四唑钠在37℃染色切片30分钟，并拍照。选择了在视交叉水平上的颅侧的第三个切片，其为最适合于计算脑缺血损伤，因为其完全由来自大脑中动脉的血液供应。 
统计：7至9只分开的动物的数据以平均数±标准差表示。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比较各试验组间的不同。以学生t试验分析组间的神经功能评分的差异。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：闭塞24小时后，所有8对照动物展现了平均2.63点的神经紊乱(下表12)。 
表12测试物质对永久性闭塞组动物的神经状态的影响；n＝7-9；平均数±标准差 
  测试组   神经状态，点
  对照   2.63±0.38
  假手术组   0.14±0.14#
  NA50x 7   2.25±0.25
  MD150x 7   1.63±0.29
  NA50+MD150x 7   1.38±0.26*&
*P＜0.05对对照 
#P＜0.0005对对照 
&P＜0.05对NA 
在假手术组中，仅有1只动物显示了轻微的紊乱。重复使用MD共7天部分 预防了由MCA闭塞造成的神经状态的恶化。出人意外地，NA+MD组合显示了明显的对神经紊乱的保护，优于NA的效果(表12)。 
对于对照组动物，大脑中动脉闭塞导致缺血性损伤，其在视交叉水平上的脑组织中占了22.2％(表13)。施加NA+MD组合7天展现了明显的对脑组织损伤的防护，也优于NA单独的效果。 
表13 7天施加测试物质对永久性闭塞动物的脑缺血梗塞损伤区域的大小的影响；n＝7-9；平均数±标准差 
  测试组   缺血性损伤区域，％
  对照   22.2±2.21
  NA   19.0±1.75
  MD   16.9±1.82
  NA50+MD150   12.9±1.54*&
*P＜0.005对对照 
&P＜0.05对NA 
在下一个试验中，大脑中动脉被暂时性闭塞2小时，接着再灌注，导致了对照组动物在试验24小时后严重的脑功能紊乱(下表14)。在闭塞1、3和6小时导入测试物质，NA25(25毫克/公斤x 3)组和MD75(75毫克/公斤x 3)组两者都没有提供明显的保护。出人意外地，仅有具测试组合的NA25+MD75(25毫克/公斤+75毫克/公斤)组在闭塞后导入3次，得到了脑功能实质上的保护，显著地优于单独的NA和MD(下表14)。 
表14在暂时性闭塞后，测试物质对神经功能的治疗效果；n＝7-9；平均数±标准差 
  测试组   神经状态，点
  对照   2.75±0.31
  假手术组   0.29±0.18#
  NA25   2.25±0.16
  MD75   2.13±0.23
  NA25+MD75   1.44±0.18*&$
*P＜0.005对对照 
#P＜0.0005对对照 
$P＜0.05对MD 
&P＜0.05对NA 
形态分析揭露了，NA或MD单独并无明显的预防由MCA暂时性闭塞和再灌注造成的脑组织损伤(下表15)。出人意外地，NA+MD的组合(25毫克/公斤+75毫克/公斤)，在闭塞后开始治疗，展现了实质上预防脑组织损伤，显著地优于单独的NA和MD(表15)。 
表15测试物质对于暂时性闭塞组动物的脑缺血梗塞损伤区域的大小的治疗效果； n＝7-9；平均数±标准差 
  测试组   缺血性损伤区域，％
  对照   22.3±1.3
  NA25   18.9±1.8
  MD75   18.2±1.3
  NA25+MD75   13.3±1.7#&$
#P＜0.005对对照 
$P＜0.05对MD 
&P＜0.05对NA 
因此我们已出人意外地发现，不论在MCA闭塞前或后的治疗使用时，NA加上MD组合，比起单独成分，提供了显著较佳的对脑组织在功能上和形态上损伤的防御。这些结果指出，组合药品可在治疗和/或预防包含中风的CNS缺血-缺血病状况有益处的，也由于其对血小板聚集和血栓形成测试的抑制活性，如下所述。 
抗血小板聚集和抗血栓活性
测试：体外血小板聚集；体内大鼠血栓形成模型；进行记录体内皮层温度的改变。 
实施例5-MD和NA对血小板聚集的影响
方法：未曾使用过ASA或任何其他抗血小板药物的健康捐贈者B.(37岁)得到全血、使用多板(Multiplate)(多种血小板功能分析仪，Dynabyte Medical公司，德国)、用已建立之方法(Toth O等人，Thromb Haemost，2006；96：781-788.Velik-Salchner C等人，Anesth Analg 2008；107：1798-1806)来研究血小板聚集。血液样品被收集至以水蛭素覆盖的塑料管(Dynabyte Medical公司，德国)，并用于在收集后的30分钟到4小时之间测量。根据修改的Dynabyte Medical公司的方案进行测量。等渗氯化钠溶液(0.3毫升，或具有测试化合物的盐水(至最终浓度10-6至10-4毫摩尔/毫升))被加热至37℃并用移液管移至测试細胞中，再加入0.3毫升用水蛭素抗凝的全血样品。经5分钟培养后，并在37℃搅拌，通过添加适当的激动剂溶液(来源于Dynabyte Medical公司，德国)来开始测量： 
1)二磷酸腺甘酸(ADP)-ADP-测试。ADP通过ADP受体(P2Y12及其他)刺激血小板活化。 
2)ADP HS测试(前列腺素E1与ADP的组合)。添加内源性抑制剂PGE1，使得ADP HS测试对氯吡格雷和相关药物的效果相较于ADP测试更加敏感。 
记录聚集曲线6分钟，并使用Dynabyte Medical软件分析。我们计算了下列血小板聚集的参数： 
1)Amax，以任意单位(AU)的聚集的血小板聚集表现的最大值； 
2)AUC，在聚集曲线下的总面积(AU*min)。此会被聚集曲线的总高度以及其斜率所影响，且最适合于表现整体的血小板活性。 
统计：结果以平均数±标准差表示。为了评估差异的显著性，使用单向ANOVA分析。如果虚无假设被排除，则使用事后学生-纽曼-科伊尔斯检验。 
结果：安排第一系列的测试，以测定不同浓度的药物的效果。如表16所示，广泛浓度范围的MD对于由ADP+PGE1诱导的血小板聚集提供显著保护。Amax从对照的100％降至MD 10-5组和10-4组的55-58％。NA(在10-4和10-3毫摩尔/毫升组)也降低由ADP导致的聚集。两种物质的组合作用提供了由ADP或ADP+PGE1导致的血小板聚集的显著较高和明显降低，此显示于AUC和Amax两者数据中。 
表16MD、NA及其组合对由ADP和PGE1+ADP诱导的血小板聚集的影响；平均数±标准差；N＝5-8. 
Figure GPA00001481762400191
*P＜0.05对对照 
**P＜0.005对对照 
***P＜0.0005对对照 
****P＜0.00005对对照 
#P＜0.005对MD 10-4
##P＜0.0005对MD 10-4
$P＜0.005对NA 10-4
$$P＜0.0005对NA 10-4
实施例6-MD和NA对血栓形成的影响
方法：我们选择基于由三氯化铁(FeCl3)所诱发的大鼠动脉血栓形成的试验性血栓形成模型(Kurz K等人，Thromb Res 1990；60：269-280.Wang X，Xu L，Tromb Res 2005；115：95-100)。由铁介导的化学氧化作用起始的组织损伤易于诱发血小板粘附和聚集的受伤部位，接着凝血活化及纤维蛋白沉积。在试验中使用体重350-420克的雄性Wistar大鼠。随机将大鼠分成各个试验组，每组由不少于7只动物组成。在血栓形成起始前2小时，通过口途径给与媒介物或测试化合物MD(25毫克/公斤)、NA(25毫克/公斤)及组合物MD+NA(25+25毫克/公斤)。 
将大鼠通过腹腔注射50毫克/公斤戊巴比妥钠进行麻醉，并置于热控手术台上，在整个试验期间保持37℃的体温。通过经切口将劲动脉之一暴露出，自黏附的组织、迷走神经分离，且电流探针(电磁血流量计MFV 1200，Nicon Kohden公司，日本)被放置在总劲动脉的露出部位，以记录血流量。在15分钟的稳定期后， 通过局部施加(接触血管外膜表面)两片(2x1毫米)浸于三氯化铁(FeCl3)的15％溶液的Whatman滤纸，来诱发血栓形成。记录劲动脉的血栓形成时间，其被报道为直到阻塞的时间(TTO)，即完全停止血流所需的时间。 
此外，在血栓形成试验期间，测量大鼠尾巴流血时间。用解剖刀从尾端5毫米处横切尾巴，并将尾巴立即浸入37℃温暖等渗水中，直到注意到流血停止。流血完全停止且在接下來30秒无再流血的时间点，定义为流血停止。 
统计：通过Microsoft Excel 2007软件分析结果。数据表示为7至8只分开的动物/测量的平均数±标准差。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比較各试验组间的不同。P＜0.05被认为是是显著的。 
结果：在对照组中，三氯化铁(FeCl3)导致的血管血栓形成及其结果的动脉流停止的平均时间为24.4分钟(表17) 
表17MD、NA和其组合对FeCl3导致的血栓形成的影响。平均数±标准差；N＝7-8 
Figure GPA00001481762400201
*P＜0.05对控制组 
MD在25毫克/公斤剂量不提供明显的TTO的增加。NA造成小量TTO的增加但不明显。NA对尾巴流血时间的影响是类似的。MD和NA的组合使用意想不到地造成TTO相当明显的增加(39％)，而无尾巴流血时间明显的增加。 
考虑到MD和NA组合在体外对抗血小板聚集以及体内TTO的延长的积极影响，此组合发现可应用于降低显著的动脉粥样硬化、可能的心肌梗塞和损伤以及手术后期间中的患者中的血栓形成风险。MD和NA组合不延长流血时间，此事实指出，此组合物在用于在手术前及手术期间增加流血风险的患者的可能用途。 
实施例7-MD/NA和LA/NA组合施加用于降低潮红的比较研究
烟酸(烟酸，NA)有效地降低血清胆固醇、LDL和甘油三酯，且提高HDL。然而在接受立即或持续释放烟酸的患者中，有限的不利影响是显著的皮肤温暖和血管扩张的迅速形成，称为“潮红”，其严重地导致停药(Gupta EK，Ito MK，Heart Dis 2002；4：124-137)。拉罗匹仑(MK-0524)已被提出作为降低烟酸潮红的最有活性及前景的药物之一(Cheng K等人，PNAS 2006；103：6682-6687)。我们的研究目的是，比较在试验中MD和LA对于由NA造成的潮红(皮肤温度和血流的改变)的影响。 
7.1.1.皮肤的血管扩张的测定
模型：以戊巴比妥钠(50毫克/公斤，腹腔注射)麻醉雄性Wistar大鼠并以每小时额外的剂量(10毫克/公斤)使处于麻醉状态下。测量左劲动脉的血压，通过标准 II导线记录ECG。通过激光多普勒流量计(OXYFLOW 2000，美国)测量右耳动脉的血流。通过AD仪器PowerLab系统记录血流、ECG和动脉压，并储存在电脑中用于进一步处理。在10分钟长的基线记录后，测试物质通过皮下注射进入鬐甲区域并继续记录30分钟。考虑到平均血压，计算每只动物的平均血流数据，并与起始值以及对照比较。从5至8个分开的试验计算结果，并以百分比表示作为对基线的血流的最大变化[Carballo-Jane E等人，J Pharmacol Toxicol Methods 2007；56(3)：308-316]。 
统计：各组的结果以平均数±标准差表示。通过用于不配对数据的学生t检验和卡方检验进行群组间的统计分析。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比较各试验组间的不同。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：如可由下表18所观察到的，在此动物模型中，15毫克/公斤剂量的NA导致耳动脉明显的血流增加。MD类似于对照，导致不明显的血流变化。NA与MD一起，比起单独NA，导致延迟(缓慢增加)且明显的统计上较不显著的血流的绝对增加(表18)。MD对抗由NA导致的周边血管扩张的潜力可具有临床上用于减弱烟酸的皮肤的影响(潮红)的有益效果，因此其被进一步详细研究(如下所述)。 
表18试验物质对皮肤的血管扩张的影响；n＝5-8，平均数±标准差 
  组   血流的改变，％
  对照/溶剂   2.15±4.29
  NA(15毫克/公斤)   46.1±7.52#
  MD(45毫克/公斤)   7.15±3.72
  NA+MD(15+45毫克/公斤)   19.33±6.44$
#P＜0.01对控制组 
$P＜0.05对NA 
7.1.2.MD和LA在NA诱发的皮肤的血管扩张的影响
材料与方法：见7.1.节 
试验方案
Figure GPA00001481762400211
统计：每组的结果以平均数±标准差表示。组内的统计分析通过学生t检验进行。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比较各试验组间的不同。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：当单独给与MD时，类似于LA，仅造成血流明显的改变。当同时给与NA和MD(提前时间＝0)，血流的升高变慢，而比起同时给与NA和LA(LA+NA[0]，见表19)的情况下是较不显著的。在耳朵血流方面，MD+NA[0](当MD与NA一起被加入)组和MD+NA[30](在NA的30分钟前做MD 45毫克/公斤的前处理)组之间没有明显的不同。在我们的试验中，在NA的30分钟前做LA的前处理(NA+LA[30])显著地降低了在大鼠耳朵血管中由NA诱发的血流的提升(表19)。 
表19MD和LA对有NA诱发的皮肤血管扩张的影响；N＝5-7，平均数±标准差 
  组   血流变化，％
  NA和MD的溶剂   2.12±1.66$$
  NA   52.27±8.5**
  MD   6.04±2.02$
  NA+MD[0]   25.11±5.25*$
  NA+MD[30]   28.07±5.74*$
  LA的溶剂   7.31±1.93$$
  LA   9.87±2.60$
  NA+LA[0]   29.34±7.82*
  NA+LA[30]   16.32±6.21$
*P＜0.05对溶剂 
**P＜0.005对溶剂 
$P＜0.05对NA 
$$P＜0.005对NA 
MD可对抗由NA导致的周边血管扩张的潜力可具有临床上用于减弱NA对皮肤的影响(潮红)的有益效果。在我们的试验中，与同时给与NA和MD相比，我们无法建立任何NA和LA组合的同时施加的任何优点。 
7.2.烟酸诱发的皮肤温度改变的评定
材料与方法：为了记录完整大鼠的皮肤温度的变化，使用非接触式温度记录方法(Papaliodis D等人，BrJ Pharmacol 2008；153：1382-1387)。以一手持式红外测温仪(Model Proscan 510，TFA-Dostman公司)进行温度测量。在使用前三日，使动物习惯于被处理及该红外线探针。在动物麻醉下，动物被皮下注射NA(鬐甲区域)或溶剂/测试化合物(尾巴区域)前，记录三个从每一耳背侧读到的温度。接着在一长至60分钟的期间，每5分钟测量耳温。在测量之间，将动物放置回它们的笼内。将六个耳温测量(每耳三个)在每个时间点进行平均。在试验的每一天，首先将拉罗匹仑(MK 0524，Cayman Chemicals)溶解在二甲基亚砜(DMSO)中，然后用0.9％氯化钠(NaCl)重新地稀释。NA和LA组合的比率是基于TredaptiveTM(烟酸/拉罗匹 仑(laropiprant))1000毫克/20毫克改性-释放片剂的产品特征的概要。 
试验方案
I测试时间和溶剂对皮肤温度的影响
组      处理                        动物数 
SolvLA  用于LA的溶剂                6 
SolvNA  用于NA的溶剂                6 
NA      NA 15毫克/公斤，皮下注射    6 
II NA/LA和NA/MD组合对皮肤温度影响的研究
与NA同时导入LA如LA+NA[0]，或在NA的30分钟之前导入LA如LA+NA[30]，与NA同时导入MD如NA+MD[0]，或在NA的30分钟之前导入MD如NA+MD[30]；也检验LA和MD单独对皮肤温度的影响。 
Figure GPA00001481762400231
*在每个时间组中 
统计：通过Microsoft Excel软件分析数据，且结果以平均数+/-平均标准差表示。使用根据ANOVA和学生t检验的单因子分析来比较不同群组的平均结果。 
P＜0.05被认为是显著的。 
结果：在10AM至2PM，所记录的基线平均耳温度是28.1-30.2℃。对NA(15毫克/公斤，皮下注射)的时间反应研究显示了，在10分钟时，从基线的最高温度增加了2.32±0.37℃，与溶剂组比较最高温度增加了组2.57±0.43(P＜0.005)。确定的是，LA溶剂对耳温的影响仅有在注射后的起初5分钟实质上不同于NA和MD溶剂，因此仅使用一个对照组。 
Figure GPA00001481762400241
皮下注射MD或LA并不对大鼠耳朵皮肤温度造成明显的改变(表21)。同时给与NA和MD(NA+MD[0]组；提前时间＝0)造成了NA潮红的降低，其类似于同时给与NA和LA所引起。由NA造成的温度增加被降低，相应地至69％和67％(表21)。在MD+NA[0](当MD与NA一起被添加)和MD+NA[30](在30分钟前做MD45毫克/公斤的前处理)之间，沒有温度的变化。在我们的试验中，仅用LA前处理(当以皮下注射剂量0.3毫克/公斤，提前NA 30分钟)造成明显的防御由NA造成的皮肤温度增加(表21)。 
表21LA和MD对由NA造成的皮肤温度升高的影响；N＝6，平均数±标准差 
  组   起始温度，℃   最高温度，℃   增加，％
  对照/溶剂   29.5±0.29   29.62±0.25$$$   -
  NA   29.61±0.4   32.2±0.42***   100
  LA   29.43±0.27   29.5±0.35$$$   -
  NA+LA[0]   29.72±0.31   31,45±0.40**   67
  NA+LA[30]   29.51±0.32   30.73±0.34*$   47
  MD   29.42±0.38   29.7±0.31$$$   -
  NA+MD[0]   29.53±0.29   31.33±0.48*   69
  NA+MD[30]   29.68±0.26   31.40±0.39*   65
*P＜0.05对对照 
**P＜0.005对对照 
***P＜0.0005对对照 
$P＜0.05对NA 
$$$P＜0.0005对NA 
因此我们已确定，NA和MD的组合不仅具有无法预期的协同抗血小板活性， 而且具有降低副作用-潮红。 
实施例8-对血糖水平影响的测定
已熟知的的是，即使单一大口服剂量的NA，增加动物的血液中GL水平(Thornton JH，Schultz LH，J Dairy Sci 1980；63，262-268)，且在治疗糖尿病患者时，使用NA需要监控糖水平(Goldberg RB，Jacobson TA，Mayo Clin Proc 2008；83(4)：470-8)。 
方法：在试验中使用雄性成年Wistar大鼠。动物从试验前一晚禁食，以使血中糖水平稳定。在试验前以及口服空白或测试物质45分钟后，测定在静脉血中GL水平。通过商业可得试剂盒(Optium，Abbott Diabetes Care Ltd，美国)测定GL水平。使用高剂量的NA(300毫克/公斤，经口服用)，其为已知会造成稳定且长期的血中GL水平升高。使用相同剂量的MD(300毫克/公斤)。 
随机将动物分为4组(n＝8)： 
1)对照组(接受1％(NaCl溶液，剂量2毫升/公斤) 
2)NA组(接受NA，剂量300毫克/公斤) 
3)MD组(接受MD，剂量300毫克/公斤) 
4)NA+MD组(接受300毫克/公斤NA和300毫克/公斤MD)。 
统计：各组的结果以平均数±标准差表示。组内的统计分析以学生t检验进行。使用单向ANOVA分析及重复比较(塔基检验)来比较各试验组间的不同。P＜0.05被认为是显著的。 
结果：NA造成统计上明显的GL水平提高，对照基线和对照(下表21)。MD造成明显的GL浓度的降低，与对照组并无不同。NA和MD的组合造成值得注意的、较不显著的GL水平的提高(对于基线改变27.5％，与NA造成的61.1％相比较)。此正面效益指出，NA+MD的组合药品可在具有不稳定或紊乱的血糖控制的患者造成较不显著的副作用。 
表21测试物质对大鼠血液中GL浓度的影响；n＝8；平均数±标准差 
  组   基线   试验   相对于基线改变，％   相对于对照％
  对照(盐水)   3.84±0.51   3.9±0.53   +1.6   0
  NA   3.8±0.344   6.12±0.42*&   +61.1   +56,9
  MD   3.92±0.34   3.72±0.31   -5.1   -4.6
  NA+MD   4.03±0.349   5.14±0.56   +27.5   +31.8
*P＜0.05对对照 
&P＜0.01对基线 
概要结论
意想不到地发现的是，NA和MD的组合增强了NA对疾病的治疗效果，该疾病包括血脂异常、高脂血、动脉粥样硬化、选自心绞痛和心肌梗塞的冠心病、含 脑血管意外和中风和周围动脉闭塞性疾病的暂时或永久性缺血发作，该组合物改善了心脏与脑缺血-缺氧下的状况。该组合也改善了由NA造成的周边血管扩张。因此，该治疗组合，相较于NA，预计在治疗脂质代谢相关的紊乱显示改善的活性，使得可減少NA日剂量，并具有较不显著的不良的副作用。 
实施发明的模式
在本文使用的术语“治疗组合”提供用于同时、依序或分开给与组合的成分。因此，本发明提供治疗组合，其包含NA和MD或其药学上可接受的盐，用于同时、依序或分开预防血小板聚集和血栓形成。本发明的治疗组合可以以药物组合物的形式给与。根据本发明的该方面，提供药物组合物，其包含NA或其药学上可接受的盐和MD或其药学上可接受的盐，混合药学上可接受的稀释剂或载体。 
根据本发明的药物组合物也包括分开的组合物，其包括：NA或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂或载体的第一组合物；和MD或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的稀释剂或载体的第二组合物。此组合物提供了依序或分开使用。因为治疗或预防脂质代谢相关病症假定长时间使用药品，实施本发明的最优选的模式为提供适合于口服的形式，例如片剂或胶囊。在药物组合物中，本发明治疗组合的各活性成分之量将依所治疗的状况而定。治疗脂质代谢相关的病症患者的领域的技术人员，可容易地选择各活性成分的适当量及合适给药方案。优选的NA和MD或其盐的活性成分的比率为自3∶1至1∶3。 
根据本发明的进一步方面，提供如前述定义的治疗组合或如前述定义的药物组合物，用于制备用于同时、依序或分开给与来预防血小板聚集/血栓形成药品的用途。 

Claims (7)

1.药物组合物，其包括有效量的烟酸或其药学上可接受的盐以及有效量的米曲肼或其药学上可接受的盐，连同药学上可接受的赋形剂或载体。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述烟酸或其药学上可接受的盐为立即释放、持续释放或延长释放制剂的形式。
3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述米曲肼或其药学上可接受的盐为立即释放、持续释放或延长释放制剂的形式。
4.根据权利要求1所述的药物组合物，其包括50-500毫克的烟酸或其药学上可接受的盐以及50-500毫克的米曲肼或其药学上可接受的盐。
5.根据权利要求1-4任一所述的药物组合物，其进一步包括选自阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀、匹伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀和辛伐他汀的他汀类。
6.根据权利要求1-4任一所述的组合物在制备用于预防和/或治疗以下疾病的药品中的应用：高脂血，动脉粥样硬化，周围动脉闭塞性疾病，心肌梗死，脑血管意外、中风、血栓形成或血栓栓塞。
7.根据权利要求5所述的组合物在制备用于预防和/或治疗以下疾病的药品中的应用：血脂异常、高脂血和动脉粥样硬化的病症。
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