CN102793702A - 肝癌治疗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种以利福平或其衍生物为有效成分的肝癌治疗剂或癌转移抑制剂。本发明的发明人为了开发针对肝癌的治疗剂进行了深入研究，结果发现利福平或其衍生物对肝癌、特别是转移性肝癌具有治疗效果。利福平或其衍生物具有抑制转移到肝的各种癌的增殖和向肝组织内的浸润的作用，并对转移性肝癌具有治疗效果。

Description

肝癌治疗剂
本申请是申请日为2008年2月14日、发明名称为“肝癌治疗剂”的中国申请号为200880005174.X的分案申请。
技术领域
本发明涉及以利福平或其衍生物为有效成分的肝癌治疗剂。
背景技术
关于利福平，已报告了以下认识。
（1）抗菌作用
利福平是作为抗结核药的抗生素而被开发出来的。利福平通过与原核生物的由rpoB基因编码的DNA依赖性RNA聚合酶的β亚单位结合，并阻碍RNA合成而显示抗菌性。
（2）化学结构
3-[[(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨基]甲基]利福霉素
5,6,9,17,19,21-六羟基-23-甲氧基-2,4,12,16,18,20,22-七甲基-8-[N-(4-甲基-1-哌嗪基)亚氨甲基]2,7-(十五碳环氧[1,11,13]三烯亚胺)-萘并[2,1-β]呋喃-1,11(2H)-二酮21-乙酸酯
C43H58N4O12:822.95
利福平在化学结构上的特征之一是存在苯并氢醌（naphtohydroquinone）结构，该结构被认为是使利福平具有自由基清除剂（free radical scavenger）作用的结构。
（3）自由基清除作用
（a）ONOO＝抑制：
一氧化氮（NO）在生物体内发挥着血管扩张作用等重要的作用，但当大量存在时，其与氧结合转化为过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite:ONOO＝）。ONOO＝氧化脂质、蛋白质、DNA等生物物质，并且引起酪氨酸的亚硝酸化，从而成为损伤的原因（参照非专利文献1）。酪氨酸与α1-抗蛋白酶均与炎症反应相关，其亚硝酸化引起炎症反应。利福平抑制这些物质的亚硝酸化（参照非专利文献2）。
（b）抗氧化作用：
DPPH（α,α-二苯基-β-苦基偕腙肼）为稳定的自由基，使用DPPH对化合物的抗氧化作用进行评价。从其结果可知：利福平具有抗氧化作用（参照非专利文献3）。
（c）淀粉样蛋白凝集抑制作用：
可溶性β淀粉样蛋白（Aβ）凝集成不溶性物质是阿尔茨海默病的原因。用采用了Aβ1-40肽的系统尝试着进行研究，结果利福平抑制凝集反应。已知在Aβ1-40肽的凝集反应中出现的自由基发挥了很大的作用，因此推想利福平的自由基清除作用与凝集反应的抑制相关（参照非专利文献4）。
（4）组织分布：
各种组织中利福平的分布是在给药150mg和450mg后通过活检采集组织来进行的。从用血液/组织计算的浓度比来看，在给药后12小时时，低于1（即在组织中的浓度高）的是胆汁、肝、胆囊壁、输尿管、卵巢囊肿壁，基本接近1的是脾、肠系膜囊肿和囊液、阑尾、皮肤、肌肉、骨和乳腺癌组织，显示大于1的值的是肺、胃壁和胃癌组织、脂肪、乳汁。其特别以从胆汁再吸收到肝而在肝中聚集为特征（参照非专利文献5）。
（5）新生血管抑制作用：
已报告利福平及其衍生物具有新生血管抑制作用（参照专利文献1）。
（6）抗癌作用：
已报告利福平或其衍生物对培养的癌细胞具有尽管弱却存在的抗癌活性。此外也报告，在临床上，当对胆管细胞癌的患者给药时，患者的预后得到改善。在大鼠的腺癌中，已证实利福平的衍生物经由腹腔给药时具有抗癌效果，但在经口或经皮给药中却没有效果。也已指出利福平具有抑制急性髄性白血病复发的可能性（参照非专利文献6～12）。
专利文献1：日本专利公开公报第2004-75665号
非专利文献1：藤田直著、「活性酸素、過酸化脂质、フリ一ラジカルの生成と消去機構並びにそれらの生物学的作用」、薬学雑誌、2002年、Vol.122、p.203-218
非专利文献2：Whiteman,M.和Halliwell,B.著,“Prevention ofperoxynitrite-dependent tyrosine nitration and inactivation ofalpha1-antiproteinase by antibiotics.”,Free Radic Res,1997年,Vol.26,p.49-56
非专利文献3：Kalpana,T.及另4人著,“Assessment of antioxidantactivity of some antileprotic drugs.”,Arzneimittelforschung,2001年,Vol.51,p.633-637
非专利文献4：Tomiyama,T.及另6人著,“Inhibition of amyloid betaprotein aggregation and neurotoxicity by rifampicin.Its possible function as ahydroxyl radical scavenger.”,J Biol Chem,1996年,Vol.271,p.6839-6844.
非专利文献5：Acocella,G.著,“Clinical pharmacokinetics of rifampicin.”,Clin Pharmacokinet,1978年,Vol.3,p.108-127
非专利文献6：Winters,W.D.及另2人著,“Differential effects ofrifampicin on cultured human tumor cells.”,Cancer Res,1974年,Vol.34,p.3173-3179
非专利文献7：Joss,U.R.及另2人著,“Effect of dimethylbenzyldesmethyl rifampicin（DMB）on chemically induced mammary tumours in rats.”,Nat New Biol,1973年,Vol.242,p.88-90
非专利文献8：Sali,A.及另3人著,“Rifampicin as cytotoxic agent forcholangiocarcinoma:preliminary report of seven cases”,J Cancer Res ClinOncol,1991年,Vol.117,p.503-504
非专利文献9：Burghouts,J.和Haanen,C.著,“A possible role ofrifampicin in prolonging remission duration in acute myelogenous leukaemia,Scand J Haematol”,1986年,Vol.36,p.376-378
非专利文献10：Adamson,R.H.著,“Evaluation of the antitumor activityof rifamycin SV.,Arch Int Pharmacodyn Ther”,1971年,Vol.192,p.61-65
非专利文献11：Hughes,A.M.和Calvin,M.著,“Effect of some rifamycinderivatives on chemically-induced mammary tumors in rats”,Cancer Lett,1976年,Vol.2,p.5-10
非专利文献12：Hughes,A.M.及另5人著,“Inhibition ofadenocarcinoma TA3 ascites tumor growth by rifamycin derivatives.”,Oncology，1978年,Vol.35,p.76-82
发明内容
本发明的课题在于提供一种肝癌治疗剂。本发明的课题还在于提供一种针对转移性肝癌的治疗剂以及向肝转移的癌转移的抑制剂。
本发明的发明人为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现利福平或其衍生物对肝癌具有治疗效果。
另外，胃癌、大肠癌、肺癌均属于在日本人中多发性的癌，而且手术后通过门静脉转移到肝的情况很多。本发明的发明人为了开发针对从其他脏器转移来的肝癌的治疗剂进行了深入研究，结果发现利福平或其衍生物对转移性肝癌具有治疗效果。
利福平或其衍生物具有抑制转移到肝的各种癌的增殖和向肝组织内的浸润的作用，并对肝癌、特别是转移性肝癌具有治疗效果。
如上所述，已报告利福平对胆管癌具有抗癌活性，但是却没有利福平或其衍生物对肝癌、特别是肝实质细胞癌有效的报告。
已报告抗癌剂ADRIACIN在对肝癌的临床试验中的效果为16.7％，相对于此，其对胆囊癌和胆管癌的效果为60％（横山正和、檜森巽、氏家重紀、斉藤達雄(1974)；Adriamycinによる悪性腫瘍の治療成績癌の臨床20巻7号536-544）。如在该文中所显示的，胆管癌与肝实质细胞癌在细胞学上是种类不同的癌，通常，如果癌细胞的种类不同，则抗癌剂的种类也不同。也就是说，即使在已知利福平对胆管癌有效的情况下，也无法同样地预测其对肝实质细胞癌也有效。
另外，其具有对向肝转移的转移癌有效的治疗效果是由本发明的发明人首次发现的。
利福平或其衍生物作为肝癌治疗剂、特别是转移性肝癌治疗剂、或向向肝转移的癌转移的抑制剂的有效成分是有用的。
即，本发明涉及肝癌治疗剂、特别是转移性肝癌治疗剂、以及向肝转移的癌转移的抑制剂，更具体地，本发明提供以下技术方案：
（1）一种肝癌治疗剂，其以利福平或其衍生物为有效成分。
（2）根据（1）所述的治疗剂，其中，上述肝癌为肝实质细胞癌。
（3）根据（1）所述的治疗剂，其中，上述肝癌为转移性肝癌。
（4）根据（3）所述的治疗剂，其中，上述转移性肝癌为从肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、大肠癌、胰腺癌或乳腺癌转移的转移癌。
（5）一种癌转移抑制剂，其以利福平或其衍生物为有效成分。
（6）根据（5）所述的癌转移抑制剂，其中，上述癌转移为向肝转移的癌转移。
（7）根据（6）所述的癌转移抑制剂，其中，上述癌转移为从肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、大肠癌、胰腺癌或乳腺癌向肝的转移。
另外，本发明还提供以下技术方案：
（8）一种肝癌的治疗方法，其包括将利福平或其衍生物对个体（需要治疗的患者等）给药的工序。
（9）根据（8）所述的方法，上述肝癌为转移性肝实质细胞癌。优选上述转移性肝癌为从肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、大肠癌、胰腺癌或乳腺癌转移的转移癌。
（10）一种抑制癌转移的方法，其包括将利福平或其衍生物对个体（需要治疗的患者等）给药的工序。
（11）根据（10）所述的方法，其中，上述癌转移为向肝的癌转移。优选上述癌转移为从肺癌、胃癌、直肠癌、结肠癌、大肠癌、胰腺癌或乳腺癌向肝的转移。
另外，本发明还涉及以下发明：
（12）利福平（或其衍生物）在肝癌治疗剂的制备中的用途。
（13）利福平（或其衍生物）在癌转移抑制剂的制备中的用途。
（14）用于肝癌的治疗的利福平（或其衍生物）、用于在肝癌的治疗方法中应用的利福平（或其衍生物）、或用于在肝癌的治疗中应用的利福平（或其衍生物）。
（15）用于癌转移的抑制的利福平（或其衍生物）、用于在癌转移的抑制方法中应用的利福平（或其衍生物）、或用于在癌转移的抑制中应用的利福平（或其衍生物）。
需要说明的是，本研究是得到日本文部科学省科学研究费补助金特定领域研究、基础研究以及科学技术振兴机构（JST）的支助而进行的。
附图说明
图1是将测定的吸光度换算为癌抗原在血浆中的浓度的曲线图。STD.0.0～4.7分别为0.0～4.7U/mL的标准样品。1～7表示对照给药组。8～14表示50mg给药组。15～21表示100mg给药组。22～27表示200mg给药组。51～57表示5-FU给药组。
图2为表示利福平给药与血浆中CA15-3浓度之间的关系的曲线图。利福平100mg/kg组的血浆中CA15-3浓度与对照组的相比有显著性差异（p＜0.05）地低。
图3为表示皮下移植癌的生长曲线的曲线图。白圈表示非癌细胞对照、黑点表示对照、黑方块表示3-甲酰利福霉素SV、黑三角表示利福霉素SV、黑菱形表示利福平。
图4为表示在背部皮下移植有人肝癌细胞株Hep G2的裸鼠中，利福平对肿瘤体积的影响效果的曲线图。点表示10只小鼠的平均值，垂直线表示S.D.（标准偏差）。*P<0.05、**P<0.01vs对照组（Dunnett型多重比较检验）。
具体实施方式
本发明的发明人发现利福平或其衍生物对肝癌、特别是转移性肝癌具有抗癌作用。本发明涉及以利福平或其衍生物为有效成分的肝癌治疗剂。
本发明治疗剂优选的实施方式为针对肝实质细胞癌的治疗剂。另外，本发明还提供含有以利福平或其衍生物为有效成分的转移性肝癌治疗剂。
此外，本发明的发明人还发现利福平或其衍生物能够抑制从以肝以外的脏器为原发病灶的癌向肝的转移。即，本发明涉及以利福平或其衍生物为有效成分的向肝转移的癌转移的抑制剂。（在本说明书中，本发明的上述治疗剂或癌转移抑制剂有时仅记为“本发明药剂”。
本发明药剂的有效成分通常为下述通式（I）表示的化合物。
Figure BDA00001970534100071
另外，本发明优选的实施方式为以上述通式（I）表示的化合物的衍生物为有效成分的药剂。
作为可用作本发明药剂的利福平的衍生物，可列举出例如3-甲酰RFM、利福霉素SV、或主代谢物25-去乙酰RFP等。
在本发明中，“转移性肝癌”是指以肝以外的脏器或组织为原发病灶的肝癌，通常是指在肝以外的脏器或组织中的癌转移到肝而成的癌。可列举出例如在肺、胃、直肠、大肠、结肠、胰脏或乳腺等发生的癌（例如肺癌、胃癌、直肠癌、大肠癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌等）向肝转移而引起的肝癌。
另外，在本发明中，利福平的盐也包括在本发明的衍生物中。在本发明中，“盐”是指与本发明的利福平形成的盐，并且只要是药理学上可接受的盐，则没有特殊限制，可列举出例如无机酸盐、有机酸盐、无机碱盐、有机碱盐、酸性或碱性氨基酸盐等。通常，本发明的“盐”是指通常药学上可接受的盐。
本发明的治疗剂可以记作：例如“治疗药”、“抗癌剂”、“抗肿瘤剂”、“癌治疗用组合物”、“医药品”、“医药组合物”等。
本发明的治疗剂通常是指具有治疗癌或抑制癌转移的效果的药剂（医药、医药组合物），但具有例如预防癌或预防癌转移的效果的药剂也包含在本发明药剂中。
本发明药剂如在后文的实施例中所显示的那样，对肝癌的发生（例如、由肝硬化转变成的肝癌的发生）具有预防效果。因此，本发明优选为含有以利福平或其衍生物为有效成分的肝癌的预防剂或复发预防剂。作为本发明的预防剂优选的实施方式，可列举出例如由肝硬化转变成的肝癌的发生的预防剂。
在本发明中，“癌”通常也被称为恶性肿瘤。
本发明的以利福平或其衍生物为有效成分的药剂可以采用常用方法制成片剂、丸剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、粉剂、包衣片剂、胶囊剂、吸入剂、栓剂、注射剂、软膏剂、液体制剂、乳剂、悬浮剂、注射剂等制剂。
制剂制备中可以使用通常使用的赋形剂、粘合剂、润滑剂、着色剂、矫味矫臭剂，或根据需要使用的稳定剂、乳化剂、吸收促进剂、表面活性剂、pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂等，配合一般作为医药品制剂的原料使用的成分并通过通常的方法制成制剂。
例如在制备经口制剂中，在加入本发明的化合物或其药理学上可接受的盐以及赋形剂、以及根据需要使用的粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味矫臭剂等后，通过通常的方法制成散剂、细粒剂、颗粒剂、片剂、包衣片剂、胶囊剂等。
另外，在制备注射用制剂等液体制剂时，在本发明的化合物或其药理学上可接受的盐中加入pH调节剂、溶解剂、等渗剂等，以及根据需要使用的助溶剂、稳定剂等，通过通常的方法制成制剂。在制备注射剂时，根据需要，添加pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、保存剂等，并通过通常的方法制成皮下、肌肉内、静脉内注射剂。注射剂也可以制成下述制剂：在将溶液收纳到容器后，通过冷冻干燥等制成固体制剂，然后在使用时配制。
作为制剂制备中使用的基质原料，可以使用在医药品、医药部外品、化妆品等中通常使用的各种原料。作为所使用的基质原料，具体地可列举出例如，动植物油、矿物油、酯油、蜡类、高级醇类、脂肪酸类、硅油、表面活性剂、磷脂类、醇类、多元醇类、水溶性高分子类、粘土矿物类、精制水等原料，还可以根据需要添加pH调节剂、抗氧化剂、螯合剂、防腐防霉剂、着色料、香料等。另外，也可以根据需要配合杀菌剂、消炎剂、细胞活化剂、维生素类、氨基酸、保湿剂、角质溶解剂等成分。
按照含有作为主成分的本发明药剂的方式制成上述剂型的制剂技术是公知的。
在给药本发明的化合物或衍生物（包括盐）时，对其形态没有特殊限制，可以采用通常使用的方法经口给药或非经口给药。本发明药剂的给药量可以考虑剂型的种类、给药方法、患者的年龄和体重、患者的症状等，并最终根据医生或兽医的判断来适当地确定。
在本发明药剂中，利福平或其衍生物的含有浓度没有特殊限制，但给出如下例子：相对于1kg待给药个体的对象脏器（肝或肝细胞），例如达到10～500mg、优选为50～200mg、更优选为50～100mg的浓度。
成为本发明药剂的给药对象的生物，通常为哺乳动物，可列举出例如，人、狗或猫等生物。
另外，本发明还涉及肝癌的治疗（或预防）方法，其包括将利福平或其衍生物对个体给药的工序。所述个体通常是指需要治疗的患者，优选为癌患者。另外，个体优选为人，但非人动物也可作为对象。作为本发明优选的实施方式，可列举出例如肝癌的预防方法，其包括将利福平或其衍生物对肝硬化的患者给药的工序。
此外，本发明还涉及抑制癌转移的方法，其包括将利福平或其衍生物对个体给药的工序。
另外，本发明还涉及利福平或其衍生物的用途。在优选的实施方式中，可列举出：利福平（或其衍生物）在肝癌治疗剂的制备中的用途，或利福平（或其衍生物）在癌转移抑制剂的制备中的用途。
此外，本说明书中引用的所有现有技术文献被引入本说明书作为参考。
实施例
以下通过实施例具体地说明本发明，但本发明并不限于这些实施例。
（实施例1）对裸鼠中的转移到肝的肺癌（A549）的抑制作用
研究利福平对裸鼠经脾移植到肝的肺癌细胞（A549）的增殖的作用。
使用1.5×106cells/50μL/body的肺癌细胞（A549）作为移植细胞。并且，作为移植前的麻醉，在移植处置的约5分钟前，按照每1g体重10μL容量，腹腔内给药5mg/mL Nembutal。
移植部位和移植方法如下所述。首先，使用剪刀将小鼠（小鼠、雄性、BALB/cA Jcl-nu nu/nu）以各10mm左右沿背腹轴方向剪开左侧腹部的皮肤、肌肉层。使用前端圆形的小镊子从腹腔内拉出脾，捏住脾的下端（腹侧），在距端部3～5mm的位置基本水平地刺入针，针头插入脾内部5～7mm，缓慢注入细胞悬浮液。此外，细胞悬浮液50μL装在装有27号G针的1mL注射器内。在细胞悬浮液注入后，保持针头在脾内约10秒钟，等到内压下降后拔出针，用Kimwipes擦拭从伤口漏出的注入液。另外，为了防止脏器干燥，用浸于生理盐水并拧干了的脱脂棉盖住脾。由于麻醉的小鼠体温容易下降，因此放在干燥的脱脂棉等上尽量进行保温，等待10分钟直至移植细胞转移到肝。
脾的摘除和缝合如下进行。预先使用小镊子将缝合线从脾中央部到胰脏之间穿过缝合线（丝软质缝合线3号），分别在脾内走行的2根血管（背侧、腹侧）上打结，过10分钟从腹侧的血管结扎，然后将背侧的血管和脾的一部分一起结扎。用小镊子按住结扎了腹侧血管的线，同时用环形镊子牵拉并摘出脾，用剪刀从不会使线的结扣脱离的位置切掉脾背侧部。剪断多余的缝合线，将内脏送回腹腔内，用2号缝合线在1处缝合肌肉层。用订书机将皮肤订在一起，擦掉皮肤的血迹，并送回笼子。另外，根据需要用加热板等保温，使其适应从麻醉和术后的恢复。
将利福平以50、100和200mg/kg的用量从癌细胞移植后第4日开始按1日1次、一周5日（周六、周日停药）反复地经口给药约3周。
将5-FU以30mg/kg的用量从癌细胞移植后第4日开始按1日1次、一周5日（周六、周日停药）反复地给药约3周。将药剂悬浮于0.5w/v%的羧甲基纤维素钠溶液（0.5%CMC-Na）中，使用1mL注射筒和小鼠用金属制胃管强制经口给药。对照组仅给药0.5%CMC-Na。
（a）一般状态观察
一般状态观察的结果示于下表1。观察第16日到第18日可见，对照组中的5例皮肤苍白、体温降低以及活动性降低，在观察第18日的即将采血前2例死亡。对照组的上述症状和死因认为是由转移性肝癌所致的全身状态的急剧恶化所致。另一方面，利福平各给药组中，直到观察第15日未见异常，观察第16日到第18日可见，50mg/kg组中的1例和200mg/kg组中的2例皮肤苍白、皮肤变黄、体温降低以及活动性降低，观察第17日200mg/kg的1例死亡。在利福平各给药组中，虽然未见剂量依赖性地抑制由转移性肝癌所致的上述症状发生和死亡的明显效果，但与对照组相比，上述症状的发生例数少，这启示利福平可能抑制由转移性肝癌所致的全身状态的恶化。在5-FU给药组中，仅可见1例在观察第15日到第18日皮肤发红，未观察到表明在整个观察期间，由转移性肝癌所致的全身状态的急剧恶化的症状，从而得到证明抑制转移性肝癌的进行的结果。
第18日的临床症状示于表1。
表1
第18日的临床症状
Figure BDA00001970534100111
＃发疹
在对照组中，7例中的5例观察到一些外观上的异常，而在利福平100mg/kg组中，未观察到外观上的异常。
另外，肿瘤（癌）细胞转移度和肝的空泡化的病理学观察结果示于表2。
表2
Figure BDA00001970534100121
表中、“-”表示无转移、“+”、“++”、”+++”表示转移度分别为弱、中、强。
对照组全部可见强的转移、增殖。另外，利福平具有抑制转移、增殖的倾向，在利福平100和200mg/kg组中，可见伴随着代谢酶的诱导产生的肝实质细胞的空泡化。
（b）利用癌标记物CA15-3的监测
此外，用CA15-3ELISA试剂盒（Panomics）作为分析试剂盒来实施利用癌标记物CA15-3的监测。
具体而言，在观察第18日（癌细胞移植后第22日）用乙醚麻醉后，从后大静脉腹部用肝素涂布注射筒尽可能地采集血液。采集的血液立即以1870×g离心分离10分钟，将得到的血浆用于测定。测定如下实施。
1）将血浆样品用等量的稀释缓冲液（ELISA kit附带）稀释后，将各样品分别注入2个微孔内，每个100μL，在室温（25℃）下静置5小时。
2）用0.02％Tween20/PBS洗涤5次。
3）向各微孔内加入200μL的HRP-标记检测抗体（ELISA kit附带），在37℃下静置2小时。
4）用0.02％Tween20/PBS洗涤5次。
5）向各微孔中加入100μL的TMB，在室温（25℃）下静置直至显色。
6）向各微孔中加入100μL的1N HCl，使显色停止。
7）在450nm下测定吸光度。
将测定的吸光度换算成癌抗原在血浆中的浓度，其曲线示于图1。另外，图2表示各给药组每个的合计值。由于软件的关系未能示出，但在100mg给药组中，可见统计学上的显著性差异。
从上述结果可见，在经口给药100mg利福平的组中，血中的癌标记物CA15-3为有显著性差异的降低，且显示出临床症状显著地得到改善。
（实施例2）经口给药的利福平及其衍生物对LL/2Lewis肺癌细胞在异种动物中的生长和转移的抑制效果
将LL/2细胞（106cells/动物）移植到雄性裸鼠的皮下，在癌的大小达到200mm3时，自由地给予含有0.8mg/mL利福平、3-甲酰利福霉素SV、利福霉素SV的饮用水。一组7只小鼠。用体积表示皮下移植的癌的大小（图3、表3）。对向肝和肺转移的转移癌的评价是：分别对切片的脏器拍照，计算并表示出癌区域的面积（表4和表5）。
表3
Figure BDA00001970534100131
表4
Figure BDA00001970534100141
表5
Figure BDA00001970534100142
其结果是：通过给药利福平，向肝和肺转移的癌转移被抑制。
（实施例3）利福平的肿瘤增殖抑制效果
使用背部皮下移植有人肝癌细胞株Hep G2的裸鼠，对利福平的肿瘤增殖抑制作用进行研究。
将在体外增殖了的Hep G2按照1×107cells/0.1mL/body的条件移植到7周龄的雌性裸鼠的右背部皮下。作为试验组，设定对照组、利福平的50、100和200mg/kg/天组共计4组（n=10）。在平均肿瘤体积达到95.41mm3时（第1天，移植后第16日）进行分组，分别在第1天～第28天1日1次，计28次地经口给药试验物质。对对照组同样地给予0.5%CMC-Na水溶液。到第29天，测定体重和肿瘤直径（长径和短径），分别计算出体重变化率和肿瘤体积。在第29天测定肿瘤重量，计算出肿瘤增殖抑制率（IR：Inhibition Rate）。
关于一般状态，所有的试验组在整个观察期间，全部小鼠未观察到异常情况。
关于体重变化情况，对照组在整个观察期间可见随着天数逐渐减少（第29天的体重变化率：-13.8±4.5%）。另一方面，在利福平给药组的50mg/kg/天组中，可见与对照组基本同样地逐渐减少（第29天的体重变化率：-14.4±4.0%），在100和200mg/kg/天组中，可见第19天和第26天体重增加，体重减少的程度也与对照组相比为轻度的（第29天的体重变化率分别为：-9.1±10.2%和-5.1±4.9%）。
关于肿瘤增殖，在对照组可见在整个观察期间肿瘤体积显著增大。另一方面，在利福平的50、100和200mg/kg/天组中可见：在第22天和第29天，与对照组相比，肿瘤体积均为有显著性差异的低值。
测定结果示于图4、表6。
表6
Figure BDA00001970534100151
上述表6中的“第1天”表示给药开始日。各值表示平均值±S.D.。
*P<0.05、**P<0.01vs对照组（Dunnett型多重比较检验）。
对照组的肿瘤体积在第1天为94.21±33.06mm3，在第29天为1611.16±511.39mm3。可见在整个观察期间肿瘤体积随着天数增大。
利福平50mg/kg/天组的肿瘤体积，在第1天为95.52±31.15mm3，在第29天为1134.95±399.98mm3。在第22天和第29天与对照组相比，可见肿瘤体积为有显著性差异的低值（均为P<0.05，Dunnett型多重比较检验）。
利福平100mg/kg/天组的肿瘤体积，在第1天为97.09±31.20mm3，在第29天为1020.57±397.37mm3。在第22天和第29天与对照组相比，可见肿瘤体积为有显著性差异的低值（分别为P<0.05和P<0.01，Dunnett型多重比较检验）。
利福平200mg/kg/天组的肿瘤体积，在第1天为94.83±31.47mm3，在第29天为1029.61±232.44mm3。在第22天和第29天与对照组相比，可见肿瘤体积为有显著性差异的低值（分别为P<0.05和P<0.01，Dunnett型多重比较检验）。
可以清楚：如上所述，在本试验条件下，在利福平的100和200mg/kg/天组中，利福平对Hep G2带癌裸鼠不产生严重的影响，并显示出肿瘤增殖抑制作用。
（实施例4）利福平对肝癌发生的预防效果
下面对利福平对肝癌发生的预防效果进行研究。即，在以下的表7（肝硬化患者的利福平给药期间以及未发生肝癌的期间）所示的5例肝硬化患者中，如表7所记载的，将利福平以150mg～300mg的范围给药，结果从诊断肝硬化日开始到临床研究结束日的期间中，均未见有病例发生肝癌。
表7
Figure BDA00001970534100171
本发明涉及将利福平或其衍生物用于肝癌、特别是向肝转移的癌的治疗的内容。
利福平在肝的聚集度高，因此期待其对向肝转移的癌具有有效性。利福平为自由基清除剂，对于自由基清除剂，已知其具有抑制肝内的癌细胞的浸润、游走的活性，另外，利福平及其衍生物具有新生血管抑制作用，其结果，其被期待能够抑制癌的增殖。此外，利福平作为自由基清除剂的作用有可能对新生血管抑制作用做出了贡献。
本发明的发明人查明：利福平或其衍生物具有抑制肝癌、特别是转移到肝的各种癌的增殖和向肝组织内的浸润的作用，因此其能够作为它们的治疗剂使用。

Claims (3)

1.利福平、3-甲酰利福霉素SV或利福霉素SV在肝癌细胞增殖抑制剂的制造中的用途，其中，所述剂不是肝癌的复发预防剂，所述肝癌为肝实质细胞癌。
2.利福平、3-甲酰利福霉素SV或利福霉素SV在肝癌细胞增殖抑制剂的制造中的用途，其中，所述肝癌为肺癌细胞的转移所导致的肝癌。
3.利福平、3-甲酰利福霉素SV或利福霉素SV在肝癌转移抑制剂的制造中的用途，其中，所述肝癌为肺癌细胞的转移所导致的肝癌。
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