CN102792161A

CN102792161A - 肾损伤和肾衰竭的诊断及预后的方法及组合物

Info

Publication number: CN102792161A
Application number: CN2010800455755A
Authority: CN
Inventors: J·安德贝里; J·格雷; P·麦克弗森; K·中村; J·P·坎普夫
Original assignee: Astute Medical Inc
Current assignee: Astute Medical Inc
Priority date: 2009-08-28
Filing date: 2010-08-27
Publication date: 2012-11-21
Anticipated expiration: 2030-08-27
Also published as: JP2013503344A; AU2010286559B2; EP3151005A1; EP2470905A1; WO2011025917A1; NZ624609A; HK1172691A1; NZ598712A; US20150204892A1; CN102792161B; JP5775874B2; JP6054481B2; CA2772336A1; CN104483488A; EP2894473B1; JP2015212704A; EP2894473A1; EP2470905A4; AU2010286559A1; HK1208074A1

Abstract

本发明涉及对罹患或疑患有肾损伤的受试者进行监测、诊断、预后和确定治疗方案的方法和组合物。具体地说，本发明涉及采用检测一种或多种生物标记物的测定，所述一种或多种生物标记物选自在肾损伤中作为诊断和预后生物标记物测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53。

Description

肾损伤和肾衰竭的诊断及预后的方法及组合物

技术领域

本发明要求于2009年8月28日提交的美国临时专利申请61/238,115、2009年8月28日提交的61/238,118、2009年8月28日提交的61/238,120、2009年8月28日提交的61/238,121、2009年8月28日提交的61/238,123、2009年8月28日提交的61/238,125、2009年8月28日提交的61/238,127、2009年8月28日提交的61/238,129、2009年8月28日提交的61/238,134、2009年9月18日提交的61/243,991、2009年9月18日提交的61/243,997、2009年9月18日提交的61/244,002、2009年9月18日提交的61/243,993和2009年8月28日提交的61/238,128的优先权，上述每个申请据此全文并入，包括所有表格、附图及权利要求。

背景技术

本发明的技术背景的以下论述仅用于帮助读者理解本发明且并非认同描述或构成本发明的现有技术。

肾脏负责从体内排泄水和溶解物。它的功能包括维持酸碱平衡、调节电解质浓度、控制血容量和调节血压。因此，肾脏功能因损伤和/或疾病的丧失导致大量的发病及死亡率。肾损伤的详细论述提供在Harrison’s Principles of Internal Medicine,第17版,McGraw Hill,NewYork,第1741-1830页中，该文献全文以引用的方式并入。肾病和/或肾损伤可为急性的或慢性的。急性和慢性肾病描述如下(来自Current Medical Diagnosis & Treatment 2008,第47版,McGraw Hill,New York,第785-815页,该文献全文以引用的方式并入)：“急性肾衰竭是肾功能在几小时至几天内恶化，导致含氮废物(如尿素氮)和肌酐滞留在血液中。这些物质的滞留被称为氮质血症。慢性肾衰竭(慢性肾病)因肾功能在几个月至几年内的异常丧失引起。

急性肾衰竭(ARF，也称为急性肾损伤，或AKI)是肾小球过滤急剧(一般在约48小时至1周内检测出)降低。该过滤能力的丧失导致由肾脏正常排泄的含氮(尿素和肌酐)和不含氮废物的滞留、尿量减少，或两者兼而有之。据报道，ARF的恶化导致约5%需入院治疗，4-15%需进行心肺旁路手术，多达30%需进行重症监护治疗。ARF按起因可分为肾前性、肾性或肾后性ARF。肾性疾病可进一步分为肾小球、肾小管、间质和血管异常。ARF的主要原因描述于下表，该表改自Merck Manual,第17版,第222章，其全文以引用的方式并入。

在缺血性ARF的情况下，病程可分成四个阶段。在持续几小时至几天的起始阶段期间，肾脏灌注降低正发展为损伤。肾小球超滤减少，滤液流量因肾小管内的碎片而减少，并且滤液通过受损的上皮发生回漏。此阶段期间，肾损伤可通过肾脏再灌注而得到介导。起始阶段之后是扩展阶段，该阶段的特征是持续的缺血性损伤和炎症，并且可能涉及内皮损伤和血管充血。在持续1至2周的维持阶段期间，肾细胞出现损伤，并且肾小球过滤和尿排出量达到最小。随后可以是恢复阶段，其中肾上皮细胞得以被修复，GFR逐渐复原。尽管如此，但患有ARF的受试者的存活率可能还是低至约60%。

因放射性造影剂(也称为造影介质)及其它肾脏毒素(如环孢霉素)、抗生素(包括氨基糖苷类)和抗癌药(如顺铂)引起的急性肾损伤在几天至大概一周的时间段内显现出来。造影诱发的肾病(CIN，其是由放射性造影剂引起的AKI)被认为是由肾内血管收缩(导致缺血性损伤)且因产生对肾小管上皮细胞具有直接毒性的活性氧物种而引起的。CIN传统上表现为血尿素氮和血清肌酐的急性(24-48h内发作)但可逆(峰值3-5天，1周内消除)的升高。

通常报导的用于确定和检测AKI的标准是血清肌酐的急剧(一般在约2-7天内或在住院期间内)升高。虽然使用血清肌酐的升高来确定和检测AKI已得到良好的确定，但血清肌酐升高的幅度和确定AKI的测量时间在出版物之间却有很大的差异。传统上，相对大的血清肌酐增长(如100%、200%、至少100%的增长到2mg/dL以上的值及其它定义)用于确定AKI。然而，目前的趋势是使用较小的血清肌酐升高来确定AKI。血清肌酐升高、AKI与相关的健康危险之间的关系的综述见于Praught和Shlipak,Curr Opin Nephrol Hypertens 14:265-270,2005和Chertow等,JAm Soc Nephrol 16:3365-3370,2005中，上述文献与其中所列的参考文献全文以引用的方式并入。如这些出版物中所述，现在已知急性恶化的肾功能(AKI)和增加的死亡危险及其它不利的结果与血清肌酐的极小增长有关。这些增长可确定为相对(百分比)值或标称值(nominal value)。已报道，血清肌酐较损伤前的数值相对增长低至20%就表明了急性恶化的肾功能(AKI)和增大的健康危险，但更常见报道的确定AKI和增大的健康危险的值是至少25%的相对增长。已报道，低至0.3mg/dL、0.2mg/dL或甚至0.1mg/dL的标称增长表明有恶化的肾功能和增大的死亡危险。已经用血清肌酐升至这些阈值的不同时间段来确定AKI，例如2天、3天、7天或定义为患者住院或入住重症监护病房时间的变化时间段。这些研究表明，对于恶化的肾功能或AKI，没有特定的血清肌酐升高阈值(或升高所用的时间段)，而是危险性随血清肌酐升高幅度的增加而连续增大。

一项研究(Lassnigg等,J Am Soc Nephrol 15:1597-1605,2004,其全文以引用的方式并入)对血清肌酐的增加和减少进行了研究。心脏手术后具有-0.1至-0.3mg/dL的血清肌酐轻微下降的患者死亡率最低。血清肌酐下降较大(超过或等于-0.4mg/dL)或血清肌酐有任何增长的患者死亡率较高。这些研究结果使作者得出结论，即使肾功能的非常微小的变化(如手术48小时内通过小的肌酐变化所检测到的)也严重影响患者的结果。为了对用于在临床试验和临床实践中利用血清肌酐来确定AKI的统一分类系统达成共识，Bellomo等(Crit Care.8(4):R204-12,2004，全文以引用的方式并入)提出了用于将AKI患者分级的以下分类：

“危险”：血清肌酐较基线增长1.5倍，或6小时尿量＜0.5ml/kg体重/hr；

“损伤”：血清肌酐较基线增长2.0倍，或12小时尿量<0.5ml/kg/hr；

“衰竭”：血清肌酐较基线增长3.0倍，或肌酐>355μmol/l(升高>44)，或24小时排尿量低于0.3ml/kg/hr，或至少12小时无尿；

并包括两个临床结果：

“丧失”：对肾替代疗法的持续需求超过四周。

“ESRD”：晚期肾病—对透析的需求超过3个月。

将这些标准称作RIFLE标准，这些标准提供了适用于对肾状态进行分类的临床工具。如Kellum,Crit.Care Med.36:S141-45,2008和Ricci等,Kidney Int.73,538-546,2008中所述(上述每个文献全文以引用的方式并入)，RIFLE标准提供了已在许多研究中得到确认的AKI的统一定义。

最近，Mehta等,Crit.Care 11:R31(doi:10.1186.cc5713),2007(此文献全文以引用的方式并入)提出了用于将AKI患者分级的以下类似分类，其修改自RIFLE：

“阶段I”：血清肌酐增长超过或等于0.3mg/dL(≥26.4μmol/L)，或增至超过或等于基线的150%(1.5倍)，或超过6小时的排尿量少于0.5mL/kg每小时；

“阶段II”：血清肌酐增至超过基线的200%(>2倍)，或超过12小时的排尿量少于0.5mL/kg每小时；

“阶段III”：血清肌酐增至超过基线的300%(>3倍)，或血清肌酐≥354μmol/L，伴有至少44μmol/L的急性增长，或24小时的排尿量少于0.3mL/kg每小时，或12小时无尿。

CIN协调工作组(McCollough等,Rev Cardiovasc Med.2006；7(4):177-197，该文献全文以引用的方式并入)用25%的血清肌酐升高来确定造影剂诱发的肾病(一种类型的AKI)。虽然各组提出的用血清肌酐检测AKI的标准略有不同，但达成共识的是，血清肌酐的小的变化(如0.3mg/dL或25%)足以检测AKI(恶化的肾功能)，并且血清肌酐变化幅度是AKI严重程度和死亡危险性的指标。

虽然在若干天内连续测量血清肌酐被接受为检测和诊断AKI的方法，并且被认为是用于评价AKI患者的最重要的工具之一，但一般认为血清肌酐在诊断、评估和监测AKI患者时有一些局限性。根据所用定义的情况，血清肌酐升至被视为AKI诊断值(例如，0.3mg/dL或25%的升高)的时间段可为48小时或更长。由于AKI中的细胞损伤可在数小时内发生，则在48小时或更长时间点所检测到的血清肌酐升高可能是损伤的晚期指标，因此依赖血清肌酐可能延误AKI的诊断。此外，当肾功能快速变化时，血清肌酐并非是准确的肾脏状态及AKI最严重阶段期间的治疗需求的良好指标。一些AKI患者会完全恢复，一些将需要透析(短期或长期)，而一些则会有其它不利的结果，包括死亡、严重的不良心脏事件和慢性肾病。因为血清肌酐是过滤速度的指标，所以它并不区分AKI的起因(肾前性、肾性、肾后性梗阻、粥样栓塞性等)或肾性疾病中损伤的类别或位置(例如，起源于肾小管、肾小球或间质)。排尿量受到类似的限制，了解这些对管理和治疗AKI患者而言是至关重要的。

这些限制强调了需要更好的方法来检测和评估AKI，特别是在早期和亚临床阶段，但在后期可能出现肾脏的痊愈和恢复阶段也包括在内。此外，需要更好地识别危险的AKI患者。

发明内容

本发明的目的是提供评价受试者的肾功能的方法和组合物。如本文中所述，对选自以下的一种或多种生物标记物的测量可用于对罹患肾功能损伤、肾功能衰弱和/或急性肾衰竭(也称急性肾损伤)或有罹患上述疾病危险的受试者进行诊断、预后、危险分级、分期、监测、分类以及确定进一步诊断和治疗方案：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53(本文中称为“肾损伤标记物”)。

本发明的肾损伤标记物可单独使用，或以包含多种肾损伤标记物的组合形式使用，用于危险分级(即，识别日后有罹患肾功能损伤危险、日后发展为肾功能衰弱、日后发展为ARF、日后肾功能改善等的受试者)；用于诊断现有的疾病(即，识别罹患肾功能损伤、已发展为肾功能衰弱、已发展为ARF等的受试者)；用于监测肾功能的恶化或改善；以及用于预测日后的医疗结果，如肾功能的改善或恶化、死亡危险的降低或提高、受试者需进行肾替代疗法(即，血液透析、腹膜透析、血液过滤和/或肾移植)的危险性的降低或提高、受试者肾功能损伤痊愈的危险性的降低或提高、受试者ARF痊愈的危险性的降低或提高、受试者发展为晚期肾病的危险性的降低或提高、受试者发展为慢性肾衰竭的危险性的降低或提高、受试者移植肾发生排斥反应的危险性的降低或提高等。

在第一方面，本发明涉及评价受试者肾状态的方法。这些方法包括执行一种测定法，该测定法被设定为检测取自受试者体液样本中的选自以下的一种或多种生物标记物：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53。然后将测定结果与受试者的肾状态相关联，所述测定结果例如为选自以下的一种或多种生物标记物的测定浓度：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16。这种与肾状态相关联可包括将测定结果与本文中所述的受试者的危险分级、诊断、预后、分期、分类和监测中的一种或多种相关联。因此，本发明利用一种或多种本发明的肾损伤标记物来评价肾损伤。

在某些实施方案中，评价本文中所述肾状态的方法是对受试者进行危险分级的方法；即，确定受试者肾状态的一种或多种日后变化的可能性。在这些实施方案中，将测定结果与一种或多种上述的日后变化相关联。以下是优选的危险分级实施方案。

在优选的危险分级实施方案中，这些方法包括确定受试者日后出现肾功能损伤的危险，并且将测定结果与出现这种日后肾功能损伤的可能性相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于“阳向”肾损伤标记物，相对于当测定浓度低于阈值时确定的日后罹患肾功能损伤的可能性来说，当测定浓度高于阈值时，确定受试者日后罹患肾功能损伤的可能性增大。对于“阴向”肾损伤标记物，相对于当测定浓度高于阈值时确定的日后罹患肾功能损伤的可能性来说，当测定浓度低于阈值时，确定受试者日后罹患肾功能损伤的可能性增大。

在其它优选的危险分级实施方案中，这些方法包括确定受试者日后肾功能衰弱的危险，并且将测定结果与这种肾功能衰弱的可能性相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于“阳向”肾损伤标记物，相对于当测定浓度低于阈值时确定的日后罹患肾功能衰弱的可能性来说，当测定浓度高于阈值时，确定受试者日后罹患肾功能衰弱的可能性增大。对于“阴向”肾损伤标记物，相对于当测定浓度高于阈值时确定的日后罹患肾功能衰弱的可能性来说，当测定浓度低于阈值时，确定受试者日后罹患肾功能衰弱的可能性增大。

又在其它优选的危险分级实施方案中，这些方法包括确定受试者日后肾功能改善的可能性，并且将测定结果与这种日后肾功能改善的可能性相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于“阳向”肾损伤标记物，相对于当测定浓度高于阈值时确定的日后肾功能改善的可能性来说，当测定浓度低于阈值时，确定受试者日后肾功能改善的可能性增大。对于“阴向”肾损伤标记物，相对于当测定浓度低于阈值时确定的日后肾功能改善的可能性来说，当测定浓度高于阈值时，确定受试者日后肾功能改善的可能性增大。

还在其它优选的危险分级实施方案中，这些方法包括确定受试者发展成ARF的危险性，并且将结果与这种发展成ARF的可能性相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于“阳向”肾损伤标记，相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性来说，当测定浓度高于阈值时，确定受试者发展成ARF的可能性增大。对于“阴向”肾损伤标记，相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性来说，当测定浓度低于阈值时，确定受试者发展成ARF的可能性增大。

在其它优选的危险分级实施方案中，这些方法包括确定受试者结果的危险性，并且将测定结果与出现同受试者罹患的肾损伤相关的临床结果的可能性相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于“阳向”肾损伤标记，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现以下一种或多种情况的可能性增大：急性肾损伤、发展成AKI的恶化阶段、死亡、需进行肾替代疗法、需移除肾脏毒素、晚期肾病、心力衰竭、中风、心肌梗塞、发展成慢性肾病等，这是相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性来说的。对于“阴向”肾损伤标记，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现以下一种或多种情况的可能性增大：急性肾损伤、发展成AKI的恶化阶段、死亡、需进行肾替代疗法、需移除肾脏毒素、晚期肾病、心力衰竭、中风、心肌梗塞、发展成慢性肾病等，这是相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性来说的。

在上述危险分级实施方案中，优选地，确定的可能性或危险性是指在从获取受试者体液样本之时起差不多180天内可能发生所关注的事件。在特别优选的实施方案中，确定的可能性或危险性涉及在较短的时间段内发生的所关注的事件，所述较短的时间段例如为18个月、120天、90天、60天、45天、30天、21天、14天、7天、5天、96小时、72小时、48小时、36小时、24小时、12小时或更短。自获取受试者体液样本起0小时的危险性相当于目前症状的诊断。

在优选的危险分级实施方案中，根据受试者预先存在的肾前性、肾性或肾后性ARF的一种或多种已知的危险因素来选择进行危险分级的受试者。例如，正在经历或经历过大血管手术、冠状动脉搭桥或其它心脏手术的受试者；具有预先存在的充血性心力衰竭、子痫前期、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、肾小球过滤低于正常范围、肝硬化、血清肌酐高于正常范围或败血症的受试者；或接触NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基糖甙类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线的造影剂或链脲佐菌素的受试者，这些都是优选根据本文中所述的方法监测危险性的受试者。这份清单并不意味着具有限制的意思。在这种情况下的“预先存在”意指在获取受试者体液样本时就存在所述的危险因素。在特别优选的实施方案中，根据肾功能损伤、肾功能衰弱或ARF的现有诊断来选择进行危险分级的受试者。

在其它实施方案中，本文中所述评价肾状态的方法是诊断受试者肾损伤的方法；即，评估受试者是否己罹患肾功能损伤、肾功能衰弱或ARF。在这些实施方案中，将测定结果与是否出现肾状态变化相关联，所述测定结果例如为选自以下的一种或多种生物标记物的测定浓度：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16。以下是优选的诊断实施方案。

在优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断是否出现肾功能损伤，并将测定结果与是否出现这种损伤相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现肾功能损伤的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现肾功能损伤的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现肾功能损伤的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现肾功能损伤的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)。

在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断是否出现肾功能衰弱，并将测定结果与是否出现损伤引起的肾功能衰弱相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现损伤引起的肾功能衰弱的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现损伤引起的肾功能衰弱的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现损伤引起的肾功能衰弱的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现损伤引起的肾功能衰弱的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)。

又在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断是否出现ARF，并将测定结果与是否出现损伤引起的ARF相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现ARF的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现ARF的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现ARF的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现ARF的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)。

还在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断需进行肾替代疗法的受试者，并将测定结果与对肾替代疗法的需求相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾替代疗法的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾替代疗法的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾替代疗法的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾替代疗法的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)。

还在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断需进行肾移植的受试者，并将测定结果与对肾移植的需求相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大(相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性)；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大(相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性)。

还在其它的实施方案中，本文中所述评价肾状态的方法是监测受试者肾损伤的方法；即，评估罹患肾功能损伤、肾功能衰弱或ARF受试者的肾功能是否改善或恶化。在这些实施方案中，将测定结果与是否出现肾状态变化相关联，所述测定结果例如为选自以下的一种或多种生物标记物的测定浓度：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16。以下是优选的监测实施方案。

在优选的监测实施方案中，这些方法包括监测罹患肾功能损伤的受试者的肾状态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。

在其它优选的监测实施方案中，这些方法包括监测罹患肾功能衰弱的受试者的肾状态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。

又在其它优选的监测实施方案中，这些方法包括监测罹患急性肾衰竭的受试者的肾状态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。

在其它另外优选的监测实施方案中，这些方法包括监测因预先存在肾前性、肾性或肾后性ARF的一种或多种已知危险因素而有肾功能损伤危险的受试者的肾状态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。

还在其它的实施方案中，本文中所述评价肾状态的方法是对受试者的肾损伤进行分类的方法；即，确定受试者的肾损伤是肾前性、肾性还是肾后性的；和/或将这些类别进一步细分成子类，如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质肾炎、急性血管性肾病或浸润性疾病；和/或确定受试者发展到特定RIFLE阶段的可能性。在这些实施方案中，将测定结果与具体类别和/或子类相关联，所述测定结果例如为选自以下的一种或多种生物标记物的测定浓度：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16。以下是优选的分类实施方案。

在优选的分类实施方案中，这些方法包括确定受试者的肾损伤是肾前性、肾性还是肾后性的；和/或将这些类别进一步细分成子类，如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质肾炎、急性血管性肾病或浸润性疾病；和/或确定受试者发展到特定RIFLE阶段的可能性，并将测定结果与受试者的损伤分类相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比较，当测定浓度高于阈值时，确定具体的分类；或者，当测定浓度低于阈值时，可以对受试者确定不同的分类。

技术人员可采用多种方法得出用于这些方法所需的阈值。例如，可以由正常受试者群通过选择代表在这种正常受试者中测得的肾损伤标记物的第75、第85、第90、第95或第99百分位的浓度确定所述阈值。或者，阈值可从“患病”的受试者群中确定，如罹患损伤或易感损伤(例如，发展成ARF或某些其它临床结果，如死亡、透析、肾移植等)的受试者群体，方式是选择代表在这种受试者中测得的肾损伤标记物的第75、第85、第90、第95或第99百分位的浓度。在另一替代方案中，阈值可以由同一受试者先前测量的肾损伤标记物确定；即，可以用受试者肾损伤标记物水平的时间变化确定受试者的危险。

然而，上述讨论并不意味着暗示必须将本发明的肾损伤标记物与相应的单个阈值相比较。组合测定结果的方法可包括采用多变量逻辑回归、对数线性建模、神经网络分析、n-of-m分析、决策树分析、计算标记物比例等。这份清单并不意味着有限制性。在这些方法中，可以处理通过组合单个标记物确定的复合结果，如同其本身为标记物；即，可以如本文中为单个标记物所述的那样为复合结果确定阈值，并将单个患者的复合结果与这一阈值相比较。

利用ROC分析可以使特定的测试能够区分两个群。例如，由“第一”亚群和“第二”亚群建立的ROC曲线可用于计算一ROC曲线，该曲线下方的面积用于衡量测试质量，所述“第一”亚群的日后肾状态易发生一种或多种变化，所述“第二”亚群则不那么易发生。优选地，本文中所述的测试提供的ROC曲线面积大于0.5，优选为至少0.6，更优选为0.7，还更优选为至少0.8，甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95。

在某些方面，可将一种或多种肾损伤标记物或这种标记物的复合物的测定浓度作为连续变量处理。例如，可将任何具体的浓度转换成受试者日后出现肾功能衰弱、出现损伤、分类等的相应概率。又在另一替代方案中，阈值可提供在将受试者群分为“多个群体(bins)”时可接受的特异性与敏感性水平，如分为“第一”亚群(例如，易于发生日后肾状态的一种或多种变化、发生损伤、分类等的亚群)和不那么易于发生上述情况的“第二”亚群。通过一种或多种以下测试精确度的测量选择阈值，以将第一群与第二群分离：

比值比大于1，优选为至少约2或更大，或约0.5或更小，更优选为至少约3或更大，或约0.33或更小，还更优选为至少约4或更大，或约0.25或更小，甚至更优选为至少约5或更大，或约0.2或更小，最优选为至少约10或更大，或约0.1或更小；

特异性大于0.5，优选为至少约0.6，更优选为至少约0.7，还更优选为至少约0.8，甚至更优选为至少约0.9，最优选为至少约0.95，相应的敏感性大于0.2，优选为大于约0.3，更优选为大于约0.4，还更优选为至少约0.5，甚至更优选为约0.6，又更优选为大于约0.7，还更优选为大于约0.8，更优选为大于约0.9，最优选为大于约0.95；

敏感性大于0.5，优选为至少约0.6，更优选为至少约0.7，还更优选为至少约0.8，甚至更优选为至少约0.9，最优选为至少约0.95，相应的特异性大于0.2，优选为大于约0.3，更优选为大于约0.4，还更优选为至少约0.5，甚至更优选为约0.6，又更优选为大于约0.7，还更优选为大于约0.8，更优选为大于约0.9，最优选为大于约0.95；

至少约75%敏感性与至少约75%特异性的组合；

阳性概率比(计算为敏感性/(1-特异性))大于1，至少约2，更优选为至少约3，还更优选为至少约5，最优选为至少约10；或

阴性概率比(计算为(1-敏感性)/特异性)小于1，小于或等于约0.5，更优选为小于或等于约0.3，最优选为小于或等于约0.1。

在任何上述测量情况下的术语“约”指给定测量值+/-5%。

多阈值也可用于评估受试者的肾状态。例如，可将“第一”亚群(易于发生日后肾状态的一种或多种变化、出现损伤、分类等)与“第二”亚群(不那么易于发生上述情况)合并成单组。然后将这一组细分成三个或更多个等份(称为三分位数、四分位数、五分位数等，取决于细分的次数)。对受试者根据归属的细分组确定比值比。如果考虑三分位，则最低或最高三分位可用作比较其它细分的参考。指定这一参考细分的比值比为1。相对于该第一个三分位来确定第二个三分位的比值比。即，与第一个三分位中的某人相比，第二个三分位中的某人日后罹患肾状态的一或种多种变化的可能性大三倍。还相对于该第一个三分位来确定第三个三分位的比值比。

在某些实施方案中，测定方法是免疫测定法。用于这种测定的抗体特异性地结合所关注的全长肾损伤标记物，并且也可结合一种或多种其“相关”的多肽，该术语将于下文中定义。许多免疫测定形式是本领域技术人员已知的。优选的体液样本选自尿、血液、血清、唾液、眼泪和血浆。

不应将上述方法步骤解释成意指将肾损伤标记物测定结果孤立地用于本文所述的方法中。而是，本文所述的方法中可以包括别的变量或其它临床标识物。例如，危险分级、诊断、分类、监测等方法可将测定结果与对受试者测定的一个或多个变量组合，所述变量选自人口统计信息(例如，体重、性别、年龄、种族)、病史(例如，家族病史、手术类型、预先存在的疾病，如动脉瘤、充血性心力衰竭、子痫前期、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全或败血症；毒素接触类型，如接触NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基糖甙类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线的造影剂或链脲佐菌素)、临床变量(例如，血压、体温、呼吸率)、危险评分(APACHE评分、PREDICT评分、UA/NSTEMI的TIMI危险评分、Framingham危险评分)、肾小球滤过率、估计肾小球滤过率、尿产率、血清或血浆肌酐浓度、尿肌酐浓度、钠排泄分数、尿钠浓度、尿肌酐与血清或血浆肌酐之比、尿比重、尿渗透压、尿液尿素氮与血浆尿素氮之比、血浆BUN与肌酐之比、以尿钠/(尿肌酐/血浆肌酐)计算的肾衰竭指数、血清或血浆中性粒细胞明胶酶(NGAL)浓度、尿NGAL浓度、血清或血浆胱抑素C浓度、血清或血浆肌钙蛋白浓度、血清或血浆BNP浓度、血清或血浆NTproBNP浓度和血清或血浆proBNP浓度。可与一种或多种肾损伤标记物测定结果组合的其它肾功能的测量描述于下文和Harrison’s Principles ofInternal Medicine(第17版,McGraw Hill,New York,第1741-1830页)及Current Medical Diagnosis & Treatment 2008(第47版,McGraw Hill,New York,第785-815页)中，上述每个文献据此以引用的方式全文并入。

当测量一种以上标记物时，单个标记物可在同时获得的样本中进行测量，或者可以由不同时间(例如，较早或较晚)获得的样本进行测定。也可以对相同或不同的体液样本测量单个标记物。例如，可以在血清或血浆样本中测量一种肾损伤标记物，并在尿样中测量另一种肾损伤标记物。此外，确定可能性可以将单个肾损伤标记物测定结果与一个或多个别的变量中的时间变化相组合。

在各相关方面中，本发明还涉及进行本文中所述方法的装置和试剂盒。合适的试剂盒包含足以进行所述肾损伤标记物的至少之一的测定的试剂连同进行所述阈值比较的说明书。

在某些实施方案中，进行这种测定的试剂提供在测定装置中，并且这种测定装置可包括在这种试剂盒中。优选的试剂可包括一种或多种固相抗体，固相抗体包括检测与固体载体结合的预期生物标记物靶的抗体。在夹心免疫测定的情况下，这种试剂还可以包括一种或多种以可检测方式标记的抗体，以可检测方式标记的抗体包括检测预期生物标记物靶的抗体，所述预期生物标记物靶与可检测的标记物结合。可作为测定装置的一部分提供的其它可选元件在下文描述。

可检测的标记物可包含自身可检测的分子(例如，荧光部分、电化学标记物、ecl(电化学发光)标记物、金属螯合物、胶体金属颗粒等)以及可通过产生可检测的反应产物(例如，酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)或通过使用自身可被检测的特异性结合分子(例如，与第二抗体结合的标记抗体、生物素、地高辛、麦芽糖、寡聚组氨酸、2,4-二硝基苯、苯基砷酸盐、ssDNA、dsDNA等)而被间接检测的分子。

可利用本领域中熟知的各种光学、声学和电化学方法来进行由信号发生元件产生信号。检测模式的实例包括荧光、放射化学检测、反射、吸收、电流分析法、电导、阻抗、干涉法、椭圆光度法等。在这些方法的某些中，使固相抗体连接于转换器(例如，衍射光栅、电化学传感器等)以产生信号，而在其它方法中，由在空间上与固相抗体分开的转换器(例如，使用激发光源和光检测器的荧光计)产生信号。这份清单并不意味着是限制性的。也可使用基于抗体的生物传感器来确定分析物的存在或数量，其任选可不再需要标记的分子。

具体实施方式

本发明涉及通过测量一种或多种肾损伤标记物对罹患肾功能损伤、肾功能衰弱和/或急性肾衰竭或具有罹患上述疾病危险的受试者进行诊断、鉴别诊断、危险分级、监测、分类和确定治疗方案的方法及组合物。在各种实施方案中，将一种或多种选自肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16的生物标记物或与其相关的一种或多种标记物的测定浓度与受试者的肾状态相关联。

对于本文件来说，应用以下定义：

如本文中所用，“肾功能损伤”是测量的肾功能的急剧的(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)可测量的下降。这种损伤可通过例如肾小球滤过率或估计GFR的减小、排尿量的减少、血清肌酐的增加、血清胱抑素C的增加、对肾替代疗法的需求等进行识别。“肾功能的改善”是测量的肾功能的急剧的(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)可测量的提高。测量和/或估计GFR的优选方法在下文中描述。

如本文中所用，“衰弱的肾功能”是通过大于或等于0.1mg/dL(≥8.8μmol/L)的血清肌酐的绝对增加、大于或等于20%(基线的1.2倍)的血清肌酐的百分比增加或排尿量的减少(文献记载的少尿为每小时不到0.5ml/kg)确认的肾功能的急剧(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)下降。

如本文中所用，“急性肾衰竭”或“ARF”是通过大于或等于0.3mg/dl(≥26.4μmol/l)的血清肌酐的绝对增加、大于或等于50%(基线的1.5倍)的血清肌酐的百分比增加或排尿量的减少(文献记载的至少6小时的少尿为每小时不到0.5ml/kg)确认的肾功能的急剧(14天内，优选7天内，更优选72小时内，还更优选48小时内)下降。这一术语和“急性肾损伤”或“AKI”同义。

如本文中所用，术语“肿瘤坏死因子受体超家族成员10B”指衍生自肿瘤坏死因子受体超家族成员10B前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot O14763(SEQ ID NO:1))。

10 20 30 40 50 60

MEQRGQNAPA ASGARKRHGP GPREARGARP GPRVPKTLVL VVAAVLLLVS AESALITQQD

70 80 90 100 110 120

LAPQQRAAPQ QKRSSPSEGL CPPGHHISED GRDCISCKYG QDYSTHWNDL LFCLRCTRCD

130 140 150 160 170 180

SGEVELSPCT TTRNTVCQCE EGTFREEDSP EMCRKCRTGC PRGMVKVGDC TPWSDIECVH

190 200 210 220 230 240

KESGTKHSGE APAVEETVTS SPGTPASPCS LSGIIIGVTV AAVVLIVAVF VCKSLLWKKV

250 260 270 280 290 300

LPYLKGICSG GGGDPERVDR SSQRPGAEDN VLNEIVSILQ PTQVPEQEME VQEPAEPTGV

310 320 330 340 350 360

NMLSPGESEH LLEPAEAERS QRRRLLVPAN EGDPTETLRQ CFDDFADLVP FDSWEPLMRK

370 380 390 400 410 420

LGLMDNEIKV AKAEAAGHRD TLYTMLIKWV NKTGRDASVH TLLDALETLG ERLAKQKIED

430 440

HLLSSGKFMY LEGNADSAMS

更优选地，肿瘤坏死因子受体超家族成员10B测定检测肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的一种或多种可溶形式。肿瘤坏死因子受体超家族成员10B是具有大胞外域的单通I型膜蛋白，它们大部分或全部是以通过删除全部或部分跨膜域的选择性剪切事件或通过膜结合形式的蛋白水解产生的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的可溶形式存在。在免疫测定的情况下，在此胞外域内结合于表位的一种或多种抗体可用于检测这些可溶形式。在肿瘤坏死因子受体超家族成员10B中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“钙粘着蛋白-16”指衍生自钙粘着蛋白-16前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot O75309(SEQ IDNO:2))。

10 20 30 40 50 60

MVPAWLWLLC VSVPQALPKA QPAELSVEVP ENYGGNFPLY LTKLPLPREG AEGQIVLSGD

70 80 90 100 110 120

SGKATEGPFA MDPDSGFLLV TRALDREEQA EYQLQVTLEM QDGHVLWGPQ PVLVHVKDEN

130 140 150 160 170 180

DQVPHFSQAI YRARLSRGTR PGIPFLFLEA SDRDEPGTAN SDLRFHILSQ APAQPSPDMF

190 200 210 220 230 240

QLEPRLGALA LSPKGSTSLD HALERTYQLL VQVKDMGDQA SGHQATATVE VSIIESTWVS

250 260 270 280 290 300

LEPIHLAENL KVLYPHHMAQ VHWSGGDVHY HLESHPPGPF EVNAEGNLYV TRELDREAQA

310 320 330 340 350 360

EYLLQVRAQN SHGEDYAAPL ELHVLVMDEN DNVPICPPRD PTVSIPELSP PGTEVTRLSA

370 380 390 400 410 420

EDADAPGSPN SHVVYQLLSP EPEDGVEGRA FQVDPTSGSV TLGVLPLRAG QNILLLVLAM

430 440 450 460 470 480

DLAGAEGGFS STCEVEVAVT DINDHAPEFI TSQIGPISLP EDVEPGTLVA MLTAIDADLE

490 500 510 520 530 540

PAFRLMDFAI ERGDTEGTFG LDWEPDSGHV RLRLCKNLSY EAAPSHEVVV VVQSVAKLVG

550 560 570 580 590 600

PGPGPGATAT VTVLVERVMP PPKLDQESYE ASVPISAPAG SFLLTIQPSD PISRTLRFSL

610 620 630 640 650 660

VNDSEGWLCI EKFSGEVHTA QSLQGAQPGD TYTVLVEAQD TDEPRLSASA PLVIHFLKAP

670 680 690 700 710 720

PAPALTLAPV PSQYLCTPRQ DHGLIVSGPS KDPDLASGHG PYSFTLGPNP TVQRDWRLQT

730 740 750 760 770 780

LNGSHAYLTL ALHWVEPREH IIPVVVSHNA QMWQLLVRVI VCRCNVEGQC MRKVGRMKGM

790 800 810 820

PTKLSAVGIL VGTLVAIGIF LILIFTHWTM SRKKDPDQPA DSVPLKATV

更优选地，钙粘着蛋白-16测定检测钙粘着蛋白-16的一种或多种可溶形式。钙粘着蛋白-16是具有大胞外域的单通I型膜蛋白，它们大部分或全部是以通过删除全部或部分跨膜域的选择性剪切事件或通过膜结合形式的蛋白水解产生的钙粘着蛋白-16的可溶形式存在。在免疫测定的情况下，在此胞外域内结合于表位的一种或多种抗体可用于检测这些可溶形式。在钙粘着蛋白-16中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“胱天蛋白酶-9”指衍生自胱天蛋白酶-9前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P55211(SEQ ID NO:3))。

10 20 30 40 50 60

MDEADRRLLR RCRLRLVEEL QVDQLWDALL SRELFRPHMI EDIQRAGSGS RRDQARQLII

70 80 90 100 110 120

DLETRGSQAL PLFISCLEDT GQDMLASFLR TNRQAAKLSK PTLENLTPVV LRPEIRKPEV

130 140 150 160 170 180

LRPETPRPVD IGSGGFGDVG ALESLRGNAD LAYILSMEPC GHCLIINNVN FCRESGLRTR

190 200 210 220 230 240

TGSNIDCEKL RRRFSSLHFM VEVKGDLTAK KMVLALLELA QQDHGALDCC VVVILSHGCQ

250 260 270 280 290 300

ASHLQFPGAV YGTDGCPVSV EKIVNIFNGT SCPSLGGKPK LFFIQACGGE QKDHGFEVAS

310 320 330 340 350 360

TSPEDESPGS NPEPDATPFQ EGLRTFDQLD AISSLPTPSD IFVSYSTFPG FVSWRDPKSG

370 380 390 400 410

SWYVETLDDI FEQWAHSEDL QSLLLRVANA VSVKGIYKQM PGCFNFLRKK LFFKTS

在胱天蛋白酶-9中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“细胞死亡的Bcl2拮抗剂”指衍生自细胞死亡的Bcl2拮抗剂前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-ProtQ92934(SEQ ID NO:4))。

10 20 30 40 50 60

MFQIPEFEPS EQEDSSSAER GLGPSPAGDG PSGSGKHHRQ APGLLWDASH QQEQPTSSSH

70 80 90 100 110 120

HGGAGAVEIR SRHSSYPAGT EDDEGMGEEP SPFRGRSRSA PPNLWAAQRY GRELRRMSDE

130 140 150 160

FVDSFKKGLP RPKSAGTATQ MRQSSSWTRV FQSWWDRNLG RGSSAPSQ

如本文中所用，术语“胱天蛋白酶-1”指衍生自胱天蛋白酶-1前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P29466(SEQ ID NO:5))。

10 20 30 40 50 60

MADKVLKEKR KLFIRSMGEG TINGLLDELL QTRVLNKEEM EKVKRENATV MDKTRALIDS

70 80 90 100 110 120

VIPKGAQACQ ICITYICEED SYLAGTLGLS ADQTSGNYLN MQDSQGVLSS FPAPQAVQDN

130 140 150 160 170 180

PAMPTSSGSE GNVKLCSLEE AQRIWKQKSA EIYPIMDKSS RTRLALIICN EEFDSIPRRT

190 200 210 220 230 240

GAEVDITGMT MLLQNLGYSV DVKKNLTASD MTTELEAFAH RPEHKTSDST FLVFMSHGIR

250 260 270 280 290 300

EGICGKKHSE QVPDILQLNA IFNMLNTKNC PSLKDKPKVI IIQACRGDSP GVVWFKDSVG

310 320 330 340 350 360

VSGNLSLPTT EEFEDDAIKK AHIEKDFIAF CSSTPDNVSW RHPTMGSVFI GRLIEHMQEY

370 380 390 400

ACSCDVEEIF RKVRFSFEQP DGRAQMPTTE RVTLTRCFYL FPGH

在胱天蛋白酶-1中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“上皮钙粘着蛋白”或“钙粘着蛋白-1”指衍生自上皮钙粘着蛋白前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P12830(SEQ ID NO:6))。

10 20 30 40 50 60

MGPWSRSLSA LLLLLQVSSW LCQEPEPCHP GFDAESYTFT VPRRHLERGR VLGRVNFEDC

70 80 90 100 110 120

TGRQRTAYFS LDTRFKVGTD GVITVKRPLR FHNPQIHFLV YAWDSTYRKF STKVTLNTVG

130 140 150 160 170 180

HHHRPPPHQA SVSGIQAELL TFPNSSPGLR RQKRDWVIPP ISCPENEKGP FPKNLVQIKS

190 200 210 220 230 240

NKDKEGKVFY SITGQGADTP PVGVFIIERE TGWLKVTEPL DRERIATYTL FSHAVSSNGN

250 260 270 280 290 300

AVEDPMEILI TVTDQNDNKP EFTQEVFKGS VMEGALPGTS VMEVTATDAD DDVNTYNAAI

310 320 330 340 350 360

AYTILSQDPE LPDKNMFTIN RNTGVISVVT TGLDRESFPT YTLVVQAADL QGEGLSTTAT

370 380 390 400 410 420

AVITVTDTND NPPIFNPTTY KGQVPENEAN VVITTLKVTD ADAPNTPAWE AVYTILNDDG

430 440 450 460 470 480

GQFVVTTNPV NNDGILKTAK GLDFEAKQQY ILHVAVTNVV PFEVSLTTST ATVTVDVLDV

490 500 510 520 530 540

NEAPIFVPPE KRVEVSEDFG VGQEITSYTA QEPDTFMEQK ITYRIWRDTA NWLEINPDTG

550 560 570 580 590 600

AISTRAELDR EDFEHVKNST YTALIIATDN GSPVATGTGT LLLILSDVND NAPIPEPRTI

610 620 630 640 650 660

FFCERNPKPQ VINIIDADLP PNTSPFTAEL THGASANWTI QYNDPTQESI ILKPKMALEV

670 680 690 700 710 720

GDYKINLKLM DNQNKDQVTT LEVSVCDCEG AAGVCRKAQP VEAGLQIPAI LGILGGILAL

730 740 750 760 770 780

LILILLLLLF LRRRAVVKEP LLPPEDDTRD NVYYYDEEGG GEEDQDFDLS QLHRGLDARP

790 800 810 820 830 840

EVTRNDVAPT LMSVPRYLPR PANPDEIGNF IDENLKAADT DPTAPPYDSL LVFDYEGSGS

850 860 870 880

EAASLSSLNS SESDKDQDYD YLNEWGNRFK KLADMYGGGE DD

最优选地，上皮钙粘着蛋白测定检测上皮钙粘着蛋白的一种或多种可溶形式。上皮钙粘着蛋白是具有大胞外域的单通I型膜蛋白，它们大部分或全部是以通过删除全部或部分跨膜域的选择性剪切事件或通过膜结合形式的蛋白水解产生的上皮钙粘着蛋白的可溶形式存在。在免疫测定的情况下，在此胞外域内结合于表位的一种或多种抗体可用于检测这些可溶形式。在上皮钙粘着蛋白中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“聚[ADP-核糖]聚合酶1”指衍生自聚[ADP-核糖]聚合酶1前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot09874(SEQ ID NO:7))。

10 20 30 40 50 60

MAESSDKLYR VEYAKSGRAS CKKCSESIPK DSLRMAIMVQ SPMFDGKVPH WYHFSCFWKV

70 80 90 100 110 120

GHSIRHPDVE VDGFSELRWD DQQKVKKTAE AGGVTGKGQD GIGSKAEKTL GDFAAEYAKS

130 140 150 160 170 180

NRSTCKGCME KIEKGQVRLS KKMVDPEKPQ LGMIDRWYHP GCFVKNREEL GFRPEYSASQ

190 200 210 220 230 240

LKGFSLLATE DKEALKKQLP GVKSEGKRKG DEVDGVDEVA KKKSKKEKDK DSKLEKALKA

250 260 270 280 290 300

QNDLIWNIKD ELKKVCSTND LKELLIFNKQ QVPSGESAIL DRVADGMVFG ALLPCEECSG

310 320 330 340 350 360

QLVFKSDAYY CTGDVTAWTK CMVKTQTPNR KEWVTPKEFR EISYLKKLKV KKQDRIFPPE

370 380 390 400 410 420

TSASVAATPP PSTASAPAAV NSSASADKPL SNMKILTLGK LSRNKDEVKA MIEKLGGKLT

430 440 450 460 470 480

GTANKASLCI STKKEVEKMN KKMEEVKEAN IRVVSEDFLQ DVSASTKSLQ ELFLAHILSP

490 500 510 520 530 540

WGAEVKAEPV EVVAPRGKSG AALSKKSKGQ VKEEGINKSE KRMKLTLKGG AAVDPDSGLE

550 560 570 580 590 600

HSAHVLEKGG KVFSATLGLV DIVKGTNSYY KLQLLEDDKE NRYWIFRSWG RVGTVIGSNK

610 620 630 640 650 660

LEQMPSKEDA IEHFMKLYEE KTGNAWHSKN FTKYPKKFYP LEIDYGQDEE AVKKLTVNPG

670 680 690 700 710 720

TKSKLPKPVQ DLIKMIFDVE SMKKAMVEYE IDLQKMPLGK LSKRQIQAAY SILSEVQQAV

730 740 750 760 770 780

SQGSSDSQIL DLSNRFYTLI PHDFGMKKPP LLNNADSVQA KVEMLDNLLD IEVAYSLLRG

790 800 810 820 830 840

GSDDSSKDPI DVNYEKLKTD IKVVDRDSEE AEIIRKYVKN THATTHNAYD LEVIDIFKIE

850 860 870 880 890 900

REGECQRYKP FKQLHNRRLL WHGSRTTNFA GILSQGLRIA PPEAPVTGYM FGKGIYFADM

910 920 930 940 950 960

VSKSANYCHT SQGDPIGLIL LGEVALGNMY ELKHASHISK LPKGKHSVKG LGKTTPDPSA

970 980 990 1000 1010

NISLDGVDVP LGTGISSGVN DTSLLYNEYI VYDIAQVNLK YLLKLKFNFK TSLW

在聚[ADP-核糖]聚合酶1中已确定了以下域：

残基长度域ID

1 1 引发剂蛋氨酸

2-1014 1013 聚[ADP-核糖]聚合酶1

聚[ADP-核糖]聚合酶1可以在体外由许多胱天蛋白酶裂解，并且是体内胱天蛋白酶-3的主要裂解靶之一。裂解发生在Asp(214)和Gly(215)之间，这将PARP’s N-末端DNA结合域(24kDa)与其C-末端催化域(89kDa)分开。合适的测定可以仅识别聚[ADP-核糖]聚合酶1的大片段(89kDa)，而不是全长聚[ADP-核糖]聚合酶1，可以仅识别聚[ADP-核糖]聚合酶1的小片段(24kDa)，而不是全长聚[ADP-核糖]聚合酶1，可以仅识别全长聚[ADP-核糖]聚合酶1，或可以识别一个片段和全长聚[ADP-核糖]聚合酶1。

如本文中所用，术语“细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1”指衍生自细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P38936(SEQ ID NO:8))。

10 20 30 40 50 60

MSEPAGDVRQ NPCGSKACRR LFGPVDSEQL SRDCDALMAG CIQEARERWN FDFVTETPLE

70 80 90 100 110 120

GDFAWERVRG LGLPKLYLPT GPRRGRDELG GGRRPGTSPA LLQGTAEEDH VDLSLSCTLV

130 140 150 160

PRSGEQAEGS PGGPGDSQGR KRRQTSMTDF YHSKRRLIFS KRKP

在细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1中已确定了以下域：

残基长度域

1 1 引发剂蛋氨酸

2-164 163 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

如本文中所用，术语“钙粘着蛋白-5”指衍生自钙粘着蛋白-5前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P33151(SEQ ID NO:9))。

10 20 30 40 50 60

MQRLMMLLAT SGACLGLLAV AAVAAAGANP AQRDTHSLLP THRRQKRDWI WNQMHIDEEK

70 80 90 100 110 120

NTSLPHHVGK IKSSVSRKNA KYLLKGEYVG KVFRVDAETG DVFAIERLDR ENISEYHLTA

130 140 150 160 170 180

VIVDKDTGEN LETPSSFTIK VHDVNDNWPV FTHRLFNASV PESSAVGTSV ISVTAVDADD

190 200 210 220 230 240

PTVGDHASVM YQILKGKEYF AIDNSGRIIT ITKSLDREKQ ARYEIVVEAR DAQGLRGDSG

250 260 270 280 290 300

TATVLVTLQD INDNFPFFTQ TKYTFVVPED TRVGTSVGSL FVEDPDEPQN RMTKYSILRG

310 320 330 340 350 360

DYQDAFTIET NPAHNEGIIK PMKPLDYEYI QQYSFIVEAT DPTIDLRYMS PPAGNRAQVI

370 380 390 400 410 420

INITDVDEPP IFQQPFYHFQ LKENQKKPLI GTVLAMDPDA ARHSIGYSIR RTSDKGQFFR

430 440 450 460 470 480

VTKKGDIYNE KELDREVYPW YNLTVEAKEL DSTGTPTGKE SIVQVHIEVL DENDNAPEFA

490 500 510 520 530 540

KPYQPKVCEN AVHGQLVLQI SAIDKDITPR NVKFKFTLNT ENNFTLTDNH DNTANITVKY

550 560 570 580 590 600

GQFDREHTKV HFLPVVISDN GMPSRTGTST LTVAVCKCNE QGEFTFCEDM AAQVGVSIQA

610 620 630 640 650 660

VVAILLCILT ITVITLLIFL RRRLRKQARA HGKSVPEIHE QLVTYDEEGG GEMDTTSYDV

670 680 690 700 710 720

SVLNSVRRGG AKPPRPALDA RPSLYAQVQK PPRHAPGAHG GPGEMAAMIE VKKDEADHDG

730 740 750 760 770 780

DGPPYDTLHI YGYEGSESIA ESLSSLGTDS SDSDVDYDFL NDWGPRFKML AELYGSDPRE

ELLY

最优选地，钙粘着蛋白-5测定检测钙粘着蛋白-5的一种或多种可溶形式。钙粘着蛋白-5是具有大胞外域的单通I型膜蛋白，它们大部分或全部是以通过删除全部或部分跨膜域的选择性剪切事件或通过膜结合形式的蛋白水解产生的钙粘着蛋白-5的可溶形式存在。在免疫测定的情况下，在此胞外域内结合于表位的一种或多种抗体可用于检测这些可溶形式。在钙粘着蛋白-5中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“肌红蛋白”指衍生自肌红蛋白前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P02144(SEQ ID NO:10))。

10 20 30 40 50 60

MGLSDGEWQL VLNVWGKVEA DIPGHGQEVL IRLFKGHPET LEKFDKFKHL KSEDEMKASE

70 80 90 100 110 120

DLKKHGATVL TALGGILKKK GHHEAEIKPL AQSHATKHKI PVKYLEFISE CIIQVLQSKH

130 140 150

PGDFGADAQG AMNKALELFR KDMASNYKEL GFQG

在肌红蛋白中已确定了以下域：

残基长度域ID

1 1 引发剂蛋氨酸

2-154 153 肌红蛋白

如本文中所用，术语“载脂蛋白A-II”指衍生自载脂蛋白A-II前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P02652(SEQ ID NO:11))。

10 20 30 40 50 60

MKLLAATVLL LTICSLEGAL VRRQAKEPCV ESLVSQYFQT VTDYGKDLME KVKSPELQAE

70 80 90 100

AKSYFEKSKE QLTPLIKKAG TELVNFLSYF VELGTQPATQ

在载脂蛋白A-II中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“粘蛋白-16”指衍生自粘蛋白-16前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot Q8WXI7(SEQ ID NO:12))。

10 20 30 40 50 60

MLKPSGLPGS SSPTRSLMTG SRSTKATPEM DSGLTGATLS PKTSTGAIVV TEHTLPFTSP

70 80 90 100 110 120

DKTLASPTSS VVGRTTQSLG VMSSALPEST SRGMTHSEQR TSPSLSPQVN GTPSRNYPAT

130 140 150 160 170 180

SMVSGLSSPR TRTSSTEGNF TKEASTYTLT VETTSGPVTE KYTVPTETST TEGDSTETPW

190 200 210 220 230 240

DTRYIPVKIT SPMKTFADST ASKENAPVSM TPAETTVTDS HTPGRTNPSF GTLYSSFLDL

250 260 270 280 290 300

SPKGTPNSRG ETSLELILST TGYPFSSPEP GSAGHSRIST SAPLSSSASV LDNKISETSI

310 320 330 340 350 360

FSGQSLTSPL SPGVPEARAS TMPNSAIPFS MTLSNAETSA ERVRSTISSL GTPSISTKQT

370 380 390 400 410 420

AETILTFHAF AETMDIPSTH IAKTLASEWL GSPGTLGGTS TSALTTTSPS TTLVSEETNT

430 440 450 460 470 480

HHSTSGKETE GTLNTSMTPL ETSAPGEESE MTATLVPTLG FTTLDSKIRS PSQVSSSHPT

490 500 510 520 530 540

RELRTTGSTS GRQSSSTAAH GSSDILRATT SSTSKASSWT SESTAQQFSE PQHTQWVETS

550 560 570 580 590 600

PSMKTERPPA STSVAAPITT SVPSVVSGFT TLKTSSTKGI WLEETSADTL IGESTAGPTT

610 620 630 640 650 660

HQFAVPTGIS MTGGSSTRGS QGTTHLLTRA TASSETSADL TLATNGVPVS VSPAVSKTAA

670 680 690 700 710 720

GSSPPGGTKP SYTMVSSVIP ETSSLQSSAF REGTSLGLTP LNTRHPFSSP EPDSAGHTKI

730 740 750 760 770 780

STSIPLLSSA SVLEDKVSAT STFSHHKATS SITTGTPEIS TKTKPSSAVL SSMTLSNAAT

790 800 810 820 830 840

SPERVRNATS PLTHPSPSGE ETAGSVLTLS TSAETTDSPN IHPTGTLTSE SSESPSTLSL

850 860 870 880 890 900

PSVSGVKTTF SSSTPSTHLF TSGEETEETS NPSVSQPETS VSRVRTTLAS TSVPTPVFPT

910 920 930 940 950 960

MDTWPTRSAQ FSSSHLVSEL RATSSTSVTN STGSALPKIS HLTGTATMSQ TNRDTFNDSA

970 980 990 1000 1010 1020

APQSTTWPET SPRFKTGLPS ATTTVSTSAT SLSATVMVSK FTSPATSSME ATSIREPSTT

1030 1040 1050 1060 1070 1080

ILTTETTNGP GSMAVASTNI PIGKGYITEG RLDTSHLPIG TTASSETSMD FTMAKESVSM

1090 1100 1110 1120 1130 1140

SVSPSQSMDA AGSSTPGRTS QFVDTFSDDV YHLTSREITI PRDGTSSALT PQMTATHPPS

1150 1160 1170 1180 1190 1200

PDPGSARSTW LGILSSSPSS PTPKVTMSST FSTQRVTTSM IMDTVETSRW NMPNLPSTTS

1210 1220 1230 1240 1250 1260

LTPSNIPTSG AIGKSTLVPL DTPSPATSLE ASEGGLPTLS TYPESTNTPS IHLGAHASSE

1270 1280 1290 1300 1310 1320

SPSTIKLTMA SVVKPGSYTP LTFPSIETHI HVSTARMAYS SGSSPEMTAP GETNTGSTWD

1330 1340 1350 1360 1370 1380

PTTYITTTDP KDTSSAQVST PHSVRTLRTT ENHPKTESAT PAAYSGSPKI SSSPNLTSPA

1390 1400 1410 1420 1430 1440

TKAWTITDTT EHSTQLHYTK LAEKSSGFET QSAPGPVSVV IPTSPTIGSS TLELTSDVPG

1450 1460 1470 1480 149 1500

EPLVLAPSEQ TTITLPMATW LSTSLTEEMA STDLDISSPS SPMSTFAIFP PMSTPSHELS

1510 1520 1530 1540 1550 1560

KSEADTSAIR NTDSTTLDQH LGIRSLGRTG DLTTVPITPL TTTWTSVIEH STQAQDTLSA

1570 1580 1590 1600 1610 1620

TMSPTHVTQS LKDQTSIPAS ASPSHLTEVY PELGTQGRSS SEATTFWKPS TDTLSREIET

1630 1640 1650 1660 1670 1680

GPTNIQSTPP MDNTTTGSSS SGVTLGIAHL PIGTSSPAET STNMALERRS STATVSMAGT

1690 1700 1710 1720 1730 1740

MGLLVTSAPG RSISQSLGRV SSVLSESTTE GVTDSSKGSS PRLNTQGNTA LSSSLEPSYA

1750 1760 1770 1780 1790 1800

EGSQMSTSIP LTSSPTTPDV EFIGGSTFWT KEVTTVMTSD ISKSSARTES SSATLMSTAL

1810 1820 1830 1840 1850 1860

GSTENTGKEK LRTASMDLPS PTPSMEVTPW ISLTLSNAPN TTDSLDLSHG VHTSSAGTLA

1870 1880 1890 1900 1910 1920

TDRSLNTGVT RASRLENGSD TSSKSLSMGN STHTSMTDTE KSEVSSSIHP RPETSAPGAE

1930 1940 1950 1960 1970 1980

TTLTSTPGNR AISLTLPFSS IPVEEVISTG ITSGPDINSA PMTHSPITPP TIVWTSTGTI

1990 2000 2010 2020 2030 2040

EQSTQPLHAV SSEKVSVQTQ STPYVNSVAV SASPTHENSV SSGSSTSSPY SSASLESLDS

2050 2060 2070 2080 2090 2100

TISRRNAITS WLWDLTTSLP TTTWPSTSLS EALSSGHSGV SNPSSTTTEF PLFSAASTSA

2110 2120 2130 2140 2150 2160

AKQRNPETET HGPQNTAAST LNTDASSVTG LSETPVGASI SSEVPLPMAI TSRSDVSGLT

2170 2180 2190 2200 2210 2220

SESTANPSLG TASSAGTKLT RTISLPTSES LVSFRMNKDP WTVSIPLGSH PTTNTETSIP

2230 2240 2250 2260 2270 2280

VNSAGPPGLS TVASDVIDTP SDGAESIPTV SFSPSPDTEV TTISHFPEKT THSFRTISSL

2290 2300 2310 2320 2330 2340

THELTSRVTP IPGDWMSSAM STKPTGASPS ITLGERRTIT SAAPTTSPIV LTASFTETST

2350 2360 2370 2380 2390 2400

VSLDNETTVK TSDILDARKT NELPSDSSSS SDLINTSIAS STMDVTKTAS ISPTSISGMT

2410 2420 2430 2440 2450 2460

ASSSPSLFSS DRPQVPTSTT ETNTATSPSV SSNTYSLDGG SNVGGTPSTL PPFTITHPVE

2470 2480 2490 2500 2510 2520

TSSALLAWSR PVRTFSTMVS TDTASGENPT SSNSVVTSVP APGTWASVGS TTDLPAMGFL

2530 2540 2550 2560 2570 2580

KTSPAGEAHS LLASTIEPAT AFTPHLSAAV VTGSSATSEA SLLTTSESKA IHSSPQTPTT

2590 2600 2610 2620 2630 2640

PTSGANWETS ATPESLLVVT ETSDTTLTSK ILVTDTILFS TVSTPPSKFP STGTLSGASF

2650 2660 2670 2680 2690 2700

PTLLPDTPAI PLTATEPTSS LATSFDSTPL VTIASDSLGT VPETTLTMSE TSNGDALVLK

2710 2720 2730 2740 2750 2760

TVSNPDRSIP GITIQGVTES PLHPSSTSPS KIVAPRNTTY EGSITVALST LPAGTTGSLV

2770 2780 2790 2800 2810 2820

FSQSSENSET TALVDSSAGL ERASVMPLTT GSQGMASSGG IRSGSTHSTG TKTFSSLPLT

2830 2840 2850 2860 2870 2880

MNPGEVTAMS EITTNRLTAT QSTAPKGIPV KPTSAESGLL TPVSASSSPS KAFASLTTAP

2890 2900 2910 2920 2930 2940

PSTWGIPQST LTFEFSEVPS LDTKSASLPT PGQSLNTIPD SDASTASSSL SKSPEKNPRA

2950 2960 2970 2980 2990 3000

RMMTSTKAIS ASSFQSTGFT ETPEGSASPS MAGHEPRVPT SGTGDPRYAS ESMSYPDPSK

3010 3020 3030 3040 3050 3060

ASSAMTSTSL ASKLTTLFST GQAARSGSSS SPISLSTEKE TSFLSPTAST SRKTSLFLGP

3070 3080 3090 3100 3110 3120

SMARQPNILV HLQTSALTLS PTSTLNMSQE EPPELTSSQT IAEEEGTTAE TQTLTFTPSE

3130 3140 3150 3160 3170 3180

TPTSLLPVSS PTEPTARRKS SPETWASSIS VPAKTSLVET TDGTLVTTIK MSSQAAQGNS

3190 3200 3210 3220 3230 3240

TWPAPAEETG TSPAGTSPGS PEVSTTLKIM SSKEPSISPE IRSTVRNSPW KTPETTVPME

3250 3260 3270 3280 3290 3300

TTVEPVTLQS TALGSGSTSI SHLPTGTTSP TKSPTENMLA TERVSLSPSP PEAWTNLYSG

3310 3320 3330 3340 3350 3360

TPGGTRQSLA TMSSVSLESP TARSITGTGQ QSSPELVSKT TGMEFSMWHG STGGTTGDTH

3370 3380 3390 3400 3410 3420

VSLSTSSNIL EDPVTSPNSV SSLTDKSKHK TETWVSTTAI PSTVLNNKIM AAEQQTSRSV

3430 3440 3450 3460 3470 3480

DEAYSSTSSW SDQTSGSDIT LGASPDVTNT LYITSTAQTT SLVSLPSGDQ GITSLTNPSG

3490 3500 3510 3520 3530 3540

GKTSSASSVT SPSIGLETLR ANVSAVKSDI APTAGHLSQT SSPAEVSILD VTTAPTPGIS

3550 3560 3570 3580 3590 3600

TTITTMGTNS ISTTTPNPEV GMSTMDSTPA TERRTTSTEH PSTWSSTAAS DSWTVTDMTS

3610 3620 3630 3640 3650 3660

NLKVARSPGT ISTMHTTSFL ASSTELDSMS TPHGRITVIG TSLVTPSSDA SAVKTETSTS

3670 3680 3690 3700 3710 3720

ERTLSPSDTT ASTPISTFSR VQRMSISVPD ILSTSWTPSS TEAEDVPVSM VSTDHASTKT

3730 3740 3750 3760 3770 3780

DPNTPLSTFL FDSLSTLDWD TGRSLSSATA TTSAPQGATT PQELTLETMI SPATSQLPFS

3790 3800 3810 3820 3830 3840

IGHITSAVTP AAMARSSGVT FSRPDPTSKK AEQTSTQLPT TTSAHPGQVP RSAATTLDVI

3850 3860 3870 3880 3890 3900

PHTAKTPDAT FQRQGQTALT TEARATSDSW NEKEKSTPSA PWITEMMNSV SEDTIKEVTS

3910 3920 3930 3940 3950 3960

SSSVLKDPEY AGHKLGIWDD FIPKFGKAAH MRELPLLSPP QDKEAIHPST NTVETTGWVT

3970 3980 3990 4000 4010 4020

SSEHASHSTI PAHSASSKLT SPVVTTSTRE QAIVSMSTTT WPESTRARTE PNSFLTIELR

4030 4040 4050 4060 4070 4080

DVSPYMDTSS TTQTSIISSP GSTAITKGPR TEITSSKRIS SSFLAQSMRS SDSPSEAITR

4090 4100 4110 4120 4130 4140

LSNFPAMTES GGMILAMQTS PPGATSLSAP TLDTSATASW TGTPLATTQR FTYSEKTTLF

4150 4160 4170 4180 4190 4200

SKGPEDTSQP SPPSVEETSS SSSLVPIHAT TSPSNILLTS QGHSPSSTPP VTSVFLSETS

4210 4220 4230 4240 4250 4260

GLGKTTDMSR ISLEPGTSLP PNLSSTAGEA LSTYEASRDT KAIHHSADTA VTNMEATSSE

4270 4280 4290 4300 4310 4320

YSPIPGHTKP SKATSPLVTS HIMGDITSST SVFGSSETTE IETVSSVNQG LQERSTSQVA

4330 4340 4350 4360 4370 4380

SSATETSTVI THVSSGDATT HVTKTQATFS SGTSISSPHQ FITSTNTFTD VSTNPSTSLI

4390 4400 4410 4420 4430 4440

MTESSGVTIT TQTGPTGAAT QGPYLLDTST MPYLTETPLA VTPDFMQSEK TTLISKGPKD

4450 4460 4470 4480 4490 4500

VTWTSPPSVA ETSYPSSLTP FLVTTIPPAT STLQGQHTSS PVSATSVLTS GLVKTTDMLN

4510 4520 4530 4540 4550 4560

TSMEPVTNSP QNLNNPSNEI LATLAATTDI ETIHPSINKA VTNMGTASSA HVLHSTLPVS

4570 4580 4590 4600 4610 4620

SEPSTATSPM VPASSMGDAL ASISIPGSET TDIEGEPTSS LTAGRKENST LQEMNSTTES

4630 4640 4650 4660 4670 4680

NIILSNVSVG AITEATKMEV PSFDATFIPT PAQSTKFPDI FSVASSRLSN SPPMTISTHM

4690 4700 4710 4720 4730 4740

TTTQTGSSGA TSKIPLALDT STLETSAGTP SVVTEGFAHS KITTAMNNDV KDVSQTNPPF

4750 4760 4770 4780 4790 4800

QDEASSPSSQ APVLVTTLPS SVAFTPQWHS TSSPVSMSSV LTSSLVKTAG KVDTSLETVT

4810 4820 4830 4840 4850 4860

SSPQSMSNTL DDISVTSAAT TDIETTHPSI NTVVTNVGTT GSAFESHSTV SAYPEPSKVT

4870 4880 4890 4900 4910 4920

SPNVTTSTME DTTISRSIPK SSKTTRTETE TTSSLTPKLR ETSISQEITS STETSTVPYK

4930 4940 4950 4960 4970 4980

ELTGATTEVS RTDVTSSSST SFPGPDQSTV SLDISTETNT RLSTSPIMTE SAEITITTQT

4990 5000 5010 5020 5030 5040

GPHGATSQDT FTMDPSNTTP QAGIHSAMTH GFSQLDVTTL MSRIPQDVSW TSPPSVDKTS

5050 5060 5070 5080 5090 5100

SPSSFLSSPA MTTPSLISST LPEDKLSSPM TSLLTSGLVK ITDILRTRLE PVTSSLPNFS

5110 5120 5130 5140 5150 5160

STSDKILATS KDSKDTKEIF PSINTEETNV KANNSGHESH SPALADSETP KATTQMVITT

5170 5180 5190 5200 5210 5220

TVGDPAPSTS MPVHGSSETT NIKREPTYFL TPRLRETSTS QESSFPTDTS FLLSKVPTGT

5230 5240 5250 5260 5270 5280

ITEVSSTGVN SSSKISTPDH DKSTVPPDTF TGEIPRVFTS SIKTKSAEMT ITTQASPPES

5290 5300 5310 5320 5330 5340

ASHSTLPLDT STTLSQGGTH STVTQGFPYS EVTTLMGMGP GNVSWMTTPP VEETSSVSSL

5350 5360 5370 5380 5390 5400

MSSPAMTSPS PVSSTSPQSI PSSPLPVTAL PTSVLVTTTD VLGTTSPESV TSSPPNLSSI

5410 5420 5430 5440 5450 5460

THERPATYKD TAHTEAAMHH STNTAVTNVG TSGSGHKSQS SVLADSETSK ATPLMSTTST

5470 5480 5490 5500 5510 5520

LGDTSVSTST PNISQTNQIQ TEPTASLSPR LRESSTSEKT SSTTETNTAF SYVPTGAITQ

5530 5540 5550 5560 5570 5580

ASRTEISSSR TSISDLDRPT IAPDISTGMI TRLFTSPIMT KSAEMTVTTQ TTTPGATSQG

5590 5600 5610 5620 5630 5640

ILPWDTSTTL FQGGTHSTVS QGFPHSEITT LRSRTPGDVS WMTTPPVEET SSGFSLMSPS

5650 5660 5670 5680 5690 5700

MTSPSPVSST SPESIPSSPL PVTALLTSVL VTTTNVLGTT SPETVTSSPP NLSSPTQERL

5710 5720 5730 5740 5750 5760

TTYKDTAHTE AMHASMHTNT AVANVGTSIS GHESQSSVPA DSHTSKATSP MGITFAMGDT

5770 5780 5790 5800 5810 5820

SVSTSTPAFF ETRIQTESTS SLIPGLRDTR TSEEINTVTE TSTVLSEVPT TTTTEVSRTE

5830 5840 5850 5860 5870 5880

VITSSRTTIS GPDHSKMSPY ISTETITRLS TFPFVTGSTE MAITNQTGPI GTISQATLTL

5890 5900 5910 5920 5930 5940

DTSSTASWEG THSPVTQRFP HSEETTTMSR STKGVSWQSP PSVEETSSPS SPVPLPAITS

5950 5960 5970 5980 5990 6000

HSSLYSAVSG SSPTSALPVT SLLTSGRRKT IDMLDTHSEL VTSSLPSASS FSGEILTSEA

6010 6020 6030 6040 6050 6060

STNTETIHFS ENTAETNMGT TNSMHKLHSS VSIHSQPSGH TPPKVTGSMM EDAIVSTSTP

6070 6080 6090 6100 6110 6120

GSPETKNVDR DSTSPLTPEL KEDSTALVMN STTESNTVFS SVSLDAATEV SRAEVTYYDP

6130 6140 6150 6160 6170 6180

TFMPASAQST KSPDISPEAS SSHSNSPPLT ISTHKTIATQ TGPSGVTSLG QLTLDTSTIA

6190 6200 6210 6220 6230 6240

TSAGTPSART QDFVDSETTS VMNNDLNDVL KTSPFSAEEA NSLSSQAPLL VTTSPSPVTS

6250 6260 6270 6280 6290 6300

TLQEHSTSSL VSVTSVPTPT LAKITDMDTN LEPVTRSPQN LRNTLATSEA TTDTHTMHPS

6310 6320 6330 6340 6350 6360

INTAMANVGT TSSPNEFYFT VSPDSDPYKA TSAVVITSTS GDSIVSTSMP RSSAMKKIES

6370 6380 6390 6400 6410 6420

ETTFSLIFRL RETSTSQKIG SSSDTSTVFD KAFTAATTEV SRTELTSSSR TSIQGTEKPT

6430 6440 6450 6460 6470 6480

MSPDTSTRSV TMLSTFAGLT KSEERTIATQ TGPHRATSQG TLTWDTSITT SQAGTHSAMT

6490 6500 6510 6520 6530 6540

HGFSQLDLST LTSRVPEYIS GTSPPSVEKT SSSSSLLSLP AITSPSPVPT TLPESRPSSP

6550 6560 6570 6580 6590 6600

VHLTSLPTSG LVKTTDMLAS VASLPPNLGS TSHKIPTTSE DIKDTEKMYP STNIAVTNVG

6610 6620 6630 6640 6650 6660

TTTSEKESYS SVPAYSEPPK VTSPMVTSFN IRDTIVSTSM PGSSEITRIE MESTFSVAHG

6670 6680 6690 6700 6710 6720

LKGTSTSQDP IVSTEKSAVL HKLTTGATET SRTEVASSRR TSIPGPDHST ESPDISTEVI

6730 6740 6750 6760 6770 6780

PSLPISLGIT ESSNMTIITR TGPPLGSTSQ GTFTLDTPTT SSRAGTHSMA TQEFPHSEMT

6790 6800 6810 6820 6830 6840

TVMNKDPEIL SWTIPPSIEK TSFSSSLMPS PAMTSPPVSS TLPKTIHTTP SPMTSLLTPS

6850 6860 6870 6880 6890 6900

LVMTTDTLGT SPEPTTSSPP NLSSTSHVIL TTDEDTTAIE AMHPSTSTAA TNVETTCSGH

6910 6920 6930 6940 6950 6960

GSQSSVLTDS EKTKATAPMD TTSTMGHTTV STSMSVSSET TKIKRESTYS LTPGLRETSI

6970 6980 6990 7000 7010 7020

SQNASFSTDT SIVLSEVPTG TTAEVSRTEV TSSGRTSIPG PSQSTVLPEI STRTMTRLFA

7030 7040 7050 7060 7070 7080

SPTMTESAEM TIPTQTGPSG STSQDTLTLD TSTTKSQAKT HSTLTQRFPH SEMTTLMSRG

7090 7100 7110 7120 7130 7140

PGDMSWQSSP SLENPSSLPS LLSLPATTSP PPISSTLPVT ISSSPLPVTS LLTSSPVTTT

7150 7160 7170 7180 7190 7200

DMLHTSPELV TSSPPKLSHT SDERLTTGKD TTNTEAVHPS TNTAASNVEI PSFGHESPSS

7210 7220 7230 7240 7250 7260

ALADSETSKA TSPMFITSTQ EDTTVAISTP HFLETSRIQK ESISSLSPKL RETGSSVETS

7270 7280 7290 7300 7310 7320

SAIETSAVLS EVSIGATTEI SRTEVTSSSR TSISGSAEST MLPEISTTRK IIKFPTSPIL

7330 7340 7350 7360 7370 7380

AESSEMTIKT QTSPPGSTSE STFTLDTSTT PSLVITHSTM TQRLPHSEIT TLVSRGAGDV

7390 7400 7410 7420 7430 7440

PRPSSLPVEE TSPPSSQLSL SAMISPSPVS STLPASSHSS SASVTSPLTP GQVKTTEVLD

7450 7460 7470 7480 7490 7500

ASAEPETSSP PSLSSTSVEI LATSEVTTDT EKIHPFPNTA VTKVGTSSSG HESPSSVLPD

7510 7520 7530 7540 7550 7560

SETTKATSAM GTISIMGDTS VSTLTPALSN TRKIQSEPAS SLTTRLRETS TSEETSLATE

7570 7580 7590 7600 7610 7620

ANTVLSKVST GATTEVSRTE AISFSRTSMS GPEQSTMSQD ISIGTIPRIS ASSVLTESAK

7630 7640 7650 7660 7670 7680

MTITTQTGPS ESTLESTLNL NTATTPSWVE THSTVIQGFP HPEMTTSMGR GPGGVSWPSP

7690 7700 7710 7720 7730 7740

PFVKETSPPS SPLSLPAVTS PHPVSTTFLA HIPPSPLPVT SLLTSGPATT TDILGTSTEP

7750 7760 7770 7780 7790 7800

GTSSSSSLST TSHERLTTYK DTAHTEAVHP STNTGGTNVA TTSSGYKSQS SVLADSSPMC

7810 7820 7830 7840 7850 7860

TTSTMGDTSV LTSTPAFLET RRIQTELASS LTPGLRESSG SEGTSSGTKM STVLSKVPTG

7870 7880 7890 7900 7910 7920

ATTEISKEDV TSIPGPAQST ISPDISTRTV SWFSTSPVMT ESAEITMNTH TSPLGATTQG

7930 7940 7950 7960 7970 7980

TSTLATSSTT SLTMTHSTIS QGFSHSQMST LMRRGPEDVS WMSPPLLEKT RPSFSLMSSP

7990 8000 8010 8020 8030 8040

ATTSPSPVSS TLPESISSSP LPVTSLLTSG LAKTTDMLHK SSEPVTNSPA NLSSTSVEIL

8050 8060 8070 8080 8090 8100

ATSEVTTDTE KTHPSSNRTV TDVGTSSSGH ESTSFVLADS QTSKVTSPMV ITSTMEDTSV

8110 8120 8130 8140 8150 8160

STSTPGFFET SRIQTEPTSS LTLGLRKTSS SEGTSLATEM STVLSGVPTG ATAEVSRTEV

8170 8180 8190 8200 8210 8220

TSSSRTSISG FAQLTVSPET STETITRLPT SSIMTESAEM MIKTQTDPPG STPESTHTVD

8230 8240 8250 8260 8270 8280

ISTTPNWVET HSTVTQRFSH SEMTTLVSRS PGDMLWPSQS SVEETSSASS LLSLPATTSP

8290 8300 8310 8320 8330 8340

SPVSSTLVED FPSASLPVTS LLTPGLVITT DRMGISREPG TSSTSNLSST SHERLTTLED

8350 8360 8370 8380 8390 8400

TVDTEDMQPS THTAVTNVRT SISGHESQSS VLSDSETPKA TSPMGTTYTM GETSVSISTS

8410 8420 8430 8440 8450 8460

DFFETSRIQI EPTSSLTSGL RETSSSERIS SATEGSTVLS EVPSGATTEV SRTEVISSRG

8470 8480 8490 8500 8510 8520

TSMSGPDQFT ISPDISTEAI TRLSTSPIMT ESAESAITIE TGSPGATSEG TLTLDTSTTT

8530 8540 8550 8560 8570 8580

FWSGTHSTAS PGFSHSEMTT LMSRTPGDVP WPSLPSVEEA SSVSSSLSSP AMTSTSFFSA

8590 8600 8610 8620 8630 8640

LPESISSSPH PVTALLTLGP VKTTDMLRTS SEPETSSPPN LSSTSAEILA TSEVTKDREK

8650 8660 8670 8680 8690 8700

IHPSSNTPVVNVGTVIYKHL SPSSVLADLV TTKPTSPMAT TSTLGNTSVS TSTPAFPETM

8710 8720 8730 8740 8750 8760

MTQPTSSLTS GLREISTSQE TSSATERSAS LSGMPTGATT KVSRTEALSL GRTSTPGPAQ

8770 8780 8790 8800 8810 8820

STISPEISTE TITRISTPLT TTGSAEMTIT PKTGHSGASS QGTFTLDTSS RASWPGTHSA

8830 8840 8850 8860 8870 8880

ATHRSPHSGM TTPMSRGPED VSWPSRPSVE KTSPPSSLVS LSAVTSPSPL YSTPSESSHS

8890 8900 8910 8920 8930 8940

SPLRVTSLFT PVMMKTTDML DTSLEPVTTS PPSMNITSDE SLATSKATME TEAIQLSENT

8950 8960 8970 8980 8990 9000

AVTQMGTISA RQEFYSSYPG LPEPSKVTSP VVTSSTIKDI VSTTIPASSE ITRIEMESTS

9010 9020 9030 9040 9050 9060

TLTPTPRETS TSQEIHSATK PSTVPYKALT SATIEDSMTQ VMSSSRGPSP DQSTMSQDIS

9070 9080 9090 9100 9110 9120

SEVITRLSTS PIKAESTEMT ITTQTGSPGA TSRGTLTLDT STTFMSGTHS TASQGFSHSQ

9130 9140 9150 9160 9170 9180

MTALMSRTPG DVPWLSHPSV EEASSASFSL SSPVMTSSSP VSSTLPDSIH SSSLPVTSLL

9190 9200 9210 9220 9230 9240

TSGLVKTTEL LGTSSEPETS SPPNLSSTSA EILATTEVTT DTEKLEMTNV VTSGYTHESP

9250 9260 9270 9280 9290 9300

SSVLADSVTT KATSSMGITY PTGDTNVLTS TPAFSDTSRI QTKSKLSLTP GLMETSISEE

9310 9320 9330 9340 9350 9360

TSSATEKSTV LSSVPTGATT EVSRTEAISS SRTSIPGPAQ STMSSDTSME TITRISTPLT

9370 9380 9390 9400 9410 9420

RKESTDMAIT PKTGPSGATS QGTFTLDSSS TASWPGTHSA TTQRFPQSVV TTPMSRGPED

9430 9440 9450 9460 9470 9480

VSWPSPLSVE KNSPPSSLVS SSSVTSPSPL YSTPSGSSHS SPVPVTSLFT SIMMKATDML

9490 9500 9510 9520 9530 9540

DASLEPETTS APNMNITSDE SLATSKATTE TEAIHVFENT AASHVETTSA TEELYSSSPG

9550 9560 9570 9580 9590 9600

FSEPTKVISP VVTSSSIRDN MVSTTMPGSS GITRIEIESM SSLTPGLRET RTSQDITSST

9610 9620 9630 9640 9650 9660

ETSTVLYKMS SGATPEVSRT EVMPSSRTSI PGPAQSTMSL DISDEVVTRL STSPIMTESA

9670 9680 9690 9700 9710 9720

EITITTQTGY SLATSQVTLP LGTSMTFLSG THSTMSQGLS HSEMTNLMSR GPESLSWTSP

9730 9740 9750 9760 9770 9780

RFVETTRSSS SLTSLPLTTS LSPVSSTLLD SSPSSPLPVT SLILPGLVKT TEVLDTSSEP

9790 9800 9810 9820 9830 9840

KTSSSPNLSS TSVEIPATSE IMTDTEKIHP SSNTAVAKVR TSSSVHESHS SVLADSETTI

9850 9860 9870 9880 9890 9900

TIPSMGITSA VDDTTVFTSN PAFSETRRIP TEPTFSLTPG FRETSTSEET TSITETSAVL

9910 9920 9930 9940 9950 9960

YGVPTSATTE VSMTEIMSSN RTHIPDSDQS TMSPDIITEV ITRLSSSSMM SESTQMTITT

9970 9980 9990 10000 10010 10020

QKSSPGATAQ STLTLATTTA PLARTHSTVP PRFLHSEMTT LMSRSPENPS WKSSPFVEKT

10030 10040 10050 10060 10070 10080

SSSSSLLSLP VTTSPSVSST LPQSIPSSSF SVTSLLTPGM VKTTDTSTEP GTSLSPNLSG

10090 10100 10110 10120 10130 10140

TSVEILAASE VTTDTEKIHP SSSMAVTNVG TTSSGHELYS SVSIHSEPSK ATYPVGTPSS

10150 10160 10170 10180 10190 10200

MAETSISTSM PANFETTGFE AEPFSHLTSG FRKTNMSLDT SSVTPTNTPS SPGSTHLLQS

10210 10220 10230 10240 10250 10260

SKTDFTSSAK TSSPDWPPAS QYTEIPVDII TPFNASPSIT ESTGITSFPE SRFTMSVTES

10270 10280 10290 10300 10310 10320

THHLSTDLLP SAETISTGTV MPSLSEAMTS FATTGVPRAI SGSGSPFSRT ESGPGDATLS

10330 10340 10350 10360 10370 10380

TIAESLPSST PVPFSSSTFT TTDSSTIPAL HEITSSSATP YRVDTSLGTE SSTTEGRLVM

10390 10400 10410 10420 10430 10440

VSTLDTSSQP GRTSSTPILD TRMTESVELG TVTSAYQVPS LSTRLTRTDG IMEHITKIPN

10450 10460 10470 10480 10490 10500

EAAHRGTIRP VKGPQTSTSP ASPKGLHTGG TKRMETTTTA LKTTTTALKT TSRATLTTSV

10510 10520 10530 10540 10550 10560

YTPTLGTLTP LNASRQMAST ILTEMMITTP YVFPDVPETT SSLATSLGAE TSTALPRTTP

10570 10580 10590 10600 10610 10620

SVLNRESETT ASLVSRSGAE RSPVIQTLDV SSSEPDTTAS WVIHPAETIP TVSKTTPNFF

10630 10640 10650 10660 10670 10680

HSELDTVSST ATSHGADVSS AIPTNISPSE LDALTPLVTI SGTDTSTTFP TLTKSPHETE

10690 10700 10710 10720 10730 10740

TRTTWLTHPA ETSSTIPRTI PNFSHHESDA TPSIATSPGA ETSSAIPIMT VSPGAEDLVT

10750 10760 10770 10780 10790 10800

SQVTSSGTDR NMTIPTLTLS PGEPKTIASL VTHPEAQTSS AIPTSTISPA VSRLVTSMVT

10810 10820 10830 10840 10850 10860

SLAAKTSTTN RALTNSPGEP ATTVSLVTHP AQTSPTVPWT TSIFFHSKSD TTPSMTTSHG

10870 10880 10890 10900 10910 10920

AESSSAVPTP TVSTEVPGVV TPLVTSSRAV ISTTIPILTL SPGEPETTPS MATSHGEEAS

10930 10940 10950 10960 10970 10980

SAIPTPTVSP GVPGVVTSLV TSSRAVTSTT IPILTFSLGE PETTPSMATS HGTEAGSAVP

10990 11000 11010 11020 11030 11040

TVLPEVPGMV TSLVASSRAV TSTTLPTLTL SPGEPETTPS MATSHGAEAS STVPTVSPEV

11050 11060 11070 11080 11090 11100

PGVVTSLVTS SSGVNSTSIP TLILSPGELE TTPSMATSHG AEASSAVPTP TVSPGVSGVV

11110 11120 11130 11140 11150 11160

TPLVTSSRAV TSTTIPILTL SSSEPETTPS MATSHGVEAS SAVLTVSPEV PGMVTSLVTS

11170 11180 11190 11200 11210 11220

SRAVTSTTIP TLTISSDEPE TTTSLVTHSE AKMISAIPTL AVSPTVQGLV TSLVTSSGSE

11230 11240 11250 11260 11270 11280

TSAFSNLTVA SSQPETIDSW VAHPGTEASS VVPTLTVSTG EPFTNISLVT HPAESSSTLP

11290 11300 11310 11320 11330 11340

RTTSRFSHSE LDTMPSTVTS PEAESSSAIS TTISPGIPGV LTSLVTSSGR DISATFPTVP

11350 11360 11370 11380 11390 11400

ESPHESEATA SWVTHPAVTS TTVPRTTPNY SHSEPDTTPS IATSPGAEAT SDFPTITVSP

11410 11420 11430 11440 11450 11460

DVPDMVTSQV TSSGTDTSIT IPTLTLSSGE PETTTSFITY SETHTSSAIP TLPVSPGASK

11470 11480 11490 11500 11510 11520

MLTSLVISSG TDSTTTFPTL TETPYEPETT AIQLIHPAET NTMVPKTTPK FSHSKSDTTL

11530 11540 11550 11560 11570 11580

PVAITSPGPE ASSAVSTTTI SPDMSDLVTS LVPSSGTDTS TTFPTLSETP YEPETTVTWL

11590 11600 11610 11620 11630 11640

THPAETSTTV SGTIPNFSHR GSDTAPSMVT SPGVDTRSGV PTTTIPPSIP GVVTSQVTSS

11650 11660 11670 11680 11690 11700

ATDTSTAIPT LTPSPGEPET TASSATHPGT QTGFTVPIRT VPSSEPDTMA SWVTHPPQTS

11710 11720 11730 11740 11750 11760

TPVSRTTSSF SHSSPDATPV MATSPRTEAS SAVLTTISPG APEMVTSQIT SSGAATSTTV

11770 11780 11790 11800 11810 11820

PTLTHSPGMP ETTALLSTHP RTGTSKTFPA STVFPQVSET TASLTIRPGA ETSTALPTQT

11830 11840 11850 11860 11870 11880

TSSLFTLLVT GTSRVDLSPT ASPGVSAKTA PLSTHPGTET STMIPTSTLS LGLLETTGLL

11890 11900 11910 11920 11930 11940

ATSSSAETST STLTLTVSPA VSGLSSASIT TDKPQTVTSW NTETSPSVTS VGPPEFSRTV

11950 11960 11970 11980 11990 12000

TGTTMTLIPS EMPTPPKTSH GEGVSPTTIL RTTMVEATNL ATTGSSPTVA KTTTTFNTLA

12010 12020 12030 12040 12050 12060

GSLFTPLTTP GMSTLASESV TSRTSYNHRS WISTTSSYNR RYWTPATSTP VTSTFSPGIS

12070 12080 12090 12100 12110 12120

TSSIPSSTAA TVPFMVPFTL NFTITNLQYE EDMRHPGSRK FNATERELQG LLKPLFRNSS

12130 12140 12150 12160 12170 12180

LEYLYSGCRL ASLRPEKDSS AMAVDAICTH RPDPEDLGLD RERLYWELSN LTNGIQELGP

12190 12200 12210 12220 12230 12240

YTLDRNSLYV NGFTHRSSMP TTSTPGTSTV DVGTSGTPSS SPSPTAAGPL LMPFTLNFTI

12250 12260 12270 12280 12290 12300

TNLQYEEDMR RTGSRKFNTM ESVLQGLLKP LFKNTSVGPL YSGCRLTLLR PEKDGAATGV

12310 12320 12330 12340 12350 12360

DAICTHRLDP KSPGLNREQL YWELSKLTND IEELGPYTLD RNSLYVNGFT HQSSVSTTST

12370 12380 12390 12400 12410 12420

PGTSTVDLRT SGTPSSLSSP TIMAAGPLLV PFTLNFTITN LQYGEDMGHP GSRKFNTTER

12430 12440 12450 12460 12470 12480

VLQGLLGPIF KNTSVGPLYS GCRLTSLRSE KDGAATGVDA ICIHHLDPKS PGLNRERLYW

12490 12500 12510 12520 12530 12540

ELSQLTNGIK ELGPYTLDRN SLYVNGFTHR TSVPTTSTPG TSTVDLGTSG TPFSLPSPAT

12550 12560 12570 12580 12590 12600

AGPLLVLFTL NFTITNLKYE EDMHRPGSRK FNTTERVLQT LLGPMFKNTS VGLLYSGCRL

12610 12620 12630 12640 12650 12660

TLLRSEKDGA ATGVDAICTH RLDPKSPGLD REQLYWELSQ LTNGIKELGP YTLDRNSLYV

12670 12680 12690 12700 12710 12720

NGFTHWIPVP TSSTPGTSTV DLGSGTPSSL PSPTAAGPLL VPFTLNFTIT NLQYEEDMHH

12730 12740 12750 12760 12770 12780

PGSRKFNTTE RVLQGLLGPM FKNTSVGLLY SGCRLTLLRS EKDGAATGVD AICTHRLDPK

12790 12800 12810 12820 12830 12840

SPGVDREQLY WELSQLTNGI KELGPYTLDR NSLYVNGFTH QTSAPNTSTP GTSTVDLGTS

12850 12860 12870 12880 12890 12900

GTPSSLPSPT SAGPLLVPFT LNFTITNLQY EEDMRHPGSR KFNTTERVLQ GLLKPLFKST

12910 12920 12930 12940 12950 12960

SVGPLYSGCR LTLLRSEKDG AATGVDAICT HRLDPKSPGV DREQLYWELS QLTNGIKELG

12970 12980 12990 13000 13010 13020

PYTLDRNSLY VNGFTHQTSA PNTSTPGTST VDLGTSGTPS SLPSPTSAGP LLVPFTLNFT

13030 13040 13050 13060 13070 13080

ITNLQYEEDM HHPGSRKFNT TERVLQGLLG PMFKNTSVGL LYSGCRLTLL RPEKNGAATG

13090 13100 13110 13120 13130 13140

MDAICSHRLD PKSPGLNREQ LYWELSQLTH GIKELGPYTL DRNSLYVNGF THRSSVAPTS

13150 13160 13170 13180 13190 13200

TPGTSTVDLG TSGTPSSLPS PTTAVPLLVP FTLNFTITNL QYGEDMRHPG SRKFNTTERV

13210 13220 13230 13240 13250 13260

LQGLLGPLFK NSSVGPLYSG CRLISLRSEK DGAATGVDAI CTHHLNPQSP GLDREQLYWQ

13270 13280 13290 13300 13310 13320

LSQMTNGIKE LGPYTLDRNS LYVNGFTHRS SGLTTSTPWT STVDLGTSGT PSPVPSPTTA

13330 13340 13350 13360 13370 13380

GPLLVPFTLN FTITNLQYEE DMHRPGSRKF NTTERVLQGL LSPIFKNSSV GPLYSGCRLT

13390 13400 13410 13420 13430 13440

SLRPEKDGAA TGMDAVCLYH PNPKRPGLDR EQLYWELSQL THNITELGPY SLDRDSLYVN

13450 13460 13470 13480 13490 13500

GFTHQNSVPT TSTPGTSTVY WATTGTPSSF PGHTEPGPLL IPFTFNFTIT NLHYEENMQH

13510 13520 13530 13540 13550 13560

PGSRKFNTTE RVLQGLLKPL FKNTSVGPLY SGCRLTSLRP EKDGAATGMD AVCLYHPNPK

13570 13580 13590 13600 13610 13620

RPGLDREQLY WELSQLTHNI TELGPYSLDR DSLYVNGFTH QNSVPTTSTP GTSTVYWATT

13630 13640 13650 13660 13670 13680

GTPSSFPGHT EPGPLLIPFT FNFTITNLHY EENMQHPGSR KFNTTERVLQ GLLKPLFKNT

13690 13700 13710 13720 13730 13740

SVGPLYSGCR LTLLRPEKHE AATGVDTICT HRVDPIGPGL DRERLYWELS QLTNSITELG

13750 13760 13770 13780 13790 13800

PYTLDRDSLY VNGFNPRSSV PTTSTPGTST VHLATSGTPS SLPGHTAPVP LLIPFTLNFT

13810 13820 13830 13840 13850 13860

ITNLHYEENM QHPGSRKFNT TERVLQGLLK PLFKNTSVGP LYSGCRLTLL RPEKHEAATG

13870 13880 13890 13900 13910 13920

VDTICTHRVD PIGPGLXXEX LYWELSXLTX XIXELGPYTL DRXSLYVNGF THXXSXPTTS

13930 13940 13950 13960 13970 13980

TPGTSTVXXG TSGTPSSXPX XTSAGPLLVP FTLNFTITNL QYEEDMHHPG SRKFNTTERV

13990 14000 14010 14020 14030 14040

LQGLLGPMFK NTSVGLLYSG CRLTLLRPEK NGAATGMDAI CSHRLDPKSP GLDREQLYWE

14050 14060 14070 14080 14090 14100

LSQLTHGIKE LGPYTLDRNS LYVNGFTHRS SVAPTSTPGT STVDLGTSGT PSSLPSPTTA

14110 14120 14130 14140 14150 14160

VPLLVPFTLN FTITNLQYGE DMRHPGSRKF NTTERVLQGL LGPLFKNSSV GPLYSGCRLI

14170 14180 14190 14200 14210 14220

SLRSEKDGAA TGVDAICTHH LNPQSPGLDR EQLYWQLSQM TNGIKELGPY TLDRNSLYVN

14230 14240 14250 14260 14270 14280

GFTHRSSGLT TSTPWTSTVD LGTSGTPSPV PSPTTAGPLL VPFTLNFTIT NLQYEEDMHR

14290 14300 14310 14320 14330 14340

PGSRKFNATE RVLQGLLSPI FKNSSVGPLY SGCRLTSLRP EKDGAATGMD AVCLYHPNPK

14350 14360 14370 14380 14390 14400

RPGLDREQLY WELSQLTHNI TELGPYSLDR DSLYVNGFTH QSSMTTTRTP DTSTMHLATS

14410 14420 14430 14440 14450 14460

RTPASLSGPT TASPLLVLFT INCTITNLQY EEDMRRTGSR KFNTMESVLQ GLLKPLFKNT

14470 14480 14490 14500 14510 14520

SVGPLYSGCR LTLLRPKKDG AATGVDAICT HRLDPKSPGL NREQLYWELS KLTNDIEELG

14530 14540 14550 14560 14570 14580

PYTLDRNSLY VNGFTHQSSV STTSTPGTST VDLRTSGTPS SLSSPTIMXX XPLLXPFTXN

14590 14600 14610 14620 14630 14640

XTITNLXXXX XMXXPGSRKF NTTERVLQGL LRPLFKNTSV SSLYSGCRLT LLRPEKDGAA

14650 14660 14670 14680 14690 14700

TRVDAACTYR PDPKSPGLDR EQLYWELSQL THSITELGPY TLDRVSLYVN GFNPRSSVPT

14710 14720 14730 14740 14750 14760

TSTPGTSTVH LATSGTPSSL PGHTXXXPLL XPFTXNXTIT NLXXXXXMXX PGSRKFNTTE

14770 14780 14790 14800 14810 14820

RVLQGLLKPL FRNSSLEYLY SGCRLASLRP EKDSSAMAVD AICTHRPDPE DLGLDRERLY

14830 14840 14850 14860 14870 14880

WELSNLTNGI QELGPYTLDR NSLYVNGFTH RSSGLTTSTP WTSTVDLGTS GTPSPVPSPT

14890 14900 14910 14920 14930 14940

TAGPLLVPFT LNFTITNLQY EEDMHRPGSR RFNTTERVLQ GLLTPLFKNT SVGPLYSGCR

14950 14960 14970 14980 14990 15000

LTLLRPEKQE AATGVDTICT HRVDPIGPGL DRERLYWELS QLTNSITELG PYTLDRDSLY

15010 15020 15030 15040 15050 15060

VNGFNPWSSV PTTSTPGTST VHLATSGTPS SLPGHTAPVP LLIPFTLNFT ITDLHYEENM

15070 15080 15090 15100 15110 15120

QHPGSRKFNT TERVLQGLLK PLFKSTSVGP LYSGCRLTLL RPEKHGAATG VDAICTLRLD

15130 15140 15150 15160 15170 15180

PTGPGLDRER LYWELSQLTN SVTELGPYTL DRDSLYVNGF THRSSVPTTS IPGTSAVHLE

15190 15200 15210 15220 15230 15240

TSGTPASLPG HTAPGPLLVP FTLNFTITNL QYEEDMRHPG SRKFSTTERV LQGLLKPLFK

15250 15260 15270 15280 15290 15300

NTSVSSLYSG CRLTLLRPEK DGAATRVDAV CTHRPDPKSP GLDRERLYWK LSQLTHGITE

15310 15320 15330 15340 15350 15360

LGPYTLDRHS LYVNGFTHQS SMTTTRTPDT STMHLATSRT PASLSGPTTA SPLLVLFTIN

15370 15380 15390 15400 15410 15420

FTITNLRYEE NMHHPGSRKF NTTERVLQGL LRPVFKNTSV GPLYSGCRLT TLRPKKDGAA

15430 15440 15450 15460 15470 15480

TKVDAICTYR PDPKSPGLDR EQLYWELSQL THSITELGPY TQDRDSLYVN GFTHRSSVPT

15490 15500 15510 15520 15530 15540

TSIPGTSAVH LETSGTPASL PGHTAPGPLL VPFTLNFTIT NLQYEEDMRH PGSRKFNTTE

15550 15560 15570 15580 15590 15600

RVLQGLLKPL FKSTSVGPLY SGCRLTLLRP EKRGAATGVD TICTHRLDPL NPGLDREQLY

15610 15620 15630 15640 15650 15660

WELSKLTRGI IELGPYLLDR GSLYVNGFTH RTSVPTTSTP GTSTVDLGTS GTPFSLPSPA

15670 15680 15690 15700 15710 15720

XXXPLLXPFT XNXTITNLXX XXXMXXPGSR KFNTTERVLQ TLLGPMFKNT SVGLLYSGCR

15730 15740 15750 15760 15770 15780

LTLLRSEKDG AATGVDAICT HRLDPKSPGV DREQLYWELS QLTNGIKELG PYTLDRNSLY

15790 15800 15810 15820 15830 15840

VNGFTHWIPV PTSSTPGTST VDLGSGTPSS LPSPTTAGPL LVPFTLNFTI TNLKYEEDMH

15850 15860 15870 15880 15890 15900

CPGSRKFNTT ERVLQSLLGP MFKNTSVGPL YSGCRLTLLR SEKDGAATGV DAICTHRLDP

15910 15920 15930 15940 15950 15960

KSPGVDREQL YWELSQLTNG IKELGPYTLD RNSLYVNGFT HQTSAPNTST PGTSTVDLGT

15970 15980 15990 16000 16010 16020

SGTPSSLPSP TXXXPLLXPF TXNXTITNLX XXXXMXXPGS RKFNTTEXVL QGLLXPXFKN

16030 16040 16050 16060 16070 16080

XSVGXLYSGC RLTXLRXEKX GAATGXDAIC XHXXXPKXPG LXXEXLYWEL SXLTXXIXEL

16090 16100 16110 16120 16130 16140

GPYTLDRXSL YVNGFTHWIP VPTSSTPGTS TVDLGSGTPS SLPSPTTAGP LLVPFTLNFT

16150 16160 16170 16180 16190 16200

ITNLKYEEDM HCPGSRKFNT TERVLQSLLG PMFKNTSVGP LYSGCRLTSL RSEKDGAATG

16210 16220 16230 16240 16250 16260

VDAICTHRVD PKSPGVDREQ LYWELSQLTN GIKELGPYTL DRNSLYVNGF THQTSAPNTS

16270 16280 16290 16300 16310 16320

TPGTSTVXXG TSGTPSSXPX XTSAGPLLVP FTLNFTITNL QYEEDMHHPG SRKFNTTERV

16330 16340 16350 16360 16370 16380

LQGLLGPMFK NTSVGLLYSG CRLTLLRPEK NGATTGMDAI CTHRLDPKSP GLXXEXLYWE

16390 16400 16410 16420 16430 16440

LSXLTXXIXE LGPYTLDRXS LYVNGFTHXX SXPTTSTPGT STVXXGTSGT PSSXPXXTXX

16450 16460 16470 16480 16490 16500

XPLLXPFTXN XTITNLXXXX XMXXPGSRKF NTTERVLQGL LKPLFRNSSL EYLYSGCRLA

16510 16520 16530 16540 16550 16560

SLRPEKDSSA MAVDAICTHR PDPEDLGLDR ERLYWELSNL TNGIQELGPY TLDRNSLYVN

16570 16580 16590 16600 16610 16620

GFTHRSSMPT TSTPGTSTVD VGTSGTPSSS PSPTTAGPLL IPFTLNFTIT NLQYGEDMGH

16630 16640 16650 16660 16670 16680

PGSRKFNTTE RVLQGLLGPI FKNTSVGPLY SGCRLTSLRS EKDGAATGVD AICIHHLDPK

16690 16700 16710 16720 16730 16740

SPGLNRERLY WELSQLTNGI KELGPYTLDR NSLYVNGFTH RTSVPTTSTP GTSTVDLGTS

16750 16760 16770 16780 16790 16800

GTPFSLPSPA TAGPLLVLFT LNFTITNLKY EEDMHRPGSR KFNTTERVLQ TLLGPMFKNT

16810 16820 16830 16840 16850 16860

SVGLLYSGCR LTLLRSEKDG AATGVDAICT HRLDPKSPGL XXEXLYWELS XLTXXIXELG

16870 16880 16890 16900 16910 16920

PYTLDRXSLY VNGFTHXXSX PTTSTPGTST VXXGTSGTPS SXPXXTXXXP LLXPFTXNXT

16930 16940 16950 16960 16970 16980

ITNLXXXXXM XXPGSRKFNT TERVLQGLLR PVFKNTSVGP LYSGCRLTLL RPKKDGAATK

16990 17000 17010 17020 17030 17040

VDAICTYRPD PKSPGLDREQ LYWELSQLTH SITELGPYTQ DRDSLYVNGF THRSSVPTTS

17050 17060 17070 17080 17090 17100

IPGTSAVHLE TTGTPSSFPG HTEPGPLLIP FTFNFTITNL RYEENMQHPG SRKFNTTERV

17110 17120 17130 17140 17150 17160

LQGLLTPLFK NTSVGPLYSG CRLTLLRPEK QEAATGVDTI CTHRVDPIGP GLDRERLYWE

17170 17180 17190 17200 17210 17220

LSQLTNSITE LGPYTLDRDS LYVDGFNPWS SVPTTSTPGT STVHLATSGT PSPLPGHTAP

17230 17240 17250 17260 17270 17280

VPLLIPFTLN FTITDLHYEE NMQHPGSRKF NTTERVLQGL LKPLFKSTSV GPLYSGCRLT

17290 17300 17310 17320 17330 17340

LLRPEKHGAA TGVDAICTLR LDPTGPGLDR ERLYWELSQL TNSITELGPY TLDRDSLYVN

17350 17360 17370 17380 17390 17400

GFNPWSSVPT TSTPGTSTVH LATSGTPSSL PGHTTAGPLL VPFTLNFTIT NLKYEEDMHC

17410 17420 17430 17440 17450 17460

PGSRKFNTTE RVLQSLHGPM FKNTSVGPLY SGCRLTLLRS EKDGAATGVD AICTHRLDPK

17470 17480 17490 17500 17510 17520

SPGLXXEXLY WELSXLTXXI XELGPYTLDR XSLYVNGFTH XXSXPTTSTP GTSTVXXGTS

17530 17540 17550 17560 17570 17580

GTPSSXPXXT XXXPLLXPFT XNXTITNLXX XXXMXXPGSR KFNTTEXVLQ GLLXPXFKNX

17590 17600 17610 17620 17630 17640

SVGXLYSGCR LTXLRXEKXG AATGXDAICX HXXXPKXPGL XXEXLYWELS XLTNSITELG

17650 17660 17670 17680 17690 17700

PYTLDRDSLY VNGFTHRSSM PTTSIPGTSA VHLETSGTPA SLPGHTAPGP LLVPFTLNFT

17710 17720 17730 17740 17750 17760

ITNLQYEEDM RHPGSRKFNT TERVLQGLLK PLFKSTSVGP LYSGCRLTLL RPEKRGAATG

17770 17780 17790 17800 17810 17820

VDTICTHRLD PLNPGLXXEX LYWELSXLTX XIXELGPYTL DRXSLYVNGF THXXSXPTTS

17830 17840 17850 17860 17870 17880

TPGTSTVXXG TSGTPSSXPX XTXXXPLLXP FTXNXTITNL XXXXXMXXPG SRKFNTTEXV

17890 17900 17910 17920 17930 17940

LQGLLXPXFK NXSVGXLYSG CRLTXLRXEK XGAATGXDAI CXHXXXPKXP GLXXEXLYWE

17950 17960 17970 17980 17990 18000

LSXLTXXIXE LGPYTLDRXS LYVNGFHPRS SVPTTSTPGT STVHLATSGT PSSLPGHTAP

18010 18020 18030 18040 18050 18060

VPLLIPFTLN FTITNLHYEE NMQHPGSRKF NTTERVLQGL LGPMFKNTSV GLLYSGCRLT

18070 18080 18090 18100 18110 18120

LLRPEKNGAA TGMDAICSHR LDPKSPGLXX EXLYWELSXL TXXIXELGPY TLDRXSLYVN

18130 18140 18150 18160 18170 18180

GFTHXXSXPT TSTPGTSTVX XGTSGTPSSX PXXTXXXPLL XPFTXNXTIT NLXXXXXMXX

18190 18200 18210 18220 18230 18240

PGSRKFNTTE XVLQGLLXPX FKNXSVGXLY SGCRLTXLRX EKXGAATGXD AICXHXXXPK

18250 18260 18270 18280 18290 18300

XPGLXXEXLY WELSXLTXXI XELGPYTLDR XSLYVNGFTH QNSVPTTSTP GTSTVYWATT

18310 18320 18330 18340 18350 18360

GTPSSFPGHT EPGPLLIPFT FNFTITNLHY EENMQHPGSR KFNTTERVLQ GLLTPLFKNT

18370 18380 18390 18400 18410 18420

SVGPLYSGCR LTLLRPEKQE AATGVDTICT HRVDPIGPGL XXEXLYWELS XLTXXIXELG

18430 18440 18450 18460 18470 18480

PYTLDRXSLY VNGFTHXXSX PTTSTPGTST VXXGTSGTPS SXPXXTXXXP LLXPFTXNXT

18490 18500 18510 18520 18530 18540

ITNLXXXXXM XXPGSRKFNT TEXVLQGLLX PXFKNXSVGX LYSGCRLTXL RXEKXGAATG

18550 18560 18570 18580 18590 18600

XDAICXHXXX PKXPGLXXEX LYWELSXLTX XIXELGPYTL DRXSLYVNGF THRSSVPTTS

18610 18620 18630 18640 18650 18660

SPGTSTVHLA TSGTPSSLPG HTAPVPLLIP FTLNFTITNL HYEENMQHPG SRKFNTTERV

18670 18680 18690 18700 18710 18720

LQGLLKPLFK STSVGPLYSG CRLTLLRPEK HGAATGVDAI CTLRLDPTGP GLXXEXLYWE

18730 18740 18750 18760 18770 18780

LSXLTXXIXE LGPYTLDRXS LYVNGFTHXX SXPTTSTPGT STVXXGTSGT PSSXPXXTXX

18790 18800 18810 18820 18830 18840

XPLLXPFTXN XTITNLXXXX XMXXPGSRKF NTTEXVLQGL LXPXFKNXSV GXLYSGCRLT

18850 18860 18870 18880 18890 18900

XLRXEKXGAA TGXDAICXHX XXPKXPGLXX EXLYWELSXL TXXIXELGPY TLDRXSLYVN

18910 18920 18930 18940 18950 18960

GFTHRTSVPT TSTPGTSTVH LATSGTPSSL PGHTAPVPLL IPFTLNFTIT NLQYEEDMHR

18970 18980 18990 19000 19010 19020

PGSRKFNTTE RVLQGLLSPI FKNSSVGPLY SGCRLTSLRP EKDGAATGMD AVCLYHPNPK

19030 19040 19050 19060 19070 19080

RPGLDREQLY CELSQLTHNI TELGPYSLDR DSLYVNGFTH QNSVPTTSTP GTSTVYWATT

19090 19100 19110 19120 19130 19140

GTPSSFPGHT XXXPLLXPFT XNXTITNLXX XXXMXXPGSR KFNTTEXVLQ GLLXPXFKNX

19150 19160 19170 19180 19190 19200

SVGXLYSGCR LTXLRXEKXG AATGXDAICX HXXXPKXPGL XXEXLYWELS XLTXXIXELG

19210 19220 19230 19240 19250 19260

PYTLDRXSLY VNGFTHWSSG LTTSTPWTST VDLGTSGTPS PVPSPTTAGP LLVPFTLNFT

19270 19280 19290 19300 19310 19320

ITNLQYEEDM HRPGSRKFNA TERVLQGLLS PIFKNTSVGP LYSGCRLTLL RPEKQEAATG

19330 19340 19350 19360 19370 19380

VDTICTHRVD PIGPGLXXEX LYWELSXLTX XIXELGPYTL DRXSLYVNGF THXXSXPTTS

19390 19400 19410 19420 19430 19440

TPGTSTVXXG TSGTPSSXPX XTXXXPLLXP FTXNXTITNL XXXXXMXXPG SRKFNTTEXV

19450 19460 19470 19480 19490 19500

LQGLLXPXFK NXSVGXLYSG CRLTXLRXEK XGAATGXDAI CXHXXXPKXP GLXXEXLYWE

19510 19520 19530 19540 19550 19560

LSXLTXXIXE LGPYTLDRXS LYVNGFTHRS FGLTTSTPWT STVDLGTSGT PSPVPSPTTA

19570 19580 19590 19600 19610 19620

GPLLVPFTLN FTITNLQYEE DMHRPGSRKF NTTERVLQGL LTPLFRNTSV SSLYSGCRLT

19630 19640 19650 19660 19670 19680

LLRPEKDGAA TRVDAVCTHR PDPKSPGLXX EXLYWELSXL TXXIXELGPY TLDRXSLYVN

19690 19700 19710 19720 19730 19740

GFTHXXSXPT TSTPGTSTVX XGTSGTPSSX PXXTXXXPLL XPFTXNXTIT NLXXXXXMXX

19750 19760 19770 19780 19790 19800

PGSRKFNTTE XVLQGLLXPX FKNXSVGXLY SGCRLTXLRX EKXGAATGXD AICXHXXXPK

19810 19820 19830 19840 19850 19860

XPGLXXEXLY WELSXLTXXI XELGPYTLDR XSLYVNGFTH WIPVPTSSTP GTSTVDLGSG

19870 19880 19890 19900 19910 19920

TPSSLPSPTT AGPLLVPFTL NFTITNLQYG EDMGHPGSRK FNTTERVLQG LLGPIFKNTS

19930 19940 19950 19960 19970 19980

VGPLYSGCRL TSLRSEKDGA ATGVDAICIH HLDPKSPGLX XEXLYWELSX LTXXIXELGP

19990 20000 20010 20020 20030 20040

YTLDRXSLYV NGFTHXXSXP TTSTPGTSTV XXGTSGTPSS XPXXTXXXPL LXPFTXNXTI

20050 20060 20070 20080 20090 20100

TNLXXXXXMX XPGSRKFNTT EXVLQGLLXP XFKNXSVGXL YSGCRLTXLR XEKXGAATGX

20110 20120 20130 20140 20150 20160

DAICXHXXXP KXPGLXXEXL YWELSXLTXX IXELGPYTLD RXSLYVNGFT HQTFAPNTST

20170 20180 20190 20200 20210 20220

PGTSTVDLGT SGTPSSLPSP TSAGPLLVPF TLNFTITNLQ YEEDMHHPGS RKFNTTERVL

20230 20240 20250 20260 20270 20280

QGLLGPMFKN TSVGLLYSGC RLTLLRPEKN GAATRVDAVC THRPDPKSPG LXXEXLYWEL

20290 20300 20310 20320 20330 20340

SXLTXXIXEL GPYTLDRXSL YVNGFTHXXS XPTTSTPGTS TVXXGTSGTP SSXPXXTAPV

20350 20360 20370 20380 20390 20400

PLLIPFTLNF TITNLHYEEN MQHPGSRKFN TTERVLQGLL KPLFKSTSVG PLYSGCRLTL

20410 20420 20430 20440 20450 20460

LRPEKHGAAT GVDAICTLRL DPTGPGLDRE RLYWELSQLT NSVTELGPYT LDRDSLYVNG

20470 20480 20490 20500 20510 20520

FTQRSSVPTT SIPGTSAVHL ETSGTPASLP GHTAPGPLLV PFTLNFTITN LQYEVDMRHP

20530 20540 20550 20560 20570 20580

GSRKFNTTER VLQGLLKPLF KSTSVGPLYS GCRLTLLRPE KRGAATGVDT ICTHRLDPLN

20590 20600 20610 20620 20630 20640

PGLDREQLYW ELSKLTRGII ELGPYLLDRG SLYVNGFTHR NFVPITSTPG TSTVHLGTSE

20650 20660 20670 20680 20690 20700

TPSSLPRPIV PGPLLVPFTL NFTITNLQYE EAMRHPGSRK FNTTERVLQG LLRPLFKNTS

20710 20720 20730 20740 20750 20760

IGPLYSSCRL TLLRPEKDKA ATRVDAICTH HPDPQSPGLN REQLYWELSQ LTHGITELGP

20770 20780 20790 20800 20810 20820

YTLDRDSLYV DGFTHWSPIP TTSTPGTSIV NLGTSGIPPS LPETTXXXPL LXPFTXNXTI

20830 20840 20850 20860 20870 20880

TNLXXXXXMX XPGSRKFNTT ERVLQGLLKP LFKSTSVGPL YSGCRLTLLR PEKDGVATRV

20890 20900 20910 20920 20930 20940

DAICTHRPDP KIPGLDRQQL YWELSQLTHS ITELGPYTLD RDSLYVNGFT QRSSVPTTST

20950 20960 20970 20980 20990 21000

PGTFTVQPET SETPSSLPGP TATGPVLLPF TLNFTITNLQ YEEDMHRPGS RKFNTTERVL

21010 21020 21030 21040 21050 21060

QGLLMPLFKN TSVSSLYSGC RLTLLRPEKD GAATRVDAVC THRPDPKSPG LDRERLYWKL

21070 21080 21090 21100 21110 21120

SQLTHGITEL GPYTLDRHSL YVNGFTHQSS MTTTRTPDTS TMHLATSRTP ASLSGPTTAS

21130 21140 21150 21160 21170 21180

PLLVLFTINF TITNLRYEEN MHHPGSRKFN TTERVLQGLL RPVFKNTSVG PLYSGCRLTL

21190 21200 21210 21220 21230 21240

LRPKKDGAAT KVDAICTYRP DPKSPGLDRE QLYWELSQLT HSITELGPYT LDRDSLYVNG

21250 21260 21270 21280 21290 21300

FTQRSSVPTT SIPGTPTVDL GTSGTPVSKP GPSAASPLLV LFTLNFTITN LRYEENMQHP

21310 21320 21330 21340 21350 21360

GSRKFNTTER VLQGLLRSLF KSTSVGPLYS GCRLTLLRPE KDGTATGVDA ICTHHPDPKS

21370 21380 21390 21400 21410 21420

PRLDREQLYW ELSQLTHNIT ELGHYALDND SLFVNGFTHR SSVSTTSTPG TPTVYLGASK

21430 21440 21450 21460 21470 21480

TPASIFGPSA ASHLLILFTL NFTITNLRYE ENMWPGSRKF NTTERVLQGL LRPLFKNTSV

21490 21500 21510 21520 21530 21540

GPLYSGSRLT LLRPEKDGEA TGVDAICTHR PDPTGPGLDR EQLYLELSQL THSITELGPY

21550 21560 21570 21580 21590 21600

TLDRDSLYVN GFTHRSSVPT TSTGVVSEEP FTLNFTINNL RYMADMGQPG SLKFNITDNV

21610 21620 21630 21640 21650 21660

MKHLLSPLFQ RSSLGARYTG CRVIALRSVK NGAETRVDLL CTYLQPLSGP GLPIKQVFHE

21670 21680 21690 21700 21710 21720

LSQQTHGITR LGPYSLDKDS LYLNGYNEPG LDEPPTTPKP ATTFLPPLSE ATTAMGYHLK

21730 21740 21750 21760 2177 0 21780

TLTLNFTISN LQYSPDMGKG SATFNSTEGV LQHLLRPLFQ KSSMGPFYLG CQLISLRPEK

21790 21800 21810 21820 21830 21840

DGAATGVDTT CTYHPDPVGP GLDIQQLYWE LSQLTHGVTQ LGFYVLDRDS LFINGYAPQN

21850 21860 21870 21880 21890 21900

LSIRGEYQIN FHIVNWNLSN PDPTSSEYIT LLRDIQDKVT TLYKGSQLHD TFRFCLVTNL

21910 21920 21930 21940 21950 21960

TMDSVLVTVK ALFSSNLDPS LVEQVFLDKT LNASFHWLGS TYQLVDIHVT EMESSVYQPT

21970 21980 21990 22000 22010 22020

SSSSTQHFYL NFTITNLPYS QDKAQPGTTN YQRNKRNIED ALNQLFRNSS IKSYFSDCQV

22030 22040 22050 22060 22070 22080

STFRSVPNRH HTGVDSLCNF SPLARRVDRV AIYEEFLRMT RNGTQLQNFT LDRSSVLVDG

22090 22100 22110 22120 22130 22140

YSPNRNEPLT GNSDLPFWAV ILIGLAGLLG LITCLICGVL VTTRRRKKEG EYNVQQQCPG

22150

YYQSHLDLED LQ

最优选地，粘蛋白-16测定检测粘蛋白-16的一种或多种可溶形式。粘蛋白-16是具有大胞外域的单通I型膜蛋白，它们大部分或全部是以通过删除全部或部分跨膜域的选择性剪切事件或通过膜结合形式的蛋白水解产生的粘蛋白-16的可溶形式存在。在免疫测定的情况下，在此胞外域内结合于表位的一种或多种抗体可用于检测这些可溶形式。在粘蛋白-16中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“癌胚抗原相关的细胞粘附分子5”指衍生自癌胚抗原相关的细胞粘附分子5前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P06731(SEQ ID NO:13))。

10 20 30 40 50 60

MESPSAPPHR WCIPWQRLLL TASLLTFWNP PTTAKLTIES TPFNVAEGKE VLLLVHNLPQ

70 80 90 100 110 120

HLFGYSWYKG ERVDGNRQII GYVIGTQQAT PGPAYSGREI IYPNASLLIQ NIIQNDTGFY

130 140 150 160 170 180

TLHVIKSDLV NEEATGQFRV YPELPKPSIS SNNSKPVEDK DAVAFTCEPE TQDATYLWWV

190 200 210 220 230 240

NNQSLPVSPR LQLSNGNRTL TLFNVTRNDT ASYKCETQNP VSARRSDSVI LNVLYGPDAP

250 260 270 280 290 300

TISPLNTSYR SGENLNLSCH AASNPPAQYS WFVNGTFQQS TQELFIPNIT VNNSGSYTCQ

310 320 330 340 350 360

AHNSDTGLNR TTVTTITVYA EPPKPFITSN NSNPVEDEDA VALTCEPEIQ NTTYLWWVNN

370 380 390 400 410 420

QSLPVSPRLQ LSNDNRTLTL LSVTRNDVGP YECGIQNELS VDHSDPVILN VLYGPDDPTI

430 440 450 460 470 480

SPSYTYYRPG VNLSLSCHAA SNPPAQYSWL IDGNIQQHTQ ELFISNITEK NSGLYTCQAN

490 500 510 520 530 540

NSASGHSRTT VKTITVSAEL PKPSISSNNS KPVEDKDAVA FTCEPEAQNT TYLWWVNGQS

550 560 570 580 590 600

LPVSPRLQLS NGNRTLTLFN VTRNDARAYV CGIQNSVSAN RSDPVTLDVL YGPDTPIISP

610 620 630 640 650 660

PDSSYLSGAN LNLSCHSASN PSPQYSWRIN GIPQQHTQVL FIAKITPNNN GTYACFVSNL

670 680 690 700

ATGRNNSIVK SITVSASGTS PGLSAGATVG IMIGVLVGVA LI

在癌胚抗原相关的细胞粘附分子5中已确定了以下域：

如本文中所用，术语“细胞肿瘤抗原p53”指衍生自细胞肿瘤抗原p53前体的生物样本中存在的一种或多种多肽(Swiss-Prot P04637(SEQ ID NO:14))。

10 20 30 40 50 60

MEEPQSDPSV EPPLSQETFS DLWKLLPENN VLSPLPSQAM DDLMLSPDDI EQWFTEDPGP

70 80 90 100 110 120

DEAPRMPEAA PRVAPAPAAP TPAAPAPAPS WPLSSSVPSQ KTYQGSYGFR LGFLHSGTAK

130 140 150 160 170 180

SVTCTYSPAL NKMFCQLAKT CPVQLWVDST PPPGTRVRAM AIYKQSQHMT EVVRRCPHHE

190 200 210 220 230 240

RCSDSDGLAP PQHLIRVEGN LRVEYLDDRN TFRHSVVVPY EPPEVGSDCT TIHYNYMCNS

250 260 270 280 290 300

SCMGGMNRRP ILTIITLEDS SGNLLGRNSF EVRVCACPGR DRRTEEENLR KKGEPHHELP

310 320 330 340 350 360

PGSTKRALPN NTSSSPQPKK KPLDGEYFTL QIRGRERFEM FRELNEALEL KDAQAGKEPG

370 380 390

GSRAHSSHLK SKKGQSTSRH KKLMFKTEGP DSD

细胞肿瘤抗原p53的亚型2与该亚型1序列相比具有以下变化：

332-341：IRGRERFEMF(SEQ ID NO:15)→DGTSFQKENC(SEQ ID NO:16)

342-393：缺失

如本文中所用，术语“将信号与分析物的存在或数量相关联”反映的是这种理解。一般通过使用由已知浓度的所关注的分析物计算的标准曲线将测定信号与分析物的存在或数量相关联。当术语如本文中所用，如果测定可产生指示生理相关浓度的分析物的存在或数量的可检测信号，则将测定“设定成检测”分析物。因为抗体表位有大约8个氨基酸，所以设定成检测所关注的标记物的免疫测定也检测与标记物序列相关的多肽，只要这些多肽含有与测定所用的抗体结合所必需的表位。本文中关于生物标记物所用的术语“相关标记物”（如本文中所述的肾损伤标记物之一）指特定标记物或其生物合成母体的一种或多种片段、变体等，其可作为标记物本身的替代物或单独的生物标记物进行检测。该术语也指衍生自生物标记物前体与别的物质（如结合蛋白、受体、肝素、脂质、糖等）复合的生物样本中存在的一种或多种多肽。

关于这一点，技术人员可以理解的是，由免疫测定获得的信号是在一种或多种抗体与靶生物分子(即分析物)和含与抗体结合的必要表位的多肽间形成复合物的直接结果。虽然这种测定可检测全长生物标记物，并且测定结果可表示成所关注生物标记物的浓度，但源自测定的信号实际上是样本中存在的所有这种“免疫反应性”多肽的结果。也可通过免疫测定之外的方法来确定生物标记物的表达，包括蛋白质测量(例如，斑点印迹法、蛋白质印迹法(western blots)、色谱法、质谱法等)和核酸测量(mRNA量化)。这份清单并不意味着限制性。

如本文中所用的术语“阳向”标记物指相对于未罹患疾病或病症的受试者来说，在罹患该疾病或病症的受试者中确定升高的标记物。如本文中所用的术语“阴向”标记物指相对于未罹患疾病或病症的受试者来说，在罹患该疾病或病症的受试者中确定降低的标记物。

如本文中所用的术语“受试者”指人或非人类生物体。因此，本文中所述的方法和组合物适用于人和动物的疾病。此外，虽然受试者优选为活生物体，但本文中所述的发明也可用于死后分析。优选的受试者是人，最优选的是“患者”，本文中所用的“患者”是指接受疾病或病症的医疗护理的活人。这包括未患所确定的疾病而正进行病理体征研究的人。

优选地，测量样本中的分析物。这种样本可得自受试者，或可得自旨在提供给受试者的生物材料。例如，样本可得自对可能移植到受试者当中而进行评价的肾，分析物测量用于评价肾预先存在的损害。优选的样本是体液样本。

如本文中所用的术语“体液样本”指出于诊断、预后、分类或评价所关注的受试者(如患者或移植捐赠者)的目的而获得的体液样本。在某些实施方案中，可出于确定进行中的病症的结果或治疗方案对病症的影响的目的而获得这种样本。优选的体液样本包括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、痰和胸腔积液。此外，本领域技术人员将意识到，某些体液样本在分馏或纯化步骤后(例如，将全血分离成血清或血浆组分)更易于分析。

如本文中所用术语“诊断”指技术人员可估计和/或确定患者是否罹患给定疾病或病症的机率(“可能性”)的方法。在本发明的情况下，“诊断”包括使用对本发明的肾损伤标记物的测定的结果，最优选为免疫测定的结果，任选连同其它临床特征一起，以实现对获得并测定了样本的受试者的急性肾损伤或ARF的诊断(即，是否出现)。诊断得以“确定”并不意味着诊断是100%准确的。许多生物标记物可指示多种病症。熟练的临床医生不使用信息缺乏的生物标记物结果，而是将测试结果与其它临床标识物一起使用来得出诊断。因此，在预定诊断阈值一侧上的测定生物标记物水平相对于在预定诊断阈值另一侧上的测定水平表示受试者出现疾病的可能性更大。

类似地，预后危险表示出现给定过程或结果的概率(“可能性”)。

预后指标水平或预后指标水平的变化(其又与发病概率的增加有关，例如肾功能恶化、日后ARF或死亡)被认为是“表示”患者出现不利结果的“可能性增加”。

标记物测定

通常，免疫测定涉及使含有或怀疑含有所关注的生物标记物的样本与至少一种特异性结合生物标记物的抗体接触。然后产生表示通过样本中的多肽与抗体或其它结合物质结合所形成的复合物的存在或数量的信号。然后将信号与样本中生物标记物的存在或数量相关联。检测和分析生物标记物的多种方法和装置是技术人员熟知的。参见例如美国专利6,143,576、6,113,855、6,019,944、5,985,579、5,947,124、5,939,272、5,922,615、5,885,527、5,851,776、5,824,799、5,679,526、5,525,524与5,480,792，和The Immunoassay Handbook,David Wild,ed.Stockton Press,New York,1994，上述每个文献据此以引用的方式全文并入，包括所有的表格、附图和权利要求。

本领域中已知的测定装置和方法可在各种夹心、竞争或非竞争性测定形式中利用标记的分子以产生与所关注的生物标记物的存在或数量相关的信号。合适的测定形式还包括色谱法、质谱法和蛋白质“印迹”法。另外，可使用某些方法和装置(如生物传感器和光学免疫测定)来确定分析物的存在或数量，无需标记的分子。参见例如美国专利5,631,171和5,955,377，上述每个专利文献据此以引用的方式全文并入，包括所有表格、附图和权利要求。本领域技术人员也会认识到，自动仪表装置(包括但不限于Beckman

Abbott

RocheDade Behring

系统)属于能够进行免疫测定的免疫测定分析仪。但可利用任意合适的免疫测定，例如酶联免疫测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、竞争结合测定等。

可将抗体或其它多肽固定在多种固体载体上以用于测定。可用于固定特异性结合成员的固相包括在固相结合测定中开发和/或用作固相的那些。合适固相的实例包括膜过滤器、基于纤维素的纸、珠(包括聚合、乳胶和顺磁性颗粒)、玻璃、硅片、微粒、纳米粒子、TentaGel、AgroGel、PEGA凝胶、SPOCC凝胶和多孔板。可以通过将抗体或多种抗体以阵列的形式涂覆在固体载体上制备测定条。然后将该测定条浸入测试样本中，然后通过洗涤和检测步骤快速处理，以产生可测量的信号，如染色斑点。抗体或其它多肽可通过直接配合至测定装置表面或通过间接结合而结合至测定装置的特定区域。在后一种情况的一个实施例中，可将抗体或其它多肽固定在颗粒或其它固体载体上，并且该固体载体固定至装置表面。

生物测定需要检测方法，量化结果的最常用的方法之一是将可检测的标记物配合至对所研究的生物系统中的组分之一具有亲和力的蛋白质或核酸。可检测的标记物可包括自身可检测的分子(例如，荧光部分、电化学标记物、金属螯合物等)以及可通过产生可检测的反应产物(例如，酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)或通过自身可检测的特异性结合分子(例如，生物素、地高辛、麦芽糖、寡聚组氨酸、2,4-二硝基苯、苯基砷酸盐、ssDNA、dsDNA等)而被间接检测的分子。

制备固相和可检测的标记物配合物通常包括使用化学交联剂。交联试剂含有至少两个反应性基团，且通常分为同官能交联剂(含相同的反应性基团)和异官能交联剂(含不相同的反应性基团)。通过胺、巯基偶合或非特异性反应的同双官能交联剂可购自多个商业来源。马来酰亚胺、烷基和芳基卤化物、α-卤代酰基和吡啶基二硫化物是硫醇反应性基团。马来酰亚胺、烷基和芳基卤化物和α-卤代酰基与巯基反应形成硫醚键，而吡啶基二硫化物与巯基反应产生混合二硫化物。吡啶基二硫化物产物是可裂解的。亚氨酸酯也非常适用于蛋白质-蛋白质交联。多种异双官能交联剂(各结合了用于成功配合的不同属性)是市售的。

在某些方面，本发明提供用于分析所述肾损伤标记物的试剂盒。该试剂盒包含用于分析至少一个测试样本的试剂，该测试样本包含至少一种抗体肾损伤标记物。该试剂盒还可包括进行本文中所述的一种或多种诊断和/或预后关联的装置和说明书。优选的试剂盒包含用于对分析物进行夹心测定的抗体对或对分析物进行竞争性测定的标记的物质。优选地，抗体对包含与固相配合的第一抗体和与可检测的标记物配合的第二抗体，其中第一和第二抗体各自结合肾损伤标记物。最优选地，各抗体是单克隆抗体。关于使用试剂盒和进行关联的说明书的形式可以是标签，其是指在制造、运输、销售或使用期间的任一时刻附属于或另随附于试剂盒的任何书面或记录材料。例如，术语标签包括了广告传单和小册子、包装材料、说明书、录音带或录像带、计算机磁盘和直接印在试剂盒上的字迹。

抗体

如本文中所用，术语“抗体”是指衍生自、仿效或基本上由免疫球蛋白基因或多种免疫球蛋白基因或其片段编码的能够特异性结合抗原或表位的肽或多肽。参见例如Fundamental Immunology,第三版,W.E.Paul编著,Raven Press,N.Y.(1993);Wilson(1994;J.Immunol.Methods 175:267-273;Yarmush(1992)J.Biochem.Biophys.Methods25:85-97。术语抗体包括抗原结合部分，即保留结合抗原能力的“抗原结合位点”(例如，片段、子序列、互补决定区(CDR))，包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CHl域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区由二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CHl域组成的Fd片段；(iv)由单臂抗体的VL和VH域组成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等,Nature 341:544-546(1989))，由VH域组成；和(vi)孤立的互补决定区(CDR)。单链抗体也以引用的方式包括在术语“抗体”中。

本文中所述的免疫测定中所用的抗体优先地与本发明的肾损伤标记物特异性结合。术语“特异性结合”并非旨在表明抗体专门与其预期的靶标结合，因为如上所述，抗体与显示抗体结合表位的任何多肽结合。而是，如果抗体对其预期的靶标的亲和力比其对不显示适当表位的非靶标分子的亲和力大约5倍，则抗体“特异性结合”。优选地，抗体对靶标分子的亲和力是其对非靶标分子亲和力的至少约5倍，优选为10倍，更优选为25倍，甚至更优选为50倍，最优选为100倍或更多。在优选的实施方案中，优选的抗体的结合亲和力为至少约10⁷M^-1，优选为约10⁸M^-1至约10⁹M^-1、约10⁹M^-1至约10¹⁰M^-1或约10¹⁰M^-1至约10¹²M^-1。

按K_d=k_off/k_on计算亲和力(k_off是解离速率常数，K_on是缔合速率常数，K_d是平衡常数)。可通过在平衡时测量不同浓度(c)下标记的配体的结合分数(r)来确定亲和力。利用Scatchard等式：r/c=K(n-r)对数据进行作图：其中r＝平衡时每摩尔受体的结合配体的摩尔数；c=平衡时游离配体浓度；K=平衡缔合常数；n＝配体结合位点数/受体分子。通过作图分析，将r/c绘于Y-轴，将r绘于X-轴上，由此制得Scatchard图。通过Scatchard分析测定抗体亲和力是本领域中熟知的。参见例如van Erp等,J.Immunoassay 12:425-43,1991;Nelson and Griswold,Comput.Methods Programs Biomed.27:65-8,1988。

术语“表位”是指能够与抗体特异性结合的抗原决定簇。表位通常由分子的化学活性表面基团组成，如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。构象和非构象表位的区别在于在变性溶剂存在的情况下与前者而非后者的结合消失。

许多出版物中讨论了利用噬菌体展示技术来产生和筛选用于与选定分析物结合的多肽库。参见例如Cwirla等,Proc.Natl.Acad. Sci.USA 87,6378-82,1990；Devlin等,Science 249,404-6,1990,Scott和Smith,Science 249,386-88,1990；和Ladner等,美国专利No.5,571,698。噬菌体展示法的基本概念是建立编码待筛选多肽的DNA与多肽之间的物理缔合。这种物理缔合由噬菌体颗粒提供，该噬菌体颗粒将多肽显示为包围编码多肽的噬菌体基因组的衣壳的一部分。多肽与其基因物质间的物理缔合的建立允许同时群集筛选非常大量的带有不同多肽的噬菌体。展示对靶标具有亲和力的多肽的噬菌体结合至靶标，并且这些噬菌体通过对靶标的亲和力的筛选得到富集。由这些噬菌体展示的多肽的种类可由其各自的基因组来确定。采用这些方法，于是可通过常规的手段大量合成确认对所需靶标具有结合亲和力的多肽。参见例如美国专利No.6,057,098，该专利据此以引用的方式全文并入，包括所有表格、附图和权利要求。

然后可以对由这些方法产生的抗体进行选择，方式是首先通过与所关注的纯化多肽的亲和力和特异性进行筛选，如有需要，将结果与抗体同期望排除结合的多肽的亲和力和特异性相比较。筛选步骤可涉及将纯化的多肽固定在微量滴定板的单独孔中。然后将含潜在抗体或抗体组的溶液置入各自的微量滴定孔中并温育约30分钟至2小时。然后清洗微量滴定孔并将标记的二级抗体(例如，如果培养的抗体是小鼠抗体，则为与碱性磷酸酶配合的抗小鼠抗体)添加至孔中并温育约30分钟，然后清洗。将底物加入孔中，在对固定多肽的抗体存在之处出现颜色反应。

然后，在选定的测定设计中可以对如此确定的抗体进一步分析亲和力和特异性。在靶蛋白质免疫测定的开发中，纯化的靶蛋白质用作标准物，用其判断使用已选定抗体的免疫测定的敏感性和特异性。因为各种抗体的结合亲和力可能会有所不同；某些抗体对(例如，在夹心测定中)可能会在空间上彼此干扰等，所以抗体的测定性能是比抗体的绝对亲和力和特异性更重要的量度。

虽然本申请详细地描述了基于抗体的结合测定，但作为测定中的结合物质的抗体的替代物是本领域中熟知的。这些包括特定靶、适配体等的受体。适配体是结合特异性靶分子的寡核酸或肽分子。适配体通常通过从大型随机序列池中选择它们来产生，但也存在天然适配体。包含修饰核苷酸的高亲和力适配体对配体给予改进的特征，例如改进的体内稳定性或改进的递送特征。这样的修饰的实例包括在核糖和/或磷酸盐和/或碱基位置处的化学取代，且可包括氨基酸侧链官能度。

测定关联

本文中关于生物标记物使用所用的术语“相关联”是指将患者的生物标记物的存在或数量与已知罹患或已知有罹患给定病症危险的人或已知不患有给定病症的人的生物标记物的存在或数量进行比较。通常，采取的形式是将生物标记物浓度形式的测定结果与选择表示疾病是否发生或一些日后结果的可能性的预定阈值进行比较。

选择诊断阈值涉及(除别的以外)考虑疾病的概率、不同测试阈值下真假诊断的分布和基于诊断对治疗(或治疗失败)后果的估计。例如，当考虑施用高度有效且危险水平低的特定疗法时，需要进行的测试很少，因为临床医师可接受相当的诊断不确定性。另一方面，在治疗选项有效性不高和危险性较大的情况下，临床医师往往需要更高程度的诊断确定性。因此，选择诊断阈值时涉及成本/效益分析。

可以多种方式确定合适的阈值。例如，利用心肌钙蛋白诊断急性心肌梗塞的一个建议诊断阈值是见于正常群体中的浓度的第97.5百分位。另一方法是查看同一患者的系列样本，其中先前的“基线”结果用于监测生物标记物水平的时间变化。

也可采用群体研究来选择判定阈值。源自二战期间开发用于雷达图像分析和ROC分析的信号检测理论领域的接收器操作特征(“ROC”)常用于选择能最好地区分“患病”亚群与“未患病”亚群的阈值。当人测试为阳性但实际上未患病时，这种情况下出现的是假阳性。另一方面，当人测试为阴性时，表明其是健康的，而实际上却是患病的，出现的是假阴性。为绘制ROC曲线，随着判定阈值的连续变化，确定真阳性率(TPR)和假阳性率(FPR)。因为TPR相当于敏感性，FPR等于1-特异性，所以有时称ROC图为敏感性与(1-特异性)的关系图。理想的测试在ROC曲线下的面积为1.0；随机测试的面积为0.5。选择阈值以提供可接受的特异性和敏感性水平。

在这种情况下，“患病”意指具有一种特征的群体(存在疾病或病症或出现一些结果)，“未患病”意指没有该特征的群体。虽然单个判定阈值是这种方法的最简单应用，但可使用多个判定阈值。例如，低于第一阈值，可以相对高的置信度确定疾病的不存在，高于第二阈值，也可以相对高的置信度确定疾病的存在。介于两阈值之间可视为不确定。这实质上仅是示例性的。

除比较阈值外，将测定结果与患者分类(是否出现疾病、结果的可能性等)相关联的其它方法包括决策树、规则集、贝叶斯(Bayesian)方法和神经网络方法。这些方法可产生代表受试者归属多个分类中的一个分类的程度的概率值。

测试精度的量度可按Fischer等,Intensive Care Med.29:1043-51,2003中所述获得，并用于确定给定生物标记物的有效性。这些量度包括敏感性和特异性、预测值、概率比、诊断比值比和ROC曲线面积。ROC图的曲线下面积(“AUC”)等于分级器分级到随机选择的阳性例高于随机选择的阴性例的概率。ROC曲线下的面积可认为等同于Mann-Whitney U测试(该测试所测试的是在所考虑的两组中所得到的分数之间的中值差，如果所述组是连续数据组的话)或等同于Wilcoxon分级测试。

如上所述，合适的测试可显示这些不同测量的一种或多种以下结果：特异性大于0.5，优选为至少0.6，更优选为至少0.7，还更优选为至少0.8，甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95，相应的敏感性大于0.2，优选为大于0.3，更优选为大于0.4，还更优选为至少0.5，甚至更优选为0.6，再更优选为大于0.7，还更优选为大于0.8，更优选为大于0.9，最优选为大于0.95；敏感性大于0.5，优选为至少0.6，更优选为至少0.7，还更优选为至少0.8，甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95，相应的特异性大于0.2，优选为大于0.3，更优选为大于0.4，还更优选为至少0.5，甚至更优选为0.6，再更优选为大于0.7，还更优选为大于0.8，更优选为大于0.9，最优选为大于0.95；至少75%敏感性与至少75%特异性组合；ROC曲线面积大于0.5，优选为至少0.6，更优选为0.7，还更优选为至少0.8，甚至更优选为至少0.9，最优选为至少0.95；比值比不同于1，优选为至少约2或更大或约0.5或更小，更优选为至少约3或更大或约0.33或更小，还更优选为至少约4或更大或约0.25或更小，甚至更优选为至少约5或更大或约0.2或更小，最优选为至少约10或更大或约0.1或更小；阳性概率比(计算为敏感性/(1-特异性))大于1，至少为2，更优选为至少3，还更优选为至少5，最优选为至少10；和或阴性概率比(计算为(1-敏感性)/特异性)小于1，小于或等于0.5，更优选为小于或等于0.3，最优选为小于或等于0.1。

别的临床标志物可与本发明的肾损伤标记物测定结果相组合。这些包括与肾状态相关的其它生物标记物。实例包括以下(列举的是常见生物标记物名称，接着是该生物标记物或其母体的Swiss-Prot登录号)：肌动蛋白(P68133)；腺苷脱氨酶结合蛋白(DPP4,P27487)；α-1-酸糖蛋白1(P02763)；α-1-微球蛋白(P02760)；白蛋白(P02768)；血管紧张素原酶(肾素，P00797)；膜联蛋白A2(P07355)；β-葡萄糖醛酸酶(P08236)；B-2-微球蛋白(P61679)；β-半乳糖苷酶(P16278)；BMP-7(P18075)；脑利钠肽(proBNP、BNP-32、NTproBNP;P16860)；钙结合蛋白β(S100-β,P04271)；碳酸酐酶(Q16790)；酪蛋白激酶2(P68400)；铜蓝蛋白(P00450)；簇蛋白(P10909)；补体C3(P01024)；富含半胱氨酸的蛋白(CYR61，O00622)；细胞色素C(P99999)；表皮生长因子(EGF,P01133)；内皮素-1(P05305)；核外体胎球蛋白-A(P02765)；脂肪酸结合蛋白，心脏(FABP3,P05413)；脂肪酸结合蛋白，肝脏(P07148)；铁蛋白(轻链，P02793；重链P02794)；果糖-1,6-二磷酸酶(P09467)；GRO-α(CXCL1,P09341)；生长激素(P01241)；肝细胞生长因子(P14210)；胰岛素样生长因子I(P01343)；免疫球蛋白G；免疫球蛋白轻链(Kappa和Lambda)；干扰素γ(P01308)；溶菌酶(P61626)；白介素-1α(P01583)；白介素-2(P60568)；白介素-4(P60568)；白介素-9(P15248)；白介素-12p40(P29460)；白介素-13(P35225)；白介素-16(Q14005)；L1细胞粘附分子(P32004)；乳酸脱氢酶(P00338)；亮氨酸氨基肽酶(P28838)；安眠蛋白A-α亚基(Q16819)；安眠蛋白A-β亚基(Q16820)；中期因子(P21741)；MIP2-α(CXCL2,P19875)；MMP-2(P0825)；MMP-9(P14780)；神经生长因子-1(O95631);中性内肽酶(P08473)；骨桥蛋白(P10451)；肾乳头抗原1(RPA1)；肾乳头抗原2(RPA2)；视黄醇结合蛋白(P09455)；核糖核酸酶；S100钙结合蛋白A6(P06703)；血清淀粉样P成分(P02743)；钠/氢交换子亚型(NHE3,P48764)；精脒/精胺N1-乙酰转移酶(P21673)；TGF-β1(P01137)；转铁蛋白(P02787)；三叶因子3(TFF3,Q07654)；Toll样蛋白4(O00206)；总蛋白；肾小管间质肾炎抗原(Q9UJW)；尿调蛋白(Tamm-Horsfall蛋白,P07911)。

出于危险分级的目的，脂联素(Q15848)；碱性磷酸酶(P05186)；氨基肽酶N(P15144)；钙结合蛋白D28k(P05937)；胱抑素C(P01034)；F1FO ATP酶的8亚基(P03928)；γ-谷氨酰转移酶(P19440)；GSTa(α-谷胱甘肽-S-转移酶,P08263)；GSTpi(谷胱甘肽-S-转移酶P;GST class-pi;P09211)；IGFBP-1(P08833)；IGFBP-2(P18065)；IGFBP-6(P24592)；整合膜蛋白1(Itm1,P46977)；白介素-6(P05231)；白介素-8(P10145)；白介素-18(Q14116)；IP-10(10kDa干扰素-γ-诱导蛋白,P02778)；IRPR(IFRD1,O00458)；异戊酰基-CoA脱氢酶(IVD,P26440)；I-TAC/CXCL11(O14625)；角蛋白19(P08727)；Kim-1(A型肝炎病毒细胞受体1,O43656)；L-精氨酸：甘氨酸脒基转移酶(P50440)；Leptin(P41159)；Lipocalin2(NGAL,P80188)；MCP-1(P13500)；MIG(γ-干扰素-诱导单核因子Q07325)；MIP-1a(P10147)；MIP-3a(P78556)；MIP-1β(P13236)；MIP-1d(Q16663)；NAG(N-乙酰基-β-D-氨基葡糖苷酶,P54802)；有机离子转运蛋白(OCT2,O15244)；保骨素(O14788)；P8蛋白(O60356)；纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1,P05121)；前ANP(1-98)(P01160)；蛋白磷酸酶1-β(PPI-β,P62140)；Rab GDI-β(P50395)；肾激肽(Q86U61)；整合膜蛋白的RT1.B-1(α)链(Q5Y7A8)；可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员1A(sTNFR-I,P19438)；可溶性肿瘤坏死因子受体超家族成员1B(sTNFR-II,P20333)；金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP-3,P35625)；uPAR(Q03405)可与本发明的肾损伤标记物测定结果组合。

可与本发明的肾损伤标记物测定结果组合的其它临床标志物包括人口统计信息(例如，体重、性别、年龄、种族)、病史(例如，家族病史、手术类型、预先存在的疾病，如动脉瘤、充血性心力衰竭、子痫前期、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、或败血症)、毒素接触类型(如NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基糖甙类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线的造影剂或链脲佐菌素)、临床变量(例如，血压、温度、呼吸率)、危险评分(APACHE评分、PREDICT评分、UA/NSTEMI的TIMI危险评分、Framingham危险评分)、尿总蛋白测量值、肾小球滤过率、估计肾小球滤过率、尿产率、血清或血浆肌酐浓度、肾乳头抗原1(RPA1)测量值、肾乳头抗原2(RPA2)测量值、尿肌酐浓度、钠排泄分数、尿钠浓度、尿肌酐与血清或血浆肌酐比、尿比重、尿渗透压、尿液尿素氮与血浆尿素氮比、血浆BUN与肌酐比和/或按尿钠/(尿肌酐/血浆肌酐)计算的肾衰竭指数。可与肾损伤标记物测定结果组合的其它测量的肾功能在下文和Harrison’s Principles ofInternal Medicine,第17版,McGraw Hill,New York,第1741-1830页及Current Medical Diagnosis&Treatment 2008,第47版,McGraw Hill,New York,第785-815页中描述，上述每个参考文献据此以引用的方式全文并入。

以这种方式组合测定结果/临床标志物可包括采用多变量逻辑回归、对数线性建模、神经网络分析、n-of-m分析、决策树分析等。这份清单并不意味着限制性。

急性肾衰竭的诊断

如上所述，本文中所用的术语“急性肾(或肾脏)损伤”与“急性肾(或肾脏)衰竭”部分是按血清肌酐较基线值的变化定义的。大多数ARF定义具有共同的要素，包括使用血清肌酐以及通常的排尿量。患者可表现为肾功能障碍，而没有可供使用的肾功能的基线量度用于这种比较。在这种情况下，可通过假设患者最初具有正常的GFR来估计血清肌酐基线值。肾小球滤过率(GFR)是每单位时间自肾(肾脏)小球毛细血管过滤进入波曼(Bowman's)囊的流体体积。肾小球滤过率(GFR)可通过测量在血液中具有稳定水平且被自由过滤但不被肾脏再吸收或分泌的任意化学物进行计算。GFR单位一般是ml/min：

GFR=(尿浓度×尿流量)/血浆浓度

通过GFR对体表面积的标准化，可假设每1.73m²大约75–100ml/min的GFR。因此，所测得的比率是自可计算的血液量得到的尿中物质的量。

可采用多种不同的技术来计算或估计肾小球滤过率(GFR或eGFR)。但是，在临床实践中，使用肌酐清除率来计算GFR。肌酐是由身体自然产生的(肌酐是可见于肌肉中的肌酸的代谢物)。其可通过肾小球自由过滤，但极少量也由肾小管主动分泌，使得肌酐清除率比实际GFR高估10-20%。考虑到测量肌酐清除率的容易性，这种误差幅度是可接受的。

如果肌酐的尿浓度(U_Cr)、尿流率(V)和肌酐的血浆浓度(P_Cr)值是已知的，则可计算肌酐清除率(CCr)。因尿浓度和尿流率的乘积为肌酐的排泄率，所以也可认为肌酐清除率是其排泄率(U_Cr×V)除以其血浆浓度。这在数学上通常表示为：

C_{Cr} = \frac{U_{Cr} \times V}{P_{Cr}}

通常收集24小时的尿液，从早上的空膀胱到第二天早上的膀胱含量，然后进行对比血液测试：

为比较身材不同的人之间的结果，CCr通常进行体表面积(BSA)校正，并相比于平均身材的人表示成ml/min/1.73m2。虽然大多数成年人的BSA接近1.7(1.6-1.9)，但极胖或极瘦患者应将其CCr按其实际的BSA进行校正：

因为随着肾小球滤过率(GFR)的下降，肌酐分泌增加，从而导致血清肌酐升高变少，所以肌酐清除率测量的精度有限(即使收集完全时)。因此，肌酐排泄比滤过负荷大得多，导致可能过高地估计GFR(多达两倍差异)。但是，对于临床目的，重要的是确定肾功能是否稳定或变坏或变好。这通常是通过单独监测血清肌酐确定的。与肌酐清除率类似，在ARF的非稳定态条件下，血清肌酐并不准确地反映GFR。然而，血清肌酐较基线的变化程度将反映GFR的变化。血清肌酐的测量容易且方便，并且对肾功能是特异性的。

为了确定按mL/kg/hr计的排尿量，按小时收集尿液并测量就足够了。在例如仅得到累积24小时的排尿而未提供患者体重的情况下，已描述了对RIFLE排尿量标准进行微小修改。例如，Bagshaw等,Nephrol.Dial.Transplant.23:1203–1210,2008假设患者平均体重70kg，根据以下确定患者的RIFLE分类：<35mL/h(危险)、<21mL/h(损伤)或<4mL/h(衰竭)。

选择治疗方案

一旦获得诊断结果，临床医师可轻易地选择与诊断相适合的治疗方案，例如开始肾替代疗法、取消递送已知伤肾的化合物、肾移植、延迟或避免已知伤肾的步骤、改变利尿剂的施用、开始目标指导性治疗等。技术人员可意识到与本文中所述的诊断方法相关讨论的多种疾病的合适治疗。参见例如，Merck Manual of Diagnosis and Therapy,第17版.Merck Research Laboratories,Whitehouse Station,NJ,1999。此外，由于本文中所述的方法和组合物提供了预后信息，所以本发明的标记物可用于监测治疗过程。例如，预后状态的改善或恶化可表明特定疗法的有效或无效。

技术人员很容易理解，本发明非常适合实现所提到的目标和得到所提到的结果和优点以及其中所固有的优点。本文中所提供的实施例代表优选的实施方案，它们是示例性的，并不旨在限制本发明的范围。

实施例1：造影剂诱发肾病的样本收集

此样本收集研究的目的是在接受血管内造影介质之前和之后收集患者的血浆样本和尿样及临床数据。招募大约250名经受放射照影/血管造影程序(涉及血管内施用碘化造影介质)的成人。为了进入到该项研究中，每个患者必须满足以下所有的纳入标准，并且不满足以下所有的排除标准：

纳入标准

18岁或以上的男性和女性；

经受涉及血管内施用造影介质的放射造影/血管造影程序(如CT扫描或冠状动脉介入治疗)；

预期在造影剂施用后住院至少48小时。

能够并愿意提供参与研究的书面同意书并遵守所有的研究程序。

排除标准

接受肾移植者；

在造影程序前肾功能急性恶化；

已接受透析(急性或慢性)或在招募时急需透析；

预期经历大手术(如涉及心肺旁路)或在施用造影剂后48小时内经历造影介质对肾有进一步伤害的重大危险的别的成像程序；

在先前30天内参与了实验疗法的介入性临床研究；

已知感染人类免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒。

在临第一次施用造影剂前(且在任何前置程序水合后)，收集每个患者的EDTA抗凝血样(10mL)和尿样(10mL)。然后在指数对比程序期间最后一次施用造影介质后，在4(±0.5)、8(±1)、24(±2)、48(±2)和72(±2)小时收集血样和尿样。通过直接静脉穿刺或通过其它可用的静脉通路(如现有的股鞘、中央静脉管、外周静脉管或喉癌锁(hep-lock))收集血液。将这些研究血样在临床地点处理成血浆，冷冻并运送到Astute Medical,Inc.,San Diego,CA。将研究尿样冷冻并运送到Astute Medical,Inc。

在临第一次施用造影剂前(任何前置程序水合后)和最后一次施用造影剂后的4(±0.5)、8(±1)、24(±2)和48(±2)及72(±2)小时评估血清肌酐(理想地，在获得研究样本的同时)。此外，就其它的血清和尿肌酐测量、对透析的需求、住院状态和不利的临床结果(包括死亡)的情况来评价每个患者通过第30天的状态。

在施用造影剂前，根据以下评估来确定每个患者的危险性：收缩压<80mm Hg=5个点；动脉内气囊泵=5个点；充血性心力衰竭(III-IV级或肺水肿史)=5个点；年龄>75岁=4个点；血细胞比容水平<39%(男)，<35%(女)=3个点；糖尿病=3个点；造影剂体积=1个点每100mL；血清肌酐水平>1.5g/dL=4个点或估计GFR 40–60mL/min/1.73 m²=2个点，20–40mL/min/1.73 m²=4个点，<20mL/min/1.73m²=6个点。确定的危险性如下：CIN和透析危险：总共5个点或更少=CIN危险-7.5%，透析危险-0.04%；总共6-10个点=CIN危险-14%，透析危险-0.12%；总共11-16个点=CIN危险-26.1%，透析危险-1.09%；总共>16个点=CIN危险-57.3%，透析危险-12.8%。

实施例2：心脏手术的样本收集

此样本收集研究的目的是在经受心血管手术(已知对肾功能具有潜在危害性的程序)之前和之后收集患者血浆样和尿样及临床数据。招募大约900名经受这种手术的成人。为进入该项研究中，每个患者需满足以下所有的纳入标准，且不满足以下所有的排除标准：

纳入标准

18岁或以上的男性和女性；

经受心血管手术；

肾替代危险分数的Toronto/Ottawa预测危险指数是至少2(Wijeysundera等,JAMA 297:1801-9,2007)；和

能够并愿意提供参与研究的书面同意书并遵守所有研究程序。

排除标准

已知怀孕；

先前肾移植；

招募前肾功能急性恶化(例如，任何类别的RIFLE标准)；

已接受透析(急性或慢性)或招募时急需透析；

目前被招募到另一临床研究中或预期在7天的心脏手术(涉及AKI的药物输注或治疗干预)内将招募到另一临床研究中；

已知感染人类免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒。在第一次切割前3小时内(且在任何前置程序水合后)，收集每个患者的EDTA抗凝血样(10mL)、全血(3mL)和尿样(35mL)。然后在该程序后的3(±0.5)、6(±0.5)、12(±1)、24(±2)和48(±2)小时收集血样和尿样，若患者仍住院，则然后在第3到7天每天收集。通过直接静脉穿刺或通过其它可利用的静脉通路(如现有的股鞘、中央静脉管、外周静脉管或喉癌锁)收集血液。将这些研究血样冷冻并运送到Astute Medical,Inc.,SanDiego,CA。将研究尿样冷冻并运送到Astute Medical,Inc。

实施例3：急性患病患者的样本收集

此项研究的目的是收集急性患病患者的样本。将招募大约900名预期在ICU中至少48小时的成人。为进入该项研究中，每个患者需满足以下所有的纳入标准，且不满足以下所有的排除标准：

纳入标准

18岁或以上的男性和女性；

研究群体1：具有以下至少一种的大约300名患者：

休克(SBP<90mmHg和/或需血管加压支持以维持MAP>60mmHg和/或文献记载的SBP下降至少40mmHg)；和

败血病；

研究群体2：具有以下至少一种的大约300名患者：

在招募的24小时内，按计算机化医嘱录入(CPOE)服用IV抗生素；

在招募的24小时内接触造影剂；

腹内压增加，伴急性失偿性心力衰竭；和

严重创伤是ICU住院的主要原因且可能在招募后入住ICU 48小时；

研究群体3：大约300名患者

预期住院期间配备急性护理设备(ICU或ED)，具有已知的急性肾损伤的危险因素(例如，败血症、低血压/休克(休克=收缩BP<90mmHg和/或需血管加压支持以维持MAP>60mmHg和/或文献记载的SBP下降>40mmHg)、大创伤、出血或大手术)；和/或预期招募后入住到ICU至少24小时。

排除标准

已知怀孕；

入收容院的个体；

先前肾移植；

招募前已知肾功能急性恶化(例如，任何类别的RIFLE标准)；

招募前5天内接受透析(急性或慢性)或招募时急需透析；

已知感染人类免疫缺陷病毒(HIV)或肝炎病毒；

仅满足上述的SBP<90mmHg纳入标准，按主治医师或首席研究者的意见不具有休克。

提供同意书后，收集每个患者的EDTA抗凝血样(10mL)和尿样(25-30mL)。然后在施用造影剂(如适用)后4(±0.5)和8(±1)小时；在招募后12(±1)、24(±2)和48(±2)小时收集血样和尿样，此后在患者住院期间，每天进行收集，收集到第7天至第14天。通过直接静脉穿刺或通过其它可利用的静脉通路(例如现有的股鞘、中央静脉管、外周静脉管或喉癌锁(hep-lock))收集血液。将这些研究血样在临床地点加工成血浆、冷冻并运送到Astute Medical,Inc.,San Diego,CA。将研究尿样冷冻并运送到Astute Medical,Inc。

实施例4：免疫测定形式

利用标准夹心酶免疫测定技术来测量分析物。将结合分析物的第一抗体固定在96孔聚苯乙烯微孔板的孔中。将分析物标准物和测试样本移液至合适的孔中，且通过固定的抗体结合存在的任何分析物。洗掉任何未结合物质后，将结合分析物的辣根过氧化物酶配合的第二抗体添加到孔中，从而与分析物(如果存在)和第一抗体形成夹心复合物。在洗涤以移除任何未结合的抗体-酶试剂后，将包含四甲基联苯胺和过氧化氢的底物溶液添加到孔中。按与样本中所存在的分析物的量成比例地产生颜色。停止发色并在540nm或570nm下测量颜色强度。通过与由分析物标准物确定的标准曲线进行比较来确定测试样本的分析物浓度。

实施例5表面上健康的捐赠者和慢性疾病患者的样本

不患有已知的慢性或急性疾病的捐赠者(“表面上健康的捐赠者”)的人尿样购自两个供应商(Golden West Biologicals,Inc.,27625Commerce Center Dr.,Temecula,CA 92590和Virginia MedicalResearch,Inc.,915First Colonial Rd.,Virginia Beach,VA 23454)。在低于-20℃下运送尿样并冷冻储藏。供应商提供每个捐赠者的个人资料，包括性别、种族(黑人/白人)、吸烟状况和年龄。

患有多种慢性疾病的捐赠者(“慢性疾病患者”)的人尿样购自Virginia Medical Research,Inc.,915First Colonial Rd.,Virginia Beach,VA 23454，慢性疾病包括充血性心力衰竭、冠状动脉疾病、慢性肾病、慢性阻塞性肺疾病、糖尿病和高血压。在低于-20℃下运送尿样并冷冻储藏。供应商提供每个个体捐赠者的病例报告，包括年龄、性别、种族(黑人/白人)、吸烟状况和酒精饮用、身高、体重、慢性疾病诊断、目前药物治疗和先前的手术。

实施例6用于评价患者的肾状态的肾损伤标记物的用途

在以下研究中招募重症监护病房(ICU)患者。根据招募7天内达到按RIFLE标准确定的最大阶段，将每个患者按肾状态分为无损伤(0)、有损伤危险(R)、损伤(I)和衰竭(F)。在以下时间收集每个患者的EDTA抗凝血样(10mL)和尿样(25-30mL)，在招募时、在施用造影剂(如适用)后4(±0.5)和8(±1)小时；在招募后12(±1)、24(±2)和48(±2)小时，此后在患者住院期间，每天进行收集，收集到第7天至第14天。在所收集的尿样和血样的血浆组分中使用市售的测定试剂通过标准的免疫测定法来各自测量肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53。浓度报告如下：肿瘤坏死因子受体超家族成员10B-ng/ml、钙粘着蛋白-16-ng/ml、胱天蛋白酶-9-ng/ml、细胞死亡的Bcl2拮抗剂-吸光度单位、胱天蛋白酶-1-pg/ml、钙粘着蛋白-1-pg/ml、聚[ADP-核糖]聚合酶1-ng/ml、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1-pg/ml、钙粘着蛋白-5-ng/ml、肌红蛋白-ng/ml、载脂蛋白A-II-ng/ml、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53-U/ml、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5-ng/ml以及细胞肿瘤抗原p53-ng/ml。

确定两队列，如以下表中的每一个的说明所描述的。在下表中，时间“最大阶段前”表示收集样本的时间(相对于特定患者达到按该组所定义的最低疾病阶段的时间)，分成+/-12小时的三个组。例如，作为两队列使用0对R、I、F的“之前24小时”意指达到阶段R(或I，如果无样本处于R，或F，如果无样本处于R或I)前24小时(+/-12小时)。

产生所测量的每种生物标记物的接受者操作特征(ROC)曲线，并确定每个ROC曲线下的面积(AUC)。队列2中的患者还根据定为队列2的原因而分开，如根据血清肌酐测量值(sCr)、根据排尿量(UO)或根据血清肌酐测量值或排尿量。使用上述讨论的相同实例(0对R、I、F)，对于仅根据血清肌酐测量值定为阶段R、I或F的那些患者，阶段0队列可包括根据排尿量定为阶段R、I或F的患者；对于仅根据排尿量定为阶段R、I或F的那些患者，阶段0队列可包括根据血清肌酐测量值定为阶段R、I或F的患者；对于根据血清肌酐测量值或排尿量定为阶段R、I或F的那些患者，阶段0队列仅含有血清肌酐测量值和排尿量为阶段0的患者。此外，对于根据血清肌酐测量值或排尿量判定的患者的数据中，采用产生最严重RIFLE阶段的判定方法。

利用ROC分析来确定区别队列1与队列2的能力。SE是AUC的标准误差，n是样本或个体患者的数量(示出为“pts”)。标准误差计算如Hanley,J.A.,和McNeil,B.J.,The meaning and use of the area under areceiver operating characteristic(ROC)curve.Radiology(1982)143:29-36中所述；p值是利用双尾Z测试计算的，并且报道为表1-6中p<0.05和表7-14中p<0.10。AUC<0.5表示用于比较的阴向标记物，AUC>0.5表示用于比较的阳向标记物。

选择各种阈值(或“截止值”)浓度，并确定用于区别队列1与队列2的相关敏感性和特异性。OR是对特定截止值浓度计算的比值比，95%CI是比值比的置信区间。

表1：比较在由队列1(发展未超越RIFLE阶段0的患者)收集的尿样中和在由队列2中达到阶段R、I或F之前0、24小时及48小时所收集的受试者尿样中的标记物水平。

载脂蛋白A-II

细胞死亡的Bcl2拮抗剂

胱天蛋白酶-9

钙粘着蛋白-1

钙粘着蛋白-5

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

癌胚抗原相关的细胞粘附分子5

肌红蛋白

粘蛋白-16

聚[ADP-核糖]聚合酶1(裂解的)

KSP-钙粘着蛋白

肿瘤坏死因子受体超家族成员10B

表2：比较在由队列1(发展未超越RIFLE阶段0或R的患者)收集的尿样中和在由队列2中达到阶段I或F之前0、24小时及48小时所收集的受试者尿样中的标记物水平。

载脂蛋白A-II

胱天蛋白酶-1

胱天蛋白酶-9

钙粘着蛋白-1

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

癌胚抗原相关的细胞粘附分子5

肌红蛋白

粘蛋白-16

肿瘤坏死因子受体超家族成员10B

细胞肿瘤抗原p53

表3：比较在由队列1(达到但发展未超越RIFLE阶段R的患者)达到阶段R 12小时内收集的尿样中和在由队列2(达到RIFLE阶段I或F的患者)收集的尿样中的标记物水平。

载脂蛋白A-II

肌红蛋白

KSP-钙粘着蛋白

表4：比较在由队列1(发展未超越RIFLE阶段0的患者)收集的尿样中的最大标记物水平和在由队列2在招募与达到阶段F前0、24小时和48小时之间收集的受试者尿样中的最大值。

载脂蛋白A-II

胱天蛋白酶-1

胱天蛋白酶-9

钙粘着蛋白-1

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

癌胚抗原相关的细胞粘附分子5

肌红蛋白

粘蛋白-16

聚[ADP-核糖]聚合酶1(裂解的)

KSP-钙粘着蛋白

肿瘤坏死因子受体超家族成员10B

表5：比较由队列1(发展未超越RIFLE阶段0的患者)收集的EDTA样本中和在由队列2中达到阶段R、I或F前0、24小时和48小时所收集的受试者的EDTA样本中的标记物水平。

载脂蛋白A-II

细胞死亡的Bcl2拮抗剂

胱天蛋白酶-9

钙粘着蛋白-1

钙粘着蛋白-5

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

癌胚抗原相关的细胞粘附分子5

肌红蛋白

粘蛋白-16

肿瘤坏死因子受体超家族成员10B

表6：比较在由队列1(发展未超越RIFLE阶段0或R的患者)收集的EDTA样本中和在由队列2中达到阶段I或F前0、24小时及48小时所收集的受试者的EDTA样本中的标记物水平。

载脂蛋白A-II

胱天蛋白酶-1

胱天蛋白酶-9

钙粘着蛋白-1

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

癌胚抗原相关的细胞粘附分子5

肌红蛋白

粘蛋白-16

肿瘤坏死因子受体超家族成员10B

细胞肿瘤抗原p53

表7：比较在由队列1(达到但发展未超越RIFLE阶段R的患者)达到阶段R 12小时内收集的EDTA样本中和在由队列2(达到RIFLE阶段I或F的患者)收集的EDTA样本中的标记物水平。

载脂蛋白A-II

肌红蛋白

表8：比较在由队列1(发展未超越RIFLE阶段0的患者)收集的EDTA样本中的最大标记物水平和在由队列2中在招募与达到阶段F前0、24小时及48小时之间所收集的受试者EDTA样本中的最大值。

载脂蛋白A-II

胱天蛋白酶-1

胱天蛋白酶-9

钙粘着蛋白-1

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1

癌胚抗原相关的细胞粘附分子5

肌红蛋白

粘蛋白-16

肿瘤坏死因子受体超家族成员10B

对于本领域技术人员而言，虽然本发明足够详细地描述和示例了其制备和使用，但在不脱离本发明的精神和范围的情况下，多种替代、修改和改进是显而易见的。本文中提供的实施例代表优选的实施方案，是示例性的，不旨在限制本发明的范围。本领域技术人员可想到其中的修改和其它用途。这些修改包括在本发明的精神内，并由权利要求的范围界定。

对于本领域技术人员显而易见的是，在不脱离本发明范围和精神的情况下，可对本文中公开的本发明进行各种替代和修改。

本说明书内所提到的所有专利和出版物表示本发明所属领域的普通技术人员的水平。所有专利和出版物以引用的方式并入本文，引用程度如同每个单独出版物以引用的方式具体且单独地并入一般。

本文中以适当说明性的方式描述的本发明可在本文中未具体公开的任何要素或多个要素、任何限制或多种限制不存在的情况下实施。因此，例如，在本文中各实施例中，术语“包括”、“基本上由…组成”和“由…组成”中任一者可由其它两个术语中的任一者替代。已使用的术语和表述用作描述而非限制的术语，且在这种术语和表述的使用中无意排除所示和所述特征的任何等效表述或其部分，但应了解，可在所要求的本发明范围内进行多种修改。因此，应了解，虽然本发明已具体通过优选的实施方案和可选的特征进行公开，但本文中所公开的概念的修改和变化可被本领域技术人员采用，并且这些修改和变化可认为在所附权利要求所界定的本发明范围内。

其它实施方案在所附权利要求中给出。

Claims

1.一种评价受试者肾状态的方法，包括：

进行一种或多种测定，所述测定设定成检测取自受试者的体液样本上的选自肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53的一种或多种生物标记物，从而提供测定结果；以及

将所述测定结果与所述受试者的所述肾状态相关联。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述相关联步骤包括将所述测定结果与所述受试者的所述肾状态的危险分级、诊断、分期、分类和监测中的一种或多种相关联。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述相关联步骤包括根据所述测定的结果确定所述受试者日后肾状态的一种或多种变化的可能性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述日后肾状态的一种或多种变化包括日后肾功能损伤、日后肾功能衰弱、日后肾功能改善和日后急性肾衰竭(ARF)中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者没有罹患急性肾衰竭。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者还没有经历血清肌酐比在获得所述体液样本的时间之前测定的基线值提高1.5倍或更多倍。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在获得所述体液样本的时间之前所述受试者具有至少0.5ml/kg/hr的12小时排尿量。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者还没有经历血清肌酐比在获得所述体液样本的时间之前测定的基线值提高0.3mg/dL或更多。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者(i)还没有经历血清肌酐比在获得所述体液样本的时间之前测定的基线值提高1.5倍或更多倍，(ii)在获得所述体液样本的时间之前具有至少0.5ml/kg/hr的12小时排尿量，以及(iii)还没有经历血清肌酐比在获得所述体液样本的时间之前测定的基线值提高0.3mg/dL或更多。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段0或R。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段0，并且所述相关联步骤包括确定所述受试者将在72小时内达到RIFLE阶段R、I或F的可能性。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段0或R，并且所述相关联步骤包括确定所述受试者将在72小时内达到RIFLE阶段I或F的可能性。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段0，并且所述相关联步骤包括确定所述受试者将在72小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

14.根据权利要求12所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段R，并且所述相关联步骤包括确定所述受试者将在72小时内达到RIFLE阶段I或F的可能性。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段0、R或I，并且所述相关联步骤包括确定所述受试者将在72小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述受试者处于RIFLE阶段I，并且所述相关联步骤包括确定所述受试者将在72小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

17.根据权利要求11所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在48小时内达到RIFLE阶段R、I或F的可能性。

18.根据权利要求12所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在48小时内达到RIFLE阶段I或F的可能性。

19.根据权利要求13所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在48小时内达到RIFLE阶段I或F的可能性。

20.根据权利要求17所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在48小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

21.根据权利要求18所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在48小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

22.根据权利要求19所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在48小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

23.根据权利要求17所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在24小时内达到RIFLE阶段R、I或F的可能性。

24.根据权利要求18所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在24小时内达到RIFLE阶段I或F的可能性。

25.根据权利要求19所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在24小时内达到RIFLE阶段I或F的可能性。

26.根据权利要求20所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在24小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

27.根据权利要求21所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在24小时内达到RIFLE阶段F的可能性。

28.根据权利要求22所述的方法，其中所述相关联步骤包括确定所述受试者将在24小时内达到RIFLE阶段F的可能性。。

29.根据权利要求1所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

且所述相关联步骤包括将每一测定的浓度与相应的阈值浓度相比较；且

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，相对于所述受试者的当前RIFLE阶段而言，确定所述受试者发展为恶化RIFLE阶段的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，相对于所述受试者的当前RIFLE阶段而言，确定所述受试者发展为恶化RIFLE阶段的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，相对于所述受试者的当前RIFLE阶段而言，确定所述受试者发展为恶化RIFLE阶段的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，相对于所述受试者的当前RIFLE阶段而言，确定所述受试者发展为恶化RIFLE阶段的可能性增大。

30.根据权利要求1所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为需要肾替代疗法的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定发展为需要肾替代疗法的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为需要肾替代疗法的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定发展为需要肾替代疗法的可能性增大。

31.根据权利要求5所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定发展为急性肾衰竭的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为急性肾衰竭的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定发展为急性肾衰竭的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为急性肾衰竭的可能性增大。

32.根据权利要求11所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段R、I或F的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段R、I或F的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段R、I或F的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段R、I或F的可能性增大。

33.根据权利要求12所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段I或F的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段I或F的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段I或F的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段I或F的可能性增大。

34.根据权利要求13所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段F的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段I或F的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段F的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段I或F的可能性增大。

35.根据权利要求14所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

36.根据权利要求15所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

对于阳向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段F的可能性增大，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段F的可能性减小，或者，

对于阴向标记物，当所述测定的浓度高于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段F的可能性减小，或当所述测定的浓度低于所述阈值时，确定所述受试者发展为RIFLE阶段F的可能性增大。

37.根据权利要求16所述的方法，其中所述测定结果包括以下中的一种或多种：

测定的肿瘤坏死因子受体超家族成员10B的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-9的尿或血浆浓度；

测定的细胞死亡的Bcl2拮抗剂的尿或血浆浓度；

测定的胱天蛋白酶-1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-1的尿或血浆浓度；

测定的聚[ADP-核糖]聚合酶1的尿或血浆浓度；

测定的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1的尿或血浆浓度；

测定的钙粘着蛋白-5的尿或血浆浓度；

测定的肌红蛋白的尿或血浆浓度；

测定的载脂蛋白A-II的尿或血浆浓度；

测定的粘蛋白-16的尿或血浆浓度；

测定的癌胚抗原相关的细胞粘附分子5的尿或血浆浓度；或

测定的细胞肿瘤抗原p53的尿或血浆浓度，

38.根据权利要求1所述的方法，其中根据所述受试者预先存在的肾前性、肾性或肾后性ARF的一种或多种已知危险因素选择受试者以进行肾状态评价。

39.根据权利要求1所述的方法，其中根据以下情况中的一种或多种的现有诊断：充血性心力衰竭、子痫前期、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾病、蛋白尿、肾功能不全、肾小球过滤低于正常范围、肝硬化、血清肌酐高于正常范围、败血症、肾功能损伤、肾功能衰弱或ARF；或根据正在经历或经历过大血管手术、冠状动脉搭桥或其它心脏手术；或根据接触NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基糖甙类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线的造影剂或链脲佐菌素，来选择受试者以进行肾状态评价。

40.IGFBP7的测定，其用于对没有接受肾替代疗法的受试者的肾状态进行诊断、危险分级、预后、分类和监测。

41.一种或多种生物标记物的测定，所述一种或多种生物标记物选自肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53，所述测定用于对没有罹患急性肾衰竭的受试者的肾状态进行诊断、危险分级、预后、分类和监测。

42.一种或多种生物标记物的测定，所述一种或多种生物标记物选自肿瘤坏死因子受体超家族成员10B、钙粘着蛋白-16、胱天蛋白酶-9、细胞死亡的Bcl2拮抗剂、胱天蛋白酶-1、钙粘着蛋白-1、聚[ADP-核糖]聚合酶1、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1、钙粘着蛋白-5、肌红蛋白、载脂蛋白A-II、粘蛋白-16、癌胚抗原相关的细胞粘附分子5和细胞肿瘤抗原p53，所述测定用于相对于受试者的当前RIFLE阶段而言确定所述受试者发展为恶化RIFLE阶段的可能性增大。