CN102787137A - 高效哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体 - Google Patents
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Abstract
一种哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体，该哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体不仅能象目前常用的哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体在哺乳动物细胞内表达出目的蛋白质，而且表达的效率远高于这些载体。它是在载体的启动子前插入一段长度为363碱基对的DNA序列，该DNA序列含有大量转录因子的结合位点，对转录具有增强作用的转录因子如SP、AP和CREB/CBP等可以与相应的结合位点结合，发挥转录增强效应，提高蛋白质的表达量。将含有该DNA片段的表达载体导入哺乳动物细胞，该DNA片段可以吸引大量的转录因子如SP、AP和CREB/CBP等，可以提高目的蛋白质的表达量3-50倍，从而达到提高蛋白质产量的目的。
Description
技术领域
本发明涉及一种在哺乳动物细胞内表达基因重组蛋白质的基因载体，尤其是能在哺乳动物细胞内高效率地表达基因重组蛋白质。
背景技术
自上世纪70年代基因工程技术诞生以来，基因表达技术已渗透到生命科学研究的各个领域。利用表达载体在哺乳动物细胞内表达目的基因是研究基因功能及其相互作用的重要手段, 而且是生物医药行业用来生产基因重组蛋白质药物和抗体药物的主要手段。哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体是包含原核序列、启动子、增强子、选择标记基因、终止子和多聚核苷酸信号等组分的DNA片断。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体导入哺乳动物细胞, 在一定的培养条件下哺乳动物细胞可表达生产并最终纯化获得所需的目的蛋白。哺乳动物细胞产生的蛋白质更接近于天然蛋白质，但其表达量低，产量还不高，难以满足大规模的实际应用。
发明内容
为了克服现有的哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体表达量低的不足，本发明提供一种哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体，该哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体不仅能象目前常用的哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体在哺乳动物细胞内表达出目的蛋白质，而且表达的效率远高于这些载体，其蛋白质产量是这些载体的3-50倍。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：在载体的启动子前插入一段长度为363碱基对的DNA序列，该DNA序列含有大量转录因子的结合位点，对转录具有增强作用的转录因子如SP、AP和CREB/CBP等可以与相应的结合位点结合，发挥转录增强效应，提高蛋白质的表达量。将含有该DNA片段的表达载体导入哺乳动物细胞，该DNA片段可以吸引大量的转录因子如SP、AP和CREB/CBP等，可以提高目的蛋白质的表达量3-50倍，从而达到提高蛋白质产量的目的。本发明的有益效果是，表达蛋白质的效率远高于目前常用的载体，目的蛋白质的表达量是这些载体的3-50倍，可以显著提高蛋白质的产量。
附图说明
下面结合附图对本发明进一步说明。
图1是本发明的质粒图。
图2是本发明用于插入启动子前长度为363碱基对的DNA片段序列。
图中1.新插入的长度为363碱基对的DNA片段，2.pCMV启动子，3.克隆位点，4.SV40 pA, 5.SV40 早期启动子，6. neomycin/kanamycin抗性基因，7. TK基因的聚腺嘌呤信号，8. pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制。
具体实施方式
在图1中，新插入的长度为363碱基对的DNA片段（1）含有大量转录因子的结合位点，对转录具有增强作用的转录因子如SP、AP和CREB/CBP等可以与相应的结合位点结合，与pCMV启动子（2）协同发挥转录增强效应，提高蛋白质的表达量。克隆位点（3）主要用于插入目标蛋白质的cDNA片段。SV40 pA（4）是真核基因的mRNA加工需要的多聚腺苷酸加尾信号。SV40早期启动子（5）、neomycin/kanamycin抗性基因（6）以及TK基因的聚腺嘌呤信号（7）组成Neo抗性盒，能应用G418筛选稳定转染的真核细胞株。此外，载体中的pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。
新插入的长度为363碱基对的DNA片段核甘酸序列
CCCGAACCCC CCTTTGAGGA AGACGCGGCG CAGTCCTGCT TCCACGACGG AGCCGGAAGG ACGCAAGGAC CGCGGCAGGG CGGAGTTTCT GCGTCCGGCG TCCGGGGGCG GGGCCGCGAC GGCGCATTGT GACGCGCCAG AGCTGAGCCG CCGGTTGGCC GGCTGGGCGC GGAGCAGAGC CGACACGGCT GGCGGGGGAG GCGGTGGAGG CGGTGGAGGC GGACAAGCGA GGACGTTTCT GGAGAGGAGA AGGGAGGGGA GGGGAGGGGA TAGGGGGAGG GGGAGGAGGA GGAGGGAGTG GAGCGGCGGG AAAGATCCCT CTGACTGCCC CTGAGGCCCT GGAGGAAGGA CACTGGTGAG CTC
Claims (2)
1.一种哺乳动物细胞蛋白质表达载体，其启动子前有一段含有转录因子SP、AP和CREB/CBP的结合位点的DNA片段，其特征是：该DNA片段的核苷酸序列为：
CCCGAACCCC CCTTTGAGGA AGACGCGGCG CAGTCCTGCT TCCACGACGG AGCCGGAAGG ACGCAAGGAC CGCGGCAGGG CGGAGTTTCT GCGTCCGGCG TCCGGGGGCG GGGCCGCGAC GGCGCATTGT GACGCGCCAG AGCTGAGCCG CCGGTTGGCC GGCTGGGCGC GGAGCAGAGC CGACACGGCT GGCGGGGGAG GCGGTGGAGG CGGTGGAGGC GGACAAGCGA GGACGTTTCT GGAGAGGAGA AGGGAGGGGA GGGGAGGGGA TAGGGGGAGG GGGAGGAGGA GGAGGGAGTG GAGCGGCGGG AAAGATCCCT CTGACTGCCC CTGAGGCCCT GGAGGAAGGA CACTGGTGAG CTC。
2. 根据权利要求1所述的高效哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体, 其特征是: 本发明采用的DNA片段，以５→3方向紧邻装配在pCMV启动子的上游。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| CN2011101259113A CN102787137A (zh) | 2011-05-16 | 2011-05-16 | 高效哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体 |
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| CN2011101259113A CN102787137A (zh) | 2011-05-16 | 2011-05-16 | 高效哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体 |
Publications (1)
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| CN102787137A true CN102787137A (zh) | 2012-11-21 |
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ID=47152727
Family Applications (1)
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| CN2011101259113A Pending CN102787137A (zh) | 2011-05-16 | 2011-05-16 | 高效哺乳动物细胞基因重组蛋白质表达载体 |
Country Status (1)
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|---|---|
| CN (1) | CN102787137A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020253400A1 (zh) * | 2019-06-21 | 2020-12-24 | 梦芊科技知识产权有限公司 | 一种通过增强子促进fgf-2在293t细胞中表达的方法 |
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2011
- 2011-05-16 CN CN2011101259113A patent/CN102787137A/zh active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2020253400A1 (zh) * | 2019-06-21 | 2020-12-24 | 梦芊科技知识产权有限公司 | 一种通过增强子促进fgf-2在293t细胞中表达的方法 |
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|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121121 |