CN102768136A - 含水蛭素的抗凝载玻片在制备检测骨髓液涂片中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了含有水蛭素的抗凝载玻片在制备用于检测骨髓液涂片方面的应用,所述抗凝载玻片它是由带有凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;其中所述凹面深度为0.01-0.30mm;所述水蛭素用量为含0.01mg-10mg,每1mg≥10000IU,纯度为93-98%。实验证明采用含水蛭素的抗凝载玻片检测骨髓液涂片,骨髓液在显微镜下观察细胞形态分布均匀,细胞形态结构完整,清晰便于观察、所致涂片无堆积现象,不影响背景染色效果。给临床上解决了重大课题,为减少患者痛苦带来了福音,促进了临床检验学的发展。
Description
技术领域
本发明属于医疗器械技术领域,特别是涉及含水蛭素的抗凝载玻片在制备待测体液涂片检测中的应用,更加优选的是含水蛭素的抗凝载玻片在制备检测骨髓液涂片中的用。
背景技术
近年来,随着医学科学的迅速发展,疾病的诊断越来越多的是依靠细胞形态的观察分析,例如骨髓液、关节炎液、胸腹水、脑脊髓液、血液的诊断,特别是骨髓液细胞形态的观察,它是疾病诊断的重要手段。
骨髓是机体重要造血器官,各种血液病常导致血细胞发生质与量的改变,对于白血病特别是非白血性白血病、再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、多发性骨髓瘤及特发性血小板性紫癜等的诊断有决定性意义。血液病治疗过程中,也常通过骨髓检查来评价疗效或判断预后。再例如助诊断某些代谢障碍性疾病 如高雪(Gaucher)氏病、尼曼-皮克(Niemann-pick)氏病是由于脂类代谢酶的遗传性缺陷,导致脂类在单核-巨噬细胞系统细胞内沉积的疾病,在骨髓涂片中找到其特殊细胞即可确定诊断。另外诊断原发性及继发性转移瘤 除骨髓原发性肿瘤外,某些癌特别是肺癌、骨癌、前列腺癌等常可转移到骨髓,故能在骨髓涂片中查到癌细胞。诊断某些原虫性传染病 骨髓富有单核-巨噬细胞系统,故能较多的捕捉病原体,查到黑热病原虫主要靠骨髓涂片。
骨髓涂片的制备是一项重要工作,绝对不可忽视,骨髓深片与血片基本相同,但因有骨髓小粒和脂肪滴,有核细胞较多,骨髓液离体后常因温度的改变,细胞外基质,高蛋白质和胶原的促凝,还要根据不同检测项目增加涂片数量,一般至少要6-10张,时间略长,即形成纤维状凝块,致使涂片过薄或过厚,细胞分布不均匀,重叠,凝聚影响染色观察分析。
传统骨髓涂片一般是采用不同的抗凝剂,如枸橼酸钠,EDTA等,均为化学抗凝剂,但它们易与细胞蛋白质结合,使之变化,干扰细胞蛋白质对染色液选择性吸附作用。抗凝剂极易形成结晶体影响检测。有时临床医生遇到患者特殊体质或某种病症等因素体液标本易凝固,为防止标本凝固,在没用统一认可的对策下,常采用加入肝素的方法作为抗凝剂使体液保持液态,但肝素易使细胞渗透压改变,致使细胞膨胀破裂,肝素液能改变细胞,尤其是红细胞ZETA电位,使红细胞聚集成团状,染色时又因肝素与染色液结合产生因光异色现象,可使细胞染色性发生变化,使染色背景呈淡蓝色。这些抗凝剂均影响细胞形态的观察分析。不合格的骨髓涂片,检验室无法出具准确的报告,这也是临床医生无法向患者交待的难题。有些特殊的骨髓检测还需抗凝的骨髓液0.3-0.5毫升,有的甚至需1-2毫升,给患者带来了很大的痛苦。因此干扰性的抗凝剂不能做到骨髓液分析的基本质量保证。
发明内容
本发明人通过大量的临床试验研究,成功的制备出了一种含水蛭素的抗凝载玻片,然后将待测骨髓液滴到含水蛭素的抗凝载玻片制成待测骨髓液涂片。本发明的骨髓液涂片检测观察骨髓液分布均匀,细胞形态结构完整,清晰便于观察、所致涂片无堆积现象,适合于各种染色更易于形态学观察(原有形态)各种血细胞玻片推片染色看片用,不影响血液细胞形态、血细胞染色,不影响背景染色效果。本发明的方法,在临床上解决了重大课题,减少了患者的痛苦,给患者带来福音,它的发明填补了医学领域的空白,促进了临床检验学的发展。
为实现上述目的,本发明公开了如下的技术内容:
含水蛭素载玻片在制备用于检测骨髓液涂片方面的应用,其中所述载玻片它是由带有凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;所述载玻片凹面深度为0.01-0.30mm;所述水蛭素用量为纯度93-98%水蛭素浓缩液0.01mg-10mg;待测骨髓液厚度为0.02-0.05mm。
其中纯度93-98%水蛭素浓缩液0.01mg-10m的用量优选为0.01mg-6mg;0.01mg-4mg ;0.01mg-2mg;0.01mg-1mg; 更加优选水蛭素的用量为0.01mg-0.5mg ;0.01mg-0.3mg。技术指标为1mg≥10000IU。此浓缩液生产完成即为液态,且无重金属,无菌,无杂质等特点。呈无色透明状。
本发明进一步公开了采用含水蛭素载玻片检测待测骨髓液涂片检的方法,按如下的步骤进行:
(1)将骨髓液滴在含水蛭素的抗凝载玻片,用推片混合均匀;
(2)然后吸出溶液滴在除油玻片上,用磨边片平稳地向前推进至除油玻片的另一端,玻片上便留下含水蛭素的待测骨髓液一薄层,厚度为0.02-0.05mm;
(3)图片制成后,在空气中挥动,使其迅速干燥,显微镜下观察细胞形态。
本发明同时也公开了含水蛭素的抗凝载玻片的制备方法:它是按如下的步骤进行:
(1)在十万级净化车间中,将边缘平齐、磨角无任何毛刺、薄厚均匀的凹面深度为0.01-0.30mm的载玻片进行除尘、除菌、除油处理;
(2)将纯度93-98%水蛭素浓缩液0.01mg-10mg喷涂在带凹面的载玻片上,制成含0.01mg-10mg的水蛭素抗凝载玻片;
(3)将载玻片保存在2-8℃冰箱内,用前恢复常温后使用。也就是说从冰箱中取出载玻片后,使用时应避免水雾出现。
本发明提到的经过除尘、除菌、除油处理的载玻片的处理方法如下:
1、浸泡与净化剂溶液中:备一缸水内有PH中性,无泡洗涤粉或液体去污剂。用量约5升水加入10—15克。水温35-45℃,不得超过60℃将玻片一个一个地放入缸中,可浸泡过液,不可用刷子刷洗。
2、在水中冲洗:用自来水冲洗每一块玻片,轻轻甩干然后浸于净化的水中达15分钟。
3、擦洗与干燥:用无绒毛的软巾擦净玻片,每次一块,将其分别置于一张滤纸上使其干燥,不得成堆,成叠,防止有水纹,划痕,发黄或有模糊斑迹的片子。
本发明提到的载玻片、除油玻片的消毒方法如下:
1、紫外线消毒:波长为2000—3000A°(2650—2660A°者杀菌最强)。240—280豪微米其中260的作用最强。
2、凹形玻片(凹在一侧)处理相同(或干燥法)。
本发明公开的水蛭素在制备用于检测待测骨髓液涂片方面的应用,除了可以检测骨髓液外,还可以采用此方法对关节炎液、胸腹水、脑脊髓液或血液进行检测,同样可以达到显微镜下观察细胞形态,多细胞染色无干扰的目的。
本发明公开的是将待测骨髓液滴在含有水蛭素的抗凝载玻片,在临床试验中根据具体的情况也可以将水蛭素喷涂在表面器皿上或能用于镜下的物体上,也可以制成含有水蛭素的抗凝材料,然后再将待测体液铺在含有水蛭素的抗凝材料上,其厚度为0.02-0.05mm。优选制成的厚度为0.02-0.03mm。这样也可以达到测定的效果。
关节液、胸腹水、脑脊髓液或血液也可以按照上述方法,取待测液体涂于抗凝载玻片上,利用水蛭素抗凝且不破坏细胞形态学和对血液无任何干扰的原理,观察细胞形态学。这使得临床检测人员可以更加灵活的调配相关体液的检测。能够更详细、多方位的探查患者的病情,更利于受条件影响无法抽取骨髓,但可以在脑脊髓液、血液、胸腹水、关节液等相对条件允许的部位抽取,用以判断病情的做法。而抽取这些相关体液的条件通常是在临时、紧急、大面积、危重病人等情况下尤为突出。同时一些偏远医院受医疗条件和人员素质的影响也无法抽取骨髓液。综上,利用现有条件抽取体液初步判断病情和抢救患者,只能是最可行方法。偏远医院或相对条件简陋的医院可以通过初步抽取脑脊髓液、血液、胸腹水、关节液等体液判断病情,做出是否转院,病情情况,患者的身体情况等综合评价,为及时治疗、抢救生命提供了更大的选择。
采用含水蛭素的抗凝载玻片制备骨髓液载涂片是一项重要的工作,绝对不可忽视。有时待测体液取材良好,但由于玻片的不清洁或推片技术不佳,而不能得到满意的涂片。如制备的骨髓液涂片太厚细胞重叠则无法辨认细胞的结构;涂片太薄,细胞过于分散,则影响检查速度和准确性,甚至漏诊或误诊。因此必须制备薄厚适宜、分布均匀的涂片是非常重要的。
下面是本发明采用的使用抗凝剂与未使用抗凝剂制备的骨髓液涂片的情况比较:
表1 抗凝剂使用情况与涂片结果比较
抗凝剂使用情况 | 涂片总数 | 合格涂片数 | 合格率(%) |
使用抗凝剂 | 2210 | 2144 | 97 |
未使用抗凝剂 | 2210 | 1591 | 72 |
骨髓细胞学检验的临床应用,主要有:
1.诊断造血系统疾病 骨髓是机体重要造血器官,各种血液病常导致血细胞发生质与量的改变,对于白血病特别是非白血性白血病、再生障碍性贫血、巨幼细胞性贫血、多发性骨髓瘤及特发性血小板性紫癜等的诊断有决定性意义。血液病治疗过程中,也常通过骨髓检查来评价疗效或判断预后。
2.帮助诊断某些代谢障碍性疾病 如高雪(Gaucher)氏病、尼曼-皮克(Niemann-pick)氏病是由于脂类代谢酶的遗传性缺陷,导致脂类在单核-巨噬细胞系统细胞内沉积的疾病,在骨髓涂片中找到其特殊细胞即可确定诊断。
3.诊断原发性及继发性转移瘤 除骨髓原发性肿瘤外,某些癌特别是肺癌、骨癌、前列腺癌等常可转移到骨髓,故能在骨髓涂片中查到癌细胞。
4.诊断某些原虫性传染病 骨髓富有单核-巨噬细胞系统,故能较多的捕捉病原体,查到黑热病原虫主要靠骨髓涂片。
5.做干细胞培养及染色体核型检查,以助诊断某些特殊类型的血液病。
本产品的优势:
本发明先后考察了制备体液涂片的厚度,抗凝物水蛭素的用量等因素,具体见如下的实验:
通过上述实验数据,充分说明了如果水蛭素抗凝剂量不足会出现:
(1)骨髓液轻微凝固,达不到预期抗凝效果,抗凝作用时间有限导致出现细胞分布容易分散。
(2)抗凝速度较慢,影响检验结果的准确性。
(3)染色观察容易出现偏差,造成误诊。
综上,抗凝剂量不正确起不到预先抗凝的效果,还会给检验人员造成假象,出现骨髓涂片处理不及时,延缓检测等问题。相较不使用传统抗凝剂更易造成误诊和临床检测失败。
通过上述实验数据,同时也充分说明了如果水蛭素抗凝剂量过大会出现:
(1)由于抗凝剂过多,干燥时间大幅延长,增加检测的时间。容易延误病人病情,不利于特殊情况下的抢救工作。
(2) 细胞分布容易受凝血时间过长及长时间暴露在空气中出现变质的问题。
(3)水蛭素生产成本较高,过多的抗凝剂添加造成此产品的价格昂贵,造成国家医保开支增大,不利于节能减排。
附图说明:
图1为抗凝载玻片;其中1为抗凝载玻片; 2为载玻片凹面;3为凹面中的抗凝剂;4为载玻片的磨砂边缘;5载玻片四边磨成的圆角;
图2为正常骨髓象(正常人骨髓形态);
图3为骨髓细胞极多(骨髓增生极度活跃,常见于各种类型白血病);
图4为骨髓细胞减少(骨髓增生减低,常见于慢性再生障碍贫血骨髓象);
图5为骨髓细胞极少(骨髓增生极度减低,常见于急性再生障碍性贫血骨髓象)。
具体实施方式:
下面结合实施例说明本发明,这里所述实施例的方案,不限制本发明,本领域的专业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化,所述的这些改进和变化都应视为在本发明的范围内,本发明的范围和实质由权利要求来限定。本发明所用到的纯度93-98%水蛭素浓缩液有市售。
实施例1
含水蛭素的抗凝载玻片,它是由带有凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;其中所述凹面深度为0.02mm;纯度98%水蛭素浓缩液用量为0.01mg,技术指标为1mg≥10000IU。制片时防止用手或其他物质接触载玻片,以防污染影响抗凝效果。
实施例2
含水蛭素的抗凝载玻片,它是由带有凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;其中所述凹面深度为0.050mm;纯度95%水蛭素浓缩液用量为0.03mg,技术指标为1mg≥10000IU。
实施例3
含水蛭素的抗凝载玻片,它是由带有凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;其中所述凹面深度为0.3mm;;纯度98%水蛭素浓缩液用量为0.05mg,技术指标为1mg≥10000IU。制片时防止用手或其他物质接触载玻片,以防污染影响抗凝效果。
实施例4
含水蛭素的抗凝载玻片,它是由带有凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;其中所述凹面深度为0.30mm;纯度98%水蛭素浓缩液用量为用量为含0.3mg。技术指标为1mg≥10000IU。
实施例5
一种采用含抗凝水蛭素载玻片制备待测骨髓液涂片的方法:
(1)在十万级净化车间中,将边缘平齐、磨角无任何毛刺、薄厚均匀的凹面深度为0.01-0.30mm的载玻片进行除尘、除菌、除油处理;将纯度93-98%水蛭素浓缩液0.3mg喷涂在带凹面的载玻片上,制成含0.3mg的水蛭素抗凝载玻片;将载玻片保存在2-8℃冰箱内,用前恢复常温后使用。也就是说从冰箱中取出载玻片后,使用时应避免水雾出现;
(2)然后将待测骨髓液滴在含水蛭素的抗凝载玻片上,混合均匀;
(3)吸出溶液滴在除油玻片上,用磨边片呈约37°角均匀、平稳地向前推进至除油玻片的另一端,玻片上便留下含水蛭素的待测体液一薄层,厚度为0.03mm;
(4)图片制成后,在空气中挥动,使其迅速干燥,显微镜下观察细胞形态。
实施例7
对比试验:
结论:
(1)肝素对染色有明显干扰,而用EDTA-K2抗凝剂,影响AML-M3。EDTA-K2抗凝血在室温和冷藏条件下1 h 内粒细胞及单核细胞浆中开始出现空泡,随时间延长空泡增多直至出现颗粒减少、核固缩、核溶解。日常工作中我们观察到严重感染时粒细胞及白血病原始细胞形态受影响更为明显,所以需要细致观察和鉴别,避免抗凝血涂片镜检出现的误差。
(2)含水蛭素的抗凝载玻片检测骨髓液观察到:骨髓液分布均匀,细胞形态结构完整,清晰便于观察、所致涂片无堆积现象,适合于各种染色更易于形态学观察(原有形态)各种血细胞玻片推片染色看片用,不影响血液细胞形态、血细胞染色,不影响背景染色效果。
Claims (2)
1. 含水蛭素载玻片在制备用于检测骨髓液涂片方面的应用,所述载玻片它是由带凹面的载玻片与喷涂在凹面中的水蛭素组成;其中所述载玻片凹面深度为0.01-0.30mm;所述水蛭素用量为纯度93-98%水蛭素浓缩液0.01mg-10mg;待测骨髓液厚度为0.02-0.05mm。
2.权利要求1所述的应用,其中待测骨髓液涂片检测的方法,按如下的步骤进行:
(1)将骨髓液滴在含水蛭素的载玻片上,混合均匀;
(2)然后吸出溶液滴在除油玻片上,用磨边片平稳地向前推进至除油玻片的另一端,玻片上便留下含水蛭素的待测骨髓液一薄层,厚度为0.02-0.05mm;
(3)图片制成后,在空气中挥动,使其迅速干燥,显微镜下观察细胞形态。
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