CN102764234A - 一种盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂及其制备方法，本发明将抗肿瘤药物盐酸拓扑替康包载入被亲水性聚合物聚乙二醇和靶向配基环RGD肽修饰的靶向长循环脂质体中，该脂质体能延长药物在体内的循环时间，达到肿瘤靶向，提高疗效，降低毒副反应。
Description
技术领域
本发明涉及靶向脂质体制剂，具体涉及含有盐酸拓扑替康的靶向脂质体及其制备方法。
背景技术
癌症严重威胁人类健康，肿瘤靶向长循环脂质体是提高化疗效果、降低抗肿瘤药物毒性的理想的药物输送系统，具有显著的临床意义和应用前景。它可通过靶向配基对肿瘤细胞的特异性识别机制，将药物载体导向肿瘤组织，使包载的抗癌药物浓集在癌变部位，提高化疗效果，降低细胞毒性药物对正常细胞组织的伤害。长循环脂质体表面的聚乙二醇能在脂质体表面形成一层水化膜，逃避网状内皮系统对脂质体的摄取，使脂质体在体循环中的时间延长，不仅能增加靶向配体识别和结合靶细胞的机会，还可借助肿瘤的EPR(enhanced permeability and retention)效应，造成肿瘤局部高药物浓度，逆转肿瘤细胞的多药耐药性。
整合素是介导细胞间，细胞与细胞外基质间相互作用的透膜蛋白，在细胞激活、迁移、增殖、存活和分化过程中起着极其重要的作用。其中整合素αvβ3在内皮细胞和成熟内皮细胞呈低水平表达，而高表达于肿瘤新生血管和肿瘤细胞表面，目前已经发现其高表达于骨肉瘤和侵入性肿瘤如晚期脑胶质瘤，乳腺癌、前列腺癌、恶性黑色素瘤和卵巢癌。故整合素αvβ3成为新的肿瘤治疗的重要靶标。整合素αvβ3能够和存在于细胞外基质蛋白如纤维蛋白、纤连蛋白、层黏连蛋白的RGD(Arg-Gly-Asp，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列特异性结合，在生理和病理过程中发挥着重要的作用。利用外源性的RGD肽竞争性结合肿瘤细胞表面的整合素，可达到肿瘤的靶向治疗。即RGD肽能介导药物靶向表达αvβ3整合素受体的肿瘤。
通过化学方法将RGD肽与脂质体共价结合，即在脂质体磷脂膜修饰多个RGD肽配体，形成的多价RGD结构有利于与靶细胞结合和内化，达到药物主动靶向肿瘤细胞的作用。但是，由于整合素不仅存在于肿瘤细胞中，在脾脏单核巨噬细胞也有表达，导致RGD肽容易被脾脏摄取，缩短体内消除时间，环RGD肽在体内消除半衰期仅为几分钟。因此，将RGD肽接枝到聚乙二醇远端的脂质体消除速率也很快。
因此，如何既使RGD肽能发挥肿瘤靶向作用，又使聚乙二醇发挥其体内长循环作用，是制备聚乙二醇和RGD肽双重修饰脂质体需要解决的关键问题。
发明内容
本发明旨在提供一种靶向长循环脂质体制剂及其制备方法，以克服现有技术存在的上述缺陷，满足临床应用的需要。
所述的靶向脂质体制剂，为盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂，由盐酸拓扑替康和脂质体组成，重量比为：
盐酸拓扑替康∶脂质体＝1∶5～1∶20；
优选为：盐酸拓扑替康∶脂质体＝1∶8～1∶16；
所述脂质体靶向配基、亲水性聚合物聚乙二醇(PEG)、马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)、磷脂和胆固醇各比例如下：
磷脂和胆固醇摩尔比为1∶1～10∶1；磷脂和MBPE摩尔比为200∶1～5∶1；磷脂和PEG摩尔比为100∶1～5∶1；MBPE和靶向配基摩尔比为10∶1～1∶1；
优选为：
磷脂和胆固醇摩尔比为1.2∶1～5∶1；磷脂和MBPE摩尔比为40∶1～10∶1；磷脂和PEG摩尔比为80∶1～8∶1；MBPE和靶向配基摩尔比为8∶1～2∶1。
所述亲水性聚合物聚乙二醇选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)或巯基化聚乙二醇(聚乙二醇单甲醚2000-琥珀酰基半胱氨酸，PEG-SC)；
所述的靶向配基选自含有巯基的RGD肽及其类似物，RGD肽是指含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的环肽和线性肽，如RGDwc或环RGD肽即c(RGDfc)；
所述的RGD肽，可采用文献[1]Nefzi A，Fenwick JE.N-terminus 4-Chloromethyl ThiazolePeptide as a Macrocyclization Tool in the Synthesis of Cyclic Peptides：Application to theSynthesis of Conformationally Constrained RGD-Containing Integrin Ligands.
[2]Liu SQ，Tian Q，Wang L，Hedrick JL，Hui JH，Yang YY，Ee PL.Injectable BiodegradablePoly(ethylene glycol)/RGD Peptide Hybrid Hydrogels for in vitro Chondrogenesis of HumanMesenchymal Stem Cells.报导的方法制备；
所述的环RGD肽，可以文献报导[3]Haubner，R.，et al.，Radiolabeled alpha(v)beta3integrinantagonists：a new class of tracers for tumor targeting或[4]Chen，X.，et al.Pharmacokinetics andtumor retention of 125I-labeled RGD peptide are improved by PEGylation.为基础进行制备；例如：采用固相合成的方法，以2-氯三苯甲基树脂和Fmoc保护的氨基酸(药甲基羰基-甘氨酸，茐甲基羰基-天冬氨酸β-叔丁基酯，茐甲基羰基-D-苯丙氨酸，N-芴甲氧羰酰基-2，2，4，6，7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰-L-精氨酸，芴甲氧羰基-S-三苯甲基-L-半胱氨酸)为原料，以HBTU/HOBt/DIEA为缩合剂，先将五个Fmoc保护的氨基酸通过接肽反应逐个接到树脂上，再脱去树脂得到直链五肽，通过DPPA/NaHCO3环合，经脱保护得到环五肽，用制备液相(RP-HPLC)分离提纯。
所述普通磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)或氢化大豆磷脂(HSPC)；
所述马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺的制备方法，以及有关的理化鉴别参数，在中国专利，申请号为：200810205017.5中有详细的报导；
巯基化聚乙二醇的制备方法，以及有关的理化鉴别参数，在中国专利申请号200810205019.4中有详细的报导；
所述二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000为德国Lipoid公司产品；
所述的盐酸拓扑替康靶向脂质体制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将普通磷脂、胆固醇和马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺与有机溶剂混合溶解，蒸发除去有机溶剂，加缓冲液水化，再用洗脱剂置换外水相，收集得到含马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺的空白脂质体；
所述的有机溶剂为三氯甲烷、二氯甲烷、水乙醇、乙醚或甲醇中的一种以上；
所述的用于水化的缓冲液选自浓度为0.125～0.250mol/L的硫酸铵溶液或pH为4.0的柠檬酸盐缓冲液；
所述的洗脱剂为缓冲液、葡萄糖溶液或氯化钠溶液，所述缓冲液选自磷酸缓冲液如pH7.4的PBS、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液或Tris缓冲液；氯化钠溶液如生理盐水；
(2)再将上述空白脂质体与盐酸拓扑替康粉末或其溶液混合、40℃～60℃孵育5min～1h，与靶向配基溶液混合、20℃～50℃孵育10min～1h，与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或巯基化聚乙二醇溶液混合、20℃～50℃孵育10min～1h，即得聚乙二醇和靶向配基修饰的盐酸拓扑替康脂质体；
所述的盐酸拓扑替康溶液为盐酸拓扑替康水溶液、盐酸拓扑替康缓冲液或盐酸拓扑替康氯化钠溶液，浓度为2mg/ml～15mg/ml；
靶向配基溶液为靶向配基水溶液、靶向配基缓冲液或靶向配基氯化钠溶液，浓度为0.1mg/ml～3mg/ml；
所述缓冲液选自磷酸缓冲液如pH7.4的PBS、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液或Tris缓冲液；氯化钠溶液如生理盐水；
发明人经过广泛深入的研究，意外地发现，利用功能性磷脂马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)将靶向配基环RGD肽与巯基化PEG共价结合在脂质体膜表面，构建靶向长循环脂质体，具有肿瘤细胞靶向性以及体内长循环作用。这种组装方式与文献常用的在脂质体膜表面PEG远端连接配体的方式相比，能够发挥PEG的长循环作用，并且更为简单易行，具有潜在的应用价值。且该法为后接枝PEG法，还可解决普通方法制备时脂质体膜内PEG链段占位效应使载药量降低的问题，即有望提高载药量。
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
具体实施方式
实施例1
称取氢化大豆卵磷脂HSPC 40mg(50μmol)、胆固醇9.7mg(25μmol)和马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)2.23mg(2.5μmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入0.200mol/L硫酸铵溶液4mL于60℃下水化1h，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再以0.9％NaCl溶液为洗脱剂，通过葡聚糖凝胶G-50置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液(2mg/mL)2mL混合，于65℃孵育20min，包载拓扑替康；再与环RGD肽溶液(1.45mg/mL)1mL(即2.5μmol)混合，于37℃孵育1h，再与DSPE-PEG2000溶液(7mg/mL)1mL(即2.5μmol)于37℃孵育1h；将上述脂质体用超滤管浓缩至4mL，即得PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
实施例2
称取大豆卵磷脂S10040mg(50μmol)、胆固醇19.3mg(50μmol)和MBPE2.23mg(2.5μmol)于茄形瓶中，加2mL二氯甲烷和8mL乙醇溶解后，旋转蒸发除去有机溶剂，加0.125mol/L硫酸铵溶液4mL于60℃下水化30min，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜15次挤压，再以0.9％NaCl溶液为洗脱剂，通过葡聚糖凝胶G-50置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与环RGD肽溶液(0.58mg/mL)0.5mL(即0.5μmol)混合，于37℃孵育1h，再与PEG-SC溶液(3.5mg/mL)1mL(即1.25μmol)于37℃孵育1h，再与盐酸拓扑替康溶液(2mg/mL)2mL混合后于60℃孵育20min，用超滤管浓缩至4mL，即得PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
实施例3
称取氢化大豆卵磷脂HSPC 40mg(50μmol)、胆固醇3.9mg(10μmol)和MBPE4.45mg(5μmol)于茄形瓶中，加8mL三氯甲烷和2mL甲醇溶解后，旋转蒸发除去有机溶剂，加0.150mol/L硫酸铵溶液4mL于60℃下水化30min，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜15次挤压，再以5％葡萄糖溶液为洗脱剂，透析置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与环RGD肽溶液(0.58mg/mL)0.5mL(即0.5μmol)混合，于37℃孵育1h，再与PEG-SC溶液(1.75mg/mL)1mL(即0.63μmol)于37℃孵育1h，再加入盐酸拓扑替康粉末4mg，而后于60℃孵育30min，用超滤管浓缩至4mL，即得PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
实施例4
称取DPPC 32mg(40μmol)、DSPC 8mg(10μmol)、胆固醇2mg(5μmol)和MBPE8.9mg(10μmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷溶解后，旋转蒸发除去有机溶剂，加0.250mol/L硫酸铵溶液4mL于60℃下水化1h，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜20次挤压，再以0.9％NaCl溶液为洗脱剂，通过葡聚糖凝胶G-50置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与环RGD肽溶液(1.45mg/mL)1mL(即2.5μmol)混合，于37℃孵育1h，再与PEG-SC溶液(5.6mg/mL)1mL(即2μmol)于37℃孵育1h，再与盐酸拓扑替康溶液(8mg/mL)0.5mL混合后于65℃孵育30min，用超滤管浓缩至4mL，即得PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
实施例5
称取氢化大豆卵磷脂HSPC 40mg(50μmol)、胆固醇16.1mg(41μmol)和MBPE1.1mg(1.2μmol)于茄形瓶中，加6ml二氯甲烷和4ml乙醚，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入pH4.0柠檬酸缓冲溶液4mL于60℃下水化30min，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再用5％葡萄糖溶液透析置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液(15mg/mL)1mL混合，于65℃孵育30min，包载拓扑替康；再与环RGD肽溶液(0.36mg/mL)1mL(即0.63μmol)混合，于37℃孵育1h，再与DSPE-PEG2000溶液(8.75mg/mL)2mL(即6.25μmol)于37℃孵育1h，即得PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
实施例6
称取蛋黄卵磷脂79mg(100μmol)、胆固醇13mg(33.3μmol)和MBPE 1mg(1.1μmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入0.200mol/L硫酸铵溶液6mL于60℃下水化1h，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再以0.9％NaCl溶液为洗脱剂，通过葡聚糖凝胶G-50置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液(3mg/mL)4mL混合，于65℃孵育20min，包载拓扑替康；再与环RGD肽溶液(0.1mg/mL)1mL(即0.16μmol)混合，于37℃孵育10min，再与DSPE-PEG2000溶液(2.8mg/mL)0.5mL(即0.5μmol)于37℃孵育30min，即得。
实施例7
称取蛋黄卵磷脂39mg(50μmol)、胆固醇6.5mg(16.7μmol)和MBPE 4.45mg(5μmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入0.150mol/L硫酸铵溶液4mL于60℃下水化1h，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再以5％葡萄糖凝溶液透析置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液(2mg/mL)2mL混合，于60℃孵育20min，包载拓扑替康；再与环RGD肽溶液(2.89mg/mL)1mL(即5μmol)混合，于37℃孵育1h，再与DSPE-PEG2000溶液(14mg/mL)2mL(即10μmol)于40℃孵育1h，即得。
实施例8
称取大豆卵磷脂S10039mg(50μmol)、胆固醇4.8mg(12.5μmol)和MBPE4.45mg(5μmol)于茄形瓶中，加三氯甲烷，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入0.125mol/L硫酸铵溶液4mL于60℃下水化1h，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再以5％葡萄糖凝溶液透析置换外水相，得到含MBPE的空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康溶液(2mg/mL)2mL混合，于60℃孵育10min；再与环RGD肽溶液(0.36mg/mL)1mL(即0.63μmol)混合，于37℃孵育30min，再与DSPE-PEG2000溶液(14mg/mL)1mL(即5μmol)于40℃孵育1h，用超滤管浓缩至4mL，即得PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
对比例1
称取氢化大豆磷脂HSPC 44.2mg(56μmol)、胆固醇14.7mg(38μmol)、PEG化磷脂(DSPE-PEG2000)14mg(5μmol)于茄形瓶中，加8mL三氯甲烷，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入0.200mol/L硫酸铵溶液2mL于60℃下水化30min，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再以pH7.4的PBS为洗脱剂，通过葡聚糖凝胶G-50置换外水相，得到空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康水溶液(4mg/mL)1mL混合，于60℃孵育1h，将上述脂质体用超滤管浓缩至2mL，即得盐酸拓扑替康PEG修饰脂质体。
对比例2
称取氢化大豆磷脂HSPC 44.2mg(56μmol)、胆固醇14.7mg(38μmol)于茄形瓶中，加6mL三氯甲烷，超声溶解，旋转蒸发除去有机溶剂，加入0.200mol/L硫酸铵溶液2mL于60℃下水化30min，超声分散，用薄膜挤出仪经400，200，100和50nm聚碳酸酯膜各15次挤压得到脂质体，再以pH7.4的PBS为洗脱剂，通过葡聚糖凝胶G-50置换外水相，得到空白脂质体；将所得空白脂质体与盐酸拓扑替康水溶液(4mg/mL)1mL混合，于60℃孵育1h，将上述脂质体用超滤管浓缩至2mL，即得盐酸拓扑替康普通脂质体。
实施例9
小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)体外摄取实验
MPM悬液的制备：取(20±2)g昆明小鼠若干，断颈处死，在无菌操作下，腹腔注射RPMI-1640培养液5ml，按压腹腔2min，吸出腹腔液，600rpm离心5min，弃上清液，用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液漂洗稀释至每毫升1×105备用。取上述MPM悬液1.0ml和制剂样品0.5ml，制剂样品分别为实施例1制备的PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体、对比例1制备的盐酸拓扑替康PEG修饰脂质体以及对比例2制备的盐酸拓扑替康普通脂质体。而后，于(37±0.5)℃水浴中培养30min，再在冰浴中终止吞噬，1000rpm离心5min，弃去上清液。用生理盐水洗涤，离心，弃去上清，得待测细胞样品。测定细胞样品中的盐酸拓扑替康的浓度，计算得MPM摄取的药物量，再与加入的药物总量相比，计算得出盐酸拓扑替康MPM摄取率。
结果表明，实施例1制备的PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体与对比例1制备的盐酸拓扑替康PEG修饰脂质体的MPM摄取率分别为20.41％±5.87％和18.62±4.52％，两者无显著差异(P＞0.05)，且均比对比例2制备的盐酸拓扑替康普通脂质体(MPM摄取率为34.9±4.59％)显著减少(P＜0.01)。说明PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体可减少巨噬细胞对脂质体的摄取，有长循环特性。
实施例10
实施例2～8制备的聚乙二醇和环RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体的小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)体外摄取实验
实验方法同实施例9。计算MPM摄取率，并与对比例1制备的盐酸拓扑替康PEG修饰脂质体以及对比例2制备的盐酸拓扑替康普通脂质体组相比，结果显示，实施例2～8制备的PEG和RGD肽修饰的盐酸拓扑替康脂质体的MPM摄取率为16.57～25.35％，均与PEG修饰脂质体组无显著差异(P＞0.05)，均比普通脂质体组显著减少(P＜0.05)，说明其可减少巨噬细胞对脂质体的摄取，有长循环特性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。
Claims (7)
1.一种被亲水性聚合物聚乙二醇(PEG)和靶向配基RGD肽修饰的盐酸拓扑替康靶向脂质体的组成，其特征在于：脂质体由RGD肽，亲水性聚合物聚乙二醇、功能性磷脂马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺(MBPE)、磷脂和胆固醇组成，磷脂和胆固醇摩尔比为1∶1～10∶1；磷脂和MBPE摩尔比为100∶1～5∶1；磷脂和PEG摩尔比为200∶1～5∶1；MBPE和RGD肽摩尔比为10∶1～1∶1；按重量计算，盐酸拓扑替康：脂质体为1∶5～1∶20。
2.一种如权利要求1所述的脂质体，其特征在于，脂质体中磷脂和胆固醇摩尔比为1.2∶1～5∶1；磷脂和MBPE摩尔比为40∶1～10∶1；磷脂和PEG摩尔比为80∶1～8∶1；MBPE和RGD肽摩尔比为8∶1～2∶1；按重量计算，盐酸拓扑替康：脂质体为1∶8～1∶16。
3.根据权利要求1或2所述的靶向脂质体，其特征在于，所述亲水性聚合物聚乙二醇选自二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)或巯基化聚乙二醇(聚乙二醇单甲醚2000-琥珀酰基半胱氨酸，PEG-SC)；
所述的靶向配基选自含有巯基的RGD肽及其类似物，RGD肽是指含有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸序列的环肽和线性肽，如RGDwc或环RGD肽即c(RGDfc)；
所述普通磷脂选自大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)或氢化大豆磷脂(HSPC)或其组合。
4.一种如权利要求1-3所述的盐酸拓扑替康脂质体的制备方法，其特征在于，它包括步骤：
(1)将普通磷脂、胆固醇和马来酰亚胺化磷脂酰乙醇胺等膜材与有机溶剂混合，旋转蒸发除去有机溶剂，加缓冲液水化，再用洗脱剂置换外水相，收集得到含MBPE的空白脂质体；
(2)再将上述空白脂质体与盐酸拓扑替康药物粉末或其溶液、靶向配基溶液、亲水性聚合物二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000或巯基化聚乙二醇溶液混合孵育，即得聚乙二醇和靶向配基修饰的盐酸拓扑替康脂质体。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的有机溶剂为三氯甲烷、二氯甲烷、无水乙醇、乙醚或甲醇中的一种以上；
所述的用于水化的缓冲液选自浓度为0.125～0.250mol/L的硫酸铵溶液或pH为4.0的柠檬酸盐缓冲液；硫酸铵溶液、pH4.0柠檬酸盐缓冲液等。
所述的洗脱剂为缓冲液、葡萄糖溶液或氯化钠溶液，所述缓冲液选自磷酸缓冲液如pH7.4的PBS、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液或Tris缓冲液；氯化钠溶液如生理盐水；
步骤(2)中，所述的盐酸拓扑替康溶液为盐酸拓扑替康水溶液、盐酸拓扑替康缓冲液或盐酸拓扑替康氯化钠溶液，浓度为2mg/ml～15mg/ml，孵育条件为40℃～60℃，5min～1h；
靶向配基溶液为靶向配基水溶液、靶向配基缓冲液或靶向配基氯化钠溶液，浓度为0.1mg/ml～3mg/ml，孵育条件为20℃～50℃，10min～1h；
所述缓冲液选自磷酸缓冲液如pH7.4的PBS、HEPES缓冲液、柠檬酸缓冲液或Tris缓冲液；氯化钠溶液如生理盐水。
6.一种如权利要求1～5所述的被亲水性聚合物聚乙二醇和靶向配基肽修饰的包载抗肿瘤药物的脂质体的用途，其特征在于，所述的脂质体制剂可用于制备治疗癌症的药物。
7.一种如权利要求1～5所述的被亲水性聚合物聚乙二醇和靶向配基修饰的盐酸拓扑替康脂质体，其特征在于，可用于治疗恶性肿瘤。
Priority Applications (1)
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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-
2012
- 2012-08-03 CN CN2012102752189A patent/CN102764234A/zh active Pending
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| PB01 | Publication | ||
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