CN102753202B - 水蛭提取物作为抗菌剂的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及水蛭唾液提取物作为抗菌剂在制备不同组合物，例如药物组合物、化妆品组合物或清洁产品中的用途。
Description
本发明涉及水蛭提取物的用途。
如今，抗药性细菌的感染成为越来越严重的公共卫生问题。许多细菌群对大多数当前可任意使用的抗生素治疗产生了耐药性。寻找新的抗菌剂以对抗耐药菌，尤其是在对抗医院交叉感染的框架中，已经成为真正的挑战。在美国，新抗菌剂的市场预计可达50亿美金。
迄今为止，在工业领域，细菌的消除用冗长、繁重而昂贵的步骤进行，例如清洁操作和大规模的消毒。但是，上述程序有时是不奏效的。而且，由于越来越多严格的标准，例如标准“REACH”或“BIOCIDES”开始启用，可用产品的数量大幅度地减少。例如，FDA最近限制了某些成分的使用，例如三氯生，它会产生严重的细菌耐药性。此外，大多数沿用至今的抗菌剂都不是天然的，并且由于消除这些抗菌剂非常困难会引起环境问题。
食物传染是另一个公共健康问题，它与如沙门氏菌(Salmonellae)、单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)、粪肠球菌(Enterococcusfecalis)或空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)的致病菌对食物的污染有关。食物传染不仅在发展中国家频繁发生，在发达国家的发生率也越来越高。
近年来，研究者们转向了基于新机制的新的生物源，随后发现了几种新的不会引起细菌耐药性的抗菌剂。
抗微生物肽(AMP)是一种天然的非致免疫的抗生素，它由具有特殊模式作用和活性的植物或动物产生。AMP广泛作用于细菌膜水平，并且不会产生耐药的细菌群。在市场存在的AMP中，举例说，重组菌丝霉素被用于抵抗革兰氏阳性菌，尤其是抗肺炎链球菌，一种被认为是对传统抗生素疗法具有耐药性的细菌。其他的AMPs，例如培西加南，正处于三期临床阶段。该化合物从两栖动物的滑爪蟾素(magainin)中获取，用于小脓疱疹和胃溃疡的治疗。其它可提及的化合物如来自猪protegrin的依色加南(isaganan)，用于治疗食道炎或胃溃疡，或来自人蛋白rBP123的Neuprex，或者还有来自indolicin的用于治疗使用导尿管所致感染的Ominagan。
将医水蛭类的水蛭作为药用的历史可追溯到18世纪的埃及王朝。在19世纪的法国，水蛭被用于治疗咽炎、眼疾、肥胖症和精神障碍。在治疗过程中，水蛭被直接放置于病人的腹部上。此后，利用水蛭的治疗没有被停止，直到上世纪50年代，如1948年，P.Durand、P.Viard和R.Vendel用水蛭治疗哮喘症。
如今，随着显微外科手术的发展，水蛭被广泛用于医院的整形或外伤手术，以解决由于静脉引流不充分而导致的许多问题。再植组织的存活率取决于静脉回流的效率。但是，由于缝合静脉远比缝合动脉困难，因此建立静脉回流非常困难。这样，一些外科医生考虑局部应用水蛭以解决该问题。经水蛭吸入，可刺激处于坏死危险中的回流组织。它们还有助于恢复在手术缝合技术上不可能实现的创面间的毛细血管匹配。
在2003年，德国研究者发现，通过在患者的膝部直接放置水蛭的水蛭治疗可帮助缓解膝部骨关节炎患者的症状(Michalsenetal，AnninternMed.2003；139：724-730)。
但是，水蛭治疗应用至今，利用活的有机体对于病人来说存在着潜在的感染风险，尤其是当有水蛭咬伤造成的伤口时。1983年，Whitlock等人(BrJPlastSurg1983；36：240-3)首次提出嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)可能引起皮下感染，这种嗜水气单胞菌是一种革兰阴性需氧菌，它是水蛭治疗的中间物。这种细菌存在于水蛭的肠道微生物丛，并且消化被水蛭带走的红血细胞。该细菌还与两种类型的肠胃炎有联系。第I类是类似于霍乱的疾病，会引起米汤痢疾。另一类疾病是引起充满血液和黏液的软条状粪便的痢疾性肠胃炎。
嗜水气单胞菌并不是水蛭中唯一存在的会引起感染的病原体。在水蛭的表面还能发现一小部分包括假单胞菌在内的革兰阴性杆状菌，以及少数厌氧菌。
在水蛭治疗前一般将水蛭在抗生素溶液中进行浸渍，然后用无菌水对其进行冲洗来对水蛭进行消毒。但是，这个方法并不是总能对水蛭进行有效消毒。它还会引起患者过敏或者影响水蛭的摄入量。
专利申请FR2834292报道了水蛭提取物作为抗凝血剂、抗炎剂或血栓溶解剂的应用。
专利申请FR2834293公开了从饿死的水蛭中制备的提取物作为抗麻醉剂、抗压剂或抗炎剂的应用。
专利申请FR2843883涉及具有由抗炎和/或抗牛皮癣剂活性的非刺激性水蛭提取物，其通过将均匀的粗提物在盐水中悬浮、温育并回收上清液得到。
简单地说，这些早期的专利申请仅公开了关于水蛭提取物具有抗炎剂和抗凝剂活性的信息，尤其是唾液提取物。
但是寻找一种新的、安全的天然抗菌剂，一方面不会引起细菌的耐药性，另一方面又没有关于活体手术的缺点，仍然是一种重要的需求。
近年来，在涉及关于骨关节炎的诊断工具发展的研究框架下，本发明的发明人惊讶地发现骨关节炎起源于细菌，同时发现水蛭提取物呈现出强抗菌能力。在先前的工作中，发明人在水蛭的中枢神经系统中发现了4种新的抗微生物肽。现在，发明人发现这些抗菌剂也存在于水蛭的唾液中。
本发明一方面涉及水蛭提取物在治疗细菌疾病中的应用。
根据本发明，水蛭提取物可以从整条水蛭以及水蛭任意部分的均质组织中获得，尤其是自其唾液腺获得，所述均质组织显示出抗菌活性。
本发明中应用的水蛭可以是任何吸血的水蛭，尤其是蚂蝗(Hirudinidea)，例如医水蛭(Hirudomedicinalis)、水蛭马鞭草(Hirudoverbena)、菲牛蛭(Hirudinariamallinensis)、马蛭(Haemopismarmorata)、北美巨蛭(Macrobdelladecora)。
在一个有利的实施方式中，水蛭提取物被用于治疗包括细菌引起的关节炎、病原菌所致食源性疾病或医院交叉感染在内的疾病。
根据本发明，细菌引起的关节炎包括骨关节炎、风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或脓毒性关节炎。
根据本发明，食源性疾病是由细菌存在引起的食物传染，例如空肠弯曲杆菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、粪肠球菌或其他用食后引起机体感染的微生物。
根据本发明，医院交叉感染指的是由于医院或保健服务机构的治疗导致的感染，但是其也跟患者本身的身体条件有关。如果感染在住院后的48小时或更久后或出院后的30天内发生首次发生，则被认为是医院交叉感染。这种感染也被称为医院获得性感染(或医疗保健关联性感染)。
经常地，医院交叉感染由革兰氏阳性细菌引起，例如金黄色葡萄球菌、抗甲氧西林金黄色葡萄球菌、难辨梭菌、抗万古霉素肠球菌，或由革兰氏阴性细菌引起，例如铜绿假单胞菌、鲍氏不动杆菌、军团病杆菌，分支杆菌。对于医院交叉感染，非限制性的例子有呼吸器相关性肺炎、医院交叉感染的肺结核、医院交叉感染的泌尿道感染、医院交叉感染的肺炎或医院交叉感染的胃肠炎。
在另一种有利的实施方式中，本申请的水蛭提取物被用于治疗由属于第II或第III类生物剂的细菌引起的疾病。
根据其所代表的增殖风险的重要性，生物剂被分为四大类。
第I类是不易引起人类疾病的生物剂。
第II类是能够引起人类疾病并且构成公众危险的生物剂，但是其引起的疾病并不会在公众中传播。通常已经有预防或者有效治疗这种疾病的方法。
第III类是能够引起人类疾病并且对公众构成严重危险的生物剂，所引起的疾病有在公众中传播的风险。但是，通常已经有预防或者有效治疗这种疾病的方法。
第IV类是引起人类疾病并且对公众构成严重危险的生物剂，所引起的疾病有在公众中传播的高风险。通常还没有任何预防或者有效治疗这种疾病的方法。
在更有利的实施方式中，第II或第III类生物剂的细菌选自鼠伤寒不动杆菌(Acinetobacterthyphimirium)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellathyphimirium)、粪产碱杆菌(Alcaligenesfaealis)、流感嗜血杆菌(Haemophillusinfluenzae)、斯瓦尼菌(Shewanella)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、绿浅气球菌(Aerococcusviridans)、藤黄微球菌(Microcuccusluteus)、腐生葡萄球菌(Staphylocuccussaprophyticus)。
本发明的另一方面涉及水蛭提取物作为清洁产品的应用。
在一个有利的实施方式中，所述清洁产品选自医院消毒剂或者一般家用消毒剂，例如窗户清洁剂、浴室清洁剂、厨房清洁剂、地板清洁剂、洗衣房清洁剂、清洗柔顺剂(cleaningsupply)、蔬果清洗剂和衣物柔顺剂。
本发明的另一方面涉及水蛭提取物作为化妆品组合物中抗菌剂的应用。
在一个有利的实施方式中，本发明所用的水蛭提取物为水蛭唾液提取物。根据本发明，唾液提取物指粗制唾液、纯化唾液或者任何只要显示抗菌活性的分离自唾液的物质。
水蛭唾液可以用任意常规方法提取，例如，Bligh.E.J.和Dyer.H.J.的方法(Biochem，physiol.37，911-917(1959))。
在一个更有利的实施方式中，本发明所用的水蛭提取物为纯化的水蛭提取物。
纯化的水蛭提取物可以用任意常规方法获得，例如通过下述方法：
-用常规方法提取大量的水蛭唾液，
-用任意常规方法对水蛭唾液进行灭菌，例如用紫外线，并且任选地
-用任意常规方法对水蛭唾液进行纯化，例如通过色谱法。
本发明的另一方面涉及包含水蛭唾液提取物的药物组合物，用于治疗细菌性疾病。
在一个更有利的实施方式中，该药物组合物用于治疗选自细菌引起的关节炎，例如骨关节炎、风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或脓毒性关节炎，或由于病原菌引起的食源性疾病或医院交叉感染。
在一个更有利的实施方式中，医院交叉感染是由选自(革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌)细菌或分支杆菌的细菌引起。
在另一个更有利的实施方式中，药物组合物用于抵抗第II或第III类细菌。
在一个特别有利的实施方式中，细菌选自鼠伤寒不动杆菌(Acinetobacterthyphimirium)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellathyphimirium)、粪产碱杆菌(Alcaligenesfaealis)、流感嗜血杆菌(Haemophillusinfluenzae)、斯瓦尼菌(Shewanella)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、绿浅气球菌(Aerococcusviridans)、藤黄微球菌(Microcuccusluteus)、腐生葡萄球菌(Staphylocuccussaprophyticus)、幽门螺旋杆菌(Helicobacterpyroli)。
根据本发明，药物组合物除了包括水蛭提取物外，还包括任意的其他活性物质，例如抗炎剂或其他抗菌剂。
该药物组合物中所含有的抗炎剂可以是所属领域技术人员已知的抗炎剂，例如合成或天然来源的甾体、非甾体抗炎剂，和例如从水蛭等植物或动物来源的抗炎肽类。
抗菌剂还可以是本领域已知的任意物质。
根据本发明，药物组合物也可以包含药学上可接受的载体、或希望的稀释剂、乳化剂、佐剂和赋形剂。
根据本发明，药物组合物可以通过局部途径给药、肠道途径给药或注射或输注的非肠道途径给药。
根据本发明，药物组合物可以制成液体形式，例如注射剂、喷雾剂，或固体形式，例如膏剂、贴剂、片剂、胶囊。
本发明的另一方面涉及含有水蛭唾液提取物的清洁产品。
在本发明一个有利的实施方式中，包含作为抗菌剂的水蛭唾液提取物的清洁产品选自医院消毒剂或者一般家用消毒剂，例如窗户清洁剂、浴室清洁剂、厨房清洁剂、地板清洁剂、洗衣去污剂、清洗用品、蔬果清洗剂、衣物柔顺剂。
所述清洁产品也可以包含任何常规的抗静电剂和表面活性剂。
本发明的另一个目的是一种治疗或预防选自骨关节炎、由致病菌引起的食源性疾病或医院交叉感染的方法，所述方法包括对所需患者给予水蛭提取物。
本发明通过以下实施例加以说明。
实施例
水蛭唾液粗提物抗微生物活性试验
将50μl水蛭唾液粗提物加入500μl指数生长期的不同细菌培养基中。测试的细菌在下表中列出。不同细菌溶液中的水蛭唾液粗提物的杀菌活性都在24小时内测试。在检测到活性的情况下，所有细菌都在24小时内被杀死。
革兰氏阴性细菌
革兰氏阳性菌
(++)检测到高活性；(+)检测到低活性。
Claims (21)
1.用于治疗细菌性疾病的水蛭唾液提取物，其中所述水蛭提取物是从选自蚂蝗(Hirudinidea)的水蛭类物种中提取获得。
2.如权利要求1所述的水蛭唾液提取物，其中所述水蛭提取物是从选自医水蛭(Hirudomedicinalis)、水蛭马鞭草(Hirudoverbena)、菲牛蛭(Hirudinariamallinensis)、马蛭(Haemopismarmorata)、北美巨蛭(Macrobdelladecora)的水蛭类物种中提取获得。
3.如权利要求1所述的水蛭唾液提取物，其中所述的细菌性疾病选自关节炎，包括骨关节炎、风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或脓毒性关节炎，由于病原菌引起的食源性疾病或医院交叉感染。
4.如权利要求3所述的水蛭唾液提取物，其中所述医院交叉传染是由细菌引起。
5.如权利要求4所述的水蛭唾液提取物，其中所述细菌是革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。
6.如权利要求4所述的水蛭唾液提取物，其中所述细菌是分支杆菌。
7.如权利要求1-6中任一所述的水蛭唾液提取物，其中所述的细菌为第二类和/或第三类细菌。
8.如权利要求7所述的水蛭唾液提取物，其中所述细菌选自鼠伤寒不动杆菌(Acinetobacterthyphimirium)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellathyphimirium)、粪产碱杆菌(Alcaligenesfaealis)、流感嗜血杆菌(Haemophillusinfluenzae)、斯瓦尼菌(Shewanella)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、绿浅气球菌(Aerococcusviridans)、藤黄微球菌(Microcuccusluteus)、腐生性葡萄球菌(Staphylocuccussaprophyticus)、幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori)。
9.如权利要求1所述的水蛭唾液提取物，其中所述水蛭唾液提取物是纯化的水蛭唾液提取物。
10.水蛭唾液提取物作为清洁产品的用途，所述清洁产品选自医院消毒剂，一般家用消毒剂和清洗用品，其中所述水蛭提取物是从选自蚂蝗(Hirudinidea)的水蛭类物种中提取获得。
11.如权利要求10的用途，其中所述水蛭提取物是从选自医水蛭(Hirudomedicinalis)、水蛭马鞭草(Hirudoverbena)、菲牛蛭(Hirudinariamallinensis)、马蛭(Haemopismarmorata)、北美巨蛭(Macrobdelladecora)的水蛭类物种中提取获得。
12.如权利要求10的用途，其中所述清洗用品是窗户清洁剂，浴室清洁剂，厨房清洁剂，地板清洁剂，洗衣去污剂和蔬果清洗剂。
13.水蛭唾液提取物作为抗菌剂在化妆品组合物中的用途，其中所述水蛭提取物是从选自蚂蝗(Hirudinidea)的水蛭类物种中提取获得。
14.如权利要求13的用途，其中所述水蛭提取物是从选自医水蛭(Hirudomedicinalis)、水蛭马鞭草(Hirudoverbena)、菲牛蛭(Hirudinariamallinensis)、马蛭(Haemopismarmorata)、北美巨蛭(Macrobdelladecora)的水蛭类物种中提取获得。
15.用于治疗细菌性疾病的包含水蛭唾液提取物的药物组合物，其中所述水蛭提取物是从选自蚂蝗(Hirudinidea)的水蛭类物种中提取获得。
16.如权利要求15所述的药物组合物，其中所述水蛭提取物是从选自医水蛭(Hirudomedicinalis)、水蛭马鞭草(Hirudoverbena)、菲牛蛭(Hirudinariamallinensis)、马蛭(Haemopismarmorata)、北美巨蛭(Macrobdelladecora)的水蛭类物种中提取获得。
17.如权利要求15所述的药物组合物，其中所述的细菌性疾病选自关节炎，包括骨关节炎、风湿性关节炎、牛皮癣关节炎或脓毒性关节炎，由于病原菌引起的食源性疾病或医院交叉感染。
18.如权利要求17所述的药物组合物，其中所述药物组合物可以通过局部途径给药、肠道途径给药或注射或输注的非肠道途径给药。
19.一种包含水蛭唾液提取物的清洁产品，该产品选自医院消毒剂，一般家用消毒剂和清洗用品，其中所述水蛭提取物是从选自蚂蝗(Hirudinidea)的水蛭类物种中提取获得。
20.如权利要求19的清洁产品，其中所述水蛭提取物是从选自医水蛭(Hirudomedicinalis)、水蛭马鞭草(Hirudoverbena)、菲牛蛭(Hirudinariamallinensis)、马蛭(Haemopismarmorata)、北美巨蛭(Macrobdelladecora)的水蛭类物种中提取获得。
21.如权利要求19的清洁产品，其中所述清洗用品是窗户清洁剂，浴室清洁剂，厨房清洁剂，地板清洁剂，洗衣去污剂和蔬果清洗剂。
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