CN102753168A - 用于治疗转移性骨病的色氨酸羟化酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及色氨酸羟化酶抑制剂，包含它们的组合物，以及它们用于治疗、管控、和/或防止转移性骨病的应用方法。

Description

用于治疗转移性骨病的色氨酸羟化酶抑制剂
技术领域
本发明涉及色氨酸羟化酶抑制剂，包含它们的组合物，以及它们用于治疗、管控、和/或防止转移性骨病的应用方法。
背景技术
神经递质血清素（5-羟色胺（5-HT））参与多个控制情绪的中枢神经方面，并参与调节睡眠、焦虑、酗酒、药物滥用、食物摄取和性行为。在外周组织中，血清素涉及调节血管紧张度、肠道运动性、初期止血、和细胞介导的免疫应答。Walther,D.J.等，Science 299:76(2003)。一些证据还表明，血清素可影响骨骼的生长。参见，例如Yadav,V.K.等，Cell 135:825-837(2008)。
血清素合成和代谢的失调与多种疾病相关。一个实例是类癌综合征，这是由类癌肿瘤过度释放激素引起的症状的集合。类癌肿瘤由肠嗜铬细胞发展而来，肠嗜铬细胞产生血清素、多巴胺、速激肽、以及对循环系统、胃肠道、和肺可具有深刻影响的其它物质。
在1960年代，研究者报道了化合物对氯苯丙氨酸（pCPA）在患者中减轻了类癌综合征的一些症状，但是它的施用伴随着不可接受的副作用。Cremata,V.Y.等，Clin.Pharmacol.Ther.7(6):768-76(1966)；Engelman,K.等，New Engl.J.Med.，277(21):1103-1108(1967)。该化合物是酶——色氨酸羟化酶（TPH）的抑制剂，色氨酸羟化酶催化血清素生物合成中的限速步骤。最近报道了被认为更适合药用的TPH抑制剂。参见，例如美国专利申请公布US-2007-0191370-A1、美国专利7,553,840。
血清素与癌症之间的联系并不限于类癌肿瘤。例如，据报道，血清素影响胆管癌的生长，胆管癌是胆源性癌症，它的治疗选择方案很少。Alpini,G.等，Cancer Res.,68(22):9184(2008)。据报道，与正常的胆管细胞相比，胆管癌细胞系表现出TPH1表达增加。参见同上。更重要的是，pCPA治疗胆管癌肿瘤的体内异种移植模型，抑制了肿瘤的生长。参见同上，9191页。
血清素和血清素信号还涉及神经内分泌（NE）癌例如类癌和胰腺内分泌肿瘤的生长。有趣的是，NE细胞还存在于前列腺组织，并且据报道影响前列腺癌的进展。参见，例如Dizeyi,N.等，The Prostate59:328-336(2004)。在这方面，NE分泌产物、包括血清素的增加与前列腺癌肿瘤的进展、雄激素非依赖性、和预后差有关。参见同上，329页。还报道了，5-HT1A和5-HT1B血清素受体激动剂影响过表达这些受体的前列腺癌细胞的生长。参见，例如同上，333页；Siddiqui,E.J.等，J.Urology 176:1648-1653(2006)。
前列腺癌是那些最有可能转移到骨的癌症之一。已经转移到骨的癌——称为“转移性骨病”——在乳腺癌和前列腺癌中因为这两种癌症的普遍性而具有特别的临床重要性。参见，例如Coleman,R.E.，Clinical Cancer Res.12:6243s(2006)；Barni,S.等，Annals Oncology17(supp.2):ii91-ii95(2006)。据报道，约70%死于这些癌症的患者表现出转移性骨病的尸检证据。Coleman，6243s页。不幸的是，用于治疗原发性癌的那些疗法往往损害骨骼健康。例如，前列腺癌的雄激素剥夺疗法和乳腺癌的芳香酶抑制剂疗法两者均与较高的骨质流失风险有关。Brown,S.A.和Guise,T.A.，Crit Rev Eukaryot Gene Expr.19(1):47-60，47(2009)。因此，非常需要治疗转移性骨病的新方法。
发明内容
本发明部分涉及用于治疗、管控、和/或防止转移性骨病的组合物和方法。
本发明的一个实施方式包括治疗、管控、或防止转移性骨病的方法，所述方法包括将治疗或预防有效量的色氨酸羟化酶（TPH）抑制剂施用于患者。具体的TPH抑制剂包括式I的化合物及其可药用的盐：
其中：A是任选取代的环烷基、芳基、或杂环；X是键（即A直接结合于D)、-O-、-S-、-C(O)-、-C(R4)=、=C(R4)-、-C(R3R4)-、-C(R4)=C(R4)-、-C≡C-、-N(R5)-、-N(R5)C(O)N(R5)-、-C(R3R4)N(R5)-、-N(R5)C(R3R4)-、-ONC(R3)-、-C(R3)NO-、-C(R3R4)O-、-OC(R3R4)-、-S(O2)-、-S(O2)N(R5)-、-N(R5)S(O2)-、-C(R3R4)S(O2)-、或-S(O2)C(R3R4)-；D是任选取代的芳基或杂环；R1是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R2是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R3是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基；R4是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基或芳基；各R5独立地是氢或任选取代的烷基或芳基；并且n是0-3。
另一个实施方式包括用于治疗转移性骨病的药物组合物。具体组合物包含与一种或多种其它药物组合的TPH抑制剂。其它药物包括那些典型用于治疗主癌（即向骨转移的癌）的药物。
详细说明
定义
除非另有说明，术语“烯基”表示具有2至20个（例如2至10个或2至6个）碳原子并含有至少一个碳-碳双键的直链、支链、和/或环状烃。代表性的烯基部分包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯基、2-丁烯基、异丁烯基（isobutylenyl）、1-戊烯基、2-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、1-庚烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、2-辛烯基、3-辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、2-癸烯基、和3-癸烯基。
除非另有说明，术语“烷基”表示具有1至20个（例如1至10个或1至4个）碳原子的直链、支链、和/或环状（“环烷基”）烃。具有1至4个碳的烷基部分被称为“低级烷基”。烷基基团的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、异己基、庚基、4,4-二甲基戊基、辛基、2,2,4-三甲基戊基、壬基、癸基、十一烷基、和十二烷基。环烷基部分可以是单环或多环，并且实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、和金刚烷基。烷基部分的其它实例具有直链、支链、和/或环状部分（例如1-乙基-4-甲基-环己基）。术语“烷基”包括饱和烃以及烯基和炔基部分。
除非另有说明，术语“烷氧基”表示–O–烷基基团。烷氧基基团的实例包括-OCH3、-OCH2CH3、-O(CH2)2CH3、-O(CH2)3CH3、-O(CH2)4CH3、和-O(CH2)5CH3。
除非另有说明，术语“烷基芳基”或“烷基-芳基”表示与芳基部分结合的烷基部分。
除非另有说明，术语“烷基杂芳基”或“烷基-杂芳基”表示与杂芳基部分结合的烷基部分。
除非另有说明，术语“烷基杂环”或“烷基-杂环”表示与杂环部分结合的烷基部分。
除非另有说明，术语“炔基”表示具有2至20个（例如2至20个或2至6个）碳原子并含有至少一个碳-碳叁键的直链、支链或环状烃。代表性的炔基部分包括乙炔基、丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-甲基-1-丁炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、5-己炔基、1-庚炔基、2-庚炔基、6-庚炔基、1-辛炔基、2-辛炔基、7-辛炔基、1-壬炔基、2-壬炔基、8-壬炔基、1-癸炔基、2-癸炔基、和9-癸炔基。
除非另有说明，术语“芳基”表示由碳和氢原子组成的芳香族环或者芳香族或部分芳香族的环系统。芳基部分可以包含多个结合或稠合在一起的环。芳基部分的实例包括蒽基、薁基、联苯、芴基、茚满、茚基、萘基、菲基、苯基、1,2,3,4-四氢-萘、和甲苯基。
除非另有说明，术语“芳基烷基”或“芳基-烷基”表示与烷基部分结合的芳基部分。
除非另有说明，术语“可生物水解的酰胺”、“可生物水解的酯”、“可生物水解的氨基甲酸酯”、“可生物水解的碳酸盐”、“可生物水解的脲基”、和“可生物水解的磷酸盐”分别表示化合物的酰胺、酯、氨基甲酸酯、碳酸盐、脲基、或磷酸盐或者：1)不干扰化合物的生物活性，但能赋予所述化合物有利的体内特性，例如吸收、持续作用、或开始作用；或者2)无生物活性，但在体内转变成具有生物活性的化合物。可生物水解的酯的实例包括低级烷基酯、烷氧基酰氧基酯、烷基酰基氨基烷基酯、和胆碱酯。可生物水解的酰胺的实例包括低级烷基酰胺、α-氨基酸酰胺、烷氧基酰基酰胺、和烷氨基烷基羰基酰胺。可生物水解的氨基甲酸酯的实例包括低级烷基胺、取代的乙二胺、氨基酸、羟烷基胺、杂环胺和杂芳胺、和聚醚胺
除非另有说明，术语“卤素”和“卤”包括氟、氯、溴、和碘。
除非另有说明，术语“杂烷基”是指其中至少有一个碳原子被杂原子（例如N、O、或S）代替的烷基部分（例如直链、支链、或环状）。
除非另有说明，术语“杂芳基”表示其中至少有一个碳原子被杂原子（例如N、O、或S）代替的芳基部分。实例包括吖啶基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并异噻唑基、苯并异噁唑基、苯并喹唑啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、呋喃基、咪唑基、吲哚基、异噻唑基、异噁唑基、噁二唑基、噁唑基、酞嗪基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基（pyrimidinyl）、嘧啶基（pyrimidyl）、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、四唑基、噻唑基、和三嗪基。
除非另有说明，术语“杂芳基烷基”或“杂芳基-烷基”表示与烷基部分结合的杂芳基部分。
除非另有说明，术语“杂环”是指由碳、氢、和至少一个杂原子（例如N、O、或S）组成的芳香族、部分芳香族、或非芳香族的单环或多环的环或环系统。杂环可以包含多个（即2个以上）稠合或结合在一起的环。杂环包括杂芳基。实例包括苯并[1,3]二氧杂环戊烯基、2,3-二氢-苯并[1,4]二氧杂环己烯基、噌啉基、呋喃基、乙内酰脲基、吗啉基、氧杂环丁基、环氧乙烷基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷酮基、吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢吡啶基、四氢嘧啶基、四氢噻吩基、四氢噻喃基、和戊内酰胺基。
除非另有说明，术语“杂环基烷基”或“杂环-烷基”是指与烷基部分结合的杂环部分。
除非另有说明，术语“杂环烷基”是指非芳香族杂环。
除非另有说明，术语“杂环烷基烷基”或“杂环烷基-烷基”是指与烷基部分结合的杂环烷基部分。
除非另有说明，术语“管控”包括防止特定疾病或病症或其一种或多种症状在已患有该疾病或病症的患者中复发，和/或延长已患有该疾病或病症的患者处于缓解状态的时间。该术语包括调节疾病或病症的阈值、发展和/或持续时间，或者改变患者对疾病或病症作出响应的方式。
除非另有说明，术语“可药用的盐”是指从可药用的无毒酸或碱包括有机酸和碱以及无机酸和碱制备的盐。适当的可药用的碱加成盐包括由铝、钙、锂、镁、钾、钠、和锌制成的金属盐或由赖氨酸、N,N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺（N-甲基葡糖胺）、和普鲁卡因制成的有机盐。适当的无毒酸包括无机和有机酸，例如乙酸、藻酸、邻氨基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙烯磺酸、甲酸、富马酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、硫酸、酒石酸、和对甲苯磺酸。具体的无毒酸包括盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸、和甲磺酸。因此，具体的盐的实例包括盐酸盐和甲磺酸盐。其它可药用的盐是本领域公知的。参见，例如《雷氏药物学》（Remington’s Pharmaceutical Sciences），第18版（Mack Publishing，Easton PA:1990）和《雷明顿：制药科学和实践》（Remington:The Science and Practice ofPharmacy），第19版（Mack Publishing，Easton PA:1995）。
除非另有说明，术语“强效TPH1抑制剂”是TPH1 IC50小于约10μM的化合物。
除非另有说明，术语“防止”意指在患者开始患上特定疾病或病症之前发生的抑制或降低所述疾病或病症或其一个或多个症状的严重性的行为。该术语包括预防。
除非另有说明，术语“前药”包括本文所公开化合物的可药用的酯、碳酸盐、硫代碳酸盐、N-酰基衍生物、N-酰氧基烷基衍生物、叔胺的季铵衍生物、N-Mannich碱、Schiff碱、氨基酸结合物、磷酸酯、金属盐和磺酸酯。前药的实例包括包含可生物水解部分（例如可生物水解的酰胺、可生物水解的氨基甲酸酯、可生物水解的碳酸盐、可生物水解的酯、可生物水解的磷酸盐、或可生物水解的酰脲类似物）的化合物。本领域普通技术人员很容易想象到并制备本文中公开的化合物的前药。参见，例如《前药设计》（Design of Prodrugs），Bundgaard,A编著，Elseview，1985；Bundgaard,H.，前药的设计和应用（Design andApplication of Prodrugs），《药物设计和开发教程》（A Textbook of Drug Design and Development），Krosgaard-Larsen和H.Bundgaard编著，1991，Chapter 5，p.113-191；以及Bundgaard,H.，《先进的药物递送综述》（Advanced Drug Delivery Review），1992,8,1-38。
除非另有说明，化合物的“预防有效量”是足以防止疾病或病症或与所述疾病或病症相关的一个或多个症状、或者防止其复发的量。化合物的预防有效量是治疗剂单独或与其它药剂组合在防止疾病中提供预防效益的量。术语“预防有效量”可包括改善整体预防或增强另一种预防剂的预防功效的量。
除非另有说明，术语“保护基团”在用于指受到化学反应的分子的一部分时，表示在所述化学反应的条件下无反应性但可以被去除以提供在那些条件下具有反应性的部分的化学部分。保护基团在本领域中是公知的。参见，例如Greene,T.W.和Wuts,P.G.M.，《有机合成中的保护基团》（Protective Groups in Organic Synthesis）（第三版，JohnWiley和Sons：1999）；Larock,R.C.，《有机转换全书》（Comprehensive Organic Transformations）（第二版，John Wiley和Sons：1999）。一些实例包括苯甲基、二苯甲基、三苯甲基、Cbz、Boc、Fmoc、甲氧羰基、乙氧羰基、和苯二酰亚氨基。
除非另有说明，术语“选择性THP1抑制剂”是TPH2_IC50比它的TPH1_IC50高至少约10倍的化合物。
除非另有说明，术语化合物的“立体异构富集组合物”是指提名化合物和它的立体异构体的混合物中含有的提名化合物比它的立体异构体多。例如，(S)-丁-2-醇的立体异构富集组合物包括(S)-丁-2-醇与(R)-丁-2-醇以例如约60/40、70/30、80/20、90/10、95/5、和98/2比率的混合物。
除非另有说明，术语“立体异构混合物”包括外消旋混合物以及立体异构富集混合物（例如R/S=30/70、35/65、40/60、45/55、55/45、60/40、65/35、和70/30）。
除非另有说明，术语“立体异构纯”表示包含化合物的一种立体异构体且基本上不含所述化合物的其它立体异构体的组合物。例如，具有一个立构中心的化合物的立体异构纯组合物基本上不含所述化合物的相反立体异构体。具有两个立构中心的化合物的立体异构纯组合物基本上不含所述化合物的其它立体异构体。典型的立体异构纯化合物包含大于约80重量%的所述化合物的一种立体异构体和小于约20重量%的所述化合物的其它立体异构体，大于约90重量%的所述化合物的一种立体异构体和小于约10重量%的所述化合物的其它立体异构体大于约95重量%的所述化合物的一种立体异构体和小于约5重量%的所述化合物的其它立体异构体，大于约97重量%的所述化合物的一种立体异构体和小于约3重量%的所述化合物的其它立体异构体，或者大于约99重量%的所述化合物的一种立体异构体和小于约1重量%的所述化合物的其它立体异构体。
除非另有说明，术语“取代的”在用于描述化学结构或部分时，是指所述结构或部分中一个或多个氢原子被原子、化学部分或官能团取代的衍生物，所述原子、化学部分或官能团例如但不限于醇、醛、烷氧基、烷酰氧基、烷氧羰基、烯基、烷基（例如甲基、乙基、丙基、叔丁基）、炔基、烷基羰氧基（-OC(O)烷基）、酰胺（-C(O)NH-烷基-或-烷基NHC(O)烷基）、脒基（-C(NH)NH-烷基或-C(NR)NH2）、胺（伯胺、仲胺、和叔胺，例如烷基氨基、芳基氨基、芳基烷基氨基）、芳酰基、芳基、芳氧基、偶氮、氨基甲酰基（-NHC(O)O-烷基-或–OC(O)NH-烷基）、甲氨酰基（例如CONH2，以及CONH-烷基、CONH-芳基、和CONH-芳基烷基）、羰基、羧基、羧酸、羧酸酐、羧酰氯、氰基、酯、环氧化物、醚（例如甲氧基、乙氧基）、胍基、卤素、卤代烷基（例如-CCl3、-CF3、-C(CF3)3）、杂烷基、半缩醛、亚胺（伯和仲亚胺）、异氰酸酯、异硫氰酸酯、酮、腈、硝基、氧（即用来提供氧代基团）、磷酸二酯、硫化物、磺酰胺基（例如SO2NH2）、砜、磺酰基（包括烷基磺酰基、芳基磺酰基、和芳基烷基磺酰基）、亚砜、硫醇（例如巯基、硫醚）、和脲（-NHCONH-烷基-）。
除非另有说明，化合物的“治疗有效量”是足以在治疗或管控疾病或病症中提供治疗效益或者使与疾病或病症相关的一个或多个症状延迟或最小化的量。化合物的治疗有效量是治疗剂单独或与其它疗法组合在治疗或管控疾病或病症中提供治疗效益的量。术语“治疗有效量”可包括改善整体治疗、减少或避免疾病或病症的症状或起因、或增强另一种治疗剂的治疗功效的量。
除非另有说明，术语“TPH1_IC50”是利用下文实施例所描述的体外抑制试验测定的化合物对TPH1的IC50。
除非另有说明，术语“TPH2_IC50”是利用下文实施例所描述的体外抑制试验测定的化合物对TPH2的IC50。
除非另有说明，术语“治疗”意指在患者患有特定疾病或病症时发生的降低所述疾病或病症或其一个或多个症状的严重性、或者推迟或减缓所述疾病或病症的进展的作用。
除非另有说明，术语“包括”具有与“包括”相同的含义并且术语“包括”具有与“包括但不限于”相同的含义。类似地，术语“例如”具有与“例如但不限于”相同的含义。
除非另有说明，紧接在一系列名词之前的一个或更多个形容词应被解释为适用于每个名词。例如，短语“任选取代的烷基、芳基、或杂芳基”具有与“任选取代的烷基、任选取代的芳基、或任选取代的杂芳基”相同的含义。
应说明的是，形成较大化合物的一部分的化学部分在本文中可以使用它作为单个分子存在时通常赋予它的名称或通常赋予它的基团的名称来描述它。例如，术语“吡啶”和“吡啶基”当被用于描述与其它化学部分连接的部分时，它们被赋予相同的含义。因此，“XOH，其中X是吡啶基”和“XOH，其中X是吡啶”这两个短语被赋予相同的含义，并包括化合物吡啶-2-醇、吡啶-3-醇、和吡啶-4-醇。
还应说明的是，如果结构或部分结构的立体化学没有用例如粗体或虚线指出，该结构或部分结构应应被解释为包括它的所有立体异构体。类似地，具有一个或多个手性中心而没有指定那些中心的立体化学的化合物的名称包括纯立体异构体及其混合物。此外，图中所示具有未满足的化合价的任何原子应被推定为连接了足够的氢原子以满足化合价。另外，如果化合价允许，用一条实线与一条虚线平行描绘的化学键包括单和双（例如芳香）键两者。本发明包括本文中公开的化合物的互变异构体和溶剂化物（例如水合物）。
化合物
本发明的方法和组合物利用TPH抑制剂，所述TPH抑制剂的实例被公开在2007年8月16日提交的美国专利申请no.11/638,677和2009年6月30日授权的美国专利no.7,553,840中。
具体的TPH抑制剂是式I的化合物及其可药用的盐：
Figure BDA00001996271500121
其中：A是任选取代的环烷基、芳基、或杂环；X是键、-O-、-S-、-C(O)-、-C(R4)=、=C(R4)-、-C(R3R4)-、-C(R4)=C(R4)-、-C≡C-、-N(R5)-、-N(R5)C(O)N(R5)-、-C(R3R4)N(R5)-、-N(R5)C(R3R4)-、-ONC(R3)-、-C(R3)NO-、-C(R3R4)O-、-OC(R3R4)-、-S(O2)-、-S(O2)N(R5)-、-N(R5)S(O2)-、-C(R3R4)S(O2)-、或-S(O2)C(R3R4)-；D是任选取代的芳基或杂环；R1是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R2是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R3是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基；R4是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基或芳基；各R5独立地是氢或任选取代的烷基或芳基；并且n是0-3。
具体的化合物是式I(A)的化合物：
本发明还包括式II的化合物及其可药用的盐：
Figure BDA00001996271500123
其中：A是任选取代的环烷基、芳基、或杂环；X是键、-O-、-S-、-C(O)-、-C(R4)=、=C(R4)-、-C(R3R4)-、-C(R4)=C(R4)-、-C≡C-、-N(R5)-、-N(R5)C(O)N(R5)-、-C(R3R4)N(R5)-、-N(R5)C(R3R4)-、-ONC(R3)-、-C(R3)NO-         、         -C(R3R4)O-      、-OC(R3R4)-、-S(O2)-、-S(O2)N(R5)-、-N(R5)S(O2)-、-C(R3R4)S(O2)-、或-S(O2)C(R3R4)-；D是任选取代的芳基或杂环；E是任选取代的芳基或杂环；R1是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R2是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R3是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基；R4是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基或芳基；R5是氢或任选取代的烷基或芳基；并且n是0-3。
具体的化合物是式II(A)的化合物：
Figure BDA00001996271500131
就本文中公开的化学式（例如I、I(A)、II和II(A)）来说，具体的化合物包括其中A是任选取代的环烷基（例如6元和5元）的那些化合物。在一些化合物中，A是任选取代的芳基（例如苯基或萘基）。在其它化合物中，A是任选取代的杂环（例如6元和5元）。6元杂环的实例包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、和三嗪。5元杂环的实例包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩、和呋喃。在一些化合物中，A是芳香族的。在其它化合物中，A不是芳香族的。在一些化合物中，A是任选取代的双环部分（例如吲哚、异吲哚、吡咯-吡啶、或亚萘基（napthylene））。
具体的化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500132
其中：各A1和A2独立地是单环的任选取代的环烷基、芳基、或杂环。该化学式所包涵的化合物包括其中A1和/或A2是任选取代的环烷基（例如6元和5元）的那些化合物。在一些化合物中，A1和/或A2是任选取代的芳基（例如苯基或萘基）。在其它化合物中，A1和/或A2是任选取代的杂环（例如6元和5元）。6元杂环的实例包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、和三嗪。5元杂环的实例包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩、和呋喃。在一些化合物中，A1和/或A2是芳香族的。在其它化合物中，A1和/或A2不是芳香族的。
就本文中公开的化学式来说，具体的化合物包括其中D是任选取代的芳基（例如苯基或萘基）的那些化合物。在其它化合物中，D是任选取代的杂环（例如6元和5元）。6元杂环的实例包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、和三嗪。5元杂环的实例包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩、和呋喃。在一些化合物中，D是芳香族的。在其它化合物中，D不是芳香族的。在一些化合物中，D是任选取代的双环部分（例如吲哚、异吲哚、吡咯-吡啶、或亚萘基）。
就本文中公开的各种化学式来说，具体的化合物包括其中E是任选取代的芳基（例如苯基或萘基）的那些化合物。在其它化合物中，E是任选取代的杂环（例如6元和5元）。6元杂环的实例包括吡啶、哒嗪、嘧啶、吡嗪、和三嗪。5元杂环的实例包括吡咯、咪唑、三唑、噻唑、噻吩、和呋喃。在一些化合物中，E是芳香族的。在其它化合物中，E不是芳香族的。在一些化合物中，E是任选取代的双环部分（例如吲哚、异吲哚、吡咯-吡啶、或亚萘基）。
就本文中公开的各种化学式来说，具体的化合物包括其中R1是氢或任选取代的烷基的那些化合物。
在一些化合物中，R2是氢或任选取代的烷基。
在一些化合物中，n是1或2。
在一些化合物中，X是键或S。在其它化合物中，X是-C(R4)=、=C(R4)-、-C(R3R4)-、-C(R4)=C(R4)-、或-C≡C-，并且，例如，R4独立地是氢或任选取代的烷基。在其它化合物中，X是-O-、-C(R3R4)O-、或-OC(R3R4)-，并且，例如，R3是氢或任选取代的烷基，以及R4是氢或任选取代的烷基。在一些化合物中，R3是氢并且R4是三氟甲基。在一些化合物中，X是-S(O2)-、-S(O2)N(R5)-、-N(R5)S(O2)-、-C(R3R4)S(O2)-、或-S(O2)C(R3R4)-，并且，例如，R3是氢或任选取代的烷基，R4是氢或任选取代的烷基，以及R5是氢或任选取代的烷基。在其它化合物中，X是-N(R5)-、-N(R5)C(O)N(R5)-、-C(R3R4)N(R5)-、或-N(R5)C(R3R4)-，并且，例如R3是氢或任选取代的烷基，R4是氢或任选取代的烷基，以及各R5独立地是氢或任选取代的烷基。
本发明的一些化合物由下式包涵：
Figure BDA00001996271500151
其中，例如R3是三氟甲基。其它化合物由下式包含：
Figure BDA00001996271500152
其中，例如R3是氢。
一些化合物由下式包涵：
Figure BDA00001996271500161
其中：各Z1、Z2、Z3、和Z4独立地是N或CR6；各R6独立地是氢、氰基、卤素、OR7、NR8R9、氨基、羟基、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R7独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R8独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R9独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且m是1-4。某些这样的化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500162
其它化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500163
其中，例如R3是三氟甲基。其它化合物是下式的化合物：
其中，例如R3是氢。
涉及上述各种化学式时，一些化合物是所有Z1、Z2、Z3、和Z4均为N的化合物。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3、和Z4中仅3个为N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3、和Z4中仅2个为N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3、和Z4中仅1个为N。在其它化合物中，Z1、Z2、Z3、和Z4中无一为N。
一些化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500172
其中：各Z'1、Z'2、和Z'3独立地是N、NH、S、O或CR6；各R6独立地是氨基、氰基、卤素、氢、OR7、SR7、NR8R9、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R7独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R8独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R9独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且p是1-3。某些这样的化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500173
其它化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500181
其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500182
其中，例如，R3是氢。
涉及上述各种化学式时，一些化合物是所有Z'1、Z'2、和Z'3均为N或NH的化合物。在其它化合物中，Z'1、Z'2、和Z'3中仅2个为N或NH。在其它化合物中，Z'1、Z'2、和Z'3中仅1个为N或NH。在其它化合物中，Z'1、Z'2、和Z'3中无一为N或NH。
一些化合物由下式包涵：
Figure BDA00001996271500183
其中：各Z"1、Z"2、Z"3、和Z"4独立地是N或CR10；各R10独立地是氨基、氰基、卤素、氢、OR11、SR11、NR12R13、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R11独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R12独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且各R13独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环。某些这样的化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500191
其它化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500192
其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500193
其中，例如，R3是氢。
涉及上述各种化学式时，一些化合物是所有Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4均为N的化合物。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中仅3个为N。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中仅2个为N。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中仅1个为N。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中无一为N。
一些化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500201
其中：各Z"1、Z"2、Z"3、和Z"4独立地是N或CR10；各R10独立地是氨基、氰基、卤素、氢、OR11、SR11、NR12R13、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R11独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R12独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且各R13独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环。某些这样的化合物是下式的化合物：
其它化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500203
其中，例如，R3是三氟甲基。其它化合物是下式的化合物：
其中，例如，R3是氢。
涉及上述各种化学式时，一些化合物是所有Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4均为N的化合物。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中仅3个为N。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中仅2个为N。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中仅1个为N。在其它化合物中，Z″1、Z″2、Z″3、和Z″4中无一为N。
一些是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500212
其取代基如本文中所定义的。
其它是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500213
其取代基如本文中所定义的。
其它是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500221
其取代基如本文中所定义的。
其它是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500222
其取代基如本文中所定义的。
涉及本文中公开的各种化学式时，具体的化合物包括这些化合物，其中A和E两者均为任选取代的苯基，并且，例如，X是-O-、-C(R3R4)O-、或-OC(R3R4)-，并且，例如，R3是氢以及R4是三氟甲基，并且，例如n是1。
本发明的具体化合物是式III的化合物：
Figure BDA00001996271500223
其中：A2是任选取代的杂环；R1是氢、C(O)RA、C(O)ORA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R2是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；R10是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；各R14独立地是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；RA是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；RB是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；RC是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且m是1-4。
一些化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500231
一些是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500232
其中：各R15独立地是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且n是1-3。
一些化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500233
其中：各R15独立地是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且p是1-4。
其它是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500241
其中：各R15独立地是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且q是1-2。
一些化合物是下式的化合物：
Figure BDA00001996271500242
其中：各R15独立地是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且q是1-2。
在式III的具体化合物中，A2是芳香族的。在其它化合物中，A2不是芳香族的。在一些化合物中，A2是任选被一个或多个卤素或低级烷基取代的。在一些化合物中，R14是氢或卤素。在一些化合物中，m是1。在一些化合物中，R10是氢或氨基。在一些化合物中，R1是氢或低级烷基。在其它化合物中，R1是C(O)ORA，并且RA是烷基。在一些化合物中，R2是氢或低级烷基。在一些化合物中，R15是氢或低级烷基（例如甲基）。在一些化合物中，n是1。在一些化合物中，p是1。
在一些化合物中，q是1。
本发明包括立体异构纯化合物和它们的立体异构富集组合物。立体异构体可以是不对称合成的，或者利用标准技术例如手性柱、手性拆分剂、或酶法拆分进行拆分。参见，例如Jacques,J.等，对映体、外消旋体、和拆分（Enantiomers,Racemates and Resolutions）（WileyInterscience，New York，1981）；Wilen,S.H.等，四面体（Tetrahedron）33:2725(1977)；Eliel,E.L.，碳化合物的立体化学（Stereochemistry ofCarbon Compounds）（McGraw Hill，NY，1962）；和Wilen,S.H.，拆分剂和光学拆分列表（Tables of Resolving Agents and OpticalResolutions），p.268（E.L.Eliel,Ed.，Univ.of Notre Dame Press，NotreDame，IN，1972）。
本发明的具体化合物是强效TPH1抑制剂。特定化合物的TPH1_IC50小于约10、5、2.5、1、0.75、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、或0.05μM。
具体化合物是选择性TPH1抑制剂。特定化合物的TPH1_IC50比它们的TPH2_IC50小约10、25、50、100、250、500、或1000倍。
当施用于哺乳动物（例如小鼠、大鼠、狗、猴子、或人类）时，本发明的某些化合物不容易穿过血脑屏障（例如血液中小于约5、2.5、2、1.5、1、0.5、或0.01%的化合物进入脑）。通过本领域已知的方法可以测定化合物能或不能穿过血脑屏障。参见，例如Riant,P.等，Journal of Neurochemistry 51:421-425(1988)；Kastin,A.J.，Akerstrom,V.，J.Pharmacol.Exp.Therapeutics 294:633-636(2000)；W.A.Banks,W.A.等，J.Pharmacol.Exp.Therapeutics 302:1062-1069(2002)。
化合物的合成
通过本领域已知的方法（参见，例如2007年8月16日提交的美国专利申请no.11/638,677；2009年6月30日授权的美国专利no.7,553,840）以及通过本文中描述的方法，可以制备本发明的化合物。
例如，参考式I，其中E是苯基并且D是任选取代的吡嗪、哒嗪、吡啶、或苯基的化合物通常可以通过路线1所示的方法进行制备：
Figure BDA00001996271500261
路线1
其中，例如：
其中X是–OCR3-的化合物通常可以使用路线2所示的方法进行制备，其中R3是CF3，并且D是嘧啶：
路线2
其中，例如A是任选取代的苯基、联苯、或萘基。
本发明的化合物也可以使用下面路线3所示的方法进行制备：
Figure BDA00001996271500281
路线3
其中P1是R1或保护基团；P2是保护基团；P3是OR2或保护基团；X'是例如O或N；Y1和Y3是卤素（例如Br、Cl）或合适的拟卤化物（例如三氟甲磺酸盐）；并且各R'独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环，或者与它们所连接的氧原子合在一起提供环状二氧杂环戊硼烷（例如4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷）。基团A、R1、R2、R3、R6和m如本文中别处所定义。Z"1、Z"2、Z"3、和Z"4部分也如本文中所定义，但是应知道，就上面所示的路线来说，它们中的一个与苯环连接。例如，Z"1和Z"4可以独立地是CR10（本文所定义的），同时，Z"2是N，并且Z"3是与相邻的苯环连接的碳原子。
可以用本领域已知的条件执行上面所示的各个反应。例如，适合于将含硼和卤素的部分Suzuki偶联的钯催化剂和条件是公知的，实例被提供在下文中。此外，保护基团的类型和合适的用途是公知的，它们的去除和用诸如但不限于氢的部分取代的方法也是如此（例如在酸性或碱性条件下水解）。
A部分可以是双环的（例如取代的联苯）。在这种情形下，可以如下所示制备含A的起始物料：
Figure BDA00001996271500291
其中Y2是卤素或拟卤素，并且各R独立地是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环，或者与它们所连接的氧原子合在一起提供环状二氧杂环戊硼烷（例如4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷）。
制备其中D是任选取代的嘧啶或三嗪的化合物的另一种方法如下面路线4所示：
Figure BDA00001996271500301
路线4
其中，例如，X是N、O、或S，并且FG定义如下：
当E是任选取代的苯基时，FG=B(OH)2；
当E是
Figure BDA00001996271500302
时，
Figure BDA00001996271500303
当E是
Figure BDA00001996271500304
时，FG=H。
可以用诸如下面在路线5中所示的方法容易地制备本发明的这些和其它化合物的酯衍生物，其中E是任选取代的苯基：
Figure BDA00001996271500311
路线5
制备基于三嗪的化合物的备选方法如下面路线6所示：
Figure BDA00001996271500312
路线6
环状部分D可以是容易掺入到本发明化合物中的多种结构的任一种。例如，其中D是噁唑的化合物可以如下面路线7所示制备：
Figure BDA00001996271500321
路线7
利用本领域已知的方法，很容易修改上面所示的合成方法来获得各种各样的化合物。例如，可以使用本领域已知的手性色谱法和其它技术来分离最终产物的立体异构体。参见，例如Jacques,J.等，对映体、 外消旋体、和拆分（Enantiomers,Racemates and Resolutions）（WileyInterscience，New York，1981）；Wilen,S.H.等，四面体（Tetrahedron）33:2725(1977)；Eliel,E.L.，碳化合物的立体化学（Stereochemistry of Carbon Compounds）（McGraw Hill，NY，1962）；和Wilen,S.H.，拆分剂和光学拆分列表（Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions），p.268（E.L.Eliel,Ed.，Univ.of Notre Dame Press，NotreDame，IN，1972）。此外，如上面的一些路线所示，合成可以利用手性起始物料来产生立体异构富集或纯的产物。
应用方法
本发明包括治疗、管控、和/或防止转移性骨病的方法，所述方法包含将治疗或预防有效量的TPH抑制剂施用于有需要的患者。可以转移至骨的癌的实例包括前列腺癌、乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、和肾癌。其它实例包括结肠癌和类癌肿瘤。在一个实施方式中，转移性骨病是骨硬化性（成骨细胞性）的。
在本发明的一个实施方式中，患者正在、已经、或将要接受放射疗法（例如质子束放射疗法）、高强度聚焦超声、或手术（例如乳房切除术、开胸手术、睾丸切除术）。
一个实施方式包含在同一时间或不同时间将治疗或预防有效量的第二种药物施用于患者。施用的途径可以相同或不同。具体的第二种药物是旨在治疗原发癌或肿瘤的那些药物。例如，在转移性前列腺癌的情况下，第二种药物可以是黄体化激素释放激素激动剂（例如亮丙瑞林、戈舍瑞林、布舍瑞林）；抗雄激素物质（例如氟他胺、尼鲁米特）；或肾上腺抑制剂（例如酮康唑、氨鲁米特）。第二种药物的其它实例包括米托蒽醌、雌莫司汀、多柔比星、依托泊苷、长春碱、紫杉醇、卡铂、和长春瑞滨。
防止转移性骨病的方法可以通过本领域技术人员可以容易地获得的诊断来制定。例如，升高的PSA水平、活检、和骨扫描可用于确定患者是否正患有未转移的癌（例如尚未转移至骨的前列腺癌）。防止转移性骨病的一种方法包括将TPH抑制剂施用于被诊断有前列腺癌的患者（例如具有高PSA水平的患者）。
药物组合物
本发明包括包含一种或多种本发明化合物的药物组合物。某些药物组合物是适合于口服、粘膜（例如鼻、舌下、阴道、颊、或直肠）、胃肠外（例如皮下、静脉内、推注、肌内、或动脉内）、或经皮施用于患者的单剂量剂型。剂型的实例包括但不限于：片剂；囊片；胶囊，例如软弹性明胶胶囊；扁囊剂；锭剂；菱锭；分散剂；栓剂；软膏剂；泥罨剂（泥敷剂）；糊剂；粉剂；敷剂；乳膏剂；药膏；溶液剂；贴剂；气溶胶（例如鼻喷雾剂或吸入剂）；凝胶剂；适合于口服或粘膜施用于患者的液体剂型，包括混悬剂（例如水性或非水性液体混悬剂、水包油乳剂、或油包水液体乳剂），溶液剂和酏剂；适合于胃肠外施用于患者的液体剂型；以及无菌固体（例如结晶固体或非晶质固体），所述固体可以通过复溶来提供适合于胃肠外施用于患者的液体剂型
制剂应适合于施用方式。例如，可以用肠溶衣来实现易于在胃中降解的化合物的口服施用。类似地，制剂可含有促进活性成分递送至作用部位的成分。例如，可以在脂质体制剂中施用化合物，从而保护它们避免酶降解、促进在循环系统中运输、以及实现它们递送过细胞膜。
类似地，可以借助于增溶剂、乳化剂、和表面活性剂将溶解性差的化合物掺入到液体剂型（和适合于复溶的剂型）中，所述增溶剂、乳化剂、和表面活性剂例如但不限于环糊精（例如α-环糊精、β-环糊精、
Figure BDA00001996271500341
和EncapsinTM（参见，例如Davis和Brewster，Nat.Rev.Drug Disc.3:1023-1034(2004)）、
Figure BDA00001996271500342
Figure BDA00001996271500343
Figure BDA00001996271500344
cremafor、和非水溶剂例如但不限于乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜（DMSO）、生物相容性油（例如棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油）、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、山梨醇酐的脂肪酸酯、及其混合物（例如DMSO:玉米油）。
还可以用本领域已知的其它技术将溶解性差的化合物掺入到混悬剂中。例如，可以将化合物的纳米粒子混悬在液体中，以提供纳米混悬剂（参见，例如Rabinow，Nature Rev.Drug Disc.3:785-796(2004)）。可以通过美国专利公布Nos.2004-0164194、2004-0195413、2004-0251332、2005-0042177 A1、2005-0031691 A1和美国专利Nos.5,145,684、5,510,118、5,518,187、5,534,270、5,543,133、5,662,883、5,665,331、5,718,388、5,718,919、5,834,025、5,862,999、6,431,478、6,742,734、6,745,962中描述的方法制备本文所描述的化合物的纳米粒子形式，所述各专利公布和专利通过参考以其全文结合于此。在一个实施方式中，纳米粒子形式包含平均粒度小于约2000nm、小于约1000nm、或小于约500nm的粒子。
剂型的组成、形状、和类型将典型地根据用途而异。例如，用于疾病的急性治疗的剂型在其包含的一种或多种活性成分上，可以比用于相同疾病的慢性治疗的剂型含有的量大。类似地，胃肠外剂型在其包含的一种或多种活性成分上，可以比用于治疗相同疾病的口服剂型含有的量少。如何解释这种差异对于本领域专业技术人员来说是显而易见的。参见，例如《雷氏药物学》（Remington’s PharmaceuticalSciences），第18版，Mack Publishing，Easton PA(1990)）。
口服剂型
适合于口服施用的本发明药物组合物可以作为分立的剂型提供，例如但不限于片剂（例如咀嚼片）、囊片、胶囊、和液体（例如调味糖浆）。这些剂型含有预定量的活性成分，并可以通过本领域专业技术人员公知的制药学方法进行制备。一般参见《雷氏药物学》（Remington’s Pharmaceutical Sciences），第18版，Mack Publishing，Easton PA:(1990)。
典型的口服剂型通过根据常规的制药调配技术将活性成分与至少一种赋形剂组合成紧密的混合物来制备。根据施用所需要的制剂形式，赋形剂可以采取各种各样的形式。
由于片剂和胶囊施用方便，因此它们代表了最有优势的口服单位剂型。如果需要，可以通过标准的水性技术或非水性技术对片剂进行包衣。这样的剂型可以通过制药学的常规方法制备。一般来说，通过将活性成分与液体载体、细粉固体载体或两者均匀并紧密地混合，然后在需要时将产品成形为所需要的外观来制备药物组合物和剂型。可以在固体剂型中掺入崩解剂以促进快速溶解。还可以掺入润滑剂以促进剂型（例如片剂）的制造。
胃肠外剂型
胃肠外剂型可以通过包括皮下、静脉内（包括推注）、肌内、和动脉内的各种途径施用于患者。由于它们的施用通常绕过了患者对污染物的天然防御，因此胃肠外剂型是特定无菌的或能够在施用于患者前进行灭菌。胃肠外剂型的实例包括注射即用溶液、准备溶解或混悬在可药用的注射介质的干燥产品、注射即用混悬剂、和乳剂。
可用于提供本发明胃肠外剂型的适当介质是本领域专业技术人员公知的。实例包括：USP注射用水；水性介质，例如氯化钠注射液、林格（Ringer’s）注射液、葡萄糖注射液、葡萄糖和氯化钠注射液、以及乳酸林格注射液；水能混溶的介质，例如乙醇、聚乙二醇、和聚丙二醇；以及非水性介质，例如玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯、和苯甲酸苄酯。
实施例
HPLC鉴定
在以下一些合成实施例中，提供了高效液相色谱法（HPLC）保留时间。除非另有说明，用于获得那些保留时间的各种条件如下所述：
方法A：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1% TFA；溶剂B=90% MeOH，10%水，0.1% TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=2ml/分钟；观测波长=220nm。
方法B：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1% TFA；溶剂B=90% MeOH，10%水，0.1% TFA；B%经4分钟从10至100%；流速=3ml/分钟；观测波长=220nm。
方法C：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1% TFA；溶剂B=90% MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经5分钟从0至100%；流速=2ml/分钟；观测波长=220nm。
方法D：Shim VP ODS 4.6x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=3ml/分钟；观测波长=220nm。
方法E：Shim VP ODS 4.6x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=3ml/分钟；观测波长=254nm。
方法F：YMC-PACK ODS-A 4.6x33mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=3ml/分钟；观测波长=220nm。
方法G：YMC-PACK ODS-A 4.6x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经2分钟从0至100%；流速=2.5ml/分钟；观测波长=220nm。
方法H：C184.6x20mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经2分钟从0至100%；流速=2ml/分钟；观测波长=220nm。
方法I：YMC PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1%TFA；溶剂B=90%MeOH，10%水，0.1%TFA；B%经4分钟从10至100%；流速=2ml/分钟；观测波长=220nm。
方法J：YMC Pack ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=H2O，0.1% TFA；溶剂B=MeOH，0.1% TFA；B%经4分钟从约10至约90%；流速=2ml/分钟；观测波长=220nm。
方法K：Sunfire C18 50mmx4.6mmx3.5μm；溶剂A=10mMNH4OAc水溶液；溶剂B=MeCN；B%经2分钟从10至95%；流速=4.5ml/分钟；观测波长=220nm。
方法L：Sunfire C18 50mmx4.6mmx3.5μm；溶剂A=10mMNH4OAc；溶剂B=MeCN；B%经0.8分钟从2至20%，然后经2分钟至95% B；流速=4.5ml/分钟；观测波长=220nm。
方法M：YMC-PACK ODS-A 4.6x33mm；溶剂A=90%水，10%MeOH，0.1% TFA；溶剂B=90% MeOH，10%水，0.1% TFA；B%经5分钟从0至100%；流速=2.5ml/分钟；观测波长=254nm。
方法N：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=H2O，0.1%TFA；溶剂B=MeOH，0.1%TFA；B%经4分钟从10至90%；流速=2ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法O：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH和0.1% TFA；溶剂B=90% MeOH，10%水和0.1% TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=2ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法P：ShimPack VP ODS 4.6x50mm；溶剂A=90%H2O，10%MeOH，1%TFA；溶剂B=10%H2O，90%MeOH，1%TFA；B%经2分钟从0至100%；流速=3.5ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法Q：Shim VP ODS 4.6x50mm；溶剂A=H2O和0.1%TFA；溶剂B=MeOH和0.1%TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=3ml/分钟；观测波长=254nm。
方法R：YMC Pack ODS-A 4.6x33mm；溶剂A=H2O，0.1%TFA；溶剂B=MeOH和0.1% TFA；B%经3分钟从10至90%；流速2ml/分钟；观测波长220和254nm。
方法S：YMC-Pack ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90% H2O，10%MeOH，1%TFA；溶剂B=10% H2O，90% MeOH，1%TFA；B%经4分钟从10至90%；流速=2ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法T：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=H2O，0.1%TFA；溶剂B=MeOH，0.1% TFA；B%经4分钟从10至90%；流速=2ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法U：YMC-PACK ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90%水，10%MeOH和0.1%TFA；溶剂B=90% MeOH，10%水和0.1%TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=2ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法V：ShimPack VP ODS 4.6x50mm；溶剂A=90% H2O，10%MeOH，1%TFA；溶剂B=10% H2O，90% MeOH，1%TFA；B%经2分钟从0至100%；流速=3.5ml/分钟；观测波长=220和254nm。
方法W：Shim VP ODS 4.6x50mm；溶剂A=H2O和0.1%TFA；溶剂B=MeOH和0.1% TFA；B%经4分钟从0至100%；流速=3ml/分钟；观测波长=254nm。
方法X：YMC Pack ODS-A 4.6x33mm；溶剂A=H2O，0.1%TFA；溶剂B=MeOH和0.1% TFA；B%经3分钟从10至90%；流速2ml/分钟；观测波长220和254nm。
方法Y：YMC-Pack ODS-A 3.0x50mm；溶剂A=90% H2O，10%MeOH，1% TFA；溶剂B=10%H2O，90%MeOH，1%TFA；B%经4分钟从10至90%；流速=2ml/分钟；观测波长=220和254nm。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500391
将2-氨基-4,6-二氯-[1,3,5]三嗪（200mg，1.21mmol）、(R)-(+)-1-(2-萘基)乙胺（207mg，1.21mmol）和二异丙基-乙胺（3.63mmol）的混合物溶解在150ml 1,4-二噁烷中。将溶液在90℃下回流3小时。在完成反应（通过LCMS监测）后，去除溶剂，并用CH2Cl2（100ml）和H2O（100ml）萃取反应混合物。将有机层分离，并用H2O（2x100ml）洗涤，在Na2SO4上干燥，并真空浓缩，得到中间体粗产物。将化合物粗产物溶解于在20ml微波反应管中的5ml MeCN和5ml H2O中。向该溶液中加入L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（253mg，1.21mmol）、碳酸钠（256mg，2.42mmol）、和催化量的二氯双(三苯基膦)-钯(II)（42.1mg，0.06mmol）中。将混合物密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌5分钟，然后通过硅藻土过滤。将滤液浓缩并溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA溶剂系统进行纯化。将合并的纯级分在真空下蒸发并在冷冻干燥器上进一步干燥，得到238mg 2-氨基-3-{4-[4-氨基-6-(1-萘-2-基)-乙氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基]-苯基}-丙酸（收率：46%，LC：柱子：YMC Pack ODS-A 3.0x50mm，%B=0~100%，梯度时间=4分钟，流速=2ml/分钟，波长=220，溶剂A=90:10水:MeOH w/0.1%TFA，溶剂B=90:10 MeOH:水w/0.1%TFA，RT=2.785分钟，MS:M+1=429）。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.65(d,3H),3.22-3.42(m,2H),4.3(m,1H),5.45(m,1H),7.4(m,1H),7.6(m 4H),7.8(m,4H),8.2(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基) 苯基)丙酸的别种合成
通过形成萘胺（1当量）、二氰化钠（sodium dicyanide）（0.95当量）的混合物，以及随后加入在n-BuOH:H2O（1:1）中的5N HCl（1当量），来制备(R)-1-(1-(萘-2-基)乙基)氰基胍。将混合物在密封管中在160℃下回流1天，并通过LCMS监测反应的进展。在完成反应后，在减压下去除溶剂（n-BuOH），并加入1N HCl将pH调整到3-5的范围。用EtOAc（2x100）萃取该水溶液，并将合并的有机相在Na2SO4上干燥。在真空中去除溶剂得到粗产物。通过ISCO柱色谱法使用EtOAc:己烷（7:3和1:1）作为溶剂系统将化合物纯化，以获得白色固体，对于1g至22.5g规模来说，收率为48-71%。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.5(d,3H),5.1(m,1H),7.5(m,4H),7.8(s,1H),7.9(m,2H)；LCMS:RT 1.69,M+1:239，收率：71%。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((4'-甲基联苯-4-基)甲氨基)-1,3,5-三嗪 -2-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500401
将2-氨基-4,6-二氯-[1,3,5]三嗪（100mg，0.606mmol）、4'-甲基-联苯-4-基-甲胺（142mg，0.606mmol）、和碳酸铯（394mg，1.21mmol）的混合物溶解于在5ml微波管中的1,4-二噁烷（1.5ml）和H2O（1.5ml）中。将混合物在微波反应器中在100℃下搅拌15分钟。去除溶剂，并将残余物溶解在CH2Cl2（20ml）中，用H2O（2x20ml）洗涤，在Na2SO4上干燥，然后真空去除。然后将中间体粗产物溶解于在5ml微波管中的1.5ml MeCN和1.5ml H2O中。向该溶液中加入L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（126mg，0.606mmol）、碳酸钠（128mg，1.21mmol）、和催化量的二氯双(三苯基膦)-钯(II)（21.1mg，0.03mmol）。将混合物密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌5分钟，然后通过硅藻土过滤。将滤液浓缩并溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA溶剂系统进行纯化。将合并的纯级分在真空下蒸发并在冷冻干燥器上进一步干燥，得到21.6mg 2-氨基-3-(4-{4-氨基-6-[(4’-甲基-联苯-4-基甲基)-氨基]-[1,3,5]三嗪-2-基}-苯基)-丙酸（LC：柱子：YMC Pack ODS-A 3.0x50mm，%B=0~100%，梯度时间=4分钟，流速=2ml/分钟，波长=220，溶剂A=90:10水:MeOH w/0.1%TFA，溶剂B=90:10MeOH:水w/0.1%TFA，RT=3.096分钟，MS:M+1=455）。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ2.33(s,3H),3.24-3.44(m,2H),4.38(m,1H),7.02(d,2H),7.42(m,2H),7.50-7.60(m,6H),8.22(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-吗啉基-6-(萘-2-基甲氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯基) 丙酸的合成
Figure BDA00001996271500411
将2,4-二氯-6-吗啉-4-基-[1,3,5]三嗪（121mg，0.516mmol）、C-萘-2-基-甲胺盐酸盐（100mg，0.516mmol）、碳酸铯（336mg，1.03mmol）的混合物溶解于5ml微波管中的1,4-二噁烷（1.5ml）和H2O（1.5ml）中。将混合物在微波反应器中在180℃下搅拌600秒。去除溶剂，并将残余物溶解在CH2Cl2（10ml）中，用H2O（2x100ml）洗涤，在Na2SO4上、然后在真空中干燥。通过制备型HPLC纯化残余物，得到20mg中间体（收率11%，M+1=356）。然后将该中间体溶解于2ml微波管中的0.5ml MeCN和0.5ml H2O中。向该溶液中加入L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（11.7mg，0.0562mmol）、碳酸钠（11.9mg，0.112mmol）、和催化量的二氯双(三苯基膦)-钯(II)（2.0mg，5%）。将混合物密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌5分钟，然后通过硅藻土过滤。将滤液浓缩并溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA溶剂系统进行纯化。将合并的纯级分在真空下蒸发并在冷冻干燥器上进一步干燥，得到17mg 2-氨基-3-(4-{4-吗啉-4-基-6-[(萘-2-基甲基)-氨基]-[1,3,5]三嗪-2-基}-苯基)-丙酸（收率：63%，LC：方法B，RT=3.108分钟，MS:M+1=486）。
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2,2,2-三氟-1-(2-(三氟甲基)苯基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500421
将四丁基氟化铵（0.1ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到2-三氟甲基-苯甲醛（1.74g，10mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（1.8ml，12mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将形成的混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将反应混合物用12ml 1N HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到2.2g 1-(2-三氟甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙醇，收率90%。
将NaH（80mg，60%，3.0mmol）加入到1-(2-三氟甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（244mg，1mmol）在10ml无水THF中的溶液中。将混合物搅拌20分钟，加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（164mg，1mmol），然后将反应混合物在70℃下加热1小时。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到267mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-三氟甲基苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺，收率71%。
在微波管中，4-氯-2-氨基-6-[1-(2-三氟甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶（33mg，0.1mmol），4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）和1ml乙腈，0.7ml水。向上述溶液中加入0.3ml 1N水性碳酸钠，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射法在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到5.6mg2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-三氟甲基苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.96(m,3H),7.80(d,J＝8.06Hz,1H),7.74(t,J＝7.91Hz 1H),7.63(t,J＝8.06Hz,1H),7.41(d,J＝8.3Hz,2H),7.21(m,1H),6.69(s,1H),3.87(m,1H),3.34(m,1H),3.08(m,1H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2,2,2-三氟-1-对甲苯基乙氧基)嘧啶-4- 基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500431
将四丁基氟化铵（0.1ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到4-甲基-苯甲醛（1.2g，10mmol）和TMSCF3（1.8ml，12mmol）在10mlTHF中的0℃溶液中。将形成的混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将反应混合物用12ml 1N HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到1.6g 1-(4-甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙醇，收率86%。
将NaH（80mg，60%，3.0mmol）加入到1-(4-甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（190mg，1mmol）在10ml无水THF中的溶液中。将混合物搅拌20分钟，加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（164mg，1mmol），然后将反应混合物在70℃下加热1小时。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到209mg 4-氯-6-[1-(4-甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-2-基胺，收率66%。
在微波管中装入4-氯-2-氨基-6-[1-(4-甲基苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶（33mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、和1ml乙腈、0.7ml水。将水性碳酸钠（0.3ml，1N）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到14.6mg 2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-甲基苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ7.94(d,J＝8.20Hz,2H),7.47(d,J＝7.24Hz,4H),7.27(d,J＝8.01Hz,2H)6.80(s,1H),6.75(m,1H),4.30(t,1H),3.21-3.44(m,2H),2.37(s,3H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-环己基-2，2，2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500441
将环己烷甲醛（0.9g，5mmol）溶解在10ml水性1,4-二噁烷中，向其中加入200mg（10mmol）硼氢化钠。在室温下过夜进行反应。在完成反应后，加入5ml 10% HCl溶液，并用乙酸乙酯萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.8g 1-环己基-2,2,2-三氟-乙醇，收率88%。
将NaH（80mg，60%，3.0mmol）加入到1-环己基-2,2,2-三氟-乙醇（182mg，1mmol）在10ml无水THF中的溶液中，将混合物搅拌20分钟，加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（164mg，1mmol），然后将反应混合物在70℃下加热1小时。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到202mg 4-氯-6-[1-环己基-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-2-基胺，收率65%。
在微波管中，将4-氯-2-氨基-6-[1-环己烷-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶（33mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、和1ml乙腈、0.7ml水、0.3ml水性碳酸钠（1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并通过制备型LC纯化产物，得到4.9mg2-氨基-3-{4-[2-氨基-6-(1-环己基-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3Cl)δ7.95(d,J＝8.39Hz,2H),7.49(d,J＝8.39Hz,2H),6.72(s,1H),5.90(m,1H),4.33(t,1H),3.21-3.44(m,2H),1.73-2.00(m,6H),1.23-1.39(m,5H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(6-(2-氟苯氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500451
将NaH（80mg，60%，3.0mmol）加入到含2-氟苯酚（112mg，1mmol）在10ml无水THF中的溶液中，将混合物搅拌20分钟，加入4,6-二氯-嘧啶（149mg，1mmol），然后将反应混合物在70℃下加热1小时。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到146mg 4-氯-6-(2-氟苯氧基)-嘧啶，收率65%。
在微波管（2ml)中装入4-氯-6-[2-氟苯氧基]-嘧啶（33mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、和1ml乙腈、0.7ml水，将0.3ml水性碳酸钠（1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC纯化产物，得到4.9mg 2-氨基-3-{4-[2-氨基-6-(1-2-氟苯基-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.74(s,1H),8.17(d,J＝8.06Hz,2H),7.63(s,1H),7.50(d,J＝8.06Hz,2H),7.30(m,5H),4.33(m,1H),3.34(m,1H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(4-(3-(4-氯苯基)哌啶-1-基)-1，3，5-三嗪-2-基)苯基) 丙酸的合成
Figure BDA00001996271500461
将3-(4-氯苯基)哌啶（232mg，1mmol）加入到2,4-二氯三嗪（149.97mg，1mmol）和300mg二异丙基乙胺在10ml THF中的0℃溶液中。将形成的混合物升温至室温，并搅拌1小时。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到328mg2-氯-4-[3-(4-氯苯基)-哌啶-1-基]-[1,3,5]三嗪。
在微波管中装入2-氯-4-[3-(4-氯苯基)-哌啶-1-基]-[1,3,5]三嗪（62mg，0.2mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（60mg，0.3mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。将水性碳酸钠（0.6ml；1M）加入到该溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到5.1mg2-氨基-3-(4-{4-[3-(4-氯苯基)-哌啶-1-基]-[1,3,5]三嗪-2-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3Cl)δ8.58(d,2H),8.05(d,2H),7.47(m,5H),4.96(m,1H),4.23(m,2H),3.21-3.44(m,4H),2.37(m,5H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-(2,2,2-三氟-1-苯基乙氧基)-1,3,5-三嗪 -2-基)苯基)丙酸的合成
将NaH（80mg，60%，3.0mmol）加入到2,2,2-三氟-1-苯基-乙醇（176mg，1mmol）在10ml无水1,4-二噁烷中的溶液中。将混合物搅拌20分钟，然后加入到2-氨基-4,6-二氯-三嗪（164mg，1mmol）在30ml 1,4-二噁烷中的0℃溶液中1小时。然后将反应混合物升温至室温。在完成反应后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到198mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-苯基-乙氧基]-[1,3,5]三嗪-2-基胺，收率65%。
在微波管中装入4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-苯基-乙氧基]-[1,3,5]三嗪-2-基胺（33mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。将水性碳酸钠（0.3ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后用制备型LC进行纯化，得到3.2mg 2-氨基-3-{4-[4-氨基-6-(1-苯基-2,2,2-三氟-乙氧基]-[1,3,5]三嗪-2基]-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.22(d,J＝8.20Hz,2H),7.52(m,2H),7.33(m,5H)6.62(m,1H),4.19(t,1H),3.1-3.33(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(5-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基) 吡啶-2-基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500481
在微波管中装入6-氯-N-[1-萘-2基-乙基]-[1,3,5]三嗪-2,4-二胺（30mg，0.1mmol）、2-boc保护的-氨基-3-{5-[4,4,5,5,-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶2-基-]-丙酸（50mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。将水性碳酸钠（0.3ml；1N）加入到该溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到7mg boc保护的2-氨基-3-{5-[4-氨基-6-(1-萘-2-基-乙氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基]-吡啶-2-基}丙酸。
将上述产物（7.0mg）溶解在0.1ml 10%TFA/DCM溶液中2小时，得到1.1mg 2-氨基-3-{3-[4-氨基-6-(1-萘-2-基-乙氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基]-吡啶-2-基}丙酸。1H NMR(300MHz,CD3Cl)δ9.35(d,1H),8.57(m,1H),7.85(m,4H),7.45(m,4H),6.94(s,1H),5.58(m,1H),4.72(m,2H),4.44(m,1H),1.42(d,3H)。
(S)-2-氨基-3-(3-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1，3，5-三嗪-2- 基)-1H-吡唑-1-基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500482
6-氯-N-[1-萘-2基-乙基]-[1,3,5]三嗪-2,4-二胺（30mg，0.1mmol）、2-boc-保护的氨基-3-{3-[4,4,5,5,-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡唑-1-基]-丙酸（50mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。将水性碳酸钠（0.3ml和1N）加入到微波管中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后用制备型LC进行纯化，得到6.8mg boc保护的2-氨基-3-{3-[4-氨基-6-(1-萘-2-基-乙氨基)[1,3,5]三嗪-2-基]-吡唑-1-基}丙酸。
将上述产物（6.8mg）在0.1ml 10%TFA/DCM溶液中搅拌2小时，得到3mg 2-氨基-3-{3-[4-氨基-6-(1-萘-2-基-乙氨基)-[1,3,5]三嗪-2-基]-吡唑-1-基}丙酸。1H NMR(300MHz,CD3Cl)δ8.52(s,1H),8.21(s,1H),7.74(m,4H),7.36(m,3H),5.35(m,1H),4.72(m,2H),4.44(m,1H),1.55(d,3H)。
(S)-2-氨基-3-(4'-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲氨基)联苯-4-基)丙 酸的合成
Figure BDA00001996271500491
将三乙酰氧基硼氢化钠（470mg，2.21mmol）加入到4-溴-苯胺（252mg，1.47mmol）和3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲醛（324mg，1.47mmol）在10ml 1,2-二氯乙烷（DCE）中的溶液中，加入0.5mlHOAc。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入15ml DCE。将有机相用水洗涤，并用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到656mg(4-溴-苯基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺粗产物。它无需进一步纯化就用于下一个步骤。
Emrys微波处理管（2-5ml）中装入(4-溴-苯基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺（84mg，0.22mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（46mg，0.22mmol）、和2ml乙腈。将水性碳酸钠（2ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC进行纯化，得到5mg 2-氨基-3-[4’-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲氨基)-联苯-4-基]-丙酸，收率5%。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.46(m,2H),1.62(m,4H),3.01(m,2H),3.64(s,3H),4.14(s,3H),4.66(m,1H),6.61(d,2H),6.81(s,2H),6.88(s,1H),7.18(d,2H),7.31(d,2H),7.44(d,2H),7.60(m,1H),8.19(s,3H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(6-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲氨基)嘧啶-4-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500501
将三乙酰氧基硼氢化钠（985mg，4.65mmol）加入到6-氯-嘧啶-4-基胺（200mg，1.55mmol）和3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲醛（682mg，3.1mmol）在25ml DCE中的溶液中。加入1ml HOAc，并将混合物在50℃下搅拌过夜，然后加入25ml DCE。用水洗涤有机相，并用柱子（硅胶，己烷:EtOAc 5:1）纯化产物，得到64mg（6-氯-嘧啶-4-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺，收率12%。
Emrys微波处理管（2-5ml）中装入(6-氯-嘧啶-4-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺（64mg，0.19mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（40mg，0.19mmol）、和2ml乙腈。将水性碳酸钠（2ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC进行纯化，得到5.3mg 2-氨基-3-{4-[6-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲氨基)-嘧啶-4-基]-苯基}-丙酸，收率6%。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.46(m,2H),1.62(m,4H),3.01(m,2H),3.08(m,2H),3.65(s,3H),4.20(m,1H),4.46(d,2H),4.68(m,1H),6.82(t,2H),6.87(d,2H),7.40(d,2H),7.90(s,2H),8.25(s,2H),8.6(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(6-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲氨基)吡嗪-2-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500511
将三乙酰氧基硼氢化钠（1315mg，6.2mmol）加入到6-氯-吡嗪-2-基-胺（400mg，3.10mmol）和3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲醛（818mg，3.7mmol）在50ml DCE中的溶液中，加入1ml HOAc，并将混合物在50℃下搅拌过夜，然后再加入50ml DCE。用水洗涤有机相，并用柱子（硅胶，己烷:EtOAc 6:1）纯化产物，得到50mg（6-氯-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺，收率10%。
Emrys微波处理管（2-5ml）中装入(6-氯-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺（50mg，0.15mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、和2ml乙腈。将水性碳酸钠（2ml，1M）加入到该溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC纯化产物，得到5.5mg 2-氨基-3-{4-[6-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲氨基)-吡嗪-2-基]-苯基}-丙酸，收率6%。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.46(m,2H),1.62(m,4H),3.01(m,2H),3.08(m,2H),3.65(s,3H),4.0(m,1H),4.45(d,2H),4.65(m,1H),6.90(s,2H),6.95(s,1H),7.32(d,2H),7.60(t,1H),7.90(s,1H),7.95(d,2H),8.25(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-((4'-甲基联苯-2-基)甲氨基)吡嗪-2-基)苯基)丙 酸的合成
Figure BDA00001996271500521
将三乙酰氧基硼氢化钠（215mg，1.02mmol）加入到4'-甲基-联苯-2-甲醛和5-溴-吡嗪-2-基胺在5ml DCE中的溶液中，加入0.1mlHOAc，并将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入5ml DCE。将有机相用水洗涤，并用柱子（硅胶，己烷:EtOAc 6:1）进行纯化，得到100mg（5-溴-吡嗪-2-基)-(4'-甲基-联苯-2-基甲基)-胺，收率55%。
Emrys微波处理管（2-5ml）中装入(5-溴-吡嗪-2-基)-(4'-甲基-联苯-2-基甲基)-胺（25mg，0.071mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（22mg，0.11mmol）、和1ml乙腈。将水性碳酸钠（1ml，1M）加入到该溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC纯化产物，得到19mg 2-氨基-3-{4-[6-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲氨基)-吡嗪-2-基]-苯基}-丙酸，收率63%。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ2.22(s,3H),3.09(m,1H),3.25(m,1H),4.18(t,1H),4.40(s,2H),7.07(d,2H),7.14(m,3H),7.24(m,4H),7.36(m,1H),7.72(d,2H),7.84(s,1H),8.20(d,1H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(2,2,2-三氟-1-苯基乙氧基)-嘧啶-4-基)苯基)丙 酸的合成
Figure BDA00001996271500531
将NaH（60%，120mg，3.0mmol）加入到2,2,2-三氟-1-苯基-乙醇（350mg，2.03mmol）在5ml THF中的溶液中。将混合物在室温下搅拌20分钟。加入4,6-二氯-嘧啶（300mg，2.03mmol），然后将反应混合物在70℃下加热1小时。在冷却后，蒸发THF得到残余物，将残余物溶解在15ml EtOAc中，然后用水洗涤，并用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到550mg 4-氯-6-(2,2,2-三氟-1-苯基-乙氧基)-嘧啶，收率95%。
Emrys微波处理管（2-5ml）中装入4-氯-6-(2,2,2-三氟-1-苯基-乙氧基)-嘧啶（30mg，0.11mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（32mg，0.16mmol）、1ml乙腈、和0.6ml水。将水性碳酸钠（0.42ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入10mol% POPd2（二氢二-μ-氯二氯双(二叔丁基羟亚膦基-κP)二钯（dihydrogendi-μ-chlorodichlorobis(di-tert-butylphosphinito-κP)dipalladate）。将反应容器密封，并通过微波加热至120℃，持续30分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC纯化产物，得到4.8mg 2-氨基-3-{4-[6-(2,2,2-三氟-1苯基-乙氧基)-嘧啶-4-基]-苯基}-丙酸，收率11%。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ3.20(m,1H),3.40(m,1H),4.25(t,1H),6.82(dd,1H),7.43(m,5H),7.57(s,1H),7.60(m,2H),8.10(d,2H),8.75(s,1H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(6-(1-(3,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500541
将含四丁基氟化铵（TBAF:0.1ml，1M）的THF加入到3,4-二氟-苯甲醛（1.42g，10mmol）和(三氟甲基)三甲基硅烷（1.70g，12mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。将反应混合物用12ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用二氯甲烷（3x20ml）萃取产物，将有机层合并并通过硅胶垫。蒸发有机溶剂，得到1.9g1-(3,4-二氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇，收率90%。
将NaH（80mg，60%，3.0mmol）加入到1-(3,4-二氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（212mg，1mmol）在5ml THF中的溶液中，将混合物在室温下搅拌20分钟。加入4,6-二氯-嘧啶（149mg，1mmol），然后将反应混合物在70℃下加热1小时。在冷却后，蒸发THF。将残余物溶解在15ml EtOAc中，然后用水洗涤，用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到230mg 4-氯-6-[1-(3,4-二氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶，收率70%。
Emrys微波处理管（2-5ml）中装入4-氯-6-[1-(3,4-二氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶（33mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。将水性碳酸钠（0.3ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后用制备型LC进行纯化，得到10mg 2-氨基-3-(4-{6-[1-(3,4-二氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-吡啶-4-基}-苯基)-丙酸，收率21%。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ3.11(m,1H),3.27(m,1H),4.19(dd,1H),6.78(q,1H),7.26(m,2H),7.35(d,3H),7.49(m,2H),8.02(d,2H),8.66(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲氨基)-吡嗪-2-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500551
将3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲醛（417mg，1.895mmol）、2-氨基-5-溴吡嗪（300mg，1.724mmol）、三乙酰氧基硼氢化钠（1.5当量）、和冰醋酸（3当量）在二氯甲烷（10ml）中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用水洗涤。将有机层用MgSO4干燥并过滤。浓缩滤液以提供粗产物，通过ISCO（SiO2快速柱色谱法）（己烷/乙酸乙酯=100/0至3/2）纯化所述粗产物，得到约400mg 6-溴-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺。收率：61%。
向5ml微波管中加入上述6-溴-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺（50mg，0.132mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（30mg，0.144mmol）、Na2CO3（31mg，0.288mmol）、乙腈（2ml）、和水（2ml）。加入二氯双(三苯基膦)-钯（5mg，0.007mmol）。将管盖上盖子，并在微波辐射下在150℃搅拌5分钟。将反应混合物冷却，通过注射式滤器过滤，然后通过反相制备型HPLC使用YMC-Pack ODS100x30mm ID柱（MeOH/H2O/TFA溶剂系统）进行分离。将纯级分真空浓缩。然后将产物悬浮在5ml水中、冷冻、并低压冻干，得到作为三氟盐的标题化合物（12mg，20%）。1H NMR(CD3OD)δ8.41(s,1H),7.99(s,1H),7.83(d,J=9.0Hz,2H),7.37(d,J=6.0Hz,2H),6.90-6.95(m,3H),4.78(m,1H),4.50(s,2H),4.22-4.26(m,1H),3.79(s,3H),3.12-3.39(m,2H),1.80-1.81(m,6H),1.60(m,2H)。M+1=463。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-((3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲基)-(甲基)氨基) 吡嗪-2-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500561
向(6-溴-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-胺（70mg，0.185mmol）的乙腈（10ml）溶液中加入甲醛（18.5mmol）和氰基硼氢化钠（17mg，0.278mmol）。然后滴加水性浓HCl，直至pH≈2。将混合物在室温下搅拌约6小时。然后将它用乙酸乙酯稀释，用水（3X5ml）洗涤，用MgSO4干燥。真空去除溶剂，得到70mg粗产物5-(溴-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-甲基-胺（95%粗收率），其无需进一步纯化就用于下一个步骤。
让5-(溴-吡嗪-2-基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲基)-甲基-胺（37mg，0.094mmol）接受如上所述的Suzuki偶联反应，得到6mg标题化合物。收率：13%。1H NMR(CD3OD)δ8.59(s,1H),8.12(s,1H),7.85(d,2H),7.39(d,2H),6.81-6.91(m,3H),4.72(m,1H),4.30(m,1H),3.79(s,3H),3.20-3.40(m,2H),3.18(s,3H),3.79(s,3H),1.80(m,6H),1.58(m,2H)。M+1=477。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-((1，3-二甲基-1H-吡唑-4-基)甲氨基)吡嗪-2-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500571
将1,3-二甲基-1H-吡唑-4-甲醛（142mg，1.145mmol）、2-氨基-5-溴吡嗪（200mg，1.149mmol）、硼烷三甲胺络合物（126mg，1.73mmol）、和冰醋酸（137mg，2.29mmol）在无水甲醇（3ml）中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，用MgSO4干燥，并过滤。浓缩滤液，得到作为粗产物的300mg（5-溴-吡嗪-2-基)-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基甲基)胺，其无需进一步纯化就用于下一步的反应。粗收率：93%。
(5-溴-吡嗪-2-基)-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基甲基)胺（40mg，0.142mmol）被用于如上所述的Suzuki偶联反应，得到19mg标题化合物。收率：36.5%。1H NMR(CD3OD)δ8.48(s,1H),8.05(s,1H),7.87(d,2H),7.39(d,2H),6.10(s,1H),4.81(s,2H),4.30(m,1H),3.83(s,3H),3.11-3.38(m,2H),2.10(s,3H)。M+1=367。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((S)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基 氧基)苯基)丙酸的合成
将R-(+)-1-(2-萘基)乙胺（400mg，2.424mmol）、2-氨基-4,6-二氯三嗪（373mg，2.181mmol）、无水1,4-二噁烷（40ml）、和N,N-二异丙基乙胺（1ml，5.732mmol）加到250ml烧瓶中，并加热至轻度回流约4小时。认真监测反应，从而避免形成二取代的产物。（据观察，反应越长，形成的二取代产物越多）。在4小时后，将反应混合物冷却，并在减压下去除溶剂。向残余物添加水，并将溶液超声2-3分钟。然后将溶剂过滤，用水洗涤并干燥，得到540mg（83%粗收率）一氯化物，6-氯-N-(1-萘-2基-乙基)-[1,3,5]三嗪-2,2-二胺，该产物无需进一步纯化就用于下一步的反应。
将6-氯-N-(1-萘-2基-乙基)-[1,3,5]三嗪-2,2-二胺（90mg，0.300mmol）、2-叔丁氧基羰基氨基-3-(4-羟基-苯基)-丙酸叔丁酯（102mg，0.303mmol）、和碳酸钾（82mg，0.594mmol）在异丙醇（8ml）中的混合物回流过夜。在减压下去除溶剂，并将残余物悬浮在乙酸乙酯中。将固体过滤，并用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩，然后重新溶解在甲醇/水（90:10）的混合物中，并通过制备型LC使用Sunfire C18 OBD100x30mm ID柱（MeOH/H2O/TFA溶剂系统）进行纯化。将纯级分合并并浓缩，得到50mg纯产物，3-{4-[4-氨基-6-(1-萘-2-基-乙氨基)-[1,3,5]三嗪-2基氧基]-苯基}2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸叔丁酯（28%收率）。
将上述产物（50mg，0.083mmol）溶解在三氟乙酸/二氯甲烷（8ml/2ml）中，并在室温下搅拌过夜。在减压下去除溶剂。然后将残余物重新溶解在甲醇/水（90:10）的混合物中，并通过制备型LC使用Sunfire C18 OBD 100x30mm ID柱（MeOH/H2O/TFA溶剂系统）进行纯化。将纯级分合并，并在减压下浓缩至达到约4ml，将其冷冻并冷冻干燥，得到4mg作为TFA盐的标题化合物（11%收率）。1H NMR(CD3OD)δ7.37-7.81(m,8H),7.19(m,2H),6.98(m,1H),5.37(m,1H),4.19(m,1H),3.17-3.38(m,2H),1.56(m,3H)。M+1=445。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((R)-1-(联苯-2-基)-2,2,2-三氟乙氧 基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500591
将1-联苯-2-基-2,2,2-三氟-乙酮（300mg，1.2mmol）、硼烷四氢呋喃络合物（1.2ml，在THF中的1M溶液，1.2mmol）、和S-2-甲基-CBS-噁唑硼烷（0.24ml，在甲苯中的1M溶液，0.24mmol）在THF（8ml）中的混合物在室温下搅拌过夜。加入几滴浓HCl，并将混合物搅拌30分钟。通过SiO2色谱法（己烷/乙酸乙酯=100/0至3/1）纯化产物，得到290mg 1-联苯-2-基-2,2,2-三氟-乙醇（96%收率）。
将上述醇（290mg，1.151mmol）溶解在无水THF（10ml）中。立刻加入氢化钠（55mg，1.375mmol），并将混合物在室温下搅拌30分钟。然后将该溶液转移到含有2-氨基-4,6-二氯-三嗪（190mg，1.152mmol）的THF（20ml）悬液的烧瓶中。将混合物在室温下搅拌过夜。加入水，然后将混合物用乙酸乙酯稀释。将有机层用水洗涤，用MgSO4干燥，然后浓缩，得到400mg粗产物2-氨基-4-(1-联苯-2-基-2,2,2-三氟-乙氧基-6-氯-三嗪。
让2-氨基-4-(1-联苯-2-基-2,2,2-三氟-乙氧基-6-氯-三嗪（40mg，0.105mmol）接受如上所述的相同Suzuki偶联反应，得到5mg标题化合物。收率：9.4%。1H NMR(CD3OD)δ8.18(d,2H),7.86(m,1H),7.40-7.52(m,9H),7.32(m,1H),7.07(m,1H),4.32(m,1H),3.22-3.41(m,2H)。M+1=510。
(2S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-(1-(6，8-二氟萘-2-基)乙氨基)-1，3，5-三 嗪-2-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500601
在三颈烧瓶中，在氮气下将碘化亚铜（CuI）（299mg，1.515mmol）和氯化锂（LiCl）（145mg，3.452mmol）加到无水THF（60ml）中。在室温下搅拌混合物，直至获得淡黄色溶液。在冷却至0℃后，加入甲基乙烯基酮和三甲基氯硅烷，并搅拌混合物，直至观察到橙色（~20分钟）。在冷却至约-40℃后，缓慢加入3,5-二氟苯基溴化镁（27.65ml，13.8mmol）的THF（0.5M）溶液。将反应混合物在约-40℃下搅拌0.5小时，然后移除冷浴，并让温度缓慢上升至室温。蒸发溶剂，并用己烷（4x20ml）萃取残余物。将收集的萃取液用冷的10%水性NaHCO3洗涤，并用Na2SO4干燥。在减压下蒸发溶剂，得到3,5-二氟苯基-1-三甲基硅氧基烯烃（2.03g，7.929mmol，57%粗收率），该产物无需进一步纯化就用于后续反应。
在氮气氛下将碳酸钙粉末（3.806g，38.06mmol）和乙烯基乙醚（2.184g，30.329mmol）加入到硝酸铈铵（10.430g，19.033mmol）的甲醇（40ml）溶液中。在剧烈搅拌下向所产生的悬液中滴加上面制成的3,5-二氟苯基-1-三甲基硅氧基烯烃（2.03g，7.929mmol）的乙烯基乙醚（6ml，4.518g，62.75mmol）溶液，并将该混合物在室温下搅拌过夜。通过硅藻土层过滤固体，并将滤液浓缩至它初始体积的四分之一。在剧烈搅拌下将所产生的稠混合物缓慢倒入到1:1v/v乙醚-10%水性NaHCO3中。滤去沉淀物，分离醚溶液，并在减压下蒸发溶剂，得到澄清的液体。将所产生的液体（环状和非环状乙酸酯的混合物）的甲醇（4ml）溶液滴加到二氯二氰苯醌（1.77g，7.797mmol）在80%水性硫酸中的0℃悬液中。在完成添加后，移除冰浴，并继续搅拌30分钟。将混合物倒入到冰水中；并将所产生的棕色沉淀物过滤并溶解在丙酮中。加入硅胶制成塞，并通过色谱法（己烷/乙酸乙酯=100/0至3/1）纯化粗产物，得到760mg作为浅黄色固体的1-(5,7-二氟-萘-2-基)-乙酮（两步收率为48%）。
将上述酮（760mg，3.689mmol）溶解在甲醇（40ml）中。然后，加入乙酸铵（2.841g，36.896mmol）、氰基硼氢化钠（232mg，3.389mmol）、和分子筛（
Figure BDA00001996271500611
7.6g）。将混合物在室温下搅拌2天。过滤固体，并浓缩滤液。将残余物溶解在水中，并滴加水性浓HCl，直至pH≈2。然后用乙酸乙酯萃取该混合物，以去除未完成的酮和其它副产物。用水性氢氧化钠（1M）将水层碱化至pH≈10，并用二氯甲烷进行萃取，将有机层合并，用硫酸镁干燥，并浓缩，得到290mg 1-(5,7-二氟-萘-2-基)-乙胺（38%收率）。
将新鲜制成的胺（290mg，1.401mmol）直接加入到2-氨基-4,6-二氯三嗪（277mg，1.678mmol）的无水1,4-二噁烷（60ml）悬液中，然后加入N,N-二异丙基乙胺（1ml，5.732mmol）。加热混合物至轻度回流约3小时。然后将反应混合物冷却，并在减压下去除溶剂。向残余物添加水，并将混合物超声2-3分钟。将所产生的固体过滤并用水洗涤，并干燥，得到395mg（60%粗收率）6-氯-N-[1-(6,8-二氟-萘-2-基-乙基]-[1,3,5]三嗪-2,4-二胺，该产物无需进一步纯化就直接用于下一步的反应。
让上面制成的一氯化物（48mg，0.144mmol）接受如上所述的相同Suzuki偶联反应，得到12mg标题产物。收率：17.9%。1H NMR(CD3OD)δ8.14-8.22(m,2H),8.05(m,1H),7.92(m,1H),7.63(m,1H),7.32-7.51(m,3H),7.11(m,1H),5.48(m,1H),4.13(m,1H),3.13-3.41(m,2H),1.66(d,3H)。M+1=465。
(2S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-(2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙氧 基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500621
在0℃下向3'-甲基-1-联苯-2-甲醛（500mg，2.551mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（435mg，3.061mmol）在THF（3ml）中的混合物加入四丁基氟化铵（13mg，0.05mmol）。让温度升温至室温。将混合物在室温下搅拌5小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水和盐水洗涤，并通过MgSO4干燥。在减压下去除溶剂，得到660mg（97%粗收率）作为粗产物的2,2,2-三氟-1-(3’-甲基-联苯-2-基)-乙醇，该粗产物无需进一步纯化就用于下一个步骤。
将上面制成的醇（660mg，2.481mmol）溶解在无水1,4-二噁烷（10ml）中。立刻加入氢化钠（119mg，60%，在矿物油中，2.975mmol），并将混合物在室温下搅拌30分钟。将该溶液转移到含有2-氨基-4,6-二氯-三嗪（491mg，2.976mmol）的1,4-二噁烷（70ml）悬液的烧瓶中。将混合物在室温下搅拌6小时。去除溶剂，并将残余物悬浮在乙酸乙酯中，用水洗涤，用MgSO4干燥，然后浓缩，得到790mg粗产物，所述粗产物含有约57%所需要的产物2-氨基-4-(1-(3’-甲基-联苯-2-基-2,2,2-三氟-乙氧基-6-氯-三嗪和约43%副产物（双取代的产物）。该粗产物无需进一步纯化即可使用。
2-氨基-4-(1-(3’-甲基-联苯-2-基-2,2,2-三氟-乙氧基-6-氯-三嗪（98mg，57%纯度，0.142mmol）被用于执行如上所述的相同Suzuki偶联反应，得到9mg标题化合物。收率：12.0%。1H NMR(CD3OD)δ8.09(m,2H),7.85(m,1H),7.50(m,2H),7.28-7.43(m,5H),7.17-7.26(m,2H),7.18(m,1H),3.85(m,1H),3.08-3.44(m,2H),2.33(s,3H)。M+1=524。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-(3,4-二甲氧基苯基氨甲酰基)-吡嗪-2-基)苯基) 丙酸的合成
Figure BDA00001996271500631
在0-5℃下向3,4-二甲氧基苯胺（0.306g，2mmol）和三乙胺（0.557ml，4mmol）在二氯甲烷（20ml）中的混合物加入5-氯-吡嗪-2-羰基氯（0.354g，2mmol）。让混合物在室温下搅拌3小时。将混合物用二氯甲烷（20ml）稀释，用饱和的NaHCO3（20ml）、盐水（20ml）洗涤，干燥（无水Na2SO4），并浓缩，得到0.42g 5-氯-吡嗪-2甲酸(3,4-二甲氧基-苯基)-酰胺粗产物，该粗产物被直接用于下一个反应。
将5-氯-吡嗪-2甲酸(3,4-二甲氧基-苯基)-酰胺（0.18g，0.61mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（0.146g，0.70mmol）、CH3CN（2.5ml）、H2O（2.5ml）、Na2CO3（0.129g，1.22mmol）合并在微波管中。将混合物密封，并在150℃下保持5分钟。将混合物过滤并浓缩。将残余物溶解在甲醇/水（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，以提供作为TFA盐的2-氨基-3-{4-[5-(3,4-二甲氧基-苯基氨甲酰基)-吡嗪-2基]-苯基}-丙酸（HPLC：方法A，保留时间=2.846分钟，LCMS M+1 423）。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ3.10-3.30(m,2H),3.72(d,6H),4.05(m,1H),7.42-7.62(m,4H),8.22(m,3H),9.30(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(4-(2-(三氟甲基)苯基)-哌啶-1-基)嘧啶 -4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500641
将2-氨基4,6-二氯嘧啶（0.164g，1mmol）、4-(2-三氟甲基-苯基)-哌啶盐酸盐（0.266g，1mmol）、和碳酸铯（0.684g，2.1mmol）溶解在20ml微波管中1,4-二噁烷（5ml）和H2O（5ml）的混合物中。在微波反应器中将混合物210℃下搅拌20分钟。去除溶剂，并将残余物溶解在含5%甲醇的CH2Cl2（20ml）中，用Na2SO4干燥，并浓缩以得到中间体4-氯-6-[4-(2-三氟甲基-苯基)-哌啶-1-基]-嘧啶-2-基胺（0.42g）粗产物，该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将中间体粗产物（0.42g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.209g，1mmol）、碳酸钠（0.210g，2mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（35mg，0.05mmol）溶解在10ml微波管中MeCN（2.5ml）和H2O（2.5ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液。将残余物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，以提供作为TFA盐的2-氨基-3-(4-{4-(2-三氟甲基-苯基)-哌啶-1-基]-嘧啶-4基}-苯基)-丙酸。HPLC：方法A，保留时间=3.203分钟。LCMS M+1486。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ1.80-2.20(m,5H),3.0-3.16(m,2H),3.22-3.42(m,2H),4.22(t,1H),4.42-4.54(m,1H),5.22-5.34(m,1H),6.80(s,1H),7.40(t,1H),7.50-7.60(m,4H),7.68(d,1H),7.82(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)嘧啶-4-基)苯基) 丙酸的合成
Figure BDA00001996271500651
将2-氨基4,6-二氯嘧啶（0.164g，1mmol）、(R)-(+)-1-(2-萘基)-乙胺（0.171g，1mmol）、和碳酸铯（0.358g，1.1mmol）溶解在20ml微波管中1,4-二噁烷（4ml）和H2O（4ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在210℃下搅拌20分钟。去除溶剂，并将残余物溶解在CH2Cl2（50ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，干燥（Na2SO4），并浓缩以提供中间体6-氯-N-4-(萘-2基-乙基)-嘧啶-2,4-二胺（0.270g）粗产物，该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将中间体粗产物（0.27g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.210g，1mmol）、碳酸钠（0.210g，2mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（25mg，0.036mmol）溶解在微波管中MeCN（2.5ml）和H2O（2.5ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液。将残余物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，以提供作为TFA盐的2氨基-3-{4-[2-氨基-6-(1-萘-2基-乙氨基)-嘧啶-4-基]-苯基}-丙酸。HPLC：方法A，保留时间=3.276分钟。LCMS M+1428。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ1.68(d,3H),3.22-3.40(m,2H),4.30(t,1H),5.60(q,1H),6.42(s,1H),7.42-7.54(m,5H),7.72(m,2H),7.82-7.84(m,4H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(甲基((R)-1-(萘-2-基)乙基)氨基)嘧啶-4- 基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500661
将2-氨基4,6-二氯嘧啶（0.327g，2mmol）、甲基-(1-萘-2基-乙基)-胺（0.360g，2mmol）、和碳酸铯（0.717g，2.2mmol）溶解在20ml微波管中1,4-二噁烷（7.5ml）和H2O（7.5ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在210℃下搅拌20分钟。去除溶剂，并将残余物溶解在CH2Cl2（50ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，干燥（Na2SO4），并浓缩，以得到中间体6-氯-N-4-甲基-N-4-(1-萘-2-基-乙基)-嘧啶-2,4-二胺（0.600g）粗产物，该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将中间体粗产物（0.30g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.210g，1mmol）、碳酸钠（0.210g，2mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（25mg，0.036mmol）溶解在微波管中MeCN（2.5ml）和H2O（2.5ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液。将残余物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，以提供作为TFA盐的2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[甲基-(1-萘-2基-乙基)氨基]-嘧啶-4基}-苯基)-丙酸（HPLC：方法C，保留时间=2.945分钟，LCMSM+1 442）。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ1.70(m,3H),2.92(s,3H),3.22-3.42(m,2H),4.28(m,1H),6.60(s,1H),6.72(m,1H),7.40-7.92(m,11H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((S)-2，2，2-三氟-1-(6-甲氧基萘-2-基)乙 氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500671
在氮气氛下将2-氨基4,6-二氯嘧啶（0.096g，0.6mmol）、2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-萘-2-基)-乙醇（0.140g，0.55mmol）、和NaH（96mg，0.60mmol）加入到无水二噁烷（20ml）中。将反应物在80℃下搅拌12小时，冷却至室温，并用水（0.2ml）淬灭。浓缩反应混合物，并将残余物溶解在CH2Cl2（50ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，干燥（Na2SO4），并浓缩以提供中间体4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-萘-2-基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺（0.22g）的粗产物，该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将中间体粗产物（0.22g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.126g，0.6mmol）、碳酸钠（0.126g，1.2mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（15mg，0.021mmol）溶解在微波管中MeCN（2.0ml）和H2O（2.0ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液。将残余物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，以提供作为TFA盐的2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(6-甲氧基-萘-2-基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-苯基)-丙酸（HPLC：方法C，保留时间=3.190分钟。LCMS M+1 513）。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ3.22-3.42(m,2H),3.86(s,3H),4.32(1H),6.88(m,1H),6.92(1H),7.20(dd,1H),7.26(s,1H),7.50(d,2H),7.63(d,1H),7.80-7.90(m,4H),8.05(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-(联苯-4-基甲氨基)吡嗪-2-基)苯基)丙酸的合成
在室温下在二氯乙烷（7.0ml）和乙酸（0.25ml）中用Na(OAc)3BH（0.44g，2.06mmol）将4-苯基苯甲醛（0.3g，1.65mmol）和2-氨基-5-溴吡嗪（0.24g，1.37mmol）处理18小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用1.0N NaOH洗涤，用盐水洗涤，通过MgSO4干燥，并浓缩。色谱法（SiO2，EtOAc:乙烷，1:1）提供了0.18g N-(联苯-4-基甲基)-5-溴吡嗪-2-胺。
将N-(联苯-4-基甲基)-5-溴吡嗪-2-胺（60mg，0.176mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（37mg，0.176mmol）、三苯基膦二氯化钯（3.6mg，0.0052mmol）、Na2CO3（37mg，0.353mmol）、乙腈（1.25ml）、和水（1.25ml）在微波反应器中在150℃下加热5分钟。将混合物浓缩，溶解在1.0N HCl中，用醚洗涤2次，浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化，得到41mg标题化合物。M+1=425；1H NMR(CD3OD)δ8.42(s,1H),8.05(s,1H),7.92(d,2H),7.58(d,4H),7.40(m,7H),4.60(s,2H),4.25(m,1H),3.40(m,1H),3.20(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-(萘-2-基甲氨基)吡嗪-2-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500682
在室温下在二氯乙烷（15.0ml）和乙酸（0.5ml）中用Na(OAc)3BH（1.02g，4.802mmol）将2-萘醛（0.6g，3.84mmol）和2-氨基-5-溴吡嗪（0.56g，3.201mmol）处理18小时。将混合物用二氯甲烷稀释，用1.0N NaOH洗涤，用盐水洗涤，通过MgSO4干燥，并浓缩。色谱法（SiO2，EtOAc:己烷，1:1）提供了0.49g 5-溴-N-(萘-2-基甲基)吡嗪-2-胺。
将5-溴-N-(萘-2-基甲基)吡嗪-2-胺（0.2g，0.637mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（0.13g，0.637mmol）、三苯基膦二氯化钯（13mg，0.019mmol）、Na2CO3（0.13g，1.27mmol）、乙腈（5ml）、和水（5ml）在微波反应器中在150℃下加热5分钟。将混合物浓缩，溶解在1.0N HCl中，用醚洗涤2次，浓缩，溶解在甲醇中，过滤，并浓缩，产生0.12g标题化合物。M+1=399；1H NMR(CD3OD)δ8.51(s,1H),8.37(s,1H),7.90(m,6H),7.50(m,5H),4.85(s,2H),4.30(t,1H),3.38(m,1H),3.22(m,1H)。
(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-(5-(萘-2-基甲氨基)吡嗪-2-基)苯基) 丙酸的合成
Figure BDA00001996271500691
在0℃的二噁烷（3ml）和H2O（3ml）中用三乙胺（87mg，0.862mmol）和boc-酸酐（84mg，0.379）处理(S)-2-氨基-3-(4-(5-(萘-2-基甲氨基)吡嗪-2-基)苯基)丙酸（0.15g，0.345mmol）。将混合物升温至室温，并搅拌过夜。将混合物浓缩，并在EtOAc和H2O之间分配。用1.0N HCl将水相酸化至pH=1，并用EtOAc萃取。将有机相合并，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩产生48mg标题化合物。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-(萘-2-基甲氨基)吡嗪-2-基)苯基)丙酸2-吗啉基 乙酯的合成
Figure BDA00001996271500701
将(S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3-(4-(5-(萘-2-基甲氨基)吡嗪-2-基)苯基)丙酸（48mg，0.090mmol）、4-(2-羟乙基)吗啉（12mg，0.090mmol）、三乙胺（18mg，0.180mmol）、和苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐（BOP，18mg，0.090mmol）在二氯甲烷（3.0ml）中在室温下搅拌5小时。另外加入三乙胺（18mg，0.180mmol）和BOP（18mg，0.090mmol），并将混合物搅拌过夜。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化，得到2mg标题化合物。
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2,2,2-三氟-1-(3'-氟联苯-4-基)乙氧基) 嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500702
向在0℃的THF（50ml）中的4'-溴-2,2,2-三氟苯乙酮（5.0g，19.76mmol）添加NaBH4（1.5g，39.52mmol）。将混合物升温至室温，并搅拌1小时。通过TLC（CH2Cl2）表明反应完成。将混合物用H2O淬灭，旋转蒸发以去除大部分THF，并用CH2Cl2萃取2次。将有机相合并，用盐水洗涤，浓缩至小体积，并通过硅胶塞过滤。用CH2Cl2洗涤硅胶以洗脱产物，并浓缩所产生的溶液，得到4.65g 1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇。收率92%。
在0℃下经15分钟向Pd(PPh3)4（2.1g，1.823mmol）添加3-氟苯基溴化镁（55ml，1.0M，在THF中，55mmol）。移除冰浴，并将混合物搅拌30分钟。经10分钟加入在THF（50ml）中的1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇（4.65g，18.23mmol）。加热混合物以回流3小时，并通过LC（Sunfire柱，TFA）表明反应完成。将混合物冷却，用H2O淬灭，旋转蒸发以去除大部分THF，并用CH2Cl2萃取3次。将有机相合并，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩。色谱法（SiO2，CH2Cl2）提供了4.64g 2,2,2-三氟-1-(3'-氟联苯-4-基)乙醇。收率94%。
向在0℃的THF（50ml）中的2,2,2-三氟-1-(3'-氟联苯-4-基)乙醇（1.4g，5.18mmol）添加NaH（60%，在矿物油中，0.31g，7.77mmol）。移除冰浴，并将混合物搅拌30分钟。立刻加入在THF（25ml）中的2-氨基-4,6-二氯嘧啶（1.0g，6.22mmol）。将混合物加热至50℃，持续5小时。通过LCMS（Sunfire，TFA）表明反应完成。将混合物冷却，用盐水淬灭，并用CH2Cl2萃取3次。将有机相合并，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩。色谱法（SiO2，CH2Cl2）提供了1.48g 4-氯-6-(2,2,2-三氟-1-(3'-氟联苯-4-基)乙氧基)嘧啶-2-胺。收率73%。
将4-氯-6-(2,2,2-三氟-1-(3'-氟联苯-4-基)乙氧基)嘧啶-2-胺（0.75g，1.89mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（0.47g，2.26mmol）、Pd(PPh3)2Cl2（79mg，0.113mmol）、Na2CO3（0.44g，4.15mmol）、乙腈（10ml）、和H2O（10ml）合并在20ml微波反应器中，并在微波中在150℃下加热7分钟。通过LCMS（Sunfire，中性）表明反应完成。将混合物浓缩，溶解在NaOH（20ml 0.5N）中，过滤，用醚萃取3次，并冷却至0℃。在0℃下，缓慢加入1.0N HCl，直至获得pH为6.5。将混合物在0℃下搅拌30分钟，并将产物过滤，在空气中干燥，用过量的在醚中的2.0N HCl处理，浓缩，然后用CH2Cl2研碎，得到1.12g，99%（95.5%纯度）。将385mg通过制备型HPLC（Sunfire，TFA）进行纯化，浓缩，用过量的1.0N HCl（水性）处理，浓缩至小体积，并冷冻干燥，得到240mg标题化合物。M+1=527；1H NMRδ(CD3OD)7.86(d,2H),7.64(s,4H),7.49(d,2H),7.36(m,2H),7.28(m,1H),7.02(m,1H),6.95(s,1H),6.75(q,1H),4.26(t,1H),3.32(m,1H),3.21(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(苄硫基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500721
在无水THF（15ml）中用NaH（60%，在矿物油中，67mg，1.66mmol）将苄硫醇（0.14g，1.11mmol）处理30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯嘧啶（0.2g，1.22mmol），并将混合物搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释，用水、然后用盐水洗涤，通过MgSO4干燥，并浓缩，得到0.11g 4-(苄硫基)-6-氯嘧啶-2-胺。
将4-(苄硫基)-6-氯嘧啶-2-胺（0.1g，0.397mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（0.1g，0.477mmol）、Pd(PPh3)2Cl2（17mg，0.024mmol）、Na2CO3（93mg，0.874mmol）、MeCN（2.5ml）、和水（2.5ml）在微波中在150℃下加热5分钟。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化，得到0.42g标题化合物。M+1=381；1H NMR(CD3OD)δ7.8(d,2H),7.37(t,4H),7.23(m,2H),7.16(m,1H),6.98(s,1H),4.43(s,2H),4.20(t,1H),3.29(m,1H),3.13(M,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(萘-2-基甲硫基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的 合成
在无水THF（10ml）中用NaH（60%，在矿物油中，92mg，2.30mmol）将2-巯基萘（0.2g，1.148）处理30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯嘧啶（0.21g，1.26mmol），并将混合物搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷稀释，用水、然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩，得到0.18g 4-氯-6-(萘-2-基甲硫基)嘧啶-2-胺。
将4-氯-6-(萘-2-基甲硫基)嘧啶-2-胺（0.1g，0.331mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（83mg，0.397mmol）、Pd(PPh3)2Cl2（14mg，0.020mmol）、Na2CO3（77mg，0.729mmol）、MeCN（2.5ml）、和水（2.5ml）在微波中在150℃下加热5分钟。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化，得到57mg标题化合物。M+1=431；1H NMR(CD3OD)δ7.85(s,1H),7.79(d,2H),7.72(d,3H),7.46(dd,1H),7.35(m,4H),6.95(s,1H),4.58(s,2H),4.17(m,1H),3.26(m,1H),3.11(m,1H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(1-(3,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙氧基)嘧 啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500732
在THF（5ml）中用NaBH4（0.18g，4.76mmol）将3,5-二氟苯基-三氟甲基酮处理2小时。将混合物用水淬灭，用二氯甲烷（2x）萃取。将有机相合并，通过硅胶过滤，并浓缩，得到0.46g 1-(3,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙醇。
在无水THF（3ml）中用NaH（60%，在矿物油中，38mg，0.943mmol）将1-(3,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙醇（0.1g，0.471mmol）处理30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯嘧啶（77mg，0.471mmol），并将混合物在50℃下搅拌6小时。将混合物用水淬灭，并用二氯甲烷（2x）萃取。将有机相合并，用水、然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩，得到0.14g 4-氯-6-(1-(3,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙氧基)-嘧啶-2-胺。
将4-氯-6-(1-(3,4-二氟苯基)-2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-2-胺（0.14g，0.421mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（110mg，0.505mmol）、Pd(PPh3)2Cl2（18mg，0.025mmol）、Na2CO3（98mg，0.926mmol）、MeCN（2.5ml）、和水（2.5ml）在微波中在150℃下加热5分钟。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化，得到74mg标题化合物。M+1=469；1H NMR(CD3OD)δ7.83(d,2H),7.47(m,1H),7.38(m,4H),7.28(m,1H),4.21(t,1H),3.29(m,1H),3.15(m,1H)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(2，2，2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙氧 基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500741
向在0℃的THF（50ml）中的4'-溴-2,2,2-三氟苯乙酮（5.0g，19.76mmol）添加NaBH4（1.5g，39.52mmol）。将混合物升温至室温，并搅拌1小时。通过TLC（CH2Cl2）表明反应完成。将混合物用H2O淬灭，旋转蒸发以去除大部分THF，并用CH2Cl2萃取2次。将有机相合并，用盐水洗涤，浓缩至小体积，并通过硅胶塞过滤。用CH2Cl2洗涤硅胶以洗脱产物，并浓缩所产生的溶液，得到4.65g 1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇。收率：92%。
将1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇（0.13g，0.525mmol）、间甲苯基硼酸（0.1g，0.736mmol）、Fibercat（4.28% Pd，47mg，0.0157mmolPd）、K2CO3（0.22g，1.576mmol）、EtOH（3ml）、和H2O（0.5ml）合并，并在80℃下加热4小时。通过TLC（CH2Cl2）表明反应完成。将混合物冷却，过滤，浓缩，在CH2Cl2中浆化，并通过硅胶（CH2Cl2）进行层析，得到0.1g 2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙醇。收率：72%。
或者，将1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇（0.98g，3.86mmol）、间甲苯基硼酸（0.63g，4.63mmol）、Pd(PPh3)2Cl2（0.16g，0.232mmolPd）、Na2CO3（0.90g，8.49mmol）、AcCN（10ml）、和H2O（10ml）合并，并在微波中在150℃下加热10分钟。通过TLC（CH2Cl2）表明反应完成。将混合物冷却，浓缩，在CH2Cl2中浆化，过滤，并提供硅胶（CH2Cl2）层析，得到0.80g 2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙醇。收率：79%。
或者，在0℃下将四丁基氟化铵（TBAF，1.0N，在THF 13uL中，3.3mg，0.013mmol）加入到3-甲基-联苯-2-甲醛（0.25g，1.27mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（0.25g，1.53mmol）在THF（1.5ml）中的混合物中。将反应物升温至室温，并搅拌4小时。加入HCl（3.0N，2.0ml），并将混合物搅拌3小时。将混合物浓缩，溶解在二氯甲烷中，通过硅胶过滤，并浓缩，得到0.15g 2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙醇。
在无水THF（5ml）中用NaH（60%，在矿物油中，45mg，1.12mmol）将2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙醇（0.15g，0.563mmol）处理30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯嘧啶（92mg，0.5633mmol），并将混合物在50℃下搅拌6小时。将混合物用水淬灭，并用二氯甲烷（2x）萃取。将有机相合并，用水、然后用盐水洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩，得到0.16g 4-氯-6-(2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙氧基)嘧啶-2-胺。
将4-氯-6-(2,2,2-三氟-1-(3'-甲基联苯-2-基)乙氧基)嘧啶-2-胺（0.16g，0.406mmol）、L-对-二羟硼基苯丙氨酸（10mg，0.487mmol）、Pd(PPh3)2Cl2（17mg，0.024mmol）、Na2CO3（95mg，0.894mmol）、MeCN（2.5ml）、和水（2.5ml）在微波中在150℃下加热5分钟。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC进行纯化，得到105mg标题化合物。M+1=523；1H NMR(CD3OD)δ7.85(d,2H),7.70(d,1H),7.44(m,4H),7.31(t,1H),7.21(m,2H),7.10(m,2H),6.87(q,1H),6.84(s,1H),4.25(t,1H),3.30(m,1H),3.18(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲氨基)吡啶-3-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500761
将三乙酰氧基硼氢化钠（245mg，1.16mmol）加入到5-溴-吡啶-3-胺（100mg，0.57mmol）和3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲醛（127mg，0.57mmol）在10ml 1,2-二氯乙烷（DCE）中的溶液中，加入HOAc（66μL，2当量，1.16mmol），将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入15ml DCE。将有机相用水洗涤，并用硫酸钠干燥。在减压下去除溶剂，得到200mg 5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲基)吡啶-3-胺粗产物，该粗产物无需进一步纯化就用于下一个步骤。
在Emrys微波处理管（2-5ml）中装入5-溴-N-(3-(环戊基氧基)-4-甲氧基苯甲基)吡啶-3-胺（40mg，0.106mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（22mg，0.106mmol）、和2ml乙腈。将水性碳酸钠（2ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入10mol%氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至180℃，持续10分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型LC进行纯化，得到20mg(S)-2-氨基-3-(4-(5-3-(环戊基氧基-4-甲氧基-苯甲氨基)吡啶-3-基)苯基)-丙酸。NMR：1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.59(m,2H),1.7(m,6H),3.17(m,1H),3.3(m,1H),3.75(s,3H),4.2(dd,1H)4.39(s,2H),4.7(m,1H),6.9(m,3H),7.4(d,2H),7.6(d,2H),7.7(s,1H),7.9(s,1H),8.15(s,1H)；分析型HPLC：RT 2.69；M+1:462(RT:1.285)。
2-氨基-3-(3-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯 基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500771
在-78℃下经5分钟向2-(二苯基亚甲基-氨基)乙酸叔丁酯（400mg，1.35mmol）的THF（25ml）溶液添加LDA的溶液（1.8M，在THF中，2当量，2.7mmol，来自Aldrich的新瓶），并将所产生的混合物搅拌20分钟。经5分钟将2-(3-(溴甲基)苯基)-5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼烷（460mg，1.2当量，1.62mmol）的THF（10ml）溶液滴加到反应混合物中。在相同的温度（-78℃）下继续反应30分钟，并在室温下放置3小时。用饱和的NH4Cl将反应淬灭，然后加入水（30ml），并用EtOAc（2x40ml）萃取。将有机级分合并，并用Na2SO4干燥。然后在减压下浓缩溶剂，并通过柱色谱法纯化3-(3-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)2(二苯基亚甲基氨基)丙酸叔丁酯粗产物，以提供作为半固体的产物。
Emrys微波处理管（20ml）中装入(R)-6-氯-N2-(1-(萘-2-基)乙基)-1,3,5-三嗪-2,4-二胺（100mg，0.33mmol）、3-(3-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)-2-(二苯基亚甲基氨基)丙酸叔丁酯（248mg，0.5mmol，1.5当量）、和6ml乙腈加上6ml水性碳酸钠（1M），然后加入10mol%二氯双(三苯基-膦)钯(II)。将反应容器密封，并用微波加热至190℃，持续10分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在10ml THF中，向其中加入5N HCl（5ml）。将混合物回流2小时，以便将二苯甲酮（benzophone）和叔丁基基团脱保护。将所产生的反应混合物浓缩并溶解在甲醇（8ml）中，并用制备型LC进行纯化，得到15mg 2-氨基-3-(4(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)苯基)丙酸。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.85(d,3H),3.2-3.45(m,2H),4.37(m,1H),5.5(m,1H),7.4(m,1H),7.6(m 4H),7.9(m,4H),8.18(m,2H),分析型HPLC：RT 2.79M+1:429(RT:1.35)。
2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)-2- 氟苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500781
在-78℃下经5分钟向2-(二苯基亚甲基-氨基)乙酸叔丁酯（1.1g，3.73mmol）的THF（30ml）溶液添加LDA溶液（1.8M，在THF中，1当量，3.73mmol，来自Aldrich的新瓶），并将所产生的混合物搅拌20分钟。经5分钟将4-溴-1-(溴甲基)-2-氟苯（1g，3.74mmol）的THF（10ml）溶液滴加到反应混合物中。在-78℃下继续反应30分钟，然后将它在室温下放置3小时。用饱和的NH4Cl将反应淬灭，然后加入水（30ml）。用EtOAc（2x40ml）萃取产物，并将有机级分合并，用Na2SO4干燥。在减压下浓缩溶剂，并通过柱色谱法纯化3-(4-溴-2-氟苯基)-2-(二苯基亚甲基氨基)-丙酸叔丁酯粗产物。获得作为固体的产物。
Emrys微波处理管（20ml）中装入在20ml DMF中的3-(4-溴-2-氟苯基)-2-(二苯基亚甲基-氨基)丙酸叔丁酯（600mg，1.24mmol）、Pd(dba)2（71mg，0.124mmol）、PCy3（35mg，0.124mmol）、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-二(1,3,2-二氧杂环戊硼烷（346mg，1.1当量，1.36mmol）、和KOAc（182mg，1.5当量，1.86mmol）。将反应容器密封，并通过微波加热至160℃，持续20分钟。在冷却后，在减压下将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在H2O（30ml）中，用EtOAc（2x40ml）萃取，并用制备型LC进行纯化，得到220mg 2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸叔丁酯。
Emrys微波处理管（5ml）中装入(R)-6-氯-N2-(1-(萘-2-基)乙基)-1,3,5-三嗪-2,4-二胺（67mg，0.22mmol）、2-(二苯基亚甲基氨基)-3-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基)丙酸叔丁酯（120mg，0.22mmol）、和2ml乙腈。将水性碳酸钠（2ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入10mol%氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至190℃，持续10分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在10ml THF中，然后向其中加入5N.HCl（2ml）。将混合物回流2小时（二苯甲酮和叔丁基基团的脱保护）。在两个基团脱保护后，将混合物浓缩，溶解在甲醇（5ml）中，并用制备型LC进行纯化，得到10mg 2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基)-2-氟苯基)丙酸。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.6(d,3H),3.07(m,1H),3.45(m,1H),3.8(m,1H),5.45(m,1H),7.4(m,4H),7.6(m 1H),7.8(m,4H),8.08(m,1H),分析型HPLC：RT 2.88,M+1:447(RT:1.44)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-(1-(金刚烷基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基) 苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500791
将金刚烷胺（1当量）、2-氨基-4,6-二氯-[1,3,5]三嗪（1当量）、和二异丙基乙胺（5当量，Aldrich）的无水1,4-二噁烷溶液在130℃下回流3小时。在完成反应后，在减压下去除二噁烷。然后将反应物冷却至室温，加入水，并用二氯甲烷（2x40ml）萃取产物。将合并的有机溶液用Na2SO4干燥并浓缩，得到产物，该产物无需纯化就用于下一个步骤。
Emrys微波处理管（20ml）中装入金刚烷三嗪氯化物（adamantinetrizine chloride，200mg，0.65mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（135mg，0.65mmol）、和5ml乙腈。将水性碳酸钠（5ml，1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并通过微波加热至190℃，持续20分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在4ml甲醇中，并用制备型LC进行纯化，得到60mg（收率21%）偶联产物。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.22(m,3H),1.6-1-8(m,12H),2.01(d,3H),3.25-3.42(m,2H),4.0(m,1H),4.40(m,1H),7.6(d,2H),8.2(d,2H),分析型HPLC：RT 3.11,M+1:437(RT:1.76)。
(2S)-2-氨基-3-(4-(4-氨基-6-(1-(金刚烷基)乙氨基)-1,3,5-三嗪-2-基) 苯基)丙酸的别种合成
通过形成氰基胍（1当量）、(S)-2-氨基-3-(4-氰基苯基丙酸（1当量）、和叔丁醇钾（3.5当量，Aldrich）的无水n-BuOH溶液，并将该溶液在密封管中在160℃下剧烈回流2天，来制备金刚烷(2-基)乙基氰基胍。在完成反应后，让混合物冷却至室温，并用水将反应淬灭。在减压下去除溶剂。此外，在冷却至室温后，通过加入1N NaOH将反应混合物带到pH 12-14。然后，在用醚:EtOAc（9:1，2x100ml）萃取时，去除杂质。将水溶液冷却至0℃，然后加入1N HCl以将pH调整至7。淡黄色产物在H2O中缓慢析出，将混合物在冰箱中保持30分钟，并通过过滤获得92%纯度的固体。让化合物从MeOH结晶，得到白色固体（>98%纯度，48-78%收率）。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ1.0(d,3H),1.45-1.6(m,6H),4.62-4.8(m,4H)2.0(m,2H),3.3(m,1H),3.5(m,1H)；分析型HPLC：RT 2.69；M+1:462(RT:1.285)。
(S)-2-氨基-3-(4-(5-氟-4-((R)-1-(萘-2-基)乙氨基)嘧啶-2-基)苯基)丙 酸的合成
Figure BDA00001996271500811
将(R)-(+)-1-(2-萘基)乙胺（102.6mg，0.599mmol）、2,4-二氯-5-氟嘧啶（100mg，0.599mmol）、和碳酸铯（390mg，1.2mmol）的混合物溶解在10ml微波管中的1,4-二噁烷（3ml）和H2O（3ml）中。将混合物在微波反应器中在80℃下搅拌10分钟。将残余物溶解在CH2Cl2（50ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，干燥（Na2SO4），并浓缩，得到中间体2-氯-5-氟-嘧啶-4-基)-(1-萘-2-基-乙基)-胺的粗产物。
然后将中间体粗产物（250mg，0.83mmol）溶解在20ml微波管中的6.0ml MeCN和6ml H2O中。向该溶液中加入L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（173.6mg，0.83mmol）、碳酸钠（173.6mg，1.66mmol）、和催化量的二氯双(三苯基膦)-钯(II)（11.6mg，0.0166mmol）。然后将反应管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌7分钟。然后将内容物过滤，将滤液浓缩并溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化。将合并的纯级分在真空下蒸发，并在冷冻干燥器上进一步干燥，得到154mg 2-氨基-3-{4-[5-氟-4-(1-萘-2-基-乙氨基)-嘧啶-2-基]-苯基}-丙酸。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ1.8(d,3H)3.2-3.4(m,2H),4.35(m,1H),5.7(q,1H),7.5(m,4H),7.6(d,1H),7.8-7.9(m,4H),8.1(d,2H),8.3(d,1H)。LCMS:M+1=431。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(4-(三氟甲基)-苯甲氨基)嘧啶-4-基)苯基) 丙酸的合成
Figure BDA00001996271500821
将三氟甲基苯甲胺（106.8mg，0.610mmol）、2-氨基-4,6-二氯嘧啶（100mg，0.610mmol）、和碳酸铯（217mg，1.2mmol）的混合物溶解在20ml微波管中的1,4-二噁烷（6ml）和H2O（6ml）中。将混合物在微波反应器中在210℃下搅拌25分钟。然后去除溶剂。将残余物溶解在CH2Cl2（50ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，干燥（Na2SO4），并浓缩，得到中间体6-氯-N-4'-(三氟甲基-苯甲基)-嘧啶-2-4-二胺的粗产物。
然后将该中间体粗产物（150mg，0.497mmol）溶解在10ml微波管中的3.0ml MeCN和3ml H2O中。向该溶液中加入L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（104mg，0.497mmol）、碳酸钠（150mg，0.994mmol）、和催化量的二氯双(三苯基膦)-钯(II)（6.9mg，0.00994mmol）。然后将反应管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌5分钟。将内容物过滤，将滤液浓缩并溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA溶剂系统进行纯化。将合并的纯级分在真空下蒸发，并在冷冻干燥器上进一步干燥，得到2-氨基-3-{4-[2-氨基-6-(4-三氟甲基-苯甲氨基)-嘧啶-4-基]-苯基}-丙酸。NMR:1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ3.1-3.3(m,2H),4.2(t,1H),4.7(s,2H),6.3(s,1H),7.4-7.5(m,4H),7.6(d,2H),7.7(d,2H）。LCMS:M+1=432。
2-氨基-3-(5-(5-苯基噻吩-2-基)-1H-吲哚-3-基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500831
将2-氨基-3-(5-溴-1H-吲哚-3-基)-丙酸（0.020g，0.071mmol）加入到5ml微波管中，所述微波管中含有5-苯基-噻吩-2-硼酸（0.016g，0.078mmol）、Na2CO3（0.015g，0.142mmol）、乙腈（1.5ml）/水（1.5ml）、和二氯双(三苯基膦)-钯（3mg，0.003mmol）。将微波管盖上盖子，并在微波辐射下在150℃搅拌5分钟。将反应混合物冷却，通过注射式滤器过滤，然后通过反相制备型HPLC使用YMC-Pack ODS100x30mm ID柱（MeOH/H2O/TFA溶剂系统）进行分离。将纯级分真空浓缩。然后将产物悬浮在5ml水中、冷冻、并冻干，得到5mg纯的产物，2-氨基-3-[5-(5-苯基-噻吩-2-基)-1H-吲哚-3-基]-丙酸。1H-NMR(300MHz,CD3OD):3.21-3.26(m,2H),4.25(q,1H),7.15-7.35(m,8H),7.58(d,2H),7.82(d,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-(4-苯氧基苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)丙酸 的合成
Figure BDA00001996271500832
将1-乙炔基-4-苯氧基-苯（126mg，0.65mmol）和(S)-3-(4-叠氮基-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（200mg，0.65mg）在H2O:二噁烷（5:1）中的混合物在密封管中在100℃下加热过夜。在完成反应后，加入3N HCl（5ml），并将混合物在50℃下搅拌2小时。去除溶剂提供了粗产物，将粗产物溶解在MeOH中，并通过制备型HPLC进行纯化，得到45mg所需要的产物（收率：29%）。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)3.2(m,1H),3.4(m,1H),4.3(m,1H),6.9(d,2H),7.0(d,2H),7.2(m,1H),7.3(d,2H),7.4-7.55(m,6H),8.0(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(4-(4-(噻吩-2-甲酰胺基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基) 苯基)丙酸和(S)-2-氨基-3-(4-(5-(4-(噻吩-2-甲酰胺基)苯基)-1H-1,2,3-三 唑-1-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271500841
将噻吩-2-甲酸(4-乙基-苯基)酰胺（117mg，0.49mmol）和(S)-3-(4-叠氮基-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（150mg，0.49mg）在5ml H2O:二噁烷（5:1）中的混合物在密封管中在100℃下加热过夜。在完成反应后，加入3N HCl（5ml），并将混合物在50℃下搅拌2小时。去除溶剂提供了粗产物，将粗产物溶解在MeOH中，并通过制备型HPLC进行纯化。根据LCMS（保留时间）和NMR，获得了2个区域异构体（总收率：70mg，66%）。主要产物是(S)-2-氨基-3-(4-(4-(4-(噻吩-2-甲酰胺基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)丙酸。NMR:1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ3.2(m,1H),3.4(m,1H),4.3(m,1H),7.15(m,1H),7.3(d,2H),7.6(m,4H),7.0(m,3H),7.95(d,1H),8.0(s,1H）。次要产物是(S)-2-氨基-3-(4-(5-(4-(噻吩-2-甲酰胺基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)苯基)丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ3.2(m,1H),3.4(m,1H),4.35(m,1H),7.2(m,1H),7.3(d,2H),7.5-7.6(m,4H),7.75(m,3H),7.95(d,1H),8.05(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-(苯基乙炔基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合 成
Figure BDA00001996271500851
将2-氨基4,6-二氯嘧啶（0.180g，1.1mmol）、三甲基-苯基乙炔基-锡烷（0.264g，1mmol）溶解在THF（20ml）中，并将混合物在65℃下搅拌12h。LCMS表明反应完成。去除溶剂，并将残余物直接用于接下来的步骤。
将中间体粗产物（0.42g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.210g，1mmol）、碳酸钠（0.210g，2mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（25mg，0.036mmol）溶解在10ml微波管中MeCN（3ml）和H2O（3ml）的混合物中。将管密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液。通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统纯化残余物，获得作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-苯基乙炔基-嘧啶-4-基(-苯基]-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)3.20-3.42(m,2H),4.31(m,1H),7.40-7.51(m,6H),7.62(d,2H),8.18(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧 基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500852
将四丁基氟化铵（0.027ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到4-吡啶-4-基-苯甲醛（500mg，2.73mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（485μl，3.28mmol）在5ml THF中的0℃溶液中。将所产生的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂至干燥，加入9ml 1M碳酸钠水溶液，用氯仿（3x10ml）萃取水相，并将合并的氯仿层用水洗涤，用MgSO4干燥。在真空下去除有机溶剂，得到360mg2,2,2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)乙醇，收率：51%。
将2,2,2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)乙醇（100mg，0.40mmol)、2-氨基-4,6-二氯嘧啶（60mg，0.38mmol）、和碳酸铯（468mg，1.44mmol）的混合物溶解在50ml密封管中的2ml 1,4-二噁烷中。将混合物在110℃下加热过夜，然后冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯，然后通过硅藻土过滤。浓缩滤液，得到120mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺，收率：80%。
在微波小瓶中，将4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺（30mg，0.080mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（21mg，0.098mmol）和1ml乙腈、和0.7ml水混合在一起。然后，向混合物中加入0.3ml 1N水性碳酸钠，接着加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到6.7mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-嘧啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)8.82(s,2H),8.26(s,2H),8.02(d,J=8Hz,2H),7.97(d,J=8.4Hz,2H),7.86(d,J=8.4Hz,2H),7.45(d,J=8Hz 2H),6.89(q,J=6.8Hz,1H),6.81(d,J=2Hz,1H),4.29(t,J=1.6Hz,1H),3.39(m,1H),3.19(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶 -4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500871
将四丁基氟化铵（0.027ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到2-吡啶-4-基-苯甲醛（500mg，2.73mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（485μl，3.28mmol）在5ml THF中的0℃溶液中。将所形成的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂至干燥，加入9ml 1M碳酸钠水溶液，用氯仿（3x10ml）萃取水相，并将合并的有机层用水洗涤，用MgSO4干燥。蒸发有机溶剂，得到300mg 2,2,2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)乙醇，收率：43%。
2,2,2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)乙醇（100mg，0.40mmol）、4,6-二氯-嘧啶（54mg，0.38mmol）、碳酸铯（468mg，1.44mmol）、和1,4-二噁烷（1ml）的混合物。将混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温。加入10ml乙酸乙酯，然后将混合物通过硅藻土过滤。浓缩滤液，得到110mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶，收率：76%。
在微波管中，将4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(4-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶（30mg，0.082mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（21mg，0.098mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水混合在一起。然后，向混合物中加入0.3ml 1N水性碳酸钠，接着加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到19mg(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-吡啶-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)8.94(d,J=6Hz,2H),8.79(d,J=1.2Hz,1H),8.15(m,4H),7.84(t,J=5.2Hz,1H),7.62(m,3H),7.46(m,3H)。6.66(q,J=6.4Hz,1H),4.31(q,J=6Hz,1H),3.41(m,1H),3.26(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯 基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500881
在微波管中，将3-溴-4-甲基-噻吩（653mg，3.69mmol）、2-甲酰基苯基硼酸（500mg，3.36mmol）、和7ml乙腈混合在一起。将6.7ml 1N水性碳酸钠加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，加入50ml乙酸乙酯，将有机层分离，用水洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到粗产物，通过ISCO CombiFlash柱纯化粗产物，得到530mg 2-(4-甲基-噻吩-3-基)苯甲醛，收率：78%。
将四丁基氟化铵（0.013ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到2-(4-甲基噻吩-3-基)-苯甲醛（260mg，1.29mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（228μl，1.54mmol）在5ml THF中的0℃溶液中。将所形成的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x50ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到340mg 2,2,2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙醇，收率97%。
将2,2,2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙醇（100mg，0.37mmol）、2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（54mg，0.33mmol）、碳酸铯（481mg，1.48mmol）、和1,4-二噁烷（1ml）的混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后将混合物通过硅藻土过滤，浓缩滤液，得到100mg 4-氯-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺，收率：76%。
在微波管中，混合4-氯-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺（30mg，0.075mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（19mg，0.09mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向混合物中加入0.3ml 1N水性碳酸钠，然后加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到15.1mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-(4-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)7.94(d,J=8Hz,2H),7.80(s,1H),7.50(m,5H),7.25(m,2H),7.03(s,1H),6.94(s,1H),4.31(t,J=5.6,1H),3.48(m,1H),3.26(m,1H),1.98(s,3H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯 基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500891
在微波管中，混合4-溴-2-甲基-噻吩（653mg，3.69mmol）、2-甲酰基苯基硼酸（500mg，3.36mmol）、和7ml乙腈。将6.7ml 1N水性碳酸钠加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，加入50ml乙酸乙酯，将有机层分离，用水洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发有机溶剂，并通过ISCO纯化残余物，得到550mg 2-(5-甲基-噻吩-3-基)苯甲醛，收率81%。
将四丁基氟化铵（0.028ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到2-(5-甲基噻吩-3-基)-苯甲醛（550mg，1.29mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（483μl，3.27mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将所形成的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用10ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x50ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到650mg 2,2,2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙醇，收率：87%。
将2,2,2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙醇（100mg，0.37mmol）、2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（54mg，0.33mmol）、碳酸铯（481mg，1.48mmol）、和1,4-二噁烷（2ml）的混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后将混合物通过硅藻土过滤，浓缩滤液，得到90mg 4-氯-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺，收率：68%
在微波管中，混合4-氯-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺（30mg，0.075mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（19mg，0.09mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向混合物中加入0.3ml 1N水性碳酸钠，然后加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到10.1mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-(5-甲基-噻吩-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1HNMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)7.83(d,J=8.4Hz,2H),7.63(d,J=7.2Hz,1H),7.34(m,4H),7,26(m,1H),7.12(d,J=1.2Hz,1H),6.92(q,J=6.8,1H),6.82(d,J=1.2Hz,1H),6.64(s,1H),4.21(t,J=5.6Hz,1H),3.29(m,1H),3.20(m,1H),2.47(s,3H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧 基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500911
在微波管中，混合3-溴-呋喃（590mg，4.02mmol）、4-甲酰基苯基硼酸（600mg，4.02mmol）、和7ml乙腈。然后向混合物中加入8ml1N水性碳酸钠，接着加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热7分钟。在冷却后，加入50ml乙酸乙酯，将有机层分离，用水洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到粗产物，通过ISCO纯化粗产物，得到410mg 4-呋喃-3-基-苯甲醛，收率：60%。
将四丁基氟化铵（0.024ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到4-呋喃-3-基-苯甲醛（410mg，2.38mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（423μl，2.86mmol）在5ml THF中的0℃溶液中。将所形成的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x50ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到480mg 2,2,2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙醇，收率：83%。
将2,2,2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙醇（100mg，0.4mmol）、2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（60mg，0.36mmol）、碳酸铯（468mg，1.44mmol）、和1,4-二噁烷（1ml）的混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后将混合物通过硅藻土过滤，浓缩滤液，得到110mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺，收率：72%。
在微波管中，混合4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺（30mg，0.081mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（20mg，0.098mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。然后，向混合物中加入0.3ml1N水性碳酸钠，接着加入5mol%二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到7.2mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)7.96(m,3H),7.61(m,5H),6.81(s,1H),6.77(d,J=6.8Hz,1H),6.74(d,J=4,8Hz,1H),4.27(q,J=5.6Hz,1H),3.36(m,1H),3.21(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-[4-{2-氨基-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯 基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
将三乙酰氧基硼氢化钠（844mg，4mmol）加入到5-溴-呋喃-2-甲醛（350mg，2mmol）和二甲胺（2ml，2M的THF溶液）在10ml1,2-二氯乙烷（DCE）中的溶液中。然后加入0.2ml HOAc。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入15ml DCE。将有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到400mg(5-溴-呋喃-2-基甲基)-二甲基-胺，收率：97%。
在微波管中，混合(5-溴-呋喃-2-基甲基)-二甲基-胺（385mg，1.88mmol）、2-甲酰基苯基硼酸（288mg，1.93mmol）、和3.7ml乙腈。然后，向混合物中加入3.7ml 1N水性碳酸钠，接着加入5mol%氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射法150℃下加热5分钟。在冷却后，加入20ml 1N HCl。通过乙酸乙酯（3x10ml）萃取混合物，并丢弃乙酸乙酯层。向水相加入1N NaOH溶液以将pH调整到10，然后用乙酸乙酯（3x20ml）萃取。将合并的有机层用水洗涤，并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，得到300mg 2-(4-二甲基氨基甲基-环戊-1,3-二烯基)-苯甲醛，收率：69%。
将四丁基氟化铵（0.013ml；在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到2-(4-二甲基氨基甲基-环戊-1,3-二烯基)-苯甲醛（287mg，1.25）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3）（222μl，1.5mmol）在5ml THF中的0℃溶液中。将所形成的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用5ml 1N HCl处理，并在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x50ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到250mg 1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇，收率66%。
将1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（225mg，0.75mmol）、2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（111mg，0.67mmol）、碳酸铯（978mg，3.01mmol）、和1,4-二噁烷（3ml）的混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温；加入10ml乙酸乙酯。然后将混合物通过硅藻土过滤，浓缩滤液，得到110mg 4-氯-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-2-基胺，收率87%。
在微波管中，混合4-氯-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-2-基胺（37mg，0.087mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（22mg，0.10mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。然后，加入0.3ml 1N水性碳酸钠，接着加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型LC进行纯化，得到16mg(S)-2-氨基-3-[4-{2-氨基-6-{1-[2-(5-二甲基氨基甲基-呋喃-2-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)7.88(d,J=8.4Hz,2H),7.71(d,J=7.6Hz,1H),7.62(d,J=7.6Hz,1H),7.42(m,2H),7.40(d,J=1.6Hz,2H),7.34(d,J=8.4Hz,1H),6.89(q,J=3.6Hz,2H),6.66(s,1H),4.54(s,2H),4.20(q,J=6Hz,1H),3.3(m,1H),3.14(m,1H),2.84(s,6H)。
(S)-2-氨基-3[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基-吡啶-3-基)-苯基]-2,2,2-三 氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500941
在微波管中，混合5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶-2-甲腈（279mg，1.51mmol）、2-溴-苯甲醛（230mg，1mmol）、和2ml乙腈。然后，加入2ml 1N水性碳酸钠，接着加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在100℃下加热10分钟。在冷却后，加入50ml乙酸乙酯，将有机层分离，用水洗涤，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂得到粗产物，通过ISCO纯化粗产物，得到150mg 5-(2-甲酰基-苯基)-吡啶-2-甲腈，收率72%。
将四丁基氟化铵（5.3μl，在四氢呋喃中的1.0M溶液）加入到5-(2-甲酰基-苯基)-吡啶-2-甲腈（110mg，0.53mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（120μl，0.81mmol）在5ml THF中的0℃溶液中。将所形成的混合物升温至室温，并在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物用5ml 1NHCl处理，并在室温下搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x50ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到140mg5-[2-(2,2,2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-吡啶-2-甲腈，收率95%。
将5-[2-(2,2,2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-吡啶-2-甲腈（46mg，0.165mmol）、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（59mg，0.15mmol）、碳酸铯（195mg，0.6mmol）、和1,4-二噁烷（1ml）的混合物在110℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，然后倒到5ml水中。加入1N HCl以将pH调整到4.5，用乙酸乙酯（3x10ml）萃取水相。将合并的有机层用盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。蒸发溶剂，得到80mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基吡啶-3-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸粗产物，收率84%。
将80mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基吡啶-3-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸溶解在30%三氟乙酸的二氯甲烷（5ml）溶液中。将混合物在室温下搅拌1小时。蒸发溶剂，并通过制备型HPLC纯化残余物，得到12.6mg(S)-2-氨基-3[4-(2-氨基-6-{1-[2-(6-氰基-吡啶-3-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ(ppm)8.86(s,1H),8.17(d,J=2Hz,1H),8.15(d,J=2Hz,1H),7.96(m,2H),7.59(m,1H),7.36(m,3H),6.7(s,1H),6.65(d,J=6.8Hz,1H),4.25(m,1H),3.47(m,1H),3.23(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2，2，2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙氧 基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500951
向含2-咪唑-1-基-苯甲醛（0.344g，2mmol）的THF（8ml）中加入三氟甲基三甲基硅烷（0.341g，2.4mmol）。将反应混合物冷却至0-5℃（冰水浴），并加入氟化四正丁基铵（0.035ml，0.035mmol，1M，在THF中）。移除冰浴，并将混合物在室温下搅拌6小时。加入2N HCl（5ml），并将反应混合物进一步在室温下搅拌3小时。在减压下在旋转蒸发器上去除溶剂。将粗残余物溶解在DCM（30ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂，得到2,2,2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙醇（0.45g，93%）粗产物，该粗产物被直接用于下一个步骤。
在氮气下将2-氨基-4,6-二氯嘧啶（0.107g，0.65mmol）、2,2,2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙醇（0.157g，0.65mmol）、和NaH（0.03g，0.78mmol）加入到无水THF（10ml）中。将反应物在40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水（0.2ml）淬灭。浓缩反应混合物，得到4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺粗产物（0.24g，通过LCMS测得纯度>90%），该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将上述中间体粗产物（0.24g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.140g，0.67mmol）、碳酸钠（0.14g，1.32mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（15mg，0.021mmol）溶解在微波管中MeCN（2.0ml）和H2O（2.0ml）的混合物中。将反应混合物密封，并在微波反应器中在150℃下搅拌6分钟。过滤混合物，并浓缩滤液。将残余物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-(4-[2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-苯基-丙酸。LCMS:M+1=499。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)3.20-3.41(m,2H),4.30(t,1H),6.61(m,1H),6.88(s,1H),7.48(d,2H),7.69(d,1H),7.72-7.81(m,2H),7.83(m,1H),7.98(m,3H),8.02(m,1H),9.40(m,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶 -4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500971
向含2-吡唑-1-基-苯甲醛（0.344g，2mmol）的THF（8ml）中加入三氟甲基三甲基硅烷（0.341g，2.4mmol）。将混合物冷却至0-5℃（冰水浴），并加入氟化四正丁基铵（0.035ml，0.035mmol，1M，在THF中）。移除冰浴，并将混合物在室温下搅拌6小时。加入2N HCl（5ml），并将反应混合物进一步在室温下搅拌3小时。在减压下在旋转蒸发器上去除溶剂。将残余物溶解在DCM（30ml）中，用水（20ml）、盐水（20ml）洗涤，并用硫酸钠干燥。在真空下去除溶剂，得到2,2,2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙醇（0.45g，93%）粗产物，该粗产物被直接用于接下来的实验。
在氮气氛下将4,6-二氯嘧啶（0.082g，0.55mmol）、2,2,2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙醇（0.121g，0.50mmol）、NaH（0.03g，0.78mmol）加入到无水THF（10ml）中。将反应物在40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水（0.2ml）淬灭。浓缩反应混合物，以提供4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶粗产物（0.20g，通过LCMS测得纯度>90%），该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将该中间体粗产物（0.20g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.105g，0.50mmol）、碳酸钠（0.105g，1mmol）、二氯双(三苯基膦)-钯(II)（15mg，0.021mmol）溶解在微波管中MeCN（2.0ml）和H2O（2.0ml）的混合物中。将管密封，并将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热6分钟。过滤混合物，并浓缩滤液。将残余物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，然后通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-(4-[6-[2,2,2-三氟-1-(2-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-苯基-丙酸。LCMS:M+1=484。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)3.20-3.40(m,2H),4.30(t,1H),6.63(s,1H),7.10(m,1H),7.50(m,3H),7.60(m,3H),7.84(m,2H),8.16(m,3H),8.68(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500981
将2,2,2-三氟-1-(2-碘-苯基)-乙醇（0.331g，1.1mmol）、3-三氟甲基吡唑（0.136g，1.0mmol）、CuI（0.019g，0.1mmol）、K2CO3（0.290g，2.1mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己基-1,2-二胺（0.028g，0.2mmol）、和甲苯（10ml）合并在20ml压力管中。将混合物在130℃（油浴温度）下加热12小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，并用H2O（2x20ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到140mg 2,2,2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇。
在氮气氛下将2-氨基-4,6-二氯嘧啶（0.074g，0.45mmol）、2,2,2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（0.140g，0.45mmol）、和NaH（0.022g，0.59mmol）加入到无水THF（10ml）中。将反应物在40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水（0.2ml）淬灭。浓缩反应混合物，得到4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-[2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基)苯基]-乙氧基]-嘧啶-2-基胺粗产物（0.21g，通过LCMS测得纯度>90%），该粗产物被直接用于下一个步骤。
将中间体粗产物（0.21g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.1g，0.48mmol）、碳酸钠（0.1g，0.94mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（15mg，0.021mmol）溶解在微波管中MeCN（2.0ml）和H2O（2.0ml）的混合物中。将管密封，并将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热6分钟。将反应混合物过滤，并浓缩滤液，得到粗产物，将粗产物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-(3-三氟甲基-吡唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基]-苯基-丙酸。LCMS:M+1＝567。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)3.2(m,1H),3.35(m,1H),4.30(t,1H),6.80(s,1H),6.85(m,1H),6.98(d,1H),7.45(d,2H),7.59(m,1H),7.68(m,2H),7.88(m,1H),7.95(d,2H),8.20(1H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(3,5-二甲基-吡唑-1-基)-苯 基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271500991
将2,2,2-三氟-1-(2-碘-苯基)-乙醇（0.331g，1.1mmol）、3,5-二甲基吡唑（0.096g，1.0mmol）、CuI（0.019g，0.1mmol）、K2CO3（0.290g，2.1mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（0.028g，0.2mmol）、和甲苯（10ml）合并在20ml压力管中，并将混合物在130℃（油浴温度）下加热12小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（2x20ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到1-[2-(3,5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（120mg）。
在氮气氛下将2-氨基-4,6-二氯嘧啶（0.074g，0.45mmol）、1-[2-(3,5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（0.120g，0.45mmol）、NaH（0.022g，0.59mmol）加入到无水THF（10ml）中。将反应物在40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水（0.2ml）淬灭。浓缩反应混合物，得到4-氯-6-{1-[2-(3,5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-2-基胺粗产物（0.195g，通过LCMS测得纯度>90%），该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将所述中间体粗产物（0.195g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.10g，0.48mmol）、碳酸钠（0.10g，0.95mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（15mg，0.021mmol）溶解在微波管中MeCN（2.0ml）和H2O（2.0ml）的混合物中。将管密封，并将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液，得到粗产物，将粗产物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-[1-(2-(3,5-二甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。LCMS:M+1=527。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)4.32(t,1H),3.39(m,1H),3.25(m,1H),2.30(s,3H),2.10(s,3H),7.92(m,3H),7.68(m,2H),7.50(d,2H),7.42(m,1H),6.92(m,1H),6.89(s,1H),6.17(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯 基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501001
将2,2,2-三氟-1-(2-碘-苯基)-乙醇（0.331g，1.1mmol）、3-苯基吡唑（0.144g，1.0mmol）、CuI（0.019g，0.1mmol）、K2CO3（0.290g，2.1mmol）、(1R,2R)-N,N’-二甲基-环己-1,2-二胺（0.028g，0.2mmol）、和甲苯（10ml）装入20ml压力管中，并将混合物在130℃（油浴温度）下加热12小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（2x20ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到2,2,2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（75mg）。
在氮气氛下将2-氨基-4,6-二氯嘧啶（0.041g，0.25mmol）、2,2,2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（0.070g，0.22mmol）、和NaH（0.012g，0.31mmol）加入到无水THF（7ml）中。将反应物在40-45℃下搅拌6小时，然后冷却至室温，并用水（0.04ml）淬灭。浓缩反应混合物，得到4-氯-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基]-嘧啶-2-基胺粗产物（0.110g，通过LCMS测得纯度>90%），该粗产物被直接用于接下来的步骤。
将中间体粗产物（0.110g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.050g，0.24mmol）、碳酸钠（0.050g，0.48mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（8mg，0.010mmol）溶解在微波管中MeCN（2.0ml）和H2O（2.0ml）的混合物中。将管密封，并将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热6分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液，得到粗产物，将粗产物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(3-苯基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。LCMS:M+1=575。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)3.20(m,1H),3.38(m,1H),4.30(t,1H),6.80(s,1H),7.00(s,1H),7.30-7.48(m,7H),7.62(m,3H),7.90(m,4H),8.10(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡唑 -1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501021
将1-(2-溴-5-甲氧基-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（0.570g，2.0mmol）、4-甲基吡唑（0.164g，2.0mmol）、CuI（0.057g，0.3mmol）、K2CO3（0.580g，4.2mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（0.071g，0.5mmol）、和甲苯（10ml）合并在20ml压力管中，并将混合物在130℃（油浴温度）下加热12小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（2x20ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到2,2,2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（90mg）。
将2,2,2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（0.090g，0.31mmol）、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（0.122g，0.31mmol）、1,4-二噁烷（2ml）、Cs2CO3（0.503g，1.55mmol）合并在微波管中，并加热至180℃，持续45分钟。将混合物过滤并浓缩。向残余物加入含5%甲醇的DCM（50ml）。将混合物过滤。浓缩滤液得到粗产物，将粗产物放入含20% TFA的DCM（30ml）中，并在室温下搅拌30分钟。LCMS表明反应完成，并具有所需要的产物。浓缩反应混合物，得到粗产物，将粗产物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[5-甲氧基-2-(4-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基]-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。
LCMS:M+1=543。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.20(s,3H),3.22(m,1H),3.40(m,1H),3.84(s,3H),4.35(t,1H),6.84(s,1H),6.98(m,1H),7.18(m,1H),7.26(m,1H),7.40(d,1H),7.48(d,2H),7.66(d,2H),7.96(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(R)-2,2,2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501031
将R-1-(2-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（1.53g，6mmol）、3-甲基吡唑（0.492g，6mmol）、CuI（0.456g，2.4mmol）、K2CO3（2.07g，15mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（0.170g，1.2mmol）、和甲苯（10ml）合并在20ml压力管中，并将混合物在130℃（油浴温度）下加热12小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（2x20ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到R-2,2,2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（1.8g）。
在氮气氛下将2-氨基-4,6-二氯嘧啶（1.2g，7.4mmol）、R-2,2,2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（1.8g，7.03mmol）、和NaH（0.380g，10mmol）加入到无水THF（40ml）中。将反应物在40-45℃下搅拌6h，然后冷却至室温，并用水（0.1ml）淬灭。浓缩反应混合物，得到4-氯-6-{R-2,2,2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基]-嘧啶-2-基胺（3.0g，通过LCMS测得纯度>90%），该产物被直接用于接下来的步骤。
将该中间体粗产物（0.750g）、L-对-二羟硼基-苯丙氨酸（0.420g，2.0mmol）、碳酸钠（0.430g，4.0mmol）、和二氯双(三苯基膦)-钯(II)（30mg，0.043mmol)溶解在微波管中MeCN（7.0ml）和H2O（7.0ml）的混合物中。将管密封，并将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热7分钟。将混合物过滤，并浓缩滤液，得到粗产物，将粗产物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-2,2,2-三氟-1-[2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。LCMS:M+1＝514。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.40(s,3H),3.30(m,1H),3.42(m,1H),4.38(t,1H),6.21(s,1H),7.02(s,1H),7.18(m,1H),7.54(d,1H),7.61(m,4H),7.82(m,2H),7.97(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯 基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501041
将1-(4-氯-2-碘-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（0.840g，2.5mmol）、3-甲基吡唑（0.230g，2.8mmol）、CuI（0.190g，1.0mmol）、K2CO3（0.863g，6.25mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（0.071g，0.5mmol）、和甲苯（10ml）合并在20ml压力管中，并将混合物在130℃（油浴温度）下加热12小时。将混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（2x20ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（240mg）。
将1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（0.120g，0.41mmol）、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（0.176g，0.45mmol）、1,4-二噁烷（4ml）、和Cs2CO3（0.533g，1.64mmol）合并在20ml密封管中，并将混合物在100℃下加热12小时。将混合物浓缩。向残余物加入含10%甲醇的DCM（50ml），并将混合物过滤。浓缩滤液得到粗产物，将粗产物放入在THF/3N HCl（30ml/15ml）中，并将所产生的混合物40-45℃下搅拌12小时。LCMS表明反应完成，并具有所需要的产物。浓缩混合物，得到粗产物，将粗产物溶解在MeOH和H2O（1:1）中，并通过制备型HPLC使用MeOH/H2O/TFA作为溶剂系统进行纯化，得到作为TFA盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。LCMS:M+1=547。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.30(s,3H),3.10-3.30(m,2H),4.20(t,1H),6.32(d,1H),6.74(s,1H),7.0(q,1H),7.38(d,2H),7.50(m,2H),7.72(m,1H),7.90(m,3H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯 基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸乙酯的合成
分步制备标题化合物，如下所述：
步骤1：合成1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-乙酮.在0-5℃（冰水浴）下向含有无水甲醇（300ml）的500ml 2颈RB烧瓶中经10分钟滴加入亚硫酰氯（29.2ml，400mmol）。移除冰水浴，并加入2-溴-4-氯-苯甲酸（25g，106mmol）。加热混合物，以轻度回流12h。通过TLC和LCMS监测反应的进展。在完成反应后，浓缩反应混合物。将粗产物溶解在二氯甲烷（DCM，250ml）中，用水（50ml）、饱和水性NaHCO3（50ml）、盐水（50ml）洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，得到2-溴-4-氯-苯甲酸甲酯（26g，99%），该产物被直接用于接下来的步骤。
将含2-溴-4-氯-苯甲酸甲酯（12.4g，50mmol）的甲苯（200ml）冷却至-70℃，并加入三氟甲基三甲基硅烷（13ml，70mmol）。滴加四丁基氟化铵（1M，2.5ml），并让混合物经4h升温至室温，然后将它在室温下搅拌10小时。浓缩反应混合物，得到[1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-1-甲氧基-乙氧基]-三甲基-硅烷粗产物。将该中间体粗产物溶解在甲醇（100ml）中，并加入6N HCl（100ml）。将混合物在45-50℃下保持12h。去除甲醇，并用二氯甲烷（200ml）萃取粗产物。将合并的DCM层用水（50ml）、NaHCO3（50ml）、盐水（50ml）洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含1-2%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-乙酮（10g，70%）。1H-NMR(300MHz,CDCl3):δ(ppm)7.50(d,1H),7.65(d,1H),7.80(s,1H)。
步骤2：合成R-1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇.在氮气下向2L 3-颈RB烧瓶中的儿茶酚硼烷（1M，在THF中，280ml，280mmol）添加S-2-甲基-CBS噁唑硼烷（7.76g，28mmol），并将所产生的混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物冷却至-78℃（干冰/丙酮浴），经2小时滴加入含1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-乙酮（40g，139mmol）的THF（400ml）。让反应混合物升温至-36℃，在该温度下搅拌24小时，并进一步在-32℃下另外搅拌24h。加入3N NaOH（250ml），并用冰水浴代替冷却浴。然后，经30分钟滴加入30%过氧化氢水溶液（250ml）。移除冰水浴，并将混合物在室温下搅拌4小时。将有机层分离、浓缩、并重新溶解在醚（200ml）中。用醚（2x200ml）萃取水性层。将合并的有机层用1N水性NaOH（4x100ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过柱色谱法使用含2至5%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到所需要的醇36.2g（90%，e.e.>95%）。让该醇（36.2g）从己烷（80ml）结晶，获得R-1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇28.2g（70%；99-100% e.e.）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm)5.48(m,1H),7.40(d,1H),7.61(d,2H）。
步骤3：合成R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙 醇.将R-1-(2-溴-4-氯-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（15.65g，54.06mmol）、3-甲基吡唑（5.33g，65mmol）、CuI（2.06g，10.8mmol）、K2CO3（15.7g，113.5mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（1.54g，10.8mmol）、和甲苯（80ml）合并在250ml压力管中，并加热至130℃（油浴温度），持续12小时。将反应混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（4x100ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇(13.5g；86%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm)2.30(s,3H),4.90(m,1H),6.20(s,1H),6.84(d,1H),7.20(s,1H),7.30(d,1H),7.50(d,1H)。
步骤4：合成(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑 -1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸乙酯.将R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（17.78g，61.17mmol）、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（20.03g，51mmol）、1,4-二噁烷（250ml）、和Cs2CO3（79.5g，244mmol）合并在3-颈500ml RB烧瓶中，并加热至100℃（油浴温度），持续12-24小时。通过LCMS监测反应的进展。在完成反应后，将混合物冷却至60℃，并加入水（250ml）和THF（400ml）。将有机层分离，并用盐水（150ml）洗涤。去除溶剂，得到BOC保护的粗产物，将该粗产物放入在THF（400ml）、3N HCl（200ml）中。将该混合物在35-40℃下加热12小时。在真空下去除THF。将剩余的水性层用乙酸异丙酯（2x100ml）萃取并单独浓缩，以回收未反应的醇（3.5g）。在真空下从水性级分去除痕量的剩余的有机溶剂。
向装备有温度控制器和pH计的1L烧杯中加入H3PO4（40ml，85%水溶液）和水（300ml），然后加入50% NaOH水溶液以将pH调整到6.15。将温度上升至58℃，并将上面的酸性水溶液滴加到该缓冲液中，同时加入50% NaOH水溶液，使pH维持在6.1至6.3之间。在完成添加后，将沉淀的固体过滤，用热水（50-60℃）（2x200ml）洗涤，并干燥，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸粗产物（26.8g；95%）。LCMS和HPLC分析表明化合物的纯度为约96-97%。
在0-5℃下向无水乙醇（400ml）滴加SOCl2（22ml，306mmol）。加入来自上面的反应的酸粗产物（26.8g）。移除冰水浴，并将反应混合物在40-45℃下加热6-12小时。在完成反应后，在真空中去除乙醇。向残余物添加冰水（300ml），并用乙酸异丙酯（2x100ml）萃取。用饱和的Na2CO3中和水溶液，以将pH调整到6.5。用乙酸乙酯（2x300ml）萃取溶液。将合并的乙酸乙酯层用盐水洗涤并浓缩，得到24g酯粗产物(HPLC纯度为96-97%）。然后通过ISCO柱色谱法使用含5%乙醇的DCM作为溶剂来纯化该酯粗产物，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸乙酯（20.5g；70%；HPLC纯度为98%）。LCMS M+1=575。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)1.10(t,3H),2.25(s,3H),2.85(m,2H),3.65(m,1H),4.00(q,2H),6.35(s,1H),6.60(s,1H),6.90(m,1H),7.18(d,2H),7.45(m,2H),7.70(d,1H),7.85(m,3H)。
(S)-2-氨基-3-(4-(2-氨基-6-((R)-1-(4-氯-2-(3-甲基-1H-吡唑-1-基)苯 基)-2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基)苯基)丙酸的合成
Figure BDA00001996271501081
将(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸乙酯（22.2g,38.6mmol）溶解在THF（220ml）和水（50ml）中。加入氢氧化锂一水合物（5.56g，132mmol）。将反应混合物在室温下搅拌12h。去除THF，并向残余物添加水（100ml），得到澄清的溶液。
向装备有温度控制器和pH计的1L烧杯中加入H3PO4（40ml，85%水溶液）、水（300ml）和50% NaOH水溶液，将pH调整到6.15。将温度上升至58℃，并将化合物的水性Li盐滴加到该缓冲液中，同时加入3N HCl，使pH维持在6.1至6.2。在完成添加后，将沉淀的固体过滤，用热水（50-60℃）（2x200ml）洗涤，并干燥，得到(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸（19.39g；92%）。LCMS和HPLC分析表明化合物的纯度为约98-99%。LCMS M+1=547。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.40(s,3H),3.22-3.42(m,2H),4.38(t,1H),6.42(s,1H),7.10(s,1H),7.21(m,1H),7.60(m,4H),7.81(d,1H),7.92(m,3H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-噻唑-2-基-苯基)-乙氧 基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501091
向40ml微波反应器中加入1.04g 2-甲酰基苯基硼酸（6.9mmol）、1.14g 2-溴噻唑（6.9mmol）、240mg双三苯基膦二氯化钯（Pd(PPh3)2Cl2,0.34mmol）。然后，向混合物中加入13.8ml 1M Na2CO3（13.8mmol）和10ml CH3CN。将反应器密封，并将反应在微波下在160℃下运行5分钟。LCM表明反应完成，并具有所需要的产物。然后将反应混合物倒到分液漏斗中。然后加入200ml二氯甲烷和100ml水，用于萃取。将二氯甲烷层用MgSO4干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过硅胶柱色谱法，用己烷/乙酸乙酯混合物（5/1至2/1）洗脱来纯化粗产物，得到纯的2-噻唑-2-基-苯甲醛（0.5g，收率：38%）。
向50ml圆底烧瓶中加入184mg 2-噻唑-2-基-苯甲醛（0.97mmol）和10ml无水四氢呋喃（THF）。然后，向该溶液中加入145.4mg三氟甲基三甲基硅烷（1.02mmol）和20μl含1M四丁基氟化铵（tert-butylammonium fluoride）的THF（0.02mmol）。将混合物在室温下搅拌过夜，然后加入10ml 1N HCl，并将反应混合物在室温下搅拌15分钟。在真空中去除THF，并用二氯甲烷（3x50ml）萃取混合物。将合并的CH2Cl2层用MgSO4干燥。去除溶剂提供了262mg粗产物，粗产物的纯度为约95%，无需进一步纯化就用于下一个步骤。
在50ml密封管中将2,2,2-三氟-1-(2-噻唑-2-基-苯基)-乙醇（260mg，1mmol）、(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（390mg，1mmol）、碳酸铯（1.3g，4mmol）、和10ml1,4-二噁烷混合在一起。将反应混合物在100℃下加热3天。加入水（20ml），然后缓慢加入1N HCl水溶液以将pH调整到4，接着在真空中去除1,4-二噁烷，并用二氯甲烷（3x50ml）萃取所产生的混合物。将合并的二氯甲烷层用MgSO4干燥。去除溶剂提供了粗产物，该粗产物无需进一步纯化就被用于下一步的反应。
将上述粗产物溶解在5ml二氯甲烷中，并加入0.4ml三氟乙酸。将混合物在室温下搅拌过夜。然后在真空中去除三氟乙酸得到粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到63mg纯的产物。HPLC；YMC PackODS-A 3x50mm，7um；溶剂A=具有0.1% TFA的水；溶剂B=具有0.1% TFA的甲醇。溶剂B经4分钟从10至90%；流速=2ml/分钟；RT=3分钟。HPLC纯度=100%。LCMS:M+1=515.9。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06ppm(2H,m)；7.92(2H,d,J=8Hz)；7.84(1H,m)；7.81(1H,m)；7.77(1H,d,J=4Hz)；7.57(2H,m)；7.45(2H,d,J=8Hz)；6.84(1H,s)；4.30(2H,dd,J=8Hz)；3.38(2H,dd,J=12,2Hz)；3.23(2H,dd,J=12,8Hz)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(吡啶-3-基氧基)-苯基]- 乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸；(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟 -1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸；(S)-2-氨 基-3-[4-(6-{2,2,2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)- 苯基]-丙酸；(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-噻吩-2-基-苯 基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸；(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟 -1-(4-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸；和(S)-2-氨基 -3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-[1,2,4]三唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶 -4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501111
Figure BDA00001996271501112
Figure BDA00001996271501121
使用如下所示一般方法制备标题化合物：
Figure BDA00001996271501122
在该方法中，在0℃下将四正丁基氟化铵（0.05当量）加入到取代的苯甲醛（1当量）和三氟甲基三甲基硅烷（1.2当量）在THF中的混合物中。然后让温度升温至室温。将混合物在室温下搅拌5小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，并用MgSO4干燥。在减压下去除溶剂，得到作为粗产物的三氟-醇，该粗产物无需进一步纯化就用于下一个步骤。
将上面制成的醇（1当量）溶解在无水1,4-二噁烷中。立刻加入氢化钠（60%，在矿物油中，1.2当量），并将混合物在室温下搅拌30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯嘧啶（1当量），并将所产生的混合物在80℃下搅拌2小时。去除溶剂，并将残余物悬浮在乙酸乙酯中，用水洗涤，用MgSO4干燥，然后浓缩，得到所需要的一氯化物产物，该产物无需进一步纯化就用于下一个步骤。
将上述粗产物（1当量）加入到含有4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（1当量）、Na2CO3（2当量）、乙腈（2ml）、水（2ml）、和二氯双(三苯基膦)-钯（0.05当量）的5ml微波管中。将管盖上盖子，并在微波辐射下将混合物在150℃下加热5分钟。将混合物冷却，通过注射式滤器过滤，然后通过反相制备型HPLC使用YMC-Pack ODS 100x30mmID柱（MeOH/H2O/TFA溶剂系统）进行分离。将纯级分合并，并真空浓缩。然后将产物悬浮在5ml水中、冷冻、并冻干，得到作为三氟乙酸（TFA）盐的产物。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.05-3.40(m,2H),3.81(m,1H),6.64(s,1H),7.01(d,1H),7.15-7.54(m,7H),7.74(d,1H),7.94(d,2H),8.35(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.20-3.41(m,2H),4.30(m,1H),6.81(m,2H),7.17(m,2H),7.46-7.69(m,6H),7.93(d,2H),8.41(s,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(6-{2,2,2-三氟-1-[4-(吡啶-3-基氧基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(300MHz,CD3OD)δ：3.15-3.35(m,2H),4.25(t,1H),6.90(q,1H),7.25(d,2H),7.45(d,2H),7.71(m,3H),7.99(m,3H),8.14-8.18(m,1H),8.55(d,1H),8.63(d,1H),8.84(d,1H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-(4-噻吩-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.03-3.31(m,2H),4.19(m,1H),6.68(m,2H),7.00(m,1H),7.31-7.36(m,4H),7.52(m,2H),7.62(d,2H),7.85(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(4-咪唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.03-3.31(m,2H),4.19(m,1H),6.88(m,1H),7.32-8.63(m,11H),8.64(s,1H),9.25(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-[1,2,4]三唑-1-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.07-3.36(m,2H),4.16(m,1H),6.65(s,1H),6.75(m,1H),7.31(d,2H),7.69(d,2H),7.85(m,4H),8.08(s,1H),9.03(s,1H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-氟-2-噻吩-3-基-苯基) 乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸；(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟 -1-[4-氟-2-(4-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸； 和(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(3,5-二甲基-异噁唑-4-基)-4-氟-苯 基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501141
Figure BDA00001996271501142
使用如下所示一般方法制备标题化合物：
Figure BDA00001996271501151
在该方法中，将溴取代的苯甲醛（1当量）加入到含有芳香族杂环硼酸（1当量）、Na2CO3（2当量）、乙腈（8ml）/水（8ml）和二氯双(三苯基膦)-钯（0.05当量）的20ml微波管中。将管盖上盖子，并在微波辐射下在150℃下搅拌6分钟。将反应混合物冷却，通过注射式滤器过滤，然后用乙酸乙酯稀释。用水将它洗涤。然后加入硅胶以制成塞，并通过色谱法，用己烷和乙酸乙酯洗脱来将它纯化。
然后，醛接受如上面实施例所描述的相同的反应。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(4-氟-2-噻吩-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：3.08-3.30(m,2H),4.19(m,1H),6.61(s,1H),6.84(m,1H),7.02-7013(m,2H),7.22(dd,1H),7.32(d,2H),7.47(m,1H),7.77(m,1H),7.84(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-(4-氟-2-(4-甲基-噻吩-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：2.26(s,3H),3.09-3.30(m,2H),4.20(m,1H),6.64(s,1H),6.95(m,2H),7.13(m,3H),7.34(d,2H),7.69(m,1H),7.83(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{1-[2-(3,5-二甲基-异噁唑-4-基)-4-氟-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD)δ：1.89-2.19(m,6H),2.97-3.30(m,2H),3.83(m,1H),6.55(d,1H),6.74-6.87(m,1H),7.00(m,1H),7.7.24-7.33(m,3H),7.88(m,3H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501161
将2-溴-5-氟-苯甲酸甲酯（1g，4.292mmol）、NaBH4（0.423g，11.159mmol）、和LiCl（0.474g，11.159mmol）在THF/EtOH（20ml/10ml）中的混合物在室温下搅拌过夜。加入水性HCl（10ml，2N），并搅拌约10分钟。然后在低真空下去除有机溶剂。将残余物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水性NaHCO3（10%）、水、和盐水洗涤，然后干燥（MgSO4）并浓缩，得到852mg（96.8%粗收率）作为白色固体的粗产物，(2-溴-5-氟-苯基)甲醇，该粗产物无需进一步纯化即使用。
向(2-溴-5-氟-苯基)甲醇（0.852g，4.156mmol）的DCM（15ml）溶液中加入MnO2（4.254g，85%，41.56mmol）。将混合物在室温下搅拌2天，然后过滤，并用DCM洗涤。浓缩滤液，得到777mg 2-溴-5-氟-苯甲醛（92%收率）。然后将新制成的醛（0.777g，3.828mmol）溶解在无水THF（10ml）中，并冷却至0℃。加入三氟甲基三甲基硅烷（1.13ml，7.656mmol），然后加入四丁基氟化铵（0.020g，0.076mmol）。然后让温度升温至室温。将混合物在室温下搅拌5小时，然后用乙酸乙酯稀释，用水、盐水洗涤，并用MgSO4干燥。在减压下去除溶剂，得到作为粗产物的2-溴-5-氟-苯基)2,2,2-三氟-乙醇，1.1g（90%纯度），该粗产物无需进一步纯化就用于下一个步骤。
将2-溴-5-氟-苯基)2,2,2-三氟-乙醇（0.990g，3.263mmol，90%）、3-甲基吡唑（0.476g，4.895mmol）、CuI（0.367g，1.632mmol）、K2CO3（1.334g，8.158mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（0.110g，0.653mmol）、和甲苯（10ml）合并在20ml微波管中，然后将管密封，并在180℃下加热40分钟。将混合物过滤，并用乙酸乙酯洗涤。用水将滤液洗涤3次，然后加入硅胶以制成塞。通过ISCO柱色谱法使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化化合物，得到1-(5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇75mg。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ：2.29(s,3H),4.90(m,1H),6.21(d,1H),7.07-7.11(m,1H),7.19-7.22(m,1H),7.29-7.32(m,1H),7.51(d,1H)。
将上面制成的醇（0.075g，0.273mmol）溶解在无水1,4-二噁烷（3ml）中。立刻加入氢化钠（0.013g，0.328mmol，60%，在矿物油中），并将混合物在室温下搅拌30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（0.045g，0.273mmol）。将混合物在80℃下搅拌约2小时。去除溶剂，并将残余物悬浮在乙酸乙酯中，用水洗涤，用MgSO4干燥，然后浓缩，得到所需要的一氯化物产物100mg（0.249mmol），将该产物加入到含有4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（0.052g，0.249mmol）、Na2CO3（0.053g，0.498mmol）、乙腈（2ml）/水（2ml）、和二氯双(三苯基膦)-钯（5mg，0.007mmol）的5ml微波管中。将管盖上盖子，并在微波辐射下在150℃搅拌5分钟。将反应混合物冷却，通过注射式滤器过滤，然后通过反相制备型HPLC使用YMC-Pack ODS 100x30mm ID柱(MeOH/H-2O/TFA溶剂系统）进行分离。将纯级分真空浓缩。然后将产物悬浮在5ml水中、冷冻、并冻干，得到作为三氟盐的(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(R)-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸，37mg。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ2.29(s,3H),3.08-3.30(m,2H),4.19(q,1H),6.32(d,1H),6.82(s,1H),6.85(m,1H),7.26(m,1H),7.33(d,2H),7.42(m,2H),7.75(d,1H),7.87(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6{2,2,2-三氟-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
从R-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇制备标题化合物，其制备使用上面对于R-1-[4-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇所描述的相同方法。具体地，将R-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（0.959g，3.318mmol）溶解在无水1,4-二噁烷（8ml）中。立刻加入氢化钠（0.159g，3.982mmol，60%，在矿物油中），并将混合物在室温下搅拌30分钟。加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（0.544g，3.318mmol）。将混合物在80℃下搅拌约2小时。去除溶剂，并将残余物悬浮在乙酸乙酯中，用水洗涤，用MgSO4干燥，然后浓缩，得到所需要的一氯化物产物1.38g，该产物无需进一步纯化就直接使用。
将上面制成的一氯化物（0.460g，1.104mmol）加入到含有4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（0.277g，1.325mmol）、Na2CO3（0.234g，2.208mmol）、乙腈（8ml）/水（8ml）、和二氯双(三苯基膦)-钯（0.039g，0.055mmol）的20ml微波管中。将管盖上盖子，并将混合物在微波辐射下在150℃搅拌10分钟。将混合物冷却，通过注射式滤器过滤，然后通过反相制备型HPLC，使用YMC-Pack ODS 100x30mm ID柱（MeOH/H2O/TFA溶剂系统）进行分离。将纯级分真空浓缩。然后将产物悬浮在5ml水中、冷冻、并冻干，得到580mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{R-1-[5-氯-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基}-丙酸。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ2.40(s,3H),3.29-3.46(m,2H),4.38(q,1H),6.45(d,1H),7.09(s,1H),7.24(m,1H),7.53-7.70(m,4H),7.82(s,1H),7.90(d,1H),7.97(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[4-(2-氧代-吡咯烷-1-基)- 苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501191
将含4-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-苯甲醛（500mg，2.64mmol）的THF（20ml）冷却至0℃，并加入三氟甲基三甲基硅烷（375mg，2.64mmol）。滴加四丁基氟化铵（1M，0.1ml），让混合物经1h升温至室温，并进一步在室温下搅拌过夜。在完成反应后，加入3N HCl（5ml），并将反应混合物搅拌2小时。将混合物浓缩。加入水（20ml），并将混合物用EtOAc（2x20ml）萃取，用NaHCO3（20ml）、盐水（20ml）洗涤，用硫酸钠干燥，并浓缩，得到590mg所需要的产物，该产物无需进一步纯化就用于下一个步骤（收率为86%）。
将4,6-二氯-嘧啶-2-基胺（700mg，2.69mmol）、NaH（194mg，8.07mmol，60%）、和1-(4-(2,2,2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基)-吡咯烷-2-酮（441mg，2.69mmol）的无水THF（10ml）溶液在室温下搅拌过夜。在完成反应后，在减压下去除THF。加入水（10ml），同时将混合物冷却至0℃。然后用二氯甲烷（2x40ml）萃取混合物。将合并的有机溶液用Na2SO4干燥。去除溶剂提供了498mg所需要的产物，纯度为92%，该产物无需进一步纯化就用于下一个步骤（收率为498mg，48%）。
在Emrys微波处理管（20ml）中装入1-(4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基氧基)-2,2,2-三氟-乙基)-苯基)-吡咯烷-2-酮（200mg，0.51mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（108mg，0.51mmol）、和5ml乙腈。将5ml水性碳酸钠（1M）加入到上述溶液中，然后加入5mol%氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，用微波辐射加热至160℃，持续7分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在4ml甲醇中，并用制备型LC进行纯化，得到153mg产物（收率58%）。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.1(m,2H),2.5(t,2H),3.05-3.4(m,2H),3.85(t,2H),4.2(m,1H),6.6(m,1H),6.75(s,1H),7.3(d,2H),7.5(d,2H),7.6(d,2H),7.9(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(R)-2,2,2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑 -1-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501201
将R-1-(2-溴-5-氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（4.0g，14.65mmol）、3-甲基吡唑（1.56g，19.04mmol）、CuI（0.557g，2.93mmol）、K2CO3（4.25g，30.76mmol）、(1R,2R)-N,N′-二甲基-环己-1,2-二胺（0.416g，2.93mmol）、和甲苯（15ml）装入50ml密封管中，并将所产生的混合物在130℃（油浴温度）下加热2天。将混合物用乙酸乙酯稀释，用H2O（4x30ml）、盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。去除溶剂提供了粗产物，通过ISCO柱色谱使用含5-10%乙酸乙酯的己烷作为溶剂来纯化粗产物，得到1.75g R-2,2,2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（收率：44%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ(ppm)2.35(s,3H),5.0(m,1H),6.3(s,1H),7.1(m,1H),7.20(s,1H),7.35(d,1H),7.50(s,1H)。
将4,6-二氯-嘧啶-2-基胺（938mg，5.72mmol）、NaH（188mg，1.5当量，8.17mmol，60%）、和R-2,2,2-三氟-1-[5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基]-乙醇（1.5g，1当量，5.45mmol）的无水THF（10ml）溶液在室温下在50℃下搅拌过夜。在完成反应后，在减压下去除THF。加入水（10ml）以将反应淬灭。然后用二氯甲烷（2x40ml）萃取混合物。将合并的有机溶液用Na2SO4干燥。去除溶剂提供了所需要的产物，纯度为92%，该产物无需纯化就用于下一个步骤（收率：85%）。
在Emrys微波处理管（20ml）中装入氯-6-R-2,2,2-三氟-1-(5-氟-2-(3-甲基-吡唑-1-基)-苯基)-乙氧基)-嘧啶-2-基胺（2.18g，5.45mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（1.13g，5.45mmol），将碳酸钠（1M 10.90ml，2当量）加入到上述溶液中，然后加入5mol%二氯双（三苯基膦)-钯(II)（191mg，0.27mmol）和5ml乙腈、和5ml H2O。将反应容器密封，并将混合物用微波辐射在160℃下加热10分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在H2O（10ml）中，并用醚萃取。废弃醚层。然后，在真空下去除水相中的大部分水，接着加入10ml甲醇。用制备型HPLC纯化粗产物，得到1.163g（收率75%）产物。1H-NMR(400MHz,CD3OD):δ(ppm)2.4(s,3H),3.35(m,1H),3.5(m,1H),4.36(m,1H),6.4(s,1H),7.0(s,1H),7.1(m,1H),7.4(m,1H),7.55(m,4H),7.85(s,1H),8.0(d,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)- 苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501211
将四丁基氟化铵（TBAF）（0.1ml 1M，在THF中）加入到4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯甲醛（213mg，1mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（0.2ml，1.2mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将反应混合物用12ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.25g 1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇，该产物无需纯化就直接用于下一个步骤。收率：90%。
将Cs2CO3（375mg，1mmol）加入到含1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-2,2,2-三氟-乙醇（67mg，0.2mmol）在10ml无水1,4-二噁烷中的溶液中。将混合物搅拌5分钟，然后加入(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（78mg，0.2mmol），并将混合物在110℃下加热过夜。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到112mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（收率：88%）。
将上述产物（112mg）加入到5ml 30% TFA/DCM溶液中。在完成反应后，蒸发溶剂得到粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到5mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[4-(6-甲氧基-吡啶-2-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)8.18(d,J＝8.4Hz,2H),7.94(d,J＝8.4Hz,2H),7.74(m,3H),7.60(d,J＝8.4Hz,2H),7.52(d,J＝7.2Hz,1H),7.08(s,1H),6.86(m,1H),6.82(d,J＝8.1Hz 1H),4.37(t,1H),4.03(s,3H),3.5(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2，2，2-三氟-1-[2-氟-4-(5-甲氧基-吡啶-3- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501231
将TBAF（0.1ml）加入到4-溴-2-氟-苯甲醛（2.03g，10mmol）和TMSCF3（20ml，12mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将形成的混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将反应混合物用12ml 3MHCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到2.4g 1-(4-溴-2-氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（收率：90%）。
将Cs2CO3（8.45g，26mmol）加入到1-(4-溴-2-氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（1.4g，5.2mmol）在10ml无水1,4-二噁烷中的溶液中，将混合物搅拌5分钟，然后加入(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（2.0g，5mmol），并将所产生的混合物在110℃下加热过夜。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到2.6g(S)-3-(4-{2-氨基-6-[1-(4-溴-2-氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}苯基)2叔丁氧基羰基氨基-丙酸（收率：82%）。
在微波管（2ml）中装入(S)-3-(4-{2-氨基-6-[1-(4-溴-2-氟-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（130mg，0.2mmol）、3-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶（70mg，0.3mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入14mg（5mol%）二氯双(三苯基膦)钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并用制备型HPLC进行纯化，得到51mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-氟-4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸。
将上述产物（51mg）溶解在5ml 30%TFA/DCM溶液中。将混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂提供了粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到17mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-氟-4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)：8.73(s,1H),8.56(s,1H),8.25(s,1H),7.94(d,J＝8.2Hz,2H),7.77(m,3H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),7.16(m,1H),7.00(s,1H),4.35(t,1H),4.09(s,3H),3.4(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(2-氟-吡啶-4-基)- 苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501241
将Cs2CO3（16.25g，50mmol）加入到(S)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙醇（2.55g，11.0mmol）在10ml无水1,4-二噁烷中的溶液中，并将混合物搅拌5分钟，然后加入(S)-3-[4-(2-氨基-6-氯-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（3.92g，10mmol）。将所产生的混合物在110℃下加热过夜。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到5.2g(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}苯基)-2-叔丁氧基-羰基氨基-丙酸（收率：82%）。
在微波管（2ml）中装入(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（139mg，0.23mmol）、2-氟吡啶-4-硼酸（40mg，0.27mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入14mg（5mol%）二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射法加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，并将残余物溶解在2.5ml甲醇中。用制备型HPLC纯化产物，得到70mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸。
将上述产物（70mg）溶解在5ml含30% TFA的DCM中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂提供了粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到52mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(2-氟-吡啶-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)8.17(d,J＝5.7Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(d,J＝6.9Hz,2H),7.67(d,J＝8.2Hz,2H),7.53(m,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,,2H),7.30(s,1H),6.76(m,2H),4.21(t,1H),3.2(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(5-甲氧基-吡啶-3- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
在微波管（2ml）中装入(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（139mg，0.23mmol）、3-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]-二氧杂环戊硼烷-2-基)-吡啶（69mg，0.27mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入14mg二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并通过制备型HPLC进行纯化，得到60mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸。
将上述产物（60mg）溶解在5ml含30% TFA的DCM中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂提供了粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到48mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1HNMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)：8.54(d,J＝1.5Hz,1H),8.37(d,J＝2.7Hz,1H),8.03(dd,J＝2.7Hz,1.5Hz,1H),7.84(d,J＝8.2Hz,2H),7.78(d,J＝8.4Hz,2H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,,2H),6.81(s,1H),6.75(m,1H),4.22(t,1H),3.95(t,3H),3.25(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(4-三氟甲基-吡啶 -3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501261
在微波管（2ml）中装入(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（139mg，0.23mmol）、4-三氟甲基吡啶-3-硼酸（61mg，0.3mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入14mg二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射法加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并通过制备型HPLC进行纯化，得到20mg(S)-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(4-三氟甲基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸。
将上述产物（20mg）溶解在5ml含30%TFA的DCM中。将反应混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂提供了粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到10mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{(S)-2,2,2-三氟-1-[4-(4-三氟甲基-吡啶-3-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)：8.72(d,J＝5.1Hz,1H),8.55(s,1H),7.87(d,J＝8.2,2H),7.72(d,J＝5.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.2Hz,2H),7.36(m,4H),6.81(m,1H),6.70(s,1H),4.20(t,1H),3.22(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-2，2，2-三氟-1-(4-异噁唑-4-基-苯基)- 乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
在微波管（2ml）中装入(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-1-(4-溴-苯基)-2,2,2-三氟-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基-丙酸（139mg，0.23mmol）、4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-异噁唑（57.5mg，0.3mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入14mg二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射法加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并通过制备型HPLC进行纯化，得到20mg(S)-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4-异噁唑-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-2-叔丁氧基羰基氨基丙酸。
将上述产物（20mg）溶解在5ml含30% TFA的DCM中。将混合物在室温下搅拌过夜。去除溶剂提供了粗产物，通过制备型HPLC纯化粗产物，得到10mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[(S)-2,2,2-三氟-1-(4-异噁唑-4-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)9.03(s,1H),8.77(s,1H),7.84(m,2H),7.63(d,J＝8.2,1H),7.56(d,J＝8.4Hz,1H),7.50(m,1H),7.37(m,3H),6.70(m,2H),4.20(t,1H),3.22(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧 基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501281
在微波管（20ml）中装入2-甲酰基苯基硼酸（290mg，2.0mmol）、5-溴-嘧啶（316mg，2.0mmol）、和8ml乙腈。向该混合物中加入4ml水性碳酸钠（1M），然后加入100mg二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，用乙酸乙酯萃取反应混合物。蒸发有机层得到粗材料，通过ISCO将粗材料纯化，得到220mg 2-嘧啶-5-基-苯甲醛。
将四丁基氟化铵（TBAF，0.1ml 1M，在THF中）加入到2-嘧啶-5-基-苯甲醛（184mg，1mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（TMSCF3，0.2ml，1.2mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将混合物用3ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.21g 2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙醇（收率：84%），该产物无需纯化就直接用于下一个步骤。
将Cs2CO3（325mg，1.0mmol）加入到2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙醇（72mg，0.28mmol）在10ml无水THF中的溶液中。将混合物搅拌20分钟，加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（36.7mg，0.22mmol），然后将反应混合物在110℃下加热，直至完成反应。在冷却至室温后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到76mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺粗产物（收率：92%）。
在微波管（2ml）中装入上述中间体粗产物（38mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.3ml水性碳酸钠（1M），然后加入4mg 5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后用制备型HPLC进行纯化，得到10mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)9.21(s,1H),8.87(s,2H),7.86(d,J＝8.4,2H),7.75(m,1H),7.53(m,2H),7.37(d,J＝8.2,1H),7.33(m,1H),6.72(s,1H),6.58(m,1H),4.20(t,1H),3.22(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-噻吩-3-基-苯基)-乙氧 基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501291
在微波管（20ml）中装入2-甲酰基苯基硼酸（290mg，2.0mmol）、3-溴-噻吩（326mg，2.0mmol）、和8ml乙腈。向该混合物中加入4ml水性碳酸钠（1M），然后加入50mg二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，用乙酸乙酯萃取反应混合物。蒸发有机层得到粗材料，通过ISCO将粗材料纯化，得到211mg 2-噻吩-3-基-苯甲醛。
将四丁基氟化铵（TBAF，0.1ml 1M，在THF中）加入到2-噻吩-3-基-苯甲醛（100mg，0.53mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（0.1ml，0.64mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将混合物用3ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.12g 2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙醇，该产物无需纯化就直接用于下一个步骤（收率：89%）。
将Cs2CO3（325mg，1.0mmol）加入2,2,2-三氟-1-(2-噻吩-3-基-苯基)-乙醇（72mg，0.28mmol）在10ml无水THF中的溶液中，并将混合物搅拌20分钟。然后加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（36.7mg，0.22mmol），并将混合物在110℃下加热，直至完成反应。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到67mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-嘧啶-5-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-2-基胺（收率：78%）。
在微波管（2ml）中装入上述粗材料（40mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.3ml水性碳酸钠（1M），然后加入5mol%氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥。将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后用制备型HPLC进行纯化，得到11.8mg(S)-2-氨基-3-(4-{2-氨基-6-[2,2,2-三氟-1-(2-噻吩-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm):7.84(d,J＝8.0Hz,2H),7.66(d,J＝7.6Hz,1H),7.53(m,1H),7.40(m,5H),7.30(m,1H),7.17(m,1H),6.91(m,1H),6.82(s,1H),4.23(t,1H),3.25(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4- 基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501311
在微波管（20ml）中装入2-溴-苯甲醛（208mg，1.0mmol）、1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑（222mg，1.2mmol）、和8ml乙腈。向该混合物中加入2.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入50mg二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，用乙酸乙酯萃取反应混合物。蒸发有机层得到粗材料，通过ISCO将粗材料纯化，得到181mg 2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯甲醛（96%收率）。
将四丁基氟化铵（0.1ml 1M，在THF中）加入到2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯甲醛（100mg，0.53mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（0.12ml，0.6mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将混合物用3ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.12g 2,2,2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基-苯基)-乙醇，该产物无需纯化就直接用于下一个步骤（收率：89%）。
将Cs2CO3（325mg，1.0mmol）加入到2,2,2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙醇（60mg，0.2mmol）在10ml无水THF中的溶液中，并将混合物搅拌20分钟。加入2-氨基-4,6-二氯-嘧啶（32mg，0.2mmol），然后将反应混合物在110℃下加热，直至完成反应。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到70mg 4-氯-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-2-基胺（收率：92%）。
在微波管（2ml）中装入上述粗材料（38mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.3ml水性碳酸钠（1M），然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型HPLC进行纯化，得到5.6mg(S)-2-氨基-3-[4-(2-氨基-6-{2,2,2-三氟-1-[2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-苯基]-乙氧基}-嘧啶-4-基)-苯基]-丙酸。
(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶 -4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501321
在微波管（20ml）中装入2-甲酰基苯基硼酸（298mg，2.0mmol）、3-溴-呋喃（350mg，2.4mmol）、和8ml乙腈。向该混合物中加入4ml水性碳酸钠（1M），然后加入100mg二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，用乙酸乙酯萃取反应混合物。蒸发有机层得到粗材料，通过ISCO将粗材料纯化，得到110mg 2-呋喃-3-基-苯甲醛（30%收率）。
将四丁基氟化铵（0.1ml 1M，在THF中）加入到2-呋喃-3-基-苯甲醛（110mg，0.64mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（109mg，0.78mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将混合物用3ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.130g 2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙醇，该产物无需纯化就直接用于下一个步骤（收率：90%）。
将60% NaH（12mg，0.3mmol）加入到2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙醇（54mg，0.2mmol）在10ml无水THF中的溶液中。将混合物搅拌20分钟，然后加入4,6-二氯-嘧啶（30mg，0.2mmol）。然后将混合物在70℃下加热，直至完成反应。在冷却后，加入5ml水以将反应淬灭，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到67mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶（收率：94%）。
在微波管（2ml）中装入上述粗材料（38mg，0.1mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（31mg，0.15mmol）、1ml乙腈、和0.7ml水。向该混合物中加入0.3ml水性碳酸钠（1M），然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，然后通过制备型HPLC进行纯化，得到6mg(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)：8.82(s,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,2H),7.73(m,2H),7.46(m,6H),6.82(m,1H),6.54(s,1H),4.20(t,1H),3.22(m,2H)。
(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶 -4-基}-苯基)-丙酸的合成
Figure BDA00001996271501331
在微波管（20ml）中装入2-甲酰基苯基硼酸（298mg，2.0mmol）、2-溴-呋喃（350mg，2.4mmol）、和8ml乙腈。向该混合物中加入4ml水性碳酸钠（1M），然后加入100mg二氯双-(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射在150℃下加热5分钟。在冷却后，用乙酸乙酯萃取反应混合物。蒸发有机层得到粗材料，通过ISCO将粗材料纯化，得到123mg 2-呋喃-2-基-苯甲醛（34%收率）。
将四丁基氟化铵（0.1ml 1M，在THF中）加入到2-呋喃-2-基-苯甲醛（123mg，0.71mmol）和三氟甲基三甲基硅烷（120mg，0.86mmol）在10ml THF中的0℃溶液中。将混合物升温至室温，并搅拌4小时。然后将反应混合物用3ml 1M HCl处理，并搅拌过夜。用乙酸乙酯（3x20ml）萃取产物。将有机层分离，并用硫酸钠干燥。蒸发有机溶剂，得到0.150g 2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-3-基-苯基)-乙醇，该产物无需纯化就直接用于下一个步骤（收率：90%）。
将60% NaH（12mg，0.3mmol）加入到2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙醇（55mg，0.2mmol）在10ml无水THF中的溶液中。将混合物搅拌20分钟，然后加入4,6-二氯-嘧啶（29mg，0.2mmol）。然后将混合物在110℃下加热，直至完成反应。在冷却后，加入5ml水，并用乙酸乙酯（20ml）萃取产物。将有机层用硫酸钠干燥。通过旋转蒸发器去除溶剂，得到60mg 4-氯-6-[2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶（收率80%）。
在微波管（2ml）中装入上述粗材料（60mg，0.2mmol）、4-二羟硼基-L-苯丙氨酸（62mg，0.3mmol）、1ml乙腈、和0.6ml水。向该混合物中加入0.4ml水性碳酸钠（1M），然后加入5mol%二氯双(三苯基膦)-钯(II)。将反应容器密封，并用微波辐射加热至150℃，持续5分钟。在冷却后，将反应混合物蒸发至干燥，将残余物溶解在2.5ml甲醇中，并通过制备型HPLC进行纯化，得到6mg(S)-2-氨基-3-(4-{6-[2,2,2-三氟-1-(2-呋喃-2-基-苯基)-乙氧基]-嘧啶-4-基}-苯基)-丙酸。1H NMR(300MHz,CD3OD)δ(ppm)：8.66(s,1H),8.11(d,J＝8.4Hz,2H),7.77(m,2H),7.54(m,6H),6.86(d,J＝3.3Hz,1H),6.66(m,1H),4.20(t,1H),3.22(m,2H)。
其他化合物
使用本领域已知和/或本文中描述的方法制备的其他化合物列举如下：
Figure BDA00001996271501351
Figure BDA00001996271501361
Figure BDA00001996271501381
Figure BDA00001996271501391
Figure BDA00001996271501401
Figure BDA00001996271501411
Figure BDA00001996271501421
Figure BDA00001996271501431
Figure BDA00001996271501441
Figure BDA00001996271501451
Figure BDA00001996271501461
体外抑制试验
人TPH1、TPH2、酪氨酸羟化酶（TH）和苯丙氨酸羟化酶（PH）均采用分别具有以下登录号（accession number）的基因来产生：X52836、AY098914、X05290、和U49897。
将人TPH1的全长编码序列克隆到细菌表达载体pET24（Novagen，Madison，WI，USA）中。将具有表达载体的BL21（DE3）细胞的单菌落接种到50ml L肉汤（LB）-卡那霉素介质中，并在37℃下振荡生长过夜。然后将一半的培养物（25ml）转移到3L含有1.5%酵母提取物、2%细菌用胰蛋白胨、0.1mM色氨酸、0.1mM硫酸亚铁铵、和50mM磷酸盐缓冲液（pH 7.0）的介质中，并在37℃下生长至OD600=6，其中将氧气补充在40%，pH维持在7.0，并加入葡萄糖。在25℃下用15%D-乳糖诱导TPH1表达10小时的一段时间。将细胞离心下来，并用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤1次。
基于TPH1与蝶呤的结合，通过亲和层析来纯化TPH1。将细胞团块重悬在含有50mM pH 7.6的Tris-Cl、0.5M NaCl、0.1%吐温-20、2mMEDTA、5mM DTT、蛋白酶抑制剂混合物（Roche Applied Science，Indianapolis，IN，USA）和1mM苯甲磺酰氯（PMSF）的裂解缓冲液（100ml/20g）中，并用微射流机将细胞裂解。将裂解液离心，并将上清液荷载到蝶呤偶联的琼脂糖4B柱上，所述柱用含有50mM pH 8.0的Tris、2M NaCl、0.1%吐温-20、0.5mM EDTA和2mM DTT的缓冲液进行平衡。用50ml该缓冲液洗涤柱子，并用含有30mM pH 10.5的NaHCO3、0.5M NaCl、0.1%吐温-20、0.5mM EDTA、2mM DTT、和10%甘油的缓冲液洗脱TPH1。将洗脱的酶立即用200mM pH 7.0的KH2PO4、0.5M NaCl、20mM DTT、0.5mM EDTA、和10%甘油进行中和，并存储在-80℃。
基本上以相同的方式表达和纯化人II型色氨酸羟化酶（TPH2）、酪氨酸羟化酶（TH）、和苯丙氨酸羟化酶（PAH），除了对于TH来说，细胞在生长期间增补酪氨酸，而对于PAH来说，增补苯丙氨酸。
在含有50mM pH 7.0的4-吗啉丙磺酸（MOPS）、60μM色氨酸、100mM硫酸铵、100μM硫酸亚铁铵、0.5mM三(2-羧乙基)膦（TCEP）、0.3mM 6-甲基四氢蝶呤、0.05mg/ml过氧化氢酶、和0.9mM DTT的反应混合物中测定TPH1和TPH2的活性。通过加入TPH1达到终浓度为7.5nm来开始反应。通过根据360nm（激发波长=300nm）处的荧光变化来确定反应的初速度。通过测定TPH1和TPH2在各个化合物浓度下的活性来确定TPH1和TPH2的抑制，并用下面的等式计算给定化合物的效价：
v = b + v 0 - b 1 + ( [ D ] I c 50 ) D
其中ν是在给定的化合物浓度C下的初速度，ν0是当C=0时的ν，b是背景信号，D是约等于1的Hill斜率，并且Ic50是化合物在抑制最大酶活性的一半时的浓度。
通过测量使用L-[3,4-3H]-酪氨酸和L-[4-3H]-苯丙氨酸所生成的3H2O的量来分别确定人TH和PAH的活性。首先将酶（100nM）与它的底物在0.1mM孵育约10分钟，并加入到含有50mM pH 7.2的MOPS、100mM硫酸铵、0.05%吐温-20、1.5mM TCEP、100μM硫酸亚铁铵、0.1mM酪氨酸或苯丙氨酸、0.2mM 6-甲基四氢蝶呤、0.05mg/ml过氧化氢酶、和2mM DTT的反应混合物中。让反应进行10-15分钟，并通过加入2M HCl来停止反应。然后通过活性炭将混合物过滤，并通过闪烁计数来测定滤液中的放射性。使用该试验测定化合物对TH和PAH的活性，并以对TPH1和TPH2同样的方式进行计算。
基于细胞的抑制试验
两种类型的细胞系被用于筛选：RBL2H3是大鼠肥大细胞瘤细胞系，该细胞系含有TPH1并自发产生5-羟色胺（5HT）；BON是人类类癌细胞系，该细胞系含有TPH1，并产生5-羟基色氨酸（5HTP）。以96孔板的方式执行CBA。用于HPLC的流动相含有97%的pH 3.5的100mM乙酸钠和3%乙腈。使用Waters C18柱（4.6x50mm）和Waters HPLC（2795型号）。通过将280nm设定为激发波长以及360nm为发射波长，使用多通道荧光计（2475型号）来监测通流量。
RBL CBA：将细胞在完全培养基（含有5%牛血清）中生长3-4小时，以让细胞附着于板孔（7K细胞/孔）。然后将化合物以0.016μM至11.36μM的浓度范围加入到各孔中。对照是不存在任何化合物的完全培养基中的细胞。在37℃孵育3天后，收获细胞。在不存在化合物的情形下，细胞汇合>95%。将培养基从板上去除，并用等体积的0.1NNaOH裂解细胞。一大部分的细胞裂解液通过与等体积的1M TCA混合进行处理，然后通过玻璃纤维过滤。将滤液荷载到反相HPLC上，用于分析5HT浓度。还取一小部分细胞裂解液用于测定细胞的蛋白浓度，细胞的蛋白浓度反映了化合物在所使用的浓度下的细胞毒性。通过使用BCA方法测定蛋白浓度。
在未用化合物处理过的细胞中的5HT平均水平被用作根据上面提供的等式推导IC50中的最大值。5HT的最小值被设为0，或者，若化合物在最大浓度下无细胞毒性时，5HT的最小值来自用化合物的最高浓度处理过的细胞。
BON CBA：将细胞在含有5%牛血清的等体积DMEM和F12K中生长3-4小时（20K细胞/孔），并以0.07μM至50μM的浓度范围添加化合物。将细胞在37℃孵育过夜。然后，取50μM的培养上清液，用于测定5HTP。将上清液与等体积的1M TCA混合，然后通过玻璃纤维过滤。将滤液荷载到反相HPLC上，用于测定5HTP浓度。通过用Promega Celltiter-Glo发光细胞活力检测试剂盒处理剩余的细胞来测定细胞的存活性。然后以与RBL CBA中相同的方式计算化合物的效价。
本文中引用的所有参考文献（例如专利和专利申请）以其全文结合于此。

Claims (11)

1.用于治疗转移性骨病的下式的化合物或其可药用的盐：
Figure FDA00001996271400011
其中：
A是任选取代的环烷基、芳基、或杂环；
X  是键、-O-、-S-、-C(O)-、-C(R4)=、=C(R4)-、-C(R3R4)-、-C(R4)=C(R4)-、-C≡C-、-N(R5)-、-N(R5)C(O)N(R5)-、-C(R3R4)N(R5)-、-N(R5)C(R3R4)-、-ONC(R3)-、-C(R3)NO-、-C(R3R4)O-、-OC(R3R4)-、-S(O2)-、-S(O2)N(R5)-、-N(R5)S(O2)-、-C(R3R4)S(O2)-、或-S(O2)C(R3R4)-；
D是任选取代的芳基或杂环；
R1是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；
R2是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；
R3是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基；
R4是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基或芳基；
各R5独立地是氢或任选取代的烷基或芳基；并且
n是0-3。
2.权利要求1的应用，其中转移性骨病是骨硬化性（成骨细胞性）的。
3.权利要求2的应用，其中转移性骨病是前列腺癌的骨转移。
4.权利要求3的应用，其中所述化合物与治疗或预防有效量的第二种药物联合使用。
5.权利要求4的应用，其中第二种药物是黄体化激素释放激素激动剂（例如亮丙瑞林、戈舍瑞林、布舍瑞林）；抗雄激素物质（例如氟他胺、尼鲁米特）；或肾上腺抑制剂（例如酮康唑、氨鲁米特）。
6.权利要求5的应用，其中第二种药物是米托蒽醌、雌莫司汀、多柔比星、依托泊苷、长春碱、紫杉醇、卡铂、或长春瑞滨。
7.权利要求1的应用，其中所述化合物是下式的化合物：
Figure FDA00001996271400021
8.权利要求7的应用，其中所述化合物是下式的化合物：
Figure FDA00001996271400022
其中：各A1和A2独立地是单环的任选取代的环烷基、芳基、或杂环；
并且E是任选取代的芳基或杂环。
9.权利要求8的应用，其中化合物是下式的化合物：
Figure FDA00001996271400023
其中：
A2是任选取代的杂环；
R10是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；
各R14独立地是卤素、氢、C(O)RA、ORA、NRBRC、S(O2)RA、或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；
RA是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；
RB是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；
RC是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、或烷基-杂环；并且
m是1-4。
10.药物组合物，其包含下式的化合物或其可药用的盐和第二种药物：
其中：
A是任选取代的环烷基、芳基、或杂环；
X是键、-O-、-S-、-C(O)-、-C(R4)=、=C(R4)-、-C(R3R4)-、-C(R4)=C(R4)-、-C≡C-、-N(R5)-、-N(R5)C(O)N(R5)-、-C(R3R4)N(R5)-、-N(R5)C(R3R4)-、-ONC(R3)-、-C(R3)NO-、-C(R3R4)O-、-OC(R3R4)-、-S(O2)-、-S(O2)N(R5)-、-N(R5)S(O2)-、-C(R3R4)S(O2)-、或-S(O2)C(R3R4)-；
D是任选取代的芳基或杂环；
R1是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；
R2是氢或任选取代的烷基、烷基-芳基、烷基-杂环、芳基、或杂环；
R3是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基；
R4是氢、烷氧基、氨基、氰基、卤素、羟基、或任选取代的烷基或芳基；
各R5独立地是氢或任选取代的烷基或芳基；
n是0-3；并且
第二种药物是黄体化激素释放激素激动剂（例如亮丙瑞林、戈舍瑞林、布舍瑞林）；抗雄激素物质（例如氟他胺、尼鲁米特）；或肾上腺抑制剂（例如酮康唑、氨鲁米特）。
11.权利要求10的药物组合物，其中第二种药物是米托蒽醌、雌莫司汀、多柔比星、依托泊苷、长春碱、紫杉醇、卡铂、或长春瑞滨。
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