CN102712889A - 离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具 - Google Patents

离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具 Download PDF

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吉田孝夫
森村孝史
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Fukoku KK
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National Cancer Center Japan
Fukoku KK
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Abstract

本发明涉及使用为通用设备的廉价的一次性容器，能够从细胞悬浊液中无菌分离/清洗细胞，适宜采用封闭系统的离心分离用容器、该容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具。离心分离用容器借助姿态保持用适配器安装在离心机上，其具备：具有能够收容被离心物的封闭的内部空间的容器本体和能够将内部空间与外部连通的端口，容器本体包括容积较大的第一收容部和与第一收容部连通且收容离心沉淀物的容积相对较小的第二收容部，端口在第一收容部侧具有开口部，第一收容部和第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在该交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将第二收容部与端口的开口部隔离成不连通状态。

Description

离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具
技术领域
本发明涉及离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具，特别是涉及适于易于从含有培养细胞等的细胞悬浊液等中进行细胞等的分离和清洗的离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具。
背景技术
以往，作为分离和清洗细胞等（以下，简称为“细胞”）的方法，有利用离心机的方法、使用离心机转筒的方法、使用过滤器的过滤分离法、以及利用细胞的电荷的电分离法、利用存在于细胞表面的抗原的亲和性的亲和分离法等。
另一方面，由于作为经过分离和清洗的细胞的医疗用途为用于造血干细胞移植、过继细胞免疫疗法、基因治疗等使用细胞的治疗，因此，无菌分离和清洗细胞就逐渐成为很重要的课题。
而且，为了作为医疗用途常态化，将以廉价清洗和分离细胞的成本，即，将用于分离和清洗细胞的设备导入等的预置成本、为了用于分离和清洗细胞而每次使用的一次性产品的成本控制在廉价就逐渐成为重要课题。
通常的利用离心机的方法，是已知的作为能够廉价且大量处理细胞的方法。该方法是将作为目标物的细胞悬浊液等（以下，称为“细胞悬浊液”）移液到离心杯中，将该离心杯装配在离心机上进行离心操作，在离心操作后，在离心杯的底部残留有沉淀物的状态下，除去上清液，由此将细胞从分散介质，即，培养基或清洗液对开离，再加入清洗液，再一次制成细胞悬浊液，之后，与上述同样进行离心操作，除去上清液，由此来清洗细胞，能够通过通用性高的离心机和廉价的离心杯进行。
该利用离心机的方法，通常，在将作为目标物的细胞悬浊液移液到离心杯的阶段、除去上清液的阶段、再悬浊于清洗液中的阶段等多个阶段中，为了将目标物向大气排放，很难将细胞保持为无菌。为了改善这一状况，即，为了确保细胞的无菌性，需要构筑包括细胞调整室整体的无菌系统，当然也包括离心机，这就需要大规模的高价装置。
使用离心机转筒的方法是已知的作为能够自动并且无菌处理大量细胞的方法（日本专利申请公开号：特开平07-000857）。
使用该离心机转筒的方法，是在以自身的中心轴为中心旋转的被称为离心机转筒的容器中，导入作为目标物的细胞悬浊液，通过旋转的离心机转筒的转筒内产生的离心力，将细胞与分散介质分离，将细胞悬浊液连续导入离心机转筒的转筒内，连续取出分散介质或细胞，从而能够处理大量的细胞分散液的连续离心分离系统。根据该方法，能够实现在封闭系统中的分离/清洗。
在实施使用该离心机转筒的方法时，需要离心机转筒、多个袋（bag）、和由将其功能性连接的多个管道回路构成的经过消毒的一次性分离/清洗用套装、用于使离心机转筒旋转的专用的离心机、用于在清洗用套装的内部输送液体用的泵、以及对上述装置进行控制的专用的控制系统，不仅用于设备导入的预置成本价格高，而且结构复杂的一次性清洗用套装的价格也很高，结果大幅度提高了分离/清洗成本。
使用过滤器的过滤分离法是：使得含有目的细胞的细胞悬浊液通过过滤器部件，过滤出目的细胞，接着，使液体从与使得细胞悬浊液通过过滤部件的相反方向通过，从过滤部件中除去由过滤部件捕捉的含有目的细胞的细胞悬浊液，并进行回收的方法。该方法是已知的作为能够自动且无菌处理大量细胞的方法。
该使用过滤器的过滤分离方法，作为能够从不需要的细胞或液体成分中大量且迅速分离目的细胞的方法是适当的，但是，存在目的细胞的回收率低的缺点。该缺点是由过滤部件的小孔孔径在一系列处理作业过程中一定造成的。
而且，在将使用过滤器的方法用于自动且无菌地处理大量细胞时，与离心机转筒的情况同样，不仅设备导入所需的预置成本价格高，且结构复杂、价格高昂的一次性清洗用套装也是必须的，因此大幅度提高了分离/清洗成本。
因此，期望使用能够以廉价且通用的设备进行处理的廉价的一次性容器，通过单纯的短时间操作，就能够实现无菌的细胞分离/清洗的细胞分离/清洗用容器以及细胞分离/清洗系统。
发明内容
本发明要解决的课题，是提供一种能够以廉价且通用的设备，构筑使用廉价的一次性容器，通过单纯的短时间操作，从细胞悬浊液中无菌分离/清洗细胞的细胞分离/清洗用容器以及使用了该容器的细胞分离/清洗系统的离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具。
更具体而言，提供一种适于采用封闭系统，并且，适于从含有培养细胞等的细胞悬浊液中易于实现细胞等的分离和清洗的离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器和离心分离用用具。
根据本发明的一个方面，其提供一种离心分离用容器，该离心分离用容器是借助姿态保持用适配器安装在离心机上的离心分离用容器，其具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体；和能够将上述内部空间与外部连通的端口，
上述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与上述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小容积的第二收容部，
上述端口在上述第一收容部侧具有开口部，
上述第一收容部和上述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在该交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将上述第二收容部与上述端口的上述开口部隔离成不连通状态。
根据本发明离心分离用容器的一个实施方式，上述第一收容部的下部侧设有锥部，上述第一收容部借助上述锥部与上述第二收容部连通，
上述锥部和上述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在该交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将上述第二收容部与上述端口的上述开口部隔离成不连通状态。
根据本发明离心分离用容器的一个实施方式，上述第二收容部的容积为上述第一收容部的容积的10%以下。
根据本发明离心分离用容器的一个实施方式，上述容器本体通过将叠加的具有柔性的片材或薄膜的周边密封而形成。
根据本发明离心分离用容器的一个实施方式，上述容器本体通过吹塑成型，由具有柔性的树脂形成。
根据本发明的离心分离用容器的一个实施方式，能够与上述容器本体的内部空间连通的具有柔性的流体输送用管安装在上述端口上。
根据本发明的离心分离用容器的一个实施方式，上述输送用管以能够熔断密封且能够通过无菌接合装置连通的方式安装。
根据本发明的另一方面，提供一种离心分离用容器的姿态保持用适配器，其是用于将离心分离用容器安装在离心机的料仓上的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，上述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，上述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与上述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小的容积的第二收容部，
上述第一收容部和上述第二收容部的交界部或者其附近的容器壁具有柔性，
上述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有用于收容上述离心分离用容器的开口，
在上述上表面侧，具有收容上述第一收容部的第一收容空间，在其底面侧，具有收容上述第二收容部的第二收容空间，并且，在上述第一收容空间的上述第二收容空间侧，具备保持上述第一收容部的保持部，
并具备用于在离心时防止上述离心分离用容器脱落的周壁。
根据本发明的另一方面，提供一种离心分离用容器的姿态保持用适配器，其是用于将离心分离用容器安装在离心机的料仓上的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，上述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，
上述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与上述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小的容积的第二收容部，
上述第一收容部的下部侧设有锥部，上述第一收容部借助上述锥部与上述第二收容部连通，
上述锥部和上述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，
上述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有用于收容上述离心分离用容器的开口，
在上述上表面侧，具有收容上述第一收容部的第一收容空间，在其底面侧，具有收容上述第二收容部的第二收容空间，并且，在上述第一收容空间的上述第二收容空间侧，具备保持上述锥部的研钵状保持部，
并具备用于在离心时防止上述离心分离用容器脱落的周壁。
根据本发明的离心分离用容器的姿态保持用适配器的一个实施方式，上述研钵状保持部的倾斜角度为45°～80°。
根据本发明的离心分离机用容器的姿态保持用适配器的一个实施方式，上述离心分离用容器的姿态保持用适配器具有沿上下方向延伸的分型面，能够大致对开，上述分型面能够密合和分模。
根据本发明的离心分离用容器的姿态保持用适配器的一个实施方式，上述离心分离用容器的姿态保持适配器具有能够从外部通过肉眼确认上述离心分离用容器的安装状况的透明性。
根据本发明的另一方面，提供一种离心分离用用具，其特征在于，具备离心分离用容器和离心分离用容器的姿态保持用适配器，其中，上述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，和能够将上述内部空间与外部连通的端口，
上述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与上述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小的容积的第二收容部，
上述端口在上述第一收容部侧具有开口部，
上述第一收容部和上述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在该交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将上述第二收容部与上述端口的上述开口部隔离成不连通状态，
上述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有用于收容上述离心分离用容器的开口，
在上述上表面侧，具有收容上述第一收容部的第一收容空间，在其底面侧，具有收容上述第二收容部的第二收容空间，并且，在上述第一收容空间的上述第二收容空间侧，具备保持上述第一收容部的保持部，
并具备用于在离心时防止上述离心分离用容器脱落的周壁。
根据本发明的另一方面，提供一种离心分离用用具，其特征在于，具备离心分离用容器和离心分离用容器的姿态保持用适配器，其中，上述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，和能够将上述容器本体的密闭的内部空间与外部连通的端口，
上述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部，和与上述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小的容积的第二收容部，
上述第一收容部的下部侧设有锥部，上述第一收容部借助上述锥部与上述第二收容部连通，
上述锥部和上述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在该交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将上述第二收容部和上述端口的上述开口部隔离成不连通状态，
上述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有收容上述离心分离用容器的开口，
在上述上表面侧，具有收容上述第一收容部的第一收容空间，在其底面侧，具有收容上述第二收容部的第二收容空间，并且，在上述第一收容空间的上述第二收容空间侧，具备保持上述锥部的研钵状保持部，
并具备用于在离心时防止上述离心分离用容器脱落的周壁。
根据本发明的离心分离用用具的一个实施方式，上述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上述研钵状保持部的倾斜角度为45°～80°。
根据本发明的离心分离用用具的一个实施方式，上述离心分离用容器的姿态保持用适配器具有沿上下方向延伸的分型面，能够大致对开，上述分型面能够密合和分模。
根据本发明的离心分离用用具的一个实施方式，上述离心分离用容器的姿态保持适配器具有能够从外部通过肉眼确认上述离心分离用容器的安装状况的透明性。
根据本发明的离心分离用容器，由于在上部侧具有容积较大的第一收容部，在下部侧具有收容离心沉淀物的容积相对较小的第二收容部，因此，在离心分离后，沉淀物在第二收容部集聚。而且，在离心分离后排出上清液时，通过使得第一收容部和第二收容部的交界部或其附近的具有柔性的容器壁密合，能够使第二收容部与第一收容部侧的端口的开口部形成不连通状态，因此，能够从端口容易地排出上清液。特别是由于第二收容部和第一收容部侧的端口的开口部被隔离成不连通状态，因此，不需担心上清液排出时沉淀物泛起，沉淀物与上清液一起排出的情形。
此外，排出上清液时，通过将容器壁的密合位置设在第二收容部所集聚的离心沉淀物的正上方，能够尽可能减少残留在第二收容部的上清液。
而且，由于容器本体密闭，且具有在第一收容部侧具备开口部的端口，因此，能够在密闭系统中实现细胞悬浊液等内容液的收容、离心分离和上清液排出这一系列作业，能够无菌、简单且廉价地实现细胞的分离/清洗等。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器，在第一收容部的下部侧设有锥部，第一收容部借助锥部与第二收容部连通，因此，在离心操作时，沉淀物沿着锥部平稳沉降到第二收容部，而不会滞留在第一收容部。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器，第二收容部的容积为第一收容部的容积的10%以下，因此，不仅能够得到沉淀物浓度高的离心分离物，而且在为了从沉淀物中除去分散介质而进行的清洗中，能够减少反复清洗的次数，防止因反复清洗而造成的沉淀物的流出，还能够高效进行沉淀物的回收。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器，由于容器本体通过将叠加的具有柔性的片材或薄膜的周边密封而形成，因此具有均匀的柔性，减容性好，即，能够提高保管性、废弃性。此外，具有柔性的部分不限于容器本体的一部分，通过使容器整体具备柔性，能够易于构筑密闭系统。
而且，由于柔性优异，因此，即使在离心操作前的离心分离用容器的形状与姿态保持用适配器的收容空间的内侧结构未必匹配的情况下，只要其差异很小，就能够通过离心时容器壁的伸缩等变形抵消该差异，因此，能够与姿态保持用适配器的收容空间的内侧结构匹配，避免破袋。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器，容器本体通过吹塑成型法，由具有柔性的树脂形成，因此，能够提高与姿态保持用适配器的收容空间的内侧结构的匹配性。此外，具有柔性的部分，不限于容器本体的一部分，使容器整体具备柔性，能够易于构筑密闭系统。
并且，由于柔性优异，因此，即使在离心操作前的离心分离用容器的形状与姿态保持用适配器的收容空间的内侧结构未必匹配的情况下，只要其差异很小，就能够通过离心时容器壁的伸缩等变形抵消该差异，因此，能够与姿态保持用适配器的收容空间的内侧结构匹配，避免破袋。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器，由于能够与容器本体的内部空间连通的具有柔性的流体输送用管安装在端口，因此，很适宜密闭系统的构筑。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器，由于输送用管能够熔断密封，且能够通过无菌接合装置连通连接，因此，能够与细胞培养用料仓、培养基料仓、清洗液料仓、废液用料仓等实现无菌连接和分离。
根据本发明的离心分离用容器的姿态保持用适配器，由于在上表面侧具有收容第一收容部的第一收容空间，在底面侧具有收容第二收容部的第二收容空间，并且，第一收容空间的第二收容空间侧具备保持第一收容部的保持部，并具备用于在离心时防止离心分离用容器脱落的周壁，因此，不仅在离心分离用容器的第一收容部和第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性的情况下，即使在离心分离用容器整体具有柔性而难以自立的情况下，离心操作时，也能够稳固保持离心分离用容器。
根据本发明的离心分离用容器的姿态保持用适配器，具备用于保持设在离心分离用容器的第一收容部的下部侧的锥部的研钵状保持部，因此，能够与该形状的离心分离用容器很好地匹配。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器的姿态保持用适配器，由于研钵状保持部的倾斜角度为45°～80°，因此，几乎没有沉淀物滞留在锥部，从而能够沿着锥部沉淀到第二收容部。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器的姿态保持用适配器，离心分离用容器的姿态保持用适配器具有沿上下方向延伸的分型面能够分割为大致两半，能够实现分型面的密合和分模，因此，在安装离心分离用容器时，使分型面分开以设置间隙，由此，就能够容易且可靠地安装离心分离用容器。而且，在离心操作时，通过将分型面密合，能够形成保持离心分离用容器的规定的收容空间。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用容器的姿态保持用适配器，由于具有能够从外部通过肉眼确认离心分离用容器的安装状况的透明性，因此，能够通过肉眼确认离心分离用容器的安装状态，防止安装错误。
根据本发明的离心分离用用具，能够在离心分离后从端口容易地排出上清液，而且不需担心上清液的排出时沉淀物泛起，沉淀物与上清液一起排出的情况。而且，在排出上清液时，能够尽可能减少残留在第二收容部的上清液。
此外，能够在密闭系统中实现细胞悬浊液的内容液的收容、离心分离和上清液排出这一系列的作业，能够无菌、简单且廉价地实现细胞的分离/清洗等。
而且，不仅在离心分离用容器的第一收容部和第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性的情况下，即使在离心分离用容器整体都具有柔性而难以自立的情况下，通过离心分离用容器的姿态保持用适配器也能够在离心操作时稳固保持离心分离用容器。
根据本发明的离心分离用用具，离心操作时，沉淀物将沿着锥部平稳沉淀到第二收容部，而不会滞留在第一收容部。
此外，由于离心分离用容器的姿态保持用适配器具备保持离心分离用容器的锥部的研钵状保持部，因此，能够与该形状的离心分离用容器适宜匹配。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用用具，由于研钵状保持部的倾斜角度为45°～80°，因此，沉淀物几乎不会滞留在锥部，能够沿着锥部沉淀到第二收容部。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用用具，在离心分离用容器的姿态保持用适配器上安装离心分离用容器时，通过使分型面分开以设置间隙，由此，就能够容易且可靠地安装离心分离用容器。而且，在离心操作时，通过将分型面密合，能够形成保持离心分离用容器的规定的收容空间。
根据本发明的一个实施方式的离心分离用用具，由于具有能够从外部通过肉眼确认离心分离用容器安装到离心分离用容器的姿态保持用适配器上的状况的透明性，因此，能够通过肉眼确认离心分离用容器的安装状态，防止安装错误。
此外，到此为止，为了在说明本发明时便于进行说明，将细胞或细胞悬浊液作为对象物的悬浊液进行说明，但从本发明的原理而言，显然本发明不限于细胞或细胞悬浊液，也能普遍适用从含有分散质或分散介质的其它悬浊液对开离或清洗分散质的情况，这种情况也包括在本发明的范围中。特别是需要无菌操作的情况下，本发明的效果显著。
附图说明
图1为表示本发明的一个实施例的离心分离用容器的立体图。
图2为以周边密封形成图1的离心分离用容器时的容器本体的整体形状的简要俯视示意图。
图3为表示图1的离心分离用容器安装在姿态保持用适配器上的状态的俯视图。
图4为设在图1的离心分离用容器上的端口周边的放大立体图。
图5为本发明一个实施方式的离心分离用容器的姿态保持用适配器的立体示意图。
图6为构成图5的姿态保持用适配器的两个部件中的一个的立体示意图。
图7为从图1的离心分离用容器排出离心分离后的上清液时所使用的容器壁按压用压板的侧视图。
图8为将图1的离心分离用容器安装在图5的姿态保持用适配器上时的状态的立体示意图。
图9为示意性表示从图1的离心分离用容器排出离心分离后的上清液的状况的示意图。
具体实施方式
基于离心分离用用具说明本发明，作为离心分离用用具，具备收容被离心分离物的离心分离用容器1，和离心分离用容器1的姿态保持用适配器2这两个部件。
其中，姿态保持用适配器2的详细结构在后文记述，但为了在将被离心物收纳在离心机的料仓中时维持被离心物的位置和形状，用于填充被离心物和料仓之间的适配器不一定需要固定形状，也可以是离心操作时发生变形，与被离心物匹配以维持被离心物的位置和形状的适配器。
如图1所示，离心分离容器1具备：具有能够收容被离心分离液的密闭的内部空间的容器本体10；和能够将容器本体10的密闭的内部空间与外部连通的端口11、12。
容器本体10整体由具有柔性的软质部件形成，包括上部侧的具有较大容积的第一收容部10a和下部侧的具有相对较小容积的第二收容部10b，在第一收容部10a的下侧，设有与第二收容部10b连通的锥部10c。
该容器本体10的至少第二收容部10b和锥部10c通过使对置的容器壁10d、10e的内面之间互相密合，能够将第二收容部10b隔离成与第一收容部10a不连通的状态。
另外，使得排出上清液时相向的容器壁10d、10e的内面互相密合的上下方向的位置，主要由沉淀在第二收容部10b的沉淀物的容量适当决定。此外，为使构成第二收容部10b和锥部10c的容器壁10d、10e的内面互相密合，例如，可使用后述的容器壁按压用压板3（参照图7）。
以下，将能够使得对置的容器壁10d、10e内面互相密合的区域称为交界部10f。
这样，通过将构成第二收容部10b和锥部10c的容器壁10d、10e的内面互相密合，使得第二收容部10b与第一收容部10a隔离成为不连通状态，因此，在将沉淀物收容在第二收容部10b的状态下，例如，能够借助端口11容易地仅将上清液从第一收容部10a排出。
第一收容部10a包括后述的本体盖部，在上部侧形成大致呈长方体形状的收容空间。此外，设置在第一收容部10a的下侧的锥部10c，呈向着第二收容部10b渐渐收窄的形状。第二收容部10b在装满内容液的状态下，形成为呈管状结构或袋状结构。
由于第二收容部10b形成为管状结构或袋状结构，即所谓的内部深的结构，因此，上清液排出时，对沉淀物的影响能够进一步减小。
在此，内部深是指：与入口尺寸相比，进深达到足以能够减小上清液排出时对沉淀物的影响的程度的深度，例如，在入口为圆的情况下，进深优选为比直径深2倍，入口为椭圆的情况下，进深优选为比长轴深1倍。
容器本体1，由例如2片具有柔性的片材或薄膜叠合，将其周边密封而形成，或者，由具有柔性的树脂通过吹塑成型法形成。
作为形成该容器本体10的树脂，例如可举出：软质氯乙烯树脂、低密度聚乙烯树脂、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、聚丙烯树脂、乙烯-丙烯共聚物、聚丁二烯树脂、苯乙烯-丁二烯共聚物树脂及其氢化树脂、聚氨酯树脂等，以及这些树脂的混合物。
上述树脂中，低密度聚乙烯当然包括普通低密度聚乙烯，而且还包括直链低密度聚乙烯树脂、茂金属催化剂系低密度聚乙烯树脂。此外，聚丙烯树脂包括立构规整嵌段聚丙烯树脂以及聚丙烯树脂和立构规整嵌段聚丙烯树脂的混合物。
在通过密封周边而形成容器本体10时，如图2所示，可以第一收容部相当面10a’、第二收容部相当面10b’、锥部相当面10c’各作为一张而剪裁的具有柔性的片材或薄膜形成。
使用一枚片材或薄膜的情况下，将两张片材或薄膜重叠，如图1所示，通过中央的顶封10g和由中央的顶封10g的长度方向的两端遍及整个正交方向的左右侧边的顶封10h、10i将本体盖部密封。此外，由中央的顶封10h的长度方向的两端的该位置，从第一收容部10a向第二收容部10b延伸的左右的侧封10j、10k将不包括本体盖部的容器本体10密封。
端口11、12为用于填充、排出或输送内容液的部件，在形成第一收容部10a的容器壁上，与利用左右侧边的顶封10h、10i的周边的熔接同时安装，并具有将容器本体10的密封的内部空间与外部连通的功能。
作为形成端口11、12的材料，优选与容器本体10热熔接的材料，例如，在容器本体为聚乙烯系树脂的情况下，可从聚乙烯系树脂中选择。在通过吹塑成型形成容器本体10的情况下，也可将端口11、12与容器本体10一体化成型。
如图3所示，在容器本体10收纳于姿态保持用适配器2中时，端口11、12优选设置为向着中央方向，或者容易朝向中央方向。
例如，在通过周边密封形成容器本体10的情况下，端口支承片13、14的安装与左右侧边的顶封10h、10i的周边熔接同时进行，通过将端口11、12端口熔接在支承片13、14熔融，在容器本体10收纳在姿态保持用适配器2中时，通过将端口支承片13、14向中央方向折入，从而能够使端口11、12倒向中央方向。
在端口11上，可安装能够与容器本体10的内部空间连通的具有柔性的流体输送用管15。此外，在端口12上，可安装能够与外部的流体输送用具连接的连接用适配器16。
另外，通过将端口支承片13、14向中央方向折入，端口11、12能够倒向中央方向，因此，在离心操作时，端口11、12或安装在端口11上的流体输送用管15、以及安装在端口12上的连接用适配器16，能够收容在后述的姿态保持用适配器2内。
作为形成输送用管15的材料，可举出软质氯乙烯树脂、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物、低密度聚乙烯树脂、乙烯-丙烯共聚物、软质PP树脂（例如，聚丙烯树脂的立构规整嵌段共聚物）、聚丁二烯树脂、苯乙烯-丁二烯共聚物等。
输送用管15优选为能够熔断密封，且能够通过无菌接合装置连通并连接的管材。该熔断密封是通过市售的管封（tube sealer），例如Haemoneties公司制MINITM TUBE SEALER 2380，Terumo公司制TUBESEALER AC-155等，将管热熔接密封，同时，在维持热熔接部两侧的管的密封状态下，以能够切断的方式进行密封。
此外，能够通过无菌接合装置连通的连接是指，能够利用市售的无菌接合装置，例如Terumo公司制无菌接合机TSCD202，与未处于连接状态的其它管，例如血液保藏用料仓的管、输血套件用管等连通，并且能够无菌熔接以进行连接的连接。
作为具备上述具有柔性、能够熔断密封，能够通过无菌接合装置连通并连接的条件的输送用管15的形成树脂，可举出软质氯乙烯树脂、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物。但是，随着今后的熔断密封机、无菌接合装置的进步，不能否认存在可使用软质氯乙烯树脂、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物以外的材料的可能性。
由于连接用适配器16通过软质氯乙烯树脂等形成，因此，能够与市售的安装有插瓶针的流体输送用具连接。如图4所示，在该连接用适配器16中，在将容器本体10的内部空间与外部隔离的状态下，通过刺穿安装有插瓶针的流体输送用具，例如Terumo公司制的连接管瓶针能够连通的隔膜16a设置在管内16b。
如图5所示，姿态保持用适配器2具有能够插入离心分离用容器1的顶面开放的容器收容空间20，并且形成为具有底面平坦的外侧形状，以适用于离心分离机的料仓。
容器收容空间20沿上下方向具有收容有离心分离用容器1的第一收容部10a的第一收容空间201、和收容有第二收容部10b的第二收容空间202。
此外，在第一收容空间201的下侧，形成用于保持离心分离用容器1的锥部10c的研钵状保持部203，通过将该研钵状保持部203的倾斜角度设为45°以上，能够使几乎所有的沉淀物不会滞留在离心分离用容器1的锥部10c，而能够沿着锥部10c沉淀到第二收容部10b。需要说明的是，当倾斜角为80°以上时，产生了第一收容空间201变小，乃至使离心分离用容器1的第一收容部10a的容量变小的缺点。
还需要说明的是，本例所述的倾斜角是指相对于与离心操作时的离心力的力矩垂直的平面的研钵状的斜面立起的角度。
在容器收容空间20中，离心操作时，离心分离用容器1的第一收容部10a、锥部10c、第二收容部10b，能够与该容器壁外面匹配的圆筒面20a、研钵状保持部203的锥面20c、管状面或袋状面20b由上下方向连续的周壁面形成（离心分离用容器1，参照图1）。
在此，匹配意为，离心时，离心分离用容器1的容器壁在不破损的状态下，与姿态保持用适配器2的圆筒面20a、研钵状的锥面20c、管状面或袋状面20b密合，沿着该密合的容器壁，沉淀物有效沉积在第二收容部10b。需要说明的是，尽管优选为容器壁的褶皱尽可能少，但是，如果即使有褶皱，沉淀物难以在褶皱处堆积，能够有效堆积在第二收容部10b，则也属于匹配。
如图5和图6所示，姿态保持用适配器2由具有沿上下方向延伸的分型面21的大致对开的2个部件2A、2B构成，该分型面21设定为与离心机的离心轴平行。
而且，在离心操作时，2个部件2A、2B在分型面21处密合，此外，在将离心分离用容器1收容到容器收容空间20时，为了能够容易且可靠地实现向容器收容空间20的收容，在2个部件2A、2B的分型面21上，设有间隙。
大致对开的2个部件2A、2B呈通过插通到贯通孔22a、22b、23a、23b的螺栓24a、24b、25a、25b（参照图5）能够紧固成一体的结构，通过螺栓24a、24b、25a、25b的调节，能够调节分型面21的间隙的大小。
作为形成姿态保持用适配器2的树脂，例如可举出苯乙烯系树脂、丙烯酸系树脂、聚乙烯系树脂、聚丙烯系树脂、聚酰胺系树脂、聚酯系树脂、氟系树脂、聚缩醛系树脂、聚碳酸酯系树脂、ABS树脂、聚砜系树脂等硬而有韧性的树脂。
此外，为形成能够从外部容易通过肉眼确认离心分离用容器1的安装状况的状态，可举出具有透明性的丙烯酸树脂、聚碳酸酯树脂、聚砜树脂、透明ABS树脂、透明化聚丙烯系树脂、聚对苯二甲酸乙二酯树脂、聚砜树脂、聚甲基戊烯树脂等透明树脂。
如图7所示，容器壁按压用压板3具备：按压部30、31，手柄32、33，用于打开手柄32、33关闭按压部30、31，与容器本体10的交界部10f（参照图1）密接紧固的弹簧34。按压部30、31设定为长度比容器本体10的交界部10d的宽度方向的长度长，在手柄32、33的端部，设有悬吊孔35、36。
如上所述，根据本实施方式的离心分离用容器1，由于上部侧具有容积较大的第一收容部10，下部侧具有收容离心沉淀物的容积相对较小的第二收容部10b，因此，离心分离后，沉淀物集聚在第二收容部10b。而且，在离心分离后排出上清液时，通过使第一收容部10a与第二收容部10b的交界部10d或其附近的具有柔性的容器壁10d、10e密合，使得第二收容部10b与第二收容部10a侧的端口11的开口部呈不连通状态，由此，就能够容易地从端口11排出上清液。特别是由于第二收容部10b与第二收容部10侧的端口11的开口部隔离成不连通状态，因此，不需担心上清液排出时沉淀物泛起，沉淀物与上清液一起排出的情形。
此外，排出上清液时，通过将容器壁10d、10e的密合位置设在第二收容部10b所集聚的离心沉淀物的正上方，能够尽可能减少残留在第二收容部10b的上清液。
而且，由于容器本体10密闭，且具有在第一收容部10a侧具备开口部的端口11，因此，能够在密闭系统中实现细胞悬浊液等内容液的收容、离心分离和上清液的排出这一系列作业，能够无菌、简易且廉价地实现细胞的分离/清洗等。
此外，由于在第一收容部10a的下部侧设有锥部10c，第一收容部10a借助锥部10c与第二收容部10b连通，因此，在离心操作时，沉淀物沿着锥部10c平稳沉淀到第二收容部10b，而不会滞留在第一收容部10a。
根据本实施方式的离心分离用容器的姿态保持用适配器2，上表面侧具备收容有第一收容部10a的第一收容空间201，底面侧具备收容有第二收容部10b的第二收容空间202，并且，第一收容空间201的第二收容空间202侧具备保持第一收容部10a的锥部10c的研钵状保持部203，具备离心操作时防止离心分离用容器1的脱落的圆筒面20a，因此，不仅是在离心分离用容器1的第一收容部10a和第二收容部10b的交界部10f或其附近的容器壁10d、10e具有柔性的情况下，即使是在离心分离用容器1整体均具有柔性难以自立的情况下，在离心操作时，也能够稳固保持离心分离用用容器1。
实施例1
本例中使用的离心分离用容器1在容器本体10上部具有2个端口11、12，各端口11、12连接着流体输送用管15或连接用适配器16。在容器本体10的下部，形成具有内部深的袋状结构的第二收容部10b、和向该第二收容部10b渐渐收窄的锥状的锥部10c。
容器本体10通过将乙酸乙烯酯含量15%的乙烯-乙酸乙烯酯共聚物胀塑成型得到的具有柔性的片材10d、10e叠层，利用高频密封法将其周边密封，然后将通过注射成型法成型的中密度聚乙烯树脂制端口11热密封在端口支承片14上，由此，由具有柔性的片材形成整个容器壁。
在容器本体10的锥部10c中，将周边密封时的角度设定为90°，以使得填充内容液立体化时的锥度（对向面的棱线所成角度）为60°左右。此外，将以容器按压用压板3夹持交界部10f而使对向的容器壁10d、10e密合时的狭窄部侧的空间和端口侧的空间的体积比设定为约1:150。
流体输送用管15是内径4.7mm、外径6.7mm的由具有柔性的软质氯乙烯树脂形成的部件。连接用适配器16是安装有插瓶针的流体输送用具的插瓶针容易刺穿并能够连接，且不易脱落的内径4.4mm的由软质氯乙烯树脂形成的部件。
作为姿态保持用适配器2，是通过对透明的丙烯酸树脂的树脂块进行切削加工而制作，通过对切削加工面的研磨，透明化成内侧能够由肉眼观察到的部件。容器收纳部的锥面的倾斜角设定为倾斜角最大的位置的倾斜角为63°、倾斜角最小的位置的倾斜角为57°，以与容器本体的锥部匹配。
使用上述离心分离用容器1和姿态保持用适配器2，说明细胞分离的操作步骤和结果。
将含有K562细胞8.8×104个/ml的255ml的培养基（KBM400：Kohjin-bio公司制）制成的细胞浮游液输送到容量300ml的离心分离用容器1之后，将流体输送用管15用Terumo公司制管封（TERUFLEXAC0157）熔断密封，从而将容器密封。
接着，拧松姿态保持用适配器2的螺栓24a、24b、25a、25b，在2个部件2A、2B的分型面21设置间隙后，以肉眼确认填充了培养液的离心分离用容器1，同时将其插入并置于姿态保持用适配器2的第一收容空间201和第二收容空间202内，将螺栓24a、24b、25a、25b紧固，以使分型面21密合。
端口11和流体输送用管15暂时沿中央的顶封10g收存，对于越过构成姿态保持用适配器2的第一收容空间201的对向的另一个圆筒面20a的部分，在另一个内壁附近弯曲，沿内壁收存。此外，连接用适配器16也沿着顶封10g收存。
与插入设置有以同样方式制作的另一个离心分离用容器1的姿态保持用适配器2一起，分别载置在离心机（久保田制作所制大容量冷却离心机9810）的对角线上的料仓中，以400G的离心力进行20分钟的离心操作。
以上的2个离心分离用容器1被称为第一容器、第二容器。
离心操作后，拧松姿态保持用适配器2的螺栓24a、24b、25a、25b，小心取出离心分离用容器1，确认沉淀物是否形成明确的界面，然后，通过容器壁按压用压板3，以不扰乱沉淀物的界面的方式在该界面的正上方，即第二收容部10b和锥部10c的交界部附近，将隔着沉淀物界面相对的容器壁10d、10e密合，将第二收容部10c与端口11侧的第一收容部10a隔开。
接着，用手揉搓离心分离用容器1的上清液侧的容器壁，搅拌上清液，将沉淀或附着在离心分离用容器1的壁面的细胞分散到上清液中。
并且，对于第一容器，用悬吊孔35、36将容器壁按压用压板3吊起到悬吊装置上，悬吊为使得端口11位于下方的状态，将端口11侧的空间中的，即存在于第一收容部10a内的培养基，也即上清液从流体输送用管15全部排出，测定上清液的量和上清液中浮游的细胞数，计算浮游在上清液中的总细胞数，并计算出离心分离用容器1内残留的总细胞数和初始总细胞数之比，记为回收率。
此外，对于第二容器，去除容器壁按压用压板3，与第一次的离心操作同样，插入并设置在姿态保持用适配器2中，以400G的离心力进行20分钟的第二次离心操作，之后，与第一容器同样，计算上清液中浮游的总细胞数和回收率。
其结果，如表1所示。
表1
Figure BDA00001780496300231
接着，向第一容器中作为沉淀而残留的细胞注入PBS 30ml，轻捏沉淀物，通过肉眼和倒置显微镜观察（100倍）沉淀物的再分散性，确认不会造成结块，能够均匀分散。
此外，测定第二容器的上清液排出后的料仓内的液体量，结果为2.1ml，为当初填充的总液量的0.82%。
即，根据本实施例，能够确认：回收率好、再分散性好、沉淀物侧的残留液少、实现了高效的离心分离。
产业实用性
如上所述，本发明的离心分离用容器、离心分离用容器的姿态保持用适配器、离心分离用用具，当用于细胞培养后的细胞的分离和清洗中时，能够高效分离细胞。极为适合用作例如免疫疗法中使用的细胞、抗体、蛋白质的回收或清洗用方案，用于再生医疗中使用的细胞的回收或清洗用方案，通过细胞培养实现的制药的研究开发用方案，以及细胞之外的微粒的回收或清洗用方案。

Claims (17)

1.一种离心分离用容器，所述离心分离用容器借助姿态保持用适配器安装在离心机上，其特征在于，具备：
具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体；和能够将所述内部空间与外部连通的端口，
所述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与所述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小容积的第二收容部，
所述端口在所述第一收容部侧具有开口部，
所述第一收容部和所述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在所述交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将所述第二收容部与所述端口的所述开口部隔离成不连通状态。
2.如权利要求1所述的离心分离用容器，其特征在于，所述第一收容部的下部侧设有锥部，所述第一收容部借助所述锥部与所述第二收容部连通，
所述锥部和所述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在所述交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将所述第二收容部与所述端口的所述开口部隔离成不连通状态。
3.如权利要求1或2所述的离心分离用容器，其特征在于，所述第二收容部的容积为所述第一收容部的容积的10%以下。
4.如权利要求1～3中任一项所述的离心分离用容器，其特征在于，所述容器本体通过将叠加的具有柔性的片材或薄膜的周边密封而形成。
5.如权利要求1～3中任一项所述的离心分离用容器，其特征在于，所述容器本体通过吹塑成型，由具有柔性的树脂形成。
6.如权利要求1～5中任一项所述的离心分离用容器，其特征在于，能够与所述容器本体的内部空间连通的具有柔性的流体输送用管安装在所述端口上。
7.如权利要求6所述的离心分离用容器，其特征在于，所述输送用管以能够熔断密封且能够通过无菌接合装置连通的方式安装。
8.一种离心分离用容器的姿态保持用适配器，其是用于将离心分离用容器安装在离心机的料仓上的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，
所述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，
所述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与所述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小容积的第二收容部，
所述第一收容部和所述第二收容部的交界部或者其附近的容器壁具有柔性，
所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具备用于收容所述离心分离用容器的开口，
在所述上表面侧，具有收容所述第一收容部的第一收容空间，在所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的底面侧，具有收容所述第二收容部的第二收容空间，并且，在所述第一收容空间的所述第二收容空间侧，具备保持所述第一收容部的保持部，
并具备用于在离心操作时防止所述离心分离用容器脱落的周壁。
9.一种离心分离用容器的姿态保持用适配器，其是用于将离心分离用容器安装在离心机的料仓上的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，
所述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，
所述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部；和与所述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相较小的容积的第二收容部，
所述第一收容部的下部侧设有锥部，所述第一收容部借助所述锥部与所述第二收容部连通，
所述锥部和所述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，
所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有用于收容所述离心分离用容器的开口，
在所述上表面侧，具有收容所述第一收容部的第一收容空间，在所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的底面侧，具有收容所述第二收容部的第二收容空间，并且，在所述第一收容空间的所述第二收容空间侧，具备保持所述锥部的研钵状保持部，
并具备用于在离心操作时防止所述离心分离用容器脱落的周壁。
10.如权利要求9所述的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，所述研钵状保持部的倾斜角度为45°～80°。
11.如权利要求8～10中任一项所述的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，所述离心分离用容器的姿态保持用适配器具有沿上下方向延伸的分型面，能够大致对开，所述分型面能够密合和分模。
12.如权利要求8～11中任一项所述的离心分离用容器的姿态保持用适配器，其特征在于，所述离心分离用容器的姿态保持适配器，具有能够从外部通过肉眼确认所述离心分离用容器的安装状况的透明性。
13.一种离心分离用用具，其特征在于，具备离心分离用容器和离心分离用容器的姿态保持用适配器，其中，
所述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，和能够将所述内部空间与外部连通的端口，
所述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部，和与所述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小的容积的第二收容部，
所述端口在所述第一收容部侧具有开口部，
所述第一收容部和所述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在该交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将所述第二收容部与所述端口的所述开口部隔离成不连通状态，
所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有用于收容所述离心分离用容器的开口，
在所述上表面侧，具有收容所述第一收容部的第一收容空间，在所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的底面侧，具有收容所述第二收容部的第二收容空间，并且，在所述第一收容空间的所述第二收容空间侧，具备保持所述第一收容部的保持部，
并具备用于在离心操作时防止所述离心分离用容器脱落的周壁。
14.一种离心分离用用具，其特征在于，具备离心分离用容器和离心分离用容器的姿态保持用适配器，其中，
所述离心分离用容器具备：具有能够收容被离心物的密闭的内部空间的容器本体，和能够将所述容器本体的密闭的内部空间与外部连通的端口，
所述容器本体包括位于上部侧的具有较大容积的第一收容部，和与所述第一收容部连通且收容离心沉淀物的位于下部侧的具有相对较小的容积的第二收容部，
所述第一收容部的下部侧设有锥部，所述第一收容部借助所述锥部与所述第二收容部连通，
所述锥部和所述第二收容部的交界部或其附近的容器壁具有柔性，在所述交界部或其附近，能够通过将对向的容器壁密合，将所述第二收容部与所述端口的所述开口部隔离成不连通状态，
所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的上表面具有收容所述离心分离用容器的开口，
在所述上表面侧，具有收容所述第一收容部的第一收容空间，和，在所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的底面侧，具有收容所述第二收容部的第二收容空间，并且，在所述第一收容空间的所述第二收容空间侧，具备保持所述锥部的研钵状保持部，
并具备用于在离心操作时防止所述离心分离用容器脱落的周壁。
15.如权利要求14所述的离心分离用用具，其特征在于，所述离心分离用容器的姿态保持用适配器的所述研钵状保持部的倾斜角度为45°～80°。
16.如权利要求13～15中任一项所述的离心分离用用具，其特征在于，所述离心分离用容器的姿态保持用适配器具有沿上下方向延伸的分型面，能够大致对开，所述分型面能够密合和分模。
17.如权利要求13～16中任一项所述的离心分离用用具，其特征在于，所述离心分离用容器的姿态保持适配器具有能够从外部通过肉眼确认所述离心分离用容器的安装状况的透明性。
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