CN102692476A - 气流吹扫微注射器萃取技术与gc-ms联用检测北细辛药材的方法 - Google Patents

气流吹扫微注射器萃取技术与gc-ms联用检测北细辛药材的方法 Download PDF

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李东浩
张善玉
朴相范
杨翠
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Yanbian University
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Abstract

本发明涉及用气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法，包括以下几个步骤，（1）北细辛供试品溶液的制备；（2）色谱条件；（3）建立北细辛药材指纹图谱共有模式图谱；（4）指纹图谱质量控制；将所测得的供试品图谱与对照指纹图谱进行比较，并输入计算机辅助相似性评价系统进行相似度计算，得出相关系数，便可作出检测结论。本方法具有以下特点：①可以从整体上、宏观上表征北细辛药材的质量；②具有较好的专属性和重现性；可操作性强；③可用于鉴别北细辛药材的真伪。

Description

气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法
技术领域
本发明属于一种中药材的检测方法，具体是指一种气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法。
背景技术
北细辛药材来源于马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr. Schmidt val. Mandshuricum (Maxim.) Kitag. 的干燥根和根茎，收载于中国药典。北细辛全草含挥发油1％~ 3％，含量较高的有黄樟醚、3,5-二甲氧基甲苯、榄香素、优香芹酮、肛蒎烯、仿蒎烯、细辛醚等多种成分。中国药典中采用挥发油测定的方法和高效液相法测定细辛脂素含量的方法对其进行定量分析，然而其他植物中也会含有细辛脂素类化合物，这就对北细辛药材真伪鉴定带来不利。因此，仅仅测定细辛脂素的含量不能完整的反应北细辛药材的全貌。指纹图谱分析技术可以有效地量化检测出中药材的宏观质量信息，与单一指标成分或活性成分鉴定相比，其所含的信息是综合的多层次的，因此更为科学和合理，更为符合中药材的检测。
气流吹扫微注射器萃取技术是顶空萃取技术发展中的一次革命，利用开放式顶空萃取体系克服了封闭式顶空萃取技术中不完全萃取的问题，并且实现了挥发性和半挥发性有机物的同时、快速（几分钟）、完全富集与分析。本方法运用了目标物的运动既受热力学作用又受气流动力学作用的原理以及结合理想气体理论，使目标物与萃取溶剂的接触几率大大增加，进而达到了提高目标物富集率的目的。为植物真伪鉴别、植物信息传递机理、植物质量评价等研究提供了萃取、浓缩、净化为一体的快速、准确的样品前处理方法。
发明内容
本发明的目的是建立一种用气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法，利用计算机辅助获得北细辛药材指纹图谱共有模式图谱，并将该方法应用于北细辛药材真伪鉴别中。
本发明技术方案如下：
一种气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法，包括下列步骤：
（1）北细辛供试品溶液的制备
精密称取经鉴定的北细辛药材的粉末5 ~ 20 mg，置于样品槽中，将250 μL微型注射器中加入 20 μL 正己烷进行萃取，萃取温度为250℃, 萃取时间为2 min，冷凝温度为―4℃，氮气流速为2 mL/min，萃取结束后用正己烷定容至100 μL，备用；
（2）色谱条件
色谱柱 DB-5MS，石英毛细管柱 30 m × 0.25 mm × 0.25 μm，
进样口温度：280℃，
    MS检测器温度：200℃，
    进样量：2 μL，
    升温程序：起始温度为45℃，保持1 min，以4℃/min升高至250℃，再以6℃/min升高至280℃，保持5 min；
载气为He，流速为0.98 mL/min，恒流方式，不分流；
    质谱分析条件：质量扫描范围：50-600 aum，扫描速度：1250 aum/s；
  （3）建立北细辛药材指纹图谱共有模式图谱
对所收集并经鉴定为北细辛药材的10批样品，按照供试品制备方法制备供试品溶液，并逐一按上述相同方法检测，分别得到各批北细辛药材相应的指纹图谱，经计算机辅助相似性评价系统进行计算，既可得出北细辛药材共有模式图谱；
  （4）指纹图谱质量控制
    将样品的GC-MS指纹图谱与标准指纹图谱比较；以23个共有峰计算得到的相似度应不小于0.90。
所述计算机辅助相似性评价系统系国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)》；或用23个共有峰的相关系数来表示相似度。
本发明的原理是基于北细辛药材中主要含有大量的挥发性和半挥发性成分，因此，采用气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用对挥发性和半挥发性物质群进行检测，从整体上、宏观上对产品质量进行控制。在研究过程中对提取方法、检测方法、色谱条件等进行了考察，精密度和重现性实验中23个共有峰峰面积比值的相对标准偏差均小于3%。根据采集10批样品的指纹图谱经国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)》进行计算，建立了北细辛药材指纹图谱共有模式图谱，并确定供试品指纹图谱与相应的共有模式图谱之间的相关系数为0.90。本方法能方便的对北细辛药材进行检测。
附图说明
图1 为北细辛GC-MS标准指纹图谱。
图2 为实施例1吉林产北细辛指纹图谱。
图3 为实施例2辽宁产北细辛指纹图谱。
具体实施方式
实施例1
1、药材来源  吉林
2、样品编号  20110921
3、供试品溶液的制备与检测
第一步：① 供试品溶液的制备
准确称取经鉴定的北细辛药材的粉末(过100 目筛)20 mg，置于样品槽中，将250 μL微型注射器中加入 20 μL 正己烷进行萃取，萃取温度为250℃, 萃取时间为2 min，冷凝温度为-4℃，氮气流速为2 mL/min。萃取结束后用正己烷定容至100 μL，备用。
② 色谱条件
色谱柱 DB-5MS 石英毛细管柱(30 m × 0.25 mm × 0.25 μm )；
进样口温度：280℃；
MS检测器温度：200℃，
进样量：2 μL，
气相与质谱连接口温度：280℃；
升温程序：起始温度为45℃，保持1 min，以4℃/min升高至250℃，再以6℃/min升高至280℃，保持5 min；
载气为He，流速为0.98 mL/min，恒流方式，不分流；
进样器：岛津AOC-20i自动进样器，进样速度：高速；粘度补偿时间：0.2 s。
③ 主要仪器与试药
     色谱仪： GC-MS 2010（日本岛津公司）；
     ME-101多功能微萃取仪：延边大学制造，经新产品鉴定：2009年“ME-101多功能微萃取仪”通过吉林省工业和信息化厅新产品鉴定（200912002）。技术鉴定：2009年“气流式微富集技术及其应用”通过了吉林省科学技术厅技术鉴定（2009-623）。详细技术内容可参考延边大学申请的专利：专利申请号为200820072292.X，201020165509.9，200920093186.4，201020165631.6，201010170882.8，201020616258.1，201020693247.3，201020610097.5等；
氮气：高纯氮气，纯度99.99%；
正己烷：Caledon (Georgetown, Ont., Canada)，色谱纯。
④   检测 
取2 μL供试品溶液经自动进样器进样，气相色谱仪测定，既得气相色谱图。
第二步，建立北细辛药材指纹图谱共有模式图谱
对所收集并经鉴定为北细辛药材的10批样品，按照供试品制备方法制备供试品溶液，并逐一按上述相同方法检测，分别得到各批北细辛药材相应的指纹图谱，经计算机辅助相似性评价系统进行计算，既可得出北细辛药材共有模式图谱。
建立共有模式图谱可以将所得的北细辛药材指纹图谱输入计算机计算供试品与共有模式图谱之间的相关系数，从理论上考察供试品与共有模式图谱之间的相似度，从而使质量的判别标准更客观科学。
4、用以上述相同的方法制备待测试品溶液和测定待测试品。
5、结果判断
色谱图中检出了与北细辛药材对照指纹图谱相同的23个特征峰；供试品指纹图谱与北细辛药材指纹图谱共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为 0.97 ，大于0.900。因此，可以判定本供试品符合本发明修订的关于北细辛药材的质量标准。
  实施例2 北细辛药材的检测
1、药材来源  辽宁
2、样品编号  20110926
3、以上述实施例1相同方法制备供试品溶液
4、以上述实施例1相同的方法测定供试品溶液
5、结果判断
色谱图中检出了与北细辛药材对照指纹图谱相同的23个特征峰；供试品指纹图谱与北细辛药材指纹图谱共有模式图谱经计算机辅助相似性评价系统进行计算，相关系数为 0.96 ，大于0.90。因此，可以判定本供试品符合本发明修订的关于北细辛药材的质量标准。

Claims (2)

1.一种气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法，包括下列步骤：
（1）北细辛供试品溶液的制备
精密称取经鉴定的北细辛药材的粉末5 ~ 20 mg，置于样品槽中，将250 μL微型注射器中加入 20 μL 正己烷进行萃取，萃取温度为250℃, 萃取时间为2 min，冷凝温度为―4℃，氮气流速为2 mL/min，萃取结束后用正己烷定容至100 μL，备用；
 （2）色谱条件
色谱柱 DB-5MS，石英毛细管柱 30 m × 0.25 mm × 0.25 μm，
进样口温度：280℃，
    MS检测器温度：200℃，
    进样量：2 μL，
    升温程序：起始温度为45℃，保持1 min，以4℃/min升高至250℃，再以6℃/min升高至280℃，保持5 min；
载气为He，流速为0.98 mL/min，恒流方式，不分流；
    质谱分析条件：质量扫描范围：50-600 aum，扫描速度：1250 aum/s；
  （3）建立北细辛药材指纹图谱共有模式图谱
对所收集并经鉴定为北细辛药材的10批样品，按照供试品制备方法制备供试品溶液，并逐一按上述相同方法检测，分别得到各批北细辛药材相应的指纹图谱，经计算机辅助相似性评价系统进行计算，既可得出北细辛药材共有模式图谱；
  （4）指纹图谱质量控制
    将样品的GC-MS指纹图谱与标准指纹图谱比较；以23个共有峰计算得到的相似度应不小于0.90。
2.根据权利要求1所述的一种气流吹扫微注射器萃取技术与GC-MS联用检测北细辛药材的方法，其特征在于所述计算机辅助相似性评价系统系国家药典委员会开发的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版(2004A)》；或用23个共有峰的相关系数来表示相似度。
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