CN102690310A - N4—乙酰胞苷的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种N4—乙酰胞苷的制备方法，是直接将胞苷6元杂环上的4位活性氨基乙酰化，即不涉及核苷戊糖上的羟基，也不存在中间产物的污染，所得产品分子量与分子结构与CAS注册的N4—乙酰胞苷完全一致，产品得率可达50~60%、纯度可达98%以上，符合国际标准达到试剂级水平，本发明方法更加简单、便捷，适合于大规模工业化生产。

Description

N4—乙酰胞苷的制备方法
技术领域
本发明涉及一种N4—乙酰胞苷的制备方法，尤其是一种操作简单、产品纯度高、得率大，适合于大规模工业化生产的N4—乙酰胞苷的制备方法。
背景技术
大分子脱氧核糖核酸（DNA）及核糖核酸（RNA）的单体是核苷酸，核苷酸水解掉磷酸成为核苷。核苷是生命体系中的基本构建物，具有广泛的生物活性。胞嘧啶核苷（胞苷）对机体脂类代谢有着直接影响，同时胞苷的类似物在临床上具有抗病毒及抗肿瘤的独特疗效。N4—乙酰胞苷是胞苷碱基杂环上的4位活性氨基经酰化修饰的产物，是生产胞苷类似物的药物中间体。N4—乙酰胞苷为白色或灰白色结晶粉末，熔点为199。C，产品纯度达98%，国际上已将其注册化学物质登录号（CAS），编号为3768-18-1。
目前，国内外关于制备N4—乙酰胞苷的报道较少。1963年，Khorana.H .G 及其合作者创设苷类物质杂环上活性氨基的酰化方法：酰化戊糖或脱氧戊糖上所有羟基以及碱基杂环上的活性氨基，然后选择性的水解掉戊糖或脱氧戊糖上的—O—酯，保留碱基上的酰化基团。1982年Jones等人的方法是先用甲硅烷基将糖上的羟基加以瞬间保护，再将杂环上的活性氨基酰化。以上两种方法，因为均涉及对糖上的羟基进行处理，存在着操作复杂的问题。2006年又有关于核苷类似物质碱基上活性氨基酰化方法的相关报道，是用对硝基苯酚将相应的酸活性为酯，再用该酯与二环已基碳二亚胺作为偶联剂，完成核苷碱基上的活性氨基的N位酰化。虽然避开了对糖上的羟基进行处理，但却存在着中间产物的污染问题，而克服中间产物仍导致操作方法复杂。
发明内容
本发明是为了解决现有技术存在的上述技术问题，提供一种操作简单、产品纯度高、得率大，适合于大规模工业化生产的N4—乙酰胞苷的制备方法。
本发明的技术解决方案是：一种N4—乙酰胞苷的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：
a. 称取胞苷置于烧杯中；
b. 加入 NN二甲基甲酰胺，搅拌8~15min；所述NN二甲基甲酰胺与胞苷的比例为8~12ml：1g；
c. 加入乙酸酐，20~25℃下搅拌22~26小时；所述乙酸酐与胞苷的比例为0.3~0.5ml：1g；
d. 于28~32℃水浴真空浓缩，蒸干至油状物出现；
e. 加入乙酸乙酯和乙醚混合物（1：1），搅拌研磨；所述乙酸乙酯和乙醚混合物与胞苷的比例为3~5ml：1g；
f. 加入NaHCO3，继续研磨；所述NaHCO3与胞苷的质量比为0.3~0.4：1；
g. 加入纯水洗涤，充分震荡后弃上清液，将沉淀物冻干；
h. 配制5% HCl，洗脱阴离子交换树脂层析柱，再用纯水洗脱至PH值7.0~7.5，将上述g步骤获得的沉淀物用水溶解后加入柱上，用纯水洗脱，分5个阶段收集洗脱液，每阶段收集5管；
i. 取中间管洗脱液进行减压蒸馏、冻干。
本发明是直接将胞苷6 元杂环上的4位活性氨基乙酰化，即不涉及核苷戊糖上的羟基，也不存在中间产物的污染，所得产品分子量与分子结构与CAS注册的N4—乙酰胞苷完全一致，产品得率可达50~60%、纯度可达98%以上，符合国际标准达到试剂级水平，本发明方法更加简单、便捷，适合于大规模工业化生产。
具体实施方式
实施例1：
a. 称取1g胞苷置于100 ml烧杯中；
b. 加入10ml NN二甲基甲酰胺，放入磁力棒搅拌10min；
c. 加入0.39ml乙酸酐，20~22℃下搅拌24小时；
d. 于28~30℃水浴真空浓缩，蒸干至油状物出现；
e. 加入4ml乙酸乙酯和乙醚混合物（1：1），搅拌研磨；
f. 加入0.345g NaHCO3，继续研磨；
g. 加入纯水洗涤，充分震荡后弃上清液，将沉淀物冻干；
h. 配制5% HCl，洗脱阴离子交换树脂层析柱，再用纯水洗脱至PH值7.0~7.5，将上述g步骤获得的沉淀物用水溶解后加入柱上，用纯水洗脱，分5个阶段收集，每阶段收集5管，每管收集0.5ml洗脱液；
i. 取中间15管共7.5ml洗脱液进行减压蒸馏、冻干，得0.6g冻干品。
实验：
取实施例1所得冻干品用流动相配制成10mg/100ml的溶液，进行高效液相层析（HPLC）分析。
取实施例1所得冻干品进行质谱及核磁共振分析，确定分子量和分子结构。
结果：
所得产品分子量与分子结构与CAS注册的N4—乙酰胞苷完全一致，产品得率60%、纯度可达99%。
实施例2：
a. 称取10g胞苷置于烧杯中；
b. 加入80ml NN二甲基甲酰胺，放入磁力棒搅拌8min；
c. 加入3ml乙酸酐，22~24℃下搅拌22小时；
d. 于28~30℃水浴真空浓缩，蒸干至油状物出现；
e. 加入30ml乙酸乙酯和乙醚混合物（1：1），搅拌研磨；
f. 加入3g NaHCO3，继续研磨；
g. 加入纯水洗涤，充分震荡后弃上清液，将沉淀物冻干；
h. 配制5% HCl，洗脱阴离子交换树脂层析柱，再用纯水洗脱至PH值7.0~7.5，将上述g步骤获得的沉淀物用水溶解后加入柱上，用纯水洗脱，分5个阶段收集，每阶段收集5管，每管收集1.5ml洗脱液；
i. 取中间20管共30ml洗脱液进行减压蒸馏、冻干，得6g冻干品。
实验：
取实施例2所得冻干品用流动相配制成10mg/100ml的溶液，进行高效液相层析（HPLC）分析。
取实施例2所得冻干品进行质谱及核磁共振分析，确定分子量和分子结构。
结果：
所得产品分子量与分子结构与CAS注册的N4—乙酰胞苷完全一致，产品得率50%、纯度可达98%。
实施例3：
a. 称取100g胞苷置于容器中；
b. 加入120ml NN二甲基甲酰胺，放入磁力棒搅拌15min；
c. 加入50ml乙酸酐，24~25℃下搅拌26小时；
d. 于30~32℃水浴真空浓缩，蒸干至油状物出现；
e. 加入500ml乙酸乙酯和乙醚混合物（1：1），搅拌研磨；
f. 加入40g NaHCO3，继续研磨；
g. 加入纯水洗涤，充分震荡后弃上清液，将沉淀物冻干；
h. 配制5% HCl，洗脱阴离子交换树脂层析柱，再用纯水洗脱至PH值7.0~7.5，将上述g步骤获得的沉淀物用水溶解后加入柱上，用纯水洗脱，分5个阶段收集，每阶段收集5管，每管收集2.5ml洗脱液；
i. 取中间30管共75ml洗脱液进行减压蒸馏、冻干，得50g冻干品。
实验：
取实施例3所得冻干品用流动相配制成10mg/100ml的溶液，进行高效液相层析（HPLC）分析。
取实施例3所得冻干品进行质谱及核磁共振分析，确定分子量和分子结构。
结果：
所得产品分子量与分子结构与CAS注册的N4—乙酰胞苷完全一致，产品得率55%、纯度可达98%。

Claims (1)

1.一种N4—乙酰胞苷的制备方法，其特征在于依次按如下步骤进行：
a. 称取胞苷置于烧杯中；
b. 加入 NN二甲基甲酰胺，搅拌8~15min；所述NN二甲基甲酰胺与胞苷的比例为8~12ml：1g；
c. 加入乙酸酐，20~25℃下搅拌22~26小时；所述乙酸酐与胞苷的比例为0.3~0.5ml：1g；
d. 于28~32℃水浴真空浓缩，蒸干至油状物出现；
e. 加入乙酸乙酯和乙醚混合物（1：1），搅拌研磨；所述乙酸乙酯和乙醚混合物与胞苷的比例为3~5ml：1g；
f. 加入NaHCO3，继续研磨；所述NaHCO3与胞苷的质量比为0.3~0.4：1；
g. 加入纯水洗涤，充分震荡后弃上清液，将沉淀物冻干；
h. 配制5% HCl，洗脱阴离子交换树脂层析柱，再用纯水洗脱至PH值7.0~7.5，将上述g步骤获得的沉淀物用水溶解后加入柱上，用纯水洗脱，分5个阶段收集洗脱液，每阶段收集5管；
i. 取中间管洗脱液进行减压蒸馏、冻干。
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