CN102688496B - 一种ctx介导的靶向纳米载体及纳米载药体系 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种CTX介导的靶向纳米载体及纳米载药体系的方法。本发明的CTX介导的靶向纳米载体体系生物相容性、缓释性能及靶向性良好。由于CTX-壳聚糖衍生物具有CTX的高度靶向选择性，使纳米载体识别并结合于肿瘤细胞表面的MMP-2起到靶向作用，同时阻止肿瘤组织的血管生成；而载体携带的活性物质，可定位释放于肿瘤部位以杀死肿瘤细胞，因此该载体系统可以起到双重的靶向抑制及杀死肿瘤细胞的作用。本发明的制备方法操作简便、工艺稳定、成本低廉，对原材料有广泛的适用性，所有具有亲水性取代基团的壳聚糖衍生物均可，原料来源十分广泛。
Description
技术领域
本发明属于药物靶向载体领域，特别涉及一种CTX介导的靶向纳米载体及纳米载药体系。
背景技术
肿瘤的靶向治疗主要有被动靶向、主动靶向及抑制肿瘤部位血管生成等方式。被动靶向作用是基于肿瘤组织对大分子的增强渗透与保留(EPR)效应而实现的；主动靶向是采用单克隆抗体及其他配体如叶酸、铁传递蛋白等作用于靶向位点；抑制血管生成的治疗主要包括阻止肿瘤部位血管生成所必需的生长因子或酶的合成及抑制内皮细胞的分化、活化、迁移及增殖等。较于一般的抗肿瘤药物，靶向给药具有以下特点：(1)靶向性，药物集中于靶区；(2)减少用药剂量，提高疗效；(3)持续性；(4)减少药物的毒副作用。
Chlorotoxin(CTX)是一种含有30-35个氨基酸的分子量约为4-kD的蝎毒素活性肽，在动物模型中表现出脑肿瘤细胞靶向性；通过对不同病例组织切片研究发现CTX对于神经外胚层来源的肿瘤包括周围神经外胚层肿瘤细胞和神经胶质瘤细胞均表现出高度特异性和结合能力，而对于正常细胞则表现为阴性，这表明CTX具有脑肿瘤特异性，可用于神经源性肿瘤的靶向作用。随后研究进一步发现CTX的高度特异性表现在特异性地识别细胞表面的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)，MMP-2是神经源性肿瘤细胞的膜结合酶，在内皮细胞分化增殖过程中分泌产生，可降解细胞外基质而促使肿瘤组织的迁移与浸润，因此CTX可抑制肿瘤细胞的迁移与浸润，从而抑制肿瘤部位的血管生成。进一步的体内外纳米探针研究显示CTX具有良好的靶向性，与荧光分子结合可作为特异作用位点的有效标记。以上结果表明CTX可作为具有高度特异性的靶向分子，因此研制CTX介导的靶向载体具有重要的研究意义及应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种CTX介导的靶向纳米载体。
本发明的目的同时在于提供一种CTX介导的靶向纳米载药体系。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的、PH＝7-9的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖亲水性衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶(0.2-5)，反应1.5-2.5h，得壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂修饰，CTX与巯基试剂的摩尔比是1∶(2-6)，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶(3-8)混合，室温反应1-3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶(2-5)，过滤，得CTX-壳聚糖亲水性衍生物；
(4)配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的CTX-壳聚糖亲水性衍生物溶液，加入其体积(2.5-10)％的二氯甲烷，混匀，抽真空，加入二氯甲烷体积0.5-1倍的固化剂，搅拌固化50-60min，得CTX介导的靶向纳米载体。
步骤(1)中的壳聚糖亲水性衍生物是羧甲基壳聚糖或壳聚糖季铵盐亲水性衍生物。
步骤(1)中的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液是壳聚糖亲水性衍生物磷酸盐缓冲溶液。
步骤(2)中的巯基试剂是2-亚氨基硫烷盐酸盐。
步骤(4)中混匀时超声或高速均质。
步骤(4)中的固化剂是0.25％的多聚磷酸钠溶液或0.5％的氢氧化钙溶液。
一种CTX介导的靶向纳米载药体系，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的、PH＝7-9的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖亲水性衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶(0.2-5)，反应1.5-2.5h，得壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂修饰，CTX与巯基试剂的摩尔比是1∶(2-6)，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶(3-8)混合，室温反应1-3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶(2-5)，过滤，得CTX-壳聚糖亲水性衍生物；
(4)向质量体积比为0.01-0.1g/ml的CTX-壳聚糖亲水性衍生物溶液中加入活性物质，所述活性物质的用量是CTX-壳聚糖亲水性衍生物质量的0.01-1倍，混匀，再加入CTX-壳聚糖亲水性衍生物溶液体积(2.5-10)％的二氯甲烷，混匀，抽真空，加入二氯甲烷体积0.5-1倍的固化剂，搅拌固化50-60min，得CTX介导的靶向纳米载体。
一种CTX介导的靶向纳米载药体系，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的、PH＝7-9的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖亲水性衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶(0.2-5)，反应1.5-2.5h，得壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂修饰，CTX与巯基试剂的摩尔比是1∶(2-6)，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶(3-8)混合，室温反应1-3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶(2-5)，过滤，得CTX-壳聚糖亲水性衍生物；
(4)配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的CTX-壳聚糖亲水性衍生物溶液，加入其体积(2.5-10)％的二氯甲烷，混匀，抽真空，加入二氯甲烷体积0.5-1倍的固化剂，搅拌固化50-60min，得CTX介导的靶向纳米载体；
(5)向CTX介导靶向纳米载体中加入活性物质，所述活性物质的用量是CTX-壳聚糖亲水性衍生物质量的0.01-1倍，继续搅拌，得到CTX介导的靶向纳米载药体系。
所述的活性物质是阿霉素、巯嘌呤、紫杉醇、5-氟尿嘧啶任一种。
相对于现有技术，本发明有以下优点：(1)本发明的CTX介导的靶向纳米载体体系生物相容性、缓释性能及靶向性良好。(2)由于CTX-壳聚糖衍生物具有CTX的高度靶向选择性，使纳米载体识别并结合于肿瘤细胞表面的MMP-2起到靶向作用，同时阻止肿瘤组织的血管生成；而载体携带的活性物质，可定位释放于肿瘤部位以杀死肿瘤细胞，因此该载体系统可以起到双重的靶向抑制及杀死肿瘤细胞的作用。(3)本发明纳米载体和载药体系的制备方法操作简便、工艺稳定、成本低廉，对原材料有广泛的适用性，所有具有亲水性取代基团的壳聚糖衍生物均可，原料来源十分广泛。
附图说明
图1为实施例1纳米载体不同浸提时间对小鼠成纤维细胞生长的影响的柱状图；
图2为实施例3纳米载体不同浸提时间对Hela细胞生长的影响的曲线图；
图3实施例5、实施例9制得的纳米载药体系的体外释放的曲线图。
具体实施方式
以下结合具体实施例来说明本发明的技术方案。
本发明所用试剂均可从市面购买，如生工生物工程(上海)有限公司、上海易利生化试剂有限公司等。
实施例1.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备壳聚糖季铵盐衍生物，配制质量体积比(g/ml)为1％的、PH＝7的壳聚糖季铵盐衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖季铵盐衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶0.2，反应1.5h，得壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶2修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶3室温反应1h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶2，过滤，得CTX-壳聚糖季铵盐衍生物；
(4)将0.40g CTX-壳聚糖季铵盐衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为1％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌溶解，加入二氯甲烷1ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为2.5％)，16000rpm高速均质5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空30min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液1ml，搅拌固化55min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例2.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备壳聚糖季铵盐衍生物，配制质量体积比(g/ml)为3％的、PH＝8的壳聚糖季铵盐衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖季铵盐衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶1，反应2h，得壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶3修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶5室温反应2h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶3，过滤，得CTX-壳聚糖季铵盐衍生物；
(4)将1.0gCTX-羧甲基壳聚糖衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为2.5％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷2ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为5％)，超声振荡5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空50min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液2ml，搅拌固化50min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例3.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备羧甲基壳聚糖衍生物，配制质量体积比(g/ml)为8％的、PH＝9的羧甲基壳聚糖衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，羧甲基壳聚糖衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶3，反应2.5h，得羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶3.5修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶6室温反应3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶4，过滤，得CTX-羧甲基壳聚糖衍生物；
(4)将2.0gCTX-壳聚糖季铵盐衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为5％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷1.5ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为2.5％)，20000rpm高速均质5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空60min；然后边搅拌边滴加交联剂0.5％的氢氧化钙溶液1ml，搅拌固化60min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例4.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备羧甲基壳聚糖衍生物，配制质量体积比(g/ml)为10％的、PH＝7.5的羧甲基壳聚糖衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，羧甲基壳聚糖衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶5，反应2h，得羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶6修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶8室温反应2h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶5，过滤，得CTX-羧甲基壳聚糖衍生物；
(4)将4.0gCTX-羧甲基壳聚糖衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为10％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷4ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为10％)，超声振荡8min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空45min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液2ml，搅拌固化50min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例5.本实施例CTX介导的靶向纳米载药载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备壳聚糖季铵盐衍生物，配制质量体积比(g/ml)为1％的、PH＝7的壳聚糖季铵盐衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖季铵盐衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶0.2，反应1.5h，得壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶2修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶3室温反应1h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶2，过滤，得CTX-壳聚糖季铵盐衍生物；
(4)将0.40g CTX-壳聚糖季铵盐衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为1％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌均匀，加入阿霉素0.4g，搅拌溶解，加入二氯甲烷1ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为2.5％)，16000rpm高速均质5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空30min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液1ml，搅拌固化55min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例6.本实施例CTX介导的靶向纳米载药载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备羧甲基壳聚糖衍生物，配制质量体积比(g/ml)为3％的、PH＝8的羧甲基壳聚糖衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，羧甲基壳聚糖衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶1，反应2h，得羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶2.5修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶5室温反应2h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶3，过滤，得CTX-羧甲基壳聚糖衍生物；
(4)将1.0gCTX-羧甲基壳聚糖衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为2.5％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌均匀，加入巯嘌呤0.25g，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷2ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为5％)，超声振荡5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空50min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液2ml，搅拌固化50min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例7.本实施例CTX介导的靶向纳米载药载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备壳聚糖季铵盐衍生物，配制质量体积比(g/ml)为8％的、PH＝9的壳聚糖季铵盐衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖季铵盐衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶3，反应2.5h，得壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶5修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶6室温反应3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶4，过滤，得CTX-壳聚糖季铵盐衍生物；
(4)将2.0gCTX-壳聚糖季铵盐衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为5％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌均匀，加入紫杉醇1g，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷1.5ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为2.5％)，20000rpm高速均质5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空60min；然后边搅拌边滴加交联剂0.5％的氢氧化钙溶液1ml，搅拌固化60min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例8.本实施例CTX介导的靶向纳米载药载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备羧甲基壳聚糖衍生物，配制质量体积比(g/ml)为10％的、PH＝7.5的羧甲基壳聚糖衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，羧甲基壳聚糖衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶5，反应2h，得羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶6修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶8室温反应2h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶5，过滤，得CTX-羧甲基壳聚糖衍生物；
(4)将4.0gCTX-羧甲基壳聚糖衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为10％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌均匀，加入5-氟尿嘧啶0.04g，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷4ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为10％)，超声振荡8min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空45min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液2ml，搅拌固化50min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
实施例9.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备壳聚糖季铵盐衍生物，配制质量体积比(g/ml)为1％的、PH＝7的壳聚糖季铵盐衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖季铵盐衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶0.2，反应1.5h，得壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶2修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶3室温反应1h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶2，过滤，得CTX-壳聚糖季铵盐衍生物；
(4)将0.40g CTX-壳聚糖季铵盐衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为1％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌溶解，加入二氯甲烷1ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为2.5％)，16000rpm高速均质5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空30min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液1ml，搅拌固化55min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
(5)向CTX介导靶向纳米载药体系中加入阿霉素0.4g，继续搅拌，得到CTX介导的靶向纳米载药体系。
实施例10.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备壳聚糖季铵盐衍生物，配制质量体积比(g/ml)为3％的、PH＝8的壳聚糖季铵盐衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖季铵盐衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶1，反应2h，得壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶3修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将壳聚糖季铵盐衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶5室温反应2h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶3，过滤，得CTX-壳聚糖季铵盐衍生物；
(4)将1.0gCTX-羧甲基壳聚糖衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为2.5％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷2ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为5％)，超声振荡5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空50min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液2ml，搅拌固化50min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
(5)向CTX介导靶向纳米载药体系中加入巯嘌呤0.25g，继续搅拌，得到CTX介导的靶向纳米载药体系。
实施例11.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备羧甲基壳聚糖衍生物，配制质量体积比(g/ml)为8％的、PH＝9的羧甲基壳聚糖衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，羧甲基壳聚糖衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶3，反应2.5h，得羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶3.5修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶6室温反应3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶4，过滤，得CTX-羧甲基壳聚糖衍生物；
(4)将2.0gCTX-壳聚糖季铵盐衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为5％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷1.5ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为2.5％)，20000rpm高速均质5min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空60min；然后边搅拌边滴加交联剂0.5％的氢氧化钙溶液1ml，搅拌固化60min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
(5)向CTX介导靶向纳米载药体系中加入紫杉醇1g，继续搅拌，得到CTX介导的靶向纳米载药体系。
实施例12.本实施例CTX介导的靶向纳米载体，通过包括以下步骤的制备方法制得：
(1)制备羧甲基壳聚糖衍生物，配制质量体积比(g/ml)为10％的、PH＝7.5的羧甲基壳聚糖衍生物磷酸盐缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，羧甲基壳聚糖衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1∶5，反应2h，得羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇溶液；
(2)CTX用巯基试剂2-亚氨基硫烷盐酸盐以摩尔比1∶6修饰，得CTX-巯基试剂；
(3)将羧甲基壳聚糖衍生物-聚乙二醇与CTX-巯基试剂以摩尔比1∶8室温反应2h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1∶5，过滤，得CTX-羧甲基壳聚糖衍生物；
(4)将4.0gCTX-羧甲基壳聚糖衍生物加入40ml去离子水中制得质量体积百分比浓度为10％的CTX-壳聚糖衍生物溶液，搅拌分散均匀，加入二氯甲烷4ml(与CTX-壳聚糖衍生物溶液体积比为10％)，超声振荡8min，重复操作3次，置真空干燥器中抽真空45min；然后边搅拌边滴加交联剂0.25％的多聚磷酸钠溶液2ml，搅拌固化50min，即得CTX介导靶向纳米载药体系。
(5)向CTX介导靶向纳米载药体系中加入5-氟尿嘧啶0.04g，继续搅拌，得到CTX介导的靶向纳米载药体系。
实验例.
图1为实施例1纳米载体不同浸提时间对小鼠成纤维细胞生长的影响的柱状图。由图可知，不同浸提时间的样品对小鼠成纤维细胞的相对增殖率均高于80％，说明所制备纳米载体具有良好的生物相容性，且生物相容性不受浸提时间的影响。
图2为实施例3纳米载体不同浸提时间对Hela细胞生长的影响的曲线图，表明不同浸提时间的样品对肿瘤细胞(Hela细胞)具有明显的抑制杀伤作用。
图3实施例5、实施例9的纳米载药体系的体外释放的曲线图，表明所制备载体具有良好的缓释效果。
Claims (7)
1.一种氯代毒素介导的靶向纳米载体，其特征在于，通过包括以下步骤的制备方法制得：
（1）配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的、PH=7-9的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖亲水性衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1：（0.2-5），反应1.5-2.5h，得壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇溶液；
（2）氯代毒素用巯基试剂修饰，氯代毒素与巯基试剂的摩尔比是1：（2-6），得氯代毒素-巯基试剂；
（3）将壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇与氯代毒素-巯基试剂以摩尔比1：（3-8）混合，室温反应1-3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1：（2-5），过滤，得氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物；
（4）配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物溶液，加入其体积（2.5-10）%的二氯甲烷，混匀，抽真空，加入二氯甲烷体积0.5-1倍的固化剂，搅拌固化50-60min，得氯代毒素介导的靶向纳米载体；
步骤（1）中的壳聚糖亲水性衍生物是羧甲基壳聚糖或壳聚糖季铵盐亲水性衍生物；
步骤（2）中的巯基试剂是2-亚氨基硫烷盐酸盐。
2.根据权利要求1所述的氯代毒素介导的靶向纳米载体，其特征在于，步骤（1）中的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液是壳聚糖亲水性衍生物磷酸盐缓冲溶液。
3.根据权利要求1所述的氯代毒素介导的靶向纳米载体，其特征在于，步骤（4）中混匀时超声或高速均质。
4.根据权利要求1所述的氯代毒素介导的靶向纳米载体，其特征在于，步骤（4）中的固化剂是0.25%的多聚磷酸钠溶液或0.5%的氢氧化钙溶液。
5.一种氯代毒素介导的靶向纳米载药体系，其特征在于，通过包括以下步骤的制备方法制得：
（1）配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的、PH=7-9的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖亲水性衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1：（0.2-5），反应1.5-2.5h，得壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇溶液；
（2）氯代毒素用巯基试剂修饰，氯代毒素与巯基试剂的摩尔比是1：（2-6），得氯代毒素-巯基试剂；
（3）将壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇与氯代毒素-巯基试剂以摩尔比1：（3-8）混合，室温反应1-3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1：（2-5），过滤，得氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物；
（4）向质量体积比为0.01-0.1g/ml的氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物溶液中加入活性物质，所述活性物质的用量是氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物质量的0.01-1倍，混匀，再加入氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物溶液体积（2.5-10）%的二氯甲烷，混匀，抽真空，加入二氯甲烷体积0.5-1倍的固化剂，搅拌固化50-60min，得氯代毒素介导的靶向纳米载体；
所述的壳聚糖亲水性衍生物是羧甲基壳聚糖或壳聚糖季铵盐亲水性衍生物；
所述的巯基试剂是2-亚氨基硫烷盐酸盐。
6.一种氯代毒素介导的靶向纳米载药体系，其特征在于，通过包括以下步骤的制备方法制得：
（1）配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的、PH=7-9的壳聚糖亲水性衍生物缓冲溶液；向其中加入聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯水溶液，壳聚糖亲水性衍生物与聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯的摩尔比1：（0.2-5），反应1.5-2.5h，得壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇溶液；
（2）氯代毒素用巯基试剂修饰，氯代毒素与巯基试剂的摩尔比是1：（2-6），得氯代毒素-巯基试剂；
（3）将壳聚糖亲水性衍生物-聚乙二醇与氯代毒素-巯基试剂以摩尔比1：（3-8）混合，室温反应1-3h，加入乙醇析出沉淀，混合液与乙醇的体积比1：（2-5），过滤，得氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物；
（4）配制质量体积比为0.01-0.1g/ml的氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物溶液，加入其体积（2.5-10）%的二氯甲烷，混匀，抽真空，加入二氯甲烷体积0.5-1倍的固化剂，搅拌固化50-60min，得氯代毒素介导的靶向纳米载体；
（5）向氯代毒素介导靶向纳米载体中加入活性物质，所述活性物质的用量是氯代毒素-壳聚糖亲水性衍生物质量的0.01-1倍，继续搅拌，得到氯代毒素介导的靶向纳米载药体系；
所述的壳聚糖亲水性衍生物是羧甲基壳聚糖或壳聚糖季铵盐亲水性衍生物；
所述的巯基试剂是2-亚氨基硫烷盐酸盐。
7.根据权利要求5或6所述的氯代毒素介导的靶向纳米载药体系，其特征在于，活性物质是阿霉素、巯嘌呤、紫杉醇、5-氟尿嘧啶任一种。
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