CN102676447A - 哺乳动物耳蜗毛细胞专用培养液 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种生物体外培养材料，具体是一种哺乳动物耳蜗毛细胞专用培养液。培养液中溶剂为蒸馏水，除蒸馏水外还包括以下重量的物质成份：葡萄糖、酚红钠、丙酮酸钾、盐酸左旋精氨酸、胱氨酸、丙氨酰谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、左旋异白氨酸、亮氨酸、盐酸左旋赖氨酸、左旋蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸、左旋苏氨酸、左旋色氨酸、左旋酪氨酸、颉胺酸、泛酸鈣、氯化胆碱、叶酸、肌醇、烟酰胺、盐酸吡多辛、核黄素、盐酸硫胺，培养液中还包含有无机盐，加入无机盐后使培养液的钾离子水平范围在100-150mEq/L，钠离子水平范围为<10mEq/L。本发明可实现成熟耳蜗毛细胞体外培养达到3天以上，为耳蜗毛细胞的体外研究奠定了基础。

Description

哺乳动物耳蜗毛细胞专用培养液
技术领域
本发明涉及一种生物体外培养材料，具体是一种哺乳动物耳蜗毛细胞专用培养液。
背景技术
人类听力功能的基础是存在于颞骨耳蜗内的听觉感受器官，即柯蒂氏器官(organ of Corti)。柯蒂氏器官内特殊的感觉神经上皮细胞，又称为毛细胞，可以将通过外耳和中耳传入内耳基底膜的声能转化为神经冲动传入大脑。大多数感音神经性耳聋是由于各种原因造成内耳毛细胞死亡或损伤所致。在现实生活中，有很多因素如噪音、耳神经毒性药物(氨基糖甙类抗生素、抗肿瘤药物等)和缺血等都可能造成内耳毛细胞损伤。因此，研究内耳毛细胞功能和损伤引起毛细胞的病理改变及其机制是了解感音神经性耳聋发生和发展的重要基础。
在体内情况下，耳蜗毛细胞浸浴在柯蒂氏器内淋巴液中。在进行体外培养试验时，通常使用目前在细胞培养中常规使用的培养液，为高钠离子浓度和低钾离子浓度。在以往的研究工作中，已经有人注意到培养液中的钾离子浓度过低，导致耳蜗毛细胞在在普通培养液中无法正常生长。但是采取简单地在普通培养液基础上增加钾离子浓度的方法无法提高耳蜗毛细胞体外培养成功的机会。因此需要对现有的细胞体外培养液进行改进。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种能够用于哺乳动物耳蜗毛细胞体外培养、延长细胞体外成活时间的哺乳动物耳蜗毛细胞专用培养液。
本发明的培养液中溶剂为蒸馏水，每升培养液中除蒸馏水外还包括以下重量的物质成份：葡萄糖4.5g、酚红钠0.0159g、丙酮酸钾0.11g、盐酸左旋精氨酸0.084g、胱氨酸0.048g、丙氨酰谷氨酸0.868g、甘氨酸0.03g、组氨酸0.042g、左旋异白氨酸0.105g、亮氨酸0.105g、盐酸左旋赖氨酸0.146g、左旋蛋氨酸0.03g、苯丙氨酸0.066g、丝氨酸0.042g、左旋苏氨酸0.095g、左旋色氨酸0.016g、左旋酪氨酸0.072g、颉胺酸0.094g、泛酸鈣0.004g、氯化胆碱0.004g、叶酸0.004g、肌醇0.0072g、烟酰胺0.004g、盐酸吡多辛0.004g、核黄素0.0004g、盐酸硫胺0.004g，培养液中还包含有无机盐，其特征是，加入无机盐后使培养液的钾离子水平范围在100-150mEq/L，钠离子水平范围为＜10mEq/L。
本发明作为较接近内淋巴液离子成分的毛细胞专用培养液，可实现成熟耳蜗毛细胞体外培养达到3天以上，为耳蜗毛细胞的体外研究奠定了基础。
具体实施方式
实施例：
本发明实施例中，每升培养液中的除蒸馏水外的成份配方表如下
无机盐                        g/L
  CaCl2.2H2O   0.264
  Fe(NO3)3.9H2O   0.001
  KCl   6.4
  MgSO4.7H2O   0.2
  NaCl   0.4
  NaHCO3   3.7
  NaH2PO4.H2O   0.125
其他成分
  葡萄糖   4.5
  酚红钠   0.0159
  丙酮酸钾   0.11
氨基酸
  盐酸左旋精氨酸   0.084
  胱氨酸   0.048
  丙氨酰谷氨酸   0.868
  甘氨酸   0.03
  组氨酸   0.042
  左旋异白氨酸   0.105
  亮氨酸   0.105
  盐酸左旋赖氨酸   0.146
  左旋蛋氨酸   0.03
  苯丙氨酸   0.066
  丝氨酸   0.042
  左旋苏氨酸   0.095
  左旋色氨酸   0.016
  左旋酪氨酸   0.072
  颉胺酸   0.094
维生素类
  泛酸鈣   0.004
  氯化胆碱   0.004
  叶酸   0.004
  肌醇   0.0072
  烟酰胺   0.004
  盐酸吡多辛   0.004
  核黄素   0.0004
  盐酸硫胺   0.004
采用本发明实施例的专用培养液培养耳蜗毛细胞结果与采用普通培养液(EMDM)培养耳蜗毛细胞结果比较发现：耳蜗毛细胞在专用培养液培养72小时以后仍有超过90％毛细胞形态正常，而在EMDM培养液中24小时以后耳蜗毛细胞已经全部死亡。

Claims (1)

1.一种哺乳动物耳蜗毛细胞专用培养液，其中溶剂为蒸馏水，每升培养液中除蒸馏水外还包括以下重量的物质成份：葡萄糖4.5g、酚红钠0.0159g、丙酮酸钾0.11g、盐酸左旋精氨酸0.084g、胱氨酸0.048g、丙氨酰谷氨酸0.868g、甘氨酸0.03 g、组氨酸0.042 g、左旋异白氨酸0.105 g、亮氨酸0.105 g、盐酸左旋赖氨酸0.146 g、左旋蛋氨酸0.03 g、苯丙氨酸0.066 g、丝氨酸0.042 g、左旋苏氨酸0.095 g、左旋色氨酸0.016 g、左旋酪氨酸0.072 g、颉胺酸0.094 g、泛酸鈣0.004 g、氯化胆碱0.004 g、叶酸0.004 g、肌醇0.0072 g、烟酰胺0.004 g、盐酸吡多辛0.004 g、核黄素0.0004 g、盐酸硫胺0.004 g，培养液中还包含有无机盐；其特征是：加入无机盐后使培养液的钾离子水平范围在100-150mEq/L，钠离子水平范围为<10mEq/L。
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