CN102675199A - 一种蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂、其制备方法及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂：

Description

一种蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂、其制备方法及其用途
技术领域
本发明涉及一种蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂、其制备方法及其在制备治疗和预防糖尿病、肥胖症及癌症的药物组合物中的应用。
背景技术
蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTPs)是一类信号传导酶,它们通过调节细胞内酪氨酸的磷酸化水平来控制细胞的成长、分化、代谢;细胞迁移、基因转录、离子通道开闭、免疫反应、细胞凋亡以及成骨发育也受到PTPs的调控。PTPs紊乱可导致多种疾病,如癌症、糖尿病、肥胖症和骨质疏松症。在人类基因组中,迄今为止发现有130余种基因编码PTP,这些高特异性PTP不仅与癌抑制和发生的信号通路相关,而且它们的功能异常可直接导致人类不同疾病的发生。与疾病发生相关的的PTP作用机制及其抑制剂的筛选,一直是国内外研究的热点。
PTPases包括一大家庭跨膜（受体型）和胞内（非受体型）酶，参与调控一系列重要生命过程。有几种PTPases可能在胰岛素通路中受体或受体后环节影响胰岛素影响作用。目前研究主要集中在SHP-2和PTP1B。
PTP1B是第一个被成功分离的蛋白质酪氨酸磷酸酶。该酶为一个37KD的胞内酶，通过含有35个氨基酸残基的C末端被定位于细胞内质网上，在第215位的Cys是PTPB1的催化活性中心。研究表明，PTP1B通过胰岛素受体(Insulin Receptor，IR）和胰岛素受体底物(InsulinReceptor Substrate，IRS），来阻断胰岛素信号转导通路，最终影响血液中葡萄糖向细胞内的转运，表现出血糖升高的现象另外。另外考虑到PTP1B基因敲除的小鼠对肥胖症具有免疫性,所以可以肯定PTP1B在肥胖症的发病过程中起着重要的作用。故而PTP1B是开发新抗糖尿病和肥胖药物的作用靶点。
蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2[Src homology 2(SH2)domaincontaining phosphotyrosinephosphatase 2,SHP2]是一种由PTPN11基因编码，细胞质内广泛表达的非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）。SHP2通过参与多种细胞内讯息传递如MAPkinase、Jak-Stat及PI3kinase等途径，在细胞的增殖及分化等过程起重要作用。PTPN11被确定为原癌基因，也是许多其他原癌基因信号通路的重要组成部分，因此，SHP2作为治疗Noonan综合症、幼年型粒单核细胞白血病等,以及其他可能相关肿瘤疾病的潜在药物靶点。
迄今，现有技术中尚没有关于从玫烟色棒束孢发酵产物中提取蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种新的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂、其制备方法及其在制备治疗和预防糖尿病、肥胖症及癌症的药物组合物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下。
一种蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂，是如下（a）或（b）：
（a）、具有如下结构式的化合物；
Figure BDA00001666245300031
（b）、上述化合物的同分异构体或其药用衍生物。
作为本发明的一种优选技术方案，其药用衍生物为药用盐，此药用盐为保持所述（a）的生物有效性且由非毒性的有机酸、无机酸、有机碱或无机碱形成的药学常用酸加成盐或碱加成盐。
作为本发明的一种优选技术方案，制备所述酸加成盐所用的无机酸为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸或硝酸，制备所述酸加成盐所用的有机酸为对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、苹果酸、虎珀酸、乳酸、富马酸；制备所述碱加成盐所用的碱性制剂为铵、钾、钠或季铵氢氧化物如氢氧化四甲胺等。
作为本发明的一种优选技术方案，其药用衍生物的形式为酯、醚衍生物，或者为通过双键的氧化引入醛、酸或醇功能基；或者为在环内引入磺酸基；或者为通过Witting反应引入含有4-10个碳的链。
作为本发明的一种优选技术方案，通过Witting反应引入的链中携带OR1、NR2R3或卤素，其中R1、R2、R3为H或含有1-5个碳的烷基，卤素为F、Cl、Br或I。
上述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的制备方法：虫生真菌玫烟色棒束孢固体或液体发酵液用乙酸乙酯、乙醇、甲醇或氯仿甲醇混合溶剂提取，所得提取物用硅胶柱层析分离，所得玫烟菌素即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
作为上述制备方法的一种优选技术方案，A、发酵培养：将所述玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至改良马铃薯葡萄糖培养基中，26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液；将种子液接种至大米培养基，26℃光照培养30天，得发酵物；其中，所述改良马铃薯葡萄糖培养基的配方为：200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4、1.5重量份的MgSO4、0.1重量份的柠檬酸、0.01重量份的维生素B1，溶于1000重量份的无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min，即得；所述大米培养基的配方为：80重量份的大米、100重量份的无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min，即得；
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，得浸膏样品，将此浸膏样品与1.2倍重、100目～200目的硅胶充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；在上述石油醚/乙酸乙酯的80∶20洗脱段得到的组分进一步进行上述常压硅胶柱层析，并再次用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在5:1洗脱段得到玫烟菌素，即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
作为上述制备方法的一种优选技术方案，A、发酵培养：将所述玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至改良马铃薯葡萄糖培养基中，26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液；将种子液接种至大米培养基，26℃光照培养30天，得发酵物；其中，所述改良马铃薯葡萄糖培养基的配方为：200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4、1.5重量份的MgSO4、0.1重量份的柠檬酸、0.01重量份的维生素B1，溶于1000重量份的无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min，即得；所述大米培养基的配方为：80重量份的大米、100重量份的无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min，即得；
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，得浸膏样品，将此浸膏样品与1.2倍重、100目～200目的硅胶充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；合并各洗脱段的洗脱液，并再次进行上述常压硅胶柱层析，层析后再次用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏；再次合并各洗脱段的洗脱液并重复100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱流程，在5:1洗脱段得到玫烟菌素，即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
作为上述制备方法的一种优选技术方案，A、发酵培养：将所述玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至改良马铃薯葡萄糖培养基中，26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液；将种子液接种至大米培养基，26℃光照培养30天，得发酵物；其中，所述改良马铃薯葡萄糖培养基的配方为：200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4、1.5重量份的MgSO4、0.1重量份的柠檬酸、0.01重量份的维生素B1，溶于1000重量份的无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min，即得；所述大米培养基的配方为：80重量份的大米、100重量份的无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min，即得；
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，得浸膏样品，将此浸膏样品与1.2倍重、100目～200目的硅胶充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；在上述石油醚/乙酸乙酯的80∶20洗脱段得到的组分进一步进行上述常压硅胶柱层析，并用氯仿/甲醇系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10，v/v，在90：10洗脱段得到玫烟菌素，即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
上述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的用途，用于制备治疗和预防糖尿病、肥胖症及癌症的药物组合物。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：发明人经过实验验证了本发明的（a）化合物的实际效果，具体参看下文；
①本发明的（a）化合物对蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP1B的体外抑制试验。酶：用常规分子生物学方法从cDNA文库克隆人PTP1B。该cDNA序列与公开的人PTP1B(登记号M33689)相同。按照Barford D.等J.Mol Biol(1994)239,726-730的描述从大肠杆菌（E.coli）中表达和纯化该蛋白质。使用以胰岛素受体络氨酸自磷酸化位点1146（TRDI(Py)E）的氨基酸序列为基础的磷酸化的络氨酸肽作为底物。应条件如下：在含有37.5nM Bis-Tris缓冲液pH6.2,140nM NaCl,0.05%BSA和2Mm DTT的缓冲液中将PTP1B(05-2Nm)与化合物孵育15min。加入50uM底物起始反应，在室温下（22-25°C）后，用KOH终止反应，利用孔雀绿检测磷酸的量。试验结果显示：本发明的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂——玫烟菌素（Fumosorinone）对蛋白质络氨酸磷酸酶PTP1B的抑制活性IC50为0.42μg/ml。
②本发明的（a）化合物对蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2的体外抑制试验。酶：用常规分子生物学方法从cDNA文库克隆人SHP2。该cDNA序列与公开的人SHP2（登记号M002834）相同。按照Ute Dechert等J Biol Chem,1994,269(8):5602-5611的描述从大肠杆菌（E.coli）中表达和纯化该蛋白质。SHP2水解pNPP（对硝基苯磷酸）的磷酸基团，产物pNP（对硝基酚）在405nm处有光吸收，其光的吸收值的增加与酶反应的时间成正比。因此，可以根据光吸收增加曲线的斜率来反映酶反应的初始速率，测定SHP2的活性。酶反应体系组成如下：缓冲液(50mM Bis-Tris pH 6.0，2mM DTT，2mM EDTA,GST2-SHP2,2mM pNPP)。反应体系混匀后室温动态测定405nm波长条件下的光吸收值，计算酶活性。试验结果显示：本发明的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂——玫烟菌素（Fumosorinone）对蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2的抑制活性IC50为0.90μg/ml。
③本发明的（a）化合物降糖作用的体内验证。实验性糖尿病动物模型是通过损伤胰腺或胰岛细胞导致胰岛素缺乏，或用拮抗剂拮抗胰岛素的作用，造成实验性糖尿病或实验性高血糖。四氧嘧啶(Alloxan)诱导的糖尿病模型是目前研究人类糖尿病最常见的模型。利用四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠模型进行目标化合物活性降血糖活性的部分。
实验动物糖尿病模型的建立：购买的雄性小鼠（昆明种）自先喂养3天，待其适应环境之后再进行实验。重量大约相同的小鼠（26±2g）禁食16-18h后，单次或多次连续腹腔内注射1%的四氧嘧啶生理盐水溶液(临用前配制)，剂量为200mg/kg，多次注射的间隔时间为3天，并连续注射4次，每次注射相同剂量的四氧嘧啶溶液。注射48h后在非禁食状态下尾部取血测定血糖值，并以血糖值>12.0mmol/L为标准，且1周后血糖值未恢复正常值的小鼠则确定为糖尿病小鼠模型，定义为糖尿病组，正常对照组小鼠腹腔内则注射相同剂量的生理盐水。
实验动物分组及处理:糖尿病小鼠模型实验共设六个组:正常对照组10只、模型对照组(血糖值>12mmol/L)10只、阳性对照组10只、实验组（目标化合物的低、中、高剂量组）30只。小鼠分组后开始灌服给药，正常对照组和模型对照组给予生理盐水；阳性对照组则每天灌服50mg/kg格列齐特；3个实验组分别灌服含有不同剂量（12.5mg/kg，25mg/kg，50mg/kg）目标化合物的生理盐水溶液，每天上、下午按半剂量各给药一次。
血糖测定：分别在给药后第5d、10d和15d，小鼠禁食16h-18h后，小鼠尾静脉取血测血糖。
试验结果：参看表1，灌服给药5d后，各给药组小鼠的血糖值与模型对照组比较均有所下降。
表1.目标化合物对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖的影响
Figure BDA00001666245300091
注：同一列不同小写字母表示不同组之间在P<0.05水平具有明显的差异；同一行不同大写字母表示给药后不同时间P<0.05水平具有明显的差异。
④根据医药学的公知常识，本发明的（a）化合物可以通过简单的化学反应形成多种具有类似效果的衍生物，本领域的技术人员都能够预料到这些衍生物的实际效果。
具体实施方式
以下实施例详细说明了本发明。本发明所使用的各种原料及各项设备均为常规市售产品，均能够通过市场购买直接获得。
实施例1：产品的制备
本发明所用的玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea Wize(=玫烟色拟青霉Paecilomyces fumosoroseus(Wize)A.H.S.Br.&G.Sm.)，采集于河北省保定市，标本藏于河北大学生命科学院。具体来源参见遗传资源来源披露登记表。
A、发酵培养：将玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至500mL的锥形瓶,每瓶含100mL改良马铃薯葡萄糖培养基（200.0g的土豆(去皮),20.0g的葡萄糖，3.0g的KH2PO4,1.5g的MgSO4,0.1g的柠檬酸,和10.0mg维生素B1，溶于1升无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min），26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液。将10mL种子液接种于500mL含大米培养基的锥形瓶中（每瓶含80g大米，100mL无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min），共50瓶，26℃光照培养30天。
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，重复三次，得浸膏200g。将200g样品与240g硅胶（100-200目）充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使其充分吸附于硅胶颗粒上。然后进行常压硅胶柱层析（300-400目），用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱（100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50(v/v)），用500mL三角瓶收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用少量有机溶剂洗涤，置于5mL的小瓶中并编号标记。在石油醚/乙酸乙酯（80∶20）洗脱段得到组分37g。该组分进一步进行常压硅胶柱层析，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱（100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1(v/v)），用200mL三角瓶收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在5:1洗脱段得玫烟菌素（Fumosorinone）10g，即为蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
实施例2：产品的制备
本实施例与实施例1的不同之处在于：将浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上后，进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；合并各洗脱段的洗脱液，并再次进行上述常压硅胶柱层析，层析后再次用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏；再次合并各洗脱段的洗脱液并重复100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱流程，在5:1洗脱段得到玫烟菌素，即为蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
采用这样的洗脱方式，有利于进一步提高产品的产率。
实施例3：产品的制备
本实施例与实施例1的不同之处在于：将浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上后，进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；在上述石油醚/乙酸乙酯的80：20洗脱段得到的组分进一步进行上述常压硅胶柱层析，并用氯仿/甲醇系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10，v/v，在90∶10洗脱段得到玫烟菌素，即为蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
实施例4：产品结构的测定
根据质谱和核磁共振等波谱数据可以确定上述玫烟菌素的结构。紫外光谱数据：UV(MeOH)λmaxnm:367（6.87），265（7.20），209（7.19）。红外光谱数据：IRvKBr maxcm-1:3267,2960,1643,1516，1446，1268,1218，837,758。质谱数据：HR-ESI-MS m/z:500.24100([M+Na]+,500.24074calcd.for C29H35NNaO5)。有关核磁共振数据见表2。
表2.玫烟菌素在CD3OD1中的1H-(600MHz)and13C-NMR(150MHz)数据
Figure BDA00001666245300121
根据上述波谱数据可以确定玫烟菌素，即本发明的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）的结构如下：
Figure BDA00001666245300132
实施例5：产品的用途
根据上文述及的试验，本发明的上述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）的用途在于制备药物，尤其是治疗和预防糖尿病、肥胖症及癌症的药物组合物。此化合物用作药物上时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用，药物组合物中可以含有0.1-99%、优选为0.5-90%的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体或赋形剂。此药用载体或赋形剂可以是一种或多种选自固体、半固体、液体稀释剂的填料或药物制品辅剂。将所述的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经口服和注射（静注、肌注）两种形式给药。口服可用其固体或液体制剂，如粉剂、片剂、糖衣剂、胶囊、溶液、糖浆、滴丸剂等。注射可用其固体或液体制剂，如粉针剂、溶液形注射剂等。
人体用药时，在非胃肠给药的情况下，为获得较佳效果，施用0.1-10000μg/kg,优选1-1000μg/kg，尤其是1μg/kg-80μg/kg体重的量是有益的。在口服给药的情况下，该量为0.2-10mg/kg,优选0.6-6mg/kg,尤其是1-5mg/kg体重。尽管如此，根据体重、给药途径、对活性化合物的个体反应、制剂种类、给药时间和间隔，可能需要偏离上述的量。
实施例6：药物的制备
按实施例1制得化合物玫烟菌素（Fumosorinone），按化合物晶体与赋形剂重量比1∶1的比例加入赋形剂，制粒压片。或者：
按实施例1制得化合物玫烟菌素（Fumosorinone），按常规胶囊制剂方法制成胶囊。或者：
按实施例1制得化合物玫烟菌素（Fumosorinone），按化合物晶体与赋形剂重量比1∶2的比例加入赋形剂，制粒压片。或者：
按实施例1制得化合物玫烟菌素（Fumosorinone），按化合物晶体与赋形剂重量比1∶3的比例加入赋形剂，制粒压片。
实施例7：药物的制备
实施例8：药物的制备
胶囊剂：玫烟菌素（Fumosorinone）100mg
淀粉            100mg
硬脂酸镁        适量
制备方法：玫烟菌素（Fumosorinone）与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。
实施例9：药物的制备
安瓿剂：玫烟菌素（Fumosorinone）    50mg
制备方法：将玫烟菌素（Fumosorinone）溶解于2毫升丙二醇中，过滤所得溶液在无菌条件下装入安瓿瓶中。
另外，本发明的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂还可以是上述（a）化合物的同分异构体或其药用衍生物，此药用衍生物为保持（a）化合物的生物有效性的药学常用衍生物。这种药用衍生物的选取范围及制备方法均是药学领域的公知常识。上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一限制条件。

Claims (10)

1.一种蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂，是如下（a）或（b）：
（a）、具有如下结构式的化合物；
Figure FDA00001666245200011
（b）、上述化合物的同分异构体或其药用衍生物。
2.根据权利要求1所述的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂，其特征在于：其药用衍生物为药用盐，此药用盐为保持所述（a）的生物有效性且由非毒性的有机酸、无机酸、有机碱或无机碱形成的药学常用酸加成盐或碱加成盐。
3.根据权利要求2所述的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂，其特征在于：制备所述酸加成盐所用的无机酸为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸或硝酸，制备所述酸加成盐所用的有机酸为对甲苯磺酸、水杨酸、甲磺酸、草酸、苹果酸、虎珀酸、乳酸、富马酸；制备所述碱加成盐所用的碱性制剂为铵、钾、钠或季铵氢氧化物。
4.根据权利要求1所述的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂，其特征在于：其药用衍生物的形式为酯、醚衍生物，或者为通过双键的氧化引入醛、酸或醇功能基；或者为在环内引入磺酸基；或者为通过Witting反应引入含有4-10个碳的链。
5.根据权利要求4所述的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂，其特征在于：通过Witting反应引入的链中携带OR1、NR2R3或卤素，其中R1、R2、R3为H或含有1-5个碳的烷基，卤素为F、Cl、Br或I。
6.权利要求1所述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的制备方法，其特征在于：虫生真菌玫烟色棒束孢固体或液体发酵液用乙酸乙酯、乙醇、甲醇或氯仿甲醇混合溶剂提取，所得提取物用硅胶柱层析分离，所得玫烟菌素即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
7.权利要求6所述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的制备方法：其特征步骤在于：
A、发酵培养：将所述玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至改良马铃薯葡萄糖培养基中，26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液；将种子液接种至大米培养基，26℃光照培养30天，得发酵物；其中，所述改良马铃薯葡萄糖培养基的配方为：200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4、1.5重量份的MgSO4、0.1重量份的柠檬酸、0.01重量份的维生素B1，溶于1000重量份的无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min，即得；所述大米培养基的配方为：80重量份的大米、100重量份的无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min，即得；
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，得浸膏样品，将此浸膏样品与1.2倍重、100目～200目的硅胶充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；在上述石油醚/乙酸乙酯的80∶20洗脱段得到的组分进一步进行上述常压硅胶柱层析，并再次用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，在5:1洗脱段得到玫烟菌素，即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
8.权利要求6所述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的制备方法：其特征步骤在于：
A、发酵培养：将所述玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至改良马铃薯葡萄糖培养基中，26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液；将种子液接种至大米培养基，26℃光照培养30天，得发酵物；其中，所述改良马铃薯葡萄糖培养基的配方为：200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4、1.5重量份的MgSO4、0.1重量份的柠檬酸、0.01重量份的维生素B1，溶于1000重量份的无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min，即得；所述大米培养基的配方为：80重量份的大米、100重量份的无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min，即得；
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，得浸膏样品，将此浸膏样品与1.2倍重、100目～200目的硅胶充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；合并各洗脱段的洗脱液，并再次进行上述常压硅胶柱层析，层析后再次用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏；再次合并各洗脱段的洗脱液并重复100:0,50:1,20:1,15:1,10:1,5:1，v/v的石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱流程，在5:1洗脱段得到玫烟菌素，即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
9.权利要求6所述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的制备方法：其特征步骤在于：
A、发酵培养：将所述玫烟色棒束孢菌株以接种针接种至改良马铃薯葡萄糖培养基中，26℃,150rpm摇床培养7天，得种子液；将种子液接种至大米培养基，26℃光照培养30天，得发酵物；其中，所述改良马铃薯葡萄糖培养基的配方为：200重量份的去皮土豆、20重量份的的葡萄糖、3重量份的KH2PO4、1.5重量份的MgSO4、0.1重量份的柠檬酸、0.01重量份的维生素B1，溶于1000重量份的无菌水，pH 6.5，121℃灭菌20min，即得；所述大米培养基的配方为：80重量份的大米、100重量份的无菌水，浸泡12h，pH自然，121℃灭菌30min，即得；
B：提取分离：发酵物用等体积的乙酸乙酯室温下浸泡提取48h，用旋转蒸发仪45℃减压蒸馏至干，得浸膏样品，将此浸膏样品与1.2倍重、100目～200目的硅胶充分搅拌混合，干燥，研磨均匀成粉末状，使浸膏样品充分吸附于硅胶颗粒上，然后进行常压硅胶柱层析，硅胶柱规格为300目～400目，用石油醚/乙酸乙酯系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10,80:20,60:40,50:50，v/v，收集洗脱液，45℃减压蒸馏，浓缩后用有机溶剂洗涤；在上述石油醚/乙酸乙酯的80：20洗脱段得到的组分进一步进行上述常压硅胶柱层析，并用氯仿/甲醇系统梯度洗脱，梯度洗脱的流程为100:0,95:5,90:10，v/v，在90：10洗脱段得到玫烟菌素，即为权利要求1中的蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂（a）。
10.权利要求1所述蛋白质络氨酸磷酸酶抑制剂的用途，其特征在于：用于制备治疗和预防糖尿病、肥胖症及癌症的药物组合物。
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