CN102668991A - 青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用及葡萄试管繁殖新技术 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用及葡萄试管繁殖新技术，该技术将从田间选取的葡萄脱病毒优良植株，采用综合无伤消毒技术获取无菌苗，然后在GS琼脂培养基上，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下进行初代培养，至试管苗长至瓶口时，剪成单芽茎段转入另瓶GS琼脂培养基中进行继代培养，在移栽前2月用加入低浓度青霉素的GN营养液+蛭石培养基，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下培养18-20天，长成苗即可进行移栽。本发明工艺简便，成本低廉，不易污染，同时既能防治杂菌，又可有效、快速地促进葡萄生长和生根，加快繁殖速度。

Description

青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用及葡萄试管繁殖新技术

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，特别是涉及一种青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用及葡萄试管繁殖新技术。

背景技术

葡萄试管脱毒繁殖是一项最有成效的生物技术，一个脱毒或新育良种和稀缺葡萄品种用试管繁殖能在短期内快速大量提供整齐一致的无病毒葡萄苗木，但试管繁殖需要具备一定的设备和技术手段，成本高(含糖琼脂培养基成本是常规繁殖的4-8倍)(见曹效东、曹孜义，1996，植物试管繁殖的成本与效益浅析。植物生理学通讯，32(4)，284-291)；在含糖琼脂培养基上容易滋生微生物，造成污染；试管苗根无根毛，移栽不易(表6)；含糖琼脂培养基耗电大、用工多，费用高(见表5)。若采用只加有无机营养成分的简易蛭石培养基，则杂菌无法生长，培养基简单，省工、省电，且可大幅降低成本，但是该蛭石培养基中没有有机成分和生长素，导致葡萄试管苗生根较慢，加入青霉素有促进生根作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用；

本发明的另一个目的是提供一种工艺简便，成本低廉，不易污染，同时既能防治杂菌，又可有效地促进生长和生根的葡萄试管繁殖新技术。

为实现上述发明目的所采用的技术方案为：

一种青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用。

一种葡萄试管简易繁殖新技术，其特征是：将从田间选取的葡萄脱病毒优良植株，采用综合无伤消毒技术获取无菌苗，然后在GS琼脂培养基上，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下进行初代培养，至试管苗长至瓶口时，剪成单芽茎段转入另瓶GS琼脂培养基中进行继代培养，在移栽前2月用加入低浓度青霉素的GN营养液+蛭石培养基，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下培养18-20天，长成苗即可进行移栽。

所述的青霉素、蛭石和GN营养液的用量配比为：每80-90mlGN营养液中加入50-60g蛭石和25-50mg的青霉素；

其中GN营养液组成为每1L水中含有如下mg的物质：

本发明采用含有低浓度青霉素的蛭石培养基进行葡萄试管简易繁殖，具有如下技术优势：

1、成本低，青霉素蛭石培养基是琼脂培养基成木的1/4(琼脂180元/kg斤，蛭石150元/m³)。

2、青霉素蛭石培养基，因没有糖和有机成份，不易兹生杂菌(见表4)。

3、受不良条件影响的葡萄琼脂培养基试管苗，可以用青霉素蛭石培养基进行挽救，从而减少损失(见表3)。

4、青霉素蛭石培养基透气好，葡萄试管苗根上有根毛，吸收好，移栽较易(表1、2、6)。

5、青霉素蛭石培养基，容器和水不用严格清洗，简少工序，节省用工、用电和设备。

6、青霉素蛭石培养基葡萄试管苗，繁殖速度是原有方法的1.5倍。

综上所述，本发明工艺简便，成本低廉，不易污染，同时既能防治杂菌，又可有效、快速地促进葡萄生长和生根，加快繁殖速度。本发明对于快速高效的繁殖脱毒葡萄、新育良种和稀缺葡萄品种迅速、低成本的繁殖推广有重要意义。

附图说明

图1为初代长成的无苗葡萄试管苗；

图2为加青霉素的蛭石培养基繁殖20天生长情况；

图3为光培开瓶后2D，简易蛭石试管繁殖苗(前排)与琼脂繁殖试管苗(后排)的生长情况；

图4为蛭石试管苗根有根毛，容易移栽；

图5为琼脂三角瓶试管苗根无根毛，不易移栽；

图6为沙培炼苗后葡萄试管苗根多根壮。

具体实施方式

1、无菌脱毒良种葡萄试管苗的获得：

从田间选取的葡萄脱病毒优良植株，采用综合无伤消毒技术获取无菌苗，然后在GS琼脂培养基上，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下进行初代培养，具体过程为：

1)用无菌操作技术剪取嫩梢，放入无菌的广口瓶内。

2)先用无菌水冲洗1-2次。

3)倒入清洁剂(84消毒液，浓度按说明书)摇洗15分钟，无菌水冲洗2次，倒入70％酒精迅速过一下，不超过5秒钟，去酒精，无菌水浸泡和冲洗2次。

4)去无菌水，加入0.1％升汞(内加2％的95％酒精)，浸没材料，并剧烈摇动3～8分钟(根据材料老幼变动，嫩的短，老的长)，去升汞，无菌水冲四次备用。

5)接种：剪去受伤药面，剪成单芽茎段，接入GS培养基中，一瓶接1～2个带芽茎段，在25～28℃、1500～3000Lux连续光下培养。

若带病毒，就要用热处理并配合茎尖剥离培养，经检测无主要葡萄病毒即为脱毒无菌葡萄试管苗。

2、无菌良种脱毒葡萄试管苗的继代增值：

当初代葡萄试管苗长至瓶口，进行继代，即剪成单芽茎段转入另瓶GS琼脂培养基中培养，每瓶放3～5个单芽茎段，30D后多数葡萄品种又长至瓶口，再剪成单芽茎段转入另瓶同一培养基中培养，仍在25～28℃、1500～3000Lx连续光下培养，一代代繁殖下去，每月即有3倍的增值速度，这叫继代繁殖。

3、无菌脱毒良种葡萄试管苗的简易蛭石培养基扩大繁殖：

GS琼脂培养基含有糖及有机成分，不仅成本高而且易滋生杂菌，也难以移栽，本发明在移栽前2月先转入无糖和无有机成分的低浓度青霉素+蛭石+GN营养液培养基中培养，具体为：

用大口瓶或废旧罐头瓶，装50～60g蛭石，加入80～90ml GN营养液(即原GS培养基，只加1/2的无机成分，铁盐浓度不变，不加有机成分、糖和贵重的琼脂。)，然后加入25～50mg的青霉素，经高温灭菌备用。

GN营养液组成为如前述的GN营养液组成成分。

接种时，每瓶放入8～10个双芽茎段，上盖透光好的培养皿或透气膜，在25～28度，1500～3000Lux连续光下培养，20D即可成苗，即准备移栽。

表1：蛭石培养基20D后葡萄试管苗的成活和增值倍数

表2：转接入蛭石培养基中不同葡萄品种成苗率和增值倍数

上述G1培养基指的是GN培养基+25mg青霉素。

4、无菌脱毒良种葡萄试管苗细菌污染和受伤苗的挽救：

表3：琼脂葡萄试管苗细菌污染和受伤苗用蛭石培养基20D的挽救效果：

从上表中可以看出：加入青霉素8，D生根率平均为87.5％，未加的平均为18.15％，生根率提高了4.8倍。

5、无菌脱毒良种葡萄试管简易繁殖苗的移栽：

1)光培炼苗及管理

光培炼苗是移栽第一步，必须进行的。光培炼苗是在光培室中，即将培养室灯光下培养的简易繁殖的葡萄试管苗，在光培室中打开瓶盖，在光强10000～300001x，湿度80～90％，室温在20～35℃下炼苗1D，其后湿度每天降低15％，阳光在30000lx以下(如超过用遮阳网遮阳到30000lx)，尽量照自然光，经3～5D自然光照，光培炼过的葡萄试管苗，茎杆发红，上部叶片产生角层，叶色发亮，部分茎叶可伸出瓶口，保温运往移栽现场进行沙培炼苗。

简易繁殖苗葡萄试管苗，因只有无机成分，又有青霉素，在光培室中打开瓶盖后，不容易滋生微生物，放置于5～7D后再取出进行沙培。而琼脂培养基试管苗光培开瓶后2D即污染，超过3D污染严重，以至葡萄试管苗全部霉烂、死亡。结果见下表4：

表4：

*为蛭石培养基干死的瓶数

从表4可知，简易蛭石试管繁殖苗与琼脂繁殖试管苗相比，在相同条件下，损失要少，成活率要高出二倍多。蛭石试管苗无糖，光培开瓶后无污染，琼脂试管苗光培开瓶2D后即污染，轻者损失20％的试管苗，重者80％，甚至全部报废。

琼脂葡萄试管苗开瓶后容易污染，移栽成活率低，而且费工，见表5。

表5：二种试管苗移栽用工对比表：

移栽试管苗用了二种葡萄试管苗，一种为琼脂试管苗，这种试管苗要经3次清洗根上附着的培养基，根长还要剪短，要有3人操作，费工，成本高，平均是简易蛭石苗试管苗用工的五倍(见表5)，并且污染严重，污染是简易蛭石苗试管苗的8倍，而简易蛭石苗无糖，不用清洗培养基，且有根毛(见图4)，栽入沙床容易长活，也不长菌，成活和生长也优于琼脂试管苗。

2)沙培炼苗及管理

把光培炼苗后的蛭石试管苗取出，根系不要抖动，轻轻均匀栽入沙床。沙床宽80～120cm，长150～300cm的玻璃沙床中。按株距3cm，行距8cm，进行移栽。地温控制在2～830℃，床温18～25℃，光强开始10000lx，以后每日增加20％lx，湿度开始100％，以后每日降低5％，2D后，每日早晚各洒一次水或安装喷灌设备，101～2D后蛭石试管苗长出一倍新叶，有发达的根系(见图6)，即移栽至营养钵中。

表6：二种试管苗光培炼苗后栽入沙床的成活率

从上表可见：经三批光培炼苗，栽入沙床，以原琼脂培养基污染严重，移栽黑比诺光培苗639株，成活153株，平均成活率为25.0％，简易蛭石苗移栽2055苗，成活1666株，平均成活率为82.6％，简易蛭石苗成活率高出原琼脂培养基苗3.45倍。

3)温棚营养袋炼苗及管理

沙培炼苗后，其后移栽容易成活，按常规进行大棚营养袋炼苗及管理即可。

本发明所用的GS琼脂培养基配方早已公开，见曹孜义主编的《实用植物组织培养技术教程》第二章第三节培养基及其配制31页上)，具体为：

GS培养基配方：

Claims (3)

1.一种青霉素在葡萄试管简易繁殖上的应用。

2.一种葡萄试管简易繁殖新技术，其特征是：将从田间选取的葡萄脱病毒优良植株，采用综合无伤消毒技术获取无菌苗，然后在GS琼脂培养基上，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下进行初代培养，至试管苗长至瓶口时，剪成单芽茎段转入另瓶GS琼脂培养基中进行继代培养，在移栽前2月用加入低浓度青霉素的GN营养液+蛭石培养基，在25-28℃、1500-3000Lx光照条件下培养18-20天，长成苗即可进行移栽。

3.按照权利要求2所述的葡萄试管简易繁殖新技术，其特征是：所述的青霉素、蛭石和GN营养液的用量配比为：每80-90mlGN营养液中加入50-60g蛭石和25-50mg的青霉素；

其中GN营养液组成为每1000ml水中含有如下mg的物质：

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