CN102657180B - 一种含有四氟醚唑与肟菌酯的杀菌组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种含有四氟醚唑和肟菌酯的杀菌组合物，其重量比为100∶1～1∶100，特别地20∶1～1∶20。本发明的杀菌组合物与单一杀菌剂相比，对水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病有显著的协同增效作用，提高了杀菌效果，效果明显高于单独使用单一杀菌剂；而且用药成本低，减少环境污染和农药残留；作用位点增加，有利于克服和延缓病菌抗药性的产生。本发明组合物对试验作物均无明显不良影响，叶色、长势等都正常，安全性好，符合农药制剂的安全性要求。
Description
技术领域
本发明涉及一种农用组合物及农用杀菌剂，特别涉及一种用于水稻的纹枯病、稻曲病和稻瘟病防治的农用组合物及农用杀菌剂。
背景技术
水稻纹枯病、稻曲病和稻瘟病是水稻上的重要病害，是我国水稻生产的三大病害，在全国各水稻产区都有发生。
水稻纹枯病是水稻产区的重要病害，是我国水稻三大病害之一，在全国各水稻产区都有发生，长江流域和南方稻区发生较重，尤其以密植矮秆杂交稻的高产田发生最为普遍且严重。主要由半知菌亚门立枯丝核菌病(Rhizoctonia solani)引起，病害由下向上扩展，严重时可到剑叶，甚至穗部发病，大片倒伏。发病较重的田块，一般减产5％～10％，严重可达50％～70％。随着矮秆多穗型品种的推广，栽插密度和施肥水平的提高，已成为水稻高产稳产的一个突出问题。
稻曲病又称伪黑穗病，病原菌无性阶段归半知菌亚门绿核菌属(Ustilaginoidea virens)；有性世代归子囊菌亚门麦角菌属(Clavicepsvirens)。此病在世界大多数稻区都有发生，我国亦早有记载。在华南双季稻区虽向有发生，但20世纪60年代前发生零星，为害轻微，不为人们所注意。近年来，随着耕作制度变化、杂交稻推广、生产条件改善和生产水平提高，稻曲病的发生越来越严重，在一些地区已经跃升为主要病害。此病发生有逐年上升之势，不少地方造成较大损失。另外，由于其病粒有毒，若用作饲料，含量达0.5％以上时，会引起禽畜慢性中毒，内脏发生病变甚至死亡。
稻瘟病在长江流域和南方稻区发生较重，尤其以密植矮秆杂交稻的高产田发生最为普遍且严重。主要由半知菌亚门立枯丝核菌病(Rhizoctoniasolani)引起，病害由下向上扩展，严重时可到剑叶，甚至穗部发病，大片倒伏。发病较重的田块，一般减产5％～10％，严重可达50％～70％。随着矮秆多穗型品种的推广，栽插密度和施肥水平的提高，已成为水稻高产稳产的一个突出问题。
稻瘟病是水稻重要病害之一，可引起水稻大幅度减产，严重时减产40％～50％，甚至颗粒无收。世界各稻区均匀发生。本病在我国各水稻产区均有发生，其中以叶部、节部发生为多，发生后可造成不同程度减产，尤其穗颈瘟或节瘟发生早而重，可造成白穗以致绝产。
四氟醚唑(Tetraconazole，通用名：Tecto，Toba2，Storite，MK-360；中文通用名：朵麦克、杀菌全能王)是由杭州宇龙化工有限公司创制的环保型农药，杭州宇龙是继意大利意赛格公司之后的全球第二个拥有四氟醚唑生技术的厂家，是市面上能购买获得的产品。其结构式为：
四氟醚唑属第二代三唑类杀菌剂，为甾醇脱甲基化抑制剂。分子结构中含氟，杀菌活性是第一代的2-3倍，杀菌谱广、高效、持效期长达4-6周，具有保护和治疗作用，并有很好的内吸传导性能。四氟醚唑对白粉病有显著的防治效果。对水稻稻瘟病、稻曲病、纹枯病、恶苗病、叶枯病有特效。对小麦的纹枯病、白粉病、条纹病、黄叶病等有特效。对多种真菌、细菌、病毒性病害，如霜霉病、白粉病、枯萎病、细菌性角斑病、软腐病和立枯病具有治疗和铲除作用。既可茎叶处理，也可作种子处理使用。
肟菌酯(Trifloxystrobin)是拜耳公司成功开发的属甲氧基丙烯酸酯类新型含氟广谱杀菌剂，具有高效、广谱、保护、治疗、铲除、渗透、内吸活性、耐雨水冲刷、持效期长等特性，在市场上可以购买获得。对1，4-脱甲基化酶抑制剂、苯甲酰胺类、二羧胺类和苯并咪唑类产生抗性的菌株有效，与目前已有杀菌剂无交互抗性。对几乎所有真菌纲(子囊菌纲、担子菌纲、卵菌纲和半知菌类)病害如白粉病、锈病、颍枯病、网斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性。除对白粉病、叶斑病有特效外，对锈病、霜霉病、立枯病、苹果黑腥病有良好的活性。对作物安全，因其在土壤，
水中可快速降解，故对环境安全。其结构式为：
以四氟醚唑和肟菌酯为有效成分的杀菌组合物，用于水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病的防治，可以延缓病菌抗药性的产生，提高实际防效，降低用药成本，是病害综合防治的重要手段。
发明内容
本发明的目的在于克服单一杀菌剂对农业病害防治作用单一、持效期短、毒力不足等问题，提供一种杀菌效果好、延缓抗药性且用药成本低的杀菌组合物。
本发明的另一目的是提供将所述杀菌组合物用于水稻的纹枯病、稻瘟病和稻曲病的用途。
本发明提供一种杀菌组合物，所述杀菌组合物含有四氟醚唑和肟菌酯，其中，四氟醚唑与肟菌酯的重量比为100∶1～1∶100。
优选地，四氟醚唑与肟菌酯的重量比为20∶1～1∶20。
本发明的杀菌组合物还包含除草剂、杀虫剂、防护剂、生长调节剂、植物营养素或土壤调节剂中的一种或几种的混合物。
本发明还提供一种杀菌剂，其中所述杀菌剂含有0.1～90重量％的上述杀菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。
优选地，所述杀菌剂含有3～80重量％的上述杀菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。
根据本发明所述杀菌剂的优选实施方式，其剂型为悬浮乳剂、水乳剂、微乳剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
本发明还提供上述杀菌组合物在防治水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病的应用。
本发明还提供一种防治作物病害的方法，在农作物和/或果实感染病害之前或之后，向农作物和/或果实及其生长或储存的场所施用上述杀菌组合物或上述杀菌剂。
以下将更详细的说明本发明的技术方案：
本发明提供一种杀菌组合物，所述杀菌组合物含有四氟醚唑和肟菌酯，其中，四氟醚唑与肟菌酯的重量比为100∶1～1∶100，特别优选地20∶1～1∶20。
本发明还提供含有上述杀菌组合物的杀菌剂，所述杀菌剂含有0.1～90重量％的上述杀菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。特别优选地，上述杀菌组合物的含量是5～80重量％。
本发明的杀菌组合物还可以包含除草剂、杀虫剂、防护剂、生长调节剂、植物营养素或土壤调节剂中的一种或几种的混合物。
所述除草剂例如乙草胺、甲草胺、丁草胺、莠去津、扑草净等；所述杀虫剂例如氟啶虫酰胺、溴氰虫酰胺等。这些除草剂、杀虫剂、防护剂、生长调节剂、植物营养素或土壤调节剂均为市面上能够购买获得的产品。
除非另有说明，本发明所涉及的“％”均为“重量百分比”。
按照本领域技术人员所公知的方法，本发明所述的杀菌组合物在实际应用时可配制成农业上允许的剂型，较好的剂型是悬浮乳剂、水乳剂、微乳剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
对悬浮乳剂，可使用的助剂有：分散剂选自聚羧酸盐、木质素磺酸盐、烷基萘磺酸盐、TERSPERSE 2425(美国亨斯迈公司出品，烷基萘磺酸盐类)；润湿剂选自烷基酚聚氧乙烯聚基醚甲醛缩合物硫酸盐、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、苯乙基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、萘磺酸盐、TERSPERSE 2500(美国亨斯迈公司出品)；增稠剂选自黄原胶、硅酸镁铝、膨润土；防腐剂选自苯甲酸、苯甲酸钠、BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)；消泡剂为有机硅类消泡剂；防冻剂选自乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、无机盐类如氯化钠。
对水乳剂，可使用的助剂有：乳化剂选自壬基酚聚氧乙烯(EO＝10)醚磷酸酯、三苯乙基苯酚聚氧乙烯醚磷酸酯(农乳600#磷酸酯)、农乳700#、农乳2201#、Span-60#、乳化剂T-60、TX-10、农乳1601#、农乳600#、农乳400#；溶剂选自二甲苯、甲苯、环己酮、溶剂油(牌号：S-150、S-180、S-200)；稳定剂选自亚磷酸三苯酯、环氧氯丙烷；防冻剂选自乙二醇、丙二醇、甘油、尿素、无机盐类如氯化钠；增稠剂选自黄原胶、膨润土、硅酸镁铝；防腐剂选自BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)、苯甲酸、苯甲酸钠。
对微乳剂，可使用的助剂有：乳化剂选自十二烷基苯磺酸钙(农乳500#)、农乳700#、农乳2201#、斯盘-60#、吐温-80、TX-10、农乳1601、农乳600#、农乳400#；助溶剂选自甲醇、异丙醇、正丁醇、乙醇；溶剂选自环己酮、N-甲基吡咯烷酮、二甲苯、甲苯、溶剂油(牌号：S-150、S-180、S-200)；稳定剂选自亚磷酸三苯酯、环氧氯丙烷。
对可湿性粉剂，可使用的助剂有：分散剂选自聚羧酸盐、木质素磺酸盐、烷基萘磺酸盐；润湿剂选自烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、萘磺酸盐；填料选自硅藻土、高岭土、白炭黑、轻钙、滑石粉、凹凸棒土、陶土等。
对于水分散粒剂来说，本领域技术人员很熟悉使用相应的助剂完成本发明。分散剂选用自聚羧酸盐、木质素磺酸盐、烷基萘磺酸盐；润湿剂选自聚氧乙烯醇、烷基硫酸盐、烷基磺酸盐、萘磺酸盐；崩解剂选自硫酸铵、尿素、蔗糖、葡萄糖、柠檬酸、丁二酸、碳酸氢钠；粘结剂选自硅藻土、玉米淀粉、PVA、羧甲基(乙基)纤维素类及微晶纤维素类；填料选自硅藻土、高岭土、白炭黑、轻钙、海泡石、滑石粉、凹凸棒土、陶土等。
本发明所述的杀菌组合物可以以成品制剂形式提供，即组合物中各物质已经混合；也可以以单剂制剂的形式，使用前在桶(罐)中直接混合。本发明的浓缩物通常与水混合得到所需要活性物质的浓度。
本发明还提供上述杀菌组合物在防治水稻纹枯病和稻曲病的应用。
本发明还提供一种防治作物病害的方法，在农作物和/或果实感染病害之前或之后，向农作物和/或果实及其生长或储存的场所施用上述杀菌组合物或上述杀菌剂。
与现有技术相比，本发明通过四氟醚唑和肟菌酯的联合使用，其有益效果为：
(1)与单剂相比，本发明所述杀菌组合物对病害有显著的增效作用，提高了杀菌效果；
(2)减少用药次数，降低用药成本，减少环境污染和农药残留；
(3)组合物由不同作用机制的有效成分组成，作用位点增加，有利于克服和延缓病菌抗药性的产生。
具体实施方式
下面结合具体实施例来对本发明进行进一步说明，但并不将本发明局限于这些具体实施方式。本领域技术人员应该认识到，本发明涵盖了权利要求书范围内所可能包括的所有备选方案、改进方案和等效方案。
一、制备实施例
下述所有制剂配比中所涉及的“％”均为重量百分比；术语“有效成分比”均为四氟醚唑与肟菌酯的重量比。
1、制备悬浮乳剂
按配方比例，将原药和分散剂、润湿剂、消泡剂、水等混合均匀，经砂磨机砂磨获得悬浮母液；再将另一原药、溶剂、乳化剂等混合均匀，获得均一油相，按照计量配比，在高剪切的条件下，将油相和余量水加入到悬浮母液中混合剪切均匀。再加入增稠剂及防腐剂搅拌均匀得到所需的产品。
实施例1：42％四氟醚唑·肟菌酯悬浮乳剂(有效成分比20∶1)
称取40％四氟醚唑原药、2％肟菌酯原药、3％FS3000(磷酸酯型阴离子表面活性剂)、1％SXC(磺酸型阴离子表面活性剂)、30％溶剂油S150、5％农乳500、1％NS-500LQ、0.1％黄原胶、5％乙二醇、0.03％BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)、0.3％有机改性硅氧烷消泡剂，去离子水加至100％。
先将肟菌酯原药、FS3000、SXC、乙二醇、消泡剂、部分去离子水混合均匀，于砂磨机砂磨获得肟菌酯悬浮母液。再将四氟醚唑原药、溶剂油、乳化剂溶解混合均匀获得均一油相，按照计量配比，在高剪切的条件下(转速3000r/min，约10min)，将油相和余量水加入到悬浮母液中混合剪切均匀。再加入增稠剂黄原胶及防腐剂BIT搅拌混合均匀得到所需的产品。
实施例2：20％四氟醚唑·肟菌酯悬浮乳剂(有效成分比1∶1)
称取10％四氟醚唑原药、10％肟菌酯原药、3％FS3000、1％JFC(脂肪醇聚氧乙烯醚)、20％溶剂油S150、4％农乳500、1％NS-500LQ、0.2％黄原胶、5％乙二醇、0.3％苯甲酸、0.3％有机改性硅氧烷消泡剂，去离子水加至100％。
制备过程同实施例1
实施例3：40.4％四氟醚唑·肟菌酯悬浮乳剂(有效成分比100∶1)
称取40％四氟醚唑原药、0.4％肟菌酯原药、3％FS3000、1％JFC(脂肪醇聚氧乙烯醚)、30％溶剂油S150、5％农乳500、1％NS-500LQ、0.1％黄原胶、5％乙二醇、0.3％苯甲酸、0.3％有机改性硅氧烷消泡剂，去离子水加至100％。
制备过程同实施例1
2、水分散粒剂
实施例4：30％四氟醚唑·肟菌酯水分散粒剂(有效成分比5∶1)
称取25％四氟醚唑原药、5％肟菌酯原药、3.5％NNO(烷基萘磺酸盐甲醛缩合物)、2.5％拉开粉BX(二丁基萘磺酸钠)、3％K-12(十二烷基硫酸钠)、5％羧甲基(乙基)纤维素、10％硅藻土、5％葡萄糖、高岭土加至100％。混合均匀，经气流粉碎后制粒。
实施例5：33％四氟醚唑·肟菌酯水分散粒剂(有效成分比10∶1)
称取30％四氟醚唑原药、3％肟菌酯原药、3.5％NNO(烷基萘磺酸盐甲醛缩合物)、2％拉开粉BX(二丁基萘磺酸钠)、3％K-12(十二烷基硫酸钠)、5％羧甲基(乙基)纤维素、15％硅藻土、5％葡萄糖、高岭土加至100％。
制备过程同实施例4。
实施例6：42％四氟醚唑·肟菌酯水分散粒剂(有效成分比1∶20)
称取2％四氟醚唑原药、40％肟菌酯原药、4％NNO(烷基萘磺酸盐甲醛缩合物)、2.5％拉开粉BX(二丁基萘磺酸钠)、3％K-12(十二烷基硫酸钠)、5％羧甲基(乙基)纤维素、20％硅藻土、5％葡萄糖、高岭土加至100％。
制备过程同实施例4。
3、可湿性粉剂
按配方要求，将各种助剂、填料、原药混合后经粗粉碎机粉碎后，进入气流粉碎机充分粉碎混合制得可湿性粉剂。
实施例7：60％四氟醚唑·肟菌酯可湿性粉剂(有效成分比5∶1)
称取50％四氟醚唑原药、10％肟菌酯原药、4％NNO、2％拉开粉BX、5％白炭黑、轻钙加至100％。混合均匀，粉碎后得到产品。
实施例8：80％四氟醚唑·肟菌酯可湿性粉剂(有效成分比1∶1)
称取40％四氟醚唑原药、40％肟菌酯原药、5％木质素磺酸钙、3％拉开粉BX、1％K-12、4％白炭黑、高岭土加至100％。混合均匀，粉碎后得到产品。
实施例9：51％四氟醚唑·肟菌酯可湿性粉剂(有效成分比50∶1)
称取50％四氟醚唑原药、1％肟菌酯原药、5％木质素磺酸钙、3％拉开粉BX、1％K-12、3％白炭黑、高岭土加至100％。混合均匀，粉碎后得到产品。
4、微乳剂
实施例10：24％四氟醚唑·肟菌酯微乳剂(有效成分比1∶5)
称取4％四氟醚唑原药、20％肟菌酯原药、5％农乳700#、5％农乳500#、6％农乳1601#、15％环己酮、5％N-甲基吡咯烷酮、5％正丁醇，经溶解完全并混合均匀，去离子水加至100％。搅拌均匀后，得到产品。
实施例11：22％四氟醚唑·肟菌酯微乳剂(有效成分比10∶1)
称取20％四氟醚唑原药、2％肟菌酯原药、5％农乳2201#、5％农乳500#、6％农乳1601#、15％环己酮、5％N-甲基吡咯烷酮、5％异丙醇，经溶解完全并混合均匀，去离子水加至100％。搅拌均匀后，得到产品。
实施例12：36％四氟醚唑·肟菌酯微乳剂(有效成分比1∶5)
称取6％四氟醚唑原药、30％肟菌酯原药、5％农乳2201#、5％农乳500#、6％农乳1601#、20％环己酮、5％N-甲基吡咯烷酮、5％异丙醇，经溶解完全并混合均匀，去离子水加至100％。搅拌均匀后，得到产品。
实施例13：51％四氟醚唑·肟菌酯微乳剂(有效成分比1∶50)
称取1％四氟醚唑原药、50％肟菌酯原药、5％农乳2201#、5％农乳500#、5％农乳1601#、25％环己酮、5％N-甲基吡咯烷酮、3％异丙醇，经溶解完全并混合均匀，去离子水加至100％。搅拌均匀后，得到产品。
5、水乳剂
实施例14：5％四氟醚唑·肟菌酯水乳剂(有效成分比4∶1)
称取4％四氟醚唑原药、1％肟菌酯原药、3％农乳2201#、2％壬基酚聚氧乙烯(EO＝10)醚磷酸酯、2％农乳600#酸磷脂、15％环己酮、10％溶剂油S150，混合溶解得到油相。将5％乙二醇，0.3％黄原胶、0.03％BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)，去离子水加至100％，配成水相。油相加入水相中充分混合，经高剪切乳化后，得到产品。
实施例15：3％四氟醚唑·肟菌酯水乳剂(有效成分比1∶5)
称取0.5％四氟醚唑原药、2.5％肟菌酯原药、3％农乳2201#、2％壬基酚聚氧乙烯(EO＝10)醚磷酸酯、2％农乳600#酸磷脂、15％环己酮、10％溶剂油S150，混合溶解得到油相。将5％乙二醇，0.3％黄原胶、0.03％BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)，去离子水加至100％，配成水相。油相加入水相中充分混合，经高剪切乳化后，得到产品。
实施例16：11％四氟醚唑·肟菌酯水乳剂(有效成分比1∶10)
称取1％四氟醚唑原药、10％肟菌酯原药、3％农乳2201#、2％壬基酚聚氧乙烯(EO＝10)醚磷酸酯、2％农乳600#酸磷脂、15％环己酮、15％溶剂油S150，混合溶解得到油相。将5％乙二醇，0.3％黄原胶、0.03％BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)，去离子水加至100％，配成水相。油相加入水相中充分混合，经高剪切乳化后，得到产品。
实施例17：11％四氟醚唑·肟菌酯水乳剂(有效成分比1∶50)
称取0.5％四氟醚唑原药、25％肟菌酯原药、3％农乳2201#、2％壬基酚聚氧乙烯(EO＝10)醚磷酸酯、2％农乳600#酸磷脂、15％环己酮、15％溶剂油S150，混合溶解得到油相。将5％乙二醇，0.3％黄原胶、0.03％BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)，去离子水加至100％，配成水相。油相加入水相中充分混合，经高剪切乳化后，得到产品。
实施例18：30.3％四氟醚唑·肟菌酯水乳剂(有效成分比1∶100)
称取0.3％四氟醚唑原药、30％肟菌酯原药、3％农乳2201#、2％壬基酚聚氧乙烯(EO＝10)醚磷酸酯、2％农乳600#酸磷脂、15％环己酮、10％溶剂油S150，混合溶解得到油相。将5％乙二醇，0.3％黄原胶、0.03％BIT(1，2-苯并异噻唑啉-3-酮)，去离子水加至100％，配成水相。油相加入水相中充分混合，经高剪切乳化后，得到产品。
二、生物活性实施例
生物活性实施例分为室内生物活性实施例和大田生物活性实施例。
活性实例1：四氟醚唑与肟菌酯复配对水稻纹枯病的室内毒力测定
试验靶标为水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)，试验采用共毒系数法评价复配制剂的联合毒力作用，明确较合理的配比。
将四氟醚唑和肟菌酯分别用DMF溶解，再用0.1％的吐温-80水溶液稀释配制成系列浓度的药液，在超净工作台中分别吸取6mL到灭菌的三角烧瓶，加入50℃左右的PDA+100mg/LSHAM培养基54mL，摇匀后倒入4个直径9cm的平皿，制成4个相应浓度的含毒培养基；用同样的方法将不同配比的四氟醚唑和肟菌酯系列浓度复配药液制成含毒培养基。将培养2天的水稻纹枯病病原菌，用直径5mm的打孔器在菌落边缘打成菌块，用接种针将菌块移至预先配制成的含毒PDA培养基中央，然后置于25℃培养箱内培养，每处理重复4次。3天后，采用十字交叉法用卡尺量取各处理菌落直径cm，求出校正抑制百分率。每个菌落十字交叉测两个直径，以其平均数代表菌落大小。按下式求出菌落生长抑制率：菌落生长抑制率％＝(空白对照菌落增长直径-药剂处理菌落增长直径)×100/空白对照菌落增长直径
在药剂抑菌率的基础上，用“DPS数据处理系统”进行数据分析统计，求出回归直线、EC50、相关系数。依孙云沛(Y-P Sun)法将测定的各处理的EC50换算成实际毒性指数(ATI)；根据混剂的配比，算出理论毒性指数(TTI)，按下列公式计算混剂的共毒系数(CTC)。
理论混用毒力指数(TTI)＝A的毒力指数×A在混用中的含量(％)
+B的毒力指数×B在混用中的含量(％)
若共毒系数大于120，表明有增效作用；若明显低于100，表明为拮抗作用；100～120之间，表明为相加作用。
表l 四氟醚唑与肟菌酯复配对水稻纹枯病的室内毒力测定结果
活性实例2：四氟醚唑与肟菌酯复配对水稻稻曲病的室内毒力测定
试验靶标为水稻稻曲病(Ustilaginoidea virens)，试验采用共毒系数法评价复配制剂的联合毒力作用，明确较合理的配比。
将四氟醚唑和肟菌酯分别用DMF溶解，再用0.1％的吐温-80水溶液稀释配制成系列浓度的药液，再将四氟醚唑和肟菌酯按不同配比分别制成预设的系列浓度复配药液。在100mL PSB培养基中接种已在PDA培养基上培养了14d的菌丝块(直径5mm)3块，26℃恒温摇培14d的孢子菌丝悬浮液，以单层灭菌医用沙布过滤去菌丝，孢子悬浮液供测试用。将各单剂及复配药剂分别按预备试验设计的系列浓度药液，加入到PSB液体培养基中制成含药液体培养基。每50mL的三角瓶中装稀释液20mL，每浓度4瓶。同时设空白对照。该过程严格按照无菌操作。每三角瓶加已培养备用的孢子悬浮液菌种2mL，26℃恒温摇培12d(转速120r/min)，静止培养2d。倒出菌丝，60℃烘干称菌丝干重。计算各药剂处理的抑菌效果，抑菌率(％)＝(空白对照菌丝干重-药剂处理菌丝干重)×100/空白对照菌丝干重。
在药剂抑菌率的基础上，用“DPS数据处理系统”进行数据分析统计，求出回归直线、EC50、相关系数。依孙云沛(Y-P Sun)法将测定的各处理的EC50换算成实际毒性指数(ATI)；根据混剂的配比，算出理论毒性指数(TTI)，按下列公式计算混剂的共毒系数(CTC)。
理论混用毒力指数(TTI)＝A的毒力指数×A在混用中的含量(％)
+B的毒力指数×B在混用中的含量(％)
若共毒系数大于120，表明有增效作用；若明显低于100，表明为拮抗作用；100～120之间，表明为相加作用。
表2四氟醚唑与肟菌酯复配对水稻稻曲病的室内毒力测定结果
活性实例3：四氟醚唑与肟菌酯复配对水稻稻瘟病的室内毒力测定
试验靶标为水稻稻瘟病(Pyricularia oryzae)，试验采用共毒系数法评价复配制剂的联合毒力作用，明确较合理的配比。
将四氟醚唑和肟菌酯分别用DMF溶解，再用0.1％的吐温-80水溶液稀释配制成系列浓度的药液，再将四氟醚唑和肟菌酯按不同配比分别制成预设的系列浓度复配药液。将培养8天的水稻稻瘟病病原菌，用直径5mm的打孔器在菌落边缘打成菌块，用接种针将菌块移至预先配制成的含毒PDA培养基中央，然后置于25℃培养箱内培养，每处理重复4次。8天后，采用十字交叉法用卡尺量取各处理菌落直径cm，求出校正抑菌率。每个菌落十字交叉测两个直径，以其平均数代表菌落大小。按下式求出抑菌率：菌落生长抑制率％＝(空白对照菌落增长直径-药剂处理菌落增长直径)×100/空白对照菌落增长直径。
在药剂抑菌率的基础上，用“DPS数据处理系统”进行数据分析统计，求出回归直线、EC50、相关系数。依孙云沛(Y-P Sun)法将测定的各处理的EC50换算成实际毒性指数(ATI)；根据混剂的配比，算出理论毒性指数(TTI)，按下列公式计算混剂的共毒系数(CTC)。
理论混用毒力指数(TTI)＝A的毒力指数×A在混用中的含量(％)+B的毒力指数×B在混用中的含量(％)
若共毒系数大于120，表明有增效作用；若明显低于100，表明为拮抗作用；100～120之间，表明为相加作用。
表3四氟醚唑与肟菌酯复配对水稻稻瘟病的室内毒力测定结果
从表1-3结果可以看出，四氟醚唑与肟菌酯混配，在重量比为100∶1～1∶100的范围内，对水稻纹枯病、稻曲病和稻瘟病均表现为增效作用。其中重量比为20∶1～1∶20的范围内增效作用尤其突出、明显。结果表明，四氟醚唑与肟菌酯混配具有合理性和可行性。
田间应用试验1：防治水稻纹枯病田间药效试验
根据农业部药检所“GB/T 17980.20-2000农药田间药效试验准则(一)——杀菌剂防治水稻纹枯病”的规定，试验药剂、对照药剂和空白对照的小区处理采用随机区组排列，小区面积15m2，4次重复，本试验共计施药两次。第一次施药时处于发病初期，两周后施第二次药。本试验共计调查2次，每试验小区采用对角线五点取样，每点调查相连5丛，共25丛，记录病害等级。
病害分级标准如下：
0级：全株无病；
1级：第四叶片及其以下各叶鞘、叶片发病(以剑叶为第一片叶)；
3级：第三片叶及其以下各叶鞘、叶片发病；
5级：第二片叶及其以下各叶鞘、叶片发病；
7级：剑叶叶片及其以下各叶鞘、叶片发病；
9级：全株发病，提早枯死。
药效计算方法：
根据调查结果，按照下面(1)、(2)公式计算病情指数和防效。
式中：CK0、CK1分别为空白对照区施药前、后的病情指数；PT0、PT1分别为药剂处理区药前、后的病情指数。
表4防治水稻纹枯病田间药效试验结果
田间应用试验2：防治水稻稻曲病田间药效试验
试验药剂、对照药剂和空白对照的小区处理采用随机区组排列，小区面积20m2，4次重复，本试验共计施药两次。第一次施药时处于发病初期，1周后施第二次药。每试验小区采用对角线五点取样，每点调查相连5丛，共25丛，调查各小区的病粒数，记录病害等级。
病害分级标准如下：
0级：无病；
1级：1粒病粒；
2级：2～5粒病粒；
3级：6～10粒病粒；
4级：11～15粒病粒；
5级：16粒以上病粒。
药效计算方法：
根据调查结果，按照下面(1)、(2)公式计算病情指数和防效。
式中：CK0、CK1分别为空白对照区施药前、后的病情指数；PT0、PT1分别为药剂处理区药前、后的病情指数。
表5防治水稻稻曲病田间药效试验结果
田间应用试验3：防治水稻稻瘟病田间药效试验
试验药剂、对照药剂和空白对照的小区处理采用随机区组排列，小区面积20m2，4次重复，本试验共计施药两次。第一次施药时处于水稻出穗期前，齐穗期施第二次药。每试验小区采用对角线五点取样，每点调查50株，穗瘟每点调查50穗以上，以穗为单位记录分级，记录病害等级。
病害分级标准如下：
0级：无病；
1级：每穗损失5％一下(个别枝梗发病)；
3级：每穗损失6％～20％(1/3左右枝梗发病)；
5级：每穗损失21％～50％(穗颈或主轴发病，谷粒半瘪)；
7级：每穗损失51％～70％(穗颈发病，大部瘪谷)；
9级：每穗损失71％～100％(穗颈发病，造成白穗)。
药效计算方法：
根据调查结果，按照下面(1)、(2)公式计算病情指数和防效。
式中：CK0、CK1分别为空白对照区施药前、后的病情指数；PT0、PT1分别为药剂处理区药前、后的病情指数。
表6防治水稻稻瘟病田间药效试验结果
上述室内生测和田间药效试验结果表明本发明所述杀菌组合物产生的有益效果为：
(1)与单剂相比，该杀菌组合物对水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病有显著的协同增效作用，提高了杀菌效果，特别是在有效成分比为20∶1～1∶20范围内，其效果明显高于单独使用单一杀菌剂，具有明显的协同增效作用；
(2)减低用药成本，减少环境污染和农药残留；
(3)组合物由不同作用机制的有效成分组成，作用位点增加，有利于克服和延缓病菌抗药性的产生。本发明组合物对试验作物均无明显不良影响，叶色、长势等都正常，安全性好，符合农药制剂的安全性要求。
本发明所述杀菌组合物对水稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病有良好的防效。
Claims (7)
1.一种杀菌组合物，所述杀菌组合物的有效成分是四氟醚唑和肟菌酯，其特征在于四氟醚唑与肟菌酯的重量比为50:1～1:50，并且四氟醚唑与肟菌酯的重量比不是1:1、9:1、10:1、20:1、50:1。
2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于所述杀菌组合物还包含除草剂、杀虫剂、植物营养素或土壤调节剂中的一种或几种的混合物。
3.一种杀菌剂，其特征在于所述杀菌剂含有0.1～90重量%的权利要求1或2所述的杀菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。
4.根据权利要求3所述的杀菌剂，其特征在于所述杀菌剂含有3～80重量%的权利要求1或2所述的杀菌组合物，余量为农药上可接受的载体和助剂。
5.根据权利要求4所述的杀菌剂，其特征在于其剂型为悬浮乳剂、水乳剂、微乳剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
6.根据权利要求1或2所述的杀菌组合物在防治水稻纹枯病、稻曲病和稻瘟病中的应用。
7.一种防治作物病害的方法，在农作物感染病害之前或之后，向农作物及其生长或储存的场所施用权利要求1或2所述的杀菌组合物或权利要求3所述的杀菌剂。
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