CN102649805A - 一种以四季青为原料制备高纯度长梗冬青苷的方法 - Google Patents

Abstract

一种以四季青为原料制备高纯度长梗冬青苷的方法，包括提取、富集和纯化步骤，所述的提取是将四季青原料用水或/和有机溶剂回流提取、分离得到提取液，浓缩后得到浸膏；所述的富集是浸膏用大孔树脂富集，上柱后用50-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，脱溶后得到四季青总皂苷；所述的纯化是四季青总皂苷用氧化铝柱色谱分离纯化，70-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩后调节至碱性后，经水饱和正丁醇萃取，然后对除去正丁醇后的萃取液用乙醚沉淀，分离出沉淀、干燥即得长梗冬青苷。

Description

一种以四季青为原料制备高纯度长梗冬青苷的方法

技术领域：

本发明涉及一种天然植物化学成分的提取方法，具体地说是一种以四季青为原料，制备高纯度长梗冬青苷的方法。

背景技术：

长梗冬青苷(Pedunculoside)，属于五环三萜皂苷类物质，化学结构式为：

四季青为冬青属植物冬青Ilex purpurea Hassk.的干燥叶，在长江以南各省区均有广泛分布，药用资源十分丰富。民间用四季青水煎液治疗烧烫伤，效果尤佳。现代研究表明，四季青具有广谱抗菌作用，对心血管系统也有显著的药理作用，以其为原料生产的注射剂、片剂及与化学药的合剂，用来治疗病毒性角膜炎、冠心病心绞痛，均有显著效果。

四季青中的主要有效成分长梗冬青苷的提取方法研究较少，廖立平等以四季青叶干药材为原料，用80％乙醇回流提取，依次用石油醚(60-90℃)，乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液分别回收溶剂，所得正丁醇部分加硅胶拌样，上样于硅胶柱(硅胶粒度200-300目)，以氯仿＝甲醇(90∶6＝500∶50)梯度洗脱，所得流分再经反复硅胶柱层析，ODS反相柱层析，SephadexLH-20纯化得到长梗冬青苷(100mg)，该方法仅适用于实验室化学成分分离鉴定，不适用于批量生产。庞小雄等报道的提取分离方法是将救必应粉碎成粗粉，用95％乙醇回流提取3次，提取液浓缩，加入等量蒸馏水，静置过夜，离心，沉淀物用适量水洗，干燥得粗品，粗品用氯仿回流除去脂溶性成分，残渣用50％乙醇加热处理，滤除不溶物，滤液放置，过滤，所得结晶经过硅胶柱层析，氯仿-甲醇-水(7∶2∶1)下层洗脱，薄层层析检查，合并相同组分后，用50％乙醇重结晶。该方法采用剧毒的氯仿脱脂，硅胶柱层析分离产量小、生产周期长、成本高，无法适应工业化生产需要。公开号为CN101033245A的中国专利文献中报道有对具栖冬青苷(即长梗冬青苷)的提取方法，采用的是将救必应用乙醇提取，提取物加水，离心，得沉淀物和上清液；沉淀物加50-95％乙醇回流提取，滤过，滤液浓缩，放置，滤过，沉淀物干燥，得一部分总皂苷，总皂苷用乙醇结晶，得一部分具栖冬青苷；上清液浓缩，离心，沉淀物用适量水洗，干燥后用乙醇结晶，又制得另一部分具栖冬青苷；两次制得的具栖冬青苷合并，用乙醇多次重结晶，得具栖冬青苷纯品。该方法工艺简单、得率低、专属性差，实际生产过程中难以得到高纯度的具栖冬青苷。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种以四季青为原料制备高纯度长梗冬青苷的方法。

本发明以四季青为原料制备高纯度长梗冬青苷的方法，包括提取、富集和纯化步骤，所述的提取是将四季青原料用水或/和有机溶剂回流提取、分离得到提取液，浓缩后得到浸膏：所述的富集是浸膏用大孔树脂富集，上柱后用50-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，脱溶后得到四季青总皂苷；所述的纯化是四季青总皂苷用氧化铝柱色谱分离纯化，70-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩后调节至碱性后，经水饱和正丁醇萃取，然后对除去正丁醇后的萃取液用乙醚沉淀，分离出沉淀物，加入无水乙醇重结晶，干燥即得长梗冬青苷。

所述提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的两种混合溶液进行提取，提取1-3小时，液料比为10∶1至3∶1，提取次数为2-4次。

所述大孔树脂选用D101、X-5、HP-20、DM-301中的一种，吸附后，先用10-30％的含水乙醇洗涤树脂至洗液无色，再用50-80％乙醇解吸附洗脱，收集洗脱液。

所述收集氧化铝柱层析洗脱液的量为4-6倍柱体积。

所述氧化铝柱层析后用氨水调pH至9.5-12.5。

本方法首先采用含水有机溶剂提取四季青皂苷，可以获得较高的四季青皂苷转移率；通过大孔树脂吸附，使长梗冬青苷得到高效富集；通过对洗脱液碱处理、水饱和正丁醇萃取和沉淀处理，使大量酚酸类成分被去除，有效保证了长梗冬青苷的纯度和药用安全性。

具体实施方式：

实施例1：

将四季青叶粉碎，取500g投入提取罐中，加入5L60℃以上的热水回流提取3小时，过滤，滤渣再加入4L60℃以上的热水回流提取1.5小时，过滤，合并滤液，通过D101型大孔树脂柱，先用20％乙醇溶液洗涤树脂至洗液无色，再用4倍柱体积的50％乙醇解吸附洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇得到浓缩液，水饱和正丁醇溶解，加50g100-150目中性氧化铝拌样烘干，再和新氧化铝装柱，80％乙醇洗脱，收集4倍柱体积的洗脱液，减压回收乙醇，用氨水调节pH至10.0，用水饱和的正丁醇萃取，提取液除去正丁醇后用乙醚进行沉淀，分离沉淀物，加入无水乙醇重结晶，分离结晶、干燥即得长梗冬青苷10.0g，经HPLC-ELSD检测，纯度为92.6％。

实施例2：

将四季青叶粉碎，取1kg投入提取罐中，加入6L70％乙醇回流提取2小时，过滤，滤渣再加入70％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，溶剂加入量依次为4L、3L、3L，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏，将浸膏通过HP-20型大孔树脂柱，先用30％乙醇溶液洗涤树脂至洗液无色，再用5倍柱体积的60％乙醇解吸附洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇得到浓缩液，水饱和正丁醇溶解，加100g100-150目中性氧化铝拌样烘干，再和新氧化铝装柱，75％乙醇洗脱，收集5倍柱体积的洗脱液，减压回收乙醇，用氨水调节pH至12.0，用水饱和的正丁醇萃取，提取液除去正丁醇后用乙醚进行沉淀，分离沉淀物，加入无水乙醇重结晶，分离结晶、干燥即得长梗冬青苷19.3g，经HPLC-ELSD检测，纯度为93.0％。

实施例3：

将四季青叶粉碎，取20kg投入提取罐中，加入140L80％甲醇回流提取2小时，过滤，滤渣再加入80L80％甲醇回流提取1小时，过滤，滤渣再加入60L80％甲醇回流提取1小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏，将浸膏通过X-5型大孔树脂柱，先用10％乙醇溶液洗涤树脂至洗液无色，再用3倍柱体积的80％乙醇解吸附洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇得到浓缩液，水饱和正丁醇溶解，加200g100-150目中性氧化铝拌样烘干，再和新氧化铝装柱，90％乙醇洗脱，收集4倍柱体积的洗脱液，减压回收乙醇，用氨水调节pH至11.0，用水饱和的正丁醇萃取，提取液除去正丁醇后用乙醚进行沉淀，分离沉淀物，加入无水乙醇重结晶，分离结晶、干燥即得长梗冬青苷382.1g，经HPLC-ELSD检测，纯度为92.3％。

实施例4：

将四季青叶粉碎，取50kg投入提取罐中，加入250L65％乙醇回流提取3小时，过滤，滤渣再加入150L65％乙醇回流提取1.5小时，过滤，滤渣再加入150L65％乙醇回流提取1.5小时，过滤，合并滤液，减压浓缩得浸膏，将浸膏通过DM-301型大孔树脂柱，先用20％乙醇溶液洗涤树脂至洗液无色，再用6倍柱体积的50％乙醇解吸附洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇得到浓缩液，水饱和正丁醇溶解，加500g100-150目中性氧化铝拌样烘干，再和新氧化铝装柱，70％乙醇洗脱，收集6倍柱体积的洗脱液，减压回收乙醇，用氨水调节pH至12.5，用水饱和的正丁醇萃取，提取液除去正丁醇后用乙醚进行沉淀，分离沉淀物，加入无水乙醇重结晶，分离结晶、干燥即得长梗冬青苷954.3g，经HPLC-ELSD检测，纯度为94.2％。

Claims (5)

1.一种以四季青为原料制备高纯度长梗冬青苷的方法，包括提取、富集和纯化步聚，所述的提取是将四季青原料用水或/和有机溶剂回流提取、分离得到提取液，浓缩后得到浸膏；所述的富集是浸膏用大孔树脂富集，上柱后用50-80％乙醇洗脱，收集洗脱液，脱溶后得到四季青总皂苷；所述的纯化是四季青总皂苷用氧化铝柱色谱分离纯化，70-90％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液浓缩后调节至碱性后，经水饱和正丁醇萃取，然后对除去正丁醇后的萃取液用乙醚沉淀，分离出沉淀物，加入无水乙醇重结晶，干燥即得长梗冬青苷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取溶剂为水、甲醇和乙醇中的两种混合溶液进行提取，提取1-3小时，液料比为10∶1至3∶1，提取次数为2-4次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述大孔树脂选用D101、X-5、HP-20、M-301中的一种，吸附后，先用1030％的含水乙醇洗涤树脂至洗液无色，再用50-80％乙醇解吸附洗脱，收集洗脱液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述收集氧化铝柱层析洗脱液的量为4-6倍柱体积。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述氧化铝柱层析后用氨水调pH至9.5-12.5。