CN102614268B

CN102614268B - 一种治疗食管癌的中药

Info

Publication number: CN102614268B
Application number: CN 201210131821
Authority: CN
Inventors: 陈玉龙; 马俊华; 刘学俊; 尹素改; 吴耀松
Original assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Current assignee: Henan University of Traditional Chinese Medicine HUTCM
Priority date: 2012-04-28
Filing date: 2012-04-28
Publication date: 2013-08-07
Anticipated expiration: 2032-04-28
Also published as: CN102614268A

Abstract

本发明涉及治疗食管癌的中药，可有效解决临床上治疗食管癌效果不佳，食管癌患者死亡率高的问题，其解决的技术方案是，由重量计的：旋覆花7-10份、当归4-7份、黄连3-6份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为98-75%的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥或低温负压干燥成固态，粉碎即可，制成的中药占生药的重量比为：4.5-6.5%，本发明组方小，费用低，疗效确切，纯中药制剂，安全便捷，是治疗食管癌药物上的创新。

Description

一种治疗食管癌的中药

一、技术领域

本发明涉及医药，特别是一种治疗食管癌的中药。

二、背景技术

食管癌是常见的恶性肿瘤之一，我国每年约有25万新诊断的食管癌病例，占全世界食管癌病例数的一半，并以河南、河北、陕西为食管癌发病率最高，特别是河南省林州一直为世界所关注，林州35-64岁男性发病率高达478.87/10万，临床上治疗食管癌效果不佳，五年生存率不到15％。食管癌属于中医“噎嗝”范畴，对它认识具有悠久的历史和丰富的临床经验，临床上辨证治疗，合用放、化疗、手术，或单独应用中药，起到增效、减毒、改善生存质量、延长生存期等多种效应，进一步研究发现，部分中药能防治化学药物致癌、抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡、提高机体免疫力等，但是，目前临床上中医治疗食管癌多为辨证治疗，缺乏专用于治疗食管癌的新中药，因此，加强针对食管癌的中药研究开发，对于提高临床防治水平和能力，减少食管癌患者死亡率具有重要意义。

三、发明内容

针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种治疗食管癌的中药，可有效解决临床上治疗食管癌效果不佳，食管癌患者死亡率高的问题。

本发明解决的技术方案是：该中药由重量计的：旋覆花7-10份、当归4-7份、黄连3-6份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为98-75％的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥或低温负压干燥成固态，粉碎即可，制成的中药占生药的重量比为：4.5-6.5％(冷冻干燥或低温负压干燥均为常规方法，现有技术，不再多述)。

产品特点：1.组方小，费用低；2.疗效确切；3.纯中药制剂；4.安全便捷；5.符合中医药组方理论。

中医认为食管癌多由忧思郁怒、饮食酒伤、年老体虚、它病转化等多种因素所引起，初起之时，气滞、痰阻、血瘀等邪气阻滞于食管，阻塞食管，使食管狭窄；病邪日久不祛，耗伤津血，脏腑失养，食管干涩，则饮食难下。病机包括气郁、痰阻、血瘀、气血津亏等，其中痰血互阻、毒邪郁滞最为常见，也是导致食管癌不断发展的主要机理。

本发明中药中旋覆花味苦、辛、咸，性微温，归肺、胃经，具有降气止呕，消痰散结，通利血脉之功效；《神农本草经》认为它主治“结气，胁下满，惊悸；除水，去五脏间寒热，补中，下气”，《本草发明》则说：“旋复花，消痰导饮、散结利气之味”；《本草纲目》还认为“旋复所治诸病，其功只在行水、下气、通血脉尔”；《医学人门》直接说它可“逐水，消痰，止咽噎”，由此旋覆花可以通过它的降气止呕、化痰散结、活血通脉的功效起到治疗食管癌的作用，在本发明中药中作为君药；当归，性温，味甘、辛，归肝、心、脾经，具有补血活血，调经止痛、润肠通便、下气止咳呕之作用。《神农本草经》认为它“味甘，温，主咳逆上气”；《药性论》说它可“止呕逆、虚劳寒热，破宿血”；《本草正》则说：“当归，其味甘而重，故专能补血，其气轻而辛，故又能行血，补中有动，行中有补，诚血中之气药，亦血中之圣药也”；因此，当归和君药旋复花配合既可化痰活血起到散结消瘤的作用、又可降气止呕，同时又可以养血以补正气，缓解食管癌患者津枯血燥所致之便秘，在本发明中药中作为臣；黄连，味苦，性寒，归心、脾、胃、肝、胆、大肠经，具有泻火解毒、清热燥湿之功能，《神农本草经》认为它“味苦，寒，主治热气”，在本发明中，取其泻火解毒已消除痰瘀郁久所产生痰瘀毒、热毒，同时又以寒凉之性，制约旋复花、当归之温，使本发明中药寒热阴阳平和，为佐使药，三药配合，共凑降气化痰活瘀，清热解毒散结，抑制肿瘤生长之功能。

四、附图说明

图1为本发明中药对Eca9706细胞生长的抑制作用时效关系(％)图。

五、具体实施方式：

以下结合实际情况对本发明的具体实施方式作详细说明

实施例1

本发明由重量计的：旋覆花7份、当归4份、黄连3份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为98％的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥成固态，粉碎。

实施例2

本发明由重量计的：旋覆花8份、当归5份、黄连4份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为95％的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥成固态，粉碎。

实施例3

本发明由重量计的：旋覆花9份、当归6份、黄连5份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为85％的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法低温负压干燥成固态，粉碎。

实施例4

本发明由重量计的：旋覆花10份、当归7份、黄连6份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为75％的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法低温负压干燥成固态，粉碎。

本发明中药是基于食管癌病机，在整理和筛选古今治疗食管癌(噎膈)验方及实验室研究基础上此研发而成，具有降气化痰活瘀，清热解毒散结，抑瘤生长之功能，主治：食管癌，中医辨证为痰气交阻、瘀血阻滞证，痰瘀互阻证兼热毒盛证等，本发明中药体内、外实验具有良好的抗食管癌作用，且毒性小，相关资料如下：

抗食管癌中药抑制肿瘤生长及急毒实验

1.1材料

1.1.1药物

旋覆花，菊科植物欧亚旋覆花Inula britannica L.的干燥头状花序；黄连，毛茛科植物黄连Coptischinensis，Franch的根茎；当归，伞形科当归Angelica sinensis Diel的根；购于河南中医学院三附院，经河南中医学院中药鉴定专家鉴定为真品.

1.1.2细胞株：人食管癌细胞株Eca9706购于中国医学科学院细胞中心。

1.1.3动物：BALB/C(nu/nu)雌性裸小鼠，4-6周龄，由中科院上海实验动物中心/上海斯莱克实验动物有限公司提供。

1.1.4主要试剂：DMEM高糖培养基(GIBCO)、胎牛血清(Hyclone)MTT(Sigma)

1.1.5主要仪器设备：Heraeus细胞培养箱(德国Kendro)；倒置显微镜(ZESS)，紫外分光光度计(BioMate)，SG-603生物安全柜(Bake)，ELx800型酶标仪(BIO-TEK)，游标卡尺(上海量具刀刃厂)

1.2方法：

1.2.1药物提取

中药旋覆花90g、当归60g、黄连50g，加入体积浓度为98-75％的乙醇2000ml，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，用旋转蒸发仪45℃浓缩至100ml，转移至蒸发皿，低温负压干燥，所得提取物置-20℃冰箱保存，备用，计算出制成的中药占生药的重量比为：4.5-6.5％。

1.2.2细胞培养：生长于含10％胎牛血清的DMEM培养液中，置于37℃、5％CO2培养箱，每间隔48h更换一次培养基，试验时，细胞用消化液(含w＝0.02％乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)和w＝0.25％胰蛋白酶以1∶1比例配制)进行消化，并接种于96孔板中或Φ100培养皿中。

1.2.3裸小鼠饲养：SPF级动物房，饲养的房间每2次/周紫外线照射，出入人员更换洁净工作衣，裸鼠食物、垫料进行湿热消毒后烘干使用，饮用水加入盐酸使PH在3-4之间，定期喂养消毒后的黄豆，一切严格无菌操作。

1.2.4MTT法测定细胞生长抑制作用量效关系：

以1×10⁴细胞/孔接种96孔平面培养板，于37℃，5％CO₂，饱和湿度的CO₂培养箱培养24小时。设对照组、中药组，每组3个复孔，药物剂量为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml，继续培养48小时，去除培养上清，每孔加入0.5mg/ml的MTT 100ml，继续培养2小时，小心吸去上清，并加入100μl DMSO溶解紫色沉淀，用酶标仪在波长为570nm(/630nm)，测定OD值，按公式：

抑制率(％)＝(1-实验孔平均A570/630值/对照孔平均A570/630值)×100％

1.2.5MTT法测定细胞抑制作用实效关系

选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞，用胰酶消化后，调至2.5×10⁴个/ml的细胞悬液，接种在96孔培养板中，200μl/孔，37℃，5％CO₂，培养24h，分别加入高(75％抑制率)、中(50％抑制率)、低剂量(25％抑制率)中药122μg/ml、77μg/ml、33μg/ml，每组6个复孔，分别于24h、36h、48h、72h检测，方法如上。

1.2.6人食管癌细胞株Eca9706裸鼠移植瘤模型建立

体外复苏、培养人食管癌细胞株Eca9706细胞，在细胞的指数生长期收集细胞，1000转/分离心，无血清DMEM培养基洗涤2次，计数，用不含血清的DMEM培养基，稀释至稀释至1.5×10⁶细胞/ml，以0.2ml/鼠，右腋下皮下接种。

30只裸小鼠，随机取6只为空白组，其余24只造模，造模裸小鼠随机分为4组，每组6只。4组分别为：模型组、中药高剂量组、中剂量组、低剂量两组，根据生药和成品的比率、成人一天所用生药量及体外半数抑制率确定动物用药剂量，所有处理自造模后第二天开始：高剂量组应用668mg/kg，中剂量组334mg/kg，低剂量组167mg/kg。每日一次，每只0.2ml，自肿瘤长出之日起，每10天称体重，测量肿瘤大小，以上处理连续进行40天后，脱颈椎处死裸小鼠，剥离肿块。

肿瘤大小和药物抑制率：自肿瘤肉眼可见之日起，每10天用游标卡尺测量肿瘤的最长径L(mm)和垂直方向的最大横径W(mm)，按李氏法：V(mm³)＝L×W²/2计算肿瘤体积，计算抑瘤率＝(1-给药组平均瘤体积/对照组平均瘤体积)×100％。

1.2.7急性毒性实验

健康昆明种小鼠，雌雄各半，体重20±0.5g，郑州大学动物中心提供。

1.2.7.1半数致死量(LD50)的测定：取小鼠50只，禁食12h，禁水2h，随机分为5(A B C DE)组，每组10只，灌服剂量分别为5196mg/kg(A)、3111mg/kg(B)、1863mg/kg(C)、1116mg/kg(D)、668mg/kg(E)，每只鼠每次灌胃0.4ml，分别相当临床人日用量(折合成生药)的233、140、84、50、30倍。

1.2.7.2最大给药量测定：动物数共20只，禁食12小时后给药，一次给药无法测出LD50，一日内连续两次给小白鼠灌胃给药5196mg/kg，每隔6小时一次，药后连续观察14天。

1.2.8统计方法计量数据应用软件spss13.0进行单因素方差分析，并应用该软件进行相关分析和曲线拟合。

2.实验结果

2.1中药对人食管癌细胞株Eca9706生长和形态的影响

显微镜下观察，对照组细胞贴壁生长，细胞界限清楚，核分裂相明显，有伪足伸出；黄连组细胞呈条状，细胞轮廓非常明显，胞质极度粗糙，内充满多量颗粒状物质。

2.2中药对肿瘤细胞生长的影响

中药可抑制人食管癌细胞株Eca9706细胞的生长，并且随药物浓度的增加，对细胞生长抑制呈现剂量-效应依赖关系(见表1)。

表1中药对Eca9706细胞生长的抑制作用

应用概率法置信区间为95％计算半数抑制量(IC₅₀)：76.84μg/ml，最高值为110.25，最低值为52.95。

2.3中药对Eca9706细胞生长的抑制作用时效关系

中药高、中、低剂量组可抑制人食管癌细胞株Eca9706细胞的生长，并且随时间而增加，对细胞生长抑制呈现时间-效应依赖关系，高剂量效果最好，中剂量效果次之(见图1)。

2.4中药对Eca9706移植瘤荷瘤裸鼠一般情况的影响

整个实验过程各组动物都未出现死亡。模型组皮肤颜色枯槁无光泽，消瘦，精神委靡，弓背，余各组一般情况无太大差别，动物活动灵敏度由高到低依次为：中剂量组＞高剂量组＞低剂量＞模型组。

2.5中药对Eca9706移植瘤荷瘤裸鼠体重的影响

20天之前各组小鼠体重接近，之后模型组体重随着时间增加而逐渐减轻，而各用药组缓慢增加，结果运用重复测量方差分析，所取各时间点因素交互作用有统计学差异(P＝0.0012)，除低剂量组外的各组与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，高剂量和空白组和低剂量比有统计学意义(P＜0.05)，其他各组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)，(见表2)。

表2中药对Eca9706移植瘤荷瘤裸鼠体重的影响

注：和对照组比较#p＜0.05，*p＞0.05；和空白组比较⊙p＞0.05，☆p＜0.05

2.6中药对Eca9706移植瘤增殖的抑制效果

自接种至成瘤大约需要8天时间，瘤体在接种初期生长缓慢，接种32天左右时，瘤体快速生长，中药组高、中、低剂量组都有一定抑制肿瘤生长的作用，且具有一定剂量依赖性(见表3)。

表3观察第20和40天的肿瘤体积和药物抑制情况(％)

注：20天和对照组比较#p＜0.05，*p＞0.05；和低剂量组比较⊙p＞0.05，☆p＜0.05。40天和对照组比较

和低剂量组比较

p＜0.05。

2.7中药急性毒性实验结果

半数致死量(LD50)的测定：观察七天。结果动物无一死亡，没有引出半数致死量。最大给药量测定：结果动物无一死亡，在第2次给药后，动物活动明显减少。但第2天后，动物就恢复正常活动。观察期间，除给药当天动物停止进食和有活动改变外，第2天起，动物恢复正常进食，活动也无异，体重有增长，毛色光亮，皮毛无疏松，口、眼、鼻、耳无异常分泌物，大小便正常。七天后处死动物，肉眼剖检心、肝、脾、肺、肾、胃肠等重要脏器，结果均未见异常改变。

3.结论

3.1抗食管癌中药体外实验表现有很好的抗食管癌效应，并呈剂量和时间依赖性；

3.2抗食管癌中药能够很好抑制动物食管癌细胞移植瘤生长，呈剂量依赖性，对减弱肿瘤对动物的损伤，在体重和形态上对食管癌移植瘤动物有所改善；

3.3抗食管癌中药半数致死量未能测出；

3.4抗食管癌中药一日两次给药的最大给药量为5196mg/kg体重，按生药量计，相当于104g/kg体重，为临床用量的233倍，试验连续观察14天，动物无一死亡；

3.5抗食管癌中药有良好的抗食管癌作用，且毒性小，是治疗食管癌药物上的创新，有显著的临床意义。

Claims

1.一种治疗食管癌的中药，其特征在于，由重量计的：旋覆花7-10份、当归4-7份、黄连3-6份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为98-75%的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥或低温负压干燥成固态，粉碎。

2.根据权利要求1所述的治疗食管癌的中药，其特征在于，由重量计的：旋覆花7份、当归4份、黄连3份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为98%的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥成固态，粉碎。

3.根据权利要求1所述的治疗食管癌的中药，其特征在于，由重量计的：旋覆花8份、当归5份、黄连4份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为95%的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法冷冻干燥成固态，粉碎。

4.根据权利要求1所述的治疗食管癌的中药，其特征在于，由重量计的：旋覆花9份、当归6份、黄连5份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为85%的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法低温负压干燥成固态，粉碎。

5.根据权利要求1所述的治疗食管癌的中药，其特征在于，由重量计的：旋覆花10份、当归7份、黄连6份制成，将旋覆花、当归、黄连粉碎，加入旋覆花、当归、黄连重量的10倍量体积浓度为75%的乙醇，室温下，时时振摇浸泡7天，过滤，得滤液，于45℃下旋转蒸发去除乙醇，再常规方法低温负压干燥成固态，粉碎。