CN102584992A - 大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用 - Google Patents

大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN102584992A
CN102584992A CN2011100016504A CN201110001650A CN102584992A CN 102584992 A CN102584992 A CN 102584992A CN 2011100016504 A CN2011100016504 A CN 2011100016504A CN 201110001650 A CN201110001650 A CN 201110001650A CN 102584992 A CN102584992 A CN 102584992A
Authority
CN
China
Prior art keywords
outer membrane
membrane protein
freund
colon bacillus
monoclonal antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2011100016504A
Other languages
English (en)
Other versions
CN102584992B (zh
Inventor
杜金玲
牟巍
赵亚荣
郭书豪
卢会英
王勇鹣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhaofenghua Biotechnology Fuzhou Co ltd
Zhaofenghua Biotechnology Nanjing Co ltd
Beijing Dabeinong Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
FUZHOU DA BEI NONG BIOTECH Co Ltd
Beijing Dabeinong Technology Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by FUZHOU DA BEI NONG BIOTECH Co Ltd, Beijing Dabeinong Technology Group Co Ltd filed Critical FUZHOU DA BEI NONG BIOTECH Co Ltd
Priority to CN201110001650.4A priority Critical patent/CN102584992B/zh
Publication of CN102584992A publication Critical patent/CN102584992A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN102584992B publication Critical patent/CN102584992B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明属于兽医生物技术领域，具体涉及大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明的抗体是以克隆、表达、纯化的禽致病性大肠杆菌 O 78 （AvianpathogenicEscherichiacoliAPECO 78 ）外膜蛋白为抗原免疫 BALB/c 小鼠，采用杂交瘤技术制备而成。该抗体特异性高、敏感性强，为今后通过免疫学方法快速、特异性的检测大肠杆菌感染奠定了实验基础，同时通过实验还证明了本发明的单克隆抗体对同型大肠杆菌感染具有良好的中和活性和保护效率，可用于大肠杆菌病的防治。

Description

大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用，属于生物技术领域。
背景技术
禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌引起，为对养禽业危害最为严重的疫病之一，目前，对大肠杆菌病的预防主要采用疫苗和抗菌药物。但大肠杆菌血清亚型众多，各血清型间的交叉免疫效果不佳，给疫苗和药物的预防带来一定困难。
单克隆抗体是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞产生的针对单一抗原决定簇的抗体，单抗具有较强的病原体特异性，不影响正常组织和细胞，相对比较安全，在细菌和病毒病的诊断和治疗方面都发挥重要作用，也是研究蛋白质结构与功能的重要工具。大肠杆菌的外膜蛋白位于大肠杆菌菌体的表面，具有良好的免疫原性，可加快巨噬细胞对抗原的提呈作用，激活淋巴细胞的增殖反应，刺激机体产生体液免疫和细胞免疫；而且更为重要的是大肠杆菌的外膜蛋白在不同血清型菌株间具有交叉保护作用，能抵抗同源和异源菌株的攻击。在目前一些大肠杆菌病的防治中都具有重要的应用价值。
发明内容
本发明的目的是提供一种大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体，该抗体是以克隆、表达、纯化的禽致病性大肠杆菌O78(Avian pathogenic Escherichia coli APEC O78)外膜蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备而成。本发明的单克隆抗体对同型大肠杆菌感染具有良好的中和活性和保护效率，可用于大肠杆菌的防治；而且该单克隆抗体特异性高、敏感性强的，为今后通过免疫学方法快速、特异性的检测大肠杆菌感染奠定了实验基础。
本发明的另一目的是提供该大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体的制备方法和应用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供一种大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体，其特征在于：以原核表达、纯化的禽致病性大肠杆菌O78(Avian pathogenic Escherichia coli APEC O78)的外膜蛋白作为抗原，加入弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化分别制成弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备单抗，所制备抗体免疫球蛋白类型为IgG2a，其轻链为κ链抗体。
其中，弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原中禽致病性大肠杆菌O78的外膜蛋白与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂体积比均为1∶1。
本发明还提供了该大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体的制备方法，其制备步骤如下：
(1)禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA原核表达及纯化
根据大肠杆菌外膜蛋白基因序列设计特异性引物，PCR扩增禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA，将OMPA先连接到pMD18T上测序，测序鉴定正确的OMPA分别以BamH I、Xhol进行双酶切后克隆到pET-28a(+)上，转化DH5α感受态细胞，通过卡那霉素抗性筛选得到的阳性质粒pET-28a(+)-OMPA再转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过抗性筛选阳性表达菌株，以IPTG诱导目的蛋白表达，并以Ni-NTA His.Bind Resin纯化柱纯化禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA，最后调整浓度至50μg/mL；
(2)免疫性抗原的制备
纯化后的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA分别加入弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化制成弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原；
(3)BALB/c小鼠免疫
8周龄BALB/c小鼠腹腔注射制备的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白弗氏完全佐剂免疫原0.5mL/只；免疫后7天和14天后分别以弗氏不完全佐剂免疫原以相同的方法和剂量进行加强免疫；
(4)单抗制备
利用PEG法，进行细胞融合，融合7～10天后，对有生长的杂交瘤细胞进行阳性筛选，以全菌包被，应用间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，获得稳定表达禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白的杂交瘤细胞株，并对此株单抗进行效价测定、亚类鉴定、稳定性测定及特异性与中和活性测定。
其中，禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白的引物序列如下：
上游引物：ATTGGATCCGCTCCGAAAGATAACA
下游引物：TTCTCGAGTTAAGCCTGCGGCTGAGTTA
本发明的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体可用于检测大肠杆菌。
本发明的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体还可用于制备防治大肠杆菌病的制剂。
本发明中的禽致病性大肠杆菌O78购自中国兽医药品监察所，其外膜蛋白有一个开放阅读框(ORF)，长1041bp，编码346个氨基酸，前21个为信号肽，成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成，相对分子质量为37KD。本发明中扩增到的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白大小975bp，原核表达的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白分子量为37KD。其中，禽致病性大肠杆菌O78也可以使用任何一株当前中国国内公开的大肠杆菌菌株，不影响本发明的实施。
本发明首次利用杂交瘤技术制备出特异性高、敏感度强的新型抗大肠杆菌外膜蛋白OMPA单克隆抗体，具有广泛的研究和商业使用价值，可以直接鉴定大肠杆菌的血清型，筛选大肠杆菌制苗菌株，用于禽大肠杆菌致病机理的研究，本发明的抗体同时具有良好的中和活性和保护效率，可用于大肠杆菌病的治疗，而且单抗可以用体内或体外方法无限量生产，易于纯化和标准化。
附图说明
图1扩增的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA片段电泳图
图2原核表达质粒pET-28a(+)-OMPA
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白免疫性抗原的制备
(1)外膜蛋白的克隆
根据Genebank中大肠杆菌K12W3110株(登录号AP009048)的OMPA基因序列设计特异性引物，上游引物引入BamH I酶切位点，下游引物引入XholI酶切位点。上游引物为：ATTGGATCCGCTCCGAAAGATAACA，下游引物：TTCTCGAGTTAAGCCTGCGGCTGAGTTA。以禽致病性大肠杆菌O78的基因组为模板PCR扩增外膜蛋白OMPA。将OMPA先连接到pMD18T上测序，测序鉴定正确的OMPA分别以BamH I、Xhol进行双酶切后克隆到pET-28a(+)上，转化DH5α感受态细胞，通过卡那霉素抗性筛选得到的阳性质粒pET-28a(+)-OMPA再转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过抗性筛选阳性表达菌株。
(2)禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白原核表达菌株的诱导表达及纯化
将筛选出的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白原核表达阳性菌液按1∶1000的比例接种加有Kan抗性的LB培养基中，每个菌接种两管，一管用于诱导，另一管用于非诱导对照，同时要接种一管空质粒菌作为对照。37℃过夜培养至OD600nm值约为0.4～0.5时，诱导管和空质粒对照管加入IPTG至终浓度为1mmol/L，非诱导对照不加，最终挑选表达能力高的两个菌，用于大量的蛋白的表达。并按照常规的SDS-Page方法对表达产物进行鉴定。然后以Ni-NTAHis.Bind Resin纯化柱纯化蛋白，经测定纯化后的蛋白浓度为396mg/L。
(3)免疫性抗原的乳化
将外膜蛋白稀释至50μg/mL，分别加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂混合，震荡乳化半小时，分别制成弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原，4℃保存备用。
实施例2禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白单克隆抗体的制备
(1)BALB/c小鼠免疫
8周龄BALB/c小鼠腹腔注射制备的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白弗氏完全佐剂免疫原0.5mL/只；免疫后7d和14d后分别以弗氏不完全佐剂免疫原同法同剂量进行加强免疫。
(2)杂交瘤细胞融合
最后一次加强免疫后的第三天取免疫小鼠的脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按细胞数量4∶1混合，利用经典的PEG法，进行细胞融合。
(3)杂交瘤细胞的筛选
融合后用HAT作为选择性培养基，同时加入饲养细胞，分装在96孔细胞培养板，置于37℃，5％CO2培养箱内培养，7～10天进行观察，对有生长的杂交瘤细胞进行阳性筛选，以全菌包被，应用间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，同时用SP2/0细胞培养上清液作阴性对照。对于初步筛选的阳性菌株采用稀释法进行克隆化和再克隆，反复筛选最终获得了一株稳定表达禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白的杂交瘤细胞株8A4。
(4)单抗腹水的制备
分别将经降植烷处理的BALB/c小鼠，腹腔内注射鉴定后再克隆的杂交瘤细胞，注射量为5×105个细胞，约经过一周，待小鼠腹部膨大后抽取腹水，离心后取上清以亲核层析法纯化单抗。
(5)单抗腹水效价的测定
以禽致病性大肠杆菌O78全菌包被，采用间接ELISA测定单抗腹水效价为16000。
(6)免疫球蛋白亚型鉴定
采用Southern biotech公司单克隆抗体亚型鉴定试剂盒进行抗体亚型鉴定，最终确定禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白特异性单克隆抗体8A4免疫球蛋白类型为IgG2a，其轻链均为κ链抗体。
(7)单抗稳定性鉴定
将所制备的单抗菌株8A4连续培养3个月或液氮冻存复苏后，仍能稳定分泌McAb。
实施例38A4株单抗特异性试验
以禽致病性大肠杆菌O78、O1、O2和沙门氏菌标准毒株分别与筛选到的单克隆抗体8A4株做玻板凝集试验，用接种环沾取少量平板上的选择禽致病性大肠杆菌O78、O1、O2和沙门氏菌菌落，于生理盐水中混匀，然后分别滴加到事先的标记好的洁净载玻片上，并同时滴加单克隆抗体8A4株，设置禽致病性大肠杆菌O78、O1、O2和沙门氏菌与生理盐水及单抗与生理盐的对照组。结果见表1，结果表明本单克隆抗体具有良好的特异性，只与禽致病性大肠杆菌O78反应呈阳性，与禽致病性大肠杆菌O1、O2型均呈阴性，与沙门氏菌也不存在交叉反应。
表1单抗8A4株特异性鉴定
Figure BDA0000042852830000051
实施例48A4株单抗的中和活性试验
特异性单克隆抗体8A4株腹水与禽致病性大肠杆菌O78种毒混合，颈部皮下注射5-10日龄的雏鸡20只。另取20只雏鸡单独注射禽致病性大肠杆菌O78种毒，结果见表2。结果表明：单独注射禽致病性大肠杆菌O78的鸡发病率100％，而单抗与禽致病性大肠杆菌O78同时注射组的鸡仅有个别死亡，对雏鸡的保护率达80％。说明此单抗对于同型大肠杆菌感染具有良好的中和活性和保护效率。
表2单抗8A4株特异性鉴定
  免疫组   雏鸭数量   发病数   死亡数   保护率(％)
  8A4+O78   20   4   2   80
  O78   20   20   20   0
Figure IDA0000042852880000011

Claims (6)

1.一种大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体，其特征在于：以原核表达、纯化的禽致病性大肠杆菌O78(Avian pathogenic Escherichia coli APEC O78)的外膜蛋白作为抗原，加入弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化分别制成弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原，免疫BALB/c小鼠，采用杂交瘤技术制备单抗，所制备抗体免疫球蛋白类型为IgG2a，其轻链为κ链抗体。
2.如权利要求1所述的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体，其特征在于：弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原中禽致病性大肠杆菌O78的外膜蛋白与弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂体积比均为1∶1。
3.如权利要求1-2任一项所述的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体的制备方法，其制备步骤如下：
(1)禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA原核表达及纯化
根据大肠杆菌外膜蛋白基因序列设计特异性引物，PCR扩增禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA，将OMPA先连接到pMD18T上测序，测序鉴定正确的OMPA分别以BamH I、Xhol进行双酶切后克隆到pET-28a(+)上，转化DH5α感受态细胞，通过卡那霉素抗性筛选得到的阳性质粒pET-28a(+)-OMPA再转化大肠杆菌BL21(DE3)，通过抗性筛选阳性表达菌株，以IPTG诱导目的蛋白表达，并以Ni-NTA His.Bind Resin纯化柱纯化禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA，最后调整浓度至50μg/mL；
(2)免疫性抗原的制备
纯化后的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白OMPA分别加入弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂乳化制成弗氏完全佐剂免疫原和弗氏不完全佐剂免疫原；
(3)BALB/c小鼠免疫
8周龄BALB/c小鼠腹腔注射制备的禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白弗氏完全佐剂免疫原0.5mL/只；免疫后7天和14天后分别以弗氏不完全佐剂免疫原以相同的方法和剂量进行加强免疫；
(4)单抗制备
利用PEG法，进行细胞融合，融合7～10天后，对有生长的杂交瘤细胞进行阳性筛选，以全菌包被，应用间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞，获得禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白的杂交瘤细胞株，并对此株单抗进行效价测定、亚类鉴定、稳定性测定及特异性与中和活性测定。
4.如权利要求3所述的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体的制备方法，其特征在于：禽致病性大肠杆菌O78外膜蛋白的引物序列如下：
上游引物：ATTGGATCCGCTCCGAAAGATAACA
下游引物：TTCTCGAGTTAAGCCTGCGGCTGAGTTA。
5.如权利要求1-2任一项所述的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体在检测大肠杆菌中的应用。
6.如权利要求1-2任一项所述的大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体在制备防治大肠杆菌病的制剂中的应用。
CN201110001650.4A 2011-01-06 2011-01-06 大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用 Active CN102584992B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110001650.4A CN102584992B (zh) 2011-01-06 2011-01-06 大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110001650.4A CN102584992B (zh) 2011-01-06 2011-01-06 大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN102584992A true CN102584992A (zh) 2012-07-18
CN102584992B CN102584992B (zh) 2015-11-18

Family

ID=46474302

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110001650.4A Active CN102584992B (zh) 2011-01-06 2011-01-06 大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102584992B (zh)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102286106A (zh) * 2011-07-11 2011-12-21 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 夹心外膜蛋白展示载体及应用其制备的大肠埃希菌疫苗
CN102977210A (zh) * 2012-11-16 2013-03-20 福建中医药大学 石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒
CN103235140A (zh) * 2013-04-19 2013-08-07 江苏省疾病预防控制中心 一种检测ⅱ型志贺毒素的elisa试剂盒
CN103837684A (zh) * 2014-03-27 2014-06-04 扬州大学 快速检测沙门氏菌的抗体试剂及检测方法
WO2014183232A1 (zh) * 2013-05-16 2014-11-20 河北科星药业有限公司 预防大肠杆菌病的基因tsh-Ser、其编码的蛋白质及其制备方法
CN105717297A (zh) * 2016-03-03 2016-06-29 河北科星药业有限公司 禽大肠杆菌病Tshs抗体夹心间接ELISA检测试剂盒、检测方法及应用
CN113897340A (zh) * 2021-11-22 2022-01-07 江苏农牧科技职业学院 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体细胞株的制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101224300A (zh) * 2007-04-11 2008-07-23 中山大学 大肠杆菌OmpA作为动物免疫调节剂的应用
US20100087373A1 (en) * 2008-03-11 2010-04-08 Taipei Medical University Detection and therapy of bacterial infection caused by enterobacteriaceae

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101224300A (zh) * 2007-04-11 2008-07-23 中山大学 大肠杆菌OmpA作为动物免疫调节剂的应用
US20100087373A1 (en) * 2008-03-11 2010-04-08 Taipei Medical University Detection and therapy of bacterial infection caused by enterobacteriaceae

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MUSSO,R ET AL: "AP009048.1", 《GENBANK》 *
呼锐: "大肠杆菌OmpA蛋白的表达和免疫保护作用", 《中国优秀硕士学位论文》 *
戴鼎震等: "鸡大肠杆菌(O78) 1 型菌毛单克隆抗体研制及对分离菌株的检测", 《金陵科技学院学报》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102286106A (zh) * 2011-07-11 2011-12-21 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 夹心外膜蛋白展示载体及应用其制备的大肠埃希菌疫苗
CN102977210A (zh) * 2012-11-16 2013-03-20 福建中医药大学 石杉碱甲的单克隆抗体制备方法及其酶联免疫检测试剂盒
CN103235140A (zh) * 2013-04-19 2013-08-07 江苏省疾病预防控制中心 一种检测ⅱ型志贺毒素的elisa试剂盒
CN103235140B (zh) * 2013-04-19 2015-05-27 江苏省疾病预防控制中心 一种检测ⅱ型志贺毒素的elisa试剂盒
WO2014183232A1 (zh) * 2013-05-16 2014-11-20 河北科星药业有限公司 预防大肠杆菌病的基因tsh-Ser、其编码的蛋白质及其制备方法
CN103837684A (zh) * 2014-03-27 2014-06-04 扬州大学 快速检测沙门氏菌的抗体试剂及检测方法
CN105717297A (zh) * 2016-03-03 2016-06-29 河北科星药业有限公司 禽大肠杆菌病Tshs抗体夹心间接ELISA检测试剂盒、检测方法及应用
CN113897340A (zh) * 2021-11-22 2022-01-07 江苏农牧科技职业学院 鸭疫里默氏杆菌单克隆抗体细胞株的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN102584992B (zh) 2015-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106190903B (zh) 鸭疫里氏杆菌Cas9基因缺失突变株及其应用
CN102584992A (zh) 大肠杆菌外膜蛋白单克隆抗体及其制备方法和应用
CN101955545B (zh) 一种多靶点重组基因及其蛋白在防治幽门螺旋杆菌感染中的应用
CN101863963B (zh) 一种幽门螺杆菌抗原表位多肽及其应用
CN101863964A (zh) 一种幽门螺杆菌尿素酶b抗原表位多肽及其应用
CN102139103B (zh) 半滑舌鳎美人鱼发光杆菌疫苗的制备与使用方法
CN103421832B (zh) 包含氟苯尼考耐药基因蛋白的卵黄抗体及制备与应用
CN102586311A (zh) 肠出血性大肠杆菌O157:H7多价fliC-hcpA-tir-eae重组菌及疫苗
CN102558306B (zh) 旋毛虫副肌球蛋白b细胞抗原表位、其组合物及用途
CN105861521A (zh) 罗非鱼源无乳链球菌重组GroEL蛋白疫苗的制备方法及其应用
CN102199611B (zh) 密码子优化的艰难梭菌外毒素a羧基端基因序列及其核酸疫苗
CN101948546B (zh) 融合蛋白SAmB及其编码基因与应用
JP2022521410A (ja) 最適化されたワクチン組成物およびその製造方法
CN107653231B (zh) 鸭源性冠状病毒弱毒株ibvdcv35及其应用
CN114957479B (zh) 抗H1N1流感病毒双特异性中和抗体Bis-Hu11-1及其应用
RU2017105223A (ru) Аттенуированный штамм вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (ррсс) и его возможное применение в средствах для иммунизации
CN105541976A (zh) 猪圆环病毒2型Cap基因修饰改造重组抗原及其应用
CN101177684B (zh) 羊型布鲁氏杆菌m5菌株核糖体蛋白l7/l12的基因、其编码蛋白及应用
CN111450248B (zh) 一种用于预防和治疗prrsv感染的抗体药物
CN109608541B (zh) 一种抗猪产肠毒素大肠杆菌卵黄抗体及其制备方法
CN107625960B (zh) 一种通用型猪大肠杆菌病疫苗及其制备方法
CN105384800B (zh) 金黄色葡萄球菌taf融合蛋白制备方法及其应用
TWI386223B (zh) Duck hepatitis vaccine and its preparation method
CN101985468B (zh) Sj16重组蛋白及其在制备血吸虫病疫苗、诊断试剂、治疗药物中的应用
CN102747024A (zh) 肠出血性大肠杆菌O157:H7多价fliC-hcpA-tir-eae重组菌及疫苗

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: 100080 Beijing City, Haidian District Zhongguancun street, No. 27 Zhongguancun building 14 DaBeiNong group

Co-patentee after: Zhaofenghua Biotechnology (Fuzhou) Co.,Ltd.

Patentee after: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.

Address before: 100080 Beijing City, Haidian District Zhongguancun street, No. 27 Zhongguancun building 14 DaBeiNong group

Co-patentee before: FUZHOU DA BEI NONG BIOTECH Co.,Ltd.

Patentee before: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20200628

Address after: 211102, 999 Ting Dong Road, Jiangning economic and Technological Development Zone, Nanjing, Jiangsu

Co-patentee after: Zhaofenghua Biotechnology (Fuzhou) Co.,Ltd.

Patentee after: Zhaofenghua Biotechnology (Nanjing) Co.,Ltd.

Address before: 100080 Beijing City, Haidian District Zhongguancun street, No. 27 Zhongguancun building 14 DaBeiNong group

Co-patentee before: Zhaofenghua Biotechnology (Fuzhou) Co.,Ltd.

Patentee before: BEIJING DABEINONG TECHNOLOGY GROUP Co.,Ltd.