CN102579347A - 一种注射用胸腺法新脂质体制剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种注射用胸腺法新脂质体制剂及其制法。该注射用脂质体制剂由特定重量配比的胸腺法新、胆固醇、蛋黄卵磷脂、磷脂酰肌醇、蔗糖酯和药学上可接受的载体制成，所述载体优选为甘露醇和海藻糖。本发明的脂质体注射剂具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率和稳定性；本发明提高了胸腺法新的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

Description

一种注射用胸腺法新脂质体制剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体注射剂及其制法，具体涉及一种注射用胸腺法新脂质体制剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

胸腺法新(Thymosinα1)，也称之为胸腺肽α1、胸腺素α1，其多肽序列为：N-Acceyl-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-OH，分子式为：C₁₂₉H₂₁₅N₃₃O₃₅，分子量为：3108.28，是胸腺素主要的生物活性成分，为体内重要的免疫调节物质。研究表明，胸腺法新促进骨髓干细胞发育分化为原淋巴细胞及前淋巴细胞；诱导T淋巴细胞分化与成熟，使已成熟的T细胞进一步分化为几个不同的亚群，如杀伤细胞、记忆细胞、效应细胞、辅导T淋巴细胞等，并产生各种可溶性介质；增强淋巴细胞对有丝分裂素的反应，并可增加淋巴组织的蛋白质和核酸的合成；增加r-IFN、a-IFN、IL-2、IL-3和淋巴毒素的生成，增强抗病毒和抗肿瘤的免疫反应；抑制自身免疫反应；恢复抑制性T细胞的功能。目前胸腺法新已被广泛应用于临床，治疗多种疾病，如用于慢性乙型肝炎的治疗；用于丙型肝炎、肝细胞癌、恶性黑色素瘤的治疗；用于治疗感染性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤等的治疗。

注射用胸腺法新是由SciClone Pharmaceuticals International公司开发的用于治疗乙肝和提高免疫力的药物，商品名为ZADAXIN。注射用胸腺法新在2～8℃保存的条件下，进口标准JX19990203和2010年版中国药典规定其有关物质的总量不得超过4％，单个杂质不得超过2％。注射用胸腺法新在生产环节上，需要使用2～8℃的水来配置灌装液才能保证其配液环节不产生大量的有关物质；在流通环节需要冷链运输，才能保证其有关物质不超出标准的规定。

刘锐等人《温度、pH值及稳定剂对胸腺素α1稳定性的影响》(中国药学杂志，2006.第四卷第四期：159～160)公开了温度和pH值是影响胸腺素α1水溶液稳定性的两个重要因素。药物在制备成制剂时注意低温贮藏；在中性和弱酸性的环境中稳定性良好；处在强酸或强碱的条件下，其稳定性差，作为胸腺素α1的稳定剂，质量分数为5％的甘露醇对此肽的保护作用明显优于人血白蛋白、Tween80和PEG4000。该文献未指出甘露醇与其他多元醇联合作为稳定剂的方案和试验数据。同时，文献数据显示，在采用文献所述的方案30天的稳定性考察，胸腺法新(胸腺肽α1)的含量下降较大(有关物质增加)，而胸腺法新制剂的有效期一般为2年，可以预见在有效期内该文献的方案不可能符合2010年版胸腺法新规定的有关物质和含量项下的指标

专利CN1840177A公开了一种胸腺法新注射液及其制备方法，它包含胸腺法新、药用辅料和注射用水，PH值为5.0-7.0，但是常规方法制成的注射液不稳定，高温灭菌还容易让药物失活。CN1398636A公开一种胸腺法新组合药物制剂及其制备方法，其由下述重量配比的原料制成：胸腺肽1-10、还原型谷胱甘肽2-120、药剂学上可以接受的其他辅料，包括亚硫酸钠、氯化钠和注射用水，该方法制成的制剂，稳定性偏差，生物利用度低。CN101934068A公开了一种胸腺肽注射液的制备方法这种方法制备过程过于繁琐，生物活性差。CN102247319A公开一种含有胸腺法新的药用组合物及其制备方法，稳定性偏差，生物利用度低。CN101766807A公开了一种胸腺法新微球注射分装制剂，它由胸腺法新PLGA缓释微球和注射溶剂以及增稠剂、保护剂、PH调节剂、等渗等张调节剂、增溶剂、抗氧化剂、局部疼痛减轻剂，注射用水组成，这种方法制备过程过于繁琐，成本太高，不适合工业化生产。

在药物载体输送系统中，微乳、微球、纳米粒、脂质体、药质体等亚微粒的研究已经成为药物新剂型研究中非常活跃的领域。将药物包封于这些亚微粒中可以改变药物在体内的分布，增加药物在靶器官的分布量，从而提高疗效，减轻毒副作用。

脂质体(Liposome)最初是由英国学者Bangham和Standlish将磷脂分散在水中进行电镜观察时发现的。磷脂分散在水中自然形成多层囊泡，每层均未脂质的双分子层；囊泡中央和各层之间被水相隔开，双分子层厚度约为4nm。后来，将这种具有类似生物膜结构的双分子小囊称为脂质体。脂质体可分为多室脂质体和胆识脂质体。单室脂质体又分为小单室脂质体和大单室脂质体。小单室脂质体为球形，尺寸一般为20-50纳米；大单室脂质体的尺寸为微米数量级。

1971年英国莱门等人开始将脂质体用于药物载体，主要作用机理是将药物粉末或溶液包裹在脂质体双层脂质膜所封闭的水相中或嵌入脂质体双层脂质膜中，这种微粒具有类细胞结构，进入人体内主药被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中积蓄，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。

在靶向给药系统中，脂质体的研究较为广泛，脂质体在体内具有良好的靶向性和生物相容性。作为一种新型药物制剂，脂质体制剂具有以下优点：(1)具有缓释作用：活性成分缓慢释放，延缓肾排泄和代谢，从而延长作用时间，提高质量效果；(2)降低药物毒性；(3)增加药物的溶解性，提高制剂质量；(4)具有靶向性：脂质体所载的药物在肝、脾网状内皮系统脏器局部维持高浓度，从而起到药物器官靶向性作用；(5)具有对活性药物成分的保护作用。

近年来，随着生物技术的不断进展，脂质体制备工艺逐步完善，脂质体作用机制进一步阐明，加之脂质体适合体内降解、无毒性和无免疫原性，特别是大量试验数据证明脂质体作为药物载体可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用，并减少药物剂量等优点。

因此目前还未见有关注射用胸腺法新脂质体制剂的文献报道，更没有注射用胸腺法新脂质体制剂投放市场。目前国内上市的有胸腺法新注射液、注射用胸腺法新、胸腺肽肠溶片、胸腺肽肠溶胶囊。这些制剂都存在上述缺陷，例如稳定性不够。由于胸腺法新注射剂存在不足，目前对于注射用胸腺法新脂质体制剂存在需求。

由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法，因而选择什么样的成分以形成具有良好品质的胸腺法新脂质体是亟待解决的课题。

发明内容

本发明人经过锐意研究发现，通过选用特定重量配比的胸腺法新、胆固醇、蛋黄卵磷脂、磷脂酰肌醇、蔗糖酯、海藻糖和甘露醇，可以形成品质优异的注射用胸腺法新脂质体制剂，从而完成了本发明。

本发明的目的是提供一种注射用胸腺法新脂质体制剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶1-1∶3，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

优选地，根据本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶1-1∶3，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

进一步优选地，根据本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶2，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

本发明的另一目的是提供上述注射用胸腺法新脂质体制剂的制备方法，该方法包括以下步骤：

(1)将胆固醇、蛋黄卵磷脂、磷脂酰肌醇和蔗糖酯置于梨形瓶中，加入有机溶剂，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的磷脂膜，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入胸腺法新水溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得胸腺法新脂质体；

(3)无菌条件下，将处方量的海藻糖和甘露醇溶于注射用水中，然后加入到胸腺法新脂质体中，加注射用水定容，经0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，即得注射用胸腺法新脂质体制剂。

本发明的脂质体达到了以下要求：(1)脂质体形态圆整且不聚集，并有效控制了粒径范围；(2)脂质体稳定性高，可以长期放置；(3)脂质体具有较高的包封率和载药量，尤其对于水溶性生物大分子药物；(4)脂质体容易实现灭菌或无菌操作。

本发明的脂质体注射剂减少了毒副作用，提高了制剂产品质量，具有良好的制剂稳定性，冷冻过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶等发生破裂，长期储存后，脂质体同样保持良好的包封率。

通过本发明方法制得的注射用胸腺法新脂质体制剂，提高了胸腺法新的溶解度，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，增加了药物在体循环中的保留时间，提高了药物的生物利用度，疗效明显提高；并且制备方法简单，适合于工业化大生产。

附图说明

图1是注射用胸腺法新脂质体制剂的血药浓度-时间曲线，说明了实施例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂、对比例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂和市售胸腺法新注射剂(上市样)的血药浓度与时间的关系曲线。

其中：

具体实施方式

以下通过具体实施方式本发明进行进一步说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚。

为了形成品质优良的注射用胸腺法新脂质体制剂，重要的是寻找能与胸腺法新良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。

为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和实现，发现特定重量配比的胸腺法新、胆固醇、蛋黄卵磷脂、磷脂酰肌醇、蔗糖酯、海藻糖和甘露醇能制成注射用胸腺法新脂质体制剂，其中，作为药物活性成分的胸腺法新的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的胸腺法新注射剂相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。

一方面，本发明提供一种注射用胸腺法新脂质体制剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶1-1∶3，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

优选地，根据本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶1-1∶3，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

进一步优选地，根据本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶2，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化卵磷脂、卵磷脂酰甘油、卵磷脂酰丝氨酸和卵磷脂酰肌醇等。合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油和聚乙二醇衍生化磷脂例如二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-mPEG₂₀₀₀)；二软酯酰胆磷脂-聚乙二醇2000(DPPG-mPEG₂₀₀₀)；氢化大豆磷脂酰胆碱-聚乙二醇2000(HSPC-mPEG₂₀₀₀)；二油酰磷脂酰胆碱-聚乙二醇2000(DOPC-mPEG₂₀₀₀等。

在本发明中，作为药物活性成分的胸腺法新，为白色疏松块状物或粉末，在三氟乙酸中极易溶解，在水中微溶，在乙腈、乙醚和氯仿中不溶。针对胸腺法新的特点，本发明人通过研究发现蛋黄卵磷脂特别适于作为基础磷脂成膜材料。蛋黄卵磷脂本品系从鸡蛋黄提取精制而得的磷脂混合物。为了改善脂质体的稳定性，所用蛋黄卵磷脂的纯度为98％以上，优选99％以上。

蛋黄卵磷脂的相变温度较高，当蛋黄卵磷脂与磷脂酰肌醇配伍时易于形成稳定的脂质体膜。而使用上述其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性、和渗漏率等性质差。

在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，相对于1.6重量份的胸腺法新而言，蛋黄卵磷脂的用量为80-450重量份。如果蛋黄卵磷脂的用量低于80重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果蛋黄卵磷脂的用量的用量高于450重量份，则作为药物活性成分的胸腺法新的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。

在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，胆固醇和磷脂酰肌醇以及蔗糖酯用于调节脂质体的膜稳定性。胆固醇是一种双亲性分子，与蛋黄卵磷脂相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入蛋黄卵磷脂双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。磷脂酰肌醇是一种天然负电荷磷脂，营养高，来源丰富，价格便宜。与胆固醇类似，磷脂酰肌醇也能调节蛋黄卵磷脂膜的稳定性并可防止脂质体聚集，其对稳定性的调节作用效果优于胆固醇。

本发明人经过研究发现，当胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂重量比为1∶1-1∶3时，能形成稳定的胸腺法新脂质体。当胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂重量比低于1∶1时，膜稳定性降低，胸腺法新易于渗漏；当胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂重量比高于1∶3时，胸腺法新脂质体膜流动性过高，被包裹在脂质体内的胸腺法新易于释放。此外，研究发现，当胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂重量比为1∶1-1∶3时，所形成的脂质体毒性低。

研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。

另一方面，本发明人研究发现，在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，相对于1.6重量份的胸腺法新而言，蛋黄卵磷脂的用量为80-450重量份，胆固醇为50-100重量份，磷脂酰肌醇为30-50重量份，且胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂重量比为1∶1-1∶3时，所形成的注射用胸腺法新脂质体制剂的包封率高。

当用于蛋黄卵磷脂双层膜中时，能提高该双层膜之间的化学能，从而提高脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提高注射用胸腺法新脂质体制剂的稳定性。

在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，使用蔗糖酯来进一步改进脂质体膜的稳定性。蔗糖酯是一种非离子表面活性剂，蔗糖酯的全称为蔗糖脂肪酸酯(SE)，系以蔗糖为原料，在适当的反应体系中，与脂肪酸进行酯化反应而生成。蔗糖酯具有很强的表面活性，有良好的乳化、增溶和抗氧防霉作用。蔗糖酯适用的型号为SE11(也称为蔗糖酯S11)、SE13(也称为蔗糖酯S13)、SE15(也称为蔗糖酯S15)，最优选的为SE15(蔗糖酯S15)。

在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，相对于1.6重量份的胸腺法新而言，蔗糖酯的用量为10-60重量份，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。如果蔗糖酯的用量低于10重量份，则由于其用量过低导致对注射用胸腺法新脂质体制剂的稳定性改进不够，反之，如果蔗糖酯的用量高于60重量份，则用于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。

研究发现，当使用上述特定量的胸腺法新、蛋黄卵磷脂、胆固醇、磷脂酰肌醇和蔗糖酯时，可以得到品质优良的胸腺法新脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。

目前上市的各种脂质体产品中，大多为液体制剂。然而，脂质体在水性介质中易发生聚集、融合、磷脂水解及药物渗漏等一系列问题，导致储存期缩短。尤其是，水溶性药物与脂质体膜之间的相互作用较弱，这使得药品的长期稳定性问题更为突出。

为了提高脂质体的稳定性，1978年Vanleberghe(药物冻干制剂技术的设计及应用)首次报道了采用冷冻干燥法提高脂质体的贮存稳定性。自此，研发人员开始尝试对其它药物用脂质体包裹并进行冻干保护。然而，在脂质体在冷冻过程中发现，冰晶的形成、渗透压的改变、相分离及相转变等因素均可导致脂质膜析叠、融合、破裂及药物渗漏，水溶性药物由于其与脂质体膜之间的相互作用较弱，冻干过程中更容易渗漏，因此从技术上更难实现冻干。

为了解决脂质体混悬液稳定性差，冻干过程中容易造成脂质体渗漏，包封率降低的难题，研发人员发现在冻干前加入适当的冻干保护剂，可以防止脂质体在冷冻干燥过程中芯材的渗漏及粒子间的相互聚集融合。因此寻找合适的冻干保护剂，实现脂质体以冻干形式的长期稳定保存，成为脂质体领域的研究热点之一。当脂质体脱水或者冷冻随后融化时，可能发生微囊融合和/或包容物的渗漏。保护脂质体在脱水和冷冻期间完整的通常方法是在脂质体制剂中加入一种低温防护剂，例如糖。低温防护剂保持脂质的完整，防止微囊融合和微囊内容物的损失。

本申请通过将海藻糖与甘露醇配伍组合，获得了良好的效果，将其组合用于本申请的冻干方法，圆满地解决了上述问题，获得了意外的效果。

因此，在本发明的氯化钾脂质体注射剂中，使用海藻糖和甘露醇作为赋形剂用于保护脂质体，以形成稳定的注射液。

海藻糖是由两个葡萄糖分子以α，α，1，1-糖苷键构成的非还原性糖，自身性质非常稳定，它最明显的性质是在无水的条件下有保护生物膜的能力，使脂质体即使在脱水的情况下也保持形态完整。在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，海藻糖能有效保护脂质体颗粒的形态和稳定性，进一步提高脂质体注射剂的稳定性。

甘露醇在医药上是良好的利尿剂，降低颅内压、眼内压及治疗肾药、脱水剂、食糖代用品、也用作药片的赋形剂及固体、液体的稀释剂，尤其能为冻干粉针剂提供良好的成型支撑。与海藻糖相同，甘露醇对脂质体也具有保护作用。一般而言，保护剂选自氯化钠、乳糖、山梨醇、山梨糖、右旋糖酐、甘露醇、海藻糖和葡萄糖中的一种或几种，经研究发现，应用海藻糖和甘露醇作为脂质体保护剂，样品色泽均匀，细腻，黏于瓶壁，体积基本不变，无收缩，遇水即溶，而其它保护剂如葡萄糖、乳糖有收缩现象等不足。海藻糖和甘露醇对脂质体的保护可能具有协同作用，其中海藻糖和甘露醇优选存在于脂质体双分子层膜的外部表面。

上述描述中，最优选地，在本发明的注射用胸腺法新脂质体制剂中，胸腺法新1.6份，胆固醇60-80份，蛋黄卵磷脂180-260份，磷脂酰肌醇30-50份，蔗糖酯S1520-40份，海藻糖20-50份，甘露醇30-60份，且胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶2；所形成的注射用胸腺法新脂质体制剂的包封率和稳定性最优。

根据权利要求1-3中任一项所述的注射用胸腺法新脂质体制剂，其中注射用胸腺法新的规格为1.6mg。

另一方面，本发明还提供一种注射用胸腺法新脂质体制剂的制备方法，具体包括如下制备步骤：

(1)将胆固醇、蛋黄卵磷脂、磷脂酰肌醇和蔗糖酯置于梨形瓶中，加入有机溶剂，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的磷脂膜；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入胸腺法新水溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得胸腺法新脂质体；

(3)无菌条件下，将处方量的海藻糖和甘露醇溶于注射用水中，然后加入到胸腺法新脂质体中，加注射用水定容，经0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，即得注射用胸腺法新脂质体制剂。

上述所述的制备方法，所述的有机溶剂选自苯甲醇、甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、乙醚、正己烷、氯仿和二氯甲烷中的一种或几种，优选为氯仿。

上述所述的制备方法，其中步骤(3)中所述的冻干过程为：在-40～-55℃预冻2～5小时，接着在-20～-25℃冷冻6～8小时，再经16～48小时升华至20～25℃，最后在25～30℃干燥2～4小时。制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。

本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的注射用胸腺法新脂质体制剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。

研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的胸腺法新脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。

实施例

以下通过具体优选的实施例对本发明进行进一步说明。这些实施例仅是说明性的，并不应理解为对本发明的限制。

实施例1注射用胸腺法新脂质体制剂的制备

所用原辅料成分及其重量如下：

采用制备工艺制备注射用胸腺法新脂质体制剂：

(1)将60g胆固醇、180g蛋黄卵磷脂、30g磷脂酰肌醇和20g蔗糖酯S15置于梨形瓶中，加入于10000ml氯仿，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去氯仿，在瓶壁上形成均匀透明的磷脂膜；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入1.6g胸腺法新溶于500ml注射用水中的溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得胸腺法新脂质体；

(3)无菌条件下，将20g海藻糖和30g甘露醇溶于300ml注射用水中，然后加入到胸腺法新脂质体中，加注射用水定容至1000ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-40℃预冻5小时，接着在-20℃冷冻6小时，再经16小时升华至20℃，最后在25℃干燥4小时，即得注射用胸腺法新脂质体制剂。

实施例2注射用胸腺法新脂质体制剂的制备

所用原辅料成分及其重量如下：

采用制备工艺制备注射用胸腺法新脂质体制剂：

(1)将70g胆固醇、220g蛋黄卵磷脂、40g磷脂酰肌醇和30g蔗糖酯S15置于梨形瓶中，加入于10000ml氯仿，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去氯仿，在瓶壁上形成均匀透明的磷脂膜；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入1.6g胸腺法新溶于500ml注射用水中的溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得胸腺法新脂质体；

(3)无菌条件下，将30g海藻糖和50g甘露醇溶于300ml注射用水中，然后加入到胸腺法新脂质体中，加注射用水定容至1000ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-45℃预冻4小时，接着在-22℃冷冻7小时，再经24小时升华至25℃，最后在25℃干燥4小时，即得注射用胸腺法新脂质体制剂。

实施例3注射用胸腺法新脂质体制剂的制备

所用原辅料成分及其重量如下：

采用制备工艺制备注射用胸腺法新脂质体制剂：

(1)将80g胆固醇、260g蛋黄卵磷脂、50g磷脂酰肌醇和40g蔗糖酯S15置于梨形瓶中，加入于15000ml氯仿，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去氯仿，在瓶壁上形成均匀透明的磷脂膜；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入1.6g胸腺法新溶于600ml注射用水中的溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得胸腺法新脂质体；

(3)无菌条件下，将40g海藻糖和30g甘露醇溶于250ml注射用水中，然后加入到胸腺法新脂质体中，加注射用水定容至1000ml，经0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，然后在-55℃预冻2小时，接着在-25℃冷冻8小时，再经48小时升华至25℃，最后在30℃干燥2小时，即得注射用胸腺法新脂质体制剂。

对比例1-3注射用胸腺法新脂质体制剂的制备

采用与分别与实施例1-3中相同的生产工艺，将如下表1中所示的对比例1-3中的原料成分分别制成注射用胸腺法新脂质体制剂：

表1对比例1-3中所用原辅料成分

其中，“/”表示未使用。

试验例1脂质体粒径的测定

室温条件下，取实施例1-3和对比例1-3中的注射用胸腺法新脂质体制剂，置于Submicron Particle Sizer Model 370粒径检测仪的样品管中，测定粒径大小分布及平均粒径；用投射电子显微镜观察粒子形态。结果示于下表2中。

表2脂质体粒径检测结果

从表2可知，实施例1-3制得的脂质体粒径均匀，显球形，大小均一；对比例1-3制得的脂质体粒径不均匀，形状不定，大小不一。

具体而言，即使在采用同样的生产工艺时，实施例1-3中所得胸腺法新脂质体的颗粒外观及其平均粒径明显优于对比例1-3中所得的胸腺法新脂质体。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，所得胸腺法新脂质体的外观劣于本发明，平均粒径明显大出很多。当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，得到的脂质体也不如权利要求范围内制得的脂质体好。

试验例2包封率的测定

将实施例1-3和对比例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂以5000r/min的转速高速离心，离心20分钟，取上清液，经HPLC法测胸腺法新含量，计算包封率，结果示于下表3中。

表3包封率测定结果

由表3可知，实施例1-3制备的脂质体制剂的包封率显著的高于对比例1-3的脂质体制剂的包封率。说明当使用本发明所用成分以外的成分时，或者当成分用量在本发明限定的成分用量范围外时，所得脂质体的脂质体包封率低于本发明。

试验例3稳定性考察

将本发明实施例1-3制备的样品和上市注射用胸腺法新冻干粉针(批号：H20100526，海南双成药业股份有限公司)分别置于高温40℃、相对湿度75％的条件下6个月，进行加速试验考察，实验结果示于下表4中。

表4加速试验结果

由表4可知，加速6月时，上市制剂含量降低，有关物质升高；而本发明的样品性状、含量和有关物质变化均不明显，说明本发明的产品稳定性好。

试验例4渗漏率试验

取试验例1-3和对比例1-3制备的样品，在室温条件下，分别于0天、30天、60天、90天和180天，定期检查，测定包封率，与0天包封的药量比较，计算渗漏率，结果示于下表5中。

表5渗漏率试验结果

由表5可知，长期储存时，本发明实施例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂渗漏率变化不大，而对比例1-3中制备的注射剂渗漏率逐渐增大，脂质体渗漏严重，这说明本发明制备的注射用胸腺法新脂质体制剂具有更高的稳定性。

试验例5血药浓度的测定

将56只大鼠随机分成7组，每组分别注射给药实施例1-3及对比例1-3中制备的注射剂，以及市售胸腺法新注射剂(批号：H20100526，海南双成药业股份有限公司)，注射量为1.6mg胸腺法新。给药后分别于0.5h、1.5h、2h、4h、6h、8h、15h和20h，采血，血样经处理后，以HPLC-MS法测定血药浓度。绘制实施例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂、对比例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂和市售胸腺法新注射剂(上市样)的血药浓度与时间的关系曲线，示于附图1中。

由图1可知，与对比例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂和市售注射用胸腺法新脂质体制剂相比，本发明实施例1-3中制备的注射用胸腺法新脂质体制剂具有以下优点：在体内的消除速度减缓，在体循环中分布时间延长，达到了改进的缓释效果，生物利用度增加。

工业实用性

由上述实施例以及实验例的结果可知，本发明的胸腺法新脂质体具有良好的外观，颗粒小，粒径均匀，包封率高，稳定性高，渗漏率低，在体内的停留时间长，生物利用度高，具有良好的工业应用价值。

以上通过具体实施方式和实施例对本发明进行了详细说明，不过应理解，这些说明并不对本发明的范围构成任何限制，在不偏离本发明的精神和保护范围的情况下，可以对本发明的技术方案及其实施方式进行多种修饰、改进和替换，这些均因落入本发明的保护范围内。

本申请中提及或引用的各个参考文献，在此全文引入作为参考。

Claims (7)

1.一种注射用胸腺法新脂质体制剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶1-1∶3，且所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

2.根据权利要求1所述的注射用胸腺法新脂质体制剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶1-1∶3，所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

3.根据权利要求1所述的注射用胸腺法新脂质体制剂，其由包括以下重量配比的药物和赋形剂成分制成：

条件是：胆固醇与磷脂酰肌醇的重量之和与蛋黄卵磷脂之间的重量比为1∶2，且所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的注射用胸腺法新脂质体制剂，其中注射用胸腺法新的规格为1.6mg。

5.一种制备注射用胸腺法新脂质体制剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将胆固醇、蛋黄卵磷脂、磷脂酰肌醇和蔗糖酯置于梨形瓶中，加入有机溶剂，加热搅拌使其溶解，然后于旋转蒸发器上减压除去有机溶剂，在瓶壁上形成均匀透明的磷脂膜，其中所述蔗糖酯为蔗糖酯S11、蔗糖酯S13、蔗糖酯S15；

(2)在氮气保护下，向瓶中加入胸腺法新水溶液，搅拌，使磷脂膜洗脱并充分溶胀水合，水化完全后在在100bar到600bar做梯度均质4～6遍，0.22μm微孔滤膜过滤，制得胸腺法新脂质体；

(3)无菌条件下，将处方量的海藻糖和甘露醇溶于注射用水中，然后加入到胸腺法新脂质体中，加注射用水定容，经0.45μm微孔滤膜过滤，灌装，然后进行冻干，即得注射用胸腺法新脂质体制剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的有机溶剂选自苯甲醇、甲醇、乙醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、乙醚、正己烷、氯仿和二氯甲烷中的一种或几种，优选为氯仿。

7.根据权利要求5所述的注射用胸腺法新脂质体制剂的制备方法，其特征在于步骤(3)中所述的冻干过程为：在-40～-55℃预冻2～5小时，接着在-20～-25℃冷冻6～8小时，再经16～48小时升华至20～25℃，最后在25～30℃干燥2～4小时。

Images