CN102574782A

CN102574782A - 取代的卤代苯氧基苯甲酰胺衍生物

Info

Publication number: CN102574782A
Application number: CN2010800471103A
Authority: CN
Inventors: M·希契科克; I·哈通; F·普勒; G·西迈斯特; R·诺伊豪斯
Original assignee: Bayer Pharma AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 2009-10-21
Filing date: 2010-10-12
Publication date: 2012-07-11
Anticipated expiration: 2030-10-12
Also published as: EP2491014A1; US20120263714A1; CA2777071A1; WO2011047796A1; CN102574782B; HK1173134A1; JP2013508320A

Abstract

本发明涉及通式(I)的取代的卤代苯氧基苯甲酰胺衍生物化合物、制备所述化合物的方法，包含所述化合物的药物组合物和组合以及所述化合物作为唯一药剂或与其他活性成分组合在制备用于治疗或预防疾病，特别是过度增殖性病症和/或血管生成病症的药物组合物中的用途，其中，R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^c和X如权利要求中所定义。

Description

取代的卤代苯氧基苯甲酰胺衍生物

技术领域

本发明涉及如本文所述和定义的取代的卤代苯氧基苯甲酰胺衍生物(在下文中称作通式(I)化合物)、制备所述化合物的方法、包含所述化合物的药物组合物和组合以及所述化合物作为唯一药剂或与其他活性成分组合用于制备治疗或预防疾病、特别是过度增殖性病症和/或血管生成病症的药物组合物的用途。

背景技术

癌症是由组织的异常生长引起的疾病。某些癌症具有侵袭局部组织并且转移到远处器官的能力。该疾病可在多种不同的器官、组织和细胞类型中发展。因此，术语“癌症”指超过一千种不同疾病的集合。

2002年，全世界超过440万人被诊断患有乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌或前列腺癌并且超过250万人死于这些致命性的疾病(Globocan 2002Report)。2005年预计仅美国就有超过125万新癌症病例和超过500,000例由癌症引起的死亡。预期大多数这些新癌症病例为结肠癌(约100,000)、肺癌(约170,000)、乳腺癌(约210,000)和前列腺癌(约230,000)。预计癌症的发病率和患病率在今后十年增加约15％，平均增长率为1.4％[1]。

越来越多的证据表明可将癌症视作“信号转导疾病”，其中影响癌基因和肿瘤抑制基因表达和/或功能的细胞基因组中的改变会最终影响正常调节细胞生长、分化和程序性细胞死亡(凋亡)的信号的传递。对人类癌症中失调的信号转导通路的阐明使得设计出越来越多的基于机理的治疗剂[2]。作为人类恶性肿瘤治疗策略的信号转导抑制近年来取得了令人瞩目的成功，例如开发了用于治疗慢性髓细胞白血病(CML)和胃肠道间质瘤(GIST)的Gleevec，由此揭开了“分子靶向”治疗的新篇章[3-5]。

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)模块是连接与增殖、分化和存活相关的各种胞外刺激的信号转导级联中的关键整合点。最近20年的科学研究已得到对这一通路的非常详细的分子剖析，所述通路现在已增加至包括具有不同的分子特征和功能特征的五个不同的MAPK亚家族[胞外信号调节激酶ERK-1/2、c-Jun-N-末端激酶(JNKs)、p38激酶、ERK-3/4和ERK-5][6-8]。虽然某些亚家族例如p38家族已成为炎性疾病和退行性疾病的治疗靶，但是从Ras到ERK-1/2的MAPK级联(由肽生长因子起始的主要的促有丝分裂通路)开始成为不同类型的人类癌症分子治疗的主要作用靶[9-11]。由于遗传变化和表观遗传变化，许多人类肿瘤中的MAPK通路被异常活化，引起增殖增加和对凋亡刺激的抗性。特别地，Ras的突变的致癌基因形式存在于50％的结肠癌和＞90％的胰腺癌中[12]。最近发现BRAF突变存在于＞60％的恶性黑色素瘤中[13]。这些突变导致MAPK通路被组成型活化。另外，某些受体酪氨酸激酶的过表达或突变性活化也可导致Raf-MEK-ERK通路的活化增加。

Raf/MEK/ERK级联的模块性质在MEK调节的交叉点处多效性降低[14]。还未鉴定出除ERK-1/2以外的MEK底物。磷酸化ERK是MEK活性的产物，因此在癌细胞和肿瘤组织中对其进行的检测提供MEK抑制的直接量度。MEK对ERK-1/2的选择性加上对双磷酸化和活化形式的ERK具有特异性抗体的可获得性使MEK成为抗癌药物开发中具有吸引力的靶点。另外，最近已证明MEK活化调节基质矿化(Blood2007，40，68)，由此对MEK活性的调节还可应用于治疗由组织矿化失调引起的或伴有组织矿化失调的疾病，更特别是用于治疗由骨矿化失调引起的或伴有骨矿化失调的疾病。

第一代MEK抑制剂PD98059[15]和U0126[16]表现出不与ATP竞争并且因此可能在MEK上具有不同的结合位点；这些化合物已被广泛用于体外和体内模型系统以特征化ERK1/2的生物活性。第二代MEK1/2抑制剂PD184352(现称作CI-1040)具有低纳摩尔范围内的IC₅₀、提高的生物利用度并且还表现出通过变构的、非ATP-竞争性机制发挥作用[17]。已证明在小鼠模型中CI-1040口服治疗体内抑制结肠癌症生长[18]并且在I/II期人体临床试验中对该化合物进行了评价，但由于功效不足以失败告终[19]。最近已有其他MEK变构抑制剂进入临床，但是发现其具有例如暴露量低、功效有限和/或毒性问题的缺点。已公开了小分子MEK抑制剂，包括于第2003/0232869、2004/0116710、2003/0216420号美国专利公布和第10/654,580和10/929,295号美国专利申请，各通过援引加入本文。最近几年出现了许多另外的专利申请，包括美国专利5,525,6625；WO 98/43960；WO99/01421；WO 99/01426；WO 00/41505；WO 00/41994；WO 00/42002；WO00/42003；WO 00/42022；WO 00/42029；WO 00/68201；WO 01/68619；WO02/06213；WO 03/077914；WO 03/077855；WO 04/083167；WO 05/0281126；WO 05/051301；WO 05/121142；WO 06/114466；WO 98/37881；WO 00/35435；WO 00/35436；WO 00/40235；WO 00/40237；WO 0I/05390；WO 0I/05391；WO 0I/05392；WO 0I/05393；WO 03/062189；WO 03/062191；WO 04/056789；WO 05/000818；WO 05/007616；WO 05/009975；WO 05/051300；WO05/051302；WO 05/028426；WO 06/056427；WO 03/035626；以及WO06/029862。

尽管本领域已取得了一些进展，但是仍需要癌症治疗和抗癌化合物。更特别地，仍需要具有平衡的效力-性质特征的结构新颖的MEK抑制剂。特别需要鉴定出新颖MEK抑制剂，此抑制剂并入了前文未例举的与强效MEK抑制匹配的结构基序。如果这些结构基序能够进一步提高MEK效力和/或调节化合物的性质(包括物理化学、药物效应动力学和药物代谢动力学性质)，这将会特别有利。

WO 2008/138639(Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft)涉及取代的苯基氨基苯化合物、包含此类化合物的药物组合物和此类化合物或组合物治疗过度增殖性病症和/或血管生成病症的用途。已发现所述化合物是强效且具有选择性的MEK抑制剂。所述化合物衍生自1-取代-2-苯基氨基苯基骨架，并且所述苯基骨架的6-位具有被进一步明确取代的侧链。这一发现令人惊讶，因为对已公布的苯基骨架衍生的MEK抑制剂和之前的结构-活性关系分析(参见例如Haile Tecle/Pfizer Global Research：“MEK inhibitors”，presented at Drew University，15^th June 2006)的调研表明，在基于苯基骨架的MEK抑制剂中较大的6-取代基不利于实现高MEK抑制效力。所述化合物是强效的EMK抑制剂并且抑制MEK-ERK通路的活化。

但是，上述背景技术均未记载如本文描述和定义并在下文中称作“本发明化合物”的本发明经选择的通式(I)化合物(其在中心苯环的3-位携带经选择的取代基(卤原子特别是氟原子)并且在左边苯环的3-位携带经选择的取代基(携带专门选择的氨磺酰基的甲基))、或其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐、或者它们的混合物，或者它们的药理学活性。

现已发现所述本发明的化合物具有令人惊讶且有利的性质，这构成了本发明的基础。

具体而言，令人惊讶地发现所述本发明的化合物不仅有效地强力抑制癌细胞增殖，而且还具有显著降低的对人碳酸酐酶的亲和力。本领域技术人员已知对人碳酸酐酶的亲和力导致各化合物不利地积累于人红细胞内。

鉴于这一点，所述本发明的通式(I)化合物因此可用于治疗或预防由不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答引起的疾病、或者伴有不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答的疾病，特别地，其中所述不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答是由丝裂原活化蛋白激酶通路介导的，例如血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移，例如白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑瘤和脑转移在内的头颈部肿瘤、包括非小细胞肺肿瘤和小细胞肺肿瘤在内的胸部肿瘤、胃肠道肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤和其他妇科肿瘤、包括肾肿瘤、膀胱瘤和前列腺瘤在内的泌尿系统肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤、和/或它们的转移。

发明内容

根据第一个方面，本发明涉及通式(I)的化合物、或其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药：

其中：

定义

本文中提及的术语优选具有以下含义：

术语“卤原子”或“卤素”应理解为氟、氯、溴或碘原子。

术语“C₁-C₁₀-烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是具有1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链的饱和一价烃基，例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、1，2-二甲基丙基、新戊基、1，1-二甲基丙基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、2-乙基丁基、1-乙基丁基、3，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基或1，2-二甲基丁基或它们的异构体。特别地，所述基团具有1、2或3个碳原子(“C₁-C₃-烷基”)，甲基、乙基、正丙基或异丙基。

术语“卤代-C₁-C₁₀-烷基”应理解为优选表示直链或支链的饱和一价烃基，其中术语“C₁-C₁₀-烷基”如上定义，并且其中一个或多个氢原子以相同或不同的方式被卤原子代替，即卤原子之间相互独立。特别地，所述卤原子为F。所述卤代-C₁-C₁₀-烷基是例如-CF₃、-CHF₂、-CH₂F、-CF₂CF₃或-CH₂CF₃。

术语“C₁-C₁₀-烷氧基”应理解为优选表示式-O-烷基的直链或支链的饱和一价烃基，其中术语“烷基”如上定义，例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、戊氧基、异戊氧基或正己氧基、或它们的异构体。

术语“卤代-C₁-C₁₀-烷氧基”应理解为优选表示其中一个或多个氢原子以相同或不同的方式被卤原子代替的如上定义的直链或支链的饱和一价C₁-C₁₀-烷氧基。特别地，所述卤原子是F。所述卤代-C₁-C₁₀-烷氧基是例如-OCF₃、-OCHF₂、-OCH₂F、-OCF₂CF₃或-OCH₂CF₃。

术语“C₁-C₁₀-烷氧基-C₁-C₁₀-烷基”应理解为优选表示其中一个或多个氢原子以相同或不同的方式被如上定义的-C₁-C₁₀-烷氧基代替的如上定义的直链或支链的饱和一价烷基，例如甲氧基烷基、乙氧基烷基、丙氧基烷基、异丙氧基烷基、丁氧基烷基、异丁氧基烷基、叔丁氧基烷基、仲丁氧基烷基、戊氧基烷基、异戊氧基烷基、己氧基烷基，其中术语“C₁-C₁₀-烷基”如上定义，或它们的异构体。

术语“卤代-C₁-C₁₀-烷氧基-C₁-C₁₀-烷基”应理解为优选表示其中一个或多个氢原子以相同或不同的方式被卤原子代替的如上定义的直链或支链的饱和一价-C₁-C₁₀-烷氧基-C₁-C₁₀-烷基。特别地，所述卤原子是F。所述卤代-C₁-C₁₀-烷氧基-C₁-C₁₀-烷基是例如-CH₂CH₂OCF₃、-CH₂CH₂OCHF₂、-CH₂CH₂OCH₂F、-CH₂CH₂OCF₂CF₃或-CH₂CH₂OCH₂CF₃。

术语“C₂-C₁₀-烯基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个双键并且具有2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是2或3个碳原子(“C₂-C₃-烯基”)，应理解，在所述烯基包含多于一个双键的情况下，所述双键可相互分离或者共轭。所述烯基是例如乙烯基、烯丙基、(E)-2-甲基乙烯基、(Z)-2-甲基乙烯基、高烯丙基、(E)-丁-2-烯基、(Z)-丁-2-烯基、(E)-丁-1-烯基、(Z)-丁-1-烯基、戊-4-烯基、(E)-戊-3-烯基、(Z)-戊-3-烯基、(E)-戊-2-烯基、(Z)-戊-2-烯基、(E)-戊-1-烯基、(Z)-戊-1-烯基、己-5-烯基、(E)-己-4-烯基、(Z)-己-4-烯基、(E)-己-3-烯基、(Z)-己-3-烯基、(E)-己-2-烯基、(Z)-己-2-烯基、(E)-己-1-烯基、(Z)-己-1-烯基、异丙烯基、2-甲基丙-2-烯基、1-甲基丙-2-烯基、2-甲基丙-1-烯基、(E)-1-甲基丙-1-烯基、(Z)-1-甲基丙-1-烯基、3-甲基丁-3-烯基、2-甲基丁-3-烯基、1-甲基丁-3-烯基、3-甲基丁-2-烯基、(E)-2-甲基丁-2-烯基、(Z)-2-甲基丁-2-烯基、(E)-1-甲基丁-2-烯基、(Z)-1-甲基丁-2-烯基、(E)-3-甲基丁-1-烯基、(Z)-3-甲基丁-1-烯基、(E)-2-甲基丁-1-烯基、(Z)-2-甲基丁-1-烯基、(E)-1-甲基丁-1-烯基、(Z)-1-甲基丁-1-烯基、1，1-二甲基丙-2-烯基、1-乙基丙-1-烯基、1-丙基乙烯基、1-异丙基乙烯基、4-甲基戊-4-烯基、3-甲基戊-4-烯基、2-甲基戊-4-烯基、1-甲基戊-4-烯基、4-甲基戊-3-烯基、(E)-3-甲基戊-3-烯基、(Z)-3-甲基戊-3-烯基、(E)-2-甲基戊-3-烯基、(Z)-2-甲基戊-3-烯基、(E)-1-甲基戊-3-烯基、(Z)-1-甲基戊-3-烯基、(E)-4-甲基戊-2-烯基、(Z)-4-甲基戊-2-烯基、(E)-3-甲基戊-2-烯基、(Z)-3-甲基戊-2-烯基、(E)-2-甲基戊-2-烯基、(Z)-2-甲基戊-2-烯基、(E)-1-甲基戊-2-烯基、(Z)-1-甲基戊-2-烯基、(E)-4-甲基戊-1-烯基、(Z)-4-甲基戊-1-烯基、(E)-3-甲基戊-1-烯基、(Z)-3-甲基戊-1-烯基、(E)-2-甲基戊-1-烯基、(Z)-2-甲基戊-1-烯基、(E)-1-甲基戊-1-烯基、(Z)-1-甲基戊-1-烯基、3-乙基丁-3-烯基、2-乙基丁-3-烯基、1-乙基丁-3-烯基、(E)-3-乙基丁-2-烯基、(Z)-3-乙基丁-2-烯基、(E)-2-乙基丁-2-烯基、(Z)-2-乙基丁-2-烯基、(E)-1-乙基丁-2-烯基、(Z)-1-乙基丁-2-烯基、(E)-3-乙基丁-1-烯基、(Z)-3-乙基丁-1-烯基、2-乙基丁-1-烯基、(E)-1-乙基丁-1-烯基、(Z)-1-乙基丁-1-烯基、2-丙基丙-2-烯基、1-丙基丙-2-烯基、2-异丙基丙-2-烯基、1-异丙基丙-2-烯基、(E)-2-丙基丙-1-烯基、(Z)-2-丙基丙-1-烯基、(E)-1-丙基丙-1-烯基、(Z)-1-丙基丙-1-烯基、(E)-2-异丙基丙-1-烯基、(Z)-2-异丙基丙-1-烯基、(E)-1-异丙基丙-1-烯基、(Z)-1-异丙基丙-1-烯基、(E)-3，3-二甲基丙-1-烯基、(Z)-3，3-二甲基丙-1-烯基、1-(1，1-二甲基乙基)乙烯基、丁-1，3-二烯基、戊-1，4-二烯基、己-1，5-二烯基或甲基己二烯基。特别地，所述基团是乙烯基或烯丙基。

术语“C₂-C₁₀-炔基”应理解为优选表示直链或支链的一价烃基，其包含一个或多个叁键并且包含2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是2或3个碳原子(“C₂-C₃-炔基”)。所述C₂-C₁₀-炔基是例如乙炔基、丙-1-炔基、丙-2-炔基、丁-1-炔基、丁-2-炔基、丁-3-炔基、戊-1-炔基、戊-2-炔基、戊-3-炔基、戊-4-炔基、己-1-炔基、己-2-炔基、己-3-炔基、己-4-炔基、己-5-炔基、1-甲基丙-2-炔基、2-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-3-炔基、1-甲基丁-2-炔基、3-甲基丁-1-炔基、1-乙基丙-2-炔基、3-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-4-炔基、1-甲基戊-4-炔基、2-甲基戊-3-炔基、1-甲基戊-3-炔基、4-甲基戊-2-炔基、1-甲基戊-2-炔基、4-甲基戊-1-炔基、3-甲基戊-1-炔基、2-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-3-炔基、1-乙基丁-2-炔基、1-丙基丙-2-炔基、1-异丙基丙-2-炔基、2，2-二甲基丁-3-炔基、1，1-二甲基丁-3-炔基、1，1-二甲基丁-2-炔基或3，3-二甲基丁-1-炔基。特别地，所述炔基是乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基。

术语“C₃-C₁₀-环烷基”应理解为优选表示饱和的一价单环或双环烃环，其包含3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是包含3、4、5或6个碳原子(“C₃-C₆-环烷基”)。所述C₃-C₁₀-环烷基是例如单环烃环，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基或环癸基，或者是双环烃环，例如全氢并环戊二烯(perhydropentalenylene)或十氢化萘环。所述环烷基环可任选包含一个或多个双键，例如环烯基，如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基、环壬烯基或环癸烯基，其中所述环与分子其他部分之间的键(无论是饱和或是不饱和)可在所述环的任何碳原子上。

术语“亚烷基”应理解为优选表示具有1、2、3、4、5或6个碳原子的被任选取代的烃链(或“链”)，即被任选取代的-CH₂-(“亚甲基”或“一元链”或例如-C(Me)₂-)、-CH₂-CH₂-(“亚乙基”、“二亚甲基”或“二元链”)、-CH₂-CH₂-CH₂-(“亚丙基”、“三亚甲基”或“三元链”)、-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-(“亚丁基”、“四亚甲基”或“四元链”)、-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-(“亚戊基”、“五亚甲基”或“五元链”)或-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-CH₂-(“亚己基”、“六亚甲基”或“六元链”)。特别地，所述亚甲基链具有1、2、3、4或5个碳原子，更特别地，具有1或2个碳原子。

如本文通篇使用，术语“C₁-C₆”在“C₁-C₆-烷基”、“C₁-C₆-卤代烷基”、“C₁-C₆-烷氧基”或“C₁-C₆-卤代烷氧基”的定义的语境中应理解为表示具有1-6个有限数量的碳原子，即1、2、3、4、5或6个碳原子的烷基。还应理解，所述术语“C₁-C₆”应理解为包含于其中的任意亚范围，例如C₁-C₆、C₂-C₅、C₃-C₄、C₁-C₂、C₁-C₃、C₁-C₄、C₁-C₅、C₁-C₆；特别是C₁-C₂、C₁-C₃、C₁-C₄、C₁-C₅、C₁-C₆；更特别地是C₁-C₄；在“C₁-C₆-卤代烷基”或“C₁-C₆-卤代烷氧基”的情况中甚至更特别地是C₁-C₂。

相似地，本文使用的术语“C₂-C₆”，如在本文中通篇使用，例如在“C₂-C₆-烯基”和“C₂-C₆-炔基”的定义的语境中应理解为表示具有2-6个有限数量的碳原子，即2、3、4、5或6个碳原子的烯基或炔基。还应理解，所述术语“C₂-C₆”应理解为包含于其中的任意亚范围，例如C₂-C₆、C₃-C₅、C₃-C₄、C₂-C₃、C₂-C₄、C₂-C₅；特别是C₂-C₃。

另外，本文使用的术语“C₃-C₁₀”，如在本文中通篇使用，例如在“C₃-C₁₀-环烷基”的定义的语境中应理解为表示具有3-10个有限数量的碳原子，即3、4、5、6、7、8、9或10个碳原子，特别是3、4、5或6个碳原子的环烷基。还应理解，所述术语“C₃-C₁₀”应理解为包含于其中的任意亚范围，例如C₃-C₁₀、C₄-C₉、C₅-C₈、C₆-C₇；特别是C₃-C₆。

本文使用的术语“一次或多次”，例如在本发明通式化合物的取代基的定义中应理解为表示“一次、两次、三次、四次或五次，特别是一次、两次、三次或四次，更特别地是一次、两次或三次，甚至更特别地是一次或两次”。

当本文中使用化合物、盐、多晶型物、水合物、溶剂合物等词的复数形式时，应理解为还表示单数的化合物、盐、多晶型物、异构体、水合物、溶剂合物等。

本发明的化合物可包含一个或多个不对称中心，视期望的各种取代基的位置和性质而定。不对称碳原子可以(R)或(S)构型存在，在具有一个不对称中心的情况下得到外消旋混合物，并且在具有多个不对称中心的情况下得到非对映异构体混合物。在某些情况下，由于围绕特定键的旋转受阻还可能存在不对称性，例如该中心键连接特定化合物的两个被取代的芳香环。

环上的取代基还可以顺式或反式形式存在。预期所有的此类构型(包括对映异构体和非对映异构体)均包括于本发明的范围内。

优选的化合物是产生更期望的生物活性的那些化合物。本发明化合物的分离的、纯净的或部分纯化的异构体和立体异构体、或者外消旋混合物或非对映异构体混合物均包括于本发明范围内。此类物质的纯化和分离可通过本领域已知的标准技术实现。

根据常规方法通过拆分外消旋混合物可获得光学异构体，例如通过使用光学活性酸或碱形成非对映异构体盐，或者通过形成共价非对映异构体。适合酸的实例为酒石酸、二乙酰基酒石酸、二甲苯酰基酒石酸和樟脑磺酸。非对映异构体的混合物可基于它们的物理和/或化学差异，通过本领域已知的方法例如通过色谱法或分级结晶分离成它们单一的非对映异构体。然后，从分离的非对映异构体盐中释放光学活性碱或酸。另一种不同的分离光学异构体的方法涉及在进行或不进行常规衍生化的条件下使用手性色谱法(例如，手性HPLC柱)，其可经过最佳选择以将对映异构体的分离最大化。适合的手性HPLC柱是由Diacel生产，例如Chiracel OD和Chiracel OJ等，所有均可常规性选用。还可在进行或不进行衍生化的条件下使用酶法分离。同样地，可通过使用光学活性原料的手性合成来获得本发明的光学活性化合物。

为了将不同类型的异构体相互之间区分开来，参考IUPAC RulesSection E(Pure Appl Chem 45，11-30，1976)。

本发明包括本发明化合物的所有可能的立体异构体，其是单一立体异构体或所述异构体的任意比例的任意混合物的形式。可通过任何适合的现有技术，例如色谱法，特别是例如手性色谱法实现本发明化合物的单一立体异构体，例如单一对映异构体，或单一非对映异构体的分离。

另外，本发明化合物可以互变异构体的形式存在。例如，包含作为杂芳基的吡唑部分的任何本发明化合物例如可以1H互变异构体或2H互变异构体的形式存在，甚至以任意量的所述两种互变异构体的混合物的形式存在，或者包含作为杂芳基的三唑部分的任何本发明化合物例如可以1H互变异构体、2H互变异构体或4H互变异构体的形式存在，甚至以任意量的所述1H、2H和4H互变异构体的混合物的形式存在：

本发明包括本发明化合物的所有可能的互变异构体，其是单一互变异构体或所述互变异构体的任意比例的任意混合物的形式。

另外，本发明的化合物可以N-氧化物的形式存在，其定义为本发明化合物中的至少一个氮被氧化。本发明包括所有此类可能的N-氧化物。

本发明还涉及如本文公开的化合物的有用形式，例如代谢物、水合物、溶剂合物、前药、盐，特别是药学可接受的盐、以及共沉淀物。

本发明的化合物可以水合物或溶剂合物的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。在化学计量溶剂合物例如水和物的情况下，可能分别是半(hemi-)溶剂合物或水合物、(半(semi-))溶剂合物或水合物、一溶剂合物或水合物、倍半溶剂合物或水合物、二溶剂合物或水合物、三溶剂合物或水合物、四溶剂合物或水合物、五溶剂合物或水合物等。本发明包括所有此类水合物或溶剂合物。

另外，本发明的化合物可以游离形式存在，例如以游离碱、游离酸或两性离子的形式，或者以盐的形式存在。所述盐可为任何盐，有机或无机加成盐，特别是药学中常用的任何药学可接受的有机或无机加成盐。

术语“药学可接受的盐”指本发明化合物的相对无毒的、无机酸或有机酸加成盐。例如，参见S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts，”J.Pharm.Sci.1977，66，1-19。

本发明化合物的适合的药学可接受的盐可以是例如在链或环中携带氮原子的具有足够碱性的本发明化合物的酸加成盐，例如与如下无机酸形成的酸加成盐：例如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、bisulfuric acid、磷酸或硝酸，或者与如下有机酸形成的酸加成盐：例如甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、苯甲酸、水杨酸、2-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、樟脑酸、肉桂酸、环戊烷丙酸、二葡糖酸(digluconic acid)、3-羟基-2-萘甲酸、烟酸、扑酸、果胶酯酸、过硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊酸、2-羟基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟脑磺酸、柠檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、肥酸、藻酸、马来酸、富马酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗坏血酸、葡庚酸、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水杨酸、半硫酸或硫氰酸。

另外，具有足够酸性的本发明化合物的另一种适合的药学可接受的盐是碱金属盐例如钠盐或钾盐，碱土金属盐例如钙盐或镁盐，铵盐，或与提供生理学可接受的阳离子的有机碱形成的盐，例如与如下物质形成的盐：N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、赖氨酸、二环己基胺、1，6-己二胺、乙醇胺、葡糖胺、肌氨酸、丝氨醇、三羟基甲基氨基甲烷、氨基丙二醇、sovak碱、1-氨基-2，3，4-丁三醇。另外，碱性含氮基团可用如下试剂季铵化：低级烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯和硫酸二丁酯、以及硫酸二戊酯；长链卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物如苄基和苯乙基溴化物等。

本领域技术人员还会认识到，所要求保护的化合物的酸加成盐可通过多种已知方法中的任意一种使所述化合物与适当的无机酸或有机酸反应来制备。或者，本发明的酸性化合物的碱金属盐和碱土金属盐通过各种已知的方法使本发明的化合物与适当的碱反应来制备。

本发明包括本发明化合物的所有可能的盐，其可为单一盐或所述盐的任意比例的任意混合物。

本文使用的术语“体内可水解的酯”应理解为表示包含羧基或羟基的本发明化合物的体内可水解的酯，例如可在人体或动物体内被水解从而产生母体酸或醇的药学可接受的酯。对于羧基的适合的药学可接受的酯包括例如烷基酯、环烷基酯和被任选取代的苯基烷基酯特别是苄基酯、C₁-C₆烷氧基甲基酯例如甲氧基甲基酯、C₁-C₆烷酰氧基甲基酯例如特戊酰氧基甲基酯、酞基酯、C₃-C₈环烷氧基羰氧基-C₁-C₆烷基酯例如1-环己基羰氧基乙基酯；1，3-二氧杂环戊烯-2-羰基甲基(1，3-dioxolen-2-onylmethyl ester)，例如5-甲基-1，3-二氧杂环戊烯-2-羰基甲基酯；以及C₁-C₆-烷氧基羰氧基乙基酯，例如1-甲氧基羰酰氧基乙基酯，并且所述酯可在本发明化合物的任意羧基上形成。

包含羟基的本发明化合物的体内可水解的酯包括无机酸酯(例如磷酸酯)、[α]酰氧基烷基醚和相关化合物，所述相关化合物由于所述酯的体内水解而断裂形成母体羟基。[α]酰氧基烷基醚的实例包括乙酰氧基甲基醚和2，2-二甲基丙酰氧基甲基醚。与羟基形成体内可水解的酯的基团的选择包括烷酰基、苯甲酰基、苯基乙酰基和取代的苯甲酰基和苯基乙酰基、烷氧羰基(以形成碳酸烷基酯)、二烷基氨基甲酰基和N-(二烷基氨基乙基)-N-烷基氨基甲酰基(以形成氨基甲酸酯)、二烷基氨基乙酰基和羧基乙酰基。本发明包括所有此类酯。

另外，本发明包括本发明化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。

根据第二个方面，本发明包括上文所述的通式(I)的化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、或者前药，其中：

根据第三个方面，本发明包括上文所述的通式(I)的化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药，其中：

根据第四个方面，本发明包括上文所述的通式(I)的化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药，其中：

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R¹和R²相同或不同并且独立地是卤原子或C₂-炔基，其中至少R¹和R²中的一个是卤原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R³是卤原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R^3a是氢原子、卤原子、或者C₁-C₄-烷基。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R⁴是氢原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R⁵是-C(＝O)N(R⁷)(R⁸)基团。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中X是O或NH。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R⁶是氢原子、卤原子、或者C₁-C₆-烷基。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R⁷和R⁸各自独立地是氢原子，或者是任选地被一个或多个卤原子取代的-C₁-C₆-烷基。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R^a、R^b和R^c各自独立地是氢原子，或者是任选地被一个或多个卤原子取代的C₁-C₆-烷基。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R^3a是氢原子或C₁-C₄-烷基。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R^3a是氢原子或卤原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R¹是氟原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R²是碘原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R²是C₂-炔基。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R³是氟原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R^3a是氢原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R⁵是R⁷和R⁸均是氢原子的-C(＝O)N(R⁷)(R⁸)基团。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R⁶每次出现时是氢原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中R_a、R_b和R_c全部是氢原子。

在上述方面的另一实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，其中X是氧原子。

应理解本发明涉及上文所述通式(I)的化合物的本发明任何实施方案范围内的任意亚组合物。

另一方面，本发明包括下文中的实施例部分公开的通式(I)化合物。

根据另一方面，本发明涉及制备本发明化合物的方法，所述方法包括本文所述的步骤。

根据另一方面，本发明涉及可用于通式(I)的本发明化合物的制备，特别是可用于本文所述方法的中间体化合物。具体而言，本发明包括通式(III)化合物：

其中R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^c和X如上文对通式(I)所定义并且PG表示酸敏感保护基团。另外，本发明包括通式(IV)化合物：

其中R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^c和X如上文对通式(I)所定义并且PG表示酸敏感保护基团。

根据又另一方面，本发明涉及上文所述通式(III)的中间体化合物在制备上文所述通式(I)的本发明化合物中的用途。

根据又另一方面，本发明涉及上文所述通式(IV)的中间体化合物在制备上文所述通式(I)的本发明化合物中的用途。

实验细节和一般方法

缩写和同义词

本领域的普通有机化学家使用的缩写的综合列表见The ACS StyleGuide(第三版)或Guidelines for Authors for the Journal of Organic Chemistry。所述列表中包含的缩写以及本领域的普通有机化学家使用的所有缩写通过援引加入本文。在本发明中，根据元素周期表(CAS版，Handbook ofChemistry and Physics，67th Ed.，1986-87)标识化学元素。

更具体地，当本公开通篇使用以下缩写时，它们具有如下含义：

如图谱中所显示描述以下实验部分中的NMR峰形式，未考虑可能的高阶效应(higher order effects)。在一些情况下使用被普遍接收的商购试剂的名称。可使用任选安装了智能元件(robotic unit)的Biotage Initator

微波炉进行使用微波照射的反应。所报告的使用微波加热的反应时间应理解为达到指定反应温度后的固定反应时间。

以下实施例中报告的收率百分数是基于以最低摩尔量使用的起始组分。通过注射器或插管转移对空气和水分敏感的液体和溶液，并通过橡胶隔垫引入反应器内。使用商品级的试剂和溶剂而未进行进一步纯化。术语“减压浓缩”指在约15mmHg的最低气压下使用Buchi旋转蒸发仪。将所有温度报告为未经修正的摄氏度(℃)。

为了更好地理解本发明，列出以下实施例。这些实施例仅用于举例说明，并且不应理解为以任何方式限制本发明的范围。本文提及的所有出版物以其整体通过援引加入本文。

一般方法

后续段落中描述了用于合成本发明关键中间体和化合物的详细的一般操作。

合成通式(I)的化合物

可根据路线I中描述的概括性的路线合成通式(I)的化合物。

路线1

其中R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^b、R^c和X具有上文对通式(I)所定义的含义。PG表示“适合的保护基团”，例如可通过诸如TFA或盐酸的适合试剂裂解的叔丁氧基羰基(BOC)基团，由此释放通式(I)的化合物。化合物A、B和C是可商购的。

通过在0℃-室温的温度下优选在室温下，在诸如三乙胺的适合的碱的存在下与异氰酸氯磺酰酯和叔丁醇反应，将适当取代的3-(氨基甲基)苯酚(X＝OH的通式A化合物)或适当取代的3-(氨基甲基)苯胺(X＝NH₂的通式A化合物)转化成对应的被叔丁氧基羰基(BOC)保护的通式(1)的氨磺酰基衍生物[参见例如49/1，1993，65-76]。

然后通过在室温至所述溶剂的沸点的温度下优选在室温下，在诸如吡啶的适合的碱和诸如乙酸铜(II)的适合的铜(II)盐的存在下，在诸如DCM的适合的溶剂系统中与诸如(3，4，5-三氟苯基)硼酸的适合的硼酸反应，将通式(1)的中间体转化成通式2的二芳基醚中间体(X＝O)或通式(2)的二芳基苯胺中间体(X＝NH₂)[参见例如D.A.Evans等人，Tetrahedron Letters，39(1998)2937-2940；D.M.T.Chan等人，Tetrahedron Letters 1998，39，2933]。

然后通过在-78℃-室温的温度下，在诸如THF的适合的溶剂中与诸如LDA的适合的碱反应将通式(2)的中间体金属化，并接着通过如此形成的金属化物质与二氧化碳或二氧化碳等同物的反应将其羧酸化以生成通式(3)的中间体。

然后通过在-5℃-室温的温度下，在诸如THF的适合的溶剂中，在诸如LiHMDS的适合的碱的存在下与通式(B)的2，4-取代苯胺反应，将通式(3)的合成中间体转化成通式(4)的中间体。

然后通过在0℃-50℃的温度下，在诸如DMF的适合的溶剂中，在诸如1，1′-羰基二咪唑的适合的活化剂的存在下与通式H-N(R⁷)(R⁸)的胺反应，将通式(4)的合成中间体转化成通式(5)的苯甲酰胺中间体。

然后可通过本领域技术人员已知的烷基化反应任选将通式(5)的合成中间体转化成通式(6)的化合物。

然后通过本领域技术人员已知的方法裂解保护基团将通式(6)的合成中间体转化成通式(7)的化合物，例如通过在室温至所述溶剂的沸点的温度下，在诸如DCM的适合的溶剂中，在诸如TFA的适合的酸的存在下裂解叔丁氧基羰基。

然后可通过本领域技术人员已知的烷基化反应任选将通式(7)的合成中间体转化成通式(I)的化合物。

根据本发明的方法制备的化合物和中间体可能需要纯化。有机化合物的纯化为本领域技术人员公知并且有数种纯化相同化合物的方法。在一些情况下，没有必要进行纯化。在一些情况下，可通过结晶纯化所述化合物。在一些情况下，可通过使用适合的溶剂进行搅拌除去杂质。在一些情况下，所述化合物可通过色谱法特别是快速色谱法纯化，使用例如预填充的硅胶柱(例如来自Separtis的IsoluteFlash硅胶或Isolute

Flash NH2硅胶)，其与适合的色谱系统例如Flashmaster II(Separtis)或Isolera system(Biotage)和洗脱液例如己烷/乙酸乙酯或DCM/甲醇梯度组合。在一些情况下，所述化合物可通过制备型HPLC纯化，使用装配了二极管阵列检测器和/或在线电喷雾电离质谱仪的Waters自动纯化器，其例如与适合的预填充反相柱和洗脱液(例如可包含诸如三氟乙酸、甲酸或氨水的水和乙腈的梯度)组合。

在一些情况下，如上所述的纯化方法可提供为盐形式的具有足够碱性或酸性的官能度的本发明的那些化合物，例如在本发明的化合物具有足够碱性的情况下为例如三氟乙酸盐或甲酸盐，或者在本发明的化合物具有足够酸性的情况下为例如铵盐。可通过本领域技术人员已知的各种方法将此类型的盐转化成其游离碱或游离酸的形式，或者作为盐用于后续的生物学测定中。应理解本文描述的分离的本发明化合物的特定形式(例如盐、游离碱等)不一定是所述化合物可用于生物学测定以定量特异的生物学活性的唯一形式。

如下进行分析型UPLC-MS：

方法A：系统：具有PDADetector的UPLC Acquity(Waters)和Waters ZQ质谱仪；柱子：Acquity BEH C18 1.7μm 2.1x50mm；温度：60℃；溶剂A：水+0.1％甲酸；溶剂B：乙腈；梯度：99％A→1％A(1.6min)→1％A(0.4min)；流速：0.8mL/min；进样体积：1.0μl(0.1mg-1mg/mL样品浓度)；检测：PDA扫描范围210-400nm-固定，ESI(+)扫描范围170-800m/z。

使用ACD/12.00版Name Batch生成化合物的名称。

合成中间体

中间体1.A

制备[(3-羟基苄基)氨磺酰基]氨基甲酸叔丁酯

溶液A：将6.321g异氰酸氯磺酰酯(44.659mmol，1.1eq.)溶解于60ml干燥的二氯甲烷中。于室温加入叔丁醇在30ml干燥的二氯甲烷中的溶液并另搅拌5min。

溶液B：将5g 3-(氨基甲基)苯酚(40.599mmol，1eq.)悬浮于110mL干燥的二氯甲烷中，加入6,791ml三乙胺(48.719mmol，1.2eq.)并将混合物冷却至0℃，然后滴加溶液A。于室温继续搅拌1h。

通过加入半浓缩的氯化铵溶液使所述反应混合物终止反应，用二氯甲烷稀释并使相分离。用二氯甲烷将分离的水相重新萃取两次。用盐水洗涤合并的有机层，用硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。通过结晶纯化残留物，得到6.469克(53％收率)目标化合物。

¹H-NMR(d₆-DMSO；300MHz)：δ＝10.79(br.s，1H)；9.30(s，1H)；8.04(dd，1H)；7.05(dd，1H)；6.72-6.65(m，2H)；6.59(dm，1H)；3.89(d，2H)；1.37(s，9H).

LC-MS：保留时间：0.88min

MS ES^-：301.2[M-H]^-

中间体2.A

制备{[3-(3，4，5三氟苯氧基)苄基]氨磺酰基}氨基甲酸叔丁酯

将500mg[(3-羟基苄基)氨磺酰基]氨基甲酸叔丁酯(1.654mmol，1.eq.)溶解于40ml干燥的二氯甲烷中并过4A°分子筛，加入700μl干燥的吡啶(8.269mmol，5.eq.)、300mg乙酸铜(II)(1.654mmol，1.eq.)和873mg(3，4，5-三氟苯基)硼酸(4.961mmol，3.eq.)。于室温将该混合物搅拌18h。过滤所得浆状物质以除去残留原料并将滤液真空浓缩。通过快速柱色谱法纯化残留物，得到110mg(15％收率)UV-纯度为86％的目标化合物。将该物质用于后续转化。

¹H-NMR(d₆-DMSO；300MHz)：δ＝10.83(br.s，1H)；8.14(br.dd，1H)；7.34(dd，1H)；7.14(br.d，1H)；7.04(m，1H)；7.02-6.91(m，3H)；4.09(d，2H)；1.34(s，9H).

LC-MS：保留时间：1.38min

MS ES^-：431.1[M-H]^-

中间体3.A

制备6-[3-({[(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]氨基}甲基)苯氧基]-2，3，4-三氟苯甲酸

将110mg{[3-(3，4，5三氟苯氧基)苄基]氨磺酰基}氨基甲酸叔丁酯(0.254mmol，1.eq.；UV纯度为86％)溶解于1mL干燥的THF中并冷却至-78℃，然后滴加283ml LDA溶液(0.509mmol，2.eq.；THF中1.8M)。于-78℃将该反应混合物搅拌2h，然后加温至室温并维持18h。将所述反应混合物冷却至-78℃，然后滴加499ml LDA溶液(0.898mmol，3.53eq.；THF中1.8M)并于-78℃将所述混合物搅拌2h。在该温度下使用隔垫和插管向反应溶液通入升华的二氧化碳气流。使该混合物达到室温并维持18h，然后真空浓缩。使残留物在各为8ml的1N氢氧化钠水溶液和甲乙酮之间分配。用1N盐酸水溶液酸化水层(达到pH＝1)并用甲乙酮重新萃取两次。将合并的有机层用10ml水洗涤一次并用10ml盐水洗涤一次，在硅酮滤器上干燥并真空浓缩，得到UV-纯度为80％的粗目标化合物。将该物质用于后续转化反应。

¹H-NMR(d₆-DMSO；300MHz)：δ＝13.99(br.s，1H)；10.84(br.s，1H)；8.17(dd，1H)；7.31(dd，1H)；7.12(br.d，1H)；7.01(br.s，1H)；6.91-6.82(m，2H)；4.08(d，2H)；1.34(s，9H).

LC-MS：保留时间：1.16min

MS ES^-：475.43[M-H]^-

中间体4.A

制备6-[3-({[(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]氨基}甲基)苯氧基]-3，4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]苯甲酸

将92mg粗6-[3-({[(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]氨基}甲基)苯氧基]-2，3，4-三氟乙酸(0.193mmol，1.eq)溶解于5mL干燥的THF中，冷却至-5℃(浴器温度)并滴加579μl LiHMDS溶液(0.579mmol，3eq.；THF中1M)处理。使该混合物达到室温并搅拌18h。然后于室温滴加另外的579μl LiHMDS溶液(0.579mmol，3eq.；THF中1M)并继续搅拌18h。于室温滴加另外的290μlLiHMDS溶液(0.290mmol，1.5eq.；THF中1M)并继续搅拌3h。使反应混合物在各为30ml的半浓缩的氯化铵溶液和乙酸乙酯之间分配。相分离后，用乙酸乙酯将分离的水层重新萃取两次，每次25ml。将合并的有机层用30ml水洗涤一次并用30ml盐水洗涤一次，在硅酮滤器上干燥并真空浓缩，得到为类褐色油的粗目标化合物。

在硅胶上进行的快速色谱法提供26mg目标化合(0.03mmol，17％收率)。

¹H-NMR(d₆-DMSO；300MHz)：δ＝10.88(br.s，1H)；9.51(br.s，1H)；8.00(br.s，1H)；7.52(dd，1H)；7.34(br.d，1H)；7.21(dd，1H)；6.98(br.d，1H)；6.88(br.s，1H)；6.72(br.dd，1H)；6.67-6.53(m，2H)；4.03(d，2H)；1.36(s，9H).

LC-MS：保留时间：1.43min

MS ES^-：692.39[M-H]^-

中间体5.A

制备[(3-{2-氨基甲酰基-4，5-二氟-3-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]苯氧基}苄基)氨磺酰基]氨基甲酸叔丁酯

将33mg 6-[3-({[(叔丁氧基羰基)氨磺酰基]氨基}甲基)苯氧基]-3，4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]苯甲酸(0.048mmol，1eq.)溶解于178ml DMF中并加入18mg 1，1′-羰二咪唑(0.110mmol，2.31eq.)。将该混合物加热至50℃并在该温度下搅拌2h。将所得反应混合物冷却至0℃并加入551μl氨水(7.510mmol，158eq.；26％)。于室温将所述混合物搅拌18h，然后用水终止反应并另搅拌2h以形成类褐色的浆状物质。将该混合物溶解于15ml乙酸乙酯中并使相分离。用乙酸乙酯将水层重新萃取两次，每次10ml。将合并的有机层用15ml盐水洗涤一次，分离有机层并在硅酮滤器上干燥并真空浓缩。通过制备型薄层色谱纯化粗产物，得到11.8mg期望产物(0.02mmol，36％收率)。

¹H-NMR(d₆-DMSO；400MHz)：δ＝10.85(br.s，1H)；8.15(br.s，1H)；8.08(s，1H)；7.81(s，1H)；7.75(s，1H)；7.53(dd，1H)；7.33(br.d，1H)；7.32(dd，1H)；7.12(d，1H)；7.06((br.s，1H)；6.94(dd，1H)；6.70-6.61(m，2H)；4.08(d，2H)；1.35(s，9H).

LC-MS：保留时间：1.44min

MS ES⁺：692.8[M+H]⁺

实施例化合物

实施例1

制备3，4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]-6-{3-[(氨磺酰基氨基)甲基]苯氧基}苯甲酰胺

将10mg[(3-{2-氨基甲酰基-4，5-二氟-3-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]苯氧基}苄基)氨磺酰基]氨基甲酸叔丁酯(0.014mmol，1eq.)溶解于186μL二氯甲烷中并用33μL三氟乙酸(0.433mmol，30eq.)处理，并于室温搅拌18小时。将反应混合物浓缩并接着在二氯甲烷和半浓缩的碳酸氢钠溶液之间分配。用二氯甲烷将水层重新萃取两次。将合并的有机层用饱和的氯化钠溶液洗涤一次、干燥、过滤并真空浓缩，得到8mg具有足够纯度的期望产物(94％收率)。

¹H-NMR(d₆-DMSO；300MHz)：δ＝8.08(br.s，1H)；7.82(br.s，1H)；7.77(br.s，1H)；7.52(dd，1H)；7.33(m，2H)；7.13(br.d，1H)；7.08(m，2H)；6.92(dd，1H)；6.72-6.59(m，4H)；4.05(d，2H).

LC-MS：保留时间：1.27min

MS ES⁺：592.8[M+H]⁺

另外，可通过本领域技术人员已知的任何方法将本发明的式(I)的化合物转化成本文所述的任何盐。相似地，可通过本领域技术人员已知的任何方法将本发明式(I)的化合物的任何盐转化成游离的化合物。

本发明化合物的药物组合物

本发明还涉及包含一种或多种本发明的化合物的药物组合物。可利用这些组合物通过向有此需要的患者给药实现期望的药理学作用。就本发明而言，患者是需要治疗具体病症或疾病的包括人在内的哺乳动物。因此，本发明包括这样的药物组合物，其包含药学可接受的载体和药学有效量的本发明的化合物或其盐。药学可接受的载体优选是这样的载体，其在与活性成分的有效活性一致的浓度下对患者相对无毒且无害，以致于由所述载体引起的任何副作用不会破坏所述活性成分的有利作用。药学有效量的化合物优选是对正在治疗的具体病症产生结果或者产生影响的量。可使用包括速释、缓释和定时释放制剂在内的任何有效的常规剂量单位形式，将本发明化合物与药学可接受的载体一起以如下方式给药：口服、肠胃外、局部、鼻腔、眼部(ophthalmically)、眼部(optically)、舌下、直肠、阴道给药等。

对于口服给药，可将所述化合物配制成固体或液体制剂，例如胶囊剂、丸剂、片剂、含锭(troche)、锭剂(lozenge)、熔胶剂(melt)、散剂、溶液剂、混悬剂或乳剂，并且可根据本领域已知的用于制备药物组合物的方法来制备。固体单位剂型可为胶囊剂，其可为普通的硬胶囊或软明胶胶囊型，包含例如表面活性剂、润滑剂和惰性填充剂例如乳糖、蔗糖、磷酸钙和玉米淀粉。

在另一实施方案中，可将本发明化合物和常规片剂基质(例如乳糖、蔗糖和玉米淀粉)一起并与如下物质组合压制成片剂：粘合剂例如阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶，用于辅助给药后所述片剂分解和溶出的崩解剂例如土豆淀粉、藻酸、玉米淀粉和瓜尔胶、西黄蓍胶、阿拉伯胶，用于提高片剂制粒的流动性并且防止片剂材料与片剂模具和冲头的表面粘附的润滑剂，例如滑石、硬脂酸或硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌，以及用于改善所述片剂的感官性质和使它们更容易被患者接受的染料、着色剂和调味剂，例如薄荷油、冬青油或樱桃香精。用于口服液体剂型的适合的赋形剂包括磷酸二钙和稀释剂例如水和醇(例如乙醇、苯甲醇和聚乙烯醇)，添加或不添加药学可接受的表面活性剂、助悬剂或乳化剂。可以存在各种其它物质作为包衣或者用于改变剂量单位的物理形式。例如可用虫胶、糖或二者将片剂、丸剂或胶囊剂包衣。

可分散的散剂和颗粒剂适合用于制备水性混悬剂。它们提供与分散剂或润湿剂、助悬剂以及一种或多种防腐剂混合的活性成分。适合的分散剂或润湿剂和助悬剂的实例为上文提及的那些。还可存在另外的赋形剂例如上文所述的那些甜味剂、调味剂和着色剂。

本发明的药物组合物还可为水包油乳剂的形式。油相可为植物油例如液体石蜡、或植物油的混合物。适合的乳化剂可为(1)天然树胶，例如阿拉伯树胶和西黄蓍胶，(2)天然磷脂，例如大豆磷脂和卵磷脂，(3)衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，例如脱水山梨糖醇单油酸酯，(4)所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。所述乳剂还可包含甜味剂和调味剂。

可通过将所述活性成分悬浮在植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中或者悬浮在矿物油例如液体石蜡中配制油性混悬剂。所述油性混悬剂可包含增稠剂，例如蜂蜡、固体石蜡或鲸蜡醇。所述混悬剂还可包含一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯；一种或多种着色剂；一种或多种调味剂；以及一种或多种甜味剂，例如蔗糖或糖精。

可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制糖浆剂和酏剂。此类制剂还可包含缓和剂和防腐剂例如尼泊金甲酯和尼泊金丙酯以及调味剂和着色剂。

还可将本发明的化合物作为所述化合物的注射剂量进行肠胃外给药，即皮下、静脉内、眼内、滑膜内、肌内或腹膜内给药，所述注射剂量优选在具有药物载体的生理学可接受的稀释剂中，所述药物载体可为无菌液体或液体的混合物，例如水，盐水，右旋糖水溶液和相关的糖溶液，醇例如乙醇、异丙醇或十六醇，二醇例如丙二醇或聚乙二醇，甘油缩酮例如2，2-二甲基-1，1-二氧戊环-4-甲醇，醚例如聚(乙二醇)400，油，脂肪酸，脂肪酸酯或脂肪酸甘油酯或乙酰化脂肪酸甘油酯，添加或不添加药学可接受的表面活性剂例如肥皂或去污剂、助悬剂例如果胶、卡波姆、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素或羧甲基纤维素、或乳化剂和其他药学辅剂。

可用于本发明的肠胃外制剂中的示例性的油是来源于石油、动物、植物或合成的那些油，例如花生油、大豆油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄榄油、凡士林油和矿物油。适合的脂肪酸包括油酸、硬脂酸、异硬脂酸和肉豆蔻酸。适合的脂肪酸酯是例如油酸乙酯和肉豆蔻酸异丙酯。适合的肥皂包括脂肪酸碱金属盐、铵盐和三乙醇胺盐，适合的去污剂包括阳离子去污剂例如二甲基二烷基卤化铵、烷基卤化吡啶和烷基胺醋酸盐；阴离子去污剂，例如烷基磺酸盐、芳基磺酸盐和烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐和烷基磺基琥珀酸盐、烯烃硫酸盐和烯烃磺基琥珀酸盐、醚硫酸盐和醚磺基琥珀酸盐以及单酸甘油酯硫酸盐和单酸甘油酯磺基琥珀酸盐；非离子型去污剂，例如脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇酰胺以及聚(氧乙烯-氧丙烯)、环氧乙烷共聚物或环氧丙烷共聚物；以及两性去污剂，例如烷基-β-氨基丙酸盐和2-烷基咪唑啉季铵盐，以及混合物。

本发明的肠胃外组合物通常会在溶液中包含约0.5-约25重量％的所述活性成分。还可有利地使用防腐剂和缓冲剂。为了最小化或消除对注射部位的刺激，此类组合物可包含亲水-亲脂平衡(HLB)优选为约12-约17的非离子表面活性剂。此类制剂中表面活性剂的量优选为约5-约15重量％。所述表面活性剂可为具有以上HLB的单一成分，或者为两种或多种具有期望的HLB的成分的混合物。

用于肠胃外制剂的示例性表面活性剂是聚乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯类例如脱水山糖梨醇单油酸酯，以及环氧乙烷与疏水性基质的高分子量加合物，所述疏水性基质由环氧丙烷和丙二醇缩合形成。

所述药物组合物可为注射用无菌水性混悬剂的形式。可根据已知的方法使用如下物质配制此类混悬剂：适合的分散剂或润湿剂和助悬剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂，其可为天然的磷脂例如卵磷脂、环氧烷烃与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯、环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物例如十七乙烯氧基鲸蜡醇、环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯、或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。

无菌注射制剂还可为在无毒的肠胃外给药可接受的稀释剂或溶剂中的注射用无菌溶液或悬浮液。可使用的稀释剂和溶剂为例如水、林格液、等渗的氯化钠溶液和等渗的葡萄糖溶液。另外，将无菌不挥发油常规性用作溶剂或悬浮介质。就此而言，可使用任何刺激性小的不挥发油，包括合成的单酸甘油酯或甘油二酯。另外，可将脂肪酸例如油酸用于注射剂的制备中。

还可将本发明的组合物以用于药物的直肠给药的栓剂的形式给药。可通过将药物与在常温下为固体但是在直肠温度下为液体并且因此可在直肠中熔化而释放所述药物的适合的无刺激性的赋形剂混合来制备这些组合物。此类物质是例如可可脂和聚乙二醇。

本发明的方法中使用的另一种制剂利用透皮递送装置(“贴剂”)。此类透皮贴剂可用于提供可控量的本发明化合物的连续或非连续输入。用于递送药剂的透皮贴剂的构造和使用是本领域公知的(参见，例如1991年6月11日公告的第5,023,252号美国专利，其通过援引加入本文)。可将此类贴剂构造成用于连续地、脉冲式或按需递送药剂。

用于肠胃外给药的控释制剂包括本领域已知的脂质体微球、聚合物微球和聚合物凝胶制剂。

可能需要或必须通过机械递送装置将所述药物组合物递送至患者。用于递送药剂的机械递送装置的构造和使用是本领域公知的。例如将药物直接给药至脑的直接技术通常涉及将药物递送导管置入患者的脑室系统以绕过血脑屏障。用于将药剂运输至身体的具体解剖学位置的此类植入式递送系统记载于1991年4月30日公告的第5,011,472号美国专利。

本发明的组合物还必须或视需要包含通常被称作载体或稀释剂的其他常规的药学可接受的制剂成分。可使用将此类组合物制备成适合的剂型的常规操作。此类成分和操作包括记载于如下参考文献中的那些，所述参考文献均通过援引加入本文：Powell，M.F.等人，″Compendium of Excipients forParenteral Formulations″PDA Journal of Pharmaceutical Science&Technology 1998，52(5)，238-311；Strickley，R.G″Parenteral Formulations ofSmall Molecule Therapeutics Marketed in the United States(1999)-Part-1″PDAJournal of Pharmaceutical Science&Technology 1999，53(6)，324-349；以及Nema，S.等人，″Excipients and Their Use in Injectable Products″PDA Journalof Pharmaceutical Science&Technology 1997，51(4)，166-171。

适当时可用于将所述组合物配制成用于预期给药途径的常用药物成分包括：

酸化剂(实例包括但不限于乙酸、柠檬酸、富马酸、盐酸、硝酸)；

碱化剂(实例包括但不限于氨水、碳酸铵、二乙醇胺、单乙醇胺、氢氧化钾、硼酸钠、碳酸钠、氢氧化钠、三乙醇胺(triethanolamine)、三乙醇胺(trolamine))；

吸附剂(实例包括但不限于粉状纤维素和活性炭)；

气雾剂抛射剂(实例包括但不限于二氧化碳、CCl₂F₂、F₂ClC-CClF₂和CClF₃)；

驱空气剂(air displacement agents)(实例包括但不限于氮气和氩气)；

抗真菌防腐剂(实例包括但不限于苯甲酸、尼泊金丁酯、尼泊金乙酯、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯甲酸钠)；

抗菌防腐剂(实例包括但不限于苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲醇、西吡氯铵、三氯叔丁醇、苯酚、苯乙醇、硝酸苯汞和硫柳汞)；

抗氧化剂(实例包括但不限于抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁羟茴醚、丁羟甲苯、次磷酸、硫代甘油、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、甲醛次硫酸氢钠、焦亚硫酸钠)；

粘合物质(实例包括但不限于嵌段聚合物、天然和合成橡胶、聚丙烯酸酯、聚氨酯、硅酮、聚硅氧烷以及苯乙烯-丁二烯共聚物)；

缓冲剂(实例包括但不限于偏磷酸钾、磷酸氢二钾、乙酸钠、无水柠檬酸钠以及柠檬酸钠二水合物)；

载体(实例包括但不限于阿拉伯胶糖浆、芳香剂糖浆、芳香剂酏剂、樱桃糖浆、可可糖浆、橙皮糖浆、糖浆、玉米油、矿物油、花生油、芝麻油、抑菌的氯化钠注射液和抑菌的注射用水)

螯合剂(实例包括但不限于依地酸钠和依地酸)；

着色剂(实例包括但不限于FD&C Red No.3、FD&C Red No.20、FD&CYellow No.6、FD&C Blue No.2、D&C Green No.5、D&C Orange No.5、D&CRed No.8、焦糖以及红氧化铁)。

澄清剂(实例包括但不限于膨润土)；

乳化剂(实例包括但不限于阿拉伯胶、聚西托醇、鲸蜡醇、单硬脂酸甘油酯、卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯50单硬脂酸酯)；

成胶囊剂(实例包括但不限于明胶和邻苯二甲酸醋酸纤维素)；

香料(实例包括但不限于茴香油、肉桂油、可可、薄荷醇、橙油、薄荷油和香草醛)；

湿润剂(实例包括但不限于甘油、丙二醇和山梨糖醇)；

研磨剂(实例包括但不限于矿物油和甘油)；

油(实例包括但不限于花生油、矿物油、橄榄油、花生油、芝麻油和植物油)；

软膏基质(实例包括但不限于羊毛脂、亲水软膏、聚乙二醇软膏、凡士林油、亲水凡士林油、白色软膏、黄色软膏以及玫瑰水软膏)；

渗透增强剂(透皮递送)(实例包括但不限于单羟基或多羟基醇类、一价或多价醇类、饱和或不饱和脂肪醇类、饱和或不饱和脂肪酯类、饱和或不饱和二羧酸类、精油类、磷脂酰衍生物、脑磷脂、萜类、酰胺类、醚类、酮类和脲类)；

增塑剂(实例包括但不限于邻苯二甲酸二乙酯和甘油)；

溶剂(实例包括但不限于乙醇、玉米油、棉籽油、甘油、异丙醇、矿物油、油酸、花生油、纯化水、注射用水、无菌注射用水和无菌冲洗用水)；

硬化剂(实例包括但不限于鲸蜡醇、十六烷基酯蜡、微晶蜡、石蜡、硬脂醇、白蜡和黄蜡)；

栓剂基质(实例包括但不限于可可脂和聚乙二醇(混合物))；

表面活性剂(实例包括但不限于苯扎氯铵、壬苯醇醚10、辛苯昔醇9、聚山梨酯80、十二烷基硫酸钠和山梨糖醇酐单棕榈酸酯)；

助悬剂(实例包括但不限于琼脂、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钠、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、高岭土、甲基纤维素、黄蓍胶和硅酸镁铝)；

甜味剂(实例包括但不限于阿司帕坦、右旋糖、甘油、甘露醇、丙二醇、糖精钠、山梨糖醇和蔗糖)；

片剂抗粘附剂(实例包括但不限于硬脂酸镁和滑石)；

片剂粘合剂(实例包括但不限于阿拉伯胶、藻酸、羧甲基纤维素钠、可压糖、乙基纤维素、明胶、液体葡萄糖、甲基纤维素、非交联聚乙烯吡咯烷酮和预胶化淀粉)；

片剂和胶囊剂稀释剂(实例包括但不限于磷酸氢钙、高岭土、乳糖、甘露醇、微晶纤维素、粉状纤维素、沉淀碳酸钙、碳酸钠、磷酸钠、山梨糖醇和淀粉)；

片剂包衣剂(实例包括但不限于液体葡萄糖、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、邻苯二甲酸醋酸纤维素和虫胶)；

片剂直接压制赋形剂(实例包括但不限于磷酸氢钙)；

片剂崩解剂(实例包括但不限于藻酸、羧甲基纤维素钙、微晶纤维素、泼拉克林钾(polacrillin potassium)、交联聚乙烯吡咯烷酮、藻酸钠、羟基乙酸淀粉钠和淀粉)；

片剂助流剂(实例包括但不限于胶体二氧化硅、玉米淀粉和滑石)；

片剂润滑剂(实例包括但不限于硬脂酸钙、硬脂酸镁、矿物油、硬脂酸和硬脂酸锌)；

片剂/胶囊剂遮光剂(实例包括但不限于二氧化钛)；

片剂抛光剂(实例包括但不限于巴西棕榈蜡和白蜡)；

增稠剂(实例包括但不限于蜂蜡、鲸蜡醇和石蜡)；

张力剂(实例包括但不限于右旋糖和氯化钠)；

粘性增强剂(实例包括但不限于藻酸、膨润土、卡波姆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、藻酸钠和黄蓍胶)；以及

润湿剂(实例包括但不限于十七乙烯氧基鲸蜡醇、卵磷脂、山梨糖醇单油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯和聚氧乙烯硬脂酸酯)。

本发明的药物组合物可举例如下：

无菌IV溶液剂：可使用无菌注射用水制备本发明的期望化合物的5mg/mL溶液，可视需要调节pH。用无菌5％右旋糖将所述溶液稀释至1-2mg/mL用于给药，并且在约60min内以IV输注给药。

用于IV给药的冻干粉：可用(i)100-1000mg的冻干粉形式的本发明的期望化合物，(ii)32-327mg/mL柠檬酸钠，和(iii)300-3000mg右旋糖酐40制备无菌制剂。用无菌注射用盐水或5％右旋糖将该制剂复溶至10-20mg/mL的浓度，然后用盐水或5％右旋糖进一步稀释至0.2-0.4mg/mL，并且IV推注或在15-60分钟内IV输注给药。

肌内注射混悬剂：可制备以下溶液剂或混悬剂用于肌内注射：

50mg/mL期望的水不溶性的本发明化合物

5mg/mL羧甲基纤维素钠

4mg/mL TWEEN 80

9mg/mL氯化钠

9mg/mL苯甲醇

硬胶囊剂：通过用100mg粉状活性成分、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁填充标准的两片式硬胶囊制备大量的单位胶囊剂。

软明胶胶囊剂：制备活性成分在可消化的油例如大豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物并且通过容积式泵注入熔化的明胶中形成包含100mg所述活性成分的软明胶胶囊。将胶囊洗涤并干燥。可将所述活性成分溶解于聚乙二醇、甘油和山梨糖醇的混合物中以制备水混溶性药物混合物。

片剂：通过常规操作制备大量片剂，使得剂量单位包含100mg活性成分、0.2mg胶体二氧化硅、5mg硬脂酸镁、275mg微晶纤维素、11mg淀粉和98.8mg乳糖。可采用适当的水性和非水性包衣以增加适口性、改善外观和稳定性或延迟吸收。

速释片剂/胶囊剂：这些是通过常规方法和新方法制备的固体口服剂型。不需用水而将这些单位口服，用于药物的即刻溶出和递送。将所述活性成分混合在包含诸如糖、明胶、果胶和甜味剂的成分的液体中。通过冷冻干燥和固态萃取技术使这些液体固化成固体片剂或囊片。可将药物化合物与粘弹性和热弹性的糖和聚合物或泡腾组分一起压片以制备在不需要水的条件下速释的多孔基质。

组合治疗

可将本发明的化合物作为唯一药剂给药或者与一种或多种其他药剂组合给药，其中所述组合不会引起不可接受的不良作用。本发明还涉及此类组合。例如，可将本发明的化合物与已知的抗过度增殖性疾病或其他适应症的药剂等以及与它们的混合物和组合进行组合。其他适应症药剂包括但不限于抗血管生成剂、有丝分裂抑制剂、烷化剂、抗代谢剂、DNA-嵌入抗生素、生长因子抑制剂、细胞周期抑制剂、酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、生物响应调节剂或抗激素。

另外的药剂可为阿地白介素、阿仑膦酸、α-干扰素(Alfaferone)、阿利维A酸、别嘌醇、注射用别嘌醇钠(Aloprim)、盐酸帕洛诺司琼注射剂(Aloxi)、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨磷汀、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、多拉司琼片(Anzmet)、阿法达贝泊汀注射剂(Aranesp)、Arglabin、三氧化二砷、依西美坦片、5-氮杂胞苷、硫唑嘌呤、BCG或Tice BCG、抑氨肽酶素b(bestatin)、醋酸倍他米松、倍他米松磷酸酯钠、贝沙罗汀、硫酸博来霉素、溴尿苷、硼替佐米、白消安、降钙素、阿仑单抗(Campath)、卡培他滨、卡铂、比卡鲁胺、Cefesone、西莫白介素、柔红霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、克拉屈滨、氯屈瞵酸(clodronic acid)、环磷酰胺、阿糖胞苷、卡达巴嗪、更生霉素、枸橼酸柔红霉素脂质体(DaunoXome)、地塞米松、地塞米松磷酸钠、戊酸雌二醇、地尼白介素融合2毒素(Denileukin diftitox)、甲基氢化泼尼松、地洛瑞林、右雷佐生、己烯雌酚、氟康唑、多西他赛、去氧氟尿苷、多柔比星、屈大麻酚、DW-166HC、醋酸亮丙瑞林(Eligard)、拉布立酶注射剂(Elitek)、盐酸表柔比星注射剂(Ellence)、阿瑞吡坦胶囊(Emend)、表柔比星、阿法依伯汀(epoetin alfa)、阿法依伯汀(Epogen)、依他铂、左旋咪唑、雌二醇(Estrace)、雌二醇、雌莫司汀磷酸钠、炔雌醇、氨磷汀、依替膦酸、依托泊苷注射剂、依托泊苷、法倔唑、farston、非格司亭、非那雄胺、非格司亭、氟尿苷、氟康唑、氟达拉滨、单磷酸5-氟脱氧尿苷、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟甲睾酮、氟他胺、福美坦、fosteabine、福莫司汀、氟维司群、γ-球蛋白(Gammagard)、吉西他滨、吉姆单抗、甲磺酸伊马替尼(Gleevec)、卡莫司汀(Gliadel)、戈舍瑞林、盐酸格拉司琼、组氨瑞林、托泊替康(Hycamtin)、氢化可的松、红羟基壬基腺嘌呤(eyrthro-hydroxynonyladenine)、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、α干扰素、α2干扰素、α-2A干扰素、α-2B干扰素、α-n1干扰素、α-n3干扰素、β干扰素、γ-1a干扰素、白介素-2、干扰素α-2B(intron A)、吉非替尼片(Iressa)、伊立替康、格拉司琼、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、左亚叶酸钙盐(levofolinic acid calcium salt)、左甲状腺素钠、Levoxyl、洛莫司汀、氯尼达明、屈大麻酚、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、甲钴胺、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、酯化雌激素片(Menest)、6-巯基嘌呤、美司钠、甲氨喋呤、Metvix、米替福新、米诺环素、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌(mitoxantrone)、Modrenal、Myocet、奈达铂、非格司亭(Neulasta)、重组人白介素11(Neumega)、非格司亭、尼鲁米特、他莫昔芬、NSC-631570、OCT-43、奥曲肽、盐酸昂丹司琼、头孢沙定、奥沙利铂、帕利他西(paclitaxel)、泼尼松磷酸钠(Pediapred)、培门冬酶、Pegasys、喷司他丁、溶链菌(picibanil)、盐酸毛果芸香碱、吡柔比星、普卡霉素、卟菲尔钠、泼尼莫司汀、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松、马雌激素、丙卡巴肼、重组人类红细胞生成素α、雷替曲塞、重组人干扰素β1a注射液(Rebif)、铼-186、羟乙膦酸盐(etidronate)、利妥昔单抗、罗扰素(Roferon-A)、罗莫肽、盐酸毛果芸香碱(Salagen)、奥曲肽、沙格司亭、司莫司汀、西佐喃、索布佐生、泼尼松龙、膦门冬酸、干细胞疗法、链佐星、氯化锶89、左甲状腺素钠、他莫昔芬、坦洛新、他索纳明、睾内酯、泰素替尔、替西白介素、替莫唑胺、替尼泊苷、丙酸睾酮、甲睾酮、硫鸟嘌呤、塞替派、促甲状腺激素、替鲁膦酸、托泊替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维甲酸、甲氨蝶呤(Trexall)、三甲基三聚氰胺、三甲曲沙、醋酸曲普瑞林、扑酸曲普瑞林、RDEA 119、UFT、尿苷、戊柔比星、维司力农、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、维鲁利秦、右雷佐生、净司他丁斯酯(zinostatin stimalamer)、昂丹司琼、ABI-007、Acolbifene、干扰素γ-1b(Actimmune)、Affinitak、氨基蝶呤、阿佐昔芬、Asoprisnil、阿他美坦、阿曲生坦、索拉非尼(sorafenib)、贝伐珠单抗(Avastin)、CCI-779、CDC-501、塞来昔布、西妥昔单抗、克立那托、醋酸环丙孕酮、地西他滨、DN-101、多柔比星-MTC、dSLIM、度他雄胺、Edotecarin、依氟鸟氨酸、依沙替康、芬维A胺、二盐酸组胺、组氨瑞林水凝胶植入剂、钬-166DOTMP、伊班膦酸、γ干扰素、PEG化干扰素α-2b(intron-PEG)、伊沙匹隆(ixabepilone)、匙孔血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin)、L-651582、兰瑞肽、拉索昔芬、Libra、Lonafarnib、米泼昔芬、米诺膦酸(Minodronate)、MS-209、MTP-PE脂质体、MX-6、那法瑞林、奈莫柔比星、新伐司他、诺拉曲赛、Oblimersen、Onco-TCS、Osidem、聚谷氨酸紫杉醇、帕米膦酸二钠、PN-401、QS-21、夸西泮、R-1549、雷洛昔芬、豹蛙酶、13-顺式-视黄酸、沙铂、西奥骨化醇、T-138067、盐酸厄洛替尼片(Tarceva)、Taxoprexin、α-1胸腺素、噻唑呋林、替吡法尼(tipifarnib)、替拉扎明、TLK-286、托瑞米芬、TransMID-107R、伐司朴达、伐普肽、瓦他拉尼(vatalanib)、维替泊芬、长春氟宁、Z-100、唑来膦酸或它们的组合。

可加入所述组合物中的任选的抗过度增殖药剂包括但不限于第11版默克索引(1996)(通过援引加入本文)的癌症化疗药物方案中所列的化合物，例如门冬酰胺酶、博来霉素、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、门冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲蜜胺、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康、亚叶酸、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、6-巯基嘌呤、美司钠、氨甲蝶呤、丝裂霉素C、米托蒽醌、泼尼松龙、泼尼松、甲基苄肼、雷洛昔芬、链佐星、它莫西芬、硫鸟嘌呤、托泊替康、长春碱、长春新碱以及长春地辛。

适合与本发明的组合物一起使用的其他抗过度增殖药剂包括但不限于Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics(NinthEdition)，Molinoff等编辑，McGraw-Hill出版，第1225-1287页，(1996)(通过援引加入本文)中公认的用于肿瘤疾病治疗的那些化合物，例如氨鲁米特、L-门冬酰胺酶、硫唑嘌呤、5-氮杂胞苷、克拉屈滨、白消安、己烯雌酚、2′，2′-二氟脱氧胞苷、多西他赛(docetaxel)、红羟基壬基腺嘌呤、炔雌醇、5-氟脱氧尿苷、单磷酸5-氟脱氧尿苷、磷酸氟达拉滨、氟甲睾酮、氟他胺、己酸羟孕酮、伊达比星、干扰素、醋酸甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、米托坦、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰基乙酰基-L-天冬氨酸盐(PALA)、普卡霉素、司莫司汀、替尼泊苷、丙酸睾酮、噻替派、三甲基三聚氰胺、尿苷以及长春瑞滨。

适合与本发明的组合物一起使用的其他抗过度增殖药剂包括但不限于其他抗癌药剂例如埃博霉素(epothilone)及其衍生物、伊立替康、雷洛昔芬和托泊替康。

还可将本发明的化合物与蛋白质治疗剂组合给药。适用于治疗癌症或其他血管生成病症并且适于和本发明的组合物一起使用的此类蛋白质治疗剂包括但不限于干扰素(例如α、β或γ干扰素)、超激动性单克隆抗体、Tuebingen、TRP-1蛋白质疫苗、Colostrinin、抗-FAP抗体、YH-16、吉姆单抗、英夫利昔单抗、西妥昔单抗、曲妥珠单抗、地尼白介素融合2毒素、利妥昔单抗、α1胸腺素、贝伐珠单抗、美卡舍明、美卡舍明林菲培、奥普瑞白介素、那他珠单抗、rhMBL、MFE-CP1+ZD-2767-P、ABT-828、ErbB2-特异免疫毒素、SGN-35、MT-103、林菲培、AS-1402、B43-染料木黄酮、L-19系放射免疫治疗剂、AC-9301、NY-ESO-1疫苗、IMC-1C11、CT-322、rhCC10、r(m)CRP、MORAb-009、阿维库明(aviscumine)、MDX-1307、Her-2疫苗、APC-8024、NGR-hTNF、rhH1.3、IGN-311、内皮抑素、伏洛昔单抗(volociximab)、PRO-1762、来沙木单抗(lexatumumab)、SGN-40、帕妥珠单抗(pertuzumab)、EMD-273063、L19-IL-2融合蛋白、PRX-321、CNTO-328、MDX-214、替加泊肽(tigapotide)、CAT-3888、拉贝珠单抗(labetuzumab)、发射a粒子的放射性同位素交联的林妥珠单抗、EM-1421、HyperAcute疫苗、西莫白介素单抗(tucotuzumab celmoleukin)、加利昔单抗(galiximab)、HPV-16-E7、Javelin-前列腺癌、Javelin-黑素瘤、NY-ESO-1疫苗、EGF疫苗、CYT-004-MelQbG10、WT1肽、奥戈伏单抗(oregovomab)、ofatumumab、扎鲁木单抗(zalutumumab)、贝辛白介素(cintredekin besudotox)、WX-G250、Albuferon、aflibercept、地诺单抗(denosumab)、疫苗、CTP-37、依芬古单抗(efungumab)或131I-chTNT-1/B。可用作蛋白质治疗剂的单克隆抗体包括但不限于莫罗单抗-CD3、阿昔单抗、依决洛单抗、达珠单抗、吉妥单抗(gentuzumab)、阿仑单抗、替伊莫单抗(ibritumomab)、西妥昔单抗、贝伐珠单抗、依法利珠单抗(efalizumab)、阿达木单抗(adalimumab)、奥马珠单抗(omalizumab)、莫罗单抗-CD3、利妥昔单抗、达珠单抗、曲妥珠单抗、帕利珠单抗、巴利昔单抗以及英夫利昔单抗。

一般而言，将细胞毒性剂和/或细胞抑制剂与本发明的化合物或组合物组合使用会起到以下作用：

(1)与单独给药任一种药剂相比在减少肿瘤生长或者甚至消除肿瘤方面产生更好的功效，

(2)允许以更少量给药化疗药剂，

(3)提供化疗剂治疗，其被患者良好地耐受并且具有的有害药理学并发症比在单一药剂化疗和某些其他组合疗法中所观察到的少，

(4)允许治疗更广谱的哺乳动物特别是人的不同癌症类型，

(5)提供受治疗患者中更高的反应率，

(6)与标准的化疗治疗相比提供受治疗患者中更长的存活时间，

(7)提供更长的肿瘤进展时间，和/或

(8)与其他癌症药剂组合产生拮抗效应的已知情况相比，得到至少与单独使用的药剂一样好的功效和耐受性。

使细胞对放射敏感的方法

在本发明的一个不同的实施方案中，本发明的化合物可用于使细胞对放射敏感。即，在细胞的放射治疗之前用本发明的化合物治疗细胞使得所述细胞与未用本发明的化合物进行任何治疗时所述细胞的情况相比更容易发生DNA损伤和细胞死亡。在一个方面中，用至少一种本发明的化合物治疗细胞。

因此，本发明还提供杀灭细胞的方法，其中将一种或多种本发明的化合物与常规放射疗法一起施用于细胞。

本发明还提供使细胞更容易发生细胞死亡的方法，其中在治疗所述细胞前用一种或多种本发明的化合物治疗所述细胞以引起或诱导细胞死亡。在一个方面中，用一种或多种本发明的化合物治疗所述细胞后，用至少一种化合物、至少一种方法或它们的组合治疗所述细胞以引起DNA损伤从而用于抑制正常细胞的功能或杀灭所述细胞。

在一个实施方案中，通过用至少一种DNA损伤剂治疗细胞将所述细胞杀灭。即，用一种或多种本发明的化合物治疗细胞使所述细胞对细胞死亡敏感后，用至少一种DNA损伤剂治疗所述细胞以杀灭所述细胞。可用于本发明中的DNA损伤剂包括但不限于化疗剂(例如顺铂)、电离辐射(X-射线、紫外线辐射)、致癌剂和致突变剂。

在另一实施方案中，通过用至少一种方法治疗细胞以引起或诱导DNA损伤将所述细胞杀灭。此类方法包括但不限于：活化细胞信号转导途径(当所述途径被活化时引起DNA损伤)、抑制细胞信号转导途径(当所述途径被抑制时引起DNA损伤)以及诱导细胞中的生物化学变化(其中所述变化引起DNA损伤)。作为非限制性实例，可抑制细胞中的DNA修复途径，由此阻止DNA损伤的修复并且导致细胞中DNA损伤的异常积累。

在本发明的一个方面，在进行辐射或进行引起细胞DNA损伤的其它诱导之前给药本发明的化合物。在本发明的另一方面，在进行辐射或进行引起细胞的DNA损伤的其它诱导的同时给药本发明的化合物。在本发明的又一方面，在辐射或引起细胞的DNA损伤的其它诱导开始之后立即给药本发明的化合物。

在另一方面，所述细胞在体外。在另一实施方案中，所述细胞在体内。

如上文所述，已令人惊讶地发现本发明的化合物有效地抑制allo-MEK并且因此可用于治疗或预防由不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、或不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答引起的疾病、或者伴有不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答的疾病，特别地，其中所述不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答是由allo-MEK介导的，例如血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移，如白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑瘤和脑转移在内的头颈部肿瘤、包括非小细胞肺肿瘤和小细胞肺肿瘤在内的胸部肿瘤、胃肠道肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤和其他妇科肿瘤、包括肾肿瘤、膀胱瘤和前列腺瘤在内的泌尿系统肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤、和/或它们的转移。

因此，根据另一方面，本发明涉及如本文所述和定义的通式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物、或盐，特别是药学可接受的盐，或者它们的混合物，其用于治疗或预防如上文所述的疾病。

因此，本发明的另一具体方面是如上文所述的通式(I)的化合物在制备用于治疗或预防疾病的药物组合物中的用途。

前两段中所提及的疾病是由不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答引起的疾病，或者伴有不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答的疾病，特别地，其中所述不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答是由Mps-1介导的，例如血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移，如白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑瘤和脑转移在内的头颈部肿瘤、包括非小细胞肺肿瘤和小细胞肺肿瘤在内的胸部肿瘤、胃肠道肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤和其他妇科肿瘤、包括肾肿瘤、膀胱瘤和前列腺瘤在内的泌尿系统肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤、和/或它们的转移。

在本发明的语境中，特别是如本文所使用的在“不适当的免疫应答或不适当的细胞炎症应答”语境中，术语“不适当的”应理解为优选表示比正常应答更弱或更强并且与所述疾病的病理相关、引起或导致所述疾病的病理的应答。

优选地，所述用途是用于疾病的治疗或预防，其中所述疾病是血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移。

治疗过度增殖性病症的方法

本发明涉及使用本发明化合物及其组合物治疗哺乳动物的过度增殖性病症的方法。可利用化合物来例如抑制、阻断、降低、减少细胞增殖和/或细胞分裂和/或引起凋亡。该方法包括向有此需要的包括人在内的哺乳动物给药一定量的可有效治疗所述病症的本发明化合物、其药学可接受的盐、异构体、多晶型物、代谢物、水合物、溶剂合物或酯等。过度增殖性病症包括但不限于银屑病、瘢痕疙瘩和其他影响皮肤的增生、良性前列腺增生(BPH)、实体瘤例如乳腺癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器官癌、消化道癌、泌尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌以及它们的远端转移。所述病症还包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。

乳腺癌的实例包括但不限于浸润性导管癌、浸润性小叶癌、原位导管癌和原位小叶癌。

呼吸道癌症的实例包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌以及支气管腺瘤和胸膜肺母细胞瘤。

脑癌的实例包括但不限于脑干和下丘脑胶质瘤、小脑和大脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤以及神经外胚层瘤和松果体瘤。

男性生殖器官肿瘤包括但不限于前列腺癌和睾丸癌。女性生殖器官肿瘤包括但不限于子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌和外阴癌以及子宫肉瘤。

消化道肿瘤包括但不限于肛门癌、结肠癌、结直肠癌、食管癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌和唾液腺癌。

泌尿道肿瘤包括但不限于膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌、尿道癌以及人乳头状肾癌。

眼癌包括但不限于眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤。

肝癌的实例包括但不限于肝细胞癌(有或无纤维板层变异的肝细胞癌)、胆管上皮癌(肝内胆管癌)和混合性肝细胞胆管上皮癌。

皮肤癌包括但不限于鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑素瘤、梅克尔细胞皮肤癌以及非黑素瘤皮肤癌。

头颈癌包括但不限于喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唇癌、口腔癌以及鳞状上皮细胞。淋巴瘤包括但不限于爱滋病相关淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金病以及中枢神经系统淋巴瘤。

肉瘤包括但不限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤以及横纹肌肉瘤。

白血病包括但不限于急性髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病以及多毛细胞白血病。

这些病症已在人类中得到良好的表征，但是还以相似的病因学存在于其他哺乳动物中，并且可通过给药本发明的药物组合物进行治疗。

本文件通篇提及的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”的使用是常规的，例如为了抵抗、减轻、减少、缓解、改善诸如肉瘤的疾病或病症的情况等。

治疗激酶病症的方法

本发明还提供用于治疗与异常的丝裂原胞外激酶活性相关的病症的方法，所述病症包括但不限于中风、心力衰竭、肝大、心脏扩大症、糖尿病、阿尔茨海默氏病、囊性纤维化病、异种移植物排斥的症状、感染性休克或哮喘。

有效量的本发明化合物可用于治疗此类病症，包括上文背景技术部分提及的那些疾病(例如癌症)。而且，可用本发明的化合物治疗此类癌症和其他疾病，而与作用机制和/或所述激酶与所述病症的关系无关。

短语“异常的激酶活性”或“异常的酪氨酸激酶活性”包括编码所述激酶的基因或其编码的多肽的异常表达或活性。此类异常活性的实例包括但不限于所述基因或多肽的过度表达；基因扩增；产生组成型活性的或高活性的激酶活性的突变；基因突变、缺失、取代、添加等。

本发明还提供抑制激酶活性特别是丝裂原胞外激酶活性的方法，所述方法包括给药有效量的本发明化合物，包括其盐、多晶型物、代谢物、水合物、溶剂合物、前药(例如酯)以及其非对映异构体形式。可在细胞中(例如体外)或在哺乳动物个体特别是需要治疗的人类患者的细胞中抑制激酶活性。

治疗血管生成病症的方法

本发明还提供治疗与过度和/或异常的血管生成相关的病症和疾病的方法。

血管生成的不适当表达和异常表达对生物体可能是有害的。许多病理状态与无关(extraneous)血管的生长相关。这些包括例如糖尿病性视网膜病、缺血性视网膜静脉阻塞以及早产儿视网膜病[Aiello等人，New Engl.J.Med.1994，331，1480；Peer等人，Lab.Invest.1995，72，638]、年龄相关性黄斑变性[AMD；参见Lopez等人Invest.Opththalmol.Vis.Vis.1996，37，855]、新生血管性青光眼、银屑病、晶体后纤维增生症、血管纤维瘤、炎症、类风湿性关节炎(RA)、再狭窄、支架内再狭窄、血管移植后再狭窄等。另外，与癌组织和肿瘤组织相关的血液供给增加促进生长，导致快速的肿瘤增大和转移。此外，肿瘤中新血管和淋巴管的生长为癌变细胞(renegade cells)提供了离开途径，促进转移并且导致癌症扩散。因此，可使用本发明的化合物来治疗和/或预防任何前文提及的血管生成病症，其方式为例如抑制和/或减少血管形成；例如抑制、阻断、降低、减少内皮细胞增殖或与血管生成相关的其他类型，以及引起此类细胞的细胞死亡或凋亡。

剂量和给药

基于已知用来评价用于治疗过度增殖性病症和血管生成病症的化合物的标准实验室技术，通过标准毒性试验以及通过用于确定对哺乳动物中上文所述病症的治疗的标准药理学试验，并且通过将这些结果与用于治疗这些病症的已知药物的结果进行比较，可容易地确定用于治疗每一种期望适应症的本发明化合物的有效剂量。在这些病症之一的治疗中所给药的活性成分的量可根据如下考量而发生很大变化：所使用的具体化合物和剂量单位、给药方式、疗程、受治疗患者的年龄和性别以及被治疗病症的性质和程度。

待给药的活性成分的总量一般为约0.001mg/kg-约200mg/kg体重/天，并且优选约0.01mg/kg-约20mg/kg体重/天。临床上有用的给药方案会是每日一至三次的给药至每四周一次的给药。另外，“停药期”(其中在某一段时间内不给予患者药物)对于药理学效力和耐受性之间的整体平衡可能是有利的。单位剂量可包含约0.5mg-约1500mg活性成分，并且可每日一次或多次地给药，或者少于每日一次地给药。通过包括静脉内、肌内、皮下和肠胃外注射在内的注射以及使用输注技术给药的平均每日剂量优选可以为0.01-200mg/kg总体重。平均每日直肠剂量方案优选为0.01-200mg/kg总体重。平均每日阴道剂量方案优选为0.01-200mg/kg总体重。平均每日局部剂量方案优选为每日一至四次给药0.1-200mg。透皮浓度优选为维持0.01-200mg/kg的每日剂量所需要的浓度。平均每日吸入剂量方案优选为0.01-100mg/kg总体重。

当然，每一名患者的具体的起始剂量和维持剂量方案会根据以下因素而变化：临床诊断医生所确定的病症的性质和严重度、所使用的具体化合物的活性、所述患者的年龄和整体健康状况、给药时间、给药途径、药物的排泄速率、药物组合等。因此，本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯或组合物的期望的治疗方式和给药数量可由本领域技术人员利用常规的治疗试验来确定。

优选地，所述方法的疾病是血液肿瘤、实体肿瘤和/或它们的转移。

本发明的化合物尤其可用于治疗和防止(即预防)肿瘤生长和转移，特别是接受或未接受所述肿瘤生长的预治疗的所有适应症和阶段的实体肿瘤的肿瘤生长和转移。

具体的药理学性质或药物性质的测定方法是本领域技术人员公知的。

本文描述的实施例测定实验用于举例说明本发明并且本发明不限于所提供的实施例。

生物学评价

可通过例如本发明化合物在下文描述的体外肿瘤细胞增殖测定中的体外活性举例说明它们的用途。体外肿瘤细胞增殖测定中的活性和临床环境中的抗肿瘤活性之间的联系已在本领域中得到确认。举例而言，用体外肿瘤增殖测定证明了紫杉酚(taxol)(Silvestrini等人，Stem Cells 1993，11(6)，528-35)、泰索帝(Bissery等人，Anti Cancer Drugs 1995，6(3)，339)和拓扑异构酶抑制剂(Edelman等人，Cancer Chemother.Pharmacol.1996，37(5)，385-93)的治疗用途。

可通过本领域公知的体外、离体和体内测定证明本发明化合物的活性。举例而言，为了证明本发明化合物的活性，可使用以下测定。

生物测定：

体外肿瘤细胞增殖测定

Cell Titer Glo增殖测定

用于试验本发明化合物的贴壁肿瘤细胞增殖测定涉及由Promega开发的被称作Cell Titre-Glo的读取装置(readout)(Cunningham，BA″A GrowingIssue：Cell Proliferation Assays.Modern kits ease quantification of cell growth″The Scientist 2001，15(13)，26，和Crouch，S P等人，″The use of ATPbioluminescence as a measure of cell proliferation and cytotoxicity″Journal ofImmunological Methods 1993，160，81-88)。

测定1：HCT116 Cell Titer Glo(CTG)增殖测定

以3000个细胞/孔的密度将HCT116细胞[人结直肠细胞系，表达BRAFV600E突变体]接种至96孔黑色透明底组织培养板(Costar 3603黑/透明底)内，所述培养板包括含10％胎牛血清(FBS)和稳定的谷氨酰胺的100μl/孔DMEM培养基(DMEM/Ham’s F12)，并于37℃温育。在单独的板子中接种对照孔(sister well)用于零点测定。将所有的板子于37℃温育过夜。记录零点板：将100μl/孔CTG溶液(Promega Cell Titer GIo solution)加入对照板(sister plate)的零点孔内；在定轨摇床上将该板子混合2min以确保细胞裂解，温育10分钟，在VICTOR 3(Perkin Elmer)上读取发光。在接种细胞后二十四小时，将受试化合物稀释于50μl培养基中并以高达10μM-低至300pM的终浓度加入，视所述受试化合物在DMSO终浓度为0.4％的系列稀释物中的活性而定。加入所述受试化合物后将细胞于37℃温育72小时。然后使用Promega Cell Titer GIo Luminescent

测定试剂盒，将100μl包含荧光素酶及其底物荧光素混合物的裂解缓冲液加入各孔内并于室温下在黑暗处温育10min以使发光信号稳定。然后使用Luminescence方案在VICTOR3(Perkin Elmer)上读取样品。通过将测量值归一化至零点板的消光(＝0％)和未处理(0μm)细胞的消光(＝100％)来计算细胞生长的变化，以百分比计。使用本公司的软件通过4参数拟合的方式确定IC50值。

测定2：A549Cell Titer Glo(CTG)增殖测定

以2000个细胞/孔的密度将A549细胞[人非小细胞肺癌细胞系，表达K-Ras G12S突变体]接种至96孔黑色透明底组织培养板(Costar 3603黑色/透明底)内，所述培养板包括含10％胎牛血清(FBS)和稳定的谷氨酰胺的100μl/孔DMEM培养基(DMEM/Ham’s F12)，并于37℃温育。使用与上文对HCT16细胞所述相同的方案进行A549细胞的Cell Titer Glo增殖测定。

测定3：A375 Cell Titer Glo(CTG)增殖测定

以3000个细胞/孔的密度将A375细胞[人恶性黑色素瘤细胞，ATCC#CRL-1619，表达BRAF V600E突变体]接种至96孔黑色透明底组织培养板(Costar 3603黑色/透明底)内，所述培养板包括含10％胎牛血清(FBS)和稳定的谷氨酰胺的100μl/孔DMEM培养基(Biochrom；FG0435；+3.7g/L碳酸氢钠；+4.5g/L D-葡萄糖)，并于37℃温育。在单独的板子中接种对照孔用于零点测定。将所有的板子于37℃温育过夜。记录零点板：将67μl/孔CTG溶液(Promega Cell Titer GIo solution)加入对照板的零点孔内；在定轨摇床上将该板子混合2min以确保细胞裂解，温育10分钟，在VICTOR 3(PerkinElmer)上读取发光。在接种细胞后二十四小时，以高达10μM-低至300pM的终浓度加入稀释于50μl培养基中的受试化合物，视所述受试化合物在DMSO终浓度为0.4％的系列稀释物中的活性而定。加入所述受试化合物后将细胞于37℃温育72小时。然后使用Promega Cell Titer Glo Luminescent

测定试剂盒，将100μl包含荧光素酶及其底物荧光素混合物的裂解缓冲液加入各孔内并于室温下在黑暗处温育10min以使发光信号稳定。然后使用Luminescence方案在VICTOR 3(Perkin Elmer)上读取样品。通过将测量值归一化至零点板的消光(＝0％)和未处理(0μm)细胞的消光(＝100％)来计算细胞生长的变化，以百分比计。使用本公司的软件通过4参数拟合的方式确定IC₅₀值。

测定4：A375结晶紫增殖测定

通过结晶紫(CV)染色测量A375细胞[人黑色素瘤细胞系，表达BRAFV600E突变体]的细胞增殖：以1500个细胞/测量点的密度将培养的人A375细胞接种至96-孔多孔滴定板内的200μl生长培养基(含10％FBS和2mM谷氨酰胺的DMEM/HAMS F12)中。24小时后，用结晶紫将一块板子(零点板)的细胞染色(见下文)，同时用加入了各种浓度(0μM以及0.3nM-30μM，溶剂二甲亚砜的终浓度为0.5％)的受试物质的新鲜培养基(200μl)替换其他板子中的培养基。在所述受试物质的存在下将细胞培养4天。通过用结晶紫将细胞染色测定细胞增殖：通过加入20μl/测量点的11％戊二醛溶液在室温下将细胞固定15分钟。用水将固定的细胞洗涤三次后，在室温下将板子干燥。通过加入100μl/测定点的0.1％结晶紫溶液(通过加入乙酸将pH调节至pH3)将细胞染色。用水将染色的细胞洗涤三次后，在室温下将板子干燥。通过加入100μl/测定点的10％乙酸溶液溶解染料，并在595nm波长下通过光度法测定消光。通过将测量值归一化至零点板的消光(＝0％)和未处理细胞(0μM)的消光(＝100％)来计算细胞生长的变化，以百分比计。使用本公司的软件通过4参数拟合的方式确定IC₅₀值。

或者，可如下进行结晶紫(CV)染色测定：

测定5：用于A375结晶紫增殖测定的替代条件

以1500个细胞/测量点的密度将培养的人A375细胞接种于96-孔多孔滴定板内的200μl生长培养基(含10％FBS和2mM谷氨酰胺的DMEM/HAMS F12)中。24小时后，用结晶紫将一块板子(零时板)的细胞染色(见下文)，同时用加入了各种浓度(0μM以及0.3nM-30μM，溶剂二甲亚砜的终浓度为0.5％)的受试物质的新鲜培养基(200μl)替换其他板子中的培养基。在受试物质的存在下将细胞培养4天。通过用结晶紫将细胞染色测定细胞增殖：通过加入20μl/测量点的11％戊二醛溶液在室温下将细胞固定15分钟。用水将固定的细胞洗涤三次后，在室温下将板子干燥。通过加入100μl/测量点的0.1％结晶紫溶液(通过加入乙酸将pH调节至pH3)将细胞染色。用水将染色的细胞洗涤三次后，在室温下将板子干燥。通过加入100μl/测量点的10％乙酸溶液溶解染料，并在595nm波长下通过光度法测定消光。通过将测量值归一化至零点板的消光(＝0％)和未处理细胞(0μM)的消光(＝100％)来计算细胞生长的变化，以百分比计。使用本公司的软件通过4参数拟合的方式确定IC₅₀值。

可与上述操作相似地测量另外的癌细胞系的体外增殖抑制。以下提供了示例性的另外的肿瘤细胞系的详情：

另外，可使用以下测定评价本发明化合物的生物学重要性。

测定6：人碳酸酐酶1和2的抑制

本测定的原理是基于用碳酸酐酶水解乙酸4-硝基苯酯然后光度法测定染料4-硝基苯酚盐(Pocker&Stone，Biochemistry，1967，6，668)。

将以0.03-10μM(终浓度)的浓度溶解于DMSO(100x所述终浓度)中受试化合物2μl以4x测定移液至96孔微量滴定板的孔内。将含有不含受试化合物的溶剂的孔用作参比值(1.不含碳酸酐酶的孔用于修正底物的非酶水解，和2.含碳酸酐酶的孔用于测定未受抑制的酶的活性)。

将含有或不含3个单位/孔碳酸酐酶I或II(Sigma-Aldrich#C4396，resp.Sigma-Adrich#C6165)的188μl测定缓冲液(10mM Tris/HCl，pH 7.4，80mMNaCl)移液至微量滴定板的孔内。通过加入10μl底物溶液(1mM乙酸4-硝基苯酯(Fluka#4602)，溶解于无水乙腈(底物终浓度：50μM)中)起始酶反应。将板子在室温下温育60分钟。在400nm波长下通过光度法测量消光。将测量的数值归一化至不含酶的孔内反应的消光(＝100％抑制)和含未受抑制的酶的孔内反应的消光(＝0％抑制)后计算酶抑制。使用本公司的软件通过4参数拟合的方式确定IC₅₀值。

测定7：测定cmpd在血液和血浆之间的分布(血液/血浆比)

使用加入了确定浓度的药物(血液中的最大溶剂浓度为0.5％)并混合均匀的新鲜肝素化(人)血，以测定受试化合物在(人)血液中的浓度(Cbl)与其血浆浓度(Cpl)的比，血液/血浆比。在顶置搅拌器内于37℃温育15min后，于1000xg离心制备血浆。通过在血浆中加入确定量的药物并进行系列稀释来制备由至少5个浓度点组成的校准曲线。用包含适量内标的4倍体积的甲醇沉淀校准样品和三份平行的血浆样品，于-20℃温育过夜并于2000xg离心20min。通过LC-MS分析上清并且从所述校准曲线估算血浆中的药物浓度。

将所述(人)血液/血浆比计算为Cbl/Cpl＝血液中加入的药物浓度(标称值)/血浆浓度(测量值)。

测定8

MEK生物化学测定：DELFIA

使用DELFIA MEK激酶测定监测MEK抑制剂的活性。通过以下方式在96-孔微量滴定板中进行激酶反应：首先将70μL激酶反应缓冲液(50mMHEPES pH 7.5、5mM NaF、5mM磷酸甘油、1mM钒酸钠、10mM MgCl₂、1mM DTT和1％(v/v)DMSO)与20nM GST-MEK、20nM His-Raf和100nM生物素化ERK1(终浓度)混合。然后加入终浓度为1μM、0.3μM、0.1μM、0.03μM、0.01μM、0.003μM、0.001μM、0.0003μM和0μM的化合物以生成剂量反应抑制曲线。通过加入20μl ATP(终浓度100μM)起始激酶反应。温育2h后，通过加入20μl 0.5M EDTA终止反应。然后将100μL反应混合物转移至96孔链霉亲和素板(cat#15120，Pierce Inc.Rockford，IL)内并接着温育2h。收集生物素化底物ERK1后，用TBST洗涤板子。加入抗磷酸-p44/42MAPK的抗体(cat#91065，Cell Signaling Technologies，Danvers，MA)并使其结合至磷酸化底物。之后与铕-标记的抗-小鼠抗体(cat#AD0124，Wallac Inc，Turku，Finland)温育，然后进行洗涤步骤。加入增强液将铕离子解离进入溶液，那里它们与增强液的组分形成强荧光螯合物。各样品的荧光与激酶活性成比例并在VICTOR5仪(Wallac Inc.)上测量。使用Analyze5软件进行数据分析用于分析IC₅₀。

测定9

MEK1活化激酶测定

激酶Cot1通过磷酸化MEK1的活化环将其活化。使用以下段落描述的HTRF测定定量本发明化合物对MEK1活化的抑制活性。

将在昆虫细胞内表达(SF21)并通过Ni-NTA亲和色谱法纯化的N-端His6标记的人Cot1重组激酶结构域(氨基酸30-397，购自Millipore，cat.no14-703)用作激酶。将非活性的C-端His6标记的GST-MEK1融合蛋白(Millipore cat.no 14-420)用作激酶反应的底物。

对于测定，将受试化合物在DMSO中的100倍浓缩溶液50nl移液至黑色小容量384孔微量滴定板(Greiner Bio-One，Frickenhausen，Germany)内，加入24nM GST-MEK1和166.7μM三磷酸腺苷(ATP)在测定缓冲液[50mMTris/HCl pH 7.5、10mM MgCl₂、2mM二硫苏糖醇、0.01％(v/v)Igepal CA630(Sigma)、5mM β-磷酸甘油]中的溶液3μl，并且将混合物于22℃温育10min，以在激酶反应开始前使受试化合物预结合至GST-MEK1。然后通过加入Cot1在测定缓冲液中的溶液2μl起始激酶反应，并且将所得混合物于22℃温育20min的反应时间。根据酶批次的活性调解测定中的Cot1的浓度，并且选择适于使所述测定在线性范围内的浓度，典型的酶浓度在约2ng/μl(在5μl测定体积中的终浓度)的范围内。通过加入HTRF检测试剂(13nM抗GST-XL665[#61GSTXLB，Fa.Cis Biointernational，Marcoule，France]、1nM Eu-cryptate标记的抗-磷酸-MEK 1/2(Ser217/221)[#61P17KAZ，Fa.Cis Biointernational])在水性EDTA-溶液(100mM HEPES/NaOH中100mM EDTA、500mM KF、0.2％(w/v)牛血清白蛋白，pH 7.5)中的溶液5μl终止反应。

将所得混合物于22℃温育2h以使磷酸化GST-MEK1结合至抗-GST-XL665和Eu-cryptate标记的抗-磷酸-MEK 1/2抗体。接着通过测量从Eu-cryptate标记的抗-磷酸-MEK抗体到抗-GST-XL665的共振能量转移来评价Ser217/Ser221-磷酸化底物的量。因此，在HTRF读板仪如Rubystar(BMGLabtechnologies，Offenburg，Germany)或Viewlux(Perkin-Elmer)中测量在350nm处激发后在620nm和665nm处的荧光发射。将665nm和622nm的发射的比率作为磷酸化底物的量的量度。将数据归一化(无抑制剂的酶反应＝0％抑制，具有所有其他测定组分而不含酶＝100％抑制)。通常在相同的微量滴定板上以20μM-1nM范围内的10个不同的浓度(20μM、6.7μM、2.2μM、0.74μM、0.25μM、82nM、27nM、9.2nM、3.1nM和1nM，在测定之前在100倍浓度的贮备液的水平上通过1∶3系列稀释制备的系列稀释物)试验受试化合物，每一个浓度平行两份进行，并且使用内部软件通过4参数拟合计算IC₅₀值。

测定10

磷酸-ERK机制测定

以25,000个细胞/孔将A375和Colo205细胞接种至96-孔组织培养板内，所述培养板包括添加了10％FBS的RPMI 1640生长培养基。于37℃在含5％CO₂的加湿培养箱中将细胞培养过夜。第二天，为了制备测定板，用100μl 5％MSD封闭缓冲液将抗-兔Meso-Scale Discovery(MSD)板(cat#L41RA-1，Meso-Scale Discovery，Gaithersburg，MD)在室温下封闭1h，然后用200μl TBST缓冲液将它们洗涤三次。向各孔中加入(25μl)1∶200稀释于2.5％MSD Blocker A-TBST内的磷酸-ERK兔多克隆抗体(cat#9101，CellSignaling Technologies，Danvers，MA)并在振摇下于室温将板子温育1h。然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS)将板子洗涤一次，此时可加入细胞裂解物。在制备测定板的同时将系列稀释于含10％FBS、0.1％牛血清白蛋白(BSA)和0.03％DMSO的RPMI1640培养基内的受试化合物加入前一天的含细胞的板子的孔内，并于37℃将板子温育1.5h。此次温育后，用PBS将化合物处理的板子洗涤三次，在30μl Bio-Rad裂解缓冲液(cat#98601，Bio-RadLaboratories，Hercules，CA)中裂解，并接着在冰上振摇30min。然后将裂解物加入磷酸-ERK包被的MSD板并于4℃将板子温育过夜。第二天，用TBST将板子洗涤三次并且向所述板子中加入1∶3000稀释的总ERK单克隆抗体25μl(Cat#610123，BD Biosciences，San Diego，CA)，然后在振摇下于室温将板子温育1h。温育后，如前所述用TBST将板子洗涤三次并向各孔中加入1∶1000稀释的MSD sulfo-标记抗-小鼠抗体25μl(cat#R32AC-5)。在振摇下于室温将板子温育1h，然后用TBST洗涤四次。在读板前即刻加入150μlMSD读板缓冲液T，并立即在MSD仪上读板。使用Analyze5进行数据分析用于分析IC₅₀。

测定11

用于机制性pEKR测定的替代条件

对于肿瘤细胞系中ERK1/2磷酸化的测量，使用单重MesoscaleDiscovery(MSD)测定。该测定的构造类似夹心免疫测定。将用系列稀释的MEK抑制剂化合物处理不同肿瘤细胞系生成的细胞裂解物加入MSD板。存在于样品中的磷酸化ERK1/2结合至固定化于工作电极表面的捕获抗体。检测抗体与固定化的磷酸-ERK1/2结合使得夹心结构完整。用电化学发光化合物标记该检测抗体。向板子电极施加电压导致通过抗体-磷酸ERK1/2夹心络合物结合至电极表面的标记发光。测量发光能够定量测定存在于所述样品中的磷酸化ERK1/2的量。具体而言，必须通过测定不同的细胞数量确定所述测定中所使用的每一种细胞系的用于测量磷酸ERK信号的线性范围。对于最终测定，将之前测定的细胞数量接种至96孔板内。接种后24小时用系列稀释的MEK变构抑制剂化合物将细胞处理1.5h，然后裂解细胞并将裂解物转移至MSD测定板内。对制造商的实验方案的改变在于将磷酸化ERK与捕获抗体的结合步骤于4℃进行过夜而不是于室温下进行3h，从而得到更好的信号强度。

以45,000个细胞/孔将A375或Colo205细胞接种至96-孔组织培养板内，所述培养板包括添加了10％FBS(Biochrom#S0410)(A375)的50μLDMEM生长培养基(Biochrom FG 0435)或添加了10％FBS(Biochrom#S0410)、10mM HEPES(Biochrom L1613)、4.5g/L葡萄糖和1mM丙酮酸钠(Biochrom L0473)(Colo-205)的RPMI生长培养基。于37℃在包含5％CO₂的加湿培养箱中将细胞培养过夜。

根据制造商的建议进行磷酸-ERK的Mesoscale Discovery(MSD)(#K111DWD)测定。方案简述如下：

在细胞接种后第二天，为了制备测定板，用150μl MSD封闭缓冲液将MSD于室温下封闭1h，然后用150μl Tris洗涤缓冲液将它们洗涤四次。在制备测定板的同时，将系列稀释于含10％FBS和0.1％DMSO的各自的生长培养基内的受试化合物加入前一天的含细胞的板子的孔内，并于37℃将板子温育1.5-2h。此次温育后，吸出培养基，在50μl裂解缓冲液中裂解细胞，然后于4℃振摇30min。然后将25μL裂解物加入封闭的MDS板并于4℃将板子温育过夜。第二天，用Tris洗涤缓冲液将板子洗涤四次并向板子加入25μl检测抗体溶液，在振摇下于室温将板子温育1h。温育后，用Tris洗涤缓冲液将板子洗涤四次，加入150μl MSD读板缓冲液T，并立即在MSD仪上读板。使用内部软件进行数据分析用于分析IC₅₀。

测定12

体内功效研究：分期的人异种移植模型

使用人BRAF突变型黑色素瘤和结肠癌的异种移植模型在小鼠中评价先导化合物的体内抗肿瘤活性。向雌性无胸腺NCR裸鼠皮下移植获自美国典型培养物保藏中心(ATCC，Maryland)的人黑色素瘤(LOX)或人结肠癌(Colo205)系。当肿瘤大小达到约100mg时开始治疗。将化合物新鲜配制于PEG/水(分别为80％/20％)中并口服给药。每日监测小鼠的整体健康状况并记录死亡率。从治疗第一天开始每周两次记录肿瘤尺寸和体重。根据BayerIACUC指南向动物实施安乐死。导致大于20％的致死率和/或20％净体重减轻的治疗被认为是“毒性的”。

每周三次用电子显示卡尺测量肿瘤生长并且根据下式计算肿瘤重量(mg)：[长(mm)x宽(mm)²]/2。将抗肿瘤功效测定为肿瘤生长抑制(％TGI)的函数。在测量日使用下式计算TGI：(100-治疗动物的平均肿瘤数值(T)/对照的平均肿瘤数值(C)x100)＝％T/C。所述计算中使用的对照是提供所述数据的最保守表示的“未治疗的对照”或“媒介物”。表现出大于或等于50％TGI的化合物被认为是活性的。使用单尾或双尾学生t检验测定统计学显著性。被试验的化合物在LOX和Colo205模型中均表现出显著的剂量依赖型肿瘤生长抑制。

使用一种或多种上文所述的测定操作试验本发明化合物的活性。

下表显示在上述测定1、2、4、6和7中获得的本发明化合物的IC₅₀值，并与背景技术文件WO 2008/138639的化合物的IC₅₀值比较，结果如下。从该数据中可看出实施例化合物1表现出特别高的抗增殖活性(与背景技术文件的化合物具有可比性)，但是还以较低的强度结合至人碳酸酐酶1和2并且未显示积累于人血细胞中。

我们认为本领域技术人员使用前文所述信息和本领域可获得的信息能够最大限度地使用本发明。本领域技术人员会认识到可改变所公开的结构、材料、组合物和方法来实施本发明而不偏离本文列出的本发明的精神或范围，并且认为此类改变属于本发明范围之内。实施例中描述的化合物预期对本发明具有代表性，并且应理解本发明的范围不受限于所述实施例的范围。上文列出的主题性标题表示可在该申请中找到某些信息的指南，但是不应认为是能够在本申请中找到关于此类主题的信息的唯一来源。上文引用的所有出版物和专利通过援引加入本文。

文献：

[1]American Cancer Society，Cancer Facts and Figures 2005.

[2]Sausville EA，El Sayed Y，Monga M，Kim G.SignalTransductionDirected Cancer Treatments.Annu Rev Pharmacol Toxicol2002；43：199-231.

[3]O′Dwyer ME，Mauro MJ，Druker BJ.STI571as a targeted therapy forCML.Cancer Invest 2003；21：429-438.

[4]de Jong FA，Verweij J.Role of imatinib mesylate(Gleevec/Glivec)ingastrointestinal stromal tumors.Expert Rev Anticancer Ther 2003；3：757-766.

[4]Becker J.Signal transduction inhibitors-a work in progress.NatureBiotech 2004；22：15-18.

[5]Cobb MH.MAP kinase pathways.Prog Biophys Mol Biol 1999；71：479-500.

[6]Lewis TS，Shapiro PS，Ahn NG.Signal transduction through MAPkinase cascades.Adv Cancer Res 1998；74：49-139.

[7]English JM，Cobb MH.Pharmacological inhibitors of MAPK pathways.Trends Pharmacol Sci 2002；23：40-45.

[8]Duesbery NS，Webb CP，Vande Woude GF.MEK wars，a new front inthe battle against cancer.Nat Med 1999；5：736-737.

[9]Sebolt-Leopold JS.Development of anticancer drugs targeting theMAP kinase pathway.Oncogene 2000；19：6594-6599.

[10]Milella M，Precupanu CM，Gregorj C，Ricciardi MR，Petrucci MT，Kornblau SM，Tafuri A，Andreeff M.Beyond single pathway inhibition：MEKinhibitors as a platform for the development of pharmacological combinationswith synergistic anti-leukemic effects.Curr Pharm Des.2005；11(21)：2779-95.

[11]Hancock CN，Macias AT，Mackerell AD Jr，Shapiro P.Mitogenactivated protein(MAP)kinases；development of ATP and non-ATP dependentinhibitors.Med Chem.2006 Mar；2(2)：213-22.

[12]Deramaudt T，Rustgi AK.Mutant KRAS in the initiation of pancreaticcancer.Biochim Biophys Acta.2005；1756(2)：97-101.

[13]Libra M，Malaponte G，Navolanic PM，Gangemi P，Bevelacqua V，Proietti L，Bruni B，Stivala F，Mazzarino MC，Travali S，McCubrey JA.Analysis of BRAF mutation in primary and metastatic melanoma.Cell Cycle.2005 Oct；4(10)：1382-4.

[14]Herrera R，Sebolt-Leopold JS.Unraveling the complexities of theRaf/MAP kinase pathway for pharmacological intervention.Trends Mol Med2002；8：S27-S31.

[15]Alessi DR，Cuenda A，Cohen P，Dudley DT，Saltiel AR.PD 098059 isa specific inhibitor of the activation of mitogenactivated protein kinase kinase invitro and in vivo.J Biol Chem 1995；270：27489-27494.

[16]Favata MF，Horiuchi KY，Manos EJ，Daulerio AJ，Stradley DA，FeeserWS，et al.Identification of a novel inhibitor of mitogenactivated protein kinasekinase.J Biol Chem 1998；273：18623-18632.

[17]Allen LF，Sebolt-Leopold J，Meyer MB.CI-1040(PD184352)，atargeted signal transduction inhibitor of MEK(MAPKK).Semin Oncol 2003；30：105-116.

[18]Sebolt-Leopold JS，Dudley DT，Herrera R，Van Becelaere K，WilandA，Gowan RC，et al.Blockade of the MAP kinase pathway suppresses growth ofcolon tumors in vivo.Nat Med 1999；5：810-816

[19]Waterhouse D，Rinehart J，Adjei A，Hecht J，Natale R，LoRusso P，et al.A phase 2study of an oral MEK inhibitor，CI-1040，in patients with advancednon small-cell lung，breast，colon，or pancreatic cancer.Proc Am Soc ClinOncol 2003；22：204a(abstr).

Claims

1.通式(I)化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药：

其中：

2.权利要求1的化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药，其中

3.权利要求1或2的化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药，其中：

4.权利要求1-3中任一项的化合物，或者其互变异构体、立体异构体、N-氧化物、盐、水合物、溶剂合物、代谢物或前药，其中：

5.权利要求1-4中任一项的化合物，其为3，4-二氟-2-[(2-氟-4-碘代苯基)氨基]-6-{3-[(氨磺酰基氨基)甲基]苯氧基}苯甲酰胺。

6.制备权利要求1-5中任一项的通式(I)化合物的方法，所述方法包括以下步骤：使通式(6)的中间体化合物与诸如盐酸或TFA的酸反应，

其中R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^c和X的定义如权利要求1-5中任一项对通式(I)的定义，并且Pg表示酸敏感保护基团，例如叔丁氧基羰基(Boc)，

由此得到式(I)化合物：

其中R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^c和X的定义如对权利要求1-5中任一项对通式(I)的定义，并且R^b表示氢。

7.权利要求1-5中任一项的通式(I)的化合物，或者其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，特别是其药学可接受的盐，或者它们的混合物，其用于治疗或预防疾病。

8.药物组合物，其包含权利要求1-5中任一项的通式(I)的化合物，或者其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，特别是其药学可接受的盐，或者它们的混合物，和药学可接受的稀释剂或载体。

9.药物组合，其包含：

-权利要求1-5中任一项的一种或多种通式(I)的化合物，或者其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物、或盐，特别是其药学可接受的盐、或者它们的混合物；以及

-一种或多种选自以下的药剂：紫杉烷，例如多西他赛、帕利他西或紫杉酚；埃博霉素，例如伊沙匹隆、帕土匹龙或沙戈匹隆；米托蒽醌；泼尼松龙；地塞米松；雌莫司汀；长春碱；长春新碱；多柔比星；阿霉素；伊达比星；柔红霉素；博来霉素；依托泊苷；环磷酰胺；异环磷酰胺；丙卡巴肼；美法仑；5-氟尿嘧啶；卡培他滨；氟达拉滨；阿糖胞苷；Ara-C；2-氯-2′-脱氧腺苷；硫鸟嘌呤；抗雄激素，例如氟他胺、醋酸环丙孕酮或比卡鲁胺；硼替佐米；铂衍生物，例如顺铂或卡铂；苯丁酸氮芥；甲氨蝶呤和利妥昔单抗。

10.权利要求1-5中任一项的通式(I)的化合物，或者其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，特别是其药学可接受的盐，或者它们的混合物在治疗或预防疾病中的用途。

11.权利要求1-5中任一项的通式(I)的化合物，或者其立体异构体、互变异构体、N-氧化物、水合物、溶剂合物或盐，特别是其药学可接受的盐，或者它们的混合物在制备用于预防或治疗疾病的药物中的用途。

12.权利要求7、10或11的用途，其中所述疾病是由不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答引起的疾病，特别地是其中所述不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答是由丝裂原活化蛋白激酶(MEK-ERK)通路介导的，更特别地是其中所述由不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适当的细胞免疫应答或不适当的细胞炎症应答引起的疾病是血液肿瘤、实体瘤和/或它们的转移，例如白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑瘤和脑转移在内的头颈部肿瘤、包括非小细胞肺肿瘤和小细胞肺肿瘤在内的胸部肿瘤、胃肠道肿瘤、内分泌肿瘤、乳腺肿瘤和其他妇科肿瘤、包括肾肿瘤、膀胱瘤和前列腺瘤在内的泌尿系统肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤、和/或它们的转移。

13.通式(III)的化合物：

其中R¹、R²、R³、R^3a、R⁴、R⁵、R⁶、R^a、R^c和X的定义如权利要求1-5中任一项对通式(I)的定义，并且PG表示酸敏感保护基团。

14.通式(IV)的化合物：

15.权利要求13的通式(III)中间体化合物或权利要求14的通式(IV)中间体化合物在制备权利要求1-5中任一项的通式(I)化合物中的用途。