CN102559904B - 一种谷氨酸转运蛋白-3基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 - Google Patents
一种谷氨酸转运蛋白-3基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102559904B CN102559904B CN 201210022007 CN201210022007A CN102559904B CN 102559904 B CN102559904 B CN 102559904B CN 201210022007 CN201210022007 CN 201210022007 CN 201210022007 A CN201210022007 A CN 201210022007A CN 102559904 B CN102559904 B CN 102559904B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- probe
- solution
- glutamate transporter
- tissue
- depc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交的探针及其设计方法，按照如下步骤：(1)根据谷氨酸转运蛋白-3的Gene bank序列我们设计谷氨酸转运蛋白-3特异的引物，并且此对引物扩增出292bp的谷氨酸转运蛋白-3片段作为谷氨酸转运蛋白-3特异的探针序列；(2)构建谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交的探针质粒；将探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；(3)制备谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交探针；(4)检测谷氨酸转运蛋白-3的cRNA探针的原位杂交。
Description
技术领域：
本发明属于生物医学领域，涉及一种探针及其设计方法，尤其是一种谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交的探针及其制备方法。
背景技术：
谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统最重要的神经递质，在体内主要与亲离子性和亲代谢性两种谷氨酸受体家族结合发挥活化作用。谷氨酸如果在细胞外浓度过高，过度兴奋谷氨酸受体可导致神经细胞死亡，由于细胞外没有能分解谷氨酸的酶，释放的谷氨酸几乎完全依赖神经元以及神经胶质细胞膜上的谷氨酸转运蛋白(EAAT)的摄取来保持浓度的相对稳定，同时EAAT也为体内很多代谢途径提供谷氨酸来源。谷氨酸转运蛋白分高亲合力和低亲合力转运蛋白两种，高亲合力转运蛋白都作用于依赖钠-钾的L-谷氨酸，L-和D-天冬氨酸，所以也称为钠-钾谷氨酸转运蛋白或兴奋性氨基酸转运蛋白(Excitatory amino acid transporter，EAAT)。目前已有五种被克隆，它们是它们是谷氨酸转运蛋白-1(EAAT1或GLAST，Glutamate-aspartate transporter)，谷氨酸转运蛋白-2(EAAT2或GLT，glial glutamate transporter)，谷氨酸转运蛋白-3(EAAT3EAAC，excitatory amino acid Carrier)，谷氨酸转运蛋白-4(EAAT4)和谷氨酸转运蛋白-5(EAAT5)。在形态学研究方面，关于谷氨酸转运蛋白-3基因在活体动物中mRNA水平的检测显示尚属空白。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位 杂交的探针及其设计方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来解决的：
一种谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交的探针，该探针的序列为：
5′GCTGTGCGGAAGAAAAGAACCACGTGGACAAGAGGATCACAAGATTTGTGCTGCCCGTCGGCGCCACCATCAACATGGACGGCACTGCGCTCTATGAAGCCGTGGCAGCTGTGTTCATTGCGCAGCTGAACGGCATGGACCTGAGCATTGGGCAGATCATCACGATCAGCATCACAGCCACCGCTGCTAGCATTGGAGCTGCCGGTGTGCCCCAGGCTGGCCTGGTGACCATGGTGATCGTGTTGAGTGCCGTGGGGCTGCCTGCTGAGGACGTCACCCTCATCATTGCCGT 3′。
所述探针的制备方法：
(1)根据谷氨酸转运蛋白-3的Gene bank序列我们设计了谷氨酸转运蛋白-3特异的引物，并且此对引物扩增出292bp的谷氨酸转运蛋白-3片段作为谷氨酸转运蛋白-3特异的探针序列；
(2)构建谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交的探针质粒；将探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；
(3)制备谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交探针；
(4)检测谷氨酸转运蛋白-3的cRNA探针的原位杂交。
所述步骤(1)中谷氨酸转运蛋白-3特异的引物是：
上游引物是5′GCTGTGCGGAAGAAAAGAAC 3′；
下游引物是5′ACGGCAATGATGAGGGTGAC 3′。
所述步骤(2)按照如下步骤进行：
(a)将大鼠的cDNA用设计的引物进行PCR扩增；
(b)将PCR产物用TIANGEN胶回收试剂盒进行胶回收；
(c)将回收后的产物于4℃与多克隆位点两端具有T7，SP6启动子的载体进行连接；
(d)将连接好的质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序。
所述步骤(3)按照如下步骤进行：
(a)步骤(2)的到的细菌测序正确后，经判断确认谷氨酸转运蛋白-3探针序列插入载体的顺序是正向的；
(b)需要使用BamH I限制性内切酶对质粒进行酶切；
(c)将酶切产物用TIANGEN胶回收试剂盒进行胶回收；
(d)用SP6 RNA聚合酶对探针进行体外转录标记。
所述步骤(4)按照如下步骤进行：
(a)将大鼠用0.4％戊巴比妥钠深麻后，经左心室插管至升主动脉，用0.01mol/L的DEPC-PBS的快速冲洗去除血液，再以4％多聚甲醛灌注固定；所述的0.01mol/L DEPC-PBS是2.9克磷酸氢二钠，0.29克磷酸二氢钠，9.0克氯化钠用超纯水定容至1L后，再加入体积百分比为0.1％的DEPC 1ml放置过夜后，高压灭菌制成的磷酸盐缓冲液；所述4％的多聚甲醛是40.0克多聚甲醛加入500.0ml蒸馏水加热使之解聚溶解后，再加入500.0ml的0.2mol/L PB缓冲液定容至1000ml。所述0.2mol/L PB缓冲液是用29.01克磷酸氢二钠，2.96克磷酸二氢钠加超纯水定容至500ml配制而成。
(b)取材后进行脑组织的后固定：于4℃，用4％的多聚甲醛后固定24小时；
(c)将固定好的组织进行切片：将组织切成25～30μm组织切片，并将切好的切片保存于0.01mol/L的DEPC-PBS中，放于4℃冰箱备用；
(d)将切好的组织片用0.01mol/L的DEPC-PBS清洗1次，室温，每次5-10分钟；
(e)将上述清洗过的片子用5 x SSC清洗2次，室温，每次5-10分钟；所述5 x SSC是由20 x SSC用超纯水稀释的，20 x SSC为一种柠檬酸缓冲液。
(f)将5 x SSC清洗后的组织片浸入预杂交液中，于55℃，在杂交炉孵育1-2小时；所述预杂交液是由5ml的去离子甲酰胺，2.5ml的20 x SSC溶液，200μl的50 x Denhardt’s溶液，50μl的浓度为200mg/ml的Heparin溶液，100μl的浓度为10mg/ml的tRNA溶液，100μl的浓度为10％的CHAPS溶液，100μl的浓度为10％的Tween-20溶液，100μl的浓度为0.5mol/L的pH8.0的EDTA溶液和1.85ml的DEPC-H2O混合配制而成。所述50 x Denhardt’s为一种常用的杂交试剂；所述200mg/ml的Heparin为200mg的Heparin粉末溶于1ml的DEPC-H2O中配制而成；所述10mg/ml的tRNA为10mg的tRNA粉末溶于1ml的DEPC-H2O中配制而成；所述10％的CHAPS为1g的CHAPS溶于1ml的DEPC-H2O中配制而成；所述10％的Tween-20为100μl的Tween-20溶于900μl的DEPC-H2O中配制而成；所述0.5mol/L的 pH8.0的EDTA为186.1g二水乙二胺四乙酸二钠加入800ml的DEPC-H2O中在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调pH值至8.0然后定容至1L配制而成高压灭菌备用；所述DEPC-H2O为1L超纯水加入体积百分比为0.1％的DEPC 1ml，放置过夜并高压灭菌处理后的水。
(g)将预杂交孵育后的组织切片浸入杂交液中，于55℃，在杂交炉中孵育16-20小时；所述杂交液是上述预杂交液中加入终浓度为1.0ug/ml的cRNA探针配置成的。
(h)杂交后用1 x SSC洗涤杂交的组织切片，37℃，2次，每次10分钟；
(i)用2 x SSC洗涤上述的组织切片，37℃，2次，每次10-15分钟；
(j)用10ug/ml的RNase A处理，37℃，1次，每次30-40分钟；
(k)用2 x SSC洗涤上述的组织切片，室温，1次，每次10分钟；
(l)用0.01mol/L PBS洗涤上述的组织切片，室温，1次，每次10分钟；所述0.01mol/L PBS是2.9克磷酸氢二钠，0.29克磷酸二氢钠，9.0克氯化钠用超纯水定容至1L配置的磷酸缓冲液。
(m)按1∶2000的抗体效价，在PBS溶液中加入Anti-Digoxigenin-AP抗体，对洗涤后的组织切片进行孵育，室温，放置过夜；
(n)将经过上步抗体孵育的组织片用0.01mol/L PBS洗涤，于室温，清洗3次，每次10-15分钟；
(o)用TS9.5洗涤上述PBS洗涤后的组织片，室温，清洗2次，每次15-20分钟；所述TS9.5为是由终浓度为摩尔浓度为0.1mol/L Tris-HCl(PH9.5)，摩尔浓度为0.1mol/L NaCl溶液和摩尔浓度为50mmol/L MgCL2用超纯水配制而成；
(p)将上述切片放于NBT-BCIP反应液中避光孵育4～6小时，在此过程中观察切片呈色强度；所述NBT-BCIP是一种Roche公司生产的呈色反应液。
(q)当呈色完成后，将切片用PBS清洗3次，室温，每次10-15分钟；
(r)将上述洗涤后切片表于载玻片上；
(s)晾干切片，再经过二甲苯脱色，封片，以备观察。
本发明的有益效果是：本发明对活体动物建立模型后进行灌注、取材、切片，通过地高辛标记的cRNA探针与组织中谷氨酸转运蛋白-3基因的mRNA发生特异性的结合，从而方便、准确的观察到组织中谷氨酸转运蛋白-3基因mRNA水平的变化。本发明使用的谷氨酸转运蛋白-3的探针序列，对谷氨酸转运蛋白-3基因mRNA的显示有明确的特异性，实现了对谷氨酸转运蛋白-3基因mRNA水平的显示作用。
附图说明：
图1为本发明的谷氨酸转运蛋白-3在海马的分布X4倍图；
图2为本发明的谷氨酸转运蛋白-3在海马的分布X40倍图。
具体实施方式：
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
参见图1和图2，谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交探针的制备方法，按照如下步骤
(1)根据谷氨酸转运蛋白-3的Gene bank序列我们设计了谷氨酸转运蛋白-3特异的引物，并且此对引物扩增出292bp的谷氨酸转运蛋白-3片段作为谷氨酸转运蛋白-3特异的探针序列；
(2)构建谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交的探针质粒；将探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；
(3)制备谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交探针；
(4)检测谷氨酸转运蛋白-3的cRNA探针的原位杂交。
探针的设计：
根据谷氨酸转运蛋白-3的Gene bank序列我们设计了谷氨酸转运蛋白-3特异的引物，并且此对引物扩增出292bp的谷氨酸转运蛋白-3片段作为谷氨酸转运蛋白-3特异的探针序列。
谷氨酸转运蛋白-3特异的引物如下：
上游引物5′GCTGTGCGGAAGAAAAGAAC3′；
下游引物5′ACGGCAATGATGAGGGTGAC3′。
谷氨酸转运蛋白-3特异的探针序列：
5′GCTGTGCGGAAGAAAAGAACCACGTGGACAAGAGGATCACAAGATTTGTGCTGCCCGTCGGCGCCACCATCAACATGGACGGCACTGCGCTCTATGAAGCCGTGGCAGCTGTGTTCATTGCGCAGCTGAACGGCATGGACCTGAGCATTGGGCAGATCATCACGATCAGCATCACAGCCACCGCTGCTAGCATTGGAGCTGCCGGTGTGCCCCAGGCTGGCCTGGTGACCATGGTGATCGTGTTGAGTGCCGTGGGGCTGCCTGCTGAGGACGTCACCCTCATCATTGCCGT3′
谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交的探针质粒的构建：
1.将大鼠的cDNA用设计的引物进行PCR扩增。
2.将PCR产物用TIANGEN胶回收试剂盒进行胶回收。
3.将回收后的产物于4℃与多克隆位点两端具有T7，SP6启动子的载体进行连接。
4.将连接好的质粒转化细菌后，摇菌培养送金斯瑞公司进行测序。
谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交探针的制备：
1.测序正确后，经判断确认谷氨酸转运蛋白-3探针序列插入载体的顺序是正向的。
2.需要使用BamH I限制性内切酶对质粒进行酶切，
3.将酶切产物用TIANGEN胶回收试剂盒进行胶回收。
4.用SP6 RNA聚合酶对探针进行体外转录标记，体外转录的试剂盒(Ambion MEGAscript)是Ambion公司的产品。
谷氨酸转运蛋白-3的cRNA探针的原位杂交检测：
1.将大鼠用0.4％戊巴比妥钠深麻后，经左心室插管至升主动脉，用0.01mol/L的DEPC-PBS的快速冲洗去除血液，再以4％多聚甲醛灌注固定。
2.取材后进行脑组织的后固定：于4℃，用4％的多聚甲醛后固定24小时。
3.将固定好的组织进行切片：将组织切成25～30μm组织切片，并将切好的切片保存于0.01mol/L DEPC-PBS中，放于4℃冰箱备用。
4.将切好的组织片用0.01mol/L DEPC-PBS清洗1次，室温，每次5分钟。
5.将上述清洗过的片子用5 x SSC清洗2次，室温，每次5分钟。
6.将5 x SSC清洗后的组织片浸入预杂交液中，于55℃，在杂交炉孵育1小时。
7.将预杂交孵育后的组织切片浸入杂交液中，于55℃，在杂交炉中孵育16-20小时。
8.杂交后用1 x SSC洗涤杂交的组织切片，37℃，2次，每次10分钟。
9.用2 x SSC洗涤上述的组织切片，37℃，2次，每次10分钟。
10.用10ug/ml的RNase A处理，37℃，1次，每次30分钟。
11.用2 x SSC洗涤上述的组织切片，室温，1次，每次10分钟。
12.用0.01mol/L PBS洗涤上述的组织切片，室温，1次，每次10分钟。
13.按1∶2000的抗体效价，在0.01mol/L PBS溶液中加入Anti-Digoxigenin-AP抗体，对洗涤后的组织切片进行孵育，室温，放置过夜。
14.将经过上步抗体孵育的组织片用0.01mol/L PBS的洗涤，于室温，清洗3次，每次10分钟。
15.用TS9.5洗涤上述0.01mol/L PBS洗涤后的组织片，室温，清洗2次，每次15分钟。
16.将上述切片放于NBT-BCIP反应液中避光孵育4～6小时，在此过程中观察切片呈色强度。
17.当呈色完成后，将切片用0.01mol/L PBS清洗3次，室温，每次10分钟。
18.将上述洗涤后切片表于载玻片上。
19.晾干切片，再经过二甲苯脱色，封片，以备观察。
所用试剂：
TIANGEN胶回收试剂盒 公司：天根 货号：DP214-02
两端具有T7，SP6启动子的载体 公司：invitrogen 货号：K466001
BamH I限制性内切酶 公司：Takara 货号：D1010A
SP6 RNA聚合酶试剂盒 公司：Ambion 货号：AM1330
20 x SSC 公司：invitrogen 货号：AM9763
50 x Denhardt’s 公司：invitrogen 货号：750018
Heperine 公司：sigma 货号：H3393
tRNA 公司：sigma 货号：R8759
CHAPS 公司：sigma 货号：C9426
Tween-20 公司：sigma 货号：P9416
Anti-Digoxigenin-AP 公司：Roche 货号：11093274910
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范 围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (1)
1.一种谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交的探针，其特征在于，该探针的序列为：
5'GCTGTGCGGAAGAAAAGAACCACGTGGACAAGAGGATCACAAGATTTGTGCTGCCCGTCGGCGCCACCATCAACATGGACGGCACTGCGCTCTATGAAGCCGTGGCAGCTGTGTTCATTGCGCAGCTGAACGGCATGGACCTGAGCATTGGGCAGATCATCACGATCAGCATCACAGCCACCGCTGCTAGCATTGGAGCTGCCGGTGTGCCCCAGGCTGGCCTGGTGACCATGGTGATCGTGTTGAGTGCCGTGGGGCTGCCTGCTGAGGACGTCACCCTCATCATTGCCGT3'；
所述的谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交的探针的制备方法如下：
(1)根据谷氨酸转运蛋白-3的Gene bank序列我们设计了谷氨酸转运蛋白-3特异的引物，并且此对引物扩增出292bp的谷氨酸转运蛋白-3片段作为谷氨酸转运蛋白-3特异的探针序列，所述探针序列如上；
其中，所述的谷氨酸转运蛋白-3特异的引物是：
上游引物是5'GCTGTGCGGAAGAAAAGAAC3'；
下游引物是5'ACGGCAATGATGAGGGTGAC3'；
(2)构建谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交的探针质粒，包括：
(a)将大鼠的cDNA用谷氨酸转运蛋白-3特异的引物进行PCR扩增；
(b)将PCR产物用TIANGEN胶回收试剂盒进行胶回收；
(c)将回收后的产物于4℃与多克隆位点两端具有T7，SP6启动子的载体进行连接；
(d)将连接好的探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；
(3)制备谷氨酸转运蛋白-3的cRNA原位杂交探针，包括：
(a)经步骤(2)得到的细菌测序正确后，判断确认谷氨酸转运蛋白-3探针序列插入载体的顺序是正向的；
(b)使用BamHⅠ限制性内切酶对质粒进行酶切；
(c)将酶切产物用TIANGEN胶回收试剂盒进行胶回收；
(d)用SP6RNA聚合酶对探针进行体外转录标记；
(4)检测谷氨酸转运蛋白-3的cRNA探针的原位杂交，包括：
(a)将大鼠用0.4%戊巴比妥钠深麻后，经左心室插管至升主动脉，用0.01mol/L的DEPC-PBS的快速冲洗去除血液，再以4%多聚甲醛灌注固定；所述的0.01mol/L DEPC-PBS是2.9克磷酸氢二钠，0.29克磷酸二氢钠，9.0克氯化钠用超纯水定容至1L后，再加入体积百分比为0.1%的DEPC1ml放置过夜后，高压灭菌制成的磷酸盐缓冲液；所述4%的多聚甲醛是40.0克多聚甲醛加入500.0ml蒸馏水加热使之解聚溶解后，再加入500.0ml的0.2mol/L PB缓冲液定容至1000ml；所述0.2mol/L PB缓冲液是用29.01克磷酸氢二钠，2.96克磷酸二氢钠加超纯水定容至500ml配制而成；
(b)取材后进行脑组织的后固定：于4℃，用4%的多聚甲醛后固定24小时；
(c)将固定好的组织进行切片：将组织切成25～30μm组织切片，并将切好的切片保存于0.01mol/L的DEPC-PBS中，放于4℃冰箱备用；
(d)将切好的组织片用0.01mol/L的DEPC-PBS清洗1次，室温，每次5-10分钟；
(e)将上述清洗过的片子用5x SSC清洗2次，室温，每次5-10分钟；所述5x SSC是由20x SSC用超纯水稀释的，20x SSC为一种柠檬酸缓冲液；
(f)将5x SSC清洗后的组织片浸入预杂交液中，于55℃，在杂交炉孵育1-2小时；所述预杂交液是由5ml的去离子甲酰胺，2.5ml的20x SSC溶液，200μl的50x Denhardt’s溶液，50μl的浓度为200mg/ml的Heparin溶液，100μl的浓度为10mg/ml的tRNA溶液，100μl的浓度为1g/ml的CHAPS溶液，100μl的浓度为10%的Tween-20溶液，100μl的浓度为0.5mol/L的pH8.0的EDTA溶液和1.85ml的DEPC-H2O混合配制而成；所述50x Denhardt’s为一种常用的杂交试剂；所述200mg/ml的Heparin为200mg的Heparin粉末溶于1ml的DEPC-H2O中配制而成；所述10mg/ml的tRNA为10mg的tRNA粉末溶于1ml的DEPC-H2O中配制而成；所述1g/ml的CHAPS为1g的CHAPS溶于1ml的DEPC-H2O中配制而成；所述10%的Tween-20为100μl的Tween-20溶于900μl的DEPC-H2O中配制而成；所述0.5mol/L的pH8.0的EDTA为186.1g二水乙二胺四乙酸二钠加入800ml的DEPC-H2O中在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调pH值至8.0然后定容至1L配制而成高压灭菌备用；所述DEPC-H2O为1L超纯水加入体积百分比为0.1%的DEPC1ml，放置过夜并高压灭菌处理后的水；
(g)将预杂交孵育后的组织切片浸入杂交液中，于55℃，在杂交炉中孵育16-20小时；所述杂交液是上述预杂交液中加入终浓度为1.0μg/ml的谷氨酸转运蛋白-3基因cRNA原位杂交的探针配置成的；
(h)杂交后用1x SSC洗涤杂交的组织切片，37℃，2次，每次10分钟；
(i)用2x SSC洗涤上述的组织切片，37℃，2次，每次10-15分钟；
(j)用10μg/ml的RNase A处理，37℃，1次，每次30-40分钟；
(k)用2x SSC洗涤上述的组织切片，室温，1次，每次10分钟；
(l)用0.01mol/L PBS洗涤上述的组织切片，室温，1次，每次10分钟；所述0.01mol/L PBS是2.9克磷酸氢二钠，0.29克磷酸二氢钠，9.0克氯化钠用超纯水定容至1L配置的磷酸缓冲液；
(m)按1:2000的抗体效价，在PBS溶液中加入Anti-Digoxigenin–AP抗体，对洗涤后的组织切片进行孵育，室温，放置过夜；
(n)将经过上步抗体孵育的组织片用0.01mol/L PBS洗涤，于室温，清洗3次，每次10-15分钟；
(o)用TS9.5洗涤上述PBS洗涤后的组织片，室温，清洗2次，每次15-20分钟；所述TS9.5为是由终浓度为摩尔浓度为0.1mol/L Tris-HCl（PH9.5）,摩尔浓度为0.1mol/L NaCl溶液和摩尔浓度为50mmol/LMgCL2用超纯水配制而成；
(p)将上述切片放于NBT-BCIP反应液中避光孵育4～6小时，在此过程中观察切片呈色强度；所述NBT-BCIP是一种Roche公司生产的呈色反应液；
(q)当呈色完成后，将切片用PBS清洗3次，室温，每次10-15分钟；
(r)将上述洗涤后切片表于载玻片上；
(s)晾干切片，再经过二甲苯脱色，封片后观察。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201210022007 CN102559904B (zh) | 2012-02-01 | 2012-02-01 | 一种谷氨酸转运蛋白-3基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201210022007 CN102559904B (zh) | 2012-02-01 | 2012-02-01 | 一种谷氨酸转运蛋白-3基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102559904A CN102559904A (zh) | 2012-07-11 |
| CN102559904B true CN102559904B (zh) | 2013-10-23 |
Family
ID=46406503
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201210022007 Expired - Fee Related CN102559904B (zh) | 2012-02-01 | 2012-02-01 | 一种谷氨酸转运蛋白-3基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102559904B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103074332A (zh) * | 2012-09-10 | 2013-05-01 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种NKCC1基因cRNA原位杂交的探针及其设计方法 |
| CN106916886A (zh) * | 2017-01-18 | 2017-07-04 | 中国人民解放军第四军医大学 | 一种用于荧光原位杂交的动力相关蛋白1基因引物及其cRNA原位杂交探针的制备方法 |
| CN114369644A (zh) * | 2021-05-17 | 2022-04-19 | 中国人民解放军空军军医大学 | 糖原磷酸化酶基因的cRNA原位杂交探针及其制备方法 |
| CN117305360A (zh) * | 2023-09-15 | 2023-12-29 | 江南大学 | 一种哺乳动物细胞核转染液及其制备方法和在细胞核内递送的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5658782A (en) * | 1993-10-20 | 1997-08-19 | State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The Oregon Health Sciences University A Non-Profit Organization | Amino acid transporters and uses |
-
2012
- 2012-02-01 CN CN 201210022007 patent/CN102559904B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5658782A (en) * | 1993-10-20 | 1997-08-19 | State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The Oregon Health Sciences University A Non-Profit Organization | Amino acid transporters and uses |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Eiichi Hinoi at el.Functional expression of particular isoforms of excitatory amino acid transporters by rodent cartilage.《Biochemical Pharmacology》.2005,(第70期),第70-81页. |
| Functional expression of particular isoforms of excitatory amino acid transporters by rodent cartilage;Eiichi Hinoi at el;《Biochemical Pharmacology》;20051231(第70期);第70-81页 * |
| 甲状腺过氧化物酶mRNA cRNA探针的构建及意义;陈云第;《临床与实验病理学杂志》;20081031;第28卷(第5期);第584-588页 * |
| 陈云第.甲状腺过氧化物酶mRNA cRNA探针的构建及意义.《临床与实验病理学杂志》.2008,第28卷(第5期), |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102559904A (zh) | 2012-07-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Boyd et al. | TLR15 is unique to avian and reptilian lineages and recognizes a yeast-derived agonist | |
| Bassity et al. | Functional identification of dendritic cells in the teleost model, rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) | |
| CN102559904B (zh) | 一种谷氨酸转运蛋白-3基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 | |
| Ventura et al. | Butyric and retinoic mixed ester of hyaluronan: A novel differentiating glycoconjugate affording a high throughput of cardiogenesis in embryonic stem cells | |
| Schaap-Oziemlak et al. | MicroRNA hsa-miR-135b regulates mineralization in osteogenic differentiation of human unrestricted somatic stem cells | |
| US20140141423A1 (en) | miRNAs Differentially Expressed in Lymph Nodes from Cancer Patients | |
| WO2013090457A3 (en) | In vivo delivery of oligonucleotides | |
| Fatima et al. | MicroRNAs in domestic livestock | |
| Chen et al. | Cgi-miR-92d indirectly regulates TNF expression by targeting CDS region of lipopolysaccharide-induced TNF-α factor 3 (CgLITAF3) in oyster Crassostrea gigas | |
| CN104450706B (zh) | 利用rna干扰技术诱导凡纳滨对虾血淋巴细胞发生upr的方法 | |
| CN102605051B (zh) | 一种EAAT2基因cRNA原位杂交的探针及其设计方法 | |
| Fu et al. | Detection of mycobacterial small RNA in the bacterial culture supernatant and plasma of patients with active tuberculosis | |
| CN110368399A (zh) | 一种反义肽核酸-dna四面体载体复合物及其制备方法和应用 | |
| CN102643897B (zh) | 一种谷氨酸转运蛋白-1基因的cRNA 原位杂交探针及其制备方法 | |
| CN102311956B (zh) | 一种特异性碱基修饰反义核苷酸链及其应用 | |
| Chen et al. | An oyster species-specific miRNA scaffold42648_5080 modulates haemocyte migration by targeting integrin pathway | |
| Taxis et al. | MicroRNA expression and implications for infectious diseases in livestock. | |
| CN104004732B (zh) | 一种壳聚糖酶及其制备方法和应用 | |
| Yang et al. | Conditionally activated (“caged”) oligonucleotides | |
| CN107653308A (zh) | 一组用于区分活动性结核病人与非结核性肺炎病人的引物对组合及试剂盒 | |
| CN106916886A (zh) | 一种用于荧光原位杂交的动力相关蛋白1基因引物及其cRNA原位杂交探针的制备方法 | |
| CN108113961B (zh) | 亚精胺三盐酸盐介导核酸纳米材料自组装方法及采用该方法制备的三棱柱的纳米制剂和应用 | |
| CN105950748A (zh) | 一种基于rpoB基因鉴定高同源性海洋弧菌的方法 | |
| CN105238744A (zh) | 一种提高人精子活力的体外培养体系试剂盒及其应用 | |
| CN103074331A (zh) | 一种KCC2基因cRNA原位杂交的探针及其设计方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20131023 Termination date: 20150201 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |