CN102552269A

CN102552269A - SBT在作为GSK-3β的抑制剂方面的应用

Info

Publication number: CN102552269A
Application number: CN2012100329039A
Authority: CN
Inventors: 钟春玖; 赵士民; 何银华; 张寰
Original assignee: SHANGHAI WARM-HEARTED BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHANGHAI WARM-HEARTED BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-02-14
Filing date: 2012-02-14
Publication date: 2012-07-11
Also published as: WO2013120379A1

Abstract

本发明提供了SBT在GSK-3β的抑制剂方面的应用，具体可用于预防和治疗阿尔茨海默病和衰老。目前国内外并未见利用SBT用于预防和/或治疗AD和衰老的研究的报道。本发明首次揭示了SBT具有提高p-GSK-3β的水平，从而使GSK-3β水平下降，达到神经保护的作用，从而用来预防和/或治疗AD和衰老。

Description

SBT在作为GSK-3β的抑制剂方面的应用

技术领域

本发明涉及一种SBT在GSK-3β的抑制剂方面的应用，具体可用于预防和治疗阿尔茨海默病和衰老。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，又称老年痴呆症。调查显示，2010年美国AD患病人数已达540万，并预期在2050年将达到1100-1600万人，而全球AD患者可能超过3000万人。作为世界上最大的发展中国家和已进入人口老龄化社会的国家，我国无论是痴呆的患病率和发病率均与欧美国家接近。对北京、上海、成都、西安4个主要城市的AD患病率调查显示，65岁以上老年人患病率为5.9％，由此估计我国AD患者业已超过600万，给社会、家庭带来沉重的精神和经济负担及各种医疗和社会问题。据国际阿尔茨海默症学会报告称：2010年，阿尔茨海默症对全球经济产生的影响高达6040亿美元，远远超过癌症或心脏病对经济的影响。尽管人们认识AD已有百年历史，但到目前为止，我们仍然缺乏能预防、阻断或延缓其病程进展的治疗药物，目前临床上使用的药物仅具有对症处理作用。因而，研究阻止或延缓AD疾病发展的新药已经成为事关全球健康安全的战略问题，其产品的市场前景和社会价值不言而喻。

AD最显著的神经病理组织学特征是神经细胞之间出现大量β淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)和神经细胞内tau蛋白异常聚集。研究显示AD患者脑内糖合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3，GSK-3)活性显著增高。GSK-3是一个与多方面生理机能和疾病发病机制关联的蛋白激酶，有两个同功异构体，分别是GSK-3α(51KD)和GSK-3β(47KD)。GSK-3信号通路能通过双通道作用机制同时调控Aβ产生和Tau蛋白磷酸化而受到AD研究学者的广泛重视。研究证明，GSK-3α通过特异性底物调控γ-分泌酶活性和APP加工的β通路功能，GSK-3α活性升高导致Aβ产生增加。此外，GSK-3β介导的Tau蛋白过磷酸化在AD发病机制中的作用也被广泛研究，在体外动物模型研究证明，GSK-3β基因过表达导致的酶活性增高诱发脑内Tau蛋白过磷酸化和神经变性性病理损害发生，抑制或下调GSK-3β表达或活性可以减少Aβ的产生和Tau蛋白磷酸化而发挥神经保护作用。因此，GSK-3抑制剂被证明具有显著的神经保护作用，通过调制GSK-3信号通路功能防治AD被赋予极高的期望。目前国内外并未见利用SBT用于预防和/或治疗AD和衰老的研究的报道。我们的研究首次揭示了SBT具有提高p-GSK-3β的水平，从而使GSK-3β水平下降，达到神经保护的作用，从而用来预防和/或治疗AD和衰老。

综上所述，SBT可以作为GSK-3β的抑制剂，提高p-GSK-3β的水平，使GSK-3β水平下降。因此SBT在临床上可用来预防和/或治疗阿尔茨海默病和衰老，具有重大的理论意义和潜在的社会与经济价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种化合物SBT的新的临床用途，采用SBT作为GSK-3β的抑制剂，用于预防和/或治疗阿尔茨海默病与衰老。

本发明提供了SBT在作为GSK-3β的抑制剂方面的应用。

本发明还提供了SBT在制备预防和/或治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

本发明还提供了SBT在制备预防和/或治疗衰老药物中的应用。

所述的SBT具有式(I)的分子结构，化学名为S-[2-[[(4-氨基-2-甲基-5-嘧啶)甲基]甲酰氨基]-1-[2-羟乙基]-1-丙烯-1-基]硫代苯甲酸酯，其分子式：C19H22N4O3S，分子量：386.48。

经离体细胞实验表明，在HEK293细胞中，SBT具有提高p-GSK-3β的水平，从而使GSK-3β水平下降，达到神经保护的作用，从而用来预防和/或治疗AD和衰老。

在本化合物的应用中，剂型并不特别限定，可以从口服或非口服用的剂型中选择适宜的形式。例如口服给药剂型，包括但不仅限于片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、微粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、悬浊剂、咀嚼剂等。非口服给药的剂型，包括但不仅限于注射剂(皮下注射、肌肉注射、静脉注射等)、点滴剂、外用剂(软膏剂、贴剂、粘胶剂、喷雾剂、栓剂等)，可以按常规方法制成上述剂型。

在固体口服给药制剂的制造中，可以使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露糖等赋形剂，淀粉、藻酸钠等崩解剂，硬脂酸镁、滑石粉等润滑剂，聚乙烯醇、羟丙基纤维素、明胶等粘合剂，脂肪酸酯等表面活性剂，甘油等可塑剂等药用辅料。在口服液体制剂中，可以添加水、蔗糖、山梨糖醇、果糖等糖类，聚乙二醇、丙二醇等醇类，芝麻油、橄榄油、大豆油等油类，对羟基苯甲酸酯类等防腐剂及各种调味剂等药用辅料。在非口服剂型中可以添加水、赋形剂、崩解剂、润滑剂，聚乙烯醇、表面活性剂、可塑剂、醇类、油类、调味剂类等药用辅料。

进而还可以在本发明的制剂中添加在各种药品、非处方药品或食品中公知的对于改善阿尔茨海默病及衰老有益的药物，如硫辛酸、肉碱、硫酸锌、辅酶Q10、维生素B6、甲钴胺、叶酸等，对于本领域的技术人员来说，可以将这些成分中的1种或1种以上成分以适当的比例添加。

本发明公开了一种预防和/或治疗阿尔茨海默病的药物，其特征在于，由SBT 1～1000重量份，硫辛酸0～1000重量份，肉碱0～1000重量份，硫酸锌0～1000重量份，辅酶Q10 0～1000重量份，维生素B6 0～1000重量份，甲钴胺0～10重量份、叶酸0～1000重量份组成。每日剂量1～1000mg。

本发明还公开了一种预防和/或治疗衰老的药物，其特征在于，由SBT 1～1000重量份，硫辛酸0～1000重量份，肉碱0～1000重量份，硫酸锌0～1000重量份，辅酶Q10 0～1000重量份，维生素B6 0～1000重量份，甲钴胺0～10重量份、叶酸0～1000重量份组成。每日剂量1～1000mg。

与现有技术相比，本发明的优点是：

目前国内外并未见利用SBT用于预防和/或治疗AD和衰老的研究的报道。本发明首次揭示了SBT具有提高p-GSK-3β的水平，从而使GSK-3β水平下降，达到神经保护的作用，从而用来预防和/或治疗AD和衰老。

附图说明

图1a为在HEK293细胞中，用western blot分析不同浓度的SBT对p-GSK3β及GSK3β的蛋白表达量的影响。Vehicle为阴性对照组，LiCl为阳性对照组，SBT为给药组；

图1b为在HEK293细胞中，不同浓度的SBT对p-GSK3β/GSK3β表达水平的影响。Vehicle为阴性对照组，LiCl为阳性对照组，SBT为给药组；

具体实施方式

下面结合实施例来具体说明本发明，但本发明的范围并不限定于实施例所限定的范围。

实施例1：制备不同剂型的SBT：

按本领域常规方法，分别制备SBT片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、微粒剂、糖浆剂、溶液剂、乳剂、悬浊剂、咀嚼剂、注射剂(皮下注射、肌肉注射、静脉注射等)、点滴剂、外用剂(软膏剂、贴剂、粘胶剂、喷雾剂、栓剂等)等。

实施例2：

一种预防和/或治疗阿尔茨海默病以及衰老的药物，由SBT组成，每日计量500mg。

实施例3:

一种预防和/或治疗阿尔茨海默病以及衰老的药物，由SBT 1000重量份，硫辛酸1000重量份，肉碱1000重量份，硫酸锌1000重量份，辅酶Q10 1000重量份，维生素B6 1000重量份，甲钴胺10重量份、叶酸1000重量份混合而成。每日剂量1000mg。

实施例5：SBT的离体细胞实验：

传代后的HEK293细胞平铺于12孔细胞培养板中，加入1.5mlDMEM(含10％FBS )培养基，待细胞贴壁并生长至孔板面积的80％时，加入SBT原药进行干预。分组为：阴性对照组(加入3ul双蒸水)、阳性对照LiCl 10mM组(加入1.5μl浓度为10M的LiCl母液，培养基中终浓度为10mM)，SBT 40μM组(加入3μl浓度为20mM的SBT母液，培养基中终浓度为40μM)、SBT 20μM组(加入1.5μl浓度为20mM的SBT母液，培养基中终浓度为20μM)。加药24小时后，用PBS清洗2次，加入100ul/孔RIPA裂解细胞，将细胞悬液放入4度冰箱中待其充分裂解，半小时后取出，离心取上清，进行western blot检测，所得图片利用Image J图像分析软件分析后，进行student T检验。如图1a-图1b，SBT可以作为GSK-3β的抑制剂，提高p-GSK-3β的水平，使GSK-3β水平下降达到神经保护的作用。证明SBT具有预防和/或治疗阿尔茨海默病和衰老的作用。

实施例6：SBT的动物实验：

(1)实验动物：

乙醇所致记忆再现障碍小鼠，ICR雄性小鼠，体重为16-18g，来自上海西普尔-必凯实验动物有限公司；

(2)实验仪器：

8鼠(小鼠)动物行为避暗视频分析系统，规格型号为JLBehv-STG-8，生产厂家为上海吉量软件科技有限公司；

(3)实验方法：

将乙醇所致记忆再现障碍小鼠分为7组，即阴性对照组、模型组、安理申组、苯磷硫胺组、SBT高剂量组、SBT中剂量组和SBT低剂量组，每组10只，通过口服给药，连续3周每日按照表1所示的治疗剂量给药，以安理申组为阳性对照组，以非治疗组为阴性对照组。各组的具体测试方法为：

将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，启动电脑开始程序，视屏分析系统自动通过摄像头和电脑软件系统采集小鼠进入暗室的时间(潜伏期)，记录1min取出小鼠，24h后进行测试。测试前30min，i.g.给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)(阴性对照组给予等容积的饮用水替代乙醇溶液)。再次开启视屏分析系统，记录动物由明室进入暗室的潜伏期和5min内的电击次数(错误次数)。计算机将划运动轨迹并分析数据。结果显示，160、80mg/kg的SBT不同程度延长了小鼠由明室进入暗室的潜伏期，且在此试验中，SBT显示了良好的量效关系。

因此，在所测定的剂量范围内，SBT显示了一定的改善由乙醇所致小鼠记忆再现障碍作用的趋势。SBT具有改善由药物诱发的正常小鼠的记忆障碍、改善其认知功能、延长平均期望寿命等的功能，证明SBT具有预防和/或治疗阿尔茨海默病和衰老的作用。

表1.SBT连续i.g.给药3周对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响(n＝10，

)

*P＜005，**P＜0.01与模型组相比。

Claims

1.SBT在作为GSK-3β的抑制剂方面的应用。

2.SBT在制备预防和/或治疗阿尔茨海默病药物中的应用。

3.SBT在制备预防和/或治疗衰老药物中的应用。

4.一种预防和/或治疗阿尔茨海默病的药物，其特征在于，由SBT 1～1000重量份，硫辛酸0～1000重量份，肉碱0～1000重量份，硫酸锌0～1000重量份，辅酶Q10 0～1000重量份，维生素B6 0～1000重量份，甲钴胺0～10重量份、叶酸0～1000重量份组成。

5.一种预防和/或治疗衰老的药物，其特征在于，由SBT 1～1000重量份，硫辛酸0～1000重量份，肉碱0～1000重量份，硫酸锌0～1000重量份，辅酶Q100～1000重量份，维生素B6 0～1000重量份，甲钴胺0～10重量份、叶酸0～1000重量份组成。