CN102477072B - 用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用。本发明的用于溶血栓的寡肽化合物如附图所示，其中n＝6、8、10、12、14和16。本发明通过动物实验评价了化合物的溶血栓活性，证明了本发明的化合物除了具有优秀的溶血栓活性外，还具有靶向性能和预防新栓形成的作用，以及自主装性能。

Description

用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及用于溶血栓的寡肽化合物及其制备方法和应用，具体涉及通式6a-f化合物，属于生物医药领域。
背景技术
P6A(ARPAK)为纤维蛋白β链降解产物之一，具有溶血栓活性。在P6A的代谢研究中发现了代谢产物PAK。在大鼠动静脉旁路插管溶血栓模型上，PAK的溶血栓活性比母体P6A强。按照一般的认识,多肽在体内都会迅速降解。通过PAK的结构修饰延缓体内降解速率和提高溶血栓活性，是寡肽溶血栓药物研究的重要途径。
血小板膜糖蛋白GPII b/III a受体的活化是血小板聚集的最终共同通道，在血栓形成中起到重要作用。RGD序列作为活化GPIIb/IIIa受体的特异性配体，具有抗血小板聚集作用和血栓靶向性。利用RGD序列对血栓部位活化血小板的靶向作用制备靶向溶栓药物，能够减少系统纤溶和出血并发症，同时抑制血栓部位血小板聚集。
按照一般的认识，含多肽的两亲性分子，例如脂肪醇链修饰的多肽，在适当的条件下通过分子间非共价键相互作用可发生自组装，形成纳米结构。借助纳米结构可改善多肽在体内的输送、延缓多肽在体内的降解速率和提高多肽的体内活性。
发明内容
本发明的目的在于提供用于溶血栓的寡肽化合物，并通过动物实验评价这些化合物的溶血栓活性。
本发明是通过以下技术方案来实现这些内容的：
本发明的目的之一是提供通式6a-f的化合物，
Figure GDA00003138687300021
通式6a-f
其中，n为6、8、10、12、14或16。
本发明的目的之二是提供通式6a-f化合物的制备方法，具体包括如下步骤：
1)在二环己基碳二亚胺(DCC)存在下Boc-Pro在无水THF中与和N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)缩合为Boc-Pro-Osu,在NaHCO3存在下Boc-Pro-OSu与Ala反应生成Boc-Pro-Ala;
2)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala在无水THF中与Lys(Boc)-OMe缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OMe;
3)在NaOH存在下，在甲醇中将Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OMe皂化为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc);
4)在DCC存在下Boc-Asp(OBzl)在无水THF中与饱和脂肪胺缩合为Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3，所述饱和脂肪胺为C8,10,12,14,16,18的饱和脂肪胺;
5)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3脱去Boc生成Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3;
6)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)在无水THF中与Asp(OBzl)-NH-CH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3;
7)在NaOH存在下在甲醇中Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3皂化生成Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)nCH3;
8)在DCC和HOBt存在下Boc-Arg(NO2)在无水THF中与Gly-OBzl缩合为Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl;
9)在NaOH存在下在甲醇中将Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl皂化生成Boc-Arg(NO2)-Gly;
10)在DCC和HOBt存在下Boc-Asp(OBzl)在无水THF中与Val-OBzl缩合为Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
11)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl脱去Boc生成Asp(OBzl)-Val-OBzl;
12)在DCC和HOBt存在下Boc-Arg(NO2)-Gly和Asp(OBzl)-Val-OBzl在无水THF中缩合生成Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
13)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl脱Boc生成Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
14)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)nCH3在无水THF中与Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)nCH3;
15)在三氟甲磺酸和三氟醋酸存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)nCH3脱去保护基得到通式6a-f化合物。
本发明的目的之三是提供一种药物组合物，该药物组合物含有治疗上有效剂量的所述通式6a-f化合物，并含有一种或多种药学上可接受的赋型剂或者辅加剂。
本发明的目的之四是提供一种药物制剂，该药物制剂是将通式6a-f化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂的混合物制成片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂或口服液。
本发明的通式6a-f化合物以及本发明的药物组合物可用于制备溶血栓的药物。
本发明通过动物实验评价了本发明的通式6a-f化合物的溶血栓活性，证明了本发明的通式6a-f化合物除了具有优秀的溶血栓活性外，还具有靶向性能和预防新栓形成的作用，以及自主装性能。
附图说明
图1为本发明的通式6a-f;
图2为本发明的通式6a-f化合物的合成路线图;
在图2中，i)DCC、HOSu、NaHCO3和Ala;ii)DCC、HOBt、NMM;iii)NaOH水溶液;iv)氯化氢/乙酸乙酯溶液(4N);v)三氟甲磺酸、三氟醋酸。
图3为本发明化合物6f的透射电子显微镜照片。
具体实施方式
为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
实施例1Boc-Pro-Ala的制备
将1.075g(5.0mmol)Boc-Pro溶于20mL无水THF，冰浴下向溶液中加入0.637g(5mmol)N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)，并使完全溶解。冰浴下，把已溶于少量无水THF的二环己基碳二亚胺(DCC)1.236g(6.0mmol)加入反应液中。室温搅拌7h，TLC(石油醚/乙酸乙酯，3:1)监测Boc-Pro消失。滤除二环己基脲(DCU)，滤液减压浓缩除去THF。浓缩物用乙酸乙酯(EA)溶解，依次用饱和NaHCO3水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗，然后将EA层减压浓缩至干，加入适量THF溶解。再加入已溶于少量水的Ala0.489g(5.5mmol)，用NaHCO3固体调pH到8-9，常温反应12h，减压浓缩除去THF，加入5mL水溶解，用饱和KHSO4水溶液调pH到2，用EA少量多次萃取，合并EA层，用饱和NaCl水溶液洗至中性，无水硫酸钠干燥。过滤，滤液减压浓缩至干得1.36g(95%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):285[M-H]-。
实施例2Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OBzl的制备
将1.20g(4.2mmol)Boc-Pro-Ala溶于20mL无水THF，冰浴下向溶液中加入0.54g(4.0mmol)HOBt，并使完全溶解。冰浴下加入1.03g(5mmol)DCC。得到反应液I，搅拌30分钟。冰浴下把1.19g(4.0mmol)Lys(Boc)-OMe悬浮于20mL无水THF中，然后加入1mL N-甲基吗啉(NMM)，调pH8-9，得到反应液II。冰浴下把反应液II加入反应液I中，先冰浴下搅拌1h，再室温搅拌4h，TLC(二氯/甲醇,15:1)显示Lys(Boc)-OMe消失。滤除DCU，滤液减压浓缩除去THF。残留物用50mL乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用饱和NaHCO3水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、5％KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液洗。乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥、过滤，滤液减压浓缩至干得到2.00g(94%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e)：525[M+H]+。
实施例3Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)的制备
将1.59g(3.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OMe溶于15mL甲醇。冰浴下将得到的溶液用NaOH(2N)水溶液调pH12并搅拌2h，TLC(二氯/甲醇,15:1)显示Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OMe消失。反应混合物用稀盐酸(2N)调pH为7，减压浓缩除甲醇。残留物用稀盐酸(2N)调pH2，用乙酸乙酯萃取3次。合并的乙酸乙酯相用饱和NaCl水溶液洗至中性，无水Na2SO4干燥。过滤，滤液减压浓缩至干得1.31g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):513[M-H]-。
实施例4Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)6CH3(1a)的制备
按实施例2的制备方法将1.324g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和0.52g(4.0mmol)NH2CH2(CH2)6CH3制得1.68g(96.6%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):401[M+H]+。
实施例5Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)6CH3(2a)的制备
将1.52g(3.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)6CH3溶解在15mL4M氯化氢-乙酸乙酯溶液中，冰浴搅拌2小时，TLC(二氯/甲醇，15/1)监测原料点消失，减压浓缩除去乙酸乙酯，残留物反复加少量乙醚进行减压浓缩以除去氯化氢气，最后得1.22g(94%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):369[M+H]+。
实施例6Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)8CH3(1b)的制备
按实施例2的制备方法由1.32g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和0.63g(4.0mmol)NH2CH2(CH2)8CH3制得1.79g(97%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):429[M+H]+。
实施例7Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)8CH3(2b)的制备
按实施例5的制备方法由1.62g(3.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)8CH3制得1.33g(95%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):397[M+H]+。
实施例8Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3(1c)的制备
按实施例2的制备方法由1.32g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和0.74g(4.0mmol)NH2CH2(CH2)10CH3制得1.89g(97%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):457[M+H]+。
实施例9Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3(2c)的制备
按实施例5的制备方法由1.72g(3.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3制得1.40g(94%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):426[M+H]+。
实施例10Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3(1d)的制备
按实施例2的制备方法由1.32g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和0.85g(4.0mmol)NH2CH2(CH2)12CH3制得1.99g(96%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)：485[M+H]+。
实施例11Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3(2d)的制备
按实施例5的制备方法由1.81g(3.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3制得1.51g(95%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):454[M+H]+。
实施例12Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3(1e)的制备
按实施例2的制备方法由1.32g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和0.96g(4.0mmol)NH2CH2(CH2)14CH3得到2.09g(96%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):513[M+H]+。
实施例13Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3(2e)的制备
按实施例5的制备方法由1.91g(3.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3制得1.61g(96%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):482[M+H]+。
实施例14Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)16CH3(1f)的制备
按实施例2的制备方法由1.32g(4.1mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.08g(4.0mmol)NH2CH2(CH2)16CH3制得2.19g(96%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):541[M+H]+。
实施例15Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)16CH3(2f)的制备
按实施例5的制备方法由2.01g(3.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)16CH3制得1.69g(94%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):510[M+H]+。
实施例16Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)6CH3(3a)的制备
按实施例2的制备方法，从1.03g(2.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和0.78g(2.1mmol)Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)6CH3制备得1.41g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):829[M+H]+。
实施例17Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)6CH3(4a)的制备
按实施例3的制备方法，由1.33g(1.6mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)6CH3制得0.994g(84%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):741[M-H]-。
实施例18Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)8CH3(3b)的制备
按实施例2的制备方法由1.10g(2.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和0.84g(2.1mmol)Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)8CH3制得1.47g(86%)标题化合物,为无色固体。ESI-MS(m/e):857[M+H]+。
实施例19Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)8CH3(4b)的制备
按实施例3的制备方法由1.43g(1.6mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)8CH3制得1.03g(84%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):769[M-H]-。
实施例20Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3(3c)的制备
按实施例2的制备方法由1.10g(2.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和0.90g(2.1mmol)Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3制得1.50g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):885[M+H]+。
实施例21Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)10CH3(4c)的制备
按实施例3的制备方法由1.47g(1.6mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)10CH3制得1.08g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):797[M-H]-。
实施例22Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3(3d)的制备
按实施例2的制备方法由1.10g(2.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和0.95g(2.1mmol)Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3制得1.57g(86%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):913[M+H]+。
实施例23Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)12CH3(4d)的制备
按实施例3的制备方法由1.52g(1.6mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)12CH3制得1.11g(84%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):825[M-H]-。
实施例24Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3(3e)的制备
按实施例2的制备方法由1.10g(2.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和1.01g(2.1mmol)Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3制得1.60g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):941[M+H]+。
实施例25Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)14CH3(4e)的制备
按实施例3的制备方法由1.56g(1.6mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)14CH3制得1.17g(86%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):853[M-H]-。
实施例26Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)16CH3(3f)的制备
按实施例2的制备方法由1.10g(2.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)和1.07g(2.1mmol)Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)16CH3制得1.65g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):969[M+H]+。
实施例27Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)16CH3(4f)的制备
按实施例3的制备方法由1.61g(1.6mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)16CH3制得1.20g(85%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):881[M-H]-。
实施例28Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl的制备
按照实施例2的制备方法，将1.60g(5.0mmol)Boc-Arg(NO2)和1.69g(5.0mmol)Gly-OBzl制得2.24g(96%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):466[M+H]+。
实施例29Boc-Arg(NO2)-Gly的制备
按照实施例3的制备方法，1.63g(3.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl制得1.23g(94%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):375[M-H]-
实施例30Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制备
按照实施例2的制备方法由1.62g(5.0mmol)Boc-Asp(OBzl)和1.895g(5.0mmol)Val-OBzl制得2.324g(97%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):513[M+H]+
实施例31Asp(OBzl)-Val-OBzl的制备
按照实施例5的制备方法由2.05g(4mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得1.749g(97%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):413.4[M+H]+
实施例32Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制备
按照实施例2的制备方法由1.313g(3.5mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly和1.569g(3.5mmol)Asp(OBzl)-Val-OBzl制得1.8g(67%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):771[M+H]+
实施例33Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl的制备
按实施例5的制备方法，从1.70g(2.2mmol)Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl制得1.42g(95%)标题化合物，为淡黄色固体。ESI-MS(m/e):672[M+H]+
实施例34制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)6CH3(5a)
按照实施例2的制备方法由0.74g(1.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)6CH3和0.707g(1.0mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应，得0.31g(22.2%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1395[M+H]+;Mp:118-119°C;[α]D 25=-37.333(c=0.43，CH3OH).IR(KBr):3296，3072，2968，2930，2858，1731，1682，1637，1535，1455，1394，1366，1255，1172，697；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=8.5-7.8(m,9H),7.4-7.3(s,10H),5.2-5.0(m,4H),4.8-4.7(m,1H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.1(m,5H),3.75-3.65(m,2H),3.4-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,3H),2.9-2.7(m,3H),2.65-2.45(m,4H),2.15-2.05(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.65-1.45(m,5H),1.4-1.15(m,38H),0.9-0.8(d,J=5.4Hz,9H).
实施例35制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)8CH3(5b)
按照实施例2的制备方法由0.77g(1.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)8CH3和0.707g(1.0mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应，得0.33g(23.2%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1423[M+H]+;Mp:123-124°C;[α]D 25=-26.4(c=0.58，CH3OH).IR(KBr):3230,3069,2929,2856,1740,1632,1538,1455,1393,1366,1254,1170,1002,734,697;1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=8.5-7.8(m,9H),7.4-7.3(s,10H),5.2-5.0(m,4H),4.8-4.7(m,1H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.1(m,5H),3.75-3.65(m,2H),3.4-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,3H),2.9-2.7(m,3H),2.65-2.45(m,4H),2.15-2.05(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.65-1.45(m,5H),1.4-1.15(m,42H),0.9-0.8(d,J=5.4Hz,9H).
实施例36制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)10CH3(5c)
按照实施例2的制备方法由0.80g(1.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)10CH3和0.707g(1.0mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应，得0.41g(27.2%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1451[M+H]+;Mp118-119°C;[α]D 25=-70.4(c=0.58,CH3OH);IR(KBr):3298,3068,2928,2855,1732,1687,1636,1540,1456,1395,1366,1255,1170,1001,731,697;1HNMR(300MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=8.5-7.8(m,9H),7.4-7.3(s,10H),5.2-5.0(m,4H),4.8-4.7(m,1H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.1(m,5H),3.75-3.65(m,2H),3.4-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,3H),2.9-2.7(m,3H),2.65-2.45(m,4H),2.15-2.05(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.65-1.45(m,5H),1.4-1.15(m,46H),0.9-0.8(d,J=5.4Hz,9H).
实施例37制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)12CH3(5d)
按照实施例2的制备方法由0.83g(1.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)12CH3和0.707g(1.0mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应得0.48g(32.0%)标题化合物，为无色粉末。ESI-MS(m/e):1478[M+H]+;Mp109-110°C;[α]D 25=-27.3(c=0.27,CH3OH);IR(KBr):3298,3068,2962,2927,2855,1736,1683,1636,1541,1456,1395,1366,1255,1170,1001,731,694;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=8.5-7.8(m,9H),7.4-7.3(s,10H),5.2-5.0(m,4H),4.8-4.7(m,1H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.1(m,5H),3.75-3.65(m,2H),3.4-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,3H),2.9-2.7(m,3H),2.65-2.45(m,4H),2.15-2.05(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.65-1.45(m,5H),1.4-1.15(m,50H),0.9-0.8(d,J=5.4Hz,9H).
实施例38制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)14CH3(5e)
按照实施例2的制备方法由0.86g(1.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)14CH3和0.707g(1.0mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应得0.48g(31.8%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1508[M+H]+;Mp99-100°C;[α]D 25=-32.9(c=0.30,CH3OH);IR(KBr):3299,3068,2962,2926,2854,1736,1687,1636,1540,1456,1395,1366,1254,1169,1123,743,697;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=8.5-7.8(m,9H),7.4-7.3(s,10H),5.2-5.0(m,4H),4.8-4.7(m,1H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.1(m,5H),3.75-3.65(m,2H),3.4-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,3H),2.9-2.7(m,3H),2.65-2.45(m,4H),2.15-2.05(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.65-1.45(m,5H),1.4-1.15(m,54H),0.9-0.8(d,J=5.4Hz,9H).
实施例39制备Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)16CH3(5f)
按照实施例2的制备方法由0.88g(1.0mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)16CH3和0.707g(1.0mmol)Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl反应得0.51g(37.5%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1535[M+H]+;Mp91-92°C;[α]D 25=-32.2(c=0.30,CH3OH);IR(KBr):3299,3068,2962,2926,2854,1736,1683,1638,1540,1456,1395,1366,1254,1172,1115,735,698;1H NMR(300MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=8.5-7.8(m,9H),7.4-7.3(s,10H),5.2-5.0(m,4H),4.8-4.7(m,1H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.1(m,5H),3.75-3.65(m,2H),3.4-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,3H),2.9-2.7(m,3H),2.65-2.45(m,4H),2.15-2.05(m,2H),1.85-1.65(m,4H),1.65-1.45(m,5H),1.4-1.15(m,58H),0.9-0.8(d,J=5.4Hz,9H).
实施例40制备Pro-Ala-Lys-Asp(Arg-Gly-Asp-Val)-NHCH2(CH2)6CH3(6a)
将100mg(0.07mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)6CH3(5a)置于带干燥管的茄瓶中，冰浴下，加4mL三氟醋酸和1mL三氟甲磺酸，反应1h，TLC显示反应完全，加入大量无水乙醚，搅拌5min，静置，倾去上清液，重复三次，抽干，加少量蒸馏水溶解，氨水调pH7，通过Sephadex柱除盐，冻干，即得57mg(84.5%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):960[M+H]+;Mp111-112°C;[α]D 25=-40.5(c=0.17,CH3OH);IR(KBr):3160,1661,1545,1404,1259,1176,1032,768,645,579,519;1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=10.4-10.25(d,J=22.5Hz,1H),9.2-9.1(m,1H),8.7-8.3(m,4H),7.95-7.65(m,2H),7.15-6.85(m,2H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.2(m,4H),4.0-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,8H),2.95-2.7(t,J=7.2Hz,J=7.5Hz,3H),2.7-2.4(m,8H),2.4-2.3(m,1H),2.25-2.15(m,1H),2.05-1.95(m,2H),1.9-1.6(m,5H),1.6-1.45(m,4H),1.45-1.2(m,17H),0.9-0.84(t,J=5.7Hz,J=6.9Hz,3H),0.84-0.75(d,J=4.2Hz,6H).
实施例41制备Pro-Ala-Lys-Asp(Arg-Gly-Asp-Val)-NHCH2(CH2)8CH3(6b)
按实施例40的方法由100mg(0.07mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)8CH3(5b)反应得56mg(80.2%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):998[M+H]+;Mp103-104°C;[α]D 25=-15.0(c=0.45,CH3OH);IR(KBr):3364,3072,2930,2856,2357,1653,1556,1402,1250,654;1H-NMR(500MHz,DMSO-d6):δ/ppm=10.4-10.25(d,J=22.5Hz,1H),9.2-9.1(m,1H),8.7-8.3(m,4H),7.95-7.65(m,2H),7.15-6.85(m,2H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.2(m,4H),4.0-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,8H),2.95-2.7(t,J=7.2Hz,J=7.5Hz,3H),2.7-2.4(m,8H),2.4-2.3(m,1H),2.25-2.15(m,1H),2.05-1.95(m,2H),1.9-1.6(m,5H),1.6-1.45(m,4H),1.45-1.2(m,21H),0.9-0.84(t,J=6.6Hz,J=7.05Hz,3H),0.84-0.75(t,J=4.55Hz,J=6.5Hz,6H).
实施例42制备Pro-Ala-Lys-Asp(Arg-Gly-Asp-Val)-NHCH2(CH2)10CH3(6c)
按实施例40的方法由100mg(0.07mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)10CH3(5c)反应得61.2mg(86.7%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1026[M+H]+;Mp102-103°C;[α]D 25=-11.2(c=0.17,CH3OH);IR(KBr):3363,3072,2930,2860,2357,1652,1556,1404,1258,1029,649,514,473;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=10.4-10.25(d,J=22.5Hz,1H),9.2-9.1(m,1H),8.7-8.3(m,4H),7.95-7.65(m,2H),7.15-6.85(m,2H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.2(m,4H),4.0-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,8H),2.95-2.7(t,J=7.2Hz,J=7.5Hz,3H),2.7-2.4(m,8H),2.4-2.3(m,1H),2.25-2.15(m,1H),2.05-1.95(m,2H),1.9-1.6(m,5H),1.6-1.45(m,4H),1.45-1.2(m,25H),0.9-0.84(t,J=6.6Hz,J=7.05Hz,3H),0.84-0.75(t,J=4.55Hz,J=6.5Hz,6H).
实施例43制备Pro-Ala-Lys-Asp(Arg-Gly-Asp-Val)-NHCH2(CH2)12CH3(6d)
按实施例40的方法由100mg(0.07mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)12CH3(5d)反应得58.8mg(82.5%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1054[M+H]+;Mp107-108°C;[α]D 25=-10.8(c=0.47，CH3OH);IR(KBr):3747,3391,3286,2927,2857,2361,1649,1544,1402,1246,1033,649,417;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=10.4-10.25(d,J=22.5Hz,1H),9.2-9.1(m,1H),8.7-8.3(m,4H),7.95-7.65(m,2H),7.15-6.85(m,2H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.2(m,4H),4.0-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,8H),2.95-2.7(t,J=7.2Hz,J=7.5Hz,3H),2.7-2.4(m,8H),2.4-2.3(m,1H),2.25-2.15(m,1H),2.05-1.95(m,2H),1.9-1.6(m,5H),1.6-1.45(m,4H),1.45-1.2(m,29H),0.9-0.84(t,J=6.6Hz,J=7.05Hz,3H),0.84-0.75(t,J=4.55Hz,J=6.5Hz,6H).
实施例44制备Pro-Ala-Lys-Asp(Arg-Gly-Asp-Val)-NHCH2(CH2)14CH3(6e)
按实施例40的方法由100mg(0.07mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)14CH3(5e)反应得60.1mg(83.7%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1082[M+H]+;Mp100-101°C;[α]D 25=-17.8(c=0.60,CH3OH);IR(KBr):3747,3343,2926,2856,2361,1651,1542,1394,1251,1167,1070,1032,641,519,470;1H-NMR(500MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=10.4-10.25(d,J=22.5Hz,1H),9.2-9.1(m,1H),8.7-8.3(m,4H),7.95-7.65(m,2H),7.15-6.85(m,2H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.2(m,4H),4.0-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,8H),2.95-2.7(t,J=7.2Hz,J=7.5Hz,3H),2.7-2.4(m,8H),2.4-2.3(m,1H),2.25-2.15(m,1H),2.05-1.95(m,2H),1.9-1.6(m,5H),1.6-1.45(m,4H),1.45-1.2(m,33H),0.9-0.84(t,J=6.6Hz,J=7.05Hz,3H),0.84-0.75(t,J=4.55Hz,J=6.5Hz,6H).
实施例45制备Pro-Ala-Lys-Asp(Arg-Gly-Asp-Val)-NHCH2(CH2)16CH3(6f)
按实施例40的方法由100mg(0.06mmol)Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)16CH3(5e)反应得61.7mg(85.4%)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):1110[M+H]+;Mp89-90°C;[α]D 25=-10.2(c=0.40,CH3OH);IR(KBr):3436,3166,1649,1556,1403,1258,1179,1034,768,647,579,520;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)=δ/ppm=10.4-10.25(d,J=22.5Hz,1H),9.2-9.1(m,1H),8.7-8.3(m,4H),7.95-7.65(m,2H),7.15-6.85(m,2H),4.6-4.5(m,1H),4.4-4.2(m,4H),4.0-3.2(m,4H),3.2-2.9(m,8H),2.95-2.7(t,J=7.2Hz,J=7.5Hz,3H),2.7-2.4(m,8H),2.4-2.3(m,1H),2.25-2.15(m,1H),2.05-1.95(m,2H),1.9-1.6(m,5H),1.6-1.45(m,4H),1.45-1.2(m,37H),0.9-0.84(t,J=6.6Hz,J=7.05Hz,3H),0.84-0.75(t,J=4.55Hz,J=6.5Hz,6H)。
实验例16a-f静脉注射给药的体内溶血栓活性试验
将200–220g雄性SD大鼠用20%乌拉坦溶液(6ml/kg,i.p.)进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定，分离右颈总动脉，于近心端夹动脉夹，近心端和远心端分别穿入手术线，将远心端的手术线于皮毛用止血钳夹紧，在远心端插管，松开动脉夹，放出约1ml动脉血并装在1ml的EP管中。往垂直固定的玻璃管(长15mm，内径2.5mm，外径5.0mm，管底用胶塞密封)中注入0.1ml大鼠动脉血液，往管内迅速插入一支不锈钢质料的血栓固定螺栓。该血栓固定螺旋用直径为0.2mm的不锈钢丝绕成，螺旋部分长12mm，含15个螺圈，螺圈的直径为1.0mm，托柄与螺旋相连，长7.0mm，呈问号型。血液凝固15min后，打开玻璃管底部的胶塞，用镊子固定血栓固定螺旋的托柄，从玻璃管中取出被血栓包裹的血栓固定螺旋，精确称重。
旁路插管由3段构成，中段为聚乙烯胶管，长60mm，内径3.5mm，两端为相同的聚乙烯管，长100mm，内径1mm，外径2mm，该管的一端拉成尖管(用于插入大鼠颈动脉或静脉)，外径1mm，另一端的外部套一段长7mm，外径3.5mm的聚乙烯管(加粗,用于插入中段的聚乙烯胶管内)。3段管的内壁均硅烷化。将血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯胶管内，胶管的两端分别与两根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU/kg)备用。
分离大鼠的左颈外静脉，近心端和远心端分别穿入手术线，在暴露的左颈外静脉上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的尖管由斜口插入左颈外静脉开口的近心端，同时远离旁路管中段（含精确称重的血栓固定螺旋）内血栓固定螺旋的托柄。用注射器通过另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水（50IU/kg），此时注射器不撤离聚乙烯管，用止血钳夹住注射器与聚乙烯管之间的软管。在右颈总动脉的近心端用动脉夹止血，在离动脉夹不远处将右颈总动脉小心地剪一斜口。从聚乙烯管的尖部拔出注射器，将聚乙烯管的尖部插入动脉斜口的近心端。旁路管道的两端都用4号手术缝线与动静脉固定。
用头皮针将生理盐水(3ml/kg)，尿激酶的生理盐水溶液(20000IU/kg)或1nmol/kg6a-f的生理盐水溶液通过旁路管的中段(含精确称重的血栓固定螺旋)，刺入远离血栓固定螺旋的近静脉处，打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠动静脉旁路溶栓模型，缓慢将注射器中的液体注入到血液中(约6min)，使生理盐水(空白对照)，尿激酶(阳性对照)或本发明的化合物通过血液循环，按静脉—心脏—动脉的顺序作用到血栓上。从开始注射时计时，1h后从旁路管道中取出血栓固定螺旋，精确称重。计算每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋给药前后的质量差，统计并评价化合物的体内溶栓活性。结果如表1所示。结果表明,6a-f有优秀的体内溶栓活性。
表1
Figure GDA00003138687300161
表1为1nmol/kg6a-f对大鼠血栓减重的影响a，其中，a为样本数，即所用大鼠的个数，a)n=12,血栓减重用均值±SD mg表示;b)与生理盐水组比,p<0.01。
实验例2剂量对6f体内溶血栓活性的影响
按照实验例1的实验方法，选取溶栓效果最好的6f考察10nmol/kg、1nmol/kg和0.01nmol/kg三个剂量下的溶栓活性。结果如表2所示。结果表明,6f的溶栓作用显示剂量依赖性。
表2
Figure GDA00003138687300162
表2为6f的剂量对大鼠血栓减重的影响a，其中，a为样本数，即所用大鼠的个数，a)n=10,血栓减重用均值±SD mg表示;b)与生理盐水及1nmol/kg6f组比,p<0.01;c)与生理盐水及0.1nmol/kg6f组比,p<0.01;d)与生理盐水相比，p<0.01。
实验例36a-f的体外溶血栓活性
1)血栓形成装置的制作
将内径4mm，外径5.5mm，长度18mm的一段玻璃管安放在一个塑料易拆卸底座上，玻璃管和塑料底座的接缝处用一段乳胶管密封。玻璃管中放置一不锈钢丝螺旋，螺旋直径1mm，长度20mm，包括一端的2mm长的挂钩，血液即凝固在不锈钢螺旋的周围，称重时可将血栓挂起，在孵育时可以将血栓挂在反应瓶的溶液中，不碰到四壁，以免损伤血栓。
2)反应瓶的制作
用带橡胶塞的10ml西林瓶，在橡胶塞上穿一根不锈钢丝，在瓶中的一端弯成钩，血栓挂在钩上，悬浮于瓶内待测化合物溶液中，不锈钢丝可以在橡胶塞上上下移动，调节血栓在溶液中的高度，使其刚好浸在待测溶液中。体内环境的模拟：按照大鼠平均体重估计每只大鼠有13ml血液，如果是大鼠体内血栓模型，可能约8ml的血液可接触到血栓，故反应瓶中加入8ml待测溶液，在37°C恒温摇床孵育。
3)血栓的制备
将350-400g雄性SD大鼠用20%乌拉坦(6ml/kg,i.p.)，麻醉，仰卧固定，分离右颈总动脉，动脉夹夹闭近心端，动脉夹上方插入30mm长聚乙烯管，每次放出约3-4ml血，大约可放2-3次，用硅烷化的5ml注射器立即将放出的血液逐个注入制备血栓用的玻璃管中，马上将不锈钢螺旋放入。静置40min使血栓形成，之后将玻璃管小心从底座上取下，用细针将血栓四周和玻璃管内壁分开，取出血栓挂在反应瓶的橡胶塞上，反应瓶中加入8ml蒸馏水，将血栓悬挂在水中静置1小时，除掉血栓表面浮血。1小时后，用滤纸吸去血栓表面的水分，逐个精确称重。
4)测定6a-f体外溶栓活性：
在每个反应瓶中重新注入6a-f(10nM)的生理盐水溶液，以生理盐水作为空白对照，尿激酶(100IU/ml)作为阳性对照，再将血栓悬挂于待测化合物的溶液中，37°C恒温摇床70rpm孵育2小时。孵育结束后，用滤纸吸取表面水再逐个精确称重，计算血栓在加入待测溶液前后的重量差，统计评价化合物体外溶栓活性。结果如表3所示。结果表明,6a-f有优秀的体外溶栓活性。
表3
Figure GDA00003138687300171
表3为10nM6a-f体外溶栓活性a，其中，a为样本数，即所用大鼠的个数，a)n=6,血栓减重用均值±SD mg表示;b)与生理盐水组比,p<0.01。
实验例4浓度对6f体外溶血栓活性的影响
按照实验例3的实验方法，选取溶栓效果最好的6f考察100nM,10nM和0.1nM三个浓度下的溶栓活性。结果如表4所示。结果表明,6f的体外溶栓作用显示浓度依赖性。
表4
Figure GDA00003138687300181
表4为6f的浓度对体外溶栓活性的影响a，其中，a为样本数，即所用大鼠的个数，a)n=6,血栓减重用均值±SD mg表示;b)与生理盐水及10nM6f组比,p<0.01;c)与生理盐水及0.1nM6f组比,p<0.01;d)与生理盐水组比,p<0.01。
实验例56a-f的自主装性能评价
1)水溶液中6a-f纳米球的粒径
在激光散射粒度仪上观察了25°C和37°C时6a-f在10-4M、10-5M和10-6M水溶液中形成的纳米球的粒径。结果如表5所示，结果表明，6a-f在水溶液中可组装为纳米球，25°C时粒径为173至636nm，37°C时粒径为145至331nm。
表5
Figure GDA00003138687300182
Figure GDA00003138687300191
2)6a-f的纳米球的形态
将6a-f配成浓度为1×10-12mg/ml的水溶液，然后将此溶液滴在铜网上，挥发干溶剂后在JEM-1230透射电子显微镜下观察纳米球的形态。测定表明，6a-f形成规则的纳米球。6f的透射电子显微镜照片作为代表，用图3描述。

Claims (6)

1.通式6a-f的化合物，
Figure FDA0000466027890000011
其中，n为6、8、10、12、14或16。
2.一种制备权利要求1所述通式6a-f的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)在二环己基碳二亚胺存在下Boc-Pro在无水THF中与和N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)缩合为Boc-Pro-Osu,在NaHCO3存在下Boc-Pro-OSu与Ala反应生成Boc-Pro-Ala;
2)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala在无水THF中与Lys(Boc)-OMe缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OMe;
3)在NaOH存在下，在甲醇中将Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-OMe皂化为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc);
4)在DCC存在下Boc-Asp(OBzl)在无水THF中与饱和脂肪胺缩合为Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3，所述饱和脂肪胺为C8,10,12,14,16,18的饱和脂肪胺;
5)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3脱去Boc生成Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3;
6)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)在无水THF中与Asp(OBzl)-NH-CH2(CH2)nCH3缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3；
7)在NaOH存在下在甲醇中Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp(OBzl)-NHCH2(CH2)nCH3皂化生成Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)nCH3;
8)在DCC和HOBt存在下Boc-Arg(NO2)在无水THF中与Gly-OBzl缩合为Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl;
9)在NaOH存在下在甲醇中将Boc-Arg(NO2)-Gly-OBzl皂化生成Boc-Arg(NO2)-Gly；
10)在DCC和HOBt存在下Boc-Asp(OBzl)在无水THF中与Val-OBzl缩合为Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
11)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl脱去Boc生成Asp(OBzl)-Val-OBzl;
12)在DCC和HOBt存在下Boc-Arg(NO2)-Gly和Asp(OBzl)-Val-OBzl在无水THF中缩合生成Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
13)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中Boc-Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl脱Boc生成Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl;
14)在DCC和HOBt存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp-NHCH2(CH2)nCH3在无水THF中与Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl缩合为Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)nCH3;
15)在三氟甲磺酸和三氟醋酸存在下Boc-Pro-Ala-Lys(Boc)-Asp[Arg(NO2)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl]-NHCH2(CH2)nCH3脱去保护基得到通式6a-f化合物。
3.一种用于溶血栓的药物组合物，其特征在于，含有治疗上有效剂量的权利要求1所述的通式6a-f化合物，并含有一种或多种药学上可接受的赋型剂或者辅加剂。
4.一种药物制剂，其特征在于，是将权利要求1所述通式6a-f化合物与药学上可接受的赋型剂或者辅加剂的混合物制成片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂或口服液。
5.权利要求1所述通式6a-f化合物在制备抗血栓药物中的应用。
6.权利要求3所述药物组合物在制备抗血栓药物中的应用。
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