CN102464590B

CN102464590B - 一类免疫调节剂及其制备方法和用途

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Publication number: CN102464590B
Application number: CN2010105505983A
Authority: CN
Inventors: 左建平; 吕伟; 丰祥军; 杨筱莹
Original assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Current assignee: Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date: 2010-11-18
Filing date: 2010-11-18
Publication date: 2013-10-23
Anticipated expiration: 2030-11-18
Also published as: CN102464590A

Abstract

本发明公开了一类免疫调节剂及其制备方法和用途，所述免疫调节剂的具体结构通式如式(I)所示。经药理筛选，该免疫调节剂具有免疫调节活性，从而可用于器官移植药物中。

Description

一类免疫调节剂及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一类具有免疫调节活性的免疫调节剂，以及这些化合物的制备方法。更具体地说，本发明涉及支链改造的新一代免疫调节剂或其药学上可接受的盐，以及它们的制备方法和这些新化合物在免疫调节领域中的应用。

背景技术

免疫调节剂是一类具有免疫调节作用的药物，可通过影响机体免疫应答反应和免疫病理反应而调节机体的免疫功能，目前广泛应用于器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。免疫调节剂的迅速发展，为目前临床器官移植所取得的巨大成功奠定了基础。医学研究者们对免疫调节药物的不断探索与研究，新型药物的不断问世，使免疫调节药物在临床中的应用占有越来越重要的地位。

免疫调节剂发展至今，一般可分为四大类，分别为：类固醇类药物、抗代谢类药物、T淋巴细胞抑制剂和抗体类免疫抑制剂。

类固醇类药物主要有泼尼松、甲基强的松龙和地塞米松等。该类药物作为免疫调节剂在临床用药已有很长一段时间，其抗炎和免疫抑制作用已得到充分证实。此类药物对免疫反应的多个环节均有抑制作用，包括防止和抑制细胞中介的免疫反应，减少T淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性细胞的数目，降低免疫球蛋白与细胞表面受体结合的能力，并抑制白介素的合成与释放，从而阻止T淋巴细胞向淋巴母细胞转化，延缓源发免疫反应的扩展。

抗代谢类药物主要有硫唑嘌呤(AZP)和霉酚酸酯(MMF)。AZP主要作用于S期细胞，导致DNA合成障碍，并可抑制淋巴细胞增殖，防止抗原敏感型淋巴细胞转化为淋巴母细胞，但长期试用该药物易造成肝损伤、白细胞和血小板减少等不良反应。MMF具有较强的免疫抑制活性，其通过控制细胞和抗体介导的排斥作用，抑制抗体的形成来延长移植物的存活。

T淋巴细胞抑制剂主要有环孢素A(CsA)、他可莫司(FK506)等。环孢素A是第一个具有选择性的免疫调节剂，其无骨髓抑制副作用，不影响人体免疫系统防御感染的能力。FK506是一种强效免疫抑制剂，通过与FK结合蛋白结合，抑制钙依赖性磷酸酯合成酶，阻断活化的T细胞核心因子从细胞浆向细胞核转移，进而抑制IL-2的生成。

抗体类免疫抑制剂主要有单克隆T淋巴细胞抗体(OKT3)和抗淋巴细胞球蛋白(ALG)。单克隆T淋巴细胞抗体能特异性与人T淋巴细胞抗原相结合，直接作用于淋巴细胞亚群，阻断T细胞的再生及其功能，从而起到免疫调节作用，其最常见的不良反应为“首剂反应”。抗淋巴细胞球蛋白进入体内后，能够与循环系统中的淋巴细胞相结合，阻断淋巴细胞正常功能所必须的受体，在肝脏调理素和补体的协助下，选择性的耗尽T淋巴细胞，从而形成以T细胞为主的细胞免疫抑制状态，可以降低迟发型过敏反应提高器官移植物的生存率。

随着环孢素A(cyclosporin)、他克莫司(tacrolimus，FK506)等免疫调节药物的应用，临床器官移植成功率得到了很大的提高。但目前常规的免疫调节类药物大多治疗窗狭窄、价格昂贵，而且多具严重毒副作用，如长期服用环孢素的病人自身免疫力都有不同程度的削弱，感染病原微生物的危险性增加；他克莫司会导致局部皮肤免疫功能下降，进而引起继发细菌感染。

FTY720(1)，是一种新型的免疫调节剂。它是将冬虫夏草抽提物中具有免疫抑制作用的成份ISP-1进行结构改造而成。

FTY720(1)为鞘氨醇-1-磷酸酯(S1P)受体激动剂，在体内经磷酸化后的FTY720就成为S1P的类似物，可促使T淋巴细胞和B淋巴细胞自外周淋巴器官流出，也可促使胸腺细胞自胸腺流入外周血，从而减少淋巴细胞到达移植物部位的概率，延长移植器官的存活时间。FTY720的体内作用机制独特，在抑制免疫排斥反应发生的同时不会破坏机体对病毒的免疫应答及免疫记忆力，不良反应少，生物利用度高。

但是，FTY720在给药后会造成短暂心动过缓反应，其他的副作用主要常见于贫血、水肿、高血钾、多毛症、肠胃不适和心动过缓等症状。而且，导致黄斑变性的发生是FTY720所造成的最严重副作用，并最终使FTY720退出器官移植的临床试验。

因此，发展与常规免疫调节剂具有不同作用机制新型药物将有十分重要的意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一类免疫调节剂或其药学上可接受的盐，其活性与FTY720相当的免疫调节剂。

本发明的另一目的是提供一种所述免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备方法。

本发明的再一目的是提供所述免疫调节剂或其药学上可接受的盐在制备免疫调节药物中的应用。

本发明的目的是这样实现的：

根据本发明的第一个目的，本发明提供了一类免疫调节剂或其药学上可接受的盐。

通过对FTY720和其类似物的构效关系研究，在此基础上设计并合成了一系列新的免疫调节剂。本发明维持了该类化合物亲水头部结构，认为氨基丙二醇头部结构对其类似物的活性也是至关重要的；在亲酯部分中，由于苯环的存在，分子活性得以提高而毒副作用降低，因此也维持了苯环的结构。为了发展新的免疫调节剂，通过改变柔性的C₈支链，具体是用更具刚性的六元环支链代替刚性较差的烷基支链，通过增强支链的强度和立体位阻来提高此类新化合物的免疫调节活性，降低毒性及改善该类药物的药代动力学性质。

本发明提供的一类免疫调节剂或其药学上可接受的盐为FTY720苯环上侧链取代改造的化合物，其结构通式如式(I)所示：

其中：

R为H或C₂～C₅的直链烷基，具体为H-、CH₃CH₂-、CH₃CH₂CH₂-、CH₃(CH₂)₂CH₂-或CH₃(CH₂)₃CH₂-；优选地，R与苯环处于反式，结构通式(I)为反式构型。

根据本发明的第二个目的，本发明提供了一种上述免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备方法。

本发明上述的免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备，通过下列反应制得：

其中，R的定义同上；Cbz表示苄氧羰基。

a、化合物(Ⅱ)经酯化反应得化合物(Ⅲ)；

b、化合物(Ⅲ)进行还原反应得化合物(Ⅳ)；

c、化合物(Ⅳ)经溴代反应得化合物(Ⅴ)；

d、化合物(Ⅴ)与三苯基膦反应得化合物(Ⅵ)；

e、化合物(Ⅵ)与化合物(4)经过Witting偶联反应得到化合物(Ⅶ)，化合物(Ⅶ)为顺反异构体混合物；

f、化合物(Ⅶ)经氢化还原反应，同时脱去Cbz保护基得化合物(Ⅷ)；

g、化合物(Ⅷ)在稀酸条件下进行水解得化合物(Ⅰ)。

本发明上述的免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备方法可以具体描述如下：

化合物(Ⅱ)与甲醇通过常规的酯化反应，得到化合物(Ⅲ)。

化合物(Ⅲ)经还原反应得化合物(Ⅳ)，该反应所用的还原剂为铝或硼的复氢化物及其衍生物，优选为氢化铝锂、硼氢化钠、硼氢化锂或硼氢化钾和氯化锂，最优选为硼氢化钾和氯化锂体系；该反应所用溶剂优选四氢呋喃。

化合物(Ⅳ)经溴代反应制得化合物(Ⅴ)，该反应所用的溴化试剂常为溴化氢或三溴化磷，优选三溴化磷。

化合物(Ⅴ)与三苯基膦反应，优选无水甲苯为溶剂，在氮气保护下反应制得化合物(Ⅵ)。

化合物(Ⅵ)和化合物(4)在碱性条件下经Witting偶联反应生成烯烃化合物(Ⅶ)，常用的碱如氢化钠、叔丁醇钾、碳酸钾等，其中优选无水碳酸钾；反应溶剂优选四氢呋喃和N，N-二甲基甲酰胺混合溶剂；得到的烯烃化合物(Ⅶ)为顺反式混合物，但无需分离。

化合物(Ⅶ)再经加氢还原同时脱去Cbz保护基生成化合物(Ⅷ)，其中可使用本领域技术人员已知的催化剂，如钯碳，其用量为化合物(Ⅶ)质量的6％-10％，而氢压可为1-20kg/cm²。

化合物(Ⅷ)在稀酸条件下水解脱保护得化合物(Ⅰ)，常用的稀酸为稀硫酸、稀盐酸或乙酸(1mol/L-8mol/L)，优选稀盐酸，浓度为6mol/L。

例如，当R为CH₃(CH₂)₂CH₂-时，(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲酸(Ⅱ-4)经过常规的酯化、还原、溴代得到溴化物(Ⅴ-4)，然后溴化物(Ⅴ-4)与三苯基膦反应，生成关键中间产物(E)-4-(4-正丁基环己基)苄磷叶利德(Ⅵ-4)，化合物(Ⅵ-4)和另一关键中间产物醛(4)经过Witting偶联反应生成烯烃化合物(Ⅶ-4)，化合物(Ⅶ-4)再经过加氢还原同时脱去氨基Cbz保护基生成烷基氨化合物(Ⅷ-4)，化合物(Ⅷ-4)经过稀酸(例如，盐酸)脱保护制得目标化合物(Ⅰ-4)。反应式如下所示：

其中，上述的化合物4是以三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS，2)为起始原料制备得到的，具体实施方案如下：

原料三(羟甲基)氨基甲烷(TRIS，2)先后经过氨基Cbz保护、羟基丙酮叉保护和Swern氧化制得产物醛(4)，该反应已有论述，在此不再累述。可以参考文献Monatshefte für Chemie-Chemical Monthly：A Convenient Synthesis ofImmunosuppressive Agent FTY720。反应式如下：

根据本发明的第三个目的，本发明提供该类免疫调节剂或其药学上可接受的盐在制备免疫调节药物中的应用。

本发明所涉及的免疫调节剂化合物或其药学上可接受的盐具有良好的体内、外免疫调节活性。

附图说明

图1：腹腔注射给药条件对DNFB诱导的迟发型超敏反应的抑制作用。

图2：口服给药条件对DNFB诱导的迟发型超敏反应的抑制作用。

图3：化合物I-3和I-5对OVA诱导的T细胞增殖的抑制活性(3mg/kg/天)。

图4：无ConA存在的条件下，化合物I-5在体外诱导小鼠淋巴细胞凋亡的能力。右下象限凋亡早期细胞群(Annexin V+PI-细胞群)比例与FTY720相比较，无明显差异。

图5：ConA(2μg/mL)存在的条件下，化合物I-5在体外诱导小鼠淋巴细胞凋亡的能力。右下象限凋亡早期细胞群(Annexin V+PI-细胞群)比例与FTY720相比较，无明显差异。

图6：化合物I-5对于GVHD的治疗作用(口服3mg/kg/天)。

具体实施方式

以下将通过实施例进一步描述本发明，但是，这些实施例仅是用于说明本发明，而不是对本发明范围的限制。

制备实施例

制备实施例1

1)(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲酸甲酯(Ⅲ-4)

将(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲酸(Ⅱ-4)(购买自山东烟台芳臣化学材料技术有限责任公司)(26.0g，0.1mol)溶于200mL甲醇中，滴加入98％硫酸(0.9mL，0.014mol)。滴加完毕后加热回流反应8小时，反应完全，冷却后有白色固体析出，抽滤，水洗后少量甲醇洗，低温烘干，得白色固体24.2g，收率88％。

mp 39-40℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.04-1.08(m，2H)，1.23-1.25(m，2H)，1.30-1.31(m，5H)，1.44-1.47(m，2H)，1.87-1.90(m，4H)，2.50-2.53(m，1H)，3.90(s，3H)，7.27(d，J＝8Hz，2H)，7.95(d，J＝8Hz，2H).

2)4-环己基苯甲酸甲酯(Ⅲ-1)

方法同上，投入20.0g化合物Ⅱ-1(购买自山东烟台芳臣化学材料技术有限责任公司)，得到目标物19.5g，收率90％。

mp 41-43℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ1.24(s，1H)，1.34-1.45(m，4H)，1.74(d，1H)，1.84(m，4H)，2.54(d，1H)，3.88(s，3H)，7.25(d，J＝8Hz，2H)，7.94(d，J＝8Hz，2H).

3)(E)-4-(4-乙基环己基)苯甲酸甲酯(Ⅲ-2)

方法同上，投入23.2g化合物Ⅱ-2(购买自山东烟台芳臣化学材料技术有限责任公司)，得到目标物23.4g，收率95％。

mp 43-44℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.91(t，3H)，1.04-1.08(m，2H)，1.19-1.21(m，1H)，1.25-1.90(m，2H)，1.43-1.50(m，2H)，1.89(d，4H)，2.50-2.55(m，1H)，3.90(s，3H)，7.27(d，J＝9Hz，2H)，7.95(d，J＝9Hz，2H).

4)(E)-4-(4-正丙基环己基)苯甲酸甲酯(Ⅲ-3)

方法同上，投入24.6g化合物Ⅱ-3(购买自山东烟台芳臣化学材料技术有限责任公司)，得到目标物21.8g，收率84％。

mp 42-43℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.06-1.08(m，2H)，1.21-1.24(m，2H)，1.33-1.36(m，3H)，1.47-1.48(m，2H)，1.87-1.90(m，4H)，2.51-2.53(m，1H)，3.90(s，3H)，7.27(d，J＝9Hz，2H)，7.95(d，J＝9Hz，2H).

5)(E)-4-(4-正戊基环己基)苯甲酸甲酯(Ⅲ-5)

方法同上，投入22.0g化合物Ⅱ-5(烟台芳臣化学材料技术有限责任公司)，得到目标物19.9g，收率86％。

mp 49-51℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.04-1.08(m，2H)，1.22-1.33(m，9H)，1.45-1.47(m，2H)，1.88-1.90(m，4H)，2.50-2.52(m，1H)，3.90(s，3H)，7.27(d，J＝7Hz，2H)，7.95(d，J＝7Hz，2H).

制备实施例2

1)(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲醇(Ⅳ-4)

将(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲酸甲酯(Ⅲ-4)(27.4g，0.1mol)、硼氢化钾(6.5g，0.12mol)和氯化锂(5g，0.12mol)悬溶于100mL无水四氢呋喃中，回流8小时后冷却至室温，缓慢滴加200mL饱和氯化铵溶液，继续搅拌2小时，减压浓缩除去四氢呋喃，乙酸乙酯萃取，有机相分别用水洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸镁干燥，浓缩得22.2g白色固体，收率：90％。

mp 47-48℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.92(t，3H)，1.07-1.08(m，2H)，1.24-1.32(m，7H)，1.46-1.48(m，2H)，1.86-1.90(m，4H)，2.48-2.50(m，1H)，4.66(s，2H)，7.21(d，J＝9Hz，2H)，7.29(d，J＝9Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ23.0，29.2，33.6，34.4，37.1，37.3，44.4，65.2，127.0，127.1，138.3，147.4.MS(EI)：m/z 246(M⁺，68).

2)4-环己基苯甲醇(Ⅳ-1)

方法同上，投入19.6g化合物Ⅲ-1，得到目标物15.2g，收率89％。

mp 35-37℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ1.26-1.27(m，1H)，1.38-1.43(m，4H)，1.76-1.77(m，1H)，1.83-1.88(m，4H)，2.50-2.52(m，1H)，4.64(s，2H)，7.20(d，J＝8Hz，2H)，7.28(d，J＝8Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ26.1，26.8，34.4，44.3，65.2，127.0，127.1，138.3，147.6.MS(EI)：m/z 190(M⁺，56).

3)(E)-4-(4-乙基环己基)苯甲醇(Ⅳ-2)

方法同上，投入18.5g化合物Ⅲ-2，得到目标物16.1g，收率98％。

mp 38-39℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.03-1.08(m，2H)，1.20-1.28(m，3H)，1.41-1.46(m，2H)，1.57(s，1H)，1.87-1.89(m，4H)，2.44-2.49(m，1H)，4.65(s，2H)，7.21(d，J＝8Hz，2H)，7.29(d，J＝8Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ11.5，29.9，33.2，34.3，44.4，65.3，127.0，127.1，138.3，147.5.MS(EI)：m/z 218(M⁺，68).

4)(E)-4-(4-正丙基环己基)苯甲醇(Ⅳ-3)

方法同上，投入19.5g化合物Ⅲ-3，得到目标物16.0g，收率92％。

mp 48-49℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.92(t，3H)，1.07-1.08(m，2H)，1.22-1.25(m，2H)，1.34-1.37(m，3H)，1.46-1.48(m，2H)，1.89-1.91(m，4H)，2.48-2.51(m，1H)，4.67(s，2H)，7.23(d，J＝8Hz，2H)，7.31(d，J＝8Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ14.4，20.0，33.6，34.4，37.0，39.7，44.4，65.3，127.0，127.1，138.3，147.5.MS(EI)：m/z 232(M⁺，72).

5)(E)-4-(4-正戊基环己基)苯甲醇(Ⅳ-5)

方法同上，投入12.0g化合物Ⅲ-5，得到目标物9.3g，收率86％。

mp 48-50℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.07-1.08(m，2H)，1.23-1.33(m，9H)，1.46-1.48(m，2H)，1.87-1.88(m，4H)，2.45-2.47(m，1H)，4.66(s，2H)，7.21(d，J＝7Hz，2H)，7.29(d，J＝7Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHZ)：δ14.1，22.7，26.6，32.2，33.6，34.3，37.3，37.4，44.4，65.2，127.0，127.1，138.3，147.5.MS(EI)：m/z 260(M⁺，72).

制备实施例3

1)(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲基溴(Ⅴ-4)

将(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲醇(Ⅳ-4)(34.5g，0.14mol)溶于200mL二氯甲烷中，冰浴冷却至-10℃，20分钟内滴加5.3mL三溴化磷，室温反应6小时，反应完毕，加入碎冰破坏多余的三溴化磷，有机相分别用水洗，饱和氯化钠溶液洗，无水硫酸钠干燥，旋蒸得淡黄色固体产物41.5g，产率：96％。

mp 33-35℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.92(t，3H)，1.05-1.08(m，2H)，1.25-1.34(m，7H)，1.44-1.46(m，2H)，1.88-1.90(m，4H)，2.48-2.49(m，1H)，4.51(s，2H)，7.20(d，J＝9Hz，2H)，7.33(d，J＝9Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ23.0，29.2，33.6，33.7，34.2，37.1，37.3，44.4，127.3，129.0，135.1，148.3.MS(EI)：m/z 308(M⁺，2).

2)4-环己基苯甲基溴(Ⅴ-1)

方法同上，投入13.3g化合物Ⅳ-1，得到目标物17.3g，收率98％。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ1.25-1.28(m，1H)，1.36-1.46(m，4H)，1.75-1.78(m，1H)，1.85-1.89(m，4H)，2.50-2.53(m，1H)，4.51(s，2H)，7.20(d，J＝8Hz，2H)，7.31(d，J＝8Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ26.0，26.8，33.7，44.3，44.2，127.2，128.9，135.0，148.4.MS(EI)：m/z 252(M⁺，3).

3)(E)-4-(4-乙基环己基)苯甲基溴(Ⅴ-2)

方法同上，投入13.0g化合物Ⅳ-2，得到目标物12.3g，收率74％。

¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.96(t，3H)，1.08-1.12(m，2H)，1.25-1.33(m，3H)，1.44-1.51(m，2H)，1.91-1.94(m，4H)，2.48-2.53(m，1H)，4.52(s，2H)，7.22(d，J＝8Hz，2H)，7.34(d，J＝8Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ11.5，29.9，33.1，33.7，34.2，39.0，44.4，127.2，129.0，148.3.MS(EI)：m/z 280(M⁺，2).

4)(E)-4-(4-正丙基环己基)苯甲基溴(Ⅴ-3)

方法同上，投入10.0g化合物Ⅳ-3，得到目标物10.0g，收率79％。

mp 35-37℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.88(t，3H)，1.02-1.04(m，2H)，1.18-1.22(m，2H)，1.31-1.34(m，3H)，1.40-1.44(m，2H)，1.84-1.86(m，4H)，2.44-2.45(m，1H)，4.47(s，2H)，7.16(d，J＝8Hz，2H)，7.29(d，J＝8Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ14.4，20.0，33.5，33.8，34.2，37.0，39.7，44.4，127.3，129.0，135.1，148.3.MS(EI)：m/z 294(M⁺，2).

5)(E)-4-(4-正戊基环己基)苯甲基溴(Ⅴ-5)

方法同上，投入9.0g化合物Ⅳ-5，得到目标物9.0g，收率81％。

mp 31-32℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，3H)，1.03-1.05(m，2H)，1.21-1.32(m，9H)，1.42-1.45(m，2H)，1.85-1.87(m，4H)，2.42-2.45(m，1H)，4.45(s，2H)，7.15(d，J＝7Hz，2H)，7.28(d，J＝7Hz，2H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：d 14.1，22.7，26.6，32.2，33.5，34.2，37.2，37.3，44.3，127.2，128.9，135.1，148.2.MS(EI)：m/z 322(M⁺，2).

制备实施例4

1)(E)-4-(4-正丁基环己基)苄磷叶利德(Ⅵ-4)

将(E)-4-(4-正丁基环己基)苯甲基溴(Ⅴ-4)(20.7g，0.067mol)和三苯基膦(17.5g，0.067mol)溶于100mL无水甲苯中，氮气保护下回流反应6小时，冰浴冷却，有大量白色固体析出，抽滤并用乙酸乙酯洗，得白色固体37.1g，产率：97％。

mp 240-241℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.88(t，3H)，0.98-1.02(m，2H)，1.20-1.33(m，9H)，1.76-1.83(m，4H)，2.32-2.37(m，1H)，4.26(d，J＝11Hz，2H)，6.93-6.97(m，4H)，7.59-7.63(m，6H)，7.66-7.77(m，9H).

2)4-环己基苄磷叶利德(Ⅵ-1)

方法同上，投入17.0g化合物Ⅴ-1和17.5g三苯基膦，得到目标物33.5g，收率97％。

mp 237-239℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ1.18-1.36(m，5H)，1.70-1.81(m，5H)，2.35-2.41(m，1H)，5.29(d，J＝11Hz，2H)，6.94-6.98(m，4H)，7.60-7.63(m，6H)，7.68-7.77(m，9H).

3)(E)-4-(4-乙基环己基)苄磷叶利德(Ⅵ-2)

方法同上，投入5.6g化合物Ⅴ-2和5.3g三苯基膦，得到目标物10.4g，收率96％。

mp 243-245℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，0.98-1.01(m，2H)，1.20-1.26(m，3H)，1.32-1.35(m，2H)，1.80-1.85(m，4H)，2.34-2.39(m，1H)，5.31(d，J＝9Hz，2H)，6.94-6.97(m，4H)，7.60-7.64(m，6H)，7.69-7.78(m，9H).

4)(E)-4-(4-正丙基环己基)苄磷叶利德(Ⅵ-3)

方法同上，投入3.0g化合物Ⅴ-3和2.7g三苯基膦，得到目标物5.4g，收率96％。

mp 238-239℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，3H)，0.99-1.01(m，2H)，1.18-1.21(m，3H)，1.29-1.35(m，4H)，1.77-1.84(m，4H)，2.35-2.37(m，1H)，5.32(d，J＝9Hz，2H)，6.94-6.99(m，4H)，7.60-7.64(m，6H)，7.69-7.78(m，9H).

5)(E)-4-(4-正戊基环己基)苄磷叶利德(Ⅵ-5)

方法同上，投入4.9g化合物Ⅴ-5和4.0g三苯基膦，得到目标物8.4g，收率94％。

mp 242-243℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，3H)，1.00-1.03(m，2H)，1.19-1.35(m，11H)，1.68-1.85(m，4H)，2.34-2.39(m，1H)，5.33(d，J＝9Hz，2H)，6.95-6.99(m，4H)，7.61-7.65(m，6H)，7.70-7.78(m，9H).

制备实施例5

1)(E)-5-N-Cbz-5-{2-[4-(4-正丁基环己基)苯基]乙烯基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅶ-4)

将(E)-4-(4-正丁基环己基)苄磷叶利德(Ⅵ-4)(3.2g，0.0056mol)，5-N-Cbz-5-羰甲基-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(1.5g，0.005mol)和无水碳酸钾(2g，0.014mol)溶于30mL无水四氢呋喃和10mL无水N，N-二甲基甲酰胺混合溶剂中，回流反应18小时，冷却后减压浓缩除去四氢呋喃，加入水，用乙酸乙酯萃取，有机相分别用水洗，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得固体。过短柱(PE∶EA＝10∶1)得1.9g白色固体，为顺反式异构体混合物，无须拆分，可直接投入下一步，收率：77％。

2)5-N-Cbz-5-[2-(4-环己基苯基)乙烯基]-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅶ-1)

方法同上，投入5.2g化合物Ⅵ-1和3.0g化合物醛(4)，得到目标物3.7g，收率80％。

3)(E)-5-N-Cbz-5-{2-[4-(4-乙基环己基)苯基]乙烯基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅶ-2)

方法同上，投入1.8g化合物Ⅵ-2和0.9g化合物醛(4)，得到目标物1.1g，收率79％。

4)(E)-5-N-Cbz-5-{2-[4-(4-正丙基环己基)苯基]乙烯基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅶ-3)

方法同上，投入2.0g化合物Ⅵ-3和0.9g化合物醛(4)，得到目标物1.3g，收率76％。

5)(E)-5-N-Cbz-5-{2-[4-(4-正戊基环己基)苯基]乙烯基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅶ-5)

方法同上，投入2.0g化合物Ⅵ-5和0.9g化合物醛(4)，得到目标物1.3g，收率75％。

制备实施例6

1)(E)-5-氨基-5-{2-[4-(4-正丁基环己基)苯基]乙基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅷ-4)

将(E)-5-N-Cbz-5-{2-[4-(4-正丁基环己基)苯基]乙烯基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅶ-4)(2.0g，0.0043mol)和0.2g钯碳加入20mL无水甲醇中。充入氢气，室温反应2小时后减压过滤除去钯碳，直接进入下一步反应。

mp 78-80℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.05-1.08(m，2H)，1.23-1.31(m，7H)，1.41-1.44(m，8H)，1.60-1.63(m，2H)，1.85-1.86(m，4H)，2.44-2.45(m，1H)，2.61-2.65(m，2H)，3.47(d，J＝10Hz，2H)，3.79(d，J＝10Hz，2H)，7.09-7.13(m，4H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ23.0，27.3，28.3，29.2，33.6，34.4，37.1，37.3，37.6，44.2，48.7，70.1，98.2，126.9，128.1，139.2，145.6.HRMS-FAB m/z 373.2982[M]⁺(计算值：C₂₂H₃₉NO₂ 373.2981).

2)5-氨基-5-[2-(4-环己基苯基)乙基]-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅷ-1)

方法同上，投入1.8g化合物Ⅶ-1和0.2g钯碳，得到目标物1.0g，收率91％。

mp 60-63℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ1.36-1.45(m，10H)，1.60-1.63(m，2H)，1.72-1.75(m，1H)，1.82-1.84(m，7H)，2.46(s，1H)，2.61-2.65(m，2H)，3.48(d，J＝11Hz，2H)，3.79(d，J＝11Hz，2H)，7.10-7.14(m，4H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ26.1，26.9，27.4，28.2，29.7，34.5，37.6，44.1，48.7，70.1，98.2，126.9，128.1，139.2，146.8.HRMS-FAB m/z 317.2355[M]⁺(计算值：C₂₂H₃₉NO₂ 317.2355).

3)(E)-5-氨基-5-{2-[4-(4-乙基环己基)苯基]乙基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅷ-2)

方法同上，投入1.0g化合物Ⅶ-2和0.1g钯碳，得到目标物0.7g，收率90％。

mp 78-79℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.90(t，3H)，1.02-1.05(m，2H)，1.25-1.28(m，2H)，1.42-1.44(m，8H)，1.60-1.63(m，5H)，1.86-1.88(m，4H)，2.48-2.53(m，1H)，2.61-2.65(m，2H)，3.47(d，J＝10Hz，2H)，3.78(d，J＝10Hz，2H)，7.01-7.14(m，4H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ11.5，19.8，27.4，28.2，30.0，33.2，34.3，37.6，39.1，44.2，48.6，70.1，98.2，127.0，128.1，139.2，145.6.HRMS-FAB m/z 345.2667[M]⁺(计算值：C₂₂H₃₉NO₂ 345.2668).

4)(E)-5-氨基-5-{2-[4-(4-正丙基环己基)苯基]乙基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅷ-3)

方法同上，投入0.7g化合物Ⅶ-3和0.1g钯碳，得到目标物0.5g，收率88％。

mp 74-76℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，3H)，1.02-1.04(m，2H)，1.19-1.21(m，2H)，1.32-1.35(m，2H)，1.42-1.44(m，7H)，1.60-1.63(m，2H)，1.84-1.86(m，8H)，2.44-2.45(m，1H)，2.61-2.64(m，2H)，3.48(d，J＝10Hz，2H)，3.79(d，J＝10Hz，2H)，7.09-7.13(m，4H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ14.4，19.9，27.5，28.2，33.6，34.4，37.0，37.5，39.7，44.2，48.7，70.0，98.2，127.0，128.1，139.2，145.6.HRMS-FAB m/z 359.2819[M]⁺(计算值：C₂₂H₃₉NO₂359.2824).

5)(E)-5-氨基-5-{2-[4-(4-正戊基环己基)苯基]乙基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅷ-5)

方法同上，投入1.4g化合物Ⅶ-5和0.2g钯碳，得到目标物0.9g，收率89％。

mp 76-77℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，3H)，1.05-1.08(m，2H)，1.22-1.32(m，9H)，1.42-1.44(m，8H)，1.60-1.64(m，2H)，1.84-1.86(m，4H)，2.44-2.45(m，1H)，2.61-2.64(m，2H)，3.47(d，J＝10Hz，2H)，3.78(d，J＝10Hz，2H)，7.09-7.13(m，4H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ14.1，19.7，22.7，26.6，27.5，28.2，32.2，33.6，34.4，37.3，37.4，37.6，44.2，48.7，70.0，98.2，126.9，128.1，139.2，145.6.HRMS-FAB m/z 387.3139[M]⁺(计算值：C₂₂H₃₉NO₂387.3137).

制备实施例7

1)(E)-2-氨基-2-{2-[4-(4-正丁基环己基)苯基]乙基}-1，3-丙二醇盐酸盐(Ⅰ-4)

将(E)-5-氨基-5-{2-[4-(4-正丁基环己基)苯基]乙基}-2，2-二甲基-1，3-二氧六环(Ⅷ-4)(0.8g，0.0021mol)加入2.5mL 1mol/L的盐酸，加热50～60℃反应3小时，后冷却至室温，有固体析出，抽滤得白色鳞片状固体0.6g，收率80％。

mp 185-187℃.¹HNMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.87(t，3H)，1.00-1.04(m，2H)，1.21-1.22(m，2H)，1.27-1.28(m，5H)，1.38-1.41(m，2H)，1.75-1.81(m，6H)，2.48-2.52(m，1H)，2.55-2.58(m，2H)，3.51-3.54(m，4H)，5.39(t，3H)，7.09-7.13(m，4H)，7.92(s，3H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ13.9，22.4，27.9，28.6，33.1，33.2，33.9，36.5，36.6，43.4，60.3，60.9，126.5，127.9，139.0，144.7.

2)2-氨基-2-[2-(4-环己基苯基)乙基]-1，3-丙二醇盐酸盐(Ⅰ-1)

方法同上，投入1.0g化合物Ⅷ-1，得到目标物0.5g，收率81％。

mp 191-193℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ1.21-1.24(m，1H)，1.33-1.38(m，4H)，1.68-1.70(m，1H)，1.74-1.79(m，4H)，2.43-2.45(m，1H)，2.55-2.58(m，4H)，3.50-3.54(m，4H)，5.36-5.38(t，2H)，7.10-7.14(m，4H)，7.90(s，3H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ25.6，26.4，27.9，33.3，34.1，43.4，60.2，61.0，126.6，128.1，139.0，145.1.

3)(E)-2-氨基-2-{2-[4-(4-乙基环己基)苯基]乙基}-1，3-丙二醇盐酸盐(Ⅰ-2)

方法同上，投入0.7g化合物Ⅷ-2，得到目标物0.5g，收率78％。

mp 184-186℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.88(t，3H)，1.00-1.03(m，2H)，1.22-1.25(m，3H)，1.38-1.42(m，2H)，1.75-1.83(m，6H)，2.40-2.43(m，1H)，2.54-2.57(m，2H)，3.32-3.52(m，4H)，3.36-3.38(t，2H)，7.09-7.14(m，4H)，7.83(s，3H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ11.3，27.9，29.4，32.6，33.2，33.8，38.4，38.9，60.2，60.9，126.5，127.9，140.0，144.8.

4)(E)-2-氨基-2-{2-[4-(4-正丙基基环己基)苯基]乙基}-1，3-丙二醇盐酸盐(Ⅰ-3)

方法同上，投入0.4g化合物Ⅷ-3，得到目标物0.3g，收率76％。

mp 186-188℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.87(t，3H)，1.01-1.04(m，2H)，1.18-1.19(m，2H)，1.30-1.33(m，3H)，1.39-1.42(m，2H)，1.75-1.81(m，6H)，2.49-2.50(m，1H)，2.54-2.57(m，2H)，3.51-3.52(m，4H)，5,37(t，2H)，7.09-7.14(m，4H)，7.85(s，3H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ14.2，19.4，27.9，28.4，33.0，33.2，33.8，36.3，39.2，43.4，60.2，60.9，126.5，127.9，140.0，144.8.

5)(E)-2-氨基-2-{2-[4-(4-正戊基基环己基)苯基]乙基}-1，3-丙二醇盐酸盐(Ⅰ-5)

方法同上，投入0.8g化合物Ⅷ-5，得到目标物0.6g，收率75％。

mp 180-182℃.¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ0.87(t，3H)，1.05-1.06(m，2H)，1.19-1.30(m，9H)，1.41-1.44(m，2H)，1.76-1.82(m，4H)，2.45-2.47(m，1H)，2.53-2.56(m，2H)，3.51-3.53(m，4H)，5.34(t，3H)，7.09-7.14(m，4H)，7.87(s，3H).¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：δ13.9，22.1，26.0，27.9，31.6，33.1，33.3，33.9，36.6，36.9，44.5，60.3，60.9，126.6，128.0，139.1，144.8.

样品标号及结构式

实验实施例

实验实施例1

ConA诱导淋巴细胞增殖实验：无菌取小鼠脾脏，制成单细胞悬液，去除红细胞后，用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养液调细胞浓度。5×10⁵个/孔小鼠脾脏细胞加入5μg/mL的ConA诱导细胞增殖，各化合物以适当的浓度加入测试其活性。37℃，5％CO₂培养箱中培养48小时，在培养结束前8小时每孔加入25μCi的³H-TdR，培养结束，用细胞收集仪收集细胞于玻璃纤维膜上，加入闪烁液，用液体闪烁计数仪检测DNA中³H-TdR渗入量来反映细胞增殖情况。

同种异体抗原诱导淋巴细胞增殖实验：C57BL/6小鼠脾脏淋巴细胞悬液5×10⁵个/孔接种于96孔板，加入铯137γ-射线处理后的BALB/C小鼠脾淋巴细胞悬液5×10⁵个/孔，同时加入不同浓度待测化合物。37℃，5％CO₂培养箱中培养3-5天。培养结束前8小时，每孔加入50μCi³H-胸腺嘧啶核苷酸。培养结束，用细胞收集仪收集细胞于玻璃纤维膜上，加入闪烁液，用液体闪烁计数仪检测DNA中³H-TdR渗入量来反映细胞增殖情况。

活性数据显示：对ConA诱导的淋巴细胞增殖和混合淋巴细胞反应(MLR)均具有较好的抑制作用。这些化合物对ConA诱导的淋巴细胞增殖和对于MLR的增殖抑制作用显示，该系列化合物在体外有着较好的免疫抑制作用，并且其活性与FTY720基本一致。

表1：对ConA诱导的淋巴细胞增殖的抑制活性

	FTY720	I-1	I-2	I-3	I-4	I-5
							IC₅₀(μM)	0.62	1.15	0.92	0.75	0.43	0.52

表2：对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制活性

	FTY720	I-1	I-2	I-3	I-4	I-5
							IC₅₀(μM)	0.403	0.150	0.185	0.192	0.241	0.265

实验实施例2

本发明所涉及的化合物显著抑制二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)，小鼠经过DNFB诱导产生迟发型超敏反应，小鼠会产生耳肿胀反应。通过观察化合物对小鼠耳肿胀反应程度的影响，反映化合物对小鼠DTH的影响作用，探讨其对机体细胞免疫反应的影响作用。

丙酮∶橄榄油(4∶1)作溶剂、0.5％的DNFB溶液20μl，涂抹在小鼠的每只后腿上致敏。致敏后的第9天，用0.2％DNFB溶液涂抹到小鼠左耳两侧进行免疫攻击。右耳单涂以丙酮∶橄榄油(4∶1)溶剂，作为对照。DNFB免疫攻击后24小时用游标卡尺分别测量左、右耳的厚度，并以其差值代表耳朵的肿胀程度；用打孔机打下小鼠左、右耳片称重，计算出两耳的重量差。FTY720和各化合物从致敏第一天开始连续给药直至实验结束。

结果如图1和图2(图1中，^**表示P＜0.01；图2中，^*表示P＜0.05，^**表示P＜0.01，与模型对照组比较)。图1为腹腔注射给药条件对DNFB诱导的迟发型超敏反应的抑制作用。图2为口服给药条件对DNFB诱导的迟发型超敏反应的抑制作用。从抑制由二硝基氟苯(DNFB)诱导的迟发性超敏反应(DTH)来看，这些化合物在腹腔给药条件下(0.3mg/kg给药)，能明显抑制DTH反应，缓解小鼠耳肿胀，减轻小鼠两耳重量差。和原药FTY720相比，化合物I-3和I-5的活性基本与FTY720一致。而这些化合物在口服条件下(0.3mg/kg给药)也有一定的效果。总体来看，化合物I-3和I-5的活性比较好。

实验实施例3

在前期活性实验的基础上，我们着重研究了化合物I-3和I-5对卵清蛋白(OVA)诱导的抗原特异性T淋巴细胞反应的影响。将OVA(2mg/kg)与等体积的CFA充分乳化，分三个点给BALB/c小鼠背部皮下注射(200μL/只)进行致敏。致敏当日起，每日口服给化合物，连续给药14天。在第14天，制备每组小鼠脾脏淋巴细胞，加入OVA后在37℃，5％CO₂培养箱中培养48小时，检测细胞增殖情况。结果如图3，口服给药3mg/kg/天条件，化合物I-3和I-5对于OVA诱导的T细胞抗原特异性的增殖均有较好的抑制活性，且活性与FTY720基本一致。

实验实施例4

因为FTY720能够诱导淋巴细胞凋亡，同样，我们着重检测了化合物I-5在体外诱导细胞凋亡的能力。取Balb/c小鼠脾脏细胞，制成单细胞悬液，调成5×10⁶/mL；细胞分别加入5μg/mL ConA或培养液作为对照，37℃，5％CO₂培养箱中培养24小时后，采用Annexin V/PI双染，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果如图4和图5。图4为无ConA存在的条件下，化合物I-5在体外诱导小鼠淋巴细胞凋亡的能力。右下象限凋亡早期细胞群(Annexin V+PI-细胞群)比例与FTY720相比较，无明显差异。图5为ConA(2μg/mL)存在的条件下，化合物I-5在体外诱导小鼠淋巴细胞凋亡的能力。右下象限凋亡早期细胞群(Annexin V+PI-细胞群)比例与FTY720相比较，无明显差异。可以看出，无论是在ConA存在条件还是无ConA存在条件，Annexin V+PI-细胞群比例与FTY720相比较，无明显差异，该化合物诱导细胞凋亡能力，与FTY720相当。

实验实施例5

研究了化合物I-5对动物急性移植物抗宿主病(aGVHD)的治疗作用。以4周龄BALB/c小鼠为供体小鼠，取小鼠四肢长骨骨髓细胞和脾脏淋巴细胞悬于PBS缓冲液中制备混合细胞悬液。以7周龄C57BL/6小鼠为受体小鼠，Gammacell全身照射8.5Gy，照射4-6小时后，每只受体小鼠尾静脉注射0.5mL供体小鼠的混合细胞悬液作为异源骨髓移植。从骨髓移植当天开始给药，3mg/kg/天剂量口服给药，每天一次直至实验结束。在此剂量下，I-5显示了一定的治疗效果，无论是生存率还是体重与模型组相比均有明显改善(见图6)。

本发明提供了一种免疫调节剂，该类免疫调节剂化合物具有良好的体内、外免疫调节活性。

Claims

1.一类结构通式(I)所示的免疫调节剂或其药学上可接受的盐：

其中：

R为H或C₂～C₅的直链烷基。

2.一种结构通式(I)所示的免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，采用下述路线合成，

其中，R的定义同权利要求1；Cbz表示苄氧羰基；

a、化合物(Ⅱ)经酯化反应得化合物(Ⅲ)；

b、化合物(Ⅲ)进行还原反应得化合物(Ⅳ)；

c、化合物(Ⅳ)经溴代反应得化合物(Ⅴ)；

d、化合物(Ⅴ)与三苯基膦反应得化合物(Ⅵ)；

e、化合物(Ⅵ)与化合物(4)经过Witting偶联反应得到化合物(Ⅶ)；

g、化合物(Ⅷ)在稀酸条件下进行水解得化合物(Ⅰ)。

3.根据权利要求2所述的结构通式(I)所示的免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备方法，其特征在于，该制备方法具体为：

化合物(Ⅱ)与甲醇通过酯化反应得到化合物(Ⅲ)；

化合物(Ⅲ)经还原反应得化合物(Ⅳ)，该反应所用的还原剂为氢化铝锂、硼氢化钠、硼氢化锂或硼氢化钾和氯化锂；该反应所用溶剂为四氢呋喃；

化合物(Ⅳ)经溴代反应制得化合物(Ⅴ)，该反应所用的溴化试剂为溴化氢或三溴化磷；

化合物(Ⅴ)与三苯基膦反应，无水甲苯为溶剂，在氮气保护下反应制得化合物(Ⅵ)；

化合物(Ⅵ)和化合物(4)在碱性条件下经Witting偶联反应生成烯烃化合物(Ⅶ)，所用的碱为氢化钠、叔丁醇钾或碳酸钾；反应溶剂为四氢呋喃和N,N-二甲基甲酰胺混合溶剂；

化合物(Ⅶ)经加氢还原同时脱去Cbz保护基生成化合物(Ⅷ)，该反应非必需使用钯碳作为催化剂；

化合物(Ⅷ)在稀酸条件下水解脱保护得化合物(Ⅰ)，所述的稀酸为稀硫酸、稀盐酸或乙酸。

4.根据权利要求2或3所述的结构通式(I)所示的免疫调节剂或其药学上可接受的盐的制备方法，其中，所述的化合物(4)是以三(羟甲基)氨基甲烷为起始原料制备得到的。

5.权利要求1所述的结构通式(I)所示的免疫调节剂或其药学上可接受的盐在制备免疫调节药物中的应用。