CN102458394A - 增殖性疾病状态的治疗或预防 - Google Patents

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史蒂文·艾伯特·埃弗雷特
萨拉耶·乌拉克
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Abstract

本发明涉及用于治疗或预防癌症和例如特征在于表达细胞色素P450 1B1(CYP1B1)及其等位基因变体的细胞的其它增殖性疾病状态的新化合物。本发明还提供了用于药物治疗例如用于预防癌症或其它增殖性疾病状态的治疗的包含一种或多种这类化合物的药物组合物以及用于治疗人类或非人类动物患者中的癌症或其它疾病状态的方法。本发明还提供了用于识别在预防癌症和例如特征在于表达CYP1B1及其等位基因变体的细胞的其它增殖性疾病状态的治疗中使用的新化合物的方法。本发明还提供了用于测定本发明化合物对治疗癌症的功效的方法。

Description

增殖性疾病状态的治疗或预防
领域
本发明涉及用于治疗或预防癌症和例如特征在于表达细胞色素P450 1B1(CYP1B1)及其等位基因变体的细胞的其它增殖性疾病状态的新化合物。本发明还提供了用于药物治疗例如用于预防癌症或其它增殖性疾病状态的治疗的包含一种或多种这类化合物的药物组合物以及用于治疗人类或非人类动物患者中的癌症或其它疾病状态的方法。本发明还提供了用于识别在预防癌症和例如特征在于表达CYP1B1及其等位基因变体的细胞的其它增殖性疾病状态的治疗中使用的新化合物的方法。本发明还提供了用于测定本发明化合物对治疗癌症的功效的方法。
背景
如Sutter等人(J Biol.Chem.，5月6日；269(18)：13092-9，1994)描述的，CYP1B1是还包括CYP1A1和CYP1A2的二恶英可诱导的CYP1基因家族中的成员。CYP1B1是能够代谢和激活包括甾体药物、异型生物质、药物和/或前药在内的多种物质的血红素硫醇盐单加氧酶。CYP1B1蛋白质在大量不同组织学类型的原发性和转移性人类癌症中高频率表达并在正常组织中不表达或以微量水平表达(参见例如，McFadyen MC，Melvin WT和Murray G1，“Cytochrome P450Enzymes：Novel Options for Cancer Therapeutics(细胞色素P450酶：癌症治疗的新选择)”，Mol Cancer Ther.，3(3)：363-71，2004；McFadyenMC和Murray G1，“Cytochrome P450 1 B1：a Novel AnticancerTherapeutic Target(细胞色素P450 1 B1：新型抗癌治疗靶点)”，FutureOncol.，1(2)：259-63，2005；Sissung TM，Price DK，Sparreboom A和Figg WD，“Pharmacogenetics and Regulation of Human CytochromeP450 1B1：Implications in Hormone-Mediated Tumor Metabolism and aNovel Target for Therapeutic Intervention(人细胞色素P450 1B1的药物遗传学和调节：激素介导的肿瘤代谢和治疗干预的新靶点的影响)”，MoI.Cancer Res.，4(3)：135-50，2006)。
更具体地，已表明CYP1B1在膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌和皮肤癌中进行表达，而不在相应的正常组织中进行表达。例如，Barnett等人在Clin.CancerRes.，13(12)：3559-67，2007中报道了CYP1B1在包括恶性胶质瘤、间变性星形胶质瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤在内的神经胶质瘤中过度表达，但并非不影响脑组织；Carnell等人在Int.J.Radial Oncol.Biol.Phys.，58(2)：500-9，2004中报道了CYP1B1在前列腺癌中过度表达，而不在匹配的正常前列腺组织中过度表达；Carnell等人，2004(同上)还证实CYP1B1在(n＝22，100％)的膀胱癌中表达；Downie等人在Clin.Cancer Res.，11(20)：7369-75，2005且McFadyen等人在Br.J.Cancer.，85(2)：242-6，2001中报道了CYP1B1在原发性和转移性卵巢癌而不在正常的卵巢组织中增加的表达；且Gibson等人在Mol.Cancer Ther.，2(6)：527-34，2003以及Kumarakulasingham等人在Clin.Cancer Res.，11(10)：3758-65，2005中报道了与匹配的正常组织相比，CYP1B1在结肠癌中过度表达。
若干研究已证实与匹配的正常组织相比，CYP1B1在乳腺癌中过度表达(参见例如：Murray G1，Taylor MC，McFadyen MC，McKay JA，Greenlee WF，Burke MD和Melvin WT，“Tumor-Specific Expression ofCytochrome P450 CYP1B1(细胞色素P450 CYP1B1的肿瘤特异性表达)”，Cancer Res.，57(14)：3026-31，1997；Haas S，Pierl C，Harth V，Pesch B，Rabstein S，Bruning T，Ko Y，Hamann U，Justenhoven C，Brauch H和Fischer HP，“Expression of Xenobiotic and Steroid HormoneMetabolizing Enzymes in Human Breast Carcinomas(异型生物质和甾体药物激素代谢酶在人类乳腺癌中的表达)”，Int.J.Cancer，119(8)：1785-91，2006；McKay JA，Murray G1，Ah-See AK，Greenlee WF，Marcus CB，Burke MD和Melvin WT的“Differential Expression ofCYP1 A1 and CYP1 B1 in Human Breast Cancer(CYP1A1和CYP1B1在人类乳腺癌中的不同表达)”，Biochem.Soc.Trans.，24(2)：327S，1996)。
Everett等人在J.Clin.Oncology，25：18S，2007中报道了CYP1B1在恶性黑素瘤中过度表达并散布疾病而不在正常的皮肤中过度表达。Chang等人在Toxicol.sci，71(1)：11-9，2003中报道在正常的肝中不存在CYP1B1蛋白质但Everett等人，2007(同上)证实CYP1B1在转移至肝的黑素瘤阶段IV中而不在邻近的正常肝组织中过度表达。
Greer等人在Proc.Am.Assoc.Cancer Res.，45：3701，2004中报道CYP1B1在头和颈鳞状细胞癌的恶性发展过程中而不在正常的上皮细胞中过度表达。
McFadyen等人在Br.J.Cancer，91(5)：966-71，2004中检测到CYP1B1在肾癌中而不在相应的正常组织中。
Murray等人，2004(同上)使用免疫组织化学以证实与正常的肺组织相比CYP1B1在肺癌细胞中的过度表达。Su等人在Anti-Cnacer Res.，2，509-15，2009中使用免疫组织化学以证实与疾病的早期阶段相比CYP1B1在晚期阶段IV非小细胞肺癌中的过度表达。
从上述引用的大量公开可以看出，CYP1B1表达是一系列不同的癌症和其它增殖性疾病状态的特征，且CYP1B1表达可用于定义这类癌症和其它疾病状态。由于正常的(非癌症的)细胞不表达显著水平的CYP1B1，因此也可以合理地预测在表达CYP1B1的细胞中表现出细胞毒性但在正常细胞中基本上是非细胞毒素的化合物能用作特征在于CYP1B1表达的癌症的靶向抗癌药物。“靶向”是指能够全身递送这类化合物并且其仅在表达CYP1B1的癌症细胞的存在下被激活，对身体的其余部分基本上保持无毒。
此外，已知大量的细胞色素P450酶能代谢和解毒多种抗癌药物。McFadyen等人，n(Biochem Pharmacol.2001，Jul 15；62(2)：207-12)证实与非CYP1B1表达的细胞相比，表达CYP1B1的细胞中的多西他赛的敏感性显著降低。该发现表明细胞中CYP1B1的存在可降低其对一些细胞毒性药物的敏感性。因此，CYP1B1-激活的前药可用于耐药性由CYP1B1介导的癌症的治疗。
此外，CYP1B1基因在癌症和改变编码蛋白质的表达和/或活性的已识别的CYP1B1基因中包含的若干单核苷酸多态性中是高度多态的。如由Sissung等人在Mol Cancer Ther.，7(1)：19-26，2008及其中引用的参考文献中描述的，在这些之中，CYP1B1*3(4326C＞G；L432V)等位基因的特征在于CYP1B1对若干底物的增加的表达和酶动力二者。该发现表明不仅CYP1B1而且酶的等位基因变体也可有助于前药激活和癌症靶向。
研究了作为降低药物不期望的毒性或一些其它负面性质而不损失功效的手段的前药。前药是化学修饰的药物以使其无活性但在给药之后，在体内代谢或另外转化为药物的活性形式。如由McFadyen等人的Mol Cancer Ther.，3(3)，363-71，2004评论的，与正常组织相比，原发性肿瘤和转移性疾病中CYP1B1的过度表达提供了用于靶向癌症治疗的CYP1B1-激活前药开发的巨大机会。实际上，如由Patterson LH和Murray G1在Curr Pharm Des.，8(15)：1335-47，2002中评论的，用于靶向癌症治疗的CYP1B1-激活前药的发现和开发可能提供比临床使用的现有非靶向细胞色素P450-激活前药显著的药理学优点，所述细胞色素P450-激活前药例如由正常组织中表达的细胞色素P450激活的前药烷基化剂环磷酰胺、异环磷酰胺、达卡巴嗪、甲基苄肼。
人类细胞色素P450家族包含57个活性同工酶，其在正常的代谢中发挥作用，影响药物代谢动力学并通过药物-药物相互作用而在患者中产生负面效果。如在Ortiz de Montellano，PR(编辑)Cytochrome P450：structure，mechanism，and biochemistry(细胞色素P450：结构、机理和生物化学)，Kluwer Academic/Plenum Publishers，New York，2005中描述的，在人类中细胞色素P450同工酶代谢大约三分之二的已知药物，其80％归因于五种同工酶，即CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4。
如由Ingelman-Sundberg，M.，Toxicol.Appl.Pharmacol.，207，52-6，2005评论的，在人类基因组计划中首创发现的基因是CYP2R1、CYP2W1、CYP2S1、CYP2S1、CYP2U1，但这些基因的功能、多态性和调节仍有待充分阐述。除CYP1B1之外，大量的这些细胞色素P450氧化还原酶为肝外的并在癌症中过度表达。如由Downie等人的Clin.Cancer Res.，11(20)：7369-75，2005描述的，如通过免疫组织化学和光学显微镜学测定的，包括CYP1B1、CYP2A/2B、CYP2F1、CYP2R1、CYP2U1、CYP3A5、CYP3A7、CYP4Z1、CYP26A1和CYP 51在内的若干细胞色素P450以比在正常的卵巢中显著高的强度水平存在。此外，如由Kumarakulasingham等人在Clin.Cancer Res.，11(10)：3758-65，2005中描述的，在原发性结肠直肠癌中使用相似检测方法，包括CYP1B1、CYP2S1、CYP2U1、CYP3A5和CYP51在内的若干细胞色素P450与正常结肠相比频繁地过度表达。在相同的研究中，包括CYP1B1、CYP2A/2B、CYP2F1、CYP4V2和CYP39的若干细胞色素P450与其在原发性肿瘤中的存在相关。根据Elder等人的Eur.J.Cancer，45(4)：705-12，还证实CYP2W1在结肠直肠癌中过度表达。如分别由Reiger等人的Cancer Res.，64(7)：2357-64，2004和Bankovic等人的Lung Cancer，67(2)：151-9，2010描述的，在乳腺癌中过度表达的CYP4Z1是与非小细胞肺癌的发生和发展相关的基因。
如由Strak K和Guengerich FP在Drug Metab.Rev.，39(2-3)：627-37，2007中评论的，所述领域的主要挑战是说明所谓的“孤儿”状态的人类细胞色素P450与未知的特异性底物的功能。如由Chang TK和Waxman DJ在Method Mol.Biol.，320，85-90，2006中描述的，大量基质被认为是用于CYP1B1，其少数通过酶特异性代谢，例如当由包括CYP1A1、CYP1A2和CYP1B1在内的CYP1家族的所有成员激活时，7-乙氧基试卤灵经历氧化脱乙基作用。大量荧光和发光探针底物可用于评价具有高敏感性的细胞色素P450活性但它们表现出显著的特异性且因此通过CYP1、CYP2和CYP3家族中的一系列细胞色素P450酶代谢。例如，Cali等人的Expert Opin.Drug Toxicol.，2(4)：62-45，2006描述了与萤火虫荧光素酶发光结合的发光基质在称为P450-Glo的技术中的用途。如Waxman DJ和Change TKH在“The use of7-ethoxycoumarin to minitor multiple enzymes in the human CYP1，CYP2，CYP3 families(使用7-乙氧基香豆素以监控人类CYP1、CYP2、CYP3家族中的多种酶)”，Method in Molecular Biology，vol.320，细胞色素P450协议，第二版，Phillips IR和Shephard编辑，EA，2006中描述的，另一实例是经历细胞色素P450-催化的7-乙氧基香豆素邻位脱乙基以释放高度荧光的阴离子的7-乙氧基香豆素。
Everett等人，Biochem.Pharmacol.，63，1629-39，2002描述了缺氧症中通过细胞色素P450还原酶(不与细胞色素P450混合)的模型吲哚醌前药的还原分裂来释放7-羟基-4-甲基香豆素阴离子。所述模型前药在预选的发射波长下没有荧光并能通过使用动力学荧光分光光度法监控香豆素阴离子的产生(λex＝380nm/λem＝450nm)来精确检测还原分裂。
已经描述有限量的化合物(通常＜100)和细胞色素P450同工酶之间的相互作用但来自这些研究的结果因为技术、检验条件和数据分析方法的差异而难于比较，如由Rendic，S.的“Summary of informationon human CYP enzymes：human P450 metabolism data(人类CYP酶信息的总结：人P450代谢数据)”，Drug Metab.Rev.，34，83-448，2002描述的。许多计算策略已经发展到生成预测性的细胞色素P450同工酶底物活性模型，但这些受缺乏细胞色素P450同工酶活性的单一大量、多样的数据组的限制，如由Veith等人，Nature Biotechnology，27，1050-55，2009描述的。该作者描述了使用具有生物发光酶底物抑制检验的定量高通量筛选(HTS)建造细胞色素P450生物活性数据库以对在主要为肝脏并负责所谓的药物1期代谢的正常组织中表达的五种细胞色素P450同工酶(CYP1A2、2C9、2C19、2D6和3A4)筛选17,143种化合物。结果表明，所述数据库应帮助构建和测试用于细胞色素P450活性的新预测的模型以帮助早期的药物发现工作。
Jensen等人，J.Med.Chem.，50，501-11，2007描述了基于对扩展连接性指纹的Tanimoto相似性检索，基于新的高斯核加权k-最邻近(k-NN)运算法则的用于计算机(in silico)预测CYP2D6和CYP3A4抑制的方法。数据组包括测试用于人类肝微粒体中CYP2D6和CYP3A4抑制的1153和1182种药物候选者的模拟。对于CYP2D6，将82％的分类测试化合物预测为正确分类且对于CYP3A4，将88％的分类测试化合物正确分类。
理论上，能使用细胞色素P450 HTS以建立大量肿瘤和正常组织细胞色素P450的生物活性数据库，然后开发底物预测模型作为用于设计和合成选择性CYP1B1-激活的前药的基础，同时筛选出用于与通过正常组织细胞色素P450的1期代谢有关的药理学责任。然而，从现有技术来看实践的减少不明显且必须对当由肿瘤-表达的细胞色素P450激活时转化为活性药物的前药结构和机制合理说明。
前药设计中所谓的“触发子-连接子-效应子”化学的使用需要激活触发子以开始连接子的断裂从而释放效应子(通常为活性药物)，其生物活性掩盖在前药形式中。靶向诸如CYP1B1的肿瘤-表达的细胞色素P450的选择性前药的模块设计需要(1)选择性触发子部分的识别，(2)触发子激活(通常通过芳香羟基化)之后有效断裂的生物稳定的连接子的使用，以及(3)不干扰触发过程的效率的合适的效应子或药物。
CYP1B1 mRNA在所有正常的肝外人类组织中组成性表达，尽管蛋白质通常为不可检测的。相比之下，CYP1B1蛋白质在肿瘤中以高水平表达。应当理解，对于源自人类的大量已建立或永生化的肿瘤细胞系(例如MCF-7乳腺癌细胞)，其经历显著的体外通路但不组成性表达活性CYP1B1蛋白质。尽管CYP1B1在MCF-7乳腺肿瘤细胞中不组成性表达，通过使用诸如二恶英TCDD的芳基烃类激动剂的治疗能以mRNA和蛋白质两种水平诱导CYP1酶表达。
WO 99/40944描述了包含束缚于载体框架的药物部分的前药，所描述的前药好像由CYP1B1羟基化而被激活以释放药物部分。
概述
我们意外地发现与在WO 99/40944中描述的那些不同，本文描述的化合物在某些细胞特别是表达细胞色素P450 1B1(下文为CYP1B1)的那些细胞中但不在正常的细胞中分解，这是化合物在羟基化时(例如由CYP1B1-表达的细胞产生)且特别通过癌细胞分解的结果。
因此，根据第一方面，本发明提供了通式(I)化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物：
Figure BPA00001482463600081
(其中：
X1使得-X1-X2为-O-X2、-S-X2、-SO2-O-X2、-SO2NZ10-X2、共轭的烯烃甲氧基、共轭的烯烃甲硫基、共轭的烯烃甲基SO2-O、共轭的烯烃甲基-SO2NZ10或下列通式：
Figure BPA00001482463600082
-X2不存在或使得X1-X2-效应子为下列中的一个：
Figure BPA00001482463600091
各个n和m独立地为0或1；
P为0，1或2；
X3为氧或硫，且此外当m＝0时，X3可为SO2-O、SO2NZ10、共轭的烯烃甲氧基、共轭的烯烃甲硫基、共轭的烯烃甲基-SO2-O或共轭的烯烃甲基-SO2NZ10；
各个Y1、Y2和Y3独立地为碳或氮，其中如果Y1为氮，则Z1不存在，如果Y2为氮，则Z3不存在且如果Y3为氮，则Z5不存在；
Y4为氧、碳或氮原子、亚砜或砜；
-Y5-为(i)单键、(ii)＝CH-，其中＝CH-中的双键＝与Y4连接，或(iii)-CH2-或-CH2CH2-，或(ii)至(iii)中的一种，其中(ii)中的氢原子或者(iii)中的一个或多个氢原子由取代基Z11取代，其中Z11独立地选自烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、卤素、羧基、甲酰基、硝基和氰基；
在存在的情况下，各个Z1-Z4独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、卤素、羧基、甲酰基、硝基和氰基；且在存在的情况下，Z5独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、羧基、甲酰基、硝基和氰基，或Z2和Z3、Z3和Z4以及Z4和Z5中的一组与其结合的原子一起形成与所述化合物的剩余部分稠合的芳族环，条件是Z1、Z2和Z4中的至少一个是氢；
Z6选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基和芳烷基；
Y6都不是氮原子，或Y6中的一个或两个可为氮原子而剩余的为碳原子；
各个Z7独立地为氢、烷基或芳基；
各个Z8独立地选自氢、吸电子基团、未取代的C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基和取代的C1-C6烷氧基，其中所述取代的烷基或烷氧基由一个或多个基团取代，所述基团选自醚、氨基、单取代或双取代的氨基、环状C1-C5烷氨基、咪唑基、C1-C6烷基哌嗪基、吗啉基、巯基、硫醚、四唑、羧酸、酯、酰氨基、单取代或双取代的酰胺基、N-连接的酰胺、N-连接的磺酰胺、磺酰氧基(sulfoxy)、磺酸酯、磺酰基、磺酰氧基、亚磺酸酯、亚磺酰基、膦酰基氧基、磷酸酯和磺酰胺；
各个Z9独立地为氧或硫；
Z10为氢或烷基，例如C1-4烷基；
效应子是具有药理学、诊断或筛选功能的分子)。
从第二方面看来，本发明提供了包含本发明第一方面的化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物以及药物可接受的载体的组合物。
从第三方面看来，本发明提供了用作药物的本发明第一方面的化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物。
从第四方面看来，本发明提供了用于治疗或预防增殖性疾病状态的方法的本发明第一方面的化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物。
从第五方面看来，本发明提供了治疗或预防增殖性疾病状态的方法，所述方法包括给予有需要的个体治疗或预防有效量的本发明第一方面的化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物。
从第六方面看来，本发明提供了本发明第一方面的化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物在制备用于治疗或预防增殖性疾病状态的方法的药物中的用途。
从第七方面看来，本发明提供了识别由细胞色素P450酶特异性激活的化合物的方法，所述方法包括的步骤为：
(a)使其中效应子是荧光团的本发明第一方面的化合物组与所述细胞色素P450酶接触并确定所述接触是否导致从所述组的一种或多种化合物中释放所述荧光团；
(b)使所述一组化合物与对照组织、组织或细胞提取物或酶接触并确定所述接触是否导致从所述组的一种或多种化合物中释放所述荧光团；以及
(c1识别由所述细胞色素P450特异性激活的所述化合物，将所述化合物作为在步骤(a)中释放但在步骤(b)中不释放或仅释放非常少程度的所述荧光团的所述一组化合物中的任何化合物。
从第八方面看来，本发明提供了用于确定本发明的化合物对治疗癌症是否有效的方法，其中效应子是具有药理学功能的分子，所述方法包括给予患有癌症的动物所述化合物，其中所述癌症或者由被修饰以组成性表达细胞色素P450酶的重组细胞的移植导致，或者由直接从肿瘤或癌症中获取的组织或来自早期通道细胞系的细胞的移植导致，所述早期通道细胞系源自直接从肿瘤或癌症中获取的组织，所述组织或细胞以与来自其起源的肿瘤或癌症的那些类似的水平表达所述细胞色素P450酶。
本发明另外的方面和实施方案将由紧随下文的讨论产生。
附图简述
图1描述了显示转染的CHO/CYP1B1/CPR细胞系中的CYP1B1表达(图片A)和转染的CHO/CYP1A1/CPR细胞系中的CYP1A1表达(图片B)的检测的免疫印记。细节在下文的实验部分提供。
图2a示出本发明化合物(本文称为SU025-04)的CYP1B1-诱导的3-羟基化，随后通过1，4消除自发释放细胞毒性效应子分子(N，N’-双(2-氯乙基)磷二酰胺(还称为IPM氯化物)的机理。
图2b示出本发明化合物(本文称为SU025-04)的CYP1B1-诱导的4-羟基化，随后通过1，6消除自发释放细胞毒性效应子分子(N，N’-双(2-氯乙基)磷二酰胺(还称为IPM氯化物)的机理。
图2c示出本发明化合物(本文称为SU025-04)的CYP1B1-诱导的6-羟基化，随后通过1，8消除自发释放细胞毒性效应子分子(N，N’-双(2-氯乙基)磷二酰胺(还称为IPM氯化物)的机理。
图3示出本发明化合物(本文称为SU024-1-03)的CYP1B1-诱导的6-羟基化，随后通过1，8消除自发释放效应子分子的机理。
详述
本发明由前药的供应产生，其中通过使所谓的效应子分子反应而对其进行化学修饰由此形成通式(I)化合物，所述效应子分子可为下文更详细描述的细胞生长抑制分子、细胞毒性分子、诊断分子或筛选分子。我们发现，通式(I)化合物的羟基化，特别是CYP1B1-诱导的羟基化允许在直接的羟基化或通过环氧化物形成进行的羟基化时自发发生的通式(I)化合物的断裂来释放效应子分子。
概括而言，可认为通式(I)化合物的结构包含三部分：触发子区域、连接子和效应子分子。触发子充当用于典型的CYP1B1-诱导的羟基化的底物且通常可理解为包含描绘在通式(I)左手侧的二环部分及其取代基，即包含含有Y1-Y5、Z1-Z6的部分化合物和连接这些部分中的一些的剩余的碳原子。化合物的触发子区域通过包含C(Z7)-X1-X2单元的连接区域与如此标记的效应子分子连接。
现在描述通式(I)化合物的这三个区域-触发子、连接子和效应子区域的组成和变化。
在随后的讨论中，除非上下文规定相反的情况，引用应理解为具有下文提供的含义的大量术语。
本文的烷基是指饱和的烃基，其可为直链、环状或支链的(除非上下文规定相反的情况，通常为直链的)。在烃基具有一个或多个不饱和位置的情况下，这些可由碳-碳双键或碳-碳三键组成。在烃基包含碳-碳双键的情况下，这提供了烯基；碳-碳三键的存在提供了炔基。通常，烷基、烯基和炔基包含1至25个碳原子，更通常为1至10个碳原子，仍更通常为1至6个碳原子，应当理解烯基和炔基的下限为2个碳原子且环烷基的下限为3个碳原子。
可取代烷基、烯基或炔基例如一次、两次或三次，例如一次即形式上取代烷基的一个或多个氢原子。这样的取代基的实例为卤素(例如氟、氯、溴和碘)、芳基、羟基、硝基、氨基、烷氧基、烷硫基、羧基、氰基、硫基、甲酰基、酯、酰基、硫基酰基、酰胺基、磺酰胺基、氨基甲酸酯等。
本文的羧基是指官能团CO2H，其可为去质子化形式(CO2 -)。
卤素为氟、溴、氯或碘。
酰基和硫基酰基分别是指通式-C(O)-烷基或-C(S)-烷基的官能团，其中烷基如上文所定义的。
酯是指包含部分-OC(＝O)-的官能团。
酰氨基是指包含-N(H)C(＝O)-部分的官能团；氨基甲酸酯是指包含-N(H)C(＝O)O-部分的官能团；且磺酰胺是指包含-SO2N(H)2-部分的官能团，其中所描述的各个氢原子可由烷基或芳基取代(在磺酰胺中独立地)。
烷氧基(Alkyloxy)(与烷氧基(alkoxy)同义)和烷硫基部分分别为通式-O-烷基和-S-烷基的部分，其中烷基如上文所定义的。
同样地，烯氧基、炔氧基、烯硫基和炔硫基为通式-O烯基、-O炔基、-S烯基和S炔基，其中烯基和炔基如上文所定义的。
本文的氨基是指通式-N(R)2的基团，其中各个R独立地为氢、烷基或芳基，例如不饱和的、诸如甲基或乙基的未取代的C1-6烷基，或其中将与氮原子N连接的两个R连接。其中的一个实例是，由此-R-R-形成亚烷基二基，形式上衍生自其中两个氢原子被抽出的烷烃，通常衍生自末端碳原子，由此与胺的氮原子一起形成环。已知环状胺中的二基不必须为亚烷基：吗啉(其中-R-R-是-(CH2)2O(CH2)2-)是一种这样的实例，由其可制备环状氨基取代基。
关于本文的氨基，也可理解为包括在其由包含这样的氨基的化合物产生的胺的季铵化或质子化的衍生物的范围内。后者的实例可理解为是诸如盐酸盐的盐。
本文的芳基是指形式上由从芳香族化合物抽出氢原子而形成的基团。
除非上下文特别规定相反的情况，亚芳基二基是形式上通过抽出两个氢原子而获得的芳香族部分，且可为并通常为单环，例如亚苯基。如本领域技术人员所公知的，杂芳族部分为包含一个或多个杂原子，通常为O、N或S代替一个或多个碳原子和与其连接的任何氢原子的芳族部分的一个子集。示例性的杂芳香族部分，例如包括吡啶、呋喃、吡咯和嘧啶。杂芳环另外的实例包括吡啶基、哒嗪(其中在芳香族6-元环中2个氮原子相邻)；吡嗪(其中在6-元芳环中2个氮排列在1，4位)；嘧啶(其中在6-元芳环中2个氮原子排列在1，3位)；或1，3，5-三嗪(其中在6-元芳环中3个氮原子排列在1，3，5位)。
芳基或亚芳基基团可由取代基取代一次或多次，所述取代基例如吸电子基团(例如选自下列基团：卤素、氰基(-CN)、卤代烷基、酰胺、硝基、酮基(-COR)、烯基、炔基、季氨基(-N+R3)、酯、酰氨基(-CONR2)、N-连接的酰氨基(-NR-C(＝O)-R)、N-连接的磺酰胺基(-NR-S(＝O)2R)、磺酰氧基(-S(＝O)2OH)、磺酸酯(S(＝O)2OR)、磺酰基(S(＝O)2R)和磺酰胺(-S(＝O)2-NR2)的基团，其中(各个)R独立地选自C1-C6烷基基团)，C3-C20杂环基团或C3-C20芳基、通常为C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基和取代的C1-C6烷氧基，其中取代的烷基或烷氧基由一个或多个选自醚、氨基、单取代或双取代的氨基、环状C1-C5烷氨基、咪唑基、C1-C6烷基哌嗪基、吗啉基、巯基、硫醚、四唑、羧酸、酯、酰胺、单取代或双取代的酰胺、N-连接的酰胺(-NR-C(＝O)-R)、N-连接的磺酰胺(-NR-S(＝O)2-R)、磺酰氧基(-S(＝O)2OH)、磺酸酯(S(＝O)2OR)、磺酰基(S(＝O)2R)、磺酰氧基(S(＝O)OH)、亚磺酸酯(S(＝O)OR)、亚磺酰基(S(＝O)R)、膦酰基氧基(-OP(＝O)(OH)2)、磷酸酯(OP(＝O)(OR)2)和磺酰胺(-S(＝O)2-NR2)的基团取代，其中(各个)R独立地选自C1-C6烷基、C3-C20杂环或C3-C20芳基。
通式(I)化合物的触发子区域通常包含含有与第二个环(包含可为芳香族或非芳族的Y1、Y4和Y5部分)稠合的芳环(包含规定的Y2和Y3部分)的二环部分。
不受理论的束缚，认为当Z2或Z4为氢时或当Y1-Z1为C-H时，作为用于羟基化的底物的通式(I)化合物的活性部分由易于羟基化的触发子部分的结构实现，例如通过CYP1B 1起作用，因此所述羟基化发生在与Z2和Z4连接的三个碳原子中的一个以及Y1，其中Y1为碳。如图2所描述的，在标记为SU025-04的本发明代表性的化合物中这些位置中任一位置的羟基化导致化合物通过消除过程而自然断裂，所述消除过程为1，4-、1，6-或1，8-消除，这取决于羟基化发生在这些位置中的哪一个位置。
从通式(I)化合物的结构可以注意到，由于连接Z2和Z4的碳原子通过Y1与连接子部分结合，因此化合物自然断裂的三种机理中的任一个可独立于化合物Z6-Y4-Y5区域的性质发生。因此，如下文讨论的，可接受通式(I)化合物该区域的多种性质。而且，通过使用本文描述的共轭的X1部分特别实现结合区域的连续。
在通式(I)化合物中，由Y1、Y2和Y3表示的各个原子可独立地为碳原子或氮原子。在关注的原子为氮原子的情况下，不存在各个取代基(分别为Z1、Z3或Z5)。在本发明某些实施方案中，Y2或Y3为碳原子。在本发明特别的实施方案中，Y2和Y3均为碳原子。根据这些实施方案中的任一个，其中Y2或Y3为碳原子或其中Y2和Y3均为碳原子，或其中Y2或Y3均不是碳原子，则Y1可为碳原子。
通常，取代基Z1、Z2和Z4可为权利要求1所描述的。然而，这些部分中的至少一个为氢原子以给予用于化合物羟基化的位点。在本发明的一些实施方案中，Z2或Z4中的一个是氢。在其它实施方案中，Z2和Z4为氢。在这些实施方案的任一实施方案中，其中Z2或Z4为氢原子，或其中Z2和Z4均为氢原子，或其中Z2或Z4均不是氢原子，则Z1可为氢。在本发明的某些实施方案中，各个Z1、Z2和Z4为氢原子。
Z3或Z4中的任一个可连同芳环(即分别为Z2或Z4，或Z3或Z5)上的相邻取代基与这些取代基连接的芳环原子一起形成与化合物剩余的稠合的芳环。因此，Z2和Z3与Z2连接的碳原子以及Y2可形成芳环。类似地，例如，Z4、Z5和Z4连接的碳原子以及Y3可一起形成芳环。
在本发明的某些实施方案中，取代基Z2和Z3、Z3和Z4以及Z4和Z5的配对都不是或仅其中的两对一起形成稠合的芳环。因此，在某些实施方案中，没有芳环与包含Y2和Y3的芳环稠合。
具体地，通常，取代基Z3和Z5不是与通式(I)化合物的剩余部分稠合的芳环的一部分。在该情况下，即在这些部分是单独的取代基的情况下，Z3可为烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、卤素、羧基、甲酰基、硝基和氰基，且Z5可为烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、羧基、甲酰基、硝基和氰基。在本发明的某些实施方案中，Z3可为烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、卤素、羧基、甲酰基、硝基和氰基。
在本发明的某些实施方案中，Z3和Z5是除氢原子之外的单独的取代基。在Z3和Z5为相同的取代基或相反的情况下，本发明某些实施方案中的Z3和Z5为诸如烷氧基、烷硫基、芳氧基、芳硫基的供电子基团。在本发明特别的实施方案中，Z3或Z5均为氨基或烷氧基，例如C1-C6烷氧基。这样的烷氧基的实例包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基、正丙氧基等。在本发明的某些实施方案中，Z3或Z5中的一个为甲氧基，或者Z3和Z5均为甲氧基。在本发明的某些实施方案中，Z3和Z5为相同的并正好为上述取代基或取代基种类中的任一种。如上所述，通式(I)化合物在其包含Z6-Y4-Y5部分的结构中可能显著不同。因此，Y4可为在其上没有Z6取代基存在(p＝0)的氧、硫、亚砜或砜；氮(其中p＝0或1)；或在其上p＝1或2的碳原子。在本发明的某些实施方案中，p＝0且Y4为氧、硫、砜或亚砜。在本发明特别的实施方案中，p＝0且Y4为氧或硫。在本发明某些实施方案中，p＝0且Y4为氧。
-Y5-可为下列情况的一种：(i)单键，因为在该实施方案中Y5有效地不存在，所以在该情况下触发子部分基于包含与5-元环稠合的环的6-元芳族Y2-和Y3-；或(ii)＝CH-，其中双键＝与Y4连接。在本发明的这些实施方案中，触发子部分由此由两个稠合的芳环组成且本领域的技术人员理解，在-Y5-为＝CH-的情况下则Y4为氮原子且p＝0或碳原子且p＝1。最后，-Y5-可为(iii)-CH2-或-CH2CH2-，在该情况下，触发子部分包含含有与由Y2和Y3取代的芳香族6-元环稠合的6-或7-元环的二环体系。在本发明的某些实施方案中，一个或多个氢或在-Y5-的选项(ii)和(iii)中规定的氢原子可由Z11部分例如烷基或卤素部分取代。在本发明的某些实施方案中，没有Z11存在。在本发明特别的实施方案中，-Y5-为单键，例如其中p＝0且Y4为氧、硫、砜或亚砜，p＝0且Y4为氧或硫，且特别是其中p＝0且Y4为氧。
现在描述连接部分CH(Z7)-X1-X2。
Z7为氢或烷基或芳基，其在本发明的某些实施方案中是未取代的。在本发明的某些实施方案中，所述各个Z7为烷基，例如诸如未取代的C1-C6烷基的未取代的烷基。Z7部分的实例包括甲基和乙基。在本发明特别的实施方案中，Z7＝氢，使得-CH(Z7)-是亚甲基。在其它实施方案中，所述各个Z7部分为取代的烷基，例如取代的甲基或乙基。这样的实施方案的实例包括氨基-取代的烷基，例如吗啉代或哌啶基烷基或给予增强的水溶性的其它基团。或者一个、各个或至少一个Z7可为诸如吡啶基的任意取代的杂芳基部分。
X1可为多种连接原子或二价连接部分，例如，X1可为氧、硫、磺酰胺或磺酸酯。此外，X1可为乙烷-1，2-二基双(氨基甲酸甲酯)或共轭的烯烃甲氧基部分。
共轭的烯烃甲氧基部分是指通式(＝CH-CH)q＝CH-CH2-O-的部分，其中q为0至6的整数，例如0至3，例如0或1。本领域技术人员理解烯烃甲氧基部分中所描述的氧原子可为由硫原子取代的SO2-O或SO2NZ10部分，由此提供上文列举的共轭的烯烃甲基磺酸酯或共轭的烯烃甲基磺酰胺部分，其中磺酰胺部分(SO2-O和SO2-NZ10)的氧或硫原子或磺酸酯与X2连接，或如果其不存在则与效应子连接。
根据本发明的某些实施方案，X1为氧或硫。在本发明的许多实施方案中，X1为氧。
X2为任选的另外连接部分，其不存在或插入在X1和效应子组分之间。
X2可包含本文描述的多个部分或可不存在。在本发明的某些实施方案中，X2不存在或X1-X2-效应子为下列中的一个：
Figure BPA00001482463600181
例如，X2可包含亚芳基-CH(Z7)X3部分(下文为-ArCH(Z7)X3-部分)和/或酰胺部分。在存在的情况下，-Ar-CH(Z7)X3-部分的两侧可为一个或两个酰胺或硫酰胺基团(C(Z9)NH)。如果两侧为酰胺或硫酰胺基团，则这可直接排列在X1部分和-Ar-CH(Z7)X3(其中n＝1)部分的芳环之间或插入在X3和效应子组分(其中m＝1)之间。或者，酰胺或硫酰胺基团可存在于所有这些位置上或均不在这些位置上。在本发明的某些实施方案中，n＝0且m＝1。当X2包含-Ar-CH(Z7)X3-部分时，不论这两侧是否为一个或两个酰胺或硫酰胺部分，通过酰胺或硫基酰胺部分直接或间接与芳环连接的X1部分可在-Ar-CH(Z7)X3体系的CH(Z7)X3部分邻位的芳环中的两个位置上或在对位上进行连接。设计包含Ar-CH(Z7)X3-部分的X2部分的芳环中的这些连接点允许效应子分子的1，4-、1，6-或1，8-消除。应当理解，在X2的某些实施方案中存在的亚芳基可为杂芳族，即一个或两个原子Y6可为氮原子，而剩余的为碳原子。这样的杂亚芳基部分的实例是亚吡啶基，其中一个Y6为氮原子。在本发明的许多实施方案中，在存在的情况下，各个Y6为碳原子。
当X2部分中存在亚芳基基团时，如所述的，这可由取代基Z8在四个位置(即不将亚芳基与通式(I)化合物的效应子和触发子末端连接)中的任一个上进行取代，所述Z8可按照权利要求1所定义的进行独立选择。
在X2包含一个或多个酰胺或硫酰胺部分时，通常在-CH(Z9)NH存在的情况下，(各个)Z9为氧由此提供一个或多个酰胺部分，尽管在多于一个Z9存在的情况下，可独立地选择每个Z9。
最后，通式(I)化合物的效应子组分是在通常表达CYP1B1的那些细胞中提供期望的目标效果的部分。当从通式(I)化合物中释放时，效应子组分可为具有药理学诊断或筛选功能的任何分子。药理学或诊断功能是指当释放时，效应子组分对释放它的细胞具有可分辨的药理学或诊断作用。
本领域的技术人员理解，当释放时，通式(I)化合物中的效应子组分(效应子)可包含本文描述的原子作为X1-的一部分，例如作为氧或硫原子，或X2的一部分，例如X3，例如氧或硫原子。然而，应当理解，使通式(I)化合物的触发子、连接子和效应子组分之间的差别简单以帮助描述本发明的化合物；本领域的技术人员知道，本发明化合物中的效应子组分组成了在羟基化-诱导的断裂时释放的大部分效应子分子，但释放的效应子分子中的一个或一些原子可由本文描述的原子提供作为X1、X1的一部分或X2以及实际上其它位置(例如从水分子获得的氢原子)。或者，效应子分子可通过例如酮基或甲酰基与通式(I)化合物的剩余部分连接。
在其具有药理学作用的情况下，所述效应子分子可为例如，在在表达影响其释放的细胞时(例如CYP1B1-表达细胞)具有细胞生长抑制或细胞毒性作用任何化学品。如所知道的，细胞毒性试剂分子是对细胞有毒的分子而细胞生长抑剂型是抑制细胞的生长和/或复制的一种试剂。
在本发明的某些实施方案中，效应子分子是细胞毒性剂。可使用的细胞毒性剂的实例包括但不限于烷化剂、抗有丝分裂剂、抗叶酸剂、抗代谢剂、DNA-损伤剂和酶抑制剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)。可能的细胞毒性药物部分的具体实例包括但不限于双(卤代乙基)磷酰胺、环磷酰胺、吉西他滨、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、6-巯嘌呤、喜树碱、拓扑替康、阿霉素、柔红霉素、倍癌霉素、依托泊苷、duetoposide、考布他汀A-4、长春碱、长春新碱、AQ4N、羟基脲、美登素、烯二炔(enediyenes)、埃博霉素、紫杉烷、博来霉素、加利车霉素、秋水仙素、达卡巴嗪、更生霉素、表柔比星、表柔比星衍生物、氟达拉滨、羟基脲喷司他丁、甲氨蝶呤、丝裂霉素、米托蒽醌、卡铂、顺铂、紫杉醇、6-硫鸟嘌呤、长春花生物碱、铂配位复合物、蒽二酮、取代的脲、甲基肼衍生物和氮芥。
在本发明的某些实施方案中，效应子分子是磷酰胺氮芥，即其中磷酸的一个或两个羟基，通常为两个羟基被氮芥或其含氧-或硫-的类似物代替且任选使用P(＝S)替换P(＝O)的磷酸衍生物。本文的氮芥定义为非特异性烷基化的胺，结构上与芥子气(1，5-二氯-3-三硫杂戊烷)相关，其中硫原子被氮原子取代且任选地，一个氯乙基侧链被氢原子或烷基基团取代，或一个或两个末端氯取代基被诸如溴、碘或甲磺酰基(-OSO2CH3)的离去基取代。磷酰胺氮芥的实例包括称为磷酰胺氮芥(PM)和异磷酰胺氮芥(IPM)的化合物：
Figure BPA00001482463600201
因此，应当注意，化合物PM以及称为磷酰胺氮芥的化合物的分类名称是一个实例，因为可将其视为磷酸的衍生物，其中一个羟基被氮芥(其它羟基被氨基(NH2)代替)代替。
在本发明的那些实施方案中，其中效应子分子是磷酰胺氮芥，其中磷酸衍生物的一个或两个，通常为两个羟基被氮芥的含氧-或硫-的类似物代替，这是指磷酰胺氮芥的类似物，其中氮芥被其中一个氯乙基分枝不存在且氮原子被硫或氧原子代替的类似物代替。
在本发明特别的实施方案中，效应子分子通过氧或硫原子与化合物的剩余部分连接，且效应子为通式(II)：
Figure BPA00001482463600211
(其中：
Z12为氧或硫；
各个X4独立地为氧、硫或NZ13，其中各个Z13独立地为(-(CH2)-Z14、-烷基或-氢；以及
各个Z14独立地为氯、溴、碘或甲磺酸酯)。
在本发明的某些实施方案中，Z12为氧。在这些和其它特定的实施方案中，各个X4为相同的。在这些和其它特定的实施方案中，各个X4为NZ13。在这些和其它特定的实施方案中，各个Z13为氢。在本发明的这些和其它特定的实施方案中，各个Z14为相同的和/或为溴或氯。在本发明特别的实施方案中，存在的各个Z14(其可为两个、三个或四个Z14部分)为溴。
或者，效应子分子可为满足诊断功能的分子，例如允许识别或更完整地理解肿瘤的性质，例如其中表达CYP1B1的肿瘤。一类为诊断分子的效应子分子的实例为荧光分子。这些在癌细胞的诊断中是有用的。荧光化合物的实例包括香豆素、试卤灵、荧光素和若丹明，且实际上通过对包含作为效应子分子的香豆素的本发明的化合物进行大量实验证实了本发明的可行性(参见下文的实施例部分)。
因此，可以理解，其中效应子满足诊断功能的通式(I)化合物可用于诊断方法并且这样的方法构成本发明的另外的方面。因此，本发明提供了通式(I)化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，用于增殖性疾病状态的诊断方法，所述增殖性疾病状态例如恶化前细胞增殖或恶性细胞增殖、癌症、白血病、牛皮癣、骨病、纤维增殖性病症或动脉粥样硬化，例如增殖性疾病状态选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌和皮肤癌，所述方法包括给予患有或怀疑患有这样的增殖的个体一定量的通式(I)化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物并监控在个体中释放的效应子分子的分布，由此允许进行诊断。
或者，效应子可为满足筛选功能的效应子，例如作为模型前药库收集物的一部分以识别被CYP1B1及其等位基因变体激活时分裂的触发子和连接子组合。一类效应子分子的实例为荧光分子。荧光化合物的实例包括公知的香豆素、试卤灵、荧光素和若丹明。实际上，通过对包含作为效应子分子的香豆素的本发明的化合物进行大量实验证实了本发明的可行性(参见下文部分的实施例1)。因此，可以理解，其中效应子满足筛选功能的通式(I)化合物可用于识别由CYP1B1激活的前药的设计和合成的触发子和连接子组合中使用且这样的方法构成本发明的另外的方面。
因此，能够理解，其中效应子满足筛选功能作为模型前药库采集物的一部分的通式(I)化合物能与细胞色素P450底物预测模型结合使用以指导对实例CYP1B1及其诸如CYP1B1*3的等位基因变体具有选择性的前药的设计和合成。为了清楚的目的，模型前药库与底物预测模型的组合将底物特异性与通过CYP1B1进行的前药激活和分裂连接，其为基本设计原理。此外，能够理解，其中效应子满足筛选功能的通式(I)化合物能与细胞色素P450底物预测模型结合使用以指导没有由正常组织细胞色素P450激活的前药的设计和合成，所述细胞色素P450由CYP1A1、CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4例示。底物预测模型的实例为基于Tanimoto相似性检索的高斯核加权k-NN运算法则，但其不限于诸如扩展连接性指纹的描述符。在源自细胞色素P450HTS的生物活性数据库上建立用于前药设计的细胞色素P450底物预测模型，所述细胞色素P450HTS来自结构多样的化合物收集物的。实际上，通过对包含作为与CYP1B1底物预测模型结合使用的效应子分子的香豆素的本发明的化合物进行大量实验证实了本发明的可行性(参见实施例1和2)。
或者，效应子可为作为模型前药库收集物的一部分的满足筛选功能的效应子，以识别当被CYP1B1和/或其它细胞色素P450及在癌症和其它增殖性疾病状态中过度表达的其等位基因变体激活时分裂的触发子和连接子组合。一类效应子分子的实例为荧光分子。荧光化合物的实例包括香豆素、试卤灵、荧光素和若丹明。在癌症中过度表达的除CYP1B1之外的细胞色素P450的实例包括CYP2A/2B、CYP2F1、CYP2R1、CYP2S1、CYP2U1、CYP2W1、CYP3A5、CYP3A7、CYP4Z1、CYP26A1和CYP51。
因此，能够理解，其中效应子满足筛选功能作为模型前药库采集物的一部分的通式(I)化合物能与细胞色素P450底物预测模型结合使用，以指导对CYP1B1和/或其它细胞色素P450及其在癌症和其它增殖性疾病状态中过度表达的等位基因变体具有选择性的前药的设计和合成。一类效应子分子的实例为荧光分子。荧光化合物的实例包括香豆素、试卤灵、荧光素和若丹明。在癌症中过度表达的除CYP1B1之外的细胞色素P450的实例包括CYP2A/2B、CYP2F1、CYP2R1、CYP2S1、CYP2U1、CYP2W1、CYP3A5、CYP3A7、CYP4Z1、CYP26A1和CYP51。底物预测模型的实例为基于Tanimoto相似性检索的高斯核加权k-NN运算法则，但其不限于诸如扩展连接性指纹的描述符。能在源自细胞色素P450 HTS的生物活性数据库上建立用于前药设计的细胞色素P450底物预测模型，所述细胞色素P450 HTS来自结构多样的化合物收集物。
根据本发明的方面和实施方案，由此效应子满足筛选功能，例如根据本发明的第七方面，通常一组化合物包含多个化合物，例如包含至少10个，例如至少20个化合物。在某些实施方案中，所述组可包含多达100、1000、10,000或甚至100,000个化合物。这样的化合物组，即其中效应子是荧光团的本发明第一方面的多个化合物以及其中效应子不如此有限和/或化合物可为药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物的其它多个化合物构成本发明的另外方面。
根据本发明第七方面的实施方案，在步骤(a)中化合物释放荧光团但在步骤(b)中不释放或仅释放非常少程度的荧光团，这是指与步骤(b)相比，在步骤(a)中P450酶通常释放至少10倍，例如至少20倍多的所述荧光团。
在筛选的情况下，例如根据本发明第七方面的实施方案产生目标物，例如且通常化合物在步骤(a)中释放荧光团但在步骤(b)中不释放或仅释放非常少程度的荧光团，本发明第七方面的方法任选包括另外的下列步骤：
(d)除了所述荧光团由具有药理学功能的分子取代之外，模拟与在步骤(c)中识别的那些化合物结构相同的化合物用于与所述细胞色素P450酶的活性位点结合；以及
(e)合成预测是用于所述细胞色素P450酶的底物的步骤(d)中模拟的化合物。
或者，可独立于本发明第七方面的强制性步骤(即(a)-(c))来实践这些步骤((d)和(e))，由此构成本发明另外的实施方案。
通常，细胞色素P450酶选自CYP1B1、CYP2S1、CYP2W1、CYP4Z1及其等位基因变体，例如CYP1B1及其等位基因变体，例如CYP1B1。
本发明的一方面是使用源自切除的癌样本的体外早期通道数＜20的原发性人肿瘤细胞系。在下文实施例4和5中描述的原发性头和颈鳞状细胞癌细胞系UT-SCC以mRNA和蛋白质水平组成性表达CYP1B1并能伴随高的移植速度皮下移植进入免疫缺陷的小鼠中(例如裸或重度复合性免疫缺陷SCID小鼠)以产生原发性人肿瘤异种移植物，其中组成性表达的细胞色素P450蛋白质表达与起源于患者的肿瘤的细胞色素P450蛋白质表达相匹配。因此，这些原发性人肿瘤异种移植物模型通过保持与起源于患者的肿瘤相似的细胞色素P450mRNA/蛋白质表达能用于评价本发明化合物的功效，其中效应子组分是对治疗癌症具有药理学活性的试剂。此外，在临床环境中，这些原发性人肿瘤异种移植物模型能用于检查本发明的化合物是否反应，其中效应子组分是具有药理学活性的试剂，并与表示个人化化学疗法的有效性的临床反应和结果相关。原发性人肿瘤模型还能用于比较权利要求1所述的化合物的功效，其中效应子组分是伴随标准化学治疗方案的具有药理学活性的试剂，且因此确定单独地或与其它化学治疗剂组合的权利要求1所述的化合物的最有效方案。
此外，作为本发明的一部分，能够通过直接移植直接从患者切除的肿瘤组织获得原发性人肿瘤异种移植物并皮下移植进入例如，裸的SCID和非肥胖型糖尿病/重度复合性免疫缺陷(NOD/SCID)的小鼠中。能够产生用于一系列不同癌症的第一代原发性人肿瘤异种移植物，其保留起源肿瘤的肿瘤组织学和基因特性，并因此以与起源肿瘤相似的水平组成性表达CYP1B1mRNA/蛋白质。这些原发性人肿瘤异种移植物模型通过保持与起源于患者的肿瘤相似的CYP1B1mRNA/蛋白质表达能因此用于评价本发明化合物的功效，其中效应子组分是对治疗癌症具有药理学活性的试剂。此外，在临床环境中，这些原发性人肿瘤异种移植物模型能用于检查权利要求1所述的化合物是否反应，其中效应子组分是具有药理学活性的试剂，并与表示个人化化学疗法的有效性的临床反应和结果相关。原发性人肿瘤模型还能用于比较本发明化合物的功效，其中效应子组分是具有标准化学治疗方案的具有药理学活性的试剂，且因此确定单独地或与其它化学治疗剂组合的本发明化合物的最有效的方案。
在根据本发明第八方面的情况下，癌症是来自早期通道细胞系的细胞移植的产物，所述早期通道细胞系源自直接从肿瘤或癌症获取的组织，其以与来自其起源的肿瘤或癌症的那些相似的水平表达所述细胞色素P450酶，如果与来自其起源的肿瘤或癌症的那些相比在10％的范围内则可认为所述水平是相似的，例如5％范围内。
对于本发明的用途，本文描述的化合物或其生理学可接受的盐、溶剂化物、酯或酰胺可以药物剂型形式存在，所述药物剂型包含化合物或其生理学可接受的盐、酯、酰胺或其它生理学功能的衍生物连同一种或多种药物可接受的载体和任选其它治疗性和/或预防性成分。从与剂型的其它成分相容并对其受体无毒的意义上而言任何载体均是可接受的。
本发明化合物的生理学可接受的盐的实例包括酸加成盐，其由诸如醋酸、乳酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、丙酮酸、草酸、富马酸、草酰乙酸、羟乙基磺酸、乳糖酸和琥珀酸的有机羧酸；诸如甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸和对甲苯磺酸的有机磺酸以及诸如盐酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸的无机酸所形成。
生理学可接受的酯或酰胺特别是酯的检测正好在本领域技术人员的技术范围内。
可以方便或期望制备、纯的和/或处理本文描述的化合物的相应溶剂化物，可将其用于所描述的用途/方法中的任一种。本文使用的术语溶剂化物是指溶质和溶剂的复合物，所述溶质例如化合物或化合物的盐。如果溶剂是水，那么溶剂化物可称为水合物，例如依赖每分子底物存在的水分子的量的单水合物、二水合物、三水合物等。
应当理解，本发明的化合物可以多种立体异构形式存在且上文定义的本发明的化合物包括所有的立体异构形式及其混合物，包括对映异构体和外消旋混合物。本发明在其范围内包括任何这样的立体异构形式或立体异构体混合物的使用，包括通式(I)或(II)化合物的各个对映异构体以及这样的对映异构体的全部或部分外消旋混合物。
本领域的技术人员还理解，诸如本文描述的那些抗癌前药能通过连接诸如肿瘤靶向肽的肿瘤靶向部分而靶向特定肿瘤，例如通过开发噬菌体展示肽库识别的小肽。这样的肽或其它部分可帮助包含它们的共轭物靶向特殊的癌症，特别是实体肿瘤。因此，这样的共轭物的提供，即与肿瘤靶向部分共轭的本发明的化合物形成了本发明另外的方面以及包含或包括使用这样的共轭物的本文描述的组合物、用途和方法。
可使用本领域容易获得的试剂和技术和/或下文描述的示例性方法来制备本发明的化合物。发现本发明的化合物在表达CYP1B1酶的细胞中表现出细胞毒性，但在不表达CYP1B1的正常细胞中基本上无毒性。本发明的化合物还可在表达CYP1A1酶的细胞中表现出细胞毒性。因此，实际上，本发明的化合物是转化(通常通过CYP1B1)成为细胞毒性剂的无毒前药物。
适当地，本发明化合物具有如下文定义的细胞毒性IC50值或小于10μM，有利地小于5μM，例如小于1.0μM或0.5μM。
在一些实施方案中，可通过使用改造以表达CYP1B1的细胞在不同系列的稀释度下培养所述化合物来检测本发明化合物的细胞毒性。适当地，所述细胞可为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，其可包含重组CYP1B1和细胞色素P-450还原酶(CPR)。当与人P-450还原酶共表达时，使用二氢叶酸还原酶(DHFR)基因放大可获得高水平的功能酶。通常，可使用化合物培养改造的细胞并在适当的时间(例如，96小时)之后，使用合适的检验试剂进一步培养(例如，1.5小时)以提供培养基中存活细胞数量的指示。合适的检验试剂是MTS(参见下文)，其由细胞生物还原成为可溶于组织培养基的甲瓒产品。在510nm下能直接检测甲瓒产品的吸收，且由490nm或510nm下吸收的量检测的定量甲瓒产品直接与培养基中存活细胞的数量成比例。在下文实施例3中描述用于测定本发明化合物的IC50值的详细方法。
通过比较，还可在不包含CYP1B1的细胞(例如，中国仓鼠卵巢细胞)中，例如野生型CHO细胞中检测本发明化合物的IC50值。本发明的化合物可适当地具有至少200的CYP1B1表达细胞的倍数选择性，其中将“倍数选择性”定义为非CYP1表达细胞中给定化合物的IC50值和CYP1B1表达细胞中相同化合物的IC50值的系数。
在一些实施方案中，如实施例4描述的，还可通过使用源自患有头和颈鳞状细胞癌的患者的原发性头和颈肿瘤细胞在不同系列的稀释度下培养化合物来检测本发明化合物的细胞毒性。
在一些实施方案中，如实施例5描述的，可通过将组成性表达CYP1B1的原发性头和颈鳞状细胞癌肿瘤细胞皮下移植进入裸小鼠的两侧以产生原发性人肿瘤异种移植物模型来检测本发明化合物的体内功效并检测前药治疗对肿瘤生长的作用。
因此，本发明还包括使用一种或多种本发明化合物，包括上述药物可接受的酯、酰胺、盐、溶剂化物和前药，其用于治疗受治疗的人或动物体，特别是治疗或预防增殖性疾病状态，例如人和非人动物中的增殖病症或疾病，所述增殖性疾病状态包括在本发明的某些实施方案中特征在于表达CYP1B1的细胞的增殖性疾病状态。更特别地，本发明包括一种或多种本发明的化合物在治疗特征在于在本发明的某些实施方案中通过CYP1B1表达的癌症中的用途。
本文的“增殖性疾病状态”意思是特征在于不期望的过多或异常细胞的不期望或不受控制的细胞增殖的疾病或病症，例如，不论体外或体内的肿瘤或增生性生长。增殖性疾病状态的实例为恶化前和恶性细胞增殖，包括恶性肿瘤和肿瘤、癌症、白血病、牛皮癣、骨病、纤维增殖性病症(例如，结缔组织的增殖病症)和动脉粥样硬化。
所述增殖性疾病状态的特征在于在本发明的某些实施方案中的表达CYP1B1的细胞。
所述增殖性疾病状态可选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌和皮肤癌。在一些实施方案中，所述增殖性疾病状态可包括实体肿瘤。
本文的“治疗”意思是不论人或非人动物(例如，在兽医应用中)的受治疗的治疗，其中实现对增殖性疾病状态的一些期望的治疗效果；例如，病症发展的抑制，包括发展速度的降低、发展速度的终止、病症的减轻或疾病状态的治愈。还包括作为预防性措施的治疗。本文涉及的防治或本文的预防不表示或要求疾病状态的完全预防；相反，其表现可为通过本发明的预防或防治而减轻或延缓。本文的“治疗有效量”意思是一种或多种本发明的化合物或包含这样的一种或多种化合物的药物剂型的量，所述量对产生这样的治疗效果是有效的，与合理的利益/危险比相称。
因此，本发明的化合物可用作抗癌药。本文的术语“抗癌药”意思是治疗癌症的化合物(即，对癌症的治疗有效的化合物)。本发明化合物的抗癌效果可通过一种或多种机制产生，包括细胞增殖的调节、血管生成的抑制、转移的抑制、侵袭的抑制或细胞死亡的促进。
可以理解，本发明化合物的合适剂量可随患者的不同而变化。通常，最佳剂量的测定包括平衡治疗效果的水平与本发明治疗的任何危险或有害副作用。选择的剂量水平依赖多种因素，包括特定化合物的活性、给药途径、给药时间、化合物排泄的速度、治疗的持续时间、其它药物、组合使用的化合物或物质以及患者的年龄、性别、体重、疾病状态、整体健康状况和先前的病史。尽管通常剂量会达到作用部位的局部浓度以实现期望的效果，但化合物的量和给药途径最终由医生判断。
在整个治疗过程中，能以一次给药、连续或间歇的形式实现体内给药。本领域技术人员熟知确定给药的最有效手段和剂量的方法并随用于治疗的剂型、治疗目的、受治疗的靶向细胞和受治疗的个体而变化。使用由治疗医生选择的剂量水平和模式能进行一次或多次给药。
药物剂型包括适用于口服、局部(包括皮肤、颊和舌下)、直肠或肠胃外(包括皮下、皮内、肌内和静脉内)、例如通过吸入的鼻和肺部给药的那些。在适当的情况下，剂型可方便地存在于单个剂量单位中并可通过药学领域熟知的任何方法进行。通常，方法包括使活性化合物与液体载体或磨碎的固体载体或二者结合的步骤，然后，若需要将产品制成期望的剂型。
其中载体为固体的适用于口服给药的药物剂型最优选以诸如各自包含预定量的活性化合物的丸剂、胶囊剂或片剂的单位剂量剂型的形式存在。可通过任选使用一种或多种附加成分的压缩或模压来制备片剂。可通过在合适的机器中压缩诸如任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合的粉末或颗粒的松散形式的活性化合物来制备压缩的片剂。可通过模压活性化合物与惰性液体稀释剂来制备模压的片剂。可任选涂覆片剂，且若未涂覆，那么可任选刻痕片剂。通过填充单独或与一种或多种附加成分混合的活性化合物进入胶囊壳然后以常规方式密封它们来制备胶囊剂。扁囊剂与胶囊剂类似，其中将活性化合物与任何附加成分一起密封在米纸包膜中。还可将活性化合物配制成为分散的颗粒剂，在给药之前可将其例如悬浮在水中或撒在食物上。可将颗粒剂包装在例如小袋中。其中载体为液体的适用于口服给药的剂型可以溶液剂或水性或非水性液体中的悬浮剂形式或以水包油液体乳剂的形式存在。
用于口服给药的剂型包括控释剂型，例如，其中将活性化合物配制在合适的控释基质中或由合适的控制膜涂覆活性化合物的片剂。这样的剂型可能特别便于预防使用。
其中载体为固体的适用于直肠给药的药物剂型最优选以单位剂量的栓剂形式存在。合适的载体包括可可脂和本领域常使用的其它物质。通过将活性化合物与软化或熔化的载体混合随后冷却并在模具中成形来方便地形成栓剂。
适用于肠胃外给药的药物剂型包括水性或油质媒介物中的活性化合物的无菌溶液剂或悬浮剂。
注射制剂可适合于弹丸注射或连续输注。这样的制剂方便以单位剂量或多剂量容器形式存在，将其在引入剂型直至使用所要求的量之后密封。或者，活性化合物可为在使用之前使用诸如无菌无热原水的合适媒介物构成的粉末形式。
还可将活性化合物配制成为长效补给制剂，其可通过肌肉注射或通过灌输进行给药，例如皮下或肌肉给药。补给制剂可包括例如合适的聚合或疏水物质，或离子交换树脂。这样的长效剂型特别便于预防使用。
存在适用于通过口腔进行肺部给药的剂型使得包含活性化合物并使得直径期望地为0.5微米至7微米的粒子在受体的支气管树中进行递送。
作为一种可能性，这样的剂型为适用于吸入设备的精细粉碎的粉末形式，所述精细粉碎的粉末可方便地以适合为例如明胶的可刺破胶囊形式或者包含活性化合物、合适的液体或气体推进剂以及诸如表面活性剂和/或固体稀释剂的任选其它成分的自动推进的剂型形式存在。合适的液体推进剂包含丙烷和氯氟化碳，且合适的气体推进剂包含二氧化碳。还可使用其中活性化合物以溶液剂或悬浮剂的液滴形式分配的自推进剂型。
这样的自推进剂型与本领域已知的那些类似并可通过常规程序进行制备。适当地，它们在装备有具有期望的喷射特征的手动操作或自动运行的阀的容器中存在；有利地，所述阀基于其各个操作为递送固定体积的计量型阀，例如25微升至100微升。
作为另一种可能性，活性化合物可为用于喷雾器或雾化器的溶液剂或悬浮剂形式，由此使用加速的气流或超声搅拌以产生用于吸入的微小滴。
适用于鼻给药的剂型包括通常与上述用于肺部给药所描述的那些相似的制剂。当分配这样的剂型时，其应当期望地具有的粒径为10微米至200微米以能够在鼻腔内存留；适当时，这可通过使用合适粒径的粉末或选择合适的阀来实现。其它合适的剂型包括用于从接近鼻子而保持的容器中通过鼻通道快速吸入给药的粒径为20微米至500微米的粗粉末，和水性或油性溶液剂或悬浮剂形式的包含0.2％w/v至5％w/v的活性化合物的鼻滴剂。
应当理解，除上述载体成分之外，上述药物剂型可包含诸如稀释剂、缓冲剂、调味剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等的合适的一种或多种另外的载体成分以及为使剂型与预定接受者的血液等渗压的目的而包含的物质。
药物可接受的载体对本领域技术人员而言是公知的且包含但不限于0.1M且优选为0.05M的磷酸盐缓冲液或0.8％的盐水。此外，药物可接受的载体可为水性或非水性的溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、诸如橄榄油的植物油和诸如油酸乙酯的可注射的有机酯。水性载体包括水、酒精/水溶液、包含盐水和缓冲培养基的乳液或悬浮液。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格式右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发性油。还可存在防腐剂和其它添加剂，例如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。
可例如以凝胶剂、乳膏剂或软膏剂的形式提供适用于局部剂型的剂型。
还可提供能直接喷洒或喷淋在例如伤口或溃疡的受治疗部位的液体或粉末剂型。或者，能将诸如绷带、纱布、网状物等的载体与剂型一起喷洒或喷淋，然后应用于受治疗的部位。
用于兽医使用的治疗剂型可方便地为粉末或液体浓缩物的形式。根据标准兽医剂型实践，可将诸如乳糖或蔗糖的常规水可溶的赋形剂与粉末混合以改善其物理性质。因此，本发明特别合适的粉末包含50％w/w至100％w/w且优选为60％w/w至80％w/w的活性成分以及0％w/w至50％w/w且优选为20％w/w至40％w/w的常规兽医赋形剂。可将这些粉末加入至动物饲料例如通过中间的预混合，或稀释在动物饮用水中。
本发明的液体浓缩物适合包含化合物或其衍生物或盐并可任选包含兽医可接受的水可混溶的溶剂，例如聚乙二醇、丙二醇、甘油、甘油缩甲醛或与多达30％v/v的乙醇混合的这样的溶剂。可将液体浓缩物给予动物饮用水。
通常，一种或多种本发明化合物的合适的剂量可为约1μg至约5000μg/kg个体体重每天，例如1、5、10、25、50、100、250、1000、2500或5000μg/kg每天。在化合物是盐、溶剂化物、前药等的情况下，可基于母体化合物计算给药量，因此待使用的实际重量可成比例增加。
在一些实施方案中，可以联合治疗的方式使用一种或多种本发明的化合物来治疗上述种类的增殖性疾病状态，即结合其它治疗剂。这样的其它治疗剂的实例包括但不限于拓扑异构酶抑剂型、烷化剂、抗代谢剂、DNA粘合剂和微管抑制剂(微管蛋白靶向剂)，例如顺铂、环磷酰胺、阿霉素、依托泊苷、伊立替康、氟达拉滨、5FU、紫杉烷或丝裂霉素C。其它治疗剂对本领域技术人员而言是明显的。对于与其它治疗方法结合的活性化合物的情况，可以各个不同的给药方案并通过不同的途径提供两种或多种治疗。
上述列举的试剂与本发明的化合物的组合将由医生判断，医生使用他常用的一般知识和熟练的医生已知的给药方案来选择剂量。
在组合治疗中，在与一种、两种、三种、四种或更多，优选为一种或两种，优选一种其它治疗剂一起给予本发明的化合物的情况下，能同时或相继给予化合物。当相继给予时，能以紧密排列的间隔(例如在5-10分钟的时间内)或以较长的间隔(例如相隔1、2、3、4或更多小时，或在需要的情况下相隔甚至更长的时间)给予它们，精确的给药方案与治疗剂的性质相称。
还可结合诸如放射疗法、光能疗法、基因疗法、手术和控制饮食的非化疗治疗组合给予本发明的化合物。
现在参考下列非限制性实施例说明本发明：
化合物的制备
综述
在Bruker Avance DPX 500 MHz或Bruker Avance 300 MHz光谱仪上在指定的溶剂中记录1H、13C和31P核磁共振(NMR)光谱。以ppm表示化学位移。将信号分裂模式描述为单峰(s)、宽单峰(bs)、双峰(d)、三重峰(t)、四重峰(q)、多重峰(m)或其组合。在Bruker MicroTof质谱仪上记录低分辨率电喷射(ES)质谱，以正离子模式运行，使用甲醇/水(95∶5)或水乙腈(1∶1)+0.1％甲酸作为流动相。在BrukerMicrotof质谱仪上进行高分辨率电喷射检测。使用安捷伦HPLC 1100(Phenomenex Gemini柱5μ C18
Figure BPA00001482463600331
50×3.0mm)进行LC-MS分析，使用(0％至20％的MeOH/H2O)洗脱并使用Bruker Microtof质谱仪的串联二极管阵列检测器。使用硅胶(230-400目)或RediSep
Figure BPA00001482463600332
.4、12、40或80g硅胶预填充柱进行柱层析。所有起始材料均可商购并不用进一步纯化就可使用。除非另外规定，所有反应均在干燥和惰性条件下进行。
[下面具有括号内的剑号
Figure BPA00001482463600333
表示的化合物不是本发明的实施例但包括在内用于更好地理解本发明的实施例。]
1.磷酰胺氮芥前药
Figure BPA00001482463600334
磷酰胺前药SU025-04和SU046-04的合成
1.前药触发子组分的合成
Figure BPA00001482463600341
试剂和条件：(i)Br2，CH3CO2H，(ii)(a)吗啉，THF，-50℃，15分钟；(b)n-BuLi，-75℃，35分钟；(c)PhNO2，-75℃，4小时，H3O+，15分钟；(iii)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(iv)CH3CO2H，120℃，24小时；(v)NaBH4，THF，EtOH，室温
2-溴-3，5-二甲氧基苯甲醛(1)
将3，5-二甲氧基苯甲醛(12.6g，76mmol)溶解在醋酸(350mL)中。将产生的无色溶液冷却至0℃。滴加溴(3.9mL)的醋酸(50mL)溶液，时间为1小时。一旦完成添加就移除冰浴并在室温下将产生的浅绿色溶液搅拌过夜。将冷水加入至溶液。通过真空过滤收集产生的白色固体并用水洗涤。然后，在EtOAc中将固体再溶解并吸附在硅胶上。通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的1(12.5g，66％)。m/z＝345.98(M+H)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.43(1H，s，CHO)，7.06(1H，s，ArH)，6.73(1H，s，ArH)，3.93(3H，s，CH3O)，3.86(3H，s，CH3O)。13C NMR(500MHz，CDCl3)：δ：192.09(CHO)，159.92(C-5)，157.02(C-3)，134.67(C-1)，109.12(C-2)，105.83，103.37(C-4和C-6)，56.60(OMe)，55.82(OMe)。
2-羟基-3，5-二甲氧基苯甲醛(2)
将吗啉(2.05g，24mmol)和THF(40mL)放置在装备有搅拌棒、隔膜盖、滴液漏斗、温度计和氩气进气口的三颈、圆底烧瓶中。将烧瓶在干冰丙酮浴中冷却至-50℃，并同时加入n-BuLi的己烷溶液(1.6M，15mL，24mmol)。10分钟之后，通过注射器滴加1(4.9g，20mmol)的THF (30mL)溶液，时间为4分钟，并在20分钟内将混合物冷却至约-75℃。然后，在45分钟内滴加n-BuLi的己烷(1.6M，20mL，32mmol)，保持温度在-75℃。完成n-BuLi的添加之后，将溶液搅拌35分钟。从滴液漏斗中加入硝基苯酚(6.90g，46mmol)的10mL的THF溶液，保持温度在-75℃。在-75℃下将产生的黑色混合物搅拌4小时，然后允许升温至室温。使用6N HCl将其酸化至pH＝1并搅拌15分钟。用盐水(100mL)稀释之后，真空去除THF。使用乙醚(4×40mL)萃取水溶液。使用2N NaOH(3×40mL)萃取混合的有机层。使用乙醚(3×20mL)洗涤混合的NaOH萃取物，然后使用浓HCl酸化至pH＝1。使用CH2Cl2(3×20mL)萃取产生的混合物，并使用盐水洗涤混合的有机萃取物，干燥(MgSO4)并在硅胶上吸附。通过使用EtOAc/己烷(1∶2)洗脱的快速色谱纯化产物。获得黄色固体形式的纯的2(2.0g，55％)。m/z＝183.06(M+H)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.71(1H，s，OH)，9.91(1H，s，CHO)，6.77(1H，d，J4，6＝2.8Hz，H-6)，6.61(1H，d，J4，6＝2.8Hz，H-4)，3.92(3H，s，OMe)，3.84(3H，s，OMe)。13C NMR CDEPT135(500MHz，CDCI3)：δ：196.11(CHO)，107.93(C-6)，103.90(C-4)，56.29(OMe)，55.83(OMe)。
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛(3)
向搅拌的包含2(1.1g，6.0mmol)和K2CO3(1.0g，7.2mmol)的DMF(100mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(0.93mL，6.0mmol)。将混合物回流4小时h。冷却之后，将沉淀物过滤除去并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过使用正己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生透明油状物形式的3(1.2g，67％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.50(1H，s，CHO)，6.88(1H，d，J4，6＝2.9Hz，H-6)，6.74(1H，d，J4，6＝2.9Hz，H-4)，4.83(1H，t，J4，6＝5.3Hz，CH)，4.14(2H，d，J4，6＝5.3Hz，CH2)，3.88(3H，s，OMe)，3.83(3H，s，OMe)，3.77-3.71)(2H，m，CH 2CH3)，3.63-3.58(2H，m，CH 2CH3)，1.24(6H，t，J＝7.1Hz，2×CH3)。
5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-甲醛(4)
将搅拌的3(1.2g，4.0mmol)的醋酸(35mL)溶液回流16小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的4(230mg，28％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：9.89(1H，s，CHO)，7.50(1H，s，H-3)，6.69(1H，d，J4，6＝2.2Hz，H-6)，6.64(1H，d，J4，6＝2.2Hz，H-4)，4.01(3H，s，OMe)，3.87(3H，s，OMe)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCI3)：δ：179.91(CHO)，153.37(C-2)，116.10(C-3)，101.80(C-6)，94.90(C-4)，56.20(OMe)，55.88(OMe)。
(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲醇(5)
将化合物4(460mg，2.23mmol)溶解在THF(5mL)和EtOH(1mL)中。在0℃下在剧烈搅拌下分批加入NaBH4(102mg，2.68mmol)。在0℃下将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的5(388mg，82％)。m/z＝209.08(M+H)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：6.62(1H，s，H-3)，6.60(1H，s，H-6)，6.46(1H，s，H-4)，4.76(2H，s，2-CH2)，3.99(3H，s，OMe)，3.85(3H，s，OMe)。13C NMR(500MHz，CDCl3)：δ：157.23(C-5)，156.72(C-1)，145.36(C-7)，139.50(C-1a)，129.38(C-4a)，104.62(C-3)，96.96(C-6)，94.58(C-4)，57.98(2-CH2)，55.95(OMe)，55.83(OMe)。
2.前药的效应子组分的合成
试剂和条件：(i)POCl3，TEA，DCM，-10℃至-15℃，2小时；(ii)H2O，THF，室温，16小时
N，N-双(2-氯乙基)磷酰胺酸(6)
伴随剧烈在-78℃下在15分钟时间内，向2-氯乙胺盐酸盐(7.2g，62mmol)的CH2Cl2(110mL)的悬浮液加入POCl3(2.84mL，31mmol)，随后在4小时内，加入TEA(17.5mL，124mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液。在-78℃下将反应混合物搅拌1小时，然后允许升温至室温并搅拌2小时。将产生的固体过滤并使用冷的EtOAc洗涤。将固体丢弃。将滤液在真空下浓缩至约5mL并加入EtOAc(10mL)。将产生的悬浮液过滤并使用EtOAc(2×10mL)洗涤。将固体再次丢弃。真空下浓缩滤液至干燥。然后，将残留物溶解在THF(7mL)中，随后在20分钟内在0℃下加入NaBr水溶液(NaBr(5g)的100mL的水)。然后，将混合物升温至室温并在水浴中搅拌15小时。白色固体从反应混合物中沉淀。然后，在冰箱中将混合物在-20℃下保持2小时。将结晶固体过滤并使用冷水(2×50mL，0℃)和冷的EtOAc(2×50mL，0℃)洗涤。在真空下室温干燥过夜之后，获得白色固体形式的产物6(1.8g，26％)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ：5.29(3H，br，OH和NH)，3.55(4H，t，J＝7.0Hz，2×CH2)，3.01(4H，dt，J＝12.2，7.0Hz，2×CH2)。31PNMR(500MHz，DMSO-d6)δ：12.28ppm。
N，N-双(2-溴乙基)磷酰胺酸(7)
使用上述相似的方法合成化合物7。以18％产率获得它(1.64g)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ：6.08(3H，s，OH和NH)，3.46(4H，t，J＝7.0Hz，2×CH2)，3.01(4H，dt，J＝12.2，7.0Hz，2×CH2)。31P NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：12.23ppm。
3.用于合成SU025-04和SU046-04的偶联反应
Figure BPA00001482463600381
试剂和条件：(i)PPh3，DIAD，THF，0℃至室温，2小时
5，7-(二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲基N，N’-双(2-氯乙基)磷二酰胺(8)SU025-04
在0℃下，向5(300mg，1.44mmol)、6(479mg，2.16mmol)和PPh3(565mg，2.16mmol)的THF(20mL)的悬浮液滴加DIAD(0.426mL，2.16mmol)。将产生的悬浮液升温至室温并搅拌2小时。将溶剂去除，并通过快速色谱(70％丙酮的甲苯)纯化残留物以产生油状物形式的8(250mg，42％)。m/z＝823.08(2M+H)。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ7.27(2H，s，2×NH)，6.75(1H，s，ArH-3)，6.62(1H，d，J4，6＝2.3Hz，ArH-4)，6.49(1H，d，J4，6＝2.3Hz，ArH-6)，5.13(2H，d，J＝9.3Hz，2H)，3.99(3H，s，OMe)，3.86(3H，s，OMe)，3.29(4H，m，2×CH2)，31P NMR(500MHz，DMSO-d6)δ：14.76ppm。HRMS：计算值C15H21N2O5PCl2Na，433.0463；发现值433.0471。
5，7-(二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲基N，N’-双(2-溴乙基)磷二酰胺(9)SU046-04
使用上述相似的方法合成化合物9(SU046-04)。以25％的产率获得它(10mg)。m/z＝500.96(M+H)，1000.93(2M+H)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ6.76(1H，s，ArH-3)，6.61(1H，d，J4，6＝2.2Hz，ArH-4)，6.48(1H，d，J4，6＝2.2Hz，ArH-6)，5.13(2H，d，J＝9.4Hz，2H)，3.99(3H，s，OMe)，3.86(3H，s，OMe)，3.49-3.45(4H，m，2×CH2)，3.40-3.33(4H，m，2×CH2)3.23(2H，bs，NH)。13C NMR(500MHz，CDCI3)：δ：156.98，152.91，145.58，139.97，129.06，128.24，107.45，97.70，94.56，59.73，56.00，42.90，34.76，30.98。HRMS：计算值C15H21N2O5PBr2Na，520.9453；发现值520.9454。
2.醚和硫醚连接的模型前药
Figure BPA00001482463600391
醚和硫醚连接的前药的合成
7-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(10)TLE-M2-SU010A
Figure BPA00001482463600402
试剂和条件：(i)PBr3，吡啶，甲苯；(ii)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
2-(溴甲基)苯并呋喃(10)
将苯并呋喃-2基甲醇(1.0g，6.7mmol)溶解在甲苯(50mL)中并加入吡啶(653μL，8.1mmol)。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(760μL，8.1mmol)。然后将反应混合物升至室温并搅拌1小时。使用K2CO3溶液洗涤混合物并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层并干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂并通过使用己烷∶EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生油状物形式的10(780mg，55％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.57(1H，d，J＝7.75Hz，H-4)，7.52(1H1 d，J＝8.40，H-7)，7.35(1H，t，J＝8.90，H-4)，7.27(1H，t，J＝8.9Hz，H-5)，6.79(1H，s，H-3)，4.64(2H，s，2-CH2)。13C NMR CDEPT135，(500MHz，CDCl3)：δ：155.34(C-2)，152.65(C-7a)，129.08(C-3a)，125.20(C-6)，123.16(C-5)，121.34(C-C-4)，111.46(C-7)，106.30(C-3)，23.61(CH2-Br)。
7-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(11)TLE-M2-SU010A
在0℃下将乙醇钠(77mg，1.13mmol)加入至DMF(10mL)，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(200mg，1.13mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入10(200mg，0.94mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水、水和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的11(35mg，12％)，m/z＝307(M+H)。H1 NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝7.75-7.60(2H，m，ArH)，7.40-7.25(2H，m，ArH)，7.23(1H，s，ArH)，7.12(2H，d，CH)，6.25(1H，s，CH)，5.41(2H，s，CH2)，2.38(3H，s，CH3)。
7-((5-氟苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(16)VG015-05
Figure BPA00001482463600411
试剂和条件：(i)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(ii)CH3CO2H，120℃，24小时；(iii)NaBH4，THF，EtOH，室温；(iv)PBr3，吡啶，甲苯，室温；(v)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-5-氟苯甲醛(12)
向搅拌的包含2-羟基-5-氟苯甲醛(500mg，3.57mmol)和K2CO3(524mg，13.79mmol)的DMF(10mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(0.6mL，3.93mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的12(300mg，33％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.30(1H，s，CHO)，7.31(1H，d，J＝7.85Hz)，7.10(1H，t，J＝7.80Hz)，6.87(1H，d，J＝8.86Hz)，4.75(1H，s，CH)，3.97(2H，d，J＝2.35Hz，CH2)，3.67-3.64(2H，m，CH2CH3)，3.53-3.50(2H，m，CH2CH3)，1.11(6H，t，J＝6.00Hz，2×CH3)。
5-氟苯并呋喃-2-甲醛(13)
将搅拌的12(300mg，4.0mmol)的醋酸(10mL)的溶液回流24小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的13(180mg，94％)，1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：9.89(1H，s，CHO)，7.57(2H，m，ArH)，7.41(1H，d，J＝7.20Hz)，7.26(1H，d，J＝6.94Hz，H-4)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ：179.74(CHO)，117.73(C-3)，117.25(C-7)，113.81(C-6)，108.68(C-4)。
(5-氟苯并呋喃-2-基)甲醇(14)
将化合物13(180mg，1.10mmol)溶解在EtOH(12mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(45mg，1.21mmol)。在0℃下将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。将溶剂真空蒸发除去。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的14(150mg，91％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.36(1H，d，J＝8.35Hz，H-7)，7.19(1H，d，J＝7.80，H-4)，7.00(1H，t，J＝8.75H-6)，6.60(1H，s，H-3)，4.75(2H，s，CH2)。
2-(溴甲基)-5-氟苯并呋喃(15)
将化合物14(150mg，0.90mmol)溶解在甲苯(10mL)中并将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(102μL，1.08mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的15(150mg，72％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.43(1H，d，J＝7.60Hz，H-7)，7.21(1H，t，J＝8.10，H-4)，7.06(1H，t，J＝8.90，H-4)，6.75(1H，s，H-3)，4.60(2H，s，2-CH2)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ：113.08(C-7)，112.08(C-6)，106.87(C-4)，106.34(C-3)，60.42(CH2-Br)。
7-((5-氟苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(16)VG015-05
在0℃下，将乙醇钠(8.9mg，0.13mmol)加入至DMF(3ml)，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(25.4mg，0.14mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入15(30mg，0.13mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的16(9.0mg，21％)，m/z＝325.20(M+H)。
7-((5，7-二氟苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(19)VG016-05
Figure BPA00001482463600431
试剂和条件：(i)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(ii)CH3CO2H，120℃，24小时；(iii)NaBH4，THF，EtOH，室温；(iv)PBr3，吡啶，甲苯，室温；(v)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-3，5-二氟苯甲醛(17)
向搅拌的包含2-羟基-3，5-氟苯甲醛(1.0g，6.32mmol)和K2CO3(960mg，6.95mmol)的DMF(10mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(1.07mL，6.95mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的17(380mg，22％)，1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.41(1H，s，CHO)，7.29(1H，d，J＝6.80Hz)，7.10(1H，t，J＝8.30Hz)，4.80(1H，s，CH)，4.20(2H，d，J＝3.25Hz，CH2)，3.71(2H，t，J＝7.10Hz，CH 2CH3)，3.57(2H，t，J＝7.45Hz，CH 2CH3)，1.19(6H，t，J＝6.25Hz，2×CH3)。
2-(溴甲基)-5，7-二氟苯并呋喃(18)
将搅拌的17(380mg，1.39mmol)的醋酸(10mL)溶液回流24小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物(300mg)溶解在EtOH(5mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(73mg，1.98mmol)。在0℃下将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。真空蒸发除去溶剂。将粗残留物(280mg)溶解在甲苯(20mL)中并将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(142μL，1.52mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生18(210mg，61％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.03(1H，d，J＝7.50Hz，H-4)，6.87(1H，t，J＝9.80，H-5)，6.79(1H，s，H-3)，4.59(2H，s，2-CH2)。
7-((5，7-二氟苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(19)VG016-05
在0℃下，将乙醇钠(8.9mg，0.13mmol)加入至DMF(3mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(25.4mg，0.14mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-(溴甲基)-5-氟苯并呋喃(30mg，0.12mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的19(8.8mg，21％)，m/z＝343.12(M+H)。
7-((5，7-二氟苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(22)(VG017-05)
Figure BPA00001482463600451
试剂和条件：(i)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(ii)CH3CO2H，120℃，24小时；(iii)NaBH4，THF，EtOH，室温；(iv)PBr3，吡啶，甲苯，室温；(v)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-5-氟-3-甲基苯甲醛(20)
向搅拌的包含5-氟-2-羟基-3-甲基苯甲醛(1.0g，6.49mmol)和K2CO3(980mg，7.10mmol)的DMF(8mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(1.10mL，7.15mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过快速色谱纯化。使用正己烷/EtOAc(4∶1)洗脱产物以产生油状物形式的20(350mg，20％)，1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.40(1H，s，CHO)，7.32(1H，d，J＝7.30Hz，ArH)，7.14(1H，d，J＝7.75Hz，ArH)，4.85(1H，s，CH)，3.95(2H，s，CH2)，3.75(2H，t，J＝7.15Hz，CH 2CH3)，3.61(2H，t，J＝7.20Hz，CH 2CH3)，2.36(3H，s，CH3)，1.24(6H，t，J＝5.65Hz，2×CH3)。
2-(溴甲基)-5-氟-7-甲基苯并呋喃(21)
将搅拌的20(350mg，1.30mmol)的醋酸(10mL)溶液回流24小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物(300mg)溶解在THF(5mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(78mg，2.02mmol)。在0℃下将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。真空蒸发除去溶剂。将粗残留物(260mg)溶解在甲苯(20ml.)中并将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(135μL，1.44mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生21(200mg，36％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.03(1H1 d，J＝7.50Hz，H-4)，6.88(1H，t，J＝9.80，H-5)，6.75(1H，s，H-3)，4.69(2H，s，2-CH2)，2.54(3H1 S1 CH3)。
7-((5，7-二氟苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(22)VG017-05
在0℃下，将乙醇钠(8.9mg，0.13mmol)加入至DMF(3mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(25.4mg，0.14mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入21(30mg，0.12mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的22(11mg，26％)。m/z＝33.20(M+H)。
7-((5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(27)VG027-05
试剂和条件：(i)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(ii)CH3CO2H，120℃，24小时；(iii)NaBH4，THF，EtOH，室温；(iv)PBr3，吡啶，甲苯，室温；(v)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-5-甲氧基苯甲醛(23)
向搅拌的包含2-羟基-5-甲氧基苯甲醛(2.0g，13.16mmol)和K2CO3(2.18g，15.79mmol)的DMF(20mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(2.43mL，15.79mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过快速色谱纯化。使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱产物以产生油状物形式的目标化合物23(1.10g，31％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.49(1H，s，CHO)，7.33(1H，d，J＝3.30Hz，ArH)，7.12(1H，dd，J＝5.75和3.30Hz，ArH)，6.97(1H，d，J＝9.05Hz)，4.87(1H，t，J＝5.25Hz，CH)，4.09(2H，d，J＝5.25Hz，CH2)，3.81-3.78(2H，m，CH 2CH3)，3.67-3.64(2H，m，CH 2CH3)，1.26(6H，t，J＝7.05Hz，2×CH3)。
5-甲氧基苯并呋喃-2-甲醛(24)
将搅拌的23(1.0g，3.74mmol)的醋酸(10mL)溶液回流16小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的24(160mg，24％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：9.80(1H，s，CHO)，7.49-7.45(2H，m，ArH)，7.12-7.09(2H，m，ArH)，3.85(3H，s，OCH3)。
(5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲醇(25)
将化合物24(3.5g，19.9mmol)溶解在EtOH(20mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(957mg，25.87mmol)。在0℃下，将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的25(3.0g，85％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.36(1H，d，J＝8.90Hz，H-7)，7.02(1H，d，J＝2.6，H-4)，6.90(1H，dd，J＝6.30和2.60，H-6)，6.61(1H，s，H-3)，4.76(2H，s，2-CH2)，3.86(3H，s，OCH3)，2.16(1H，bs，OH)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ：113.07(C-7)，111.69(C-6)，104.34(C-4)，103.60(C-3)，58.24(CH2)，55.92(OCH3)。
2-(溴甲基)-5-甲氧基苯并呋喃(26)
将化合物25(40mg，0.22mmol)溶解在甲苯(5ml)中并将溶液冷却至0℃。在10分钟时间内滴加PBr3(21μL，0.22mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的26(40mg，74％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.39(1H，d，J＝8.90Hz，H-7)，7.01(1H，d，J＝2.55，H-4)，6.94(1H，dd，J＝6.35和2.60，H-6)，6.72(1H，s，H-3)，4.61(2H，s，2-CH2)，3.86(3H，s，OCH3)。
7-((5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(27)VG027-05
在0℃下，将乙醇钠(12mg，0.18mmol)加入至DMF(5mL)，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(32mg，0.17mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入26(40mg，0.17mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的27(17mg，30％)，m/z＝337.04(M+H)，673.13(2M+H)。
7-((7-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(31)VG029-05
试剂和条件：(i)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(ii)CH3CO2H，120℃，24小时；(iii)NaBH4，THF，EtOH，室温；(iv)PBr3，吡啶，甲苯，室温；(v)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-3-甲氧基苯甲醛(28)
向搅拌的包含2-羟基-3-甲氧基苯甲醛(4.0g，26.3mmol)和K2CO3(4.36g，31.60mmol)的DMF(15mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(4.86mL，31.60mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生28(2.60g，36％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.53(1H，s，CHO)，7.42(1H，m，ArH)，7.14-7.12(2H，m，ArH)，4.83(1H，t，J＝5.30Hz，CH)，4.21(2H，d，J＝5.35Hz，CH2)，3.90(3H，s，OCH3)，3.74-3.71(2H，m，CH 2CH3)，3.60-3.57(2H，m，CH 2CH3)，1.22(6H，t，J＝7.05Hz，2×CH3)。
7-甲氧基苯并呋喃-2-甲醛(29)
将搅拌的28(2.0g，7.46mmol)的醋酸(10mL)溶液回流24小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的29(450mg，34％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：9.89(1H，s，CHO)，7.55(1H，s，ArH)，7.30(1H，d，J＝6.95Hz，ArH)，7.24(1H，t，J＝7.85，ArH)，6.97(1H，d，J＝6.90Hz)，4.02(3H，s，OCH3)。
2-(溴甲基)-7-甲氧基苯并呋喃(30)
将化合物29(450mg，2.56mmol)溶解在EtOH(10mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(104mg，2.81mmol)。在0℃下将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。真空蒸发除去溶剂。将产生的粗醇残留物溶解在甲苯(5mL)中并将溶液冷却至0℃。在10分钟时间内滴加PBr3(240μL，2.56mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的30(150mg，24％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.19-7.17(2H，m，ArH)，6.85(1H，d，J＝5.60，ArH)，6.78(1H，s，ArH)，4.62(2H，s，2-CH2)，4.04(3H，s，OCH3)。
7-((7-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(31)VG029-05
在0℃下，将乙醇钠(12mg，0.18mmol)加入至DMF(5mL)中，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(32mg，0.17mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入30(40mg，0.17mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的31(14mg，25％)，m/z 337.04(M+H)，673.13(2M+H)。
7-((5-溴苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(32)VG035-04
Figure BPA00001482463600501
试剂和条件：(i))乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
7-((5-溴苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(VG035-04)
在0℃下，将乙醇钠(76mg，1.10mmol)加入至DMF(10ml.)中，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(215mg，1.22mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入5-溴-2-(氯甲基)苯并呋喃(250mg，1.02mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的32(120mg，31％)，m/z 386(M+H)。H1 NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝7.91(1H，d，J＝2.0Hz，ArH)，7.71(1H，d，J＝8.80Hz，ArH)，7.61(1H，d，J＝8.75，ArH)，7.49(1H，dd，J＝6.70和2.05Hz，ArH)，7.20(1H，d，J＝2.45Hz，ArH)，7.13(1H，s，ArH)，7.09(1H，dd，J＝6.30和2.50，ArH)，6.25(1H，s，CH)，5.43(2H，s，CH2)，2.41(3H，s，CH3)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ：127.55(ArCH)，126.59(ArCH)，124.04(ArCH)，113.32(ArCH)，112.56(ArCH)，111.44(ArCH)，106.87(ArCH)，101.66(ArCH)，62.40(CH2)，16.11(CH3)。
7-((5-氯苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(36)VG028-05
Figure BPA00001482463600511
试剂和条件：(i)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(ii)CH3CO2H，120℃，24小时；(iii)NaBH4，THF，EtOH，室温；(iv)PBr3，吡啶，甲苯，室温；(v)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温
5-氯-2-(2，2-二乙氧基乙氧基)苯甲醛(33)
向搅拌的5-氯-2-羟基苯甲醛(5.0g，32.1mmol)和K2CO3(4.87g，35.3mmol)的DMF(20mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(5.43mL，35.3mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过快速色谱纯化。使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱产物以产生油状物形式的33(4.10g，38％)。1HNMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.42(1H，s，CHO)，7.76(1H，d，J＝2.8Hz，ArH)，7.46(1H，dd，J＝6.15和2.75Hz，ArH)，6.96(1H，d，J＝8.90Hz，ArH)，4.87(1H，t，J＝5.25Hz，CH)，4.10(2H，d，J＝5.25Hz，CH2)，3.80-3.77(2H，m，CH 2CH3)，3.67-3.62(2H，m，CH 2CH3)，1.24(6H，t，J＝7.05Hz，2×CH3)。
5-氯苯并呋喃-2-甲醛(34)
将搅拌的33(4.10g，15.07mmol)的醋酸(20mL)溶液回流24小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的34(550mg，20％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：9.91(1H，s，CHO)，7.76(1H，d，J＝1.85Hz，ArH)，7.57(1H，d，J＝8.90Hz，ArH)，7.53(1H，s，ArH)，7.50(1H，dd，J＝8.90和2.10Hz，ArH)。
2-(溴甲基)-5-氯苯并呋喃(35)
将化合物34(160mg，0.89mmol)溶解在EtOH(5mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(36mg，0.98mmol)。在0℃下，将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。真空蒸发除去溶剂。将产生的粗醇残留物溶解在甲苯(5mL)中，并将溶液冷却至0℃。在10分钟时间内滴加PBr3(92μL，0.98mmol)。然后，将混合物升至室温下并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的35(128mg，57％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：7.48(1H，d，J＝2.05Hz，ArH)，7.37(1H，d，J＝8.70，ArH)，7.25(1H，dd，J＝8.80和2.05Hz ArH)，6.68(1H，s，ArH)，4.55(2H，s，2-CH2)。
7-((5-氯苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(36)VG028-05
在0℃下，将乙醇钠(60mg，0.24mmol)加入至DMF(5mL)中，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(47mg，0.27mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-(溴甲基)-5-甲氧基苯并呋喃(40mg，0.17mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的目标化合物(2.7mg，3％)。m/z 341.10(M+H)。
7-((5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(42)VG035-05
Figure BPA00001482463600531
试剂和条件：(i)Br2，CH3CO2H；(ii)(a)吗啉，THF，-50℃，15分钟；(b)n-BuLi，-75℃，35分钟；(c)PhNO2，-75℃，4小时，H3O+，15分钟；(iii)BrCH2CH(OEt)2，DMF，140℃；(iv)CH3CO2H，120℃，24小时；(v)NaBH4，THF，EtOH，室温
2-溴-3，5-二甲氧基苯甲醛(37)
将3，5-二甲氧基苯甲醛(12.6g，76mmol)溶解在醋酸(350mL)中。将产生的无色溶液冷却至0℃。在1小时的时间内滴加溴(3.9mL)的醋酸(50mL)溶液。一旦完成添加就移除冰浴并在室温下将产生的浅绿色溶液搅拌过夜。将冷水加入至溶液。通过真空过滤收集产生的白色固体并用水洗涤。然后，将固体再溶解在EtOAc中并在硅胶上吸附。通过使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的37(12.5g，66％)，m/z＝344.98(M+H)。1H NMR(500MHz1CDCl3)：δ：10.43(1H，s，CHO)，7.06(1H，s，ArH)，6.73(1H，s，ArH)，3.93(3H，s，CH3O)，3.86(3H，s，CH3O)。13C NMR(500MHz，CDCl3)：δ：192.09(CHO)，159.92(C-5)，157.02(C-3)，134.67(C-1)，109.12(C-2)，105.83，103.37(C-4和C-6)，56.60(OMe)，55.82(OMe)。
2-羟基-3，5-二甲氧基苯甲醛(38)
将吗啉(2.05g，24mmol)和THF(40mL)放置在装备有搅拌棒、隔膜盖、滴液漏斗、温度计和氩气进气口的干燥的三颈、圆底烧瓶中。在干冰丙酮浴中将烧瓶冷却至-50℃并同时加入n-BuLi的己烷(1.6M，15mL，24mmol)溶液。10分钟之后，在4分钟的时间内，通过注射器滴加2-溴-3，5-二甲氧基苯甲醛37(4.9g，20mmol)的THF(30mL)，并在20分钟时间内将混合物冷却至约-75℃。然后，在45分钟时间内滴加n-BuLi的己烷(1.6M，20mL，32mmol)，并将温度保持在-75℃。完成n-BuLi的添加之后，将溶液搅拌35分钟。从滴液漏斗中加入硝基苯酚(6.90g，46mmol)的10mL的THF溶液，并保持温度在-75℃。在-75℃下，将产生的黑色混合物搅拌4小时，然后允许升温至室温。使用6N HCl将其酸化至pH＝1并搅拌15分钟。使用盐水(100mL)稀释之后，真空去除THF。使用乙醚(4×40mL)萃取水溶液。使用2NNaOH(3×40mL)萃取混合的有机层。使用乙醚(3×20mL)洗涤混合的NaOH萃取物，然后使用浓HCl酸化至pH＝1。使用CH2Cl2(3×20mL)萃取产生的混合物，并使用盐水洗涤混合的有机萃取物，干燥(MgSO4)并在硅胶上吸附。通过使用EtOAc/己烷(1∶2)洗脱的快速色谱纯化产物以产生黄色固体形式的38(2.0g，55％)。m/z＝183.06(M+H)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：10.71(1H，s，OH)，9.91(1H，s，CHO)，6.77(1H，d，J4，6＝2.8Hz，H-6)，6.61(1H，d，J4，6＝2.8Hz，H-4)，3.92(3H，s，OMe)，3.84(3H，s，OMe)。13C NMR CDEPT135(500MHz，CDCl3)：δ：196.11(CHO)，107.93(C-6)，103.90(C-4)，56.29(OMe)，55.83(OMe)。
2-(2，2-二乙氧基乙氧基)-3，5-二甲氧基苯甲醛(39)
向搅拌的包含38(1.1g，6.0mmol)和K2CO3(LO g，7.2mmol)的DMF(100mL)的悬浮液滴加溴代乙醛缩二乙醇(0.93mL，6.0mmol)。将混合物回流4小时。冷却之后，过滤除去沉淀物并真空蒸发溶剂。将粗残留物在硅胶上吸附并通过快速色谱纯化。使用己烷/EtOAc(4∶1)洗脱产物以产生油状物形式的39(1.2g，67％)。1H NMR(500MHz，CDCI3)：δ：10.50(1H，s，CHO)，6.88(1H，d，J4，6＝2.9Hz，H-6)，6.74(1H，d，J4，6＝2.9Hz，H-4)，4.83(1H，t，J4，6＝5.3Hz，CH)，4.14(2H，d，J4，6＝5.3Hz，CH2)，3.88(3H，s，OMe)，3.83(3H，s，OMe)，3.77-3.71)(2H，m，CH 2CH3)，3.63-3.58(2H，m，CH 2CH3)，1.24(6H，t，J＝7.1Hz，2×CH3)。
5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-甲醛(40)
将搅拌的39(1.2g，4.0mmol)的醋酸(35mL)溶液回流16小时。冷却之后，将溶液蒸发至干燥。将粗产物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的40(230mg，28％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：9.89(1H，s，CHO)，7.50(1H，s，H-3)，6.69(1H，d，J4，6＝2.2Hz，H-6)，6.64(1H，d，J4，6＝2.2Hz，H-4)，4.01(3H，s，OMe)，3.87(3H，s，OMe)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ：179.91(CHO)，153.37(C-2)，116.10(C-3)，101.80(C-6)，94.90(C-4)，56.20(OMe)，55.88(OMe)。
(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲醇(41)
将化合物39(460mg，2.23mmol)溶解在THF(5mL)和EtOH(1mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(102mg，2.68mmol)。在0℃下，将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。将残留物在硅胶上吸附并通过使用己烷/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的41(388mg，82％)，m/z＝209.08(M+H)。1H NMR(500MHz，CDCl3)：δ：6.62(1H，s，H-3)，6.60(1H，s，H-6)，6.46(1H，s，H-4)，4.76(2H，s，2-CH2)，3.99(3H，s，OMe)，3.85(3H，s，OMe)。13C NMR(500MHz，CDCl3)：δ：157.23(C-5)，156.72(C-1)，145.36(C-7)，139.50(C-1a)，129.38(C-4a)，104.62(C-3)，96.96(C-6)，94.58(C-4)，57.98(2-CH2)，55.95(OMe)，55.83(OMe)。
7-((5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(42)VG035-05
将化合物41(130mg，0.63mmol)溶解在甲苯(5mL)中并将溶液冷却至0℃。在10分钟时间内滴加PBr3(64μL，0.69mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将粗残留物用于下一步骤。在0℃下，将乙醇钠(80mg，0.24mmol)加入至DMF(5mL)，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(47mg，0.27mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-(溴甲基)-5-甲氧基苯并呋喃(40mg，0.17mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的42(2.7mg，3％)，m/z＝367.05(M+H)，733.15(2M+H)。
4-甲基-7-(萘-1-基甲氧基)-2H-色满-2-酮(43)TLE-M1-SU001A
试剂和条件：(i)PBr3，吡啶，甲苯；(ii)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
将1-萘甲醇(2.0g，12.7mmol)溶解在甲苯(30mL)中并加入吡啶(1.02mL，12.7mmol)。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(1.19mL，12.7mmol)。然后，将反应混合物升至室温下并搅拌1小时。使用K2CO3溶液洗涤混合物并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层并干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以产生无色油状物形式的1-(溴甲基)萘(1.5g，53％)。将该中间体用于下列反应。
在0℃下，将乙醇钠(169mg，2.49mmol)加入至DMF(5mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(438mg，2.49mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入1-(溴甲基)萘(500mg，2.26mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的43(200mg，28％)。Mpt＝181-183℃。H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝8.10(1H1 d，ArH)，8.00-7.99(2H，m，Ar)，7.97-7.71(2H，m，ArH)，7.70-7.53(3H，m，ArH)，7.24(1H，s，ArH)，7.09(1H，d，CH)，6.23(1H，s，CH)，5.68(2H，s，CH2)，2.40(3H，s，CH3)。
4-甲基-7-(萘-2-基甲氧基)-2H-色满-2-酮(44)VG040-03
试剂和条件：(i)PBr3，吡啶，甲苯；(ii)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
将萘-2-基甲醇(2.0g，12.7mmol)溶解在甲苯(30mL)中并加入吡啶(1.02mL，12.7mmol)。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(1.19mL，12.7mmol)。然后，将混合物升至室温并搅拌1小时。使用K2CO3溶液洗涤混合物并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层并干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以产生粗1-(溴甲基)萘。将该中间体用于下列反应。在0℃下，将乙醇钠(169mg，2.49mmol)加入至DMF(5mL)，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(438mg，2.49mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入1-(溴甲基)萘(500mg，2.26mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的44(1.44g，36％)，m/z＝317.12(M+H)，633.24(2M+H)。H1 NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝7.93-7.87(4H，m，ArH)，7.58-7.52(4H，m，Ar)，6.97(1H，t，J＝2.43Hz，ArH)，6.16(1H，s，ArH)，5.32(2H，s，CH2)，2.41(3H，s，CH3)。
7-(二苯甲基氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(45)TLE-M1-SU004A
Figure BPA00001482463600581
试剂和条件：(i)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
在0℃下，将乙醇钠(165mg，2.43mmol)加入至DMF并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(428mg，2.43mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入二苯甲基溴(500mg，2.02mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×30mL)、水(2×30mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的45(200mg，29％)。Mpt＝146-148℃。H1 NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝7.63(1H，d，ArH)，7.53(4H，d，ArH)，7.38(4H，t，ArH)，7.29(2H，t，ArH)，7.09(2H，d，ArH)，7.04(1H，d，ArH)，6.75(1H，s，ArH)，6.18(1H，s，CH)，2.37(3H，s，CH3)。13C NMR(500MHz，DMSO-d6，DEPT135)：δ＝160.2，154.4，153.2，140.8，129.90，128.0，126.8，113.7，111.4，111.2，102.9，80.2，18.2。
4-甲基-7-(1-(萘-2-基)乙氧基)-2H-色满-2-酮(46)VG039-03
Figure BPA00001482463600582
试剂和条件：(i)PBr3，吡啶，甲苯；(ii)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
将1-(萘-2-基)乙醇(2.0g，11.6mmol)溶解在甲苯(30mL)中。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(1.09mL，11.6mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。使用K2CO3溶液洗涤混合物并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层并干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以产生粗2-(1-溴乙基)萘。将该中间体用于下列步骤。
在0℃下，将乙醇钠(63.4mg，0.93mmol)加入至DMF(5mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(147mg，0.84mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入2-(1-溴乙基)萘(200mg，0.85mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50ml.)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的46(60mg，21％)，m/z＝331.15(M+H)，661.29(2M+H)。H1 NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝7.97(1H，s，ArH)，7.93-7.86(3H，m，ArH)，7.60-7.50(4H，m，Ar)，6.99(1H，q，J＝6.45和2.35Hz，ArH)，6.96(1H，d，J＝2.40Hz，ArH)，6.13(1H，s，ArH)，5.84(1H，q，J＝6.35Hz，CH)，2.26(3H，s，CH3)，1.67(3H，d，J＝6.35Hz，CH3)。
7-(蒽-9-基甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(48)SU06-02
Figure BPA00001482463600591
试剂和条件：(i)PBr3，吡啶，甲苯；(ii)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF9-(溴甲基)蒽(47)
在0℃下，向搅拌的9-蒽甲醇(2.0g，9.6mmol)的甲苯悬浮液(100ml)加入PBr3(1.2mL，12.51mmol)并在0℃下将悬浮液搅拌1小时。然后，将反应混合物升至室温并使其搅拌另外1小时。混合物变为黄色溶液。加入K2CO3(10mL)以淬灭反应。真空蒸发除去甲苯。在EtOAc中处理残留物并使用饱和的K2CO3水溶液、水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化粗残留物以产生黄色固体形式的47(1.4g，54％)。H1NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝8.45(1H，s，Ar-10H)，8.27(2H，d，Ar-1，8H)，8.00(2H，d，Ar-4，6H)，7.62(2H，d，Ar-2，7H)，7.48(2H，d，Ar-3，H)，5.50(2H，s，CH2)。
7-(蒽-9-基甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(48)SU06-02
在0℃下，将乙醇钠(151mg，2.21mmol)加入至DMF(5mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(390mg，2.21mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入47(500mg，1.85mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水、水和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生黄色固体形式的48(200mg，30％)。Mpt＝216-218℃。H1 NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝8.10(1H，d，ArH)，8.00-7.99(2H，m，Ar)，7.97-7.71(2H，m，ArH)，7.70-7.53(3H，m，ArH)，7.24(1H，s，ArH)，7.09(1H，d，CH)，6.23(1H，s，CH)，5.68(2H，s，CH2)，2.40(3H，s，CH3)。13CNMR(500MHz，DMSO-d6，DEPT135)：δ＝160.8(qC)，152.0(2×qC)，129.0(2×CH)，128.9(2×CH)，126.8，(2×CH)，126.8(Ar CH)，126.5(Ar CH)，125.3(Ar CH)，124.1(Ar CH)，112.9(香豆素3-CH)，111.2(香豆素6-CH)，101.7(香豆素8-CH)，62.9(CH2)，18.2(CH3)。
7-(双(4-甲氧基苯基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(49)SU010-02
Figure BPA00001482463600611
试剂和条件：(i)PBr3，吡啶，甲苯；(ii)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
将双(4-甲氧基苯基)甲醇(2.0g，8.2mmol)溶解在甲苯(60mL)中并加入吡啶(661μL，8.2mmol))。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(768μL，8.2mmol)。将反应混合物升温至室温并搅拌1小时。使用K2CO3溶液洗涤混合物并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层并干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以产生无色油状物形式的粗产物4，4’-(溴亚甲基)双(茴香醚)(780mg，31％)。将其用于下一反应步骤而不需进一步纯化。在0℃下，将乙醇钠(133mg，1.96mmol)加入至DMF(5mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(345mg，1.96mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入4，4’-(溴亚甲基)双(茴香醚(500mg，1.63mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水、水和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生白色固体形式的49(100mg，15％)。Mpt＝142-145℃。m/z＝403(M+H)。H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝7.60(1H，d，ArH)，7.45(4H，d，ArH)，7.04(1H，d，ArH)，6.94(5H，d，ArH)，6.56(1H，s ArH)，6.10(1H，s，qCH)，3.78(6H，s，2×CH3O)，2.39(3H，s，CH3)。13C NMR(500MHz，丙酮-d6，DEPT135)：δ＝206.3(qC)，134.1(2×qC)，129.3(2×CH)，129.2(2×CH)，129.0，(2×CH)，126.9(Ar CH)，114.4(Ar CH)，114.7(Ar CH)，115.1(Ar CH)，112.5(Ar CH)，104.0(ArCH)，81.7(CH)，55.6(2×CH3)，18.2(CH3)。
7-((1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(50)VG033-03
Figure BPA00001482463600621
试剂和条件：(i)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
在0℃下，将乙醇钠(82mg，1.20mmol)加入至DMF(10mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(253mg，1.44mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-(氯甲基)-1H-苯并[d]咪唑(200mg，1.20mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用正己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的50(200mg，54％)，m/z＝307.11(M+H)，613.22(2M+H)。H1 NMR(500MHz，DMSOd6)：δ＝12.75(1H，brs，NH)，7.74(1H，d，J＝8.85Hz，ArH)，7.60-7.59(2H，m，ArH)，7.23-7.12(4H，m，ArH)，6.25(1H，s，ArH)，5.48(2H，s，CH2)，2.40(3H，s，CH3)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ：206.52(qC)，160.80，160.03，154.52，153.33，149.27，126.57，126.28，122.04，119.42，113.64，112.50，111.47，101.86，101.77，64.23，30.67，18.10。
7-(苯并[d]噻唑-2-基甲氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(51)VG014-04
Figure BPA00001482463600622
试剂和条件：(i)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
在0℃下，将乙醇钠(30mg，0.44mmol)加入至DMF(10mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(77mg，0.44mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-(氯甲基)-1H-苯并[d]咪唑(100mg，0.44mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的51(25mg，18％)，m/z＝324.06(M+H)，647.12(2M+H)。
4-甲基-7-(4-(噻吩-2-基)苄氧基)-2H-色满-2-酮(52)VG015-04
Figure BPA00001482463600631
试剂和条件：(i)乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF
在0℃下，将乙醇钠(27mg，0.40mmol)加入至DMF(10mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(70mg，0.40mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-(氯甲基)-1H-苯并[d]咪唑(100mg，0.40mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的52(30mg，18％)，m/z＝349.09(M+H)，697.16(2M+H)。
6-(二苯甲基硫基)-9H-嘌呤(53)(VG015-02)
Figure BPA00001482463600632
试剂和条件：(i)9H-嘌呤-6-硫醇，K2CO3，DMF
将6-巯嘌呤(151mg，0.88mmol)溶解在DMF(5mL)中。加入K2CO3(122mg，1.2mmol)并向产生的悬浮液加入二苯甲基溴(200mg，0.8mmol)。在室温下，将产生的反应混合物搅拌4小时。将混合物倾倒在冰上并通过过滤分离产生的沉淀物，使用乙醚洗涤并真空干燥以产生白色固体形式的53(35mg，14％)，m/z＝319(M+H)。H1 NMR(500MHz，丙酮)：δ＝8.46(1H，s，CH)，8.2(1H，s，CH)，7.4(4H，m，CH，J＝3)，7.2(4H，m，CH，J＝3.83)，7.1(2H，m，CH，J＝2.12)，6.7(1H，s，CH)。
3.氨基甲酸酯连接的核苷类似物前药
Figure BPA00001482463600641
1-(3，4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸萘-1-基甲酯(55)SU001-03
Figure BPA00001482463600651
试剂和条件：(i)20％光气的甲苯，THF，2小时；(ii)阿糖胞苷.HCl，KHCO3，DMA，16小时
将萘-1-基甲醇(3.0g，19.0mmol)一批加入至COCl2(13.3mL，20％的COCl2的甲苯溶液形式)的THF(30mL)。在室温下，将反应搅拌2小时。减压下去除过量的COCl2和THF。将固体残留物溶解在热的己烷中并过滤。然后，缓慢真空蒸发除去己烷以获得白色固体形式的氯甲酸酯中间体54。将其立刻用于下列步骤。将54(330mg，1.5mmol)和KHCO3(252mg，2.52mmol)加入至阿糖胞苷.HCl(243mg，0.87mmol)的二甲基乙酰胺(5mL)溶液，并在室温下将混合物搅拌16小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用梯度为2.5％-12％的MeOH的DCM洗脱的快速色谱纯化产物以获得白色固体形式的55(38mg，10％)，m/z＝428.15(M+H)。
1-(3，3-二氟-4-羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸萘-1-基甲酯(56)SU0023-02
Figure BPA00001482463600652
试剂和条件：(i)20％COCl2的甲苯，THF，2小时；(ii)吉西他滨.HCl，KHCO3，DMA，100℃，16小时
将萘-1-基甲醇(1.0g，6.3mmol)一批加入至COCl2(4.4mL，20％COCl2的甲苯溶液形式)的THF(20mL)中。在室温下将反应搅拌2小时。减压去除过量的COCl2和THF。将固体残留物溶解在热的己烷中并过滤。然后，缓慢真空蒸发除去己烷溶剂以获得白色固体形式的氯甲酸酯中间体54。立即将其用于下列步骤。将吉西他滨.HCl(200mg，0.67mmol)溶解在H2O(2mL)中。向其加入预溶解在乙酸乙酯(5mL)中的KHCO3(67mg，0.67mmol)和54(147mg，0.67mmol)。在100℃下将混合物搅拌16小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用3％MeOH的乙酸乙酯洗脱的快速色谱纯化产物以获得油状物形式的56(15mg，5％)。m/z＝448.13(M+H)。
1-(3，3-二氟-4-羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸苄酯(57)SU0044-2a/02
Figure BPA00001482463600661
试剂和条件：(i)吉西他滨.HCl，KHCO3，H2O，EtOAc，80℃，16小时
将吉西他滨.HCl(200mg，0.67mmol)溶解在H2O(2mL)中。向其加入预溶解在乙酸乙酯(5mL)中的KHCO3(67mg，0.67mmol)和氯甲酸苄酯(95μL，0.67mmol)。在80℃下将混合物搅拌16小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用3％MeOH的乙酸乙酯洗脱的快速色谱纯化产物以产生油状物形式的57(40mg，15％)。m/z＝398.12(M+H)。
1-(3，4-二羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸苄酯(58)SU0044-3a/02
Figure BPA00001482463600662
试剂和条件：(i)阿糖胞苷.HCl，KHCO3，H2O，EtOAc，80℃，16小时
将阿糖胞苷.HCl(200mg，0.72mmol)溶解在H2O(2mL)中。向其加入预溶解在乙酸乙酯(5mL)中的KHCO3(72mg，0.72mmol)和氯甲酸苄酯(107μL，0.72mmol)。在80℃下将混合物搅拌16小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用3％MeOH的乙酸乙酯洗脱的快速色谱纯化产物以产生油状物形式的58(40mg，15％)。m/z＝378.13(M+H)。
4-硝基苯基碳酸苯并呋喃-2-基甲酯(60)和4-硝基苯基碳酸(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲酯(61)
Figure BPA00001482463600671
试剂和条件：(i)氯甲酸4-硝基苯酯，TEA，THF，室温，2小时
4-硝基苯基碳酸苯并呋喃-2-基甲酯(60)
将苯并呋喃-2-基甲醇59(300mg，2.03mmol)的THF(5mL)溶液冷却至0℃。滴加TEA(280μL，2.03mmol)，随后分批加入氯甲酸对硝基苯酯(282mg，3.05mmol)。在室温下，将产生的溶液搅拌2小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化粗残留物以产生白色固体形式的60(350mg，54％)。H1 NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝8.31(2H，m，ArH)，7.62(1H，d，J＝7.70Hz，ArH)，7.54(1H，d，J＝7.70Hz，ArH)，7.43-7.27(3H，m，ArH)，7.29(1H，t，J＝7.72Hz，ArH)，6.93(1H，s，ArH)，5.43(2H，s，CH2)。13C NMR CDEPT 135，(500MHz，CDCl3)：δ＝125.47，125.37，123.23，121.80，121.66，111.60，108.53，62.95。
4-硝基苯基碳酸(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲酯(61)
将(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲醇6(100mg，0.48mmol)的THF(3mL)溶液冷却至0℃。滴加TEA(69μL，0.48mmol)，随后分批加入氯甲酸对硝基苯酯(100mg，0.72mmol)。在室温下，将产生的溶液搅拌2小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化粗残留物以产生白色固体形式的61(120mg，67％)。H1NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝8.29(2H，d，J＝9.0Hz，ArH)，7.40(2H，d，J＝9.0Hz，ArH)，6.82(1H，s，ArH)，6.63(1H，s，ArH)，6.52(1H，s，ArH)，5.39(2H，s，CH2)，4.00(3H，s，OCH3)，3.85(3H，s，0CH3)。
1-(3，3-二氟-4-羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(65)SU050-03和1-(3，3-二氟-4-羟基-5-(羟基甲基)-四氢呋喃-2-基)-2-氧基-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲酯(66)SU048-04
Figure BPA00001482463600681
试剂和条件：(i)1，1，3，3，-四异丙基二硅氧烷，吡啶，120℃，1小时；(ii)60或61，THF，100℃，4天
4-氨基-1-(9，9-二氟-2，2，4，4-四异丙基四氢-6H-氟[3，2-f][1，3，5，2，4]三氧杂二硅氧烷-8-基)嘧啶-2(1H)-酮(62)
将吉西他滨.HCl(1.0g，3.3mmol)在吡啶(10mL)中搅拌10分钟(2×5mL)。蒸发除去吡啶。加入吡啶(10mL)并滴加1，1，3，3，-四异丙基二硅氧烷(1.17mL，3.63mmol)。在100℃下将产生的混合物搅拌16小时。加入另外部分的1，1，3，3，-四异丙基二硅氧烷(1mL)并在120℃下将混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温并真空蒸发除去溶剂。将产生的粗固体从EtOAc/乙醚(1∶1)中重结晶以产生白色固体形式的62(600mg，36％)，m/z＝506.23(M+H)。
1-(9，9-二氟-2，2，4，4-四异丙基四氢-6H-氟[3，2-f][1，3，5，2，4]三氧杂二硅氧烷-8-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(63)
向搅拌的62(300mg，0.59mmol)的THF(5mL)溶液加入苯并呋喃-2-基甲酯4-硝基苯基碳酸酯(223mg，0.71mmol)。在100℃下，将产生的溶液搅拌4天。真空蒸发除去溶剂并通过制备HPLC纯化以产生油状物形式的63(350mg，87％)。m/z＝680.0(M+H)，1359.49(2M+H)。
1-(3，3-二氟-4-羟基-5-(羟基甲基)四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(65)SU050-03
将化合物63(200mg，0.29mmol)溶解在THF(1.5mL)中。向其加入四-正丁基氟化铵并在室温下将产生的溶液搅拌15分钟。真空蒸发除去溶剂。通过使用5％MeOH的EtOAc洗脱的快速色谱纯化以产生油状物形式的65(30mg，23％)。m/z＝438.14(M+H)，874.24(2M+H)。
1-(3，3-二氟-4-羟基-5-(羟基甲基)-四氢呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢嘧啶-4-基氨基甲酸(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲酯(66)SU048-04
向搅拌的62(108mg，0.21mmol)的THF(5mL)溶液加入61(100mg，0.27mmol)。在100℃下将产生的溶液搅拌4天。真空蒸发除去溶剂以产生油状物形式的64。将其用于下一步骤而不需进一步纯化。将化合物64(100mg，0.14mmol)溶解在THF(1.5mL)中。向其加入四正丁基氟化铵并在室温下将产生的溶液搅拌15分钟。真空蒸发除去溶剂。通过使用5％MeOH的EtOAc洗脱的快速色谱纯化产物以产生油状物形式的66(18mg，26％)。m/z＝498.14(M+H)，995.29(2M+H)。H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝9.60(1H，bs，NH)，8.34(1H，d，J＝7.62Hz，ArH)，7.26(1H，d，J＝9.00Hz，ArH)，6.92(1H，s，ArH)，6.71(1H.d，J＝2.20Hz，ArH)，6.56(1H，d，J＝2.20Hz，ArH)，6.26(1H，t，J＝7.56Hz，CH)，5.64(2H，s，CH2)，4.55-4.45(1H，m，CH)，4.05-4.02(2H，m，CH2)，3.97(3H，s，OCH3)，3.91-3.3.87(1H，m，CH)，3.82(3H，s，OCH3)，2.92(2H，bs，OH)。
4.氨基甲酸酯连接的氮和苯胺氮芥前药
Figure BPA00001482463600701
4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(VG042-04)
Figure BPA00001482463600702
试剂和条件：(i)二乙醇胺，DMF，140℃，3小时；(ii)叔丁基二甲基氯硅烷，咪唑，DMF，室温，48小时；(iii)a.10％Pd/C，EtOH，室温，16小时；b.三光气，TEA，THF，室温，1小时；c.59，THF，室温，16小时；d.TBAF，15分钟，室温；e.吡啶，甲烷磺酰氯
2，2’-(4-硝基苯基脲二基)二乙醇(67)
将二乙醇胺(2.70mL，2.5mmol)加入至1-氟-4-硝基苯(1.0g，7.09mmol)的DMF(30mL)。在140℃下，将产生的混合物搅拌3.5小时。将溶液冷却至室温并真空蒸发除去溶剂。将残留物溶解在EtOAc(30mL)中并使用水(3×10mL)和盐水(3×20mL)洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂并通过使用EtOAc洗脱的快速色谱纯化产物以产生黄色固体形式的67(400mg，25％)。H1 NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝8.06(2H，d，J＝9.50Hz，ArH)，6.87(2H，d，J＝9.50Hz，ArH)，4.27(2H，t，J＝5.35Hz1 2×OH)，3.83(4H，q，J＝5.55和5.45Hz，2×CH2)，3.74(4H，t，J＝5.62Hz，2×CH2)。
N，N-双(2-(叔丁基二甲基硅氧基)乙基)-4-硝基苯胺(68)
向冷却的67(400mg，1.77mmol)和咪唑(481mg，7.08mmol)的DMF(10mL)的溶液滴加叔丁基二甲基氯硅烷(2.72mg，3.54mmol)。使混合物达到室温并搅拌48小时。真空蒸发除去溶剂并通过使用10％EtOAc的乙醚洗脱的快速色谱纯化产物以产生黄色固体形式的68(200mg，25％)。H1 NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝8.06(2H，d，J＝9.45Hz，ArH)，6.65(2H，d，J＝9.45Hz，ArH)，3.80(4H，t，J＝5.80Hz，2×CH2)，3.62(4H，t，J＝5.80Hz，2×CH2)，0.85(18H，s，6×CH3)，-0.01(12H，s，4×CH3)。
4-(双(2-氯乙基)氨基)苯基氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(69)VG042-04
在10％的Pd/碳(20mg)的存在下使用氢气处理化合物68(200mg，0.44mmol)。搅拌16小时之后，通过硅藻土过滤混合物并真空蒸发除去溶剂以产生中间体氨基苯胺产物。然后，在三乙胺(260μL，0.70mmol)的THF(15mL)的存在下使其与三光气(195mg，0.70mmol)反应。在室温下搅拌1小时之后，过滤除去白色沉淀物并真空蒸发除去溶剂以产生异氰酸酯苯胺的粗残留物。将其直接用于下列步骤。将异氰酸酯中间体溶解在THF(10mL)中。将溶液冷却至0℃。加入苯并呋喃-2-基甲醇59(100mg，1.35mmol)并在室温下将产生的混合物搅拌16小时。在冰上冷却混合物并在5分钟时间内滴加TBAF(996μL，3.38mmol)。使产生的混合物升温至室温，然后搅拌20分钟。真空蒸发除去THF。将中间体溶解在吡啶(5mL)中并向其中加入甲烷磺酰氯(12.5μL，0.16mmol)。在室温下将混合物搅拌1小时。真空蒸发除去吡啶并通过使用己烷∶EtOAc(3∶1)洗脱的快速色谱纯化粗产物以产生白色固体形式的69(5mg，2％)，m/z＝408.07(M+H)，837.16(2M+H)。
双(2-氯乙基)氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(70)VG045-04
Figure BPA00001482463600721
试剂和条件：(i)双(2-氯乙胺).HCl，吡啶，室温，16小时。
将60(200mg，0.64mmol)的吡啶(3mL)溶液加入至双(2-氯乙胺).盐酸盐(227mg，1.28mmol)的吡啶(25mL)溶液中。在室温下将混合物搅拌16小时。加入DCM(10mL)并使用2％的柠檬酸溶液(2×50mL)、水(50mL)、盐水(50mL)洗涤混合物，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂并通过使用CH2Cl2∶己烷(2∶1)洗脱的快速色谱纯化产物以产生油状物形式的70(125mg，62％)。m/z＝338.05(M+Na)。H1NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝7.60(1H，d，J＝7.70Hz，ArH)，7.51(1H，d，J＝8.05Hz，ArH)，7.33(1H，t，J＝6.80Hz，ArH)，7.26(1H，t，J＝6.80Hz，ArH)，6.79(1H，s，ArH)，5.28(2H，s，CH2)，3.72-3.63(8H，m，4×CH2)。
5.醚连接的拓扑异构酶I抑制剂前药
Figure BPA00001482463600722
5，7-(二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲基-喜树碱(71)SU037-04
Figure BPA00001482463600731
试剂和条件：(i)a.PBr3，甲苯，室温，1小时；b.(i)乙醇钠，DMF，2小时，(ii)喜树碱，DMF，室温，2小时。
将化合物41(100mg，0.48mmol)溶解在甲苯(5mL)中并将溶液冷却至0℃。在10分钟时间内滴加PBr3(46μL，0.48mmol)。然后，将反应混合物升至室温并搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂。将粗残留物用于下一步骤中。在0℃下，将乙醇钠(15mg，0.22mmol)加入至DMF(5mL)，并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入喜树碱(81mg，0.22mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入来自前面步骤的粗残留物2-(溴甲基)-5，7-二甲氧基苯并呋喃(50mg，0.18mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并通过使用DCM∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的目标化合物(10mg，10％)。m/z＝555.19(M+H)。
6.醚连接的酪氨酸激酶抑制剂前药
N-(4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)喹唑啉-2-基)-4，6，7-三甲基喹唑啉-2-胺(72)VG048-04
Figure BPA00001482463600741
试剂和条件：(i)乙醇钠，2-(4，6-二甲基喹唑啉-2-基氨基)喹唑啉-4-醇，DMF，室温，0.5小时。
在0℃下将乙醇钠(3mg，0.05mmol)加入至DMF(2mL)并将悬浮液搅拌5分钟。缓慢加入2-(4，6-二甲基喹唑啉-2-基氨基)喹唑啉-4-醇(15mg，0.05mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物加入2-(溴甲基)苯并呋喃(16mg，0.08mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。真空蒸发除去DMF以产生粗的白色固体。通过使用冷的乙醚和EtOAc洗涤将其纯化以产生白色固体形式的72(3mg，11％)，m/z＝462.2(M+H)。
7-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-5-异丙基-2-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶(73)SU01-A-04
Figure BPA00001482463600742
试剂和条件：(i)乙醇钠，5-异丙基-2-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇，DMF，室温，1小时。
在0℃下，将乙醇钠(7.2mg，0.10mmol)加入至DMF(2mL)并将悬浮液搅拌5分钟。缓慢加入5-异丙基-2-甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇(20mg，0.10mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物加入2-(溴甲基)苯并呋喃(16mg，0.08mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。真空蒸发除去DMF以产生粗的白色固体。通过半制备HPLC将其纯化以产生白色固体形式的73(6.3mg，19％)，m/z＝323.13(M+H)，645.27(2M+H)。
7-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-2-甲基-5-((4-甲基嘧啶-2-基硫基)甲基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶(74)SU01-B-04
Figure BPA00001482463600751
试剂和条件：(i)乙醇钠，2-甲基-5-((4-甲基嘧啶-2-基硫代)甲基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇，DMF，室温，1小时。
在0℃下将乙醇钠(4.7mg，0.07mmol)加入至DMF(2mL)并将悬浮液搅拌5分钟。缓慢加入2-甲基-5-((4-甲基嘧啶-2-基硫基)甲基)-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇(20mg，0.07mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物加入10(16mg，0.08mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。真空蒸发除去DMF以产生粗的白色固体。通过半制备的HPLC将其纯化以产生白色固体形式的74(5.2mg，18％)，m/z＝419.09(M+H)，837.23(2M+H)。
7-(苯并呋喃-2-基甲氧基)-1-(2-氟苄基)-4-甲基-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]哒嗪(75)SU01-C-04
Figure BPA00001482463600761
试剂和条件：(i)乙醇钠，2-甲基-5-((4-甲基嘧啶-2-基硫基)甲基-[1，2，4]三唑并[1，5-a]嘧啶-7-醇，DMF，室温，1小时。
在0℃下将乙醇钠(5.2mg，0.08mmol)加入至DMF(2mL)并将悬浮液搅拌5分钟。缓慢加入1-(2-氟苄基)-4-甲基-1H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]哒嗪-7-醇(20mg，0.08mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物加入2-(溴甲基)苯并呋喃(16mg，0.08mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。真空蒸发除去DMF以产生粗的白色固体。通过半制备的HPLC将其纯化以产生白色固体形式的75(3mg，10％)，m/z＝390.07(M+H)，801.12(2M+Na)。
7.氨基甲酸酯连接的模型香豆素前药
Figure BPA00001482463600762
Figure BPA00001482463600771
7-异氰酸基-4-甲基香豆素(76)
试剂和条件：(i)20％光气的甲苯，二氧六环，100℃，17小时。
将装备有干冰冷凝器和磁力搅拌器的200-mL三颈烧瓶填满20％光气的甲苯溶液(2.0mL)和二氧六环(80mL)。向该混合物加入7-氨基-4-甲基-2H-色满-2-酮(2.00g，11.4mmol)。在100℃下，将混合物搅拌12小时。开始的黄色消失且白色固体沉淀析出。加入另外20％光气的甲苯溶液(7.0mL)并将混合物加热另外5小时，此时溶液变澄清。通过向溶液鼓入氮气泡去除过量的光气和痕量的HCl。将混浊的溶液过滤以去除未反应的7-氨基-4-甲基-2H-色满-2-酮并浓缩以产生白色固体形式的76(0.5g，25％)。H1 NMR(500MHz，CDCl3)：δ＝7.50(1H，d，J＝7.40Hz，ArH)，7.46(2H，s，ArH)，6.20(1H，s，ArH)，2.35(3H，s，CH3)：红外(CH2Cl2)2314(N＝C＝O)，1726和1615cm-1。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸萘-1-基甲酯(77)VG020-02
Figure BPA00001482463600781
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将萘-1-基甲醇(56mg，0.28mmol)和76(200mg，1.27mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/己烷/EtOAc(1∶1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的77(3mg，5％)，m/z＝360.14(M+H)，719.27(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(2-氯喹啉-3-基)甲酯(78)SU030-7-03
Figure BPA00001482463600782
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将(2-氯喹啉-3-基)甲醇(100mg，0.52mmol)和76(155mg，0.77mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的78(38mg，19％)，m/z＝395.08(M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸二苯甲酯(79)SU0021-02
Figure BPA00001482463600791
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将(2-氯喹啉-3-基)甲醇(119mg，0.65mmol)和76(70mg，0.35mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的79(50mg，37％)，m/z＝386.16(M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸二苯甲酯(80)SU0021-02
Figure BPA00001482463600792
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将(4-甲基-2-苯基嘧啶-5-基)甲醇(100mg，0.50mmol)和76(151mg，0.75mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的80(70mg，35％)，m/z＝402.15(M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲酯(81)VG032-03
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将(1H-苯并[d]咪唑-2-基)甲醇(200mg，1.35mmol)和76(272mg，1.35mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的81(80mg，17％)，m/z＝350.12(M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(2H-色满-3-基)甲酯(82)SU033-03
Figure BPA00001482463600802
试剂和条件：(i)NaBH4，EtOH，室温，1.5小时；(ii)76，THF，80℃，1小时。
将2H-色烯-3-甲醛(500mg，3.13mmol)溶解在EtOH(10mL)中。伴随剧烈搅拌，在0℃下分批加入NaBH4(119mg，3.13mmol)。在0℃下将悬浮液搅拌15分钟，然后在室温下搅拌1.5小时。真空蒸发除去溶剂以获得油状物形式的醇中间体。将其溶解在THF(5mL)中并加入76(155mg，0.77mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的82(80mg，8％)，m/z＝364.12(M+H)，727.23(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸萘-2-基甲酯(83)VG037-03
Figure BPA00001482463600811
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将萘-2-基甲醇(200mg，1.27mmol)和76(279mg，1.39mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的83(26mg，6％)，m/z＝360.13(M+H)，719.25(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸苯并呋喃-2-基甲酯(84)SU018-03
Figure BPA00001482463600812
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将苯并呋喃-2-基甲醇(300mg，2.03mmol)和76(407mg，2.03mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的84(130mg，18％)，m/z＝350.09(M+H)，699.17(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸苯并[d]噻唑-2-基甲酯(85)SU024-3-03
Figure BPA00001482463600821
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将苯并[d]噻唑-2-基甲醇(200mg，1.21mmol)和76(365mg，1.8mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的85(90mg，20％)，m/z＝367.02(M+H)，733.13(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸4-(呋喃-2-基)苄酯(86)SU024-3-03
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将(4-(呋喃-2-基)苯基)甲醇(100mg，0.57mmol)和76(139mg，0.69mmol)溶解在THF(10mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的目标化合物(20mg，9％)，m/z＝376.11(M+H)，751.22(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(5-甲基苯并[b]噻吩-2-基)甲酯(87)SU030-4-03
Figure BPA00001482463600831
试剂和条件：(i)76，THF，50℃，3小时。
将(5-甲基苯并[b]噻吩-2-基)甲醇(100mg，0.56mmol)和76(136mg，0.67mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在50℃下搅拌3小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的87(38mg，18％)，m/z＝380.09(M+H)，759.17(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲酯(88)VG032-05
Figure BPA00001482463600832
试剂和条件：(i)76，THF，室温，16小时。
将(5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲醇25(200mg，1.12mmol)和76(190mg，0.95mmol)溶解在THF(10mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在室温下搅拌16小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用己烷/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的88(20mg，5％)，m/z＝380.13(M+H)，759.26(2M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(5-溴苯并呋喃-2-基)甲酯(89)VG036-05
Figure BPA00001482463600841
试剂和条件：(i)76，THF，80℃，1小时。
将(5-溴苯并呋喃-2-基)甲醇(100mg，0.44mmol)和76(106mg，0.52mmol)溶解在THF(2mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌15分钟，然后在80℃下搅拌1小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的89(5.0mg，3％)，m/z＝429.10(M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲酯(90)VG041-05
Figure BPA00001482463600842
试剂和条件：(i)76，THF，室温，16小时。
将(5，7-二甲氧基苯并呋喃-2-基)甲醇5(50mg，0.24mmol)和7-异氰酸基-4-甲基香豆素(58mg，0.29mmol)溶解在THF(10mL)中。在室温下将产生的混合物搅拌16小时。真空蒸发除去THF。将残留物吸附在二氧化硅上并通过使用CH2Cl2/EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的90(5.0mg，3％)，m/z＝410.04(M+H)。
8.扩展的连接子：氧基苄醚、氨基甲酸酯苄醚、氨基甲酸氧基苄酯
Figure BPA00001482463600851
4-甲基-7-(4-萘-1-基甲氧基)苄氧基)-2H-色满-2-酮(91)TLE-M1-SU001B
Figure BPA00001482463600861
试剂和条件：(i)a.乙醇钠，4-羟基苯甲酸乙酯，DMF，室温，16小时；b.LiAIH4，THF，室温，3小时；c.PBr3，吡啶，甲苯，室温，1小时；d.乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温，16小时。
在0℃下，将乙醇钠(924mg，13.6mmol)的DMF悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入4-羟基苯甲酸乙酯(2.26g，13.6mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物滴加[(预溶解在DMF(5mL)中)的1-(溴甲基)萘(2.0g，9.0mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水、水和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并真空蒸发除去溶剂以生成4-(萘-1-基甲氧基)苯甲酸乙酯(1.7g，5.55mmol)。然后将其溶解在THF中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(211mg，5.55mmol)。在室温下将悬浮液搅拌3小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-(萘-1-基甲氧基)苯基)甲醇(1.3g，4.9mmol)。将其用于下一反应步骤而不需进一步纯化。
将(4-(萘-1-基甲氧基)苯基)甲醇(1.0g，3.8mmol)溶解在甲苯(30mL)中并加入吡啶(305uL，3.8mmol)。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(359μL，3.8mmol)。将混合物升至室温并搅拌1小时。使用K2CO3溶液将其洗涤并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以获得1-((4-(溴甲基)苯氧基)甲基)萘(660mg，53％)。将该中间体用于下列反应。
在0℃下将乙醇钠(156mg，2.29mmol)加入至DMF并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(403mg，2.29mmol)并将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入1-((4-(溴甲基)苯氧基)甲基)萘(500mg，1.53mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的91(200mg，31％)，Mpt＝154-156℃；H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝8.10(1H，d，ArH)，8.00-7.99(2H，m，Ar)，7.97-7.71(2H，m，ArH)，7.70-7.53(3H，m，ArH)，7.24(1H，s，ArH)，7.09(1H，d，CH)，6.23(1H1s，CH)，5.68(2H，s，CH2)，2.40(3H，s，CH3)。13C NMR(500MHz，丙酮-d6，DEPT135)：δ＝154.6(qC)，153.4(qC)，133.3(qC)，131.1，129.8，128.9，128.7，128.5，126.9，126.7，126.5，126.4，126.0，125.9(11×Ar CH)，125.3，(Ar CH)，123.8(Ar CH)，114.8(Ar CH)，113.1(Ar CH)，112.7(Ar CH)，111.2(Ar CH)，111.1(Ar CH)，101.7(CH)，69.6和67.9(2×CH2)，18.1(CH3)。
7-(4-(二苯甲基氧基)苄氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(92)TLE-M1-SU004B
试剂和条件：(i)a.乙醇钠，4-羟基苯甲酸乙酯，DMF，室温，16小时；b.LiAlH4，THF，室温，3小时；c.PBr3，吡啶，甲苯，室温，1小时；d.乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温，16小时。
在0℃下，将乙醇钠(661mg，9.7mmol)加入至DMF(5mL)。将产生的悬浮液搅拌15分钟。缓慢加入4-羟基苯甲酸乙酯(1.61g，9.7mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入二苯甲基溴(2.0g，8.1mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水、水和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并真空蒸发除去溶剂以产生4-(二苯甲基氧基)苯甲酸乙酯(1.0g，3.0mmol)。然后，将其溶解在THF(5mL)中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(114mg，3.0mmol)。在室温下将悬浮液搅拌3小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-(二苯甲基氧基)苯基)甲醇(760mg，2.62mmol)。将其用于下一个反应步骤而不需进一步纯化。
将(4-(二苯甲基氧基)苯基)甲醇(500mg，1.72mmol)溶解在甲苯(20ml)中并加入吡啶(139μL，1.72mmol)。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(163μL，1.72mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。然后使用饱和的K2CO3溶液将其洗涤并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以获得油状物形式的((4-(溴甲基)苯氧基)亚甲基)二苯(450mg，74％)。将该中间体用于下列反应。
在0℃下，将乙醇钠(87mg，1.28mmol)加入至DMF(3mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(225mg，1.28mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入((4-(溴甲基)-苯氧基)亚甲基)二苯(300mg，1.53mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的92(80mg，21％)。Mpt＝179-181℃。H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝7.66(1H，d，ArH)，7.56(4H，d，ArH)，7.39-7.34(6H，m，ArH)，7.08(2H，d，ArH)，6.97(2H，d，ArH)，6.93(2H，d，ArH)，6.51(1H，s，CH)，6.12(1H，s，CH)，5.12(2H，S1 CH2)，2.42(3H，s，CH3)。
7-(4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苄氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(94)SU010B-02
Figure BPA00001482463600891
试剂和条件：(i)乙醇钠，4-羟基苯甲酸乙酯，DMF，室温，2小时；(ii)a.LiAlH4，THF，室温，1小时；b.PBr3，吡啶，甲苯，室温，1小时；c.乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温，16小时。
4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苯甲酸乙酯(93)
在0℃下，将乙醇钠(580mg，8.5mmol)加入至DMF(10mL)。将产生的悬浮液搅拌15分钟。缓慢加入4-羟基苯甲酸乙酯(1.4g，8.5mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物滴加预溶解在DMF(5mL)中的10(1.5g，7.1mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水、水和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并真空蒸发除去溶剂以产生白色固体形式的93(920mg，44％)。m/z＝423.18(M+H)。H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝8.0(2H，d，ArH)，7.60(1H，d，ArH)，7.30-7.15(2H，m，ArH)，7.27-7.19(1H，m，CH)，7.00(2H，d，ArH)，6.80(1H，s，CH)，5.20(2H，s，CH2)，4.10(2H，q，CH2)，1.25(3H，t，CH3)。
7-(4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苄氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(94)U010B-02
将化合物93(400mg，1.29mmol)溶解在THF(15mL)中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(49mg，1.29mmol)。在室温下将悬浮液搅拌1小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苯基)甲醇(220mg，67％)。将其溶解在甲苯(10mL)中。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(98μL，1.04mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。然后使用饱和的K2CO3溶液将其洗涤并使用EtOAc(3×30mL)萃取。使用盐水洗涤EtOAc层然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去溶剂以获得无色油状物形式的2-((4-(溴甲基)苯氧基)甲基)苯并呋喃(132mg)。将该中间体用于下列反应。
在0℃下将乙醇钠(43mg，0.63mmol)加入至DMF并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(110mg，0.63mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入93(132mg，0.42mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的94(80mg，47％)。Mpt＝153-155℃。m/z＝413(M+H)。H1 NMR(500MHz，丙酮-d6)：δ＝7.56-7.46(2H，m，CH)，7.40(1H，t，J＝8.2，CH)，7.34(2H，d，J＝8.50，CH)，7.27-7.19(1H，m，CH)，7.14-7.09(1H，m，CH)，7.00-6.98(2H，d，CH，J＝11.8)，6.86-6.80(3H，m，CH)，5.99(1H，s，CH)，5.14(2H，s，CH2)，5.03(2H，s，CH2)，2.28(3H，s，CH3)。
4-((4-甲基-2-氧代-2H-色满-7基氧基)甲基)苯基氨基甲酸萘-1-基甲酯(95)VG021-03
试剂和条件：(i)a.氰基苯甲酸乙酯，TEA，THF，室温，16小时；b.LiAlH4，THF，室温，1小时；c.PBr3，吡啶，甲苯，室温，1小时；d.乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温，16h。
向搅拌的萘甲醇(4.0g，25.3mmol)的THF(30mL)溶液加入TEA(100μL)。向其滴加预溶解在THF(10mL)中的氰基苯甲酸乙酯(4.0g，21.0mmol)。在室温下将产生的溶液搅拌16小时。蒸发除去溶剂以产生粗中间体4-((萘-1-基甲氧基)羰基氨基)苯甲酸乙酯(1.3g)。然后将其溶解在THF(15mL)中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(141mg，3.75mmol)。在室温下将悬浮液搅拌1小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-(羟基甲基)苯基氨基甲酸萘-1-基甲酯(500mg，1.62mmol)。将其溶解在甲苯(10mL)中。将溶液冷却至0℃。在15分钟时间内滴加PBr3(154μL，1.62mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂以获得油状物形式的4-(溴甲基)苯基氨基甲酸萘-1-基甲酯(300mg)。将该中间体用于下列反应而不需进一步纯化。
在0℃下将乙醇钠(44mg，0.65mmol)加入至DMF并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(114mg，0.70mmol)并在该温度下将混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入2-((4-(溴甲基)苯氧基)甲基)苯并呋喃(200mg，0.42mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用盐水(2×50mL)、水(2×50mL)和1M NaOH(2×30mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化以产生白色固体形式的95(160mg，63％)；Mpt＝153-155℃。m/z＝488.2(M+H)。H1 NMR(500MHz1丙酮-d6)：δ＝7.56-7.46(2H，m，CH)，7.40(1H，t，J＝8.2，CH)，7.34(2H，d，J＝8.50，CH)，7.27-7.19(1H，m，CH)，7.14-7.09(1H，m，CH)，7.00-6.98(2H，d，CH，J＝11.8)，6.86-6.80(3H，m，CH)，5.99(1H，s，CH)，5.14(2H，s，CH2)，5.03(2H，s，CH2)，2.28(3H，s，CH3)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苄酯(96)SU024-1-03)
Figure BPA00001482463600921
试剂和条件：(i)a.LiAlH4，THF，室温，1小时；b.乙醇钠，DMF，室温，c.76，室温，2小时。
将化合物93(300mg，1.01mmol)溶解在THF(15mL)中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(38mg，1.01mmol)。在室温下将悬浮液搅拌1小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苯基)甲醇(150mg，0.59mmol)。将其用于下一个步骤而不需进一步纯化。
在0℃下将乙醇钠(40mg，0.59mmol)加入至DMF并将悬浮液搅拌10分钟。加入(4-(苯并呋喃-2-基甲氧基)苯基)甲醇(150mg，0.59mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物分批加入76(130mg，0.65mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌2小时。真空蒸发除去DMF。通过使用己烷∶EtOAc(2∶1)洗脱的快速色谱纯化粗残留物以产生白色固体形式的目标化合物(20mg，8％)。m/z＝456.10(M+H)。H1 NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ＝10.22(1H，bs，NH)，7.69-7.64(2H，m，ArH)，7.58(1H，d，J＝8.15Hz，ArH)，7.55(1H，s，ArH)，7.42(2H，d，J＝8.00Hz，ArH)，7.33(1H，t，J＝7.70Hz，ArH)，7.26(1H，t，J＝7.5Hz，ArH)，7.11(2H，d，J＝8.28Hz，ArH)，7.06(1H，s，ArH)，6.23(1H，s，ArH)，5.29(2H，s，CH2)，5.12(2H，s，CH2)，2.37(3H，s，CH3)。
7-(4-((5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)苄氧基)-4-甲基-2H-色满-2-酮(97)VG040-05
Figure BPA00001482463600931
试剂和条件：(i)乙醇钠，4-羟基苯甲酸乙酯，DMF，室温，2小时；(ii)a.LiAlH4，THF，室温，1小时；b.PBr3，吡啶，甲苯，室温，1小时；c.乙醇钠，7-羟基-4-甲基香豆素，DMF，室温，16小时。
在0℃下，将乙醇钠(62mg，0.90mmol)加入至DMF(3mL)。将产生的悬浮液搅拌15分钟。缓慢加入4-羟基苯甲酸乙酯(148mg，0.90mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时，然后允许达到室温。向该混合物加入26(180mg，0.75mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌1小时。真空蒸发除去DMF以产生粗中间体(150mg)。然后，将其溶解在THF(5mL)中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(34mg，0.90mmol)。在室温下将悬浮液搅拌1小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-((5-甲氧基苯并呋喃-2-基)甲氧基)苯基)甲醇(120mg)。将其溶解在甲苯(4mL)中。将溶液冷却至0℃。在5分钟时间内滴加PBr3(84μL，1.04mmol)。在室温下将产生的混合物搅拌1小时。真空蒸发除去溶剂以获得无色油状物形式的2-((4-(溴甲基)苯氧基)甲基)-5-甲氧基苯并呋喃(90mg)。将该中间体用于下列反应。
在0℃下，将乙醇钠(22mg，0.31mmol)加入至DMF(2mL)并将悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入7-羟基-4-甲基香豆素(54mg，0.31mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌0.5小时。向该混合物分批加入2-((4-(溴甲基)苯氧基)甲基)-5-甲氧基苯并呋喃(90mg，0.23mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并通过使用己烷∶EtOAc(1∶1)洗脱的快速色谱纯化残留物以产生白色固体形式的94(22mg，7％)，m/z＝443(M+H)。
4-甲基-2-氧代-2H-色满-7-基氨基甲酸4-(二苯甲基氧基)苄酯(98)SU032-02
Figure BPA00001482463600941
试剂和条件：(i)a.乙醇钠，4-羟基苯甲酸乙酯，DMF，室温，16小时；b.LiAlH4，THF，室温，3小时；(ii)乙醇钠，DMF，76，室温，2小时。
在0℃下，将乙醇钠(300mg，4.05mmol)加入至DMF(10mL)。将产生的悬浮液搅拌10分钟。缓慢加入4-羟基苯甲酸乙酯(739mg，4.05mmol)并在该温度下将产生的混合物搅拌20分钟。向该混合物分批加入二苯甲基溴(1.0g，4.05mmol)。在室温下将产生的反应混合物搅拌16小时。真空蒸发除去DMF并在EtOAc中处理残留物，然后使用水和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO4)并真空蒸发除去溶剂以产生4-(二苯甲基氧基)苯甲酸乙酯(830mg)。然后，将其溶解在THF(5mL)中并伴随剧烈搅拌分批加入LiAlH4(114mg，3.0mmol)。在室温下将悬浮液搅拌3小时。真空蒸发除去THF。在EtOAc中处理粗残留物并使用水、盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。真空蒸发除去EtOAc以获得粗产物形式的(4-(二苯甲基氧基)苯基)甲醇(760mg，2.62mmol)。将其用于下一个反应步骤而不需进一步纯化。
将(4-(二苯甲基氧基)苯基)甲醇(100mg，0.34mmol)和76的甲苯(10ml)溶液回流2小时。使反应冷却至室温并过滤形成的所得沉淀物并用冷的乙醚和EtOAc洗涤以产生白色固体形式的98(100mg，60％)，m/z＝491.55(M+H)。
生物活性
实施例1：前药的CYP1B1代谢
取代基对通过CYP1同工酶和人肝微粒体(HLM)产生的苯并呋喃醚和氨基甲酸酯连接的香豆素的断裂的影响。
商购的SupersomalTM CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1和混合型人肝微粒体(BD Gentest，Oxford，UK提供)包含酶筛以识别表示结构特征的构效关系(SARs)，相对包括肝的正常组织中表达的细胞色素P450酶其通过癌症中表达的CYP1B1来控制前药断裂的效率和选择性。HLMs源自人患者的肝并依据供体而包含一系列包括CYP1A2、CYP2A6、CYP2B6、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4和CYP4A而非CYP1A1或CYP1B1的细胞色素P450。
在pH＝7.4和37℃下，在10mmol dm-3磷酸钾盐缓冲液中，典型的SupersomalTM CYP1A1、CYP1A2、CYP1B1酶代谢研究使用10pmol的酶、100μmol dm-3的NADPH。通过加入溶解在DMSO中的前药原液开始SupersomalTM酶代谢以产生最终浓度为10μmol dm-3的前药和0.5％的DMSO。在pH＝7.4和37℃下，在10mmol dm-3磷酸钾缓冲液中，HLM筛使用60微升的微粒体、100μmol dm-3的NADPH，总反应体积为1.5mL。
本发明的化合物包含一系列通过醚和氨基甲酸酯连接子分别与7-羟基-4-甲基香豆素和7-氨基-4-甲基香豆素的羟基偶联的杂芳香族触发子。本发明另外的实例包含的化合物是杂芳香族触发子，其通过所谓的扩展的氧基苄醚连接子(-Ar-CH(Z7)X3-＝-苯基-CH2O-)与7-羟基-4-甲基香豆素的羟基偶联。本发明另外的实例包含其中杂芳香族触发子通过所谓的扩展的氧基苄基氨基甲酸酯连接子与7-氨基-4-甲基香豆素的氨基偶联的化合物。本发明另外的实例包含其中杂芳香族触发子通过氨基甲酸酯苄醚连接子与7-羟基-4-甲基香豆素的羟基偶联的化合物。
7-羟基-4-甲基香豆素和7-氨基-4-甲基香豆素二者在生理学pH＝7.4下均部分去质子化且两种香豆素阴离子为高度荧光的，并分别具有最大值为450nm和445nm的荧光发射波长。当香豆素通过本发明描述的连接子与杂-芳香族触发子偶联时，香豆素阴离子荧光性猝灭。因此，通过动力学荧光测定法，通过香豆素阴离子的释放能实时监控杂-芳香族触发子和产生的连接子断裂的酶羟基化。该前药设计策略已经成功用于监控由P450还原酶产生的所谓的生物还原低氧-激活的前药的断裂，而不要与作为单加氧酶的CYP1B1混淆(参见例如：Everett SA等人“Modifying rates of reductive elimination of leavinggroups from indolequinone prodrugs：a key factor in controllinghypoxia-selective drug release(从吲哚醌前药还原消除离去基的修饰速率：控制低氧-选择性药物释放的关键因素)”，Biochem Pharmacol，63：1629-39，2002)。
在具有设置在5nm位置的激发和发射狭缝的Cary Eclipse动力学荧光计中，使用1cm通路长度荧光试池监控指示连接子断裂的香豆素阴离子的释放。在激发波长λex＝350nm和发射波长λem＝450nm下检测从本发明的化合物中释放的香豆素阴离子。在pH＝7.4下使用与酶代谢相同的仪器设置，在10mmol dm-3磷酸钾缓冲液中，根据荧光强度对香豆素浓度(0μmol dm-3至3.5μmol dm-3)的线性标准曲线来定量荧光强度的变化。
表3示出CYP1同工酶和HLM-激活的断裂以及从苯并呋喃醚和氨基甲酸酯连接的香豆素中香豆素的释放的特异性断裂活性(皮摩尔香豆素分钟-1皮摩尔细胞色素P450-1)。在苯并呋喃的5-和7-位中的一个或二者的供电子取代基(Me、MeO)或吸电子取代基(Cl、Br、F)对断裂特异性和效率二者具有显著影响。苯并呋喃上的4-和6-位保持未取代的(R4和R6＝H)，因为根据所提出的机制它们是对诱导醚或氨基甲酸酯连接子断裂所必需的酶羟基化的可能位置。控制5-和7-位上的取代基对苯并呋喃和CYP1同工酶-诱导的断裂效率和选择性的影响的构效关系(SAR)对于醚或氨基甲酸酯连接子断裂是不可预测的。
包含醚连接的香豆素的其中Z3＝H、Z5＝H的SU10A(参见下表3)由CYP1A1、CYP1A2和CYP1B1以及HLM断裂。对于包含10μmoldm-3的α-萘黄酮(CYP1-选择酶抑制剂)的HLM抑制SU 10A断裂，表明CYP1A2仅负责HLM-介导的香豆素释放。因此，苯并呋喃是能通过CYP1同工酶促进醚连接的前药的断裂的通用的触发子部分。
其中Z3＝F、Z5＝F的VG016-04(还参见下表3)中苯并呋喃上的吸电子取代基抑制醚连接子的CYP1同工酶和HLM-诱导的断裂。然而，其中Z3＝MeO、Z5＝MeO的VG035-05(还参见下表3)中的供电子取代基导致醚键的CYP1B1-特异性断裂，而对于CYP1A或HLM未观察到连接子断裂。具有CYP1B1的VG035-05的特异性断裂活性为13.65±1.00皮摩尔香豆素分钟-1皮摩尔细胞色素P450-1，其为所研究的多种苯并呋喃醚连接的香豆素的最高效率(参见下表3)。因此，5，7-二甲氧基苯并呋喃部分能用于通过在癌症中过度表达的酶的CYP1B1特异性触发醚连接的前药的断裂。
与VG035-04(包含醚连接的香豆素)形成显著对比，通过具有特异性断裂活性＝5.51±0.06皮摩尔香豆素分钟-1皮摩尔细胞色素P450-1的CYP1A1(而非CYP1A2或CYP1B1)选择性断裂其中Z3＝MeO、Z5＝MeO的VG041-05(包含相应的氨基甲酸酯连接的香豆素)。根据下表3，包含氨基甲酸酯连接子的结构B的所有化合物实例通过CYP1A1而非CYP1B1断裂。唯一的例外是其中X3＝MeO、Z5＝MeO的VG032-05，其产生CYP1B1特异性断裂活性＝1.53±0.09皮摩尔香豆素分钟-1皮摩尔细胞色素P450-1，其比包含醚连接子的VG027-05低约6倍。
实施例2：模型前药库与CYP1B1底物预测模型的组合连接底物特异性与前药活性和断裂
进行高通量筛选(HTS)以建立CYP1B1的生物活性数据集
为了识别建立底物特异性模型的区分活性的子结构和大型生物活性数据集，根据包含ChemDiv多样性50,000种测试化合物收集和ChemDiv激酶靶标的10,000种测试化合物收集的两种商业库来筛选靶标酶CYP1B1。使用液体处理器(Beckman Fxp)、体积分配器(MatrixWellmate)和发光板读数器(分子设备分析员AD板读数器)，在微型的384-孔标板中进行HTS。P450-GloTM检验提供了用于检测细胞色素P450活性的发光方法。通过培养人supersomal CYP1B1与具有发光的细胞色素P450底物的还原酶(BD GentestTM，UK)重组酶，即用于CYP1B1而非用于荧光素酶的底物的荧光素6’氯乙基醚(荧光素-CEE)进行常规反应。将荧光素-CEE转化为在包含荧光素检测试剂(来自Promega，Madison，USA的CYP1B1发光检验试剂盒P450-GloTM)的第二反应中检测的荧光素产物。试剂同时终止细胞色素P450反应并引发半衰期＞2小时的稳定发光信号。第二反应中产生的发光量与CYP1B1活性成比例。生物化学终点是在荧光素-CEE(20μmol dm-3)的表观Km下发挥作用的酶(0.5皮摩尔/孔)的基质抑制。检验的特征在于当在384-孔标板中运行时，通常大于0.6(其中Z’＝1.0表示完全稳健高度可重复的检验)的优异Z’-因子。阴性对照为定义酶靶标未改性状态的活性水平，而阳性对照为定义目标物(hit)的活性水平。阴性对照包含CYP1B1/KPO4/NADPH/基质反应混合物和用于溶解测试化合物的相等浓度的1％的DMSO。检验中的阳性对照包含CYP1B1/KPO4/NADPH基质反应混合物和在5μmol dm-3的最终浓度下完全抑制CYP1B1酶活性的α-萘黄酮。将阳性和阴性对照物放置在每个384-孔板的外柱中，同时将测试化合物放置在剩余的320孔中。目标物的定义是在0.5μmol dm-3的浓度下为80-100％的底物抑制剂CYP1B1活性的测试化合物。
将药物发现集成平台(Pipeline Pilot)(Scitegic，San Diego，USA)用于简化并整体化大量数据以识别来自由UCSF SMDC的计算机科学家支持的CYP1B1 HTS的SARs。软件用于识别(1)目标物(hits)与非目标物的开始的SAR结果，(2)确定物理化学性质，例如分子量、计算的log P、目标物母体的H-原子供体/受体相互作用，(3)确定环碎片和官能团的频率，以及(4)定义用于作为未来前药设计基础的CYP1B1底物抑制预测的计算机(in silico)模型。重要地，～10％的大量目标物的分子量为400-500，后者是在两种化合物集合中可获得的最大分子量的化合物。该信息确定了允许同时保持CYP1B1底物特异性的最大分子量的前药。来自CHEMAPPSTM(La JoIIa，CA，USA)的SARvision v2中目标物支架的结构分析证实测试化合物不支持正确的官能团(例如触发子羟甲基取代基)直接结合进入方案1所示的偶联化学。然而，通过识别目标物与非目标物中高频率的环碎片可能识别触发子部分的模板，然后能将其适当官能化用于偶联反应。
用于预测支持前药设计的细胞色素P450基质抑制的计算机模型。
前药设计的主要挑战是确定结合触发子、连接子和效应子化学同时保持靶标酶的底物特异性的策略。CYP1B1 HTS对识别潜在的触发子部分是非常有价值的，但随后的包含连接子和效应子药物的“目标物引导(hit to lead)”化学证明最终的前药结构对于靶标酶激活不是最佳的。通过使用基于对扩展的连接指纹的Tanimoto相似性检索的高斯核加权的k-最邻近(k-NN)运算法则开发细胞色素P450 1B1底物抑制的计算机预测模型获得来自两种HTS筛选(总共60,000种测试化合物)的大量结构数据的最佳用法。使用对选自来自ChemDiv多样性和激酶库的45,000和9,000种测试化合物的训练集的留一法(leave-one-out)交叉验证来选择CYP1B1核加权的k-NN模型的最佳参数。总共6,000种的测试化合物的剩余部分用作内部测试集以确认模型的准确性从而预测底物抑制。指定表现出＞20但＜80％抑制的任何测试化合物为未分类的。模型精确预测89％的分类的非底物抑制剂和95％的分类的底物抑制剂。将CYP1B1底物预测模型方案上传至Scitegic网络端口以通过接口促进假设的前药结构与诸如ChemDraw/IsisDraw的标准化学绘图包的接合。
使用化合物的外部测试集验证CYP1B1底物预测模型
构造组成CYP1B1底物预测模型的外部测试集的384-孔原液板，并且其包括：(1)包含例如四甲氧基二苯乙烯、β-雌二醇、α-萘黄酮、乙氧基试卤灵、白藜芦醇的已知的CYP1B1底物抑制剂，(2)不是CYP1B1底物抑制剂的化合物，所述CYP1B1底物抑制剂包含例如奎尼定(CYP2D6的有效特异性抑制剂)、磺胺苯吡唑(CYP2C9的有效特异性抑制剂)，和(3)模型前药VG016-05和VG035-05，以及(4)磷酰胺氮芥前药SU025-04和SU046-04。外部测试集原液在DMSO中的浓度为10mmol dm-3，并使用与用于主要的CYP1B1 HTS所描述的相同方法确定0.5mmol dm-3的最终浓度下的CYP1B1底物抑制百分比。一式三份进行实验以产生CYP1B1活性±标准偏差的平均底物抑制％。通过Scitegic网络端口提交所有外部测试集结构作为对CYP1B1底物预测模型的查询以产生CYP1B1的底物抑制％的预测值以便与底物抑制％的实际生物化学检测相比。
CYP1B1值的比较的实际和预测的％底物抑制如下：
Figure BPA00001482463601001
通过使用化合物的外部测试集验证模型有效性的具有广泛活性的多种类化合物，CYP1B1底物预测模型对预测CYP1B1的％底物抑制是精确的。重要地，根据发明的步骤，模型能精确预测CYP1B1底物抑制的两种模型前药VG016-05和VG035-05的活性，其能与前药断裂的效率和7-羟基-4-甲基香豆素阴离子的释放直接联系。根据表3，苯并呋喃触发子的R5和R7中的供电子或吸电子取代基活化这些模型前药以芳香族羟基化和断裂。当R5和R7＝F时，即VG016-05中的吸电子取代基，如精确预测的，模型前药不受CYP1B1激活，因此不发生连接子的断裂。显著对比之下，当R5和R7＝MeO时，即VG035-05中的供电子取代基，如精确预测的，模型前药受CYP1B1激活导致连接子以高效率断裂。二甲氧基苯并呋喃触发子部分与磷酰胺氮芥前药SU025-04和SU046-04的结合形成精确预测是良好的CYP1B1底物抑制剂的化合物。总之，基于CYP1B1生物活性数据库，模型前药库和CYP1B1底物预测模型的组合促进了特异性CYP1B1-激活的前药的设计。
实施例3：设计以表达CYP1A1和CYP1B1同工酶的野生型CHO细胞和CHO细胞中的前药细胞毒性
设计的CHO细胞用于证实由CYP1表达介导的选择性细胞杀死。在下述实验中，将化合物暴露于设计以表达CYP1A1(CHO/CYP1A1)或CYP1B1(CHO/CYP1B1)酶的野生型CHO细胞中。
CHO细胞：根据文献方法(Ding S等人，Arch.Biochem.Biophys.，348：403-410，1997，其内容通过引用并入本文)，在补充有10％FCS、1单位/ml的各个次黄嘌呤和胸苷，以及青霉素(100IU/ml)和链霉素(100μg/ml)的α-MEM中的标准细胞培养条件下生长的中国仓鼠卵巢(CHO)DUKXB11细胞。细胞在37℃下、在潮湿环境外加5％CO2的条件下生长。
CHO/CYP1A1和CHO/CYP1B1细胞：根据文献(出处同上)中描述的方法，使用用于CHO细胞的补充有0.4mg/ml的G418硫酸氢盐和0.3μM的甲氨蝶呤(Sigma/Aidrich Co.，Gillingham，Dorset，UK)的标准培养基培养包含共同表达P450还原酶的重组CYP1A1和重组CYP1B1的CHO细胞，即分别为(CHO/CYP1A1)和(CHO/CYP1B1)。细胞在37℃下，在潮湿环境外加5％的CO2的环境中生长。
重组CYP1A1和CYP1B1表达
当使用人P450还原酶共同表达时，将CHO细胞中的人cDNACYP1A1或cDNA CYP1B1的二氢叶酸还原酶(DHFR)基因扩增用于达到高水平的功能酶(出处同上，Ding S等人，Biochem J.，356(Pt 2)：613-9，2001)。消化改性的CYP1A1或CYP1B1 cDNA并结扎进入哺乳动物表达载体pDHFR以分别产生质粒pDHFR/1A1和pDHFR/1 B1(出处同上)。根据文献描述的方法进行细胞培养和DNA转染进入CHODUKXB11并通过在核苷缺乏培养基中生长选择转染的细胞用于DHFR+表型(出处同上)。将DHFR+克隆混合并在增加浓度的MTX(0.02μM至0.1μM)上生长用于转染的CYP1A1或CYP1B1cDNA的扩增。将在0.1mM的MTX选择中存活的细胞克隆分离，然后使用0.3μM的MTX进一步选择。通过免疫印记分析产生的细胞系用于CYP1A1或CYP1B1表达。使用包含全长人细胞色素P450还原酶(CPR)cDNA的质粒pcDNA/HR稳定地转染表达高水平的各个酶的细胞系，并根据文献描述的方法(出处同上)，使用G418(0.8mg/ml)和MTX(0.3μM)选择。抗性克隆分离之后，G418的浓度降低至0.4mg/ml并通过重复克隆确保细胞系的均匀性。使用运载cDNA CYP1A1的质粒转染随后使用CPR cDNA转染的CHO细胞系是指定的CHO/CYP1A1且使用运载cDNA CYP1B1的质粒转染随后使用CPR cDNA转染的CHO细胞系是指定的CHO/CYP1B1。
CYP1A1和CYP1B1的免疫化学检测
收获细胞并使用文献中的标准方法通过声波降解法裂解(Ding S等人，1997，其内容通过引用并入本文)。通过SDS/PAGE分离蛋白质(通常为50μg的裂解物)，将其转移至硝基纤维素膜并使用标准方法探查(Paine MJ等人，Arch.Biochem.Biophys.，328：380-388，1996，其内容通过引用并入本文)。将人CYP1A1加还原酶SupersomesTM，人CYP1A2加还原酶SupersomesTM和CYP1B1加还原酶SupersomesTM(BD Biosciences，Oxford，UK)用作阳性对照(通常为0.03pmol至0.3pmol)用于细胞系中酶表达的免疫化学检测。WB-1B1原发性抗体(稀释度1∶1500，BD Biosciences，Oxford，UK)和与CYP1A1(稀释度1∶2000，Cancer Research Technology，London，UK)交叉反应的抗CYP1A2抗体分别用于检测CYP1B1和CYP1A1表达。第二抗体为在1∶500稀释度下使用的山羊抗-兔子IgG。使用增强的化学发光(ECL)免疫印记检测试剂盒(GE Healthcare Life Sciences，Amersham，Buckinghamshire，UK)开发免疫印记。
设计的CHO细胞中CYP1A1和CYP1B1表达的免疫印记特征
附图的图1a是显示来自CHO/CYP1B1细胞系的裂解物中CYP1B1蛋白质表达的检测的典型免疫印记，所述CYP1B1蛋白质表达在未转染的CHO DUKXB11细胞或CHO/CYP1A1细胞系中均不可检测。带状物相当于56kDa的分子量并匹配人CYP1B1 SupersomalTM酶的带状物。图1b是显示来自CHO/CYP1A1细胞系的裂解物中CYP1A1蛋白质表达的检测的典型免疫印记，所述CYP1A1蛋白质表达在未转染的CHO DUKXB11细胞或CHO/CYP1B1细胞系中均不可检测。带状物相当于60kDa的分子量并匹配通过抗CYP1A2抗体的交叉反应性检测的人CYP1A1 SupersomalTM酶的带状物。
功能性CYP1酶活性
乙氧基试卤灵O-脱乙基(EROD)检验广泛用于确认功能性CYP1活性(Chang TK和Waxman DJ，“Enzymatic Analysis ofcDNA-Expressed Human CYP1A1，CYP1A2，and CYP1B1 with7-Ethoxyresorufin as Substrate(使用7-乙氧基试卤灵作为底物的cDNA-表达的人CYP1A1、CYP1A2和CYP1B1的酶分析)”，MethodsMol.Biol，320：85-90，2006，其内容通过引用并入本文)。检验通过CYP1A1、CYP1A2和CYP1B1确定7-乙氧基试卤灵的O-脱烷基化以产生酶产物试卤灵，其通过在580nm下的荧光性发射而被连续监控。在其内容通过引用并入本文的Cali JJ等人Expert.Opin.DrugMetabolism Toxicol，2(4)：629-45，2006中，用于检测酶活性的替代检验是使用荧光素-CEE作为CYP 1酶的发光底物的商购的PromegaP450-GloTM检验。使用具有选择性和非选择性的CYP1抑剂型的EROD检验和Promega P450-GloTM检验用于确认与上述有关的CHO细胞系表达了功能型的预期的CYP1酶。
在不存在抑剂的情况下，CHO/CYP1A1和CHO/CYP1B1(而非野生型CHO细胞)将7-乙氧基试卤灵转化为试卤灵或将荧光素-CEE转化为荧光素，由此确认这些细胞中的功能性CYP1表达(参见下表1)。
如所预期的，加入广谱CYP1抑制剂、α-萘黄酮废止了两种CYP1表达细胞系的活性(参见下表1)。选择性抑制剂四甲氧基二苯乙烯对CYP1B1的选择性超过CYP1A130倍(Chun YJ，Kim S，Kim D，LeeSK和Guengerich FP，“A New Selective and Potent Inhibitor of HumanCytochrome P450 1 B1 and its Application to Antimutagenesis(新的选择性和有效的人细胞色素P450 1B1抑制剂及其用于抗突变发生的应用)”，Cancer Res 61(22)：8164-70，2001)。四甲氧基二苯乙烯废止了两种CYP1表达细胞系中高浓度的活性并优先降低CYP1B1表达细胞的活性(与CYP1A1表达细胞相比)，细胞处于较低浓度(参见下表1)。
这些结果提供了独立的证明，即CYP1A1和CYP1B1表达水平如所预期的。
测定CHO、CHO/CYP1A1和CHO/CYP1B1细胞系中的细胞毒性IC50值
在96-孔板上以1500细胞每孔的细胞密度接种100μl必需的细胞培养基中CHO、CHO/CYP1A1或CHO/CYP1B1中的一种细胞悬浮液并在37℃下的孵化器中放置24小时。然后加入测试化合物的DMSO原液以产生100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003、0.001、0μM的给定浓度。发现0.2％的DMSO最终浓度不影响各种CHO细胞系的生长特征。使用测试化合物将细胞孵化72小时或96小时，此后抽出所有培养基并使用100μl的新鲜培养基替换以补偿培养基由于蒸发造成的损失。使用20μl的MTS检验试剂将细胞孵化1.5小时并使用酶标仪检测510nm下每孔的吸收度。根据包含(a)细胞加培养基，(b)细胞加包含0.2％DMSO的培养基，(c)单独的培养基和(d)包含DMSO 0.2％和一系列浓度为0μmol dm-3至100μmol dm-3的测试化合物的培养基的一系列对照计算各个测试化合物浓度的平均吸光度和标准偏差。从细胞生长百分比(其中100％的细胞生长相当于未处理的对照细胞)对测试化合物浓度的曲线图计算细胞毒性IC50值。
本文将细胞毒性IC50值定义为杀死50％的细胞的化合物浓度，并通过将非CYP1表达细胞中的IC50与CYP1A1或CYP1B1表达细胞中的IC50相除来计算折叠选择性(fold selectivity)。由正常CHO细胞中的化合物IC50除以CYP1A1或CYP1B1转染的CHO细胞中的IC50计算不同的细胞毒性IC50比。
PromegaTM CellTiter 96
Figure BPA00001482463601041
水性非放射性细胞增殖(MTS)检验
商购的MTS检验是用于测定增殖、细胞毒性或化学敏感性检验中能存活的细胞数量的均匀、比色方法。检验包括四唑化合物[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑内盐；MTS]和电子偶联试剂(吩嗪硫酸甲酯)PMS的溶液。通过细胞将MTS生物还原成为可溶于组织培养基的甲瓒产品。能从96-孔检验板中直接检测甲瓒产品在510nm下的吸光度。通过490nm或510nm下的吸光度量检测的甲瓒产品的量与培养基中存活细胞的数量直接成比例。
当由CYP1B1激活时，本发明的两种化合物(SU025-04和SU046-04)设计用于分别释放磷酰胺氮芥N，N-双(2-氯-乙基)磷酰胺(Cl-IPM)和N，N-双(2-溴-乙基)磷酰胺(Br-IPM)。当分别混合进入前药SU025-04和SU046-04时，两种磷酰胺氮芥Cl-IPM和Br-IPM的高毒性显著降低。与在暴露72小时之后的野生型CHO细胞中具有低于0.007μmol dm-3的细胞毒性IC50值的Cl-IPM和Br-IPM形成鲜明对比，在暴露72小时或96小时的野生型CHO细胞中SU025-04和SU046-04均具有不小于10μmol dm-3的细胞毒性IC50值(参见下表2)。从其在CHO-野生型(其缺乏CYP1酶表达)、CHO/1A1和CHO/CYP1B1细胞中的对比细胞毒性IC50值推导出两种前药的活化机制。例如，SU025和SU046在野生型CHO细胞中表现出低毒性而对CHO/1B1细胞高度有毒，从而在暴露72时分别产生1689和5075的不同细胞毒性IC50比。在96小时的较长暴露时间下，CYP1B1-选择性前药SU025-04和SU046-04对CYP1B1表达细胞的毒性比对非CYP1B1表达细胞的毒性高3367和5400倍(参见下表2)。因此，化合物SU025-04和SU046-04可证实CYP1B1-激活的前药。SU025-04和SU046-04对野生型CHO和CHO/CYP1A1细胞表现出相似低细胞毒性，在暴露72小时时具有不同细胞毒性IC50比＜1表明通过CYP1A1激活没有释放高度有毒的磷酰胺氮芥(参见下表2)。如从文献中预期的，当由CYP2B6和CYP3A4而非CYP1酶活化时还产生烷基化的异磷酰胺氮芥的两种临床使用前药异环磷酰胺和环磷酰胺(例如，McFadyen MC，Melvin WT和Murray G1，“Cytochrome P450 Enzymes：Novel Options for CancerTherapeutics(细胞色素P450酶：癌症治疗的新选择)”，Mol CancerTher.，3(3)：363-71，2004)在本细胞毒性检验中使用的100μmol dm-3的最高浓度和最长的96小时暴露时间下均为无毒的(还参见下表2)。
实施例4：原发性人肿瘤细胞系中的前药细胞毒性
组成性表达CYP1B1的原发性人头和颈鳞状细胞癌肿瘤细胞系(UT-SCC-14)中的前药细胞毒性
Greer等人在Proc.Am.Assoc.Cancer Res.，45：3701，2004中报道称CYP1B1在头和颈鳞状细胞癌(HNSCC)的恶性发展过程中而不在正常的上皮细胞中过度表达。从患有HNSCC的癌症患者中分离原发性UT-SCC-14肿瘤细胞系(参见例如Yaromina等人，RadiotherOncol，83：304-10，2007和Hessel等人，Int J Radiat Biol，80；719-27，2004)。患者为男性、年龄为25、患有HNSCC，其特征在于下列临床病理参数：位置，scc舌；T3 N1，M0；位置，舌头；病变，初期的；级别G2。UT-SCC-14细胞系在mRNA和蛋白质水平下组成性表达CYP1B1并用于证实源自特征在于CYP1B1的过度表达的人癌症的癌细胞中化合物细胞毒性(Greer等人在Proc.Am.Assoc.Cancer Res.，45：3701，2004中)。
UT-SCC-14肿瘤细胞：根据文献方法(Hessel等人，Int J RadiatBiol，80；719-27，2004，其内容通过引用并入本文)，HNSCC细胞系在补充有胎牛血清(50ml)、非必需氨基酸(100X，5ml)、丙酮酸钠(100mmol dm-3，5ml)、包含青霉素100IU/ml/链霉素(100μg/ml，5ml)的L-谷氨酰胺(200mmol dm-3，5ml)的EMEM(500ml)中，在标准细胞培养条件下生长。
测定原发性头和颈肿瘤细胞系中的前药细胞毒性IC50值
将UT-SCC-14肿瘤细胞以2000细胞每孔悬浮在96-孔板上，且若需要加入新鲜培养基以产生每孔为100μL的总体积。在孵化器中使细胞连接4小时。4小时之后，在显微镜下确认细胞已经粘附于96-孔板的底部，然后去除培养基并使用包含测试化合物的乙醇原液的新鲜培养基替换以产生下面在100μl每孔的终体积下的0、0.001、0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、10、30、100μmol dm-3的最终浓度。发现乙醇0.2％的最终浓度不影响UT-SCC-14细胞系的生长特性。使用测试化合物将UT-SCC-14细胞孵化72小时，此后全部抽出并使用100μl的新鲜培养基替换以补偿由于蒸发产生的培养基的损失。使用20μl的MTS检验试剂将细胞孵化1.5小时并使用酶标仪检测510nm下每孔的吸光度。根据包含(a)细胞加培养基，(b)细胞加包含乙醇0.2％的培养基，(c)单独的培养基和(d)包含乙醇0.2％和一系列浓度为0μmol dm-3至100μmol dm-3的测试化合物的培养基的一系列对照计算各个测试化合物浓度的平均吸光度和标准偏差。从细胞生长百分比(其中100％的细胞生长相当于未处理的对照细胞)对测试化合物浓度的曲线图中计算细胞毒性IC50值。
本文将细胞毒性IC50值定义为杀死50％的UT-SCC-14肿瘤细胞的化合物浓度。商购的MTS检验是用于测定增殖、细胞毒性或化学敏感性检验中能存活的细胞的数量的均匀、比色方法并按照上述实施例3所描述的使用。
当由CYP1B1激活时，本发明的两种化合物(SU025-04和SU046-04)设计用于分别释放磷酰胺氮芥N，N-双(2-氯-乙基)磷酰胺氮芥(Cl-IPM)和N，N-双(2-溴-乙基)磷酰胺氮芥(Br-IPM)。在暴露72小时之后，UT-SCC-14肿瘤细胞中SU025-04和SU046-04的细胞毒性IC50值分别为0.05±0.01μmol dm-3和0.02±0.01μmol dm-3。数据显示来自患有过度表达CYP1B1的HNSCC的癌症患者的UT-SCC14细胞系中的SU025-04和SU046-04的强大细胞毒性。
在包含与UT-SCC-14相同条件下培养的UT-SCC-8、UT-SCC-9和UTSCC-10的3种另外的原发性头和颈细胞系中评价SU025-04和SU046-04。对于SU025-04，在暴露72小时之后，以μmol dm-3计的细胞毒性IC50为UT-SCC-8(0.31±0.06)、UT-SCC-9(0.43±0.07)、UT-SCC-10(0.22±0.03)。对于SU025-04，在暴露72小时之后，以μmoldm-3计的细胞毒性IC50为UT-SCC-8(0.06±0.02)、UT-SCC-9(0.15±0.02)、UT-SCC-10(0.09±0.03)。数据表明SU046-04在整个组成性表达CYP1B1的原发性头和颈细胞系中是比SU025-04更强大的细胞毒素。
将本发明的一种化合物SU037-04设计为当由CYP1B1激活时释放喜树碱。对于SU037-04，在暴露72小时之后，各个原发性肿瘤细胞系的以μmol dm-3计的细胞毒性IC50为UT-SCC-8(0.56±0.04)、UT-SCC-9(0.22±0.08)、UT-SCC-10(0.21±0.04)、UT-SCC-14(0.12±0.07)。
将本发明的一种化合物SU048-04设计为当由CYP1B1激活时释放吉西他滨。在暴露72小时之后，UT-SCC-14肿瘤细胞系中SU048-04的细胞毒性IC50为0.94±0.02μmol dm-3。在10μmol dm-3下，使用α-萘黄酮(有效的CYP1B1抑制剂)共同孵化将SU048-04的毒性显著降低至12.2±0.2μmol dm-3，由此提供了前药由细胞中组成性表达的CYP1B1活化的间接证据。
实施例5：组成性表达CYP1B1的原发性人肿瘤异种移植物模型中SU046-04的抗肿瘤活性
将原发性UTSCC-14细胞系3×106皮下移植进入裸小鼠的胁腹。当肿瘤体积为100mm3至150mm3时，将小鼠随机化为10只动物每组。相对单独的媒介物以12、25和50mg/Kg的PBS腹膜内给予SU046-04，进行2个循环：每5天/停止2天。使用圆规每4天检测肿瘤体积。与单独的媒介物相比，在所有三个治疗组别中观察到肿瘤生长的显著抑制。在28天时肿瘤生长延迟为12mg/Kg下31％、25mg/Kg下为56％且50mg/Kg下为90％，具有4/10的完全响应。在最高暴露250mg/Kg之后，未观察到不良反应或显著的体重减小。
Figure BPA00001482463601091
Figure BPA00001482463601101
Figure BPA00001482463601111

Claims (49)

1.通式(I)化合物或其药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物：
Figure FPA00001482463500011
(其中：
X1使得-X1-X2为-O-X2、-S-X2、-SO2-O-X2、-SO2NZ10-X2、共轭的烯烃甲氧基或共轭的烯烃甲硫基、共轭的烯烃甲基SO2-O、共轭的烯烃甲基-SO2NZ10或为通式：
Figure FPA00001482463500012
-X2不存在或使得X1-X2-效应子为下列通式中的一个：
Figure FPA00001482463500013
Figure FPA00001482463500021
各个n和m独立地为0或1；
P为0，1或2；
X3为氧或硫，且此外当m＝0时，X3可为SO2-O、SO2NZ10、共轭的烯烃甲氧基、共轭的烯烃甲硫基、共轭的烯烃甲基-SO2-O或共轭的烯烃甲基-SO2NZ10；
各个Y1、Y2和Y3独立地为碳或氮，其中如果Y1为氮，则Z1不存在，如果Y2为氮，则Z3不存在，且如果Y3为氮，则Z5不存在；
Y4为氧、碳或氮原子、亚砜或砜；
-Y5-为(i)单键、(ii)＝CH-，其中＝CH-中的双键＝与Y4连接，或(iii)-CH2-或-CH2CH2-，或(ii)至(iii)中的一种，其中(ii)中的氢原子或者(iii)中的一个或多个氢原子由取代基Z11取代，其中Z11独立地选自烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、卤素、羧基、甲酰基、硝基和氰基；
在存在的情况下，各个Z1-Z4独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、卤素、羧基、甲酰基、硝基和氰基；且在存在的情况下，Z5独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、羧基、甲酰基、硝基和氰基，或Z2和Z3、Z3和Z4以及Z4和Z5中的一组与其连接的原子一起形成与所述化合物的剩余部分稠合的芳环，条件是Z1、Z2和Z4中的至少一个是氢；
Z6选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基和芳烷基；
Y6都不是氮原子或Y6中的一个或两个可为氮原子而剩余的为碳原子；
各个Z7独立地为氢、烷基或芳基；
各个Z8独立地选自氢、吸电子基团、未取代的C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、未取代的C1-C6烷氧基和取代的C1-C6烷氧基，其中所述取代的烷基或烷氧基由一个或多个基团取代，所述基团选自醚、氨基、单取代或双取代的氨基、环状C1-C5烷氨基、咪唑基、C1-C6烷基哌嗪基、吗啉基、巯基、硫醚、四唑、羧酸、酯、酰氨基、单取代或双取代的酰胺基、N-连接的酰胺、N-连接的磺酰胺、磺酰氧基、磺酸酯、磺酰基、磺酰氧基、亚磺酸酯、亚磺酰基、膦酰基氧基、磷酸酯和磺酰胺；
各个Z9独立地为氧或硫；
Z10为氢或烷基，例如C1-4烷基；
效应子是具有药理学或诊断功能的分子)。
2.如权利要求1所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中所述各个Z7为氢。
3.如权利要求1或2所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中X1为氧。
4.如权利要求1至3中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Y1为碳。
5.如权利要求4所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z1为烷氧基或氨基。
6.如权利要求4所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z1为氢。
7.如权利要求1至6中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z2和/或Z4为氢。
8.如权利要求1至7中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Y4为氮、氧或硫。
9.如权利要求8所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Y4为氧或硫且p＝0。
10.如权利要求9所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Y4为氧。
11.如权利要求1至10中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中-Y5-为单键。
12.如权利要求1至11中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Y2和Y3各自为碳。
13.如权利要求12所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z3和Z5各自为烷氧基或氨基。
14.如权利要求12所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z3和Z5各自为C1-6烷氧基。
15.如权利要求12所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z3和Z5各自为甲氧基。
16.如权利要求1至12中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z3选自氢、烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、烷氧基、烯氧基、炔氧基、芳氧基、芳烷氧基、烷硫基、烯硫基、炔硫基、芳硫基、芳烷硫基、氨基、羟基、硫基、羧基、甲酰基、硝基和氰基。
17.如权利要求1至16中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中X1使得-X1-X2为-O-X2、-S-X2、-SO2-OX2或-SO2NZ10-X2。
18.如权利要求1至17中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中X1使得-X1-X2为-O-X2。
19.如权利要求1至18中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中存在X2。
20.如权利要求1至18中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中X2不存在或X1-X2-效应子为通式：
Figure FPA00001482463500061
21.如权利要求19或20所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中n和m中的一个为0，或n和m均为0。
22.如权利要求19至21中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中所述各个Z9为氧。
23.如权利要求19至22中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Y6都不是氮，或Y6中的一个是氮。
24.如权利要求1至18中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中X2不存在。
25.如权利要求1至24中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中效应子是细胞毒性剂或细胞生长抑制剂。
26.如权利要求25所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中效应子通过氧或硫原子与所述化合物的剩余部分连接，且-效应子是通式(II)：
Figure FPA00001482463500071
(其中：
Z12为氧或硫；
各个X4独立地为氧、硫或NZ13，其中各个-Z13独立地为-(CH2)2-Z14、-烷基或-氢；以及
各个Z14独立地为氯、溴、碘或甲磺酸酯)。
27.如权利要求26所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中Z12为氧。
28.如权利要求26或27所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中各个X4为NZ13。
29.如权利要求28所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中各个Z13为氢。
30.如权利要求26至29中任一权利要求所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中各个Z14为溴或氯。
31.如权利要求30所述的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中各个Z14为溴。
32.包含权利要求1至31中任一权利要求所定义的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物以及药物可接受的载体的组合物。
33.用于药物的权利要求1至31中任一权利要求所定义的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物。
34.用于增殖性疾病状态的方法或治疗或预防的权利要求1至31中任一权利要求所定义的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物。
35.如权利要求34所述的用于方法或治疗或预防的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中所述增殖性疾病状态为恶化前细胞增殖或恶性细胞增殖、癌症、白血病、牛皮癣、骨病、纤维增殖性病症或动脉粥样硬化。
36.如权利要求35所述的用于方法或治疗或预防的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物，其中所述增殖性疾病状态选自膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、肾癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、前列腺癌和皮肤癌。
37.治疗或预防增殖性疾病状态的方法，所述方法包括给予有需要的个体治疗或预防有效量的权利要求1至31中任一权利要求所定义的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物。
38.权利要求1至31中任一权利要求所定义的化合物或药物可接受的盐、酯、酰胺或溶剂化物在制备用于增殖性疾病状态的方法或治疗或预防的药物中的用途。
39.如权利要求1至24中任一权利要求所述的化合物，其中所述效应子是具有诊断功能的分子。
40.如权利要求39所述的化合物，其中所述效应子是荧光团。
41.如权利要求40所述的化合物，其中所述荧光团选自香豆素、试卤灵、荧光素和若丹明。
42.如权利要求41所述的化合物，其中所述荧光团是香豆素。
43.识别由细胞色素P450酶特异性激活的化合物的方法，所述方法包括的步骤为：
(a)使权利要求40所定义的一组化合物与所述细胞色素P450酶接触并确定所述接触是否导致从所述组的一种或多种化合物中释放所述荧光团；
(b)使所述的一组化合物与对照组织、组织或细胞提取物或酶接触，并确定所述接触是否导致从所述组的一种或多种化合物中释放所述荧光团；以及
(c)识别由所述细胞色素P450特异性激活的所述化合物，将所述化合物作为在步骤(a)中释放但在步骤(b)中不释放或仅释放非常少程度的所述荧光团的所述一组化合物中的任何化合物。
44.如权利要求43所述的方法，其中与步骤(b)相比，在步骤(a)中由所述P450酶特异性激活的所述化合物释放至少10倍多的所述荧光团。
45.如权利要求43或44所述的方法，其中所述一组化合物包含至少10种不同的化合物。
46.如权利要求43至45中任一权利要求所述的方法，其中所述一组化合物包含至少20种不同的化合物。
47.如权利要求43至46中任一权利要求所述的方法，其还包括的步骤为：
(d)除了所述荧光团由具有药理学功能的分子取代之外，模拟与在步骤(c)中识别的那些化合物结构相同的化合物用于与所述细胞色素P450酶的活性位结合；以及
(e)合成预测是用于所述细胞色素P450酶的底物的步骤(d)中模拟的化合物。
48.如权利要求43至47中任一权利要求所述的方法，其中所述细胞色素P450酶选自CYP1B1、CYP2S1、CYP2W1、CYP4Z1及其等位基因变体。
49.用于确定权利要求1所述的化合物对治疗癌症是否有效的方法，其中效应子是具有药理学功能的分子，所述方法包括给予患有癌症的动物所述化合物，其中所述癌症或者由被修饰以组成性表达细胞色素P450酶的重组细胞的移植导致，或者由直接从肿瘤或癌症中获取的组织或来自早期通道细胞系的细胞的移植导致，所述早期通道细胞系源自直接从肿瘤或癌症中获取的组织，所述组织或细胞以与来自其起源的肿瘤或癌症的那些类似的水平表达所述细胞色素P450酶。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102993157A (zh) * 2012-11-21 2013-03-27 上海交通大学 α-萘黄酮衍生物及其制备方法、用途
CN112135635A (zh) * 2018-02-02 2020-12-25 马福瑞克斯肿瘤学股份有限公司 吉西他滨衍生物的新型小分子药物偶联物
CN112135634A (zh) * 2018-02-02 2020-12-25 马福瑞克斯肿瘤学股份有限公司 单磷酸吉西他滨的小分子药物偶联物
CN112409368A (zh) * 2020-11-23 2021-02-26 昆明医科大学 一类c-4位取代香豆素类化合物及其制备方法和应用
CN115697971A (zh) * 2020-06-10 2023-02-03 美国安进公司 环丁基二氢喹啉磺酰胺化合物

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0907551D0 (en) * 2009-05-01 2009-06-10 Univ Dundee Treatment or prophylaxis of proliferative conditions
PL223225B1 (pl) * 2012-02-21 2016-10-31 Centrum Badań Molekularnych i Makromolekularnych Polskiej Akademii Nauk Halogenopochodne benzo[b]furanów, ewentualnie w postaci farmaceutycznie dopuszczalnej soli oraz zastosowanie halogenopochodnych benzo[b]furanów
JP6411523B2 (ja) * 2013-10-11 2018-10-24 ビヨンドスプリング インコーポレイテッド プリナブリン及びタキサンの組合せがん治療
CA2945671A1 (en) * 2014-04-15 2015-10-22 Dow Agrosciences Llc Metalloenzyme inhibitor compounds as fungicides
CA2945674A1 (en) 2014-04-15 2015-10-22 Dow Agrosciences Llc Metalloenzyme inhibitor compounds as fungicides
MX2017011374A (es) 2015-03-06 2018-01-23 Beyondspring Pharmaceuticals Inc Método de tratamiento de cáncer asociado con una mutación de ras.
RU2728796C2 (ru) 2015-03-06 2020-07-31 Бейондспринг Фармасьютикалс, Инк. Способ лечения опухоли головного мозга
EP3334726B1 (en) 2015-07-13 2022-03-16 Beyondspring Pharmaceuticals, Inc. Plinabulin compositions
RU2753543C1 (ru) 2016-02-08 2021-08-17 Бейондспринг Фармасьютикалс, Инк. Композиции, содержащие тукаресол или его аналоги
CN118304304A (zh) 2016-06-06 2024-07-09 大连万春布林医药有限公司 用于减少中性粒细胞减少症的组合物和方法
US20200048259A1 (en) * 2016-10-12 2020-02-13 Merck Sharp & Dohme Corp. Kdm5 inhibitors
JP2020503363A (ja) 2017-01-06 2020-01-30 ビヨンドスプリング ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド チューブリン結合化合物およびその治療的使用
KR20240110997A (ko) 2017-02-01 2024-07-16 비욘드스프링 파마수티컬스, 인코포레이티드. 호중구감소증의 감소 방법
CA3089226A1 (en) 2018-01-24 2019-08-01 Beyondspring Pharmaceuticals, Inc. Composition and method for reducing thrombocytopenia via the administration of plinabulin
GR1009958B (el) * 2019-04-24 2021-03-18 ΕΝΟΡΑΣΙΣ ΑΝΩΝΥΜΗ ΕΜΠΟΡΙΚΗ ΕΤΑΙΡΕΙΑ ΦΑΡΜΑΚΕΥΤΙΚΩΝ ΚΑΙ ΙΑΤΡΙΚΩΝ ΥΛΙΚΩΝ ΚΑΙ ΜΗΧΑΝΗΜΑΤΩΝ με δ.τ. "ΕΝΟΡΑΣΙΣ Α.Ε." Παραγωγα γεμσιταβινης και μεθοδοι δημιουργιας παραγωγων γεμσιταβινης
US11753413B2 (en) 2020-06-19 2023-09-12 Incyte Corporation Substituted pyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazine compounds as JAK2 V617F inhibitors
WO2021257857A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Incyte Corporation Naphthyridinone compounds as jak2 v617f inhibitors
KR20230057341A (ko) 2020-07-02 2023-04-28 인사이트 코포레이션 Jak2 v617f 억제제로서 삼환계 우레아 화합물
WO2022006456A1 (en) 2020-07-02 2022-01-06 Incyte Corporation Tricyclic pyridone compounds as jak2 v617f inhibitors
WO2022046989A1 (en) 2020-08-27 2022-03-03 Incyte Corporation Tricyclic urea compounds as jak2 v617f inhibitors
WO2022140231A1 (en) 2020-12-21 2022-06-30 Incyte Corporation Deazaguaine compounds as jak2 v617f inhibitors
JP2024507935A (ja) 2021-02-25 2024-02-21 インサイト・コーポレイション Ｊａｋ２ ｖ６１７ｆ阻害剤としてのスピロ環式ラクタム
AU2023235313A1 (en) 2022-03-17 2024-10-03 Incyte Corporation Tricyclic urea compounds as jak2 v617f inhibitors

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0247381A2 (en) * 1986-04-30 1987-12-02 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. 5-flurorouracil derivatives
EP0363796A1 (de) * 1988-10-13 1990-04-18 BASF Aktiengesellschaft Heterocyclische substituierte Alkoxycumarine, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende therapeutische Mittel
WO2006009826A1 (en) * 2004-06-18 2006-01-26 3M Innovative Properties Company Aryloxy and arylalkyleneoxy substituted thiazoloquinolines and thiazolonaphthyridines
CN1894244A (zh) * 2000-12-08 2007-01-10 3M创新有限公司 芳基醚取代的咪唑并喹啉化合物
CN101094830A (zh) * 2004-12-30 2007-12-26 塞诺菲—安万特德国有限公司 用作cxcr2抑制剂、治疗炎症的稠合双环甲酰胺衍生物

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU389090A1 (ru) * 1971-05-17 1973-07-05 Ташкентский государственный медицинский институт Библиотека
US4526988A (en) 1983-03-10 1985-07-02 Eli Lilly And Company Difluoro antivirals and intermediate therefor
US5229272A (en) 1989-04-25 1993-07-20 Igen, Inc. Catalytic antibody components
CA1264738A (en) 1984-12-04 1990-01-23 Eli Lilly And Company Treatment of tumors in mammals
ZA859008B (en) 1984-12-04 1987-07-29 Lilly Co Eli The treatment of tumors in mammals
US6702705B1 (en) 1988-05-04 2004-03-09 Igen International, Inc. Prodrugs activated by targeted catalytic proteins
WO1989011484A1 (en) * 1988-05-25 1989-11-30 Research Corporation Technologies, Inc. Phosphoramides useful as antitumor agents
DE3834861A1 (de) 1988-10-13 1990-04-19 Basf Ag Arylalkoxycumarine, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende therapeutische mittel
US6258360B1 (en) 1989-05-04 2001-07-10 Igen International, Inc. Prodrugs activated by targeted catalytic proteins
US6060592A (en) 1990-01-11 2000-05-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Pyrimidine nucleoside compounds and oligonucleoside compounds containing same
US5401838A (en) 1992-06-22 1995-03-28 Eli Lilly And Company Stereoselective fusion glycosylation process for preparing 2'-deoxy-2',2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides
WO1994029312A1 (en) * 1993-06-08 1994-12-22 Cancer Research Campaign Technology Limited O6-substituted guanine derivatives, a process for their preparation and their use in treating tumour cells
DK0795334T3 (da) * 1996-03-12 2006-06-06 Sanofi Aventis Deutschland Nye prodrugs til behandling af tumorer og betændelsessygdomme
WO1998011484A1 (fr) 1996-09-13 1998-03-19 Hitachi, Ltd. Processeur de commande a memoire d'historique
NZ336676A (en) 1997-01-24 2000-01-28 Norsk Hydro As Gemcitabine esters or amides useful as anti-cancer and anti-viral agents
NZ330360A (en) 1997-06-02 1999-03-29 Hoffmann La Roche 5'-deoxy-cytidine derivatives, their manufacture and use as antitumoral agents
TW434252B (en) 1997-07-23 2001-05-16 Univ Georgia Res Found Process for the preparation of 2'-fluoro-5-methyl-β-L-arabino-furanosyluridine
AU2173899A (en) 1998-02-06 1999-08-23 De Montfort University Hydroxylation activated prodrugs
AU2531599A (en) 1998-02-12 1999-08-30 De Montfort University Hydroxylation activated drug release
DE19834751A1 (de) * 1998-08-01 2000-02-03 Boehringer Ingelheim Pharma Disubstituierte bicyclische Heterocyclen, ihre Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
US6175001B1 (en) 1998-10-16 2001-01-16 The Scripps Research Institute Functionalized pyrimidine nucleosides and nucleotides and DNA's incorporating same
AU2001252168B2 (en) * 2000-03-16 2007-07-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Carboxylic acid derivatives as ip antagonists
GB0007401D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Cancer Res Campaign Tech Substituted chalcones as therapeeutic compounds
US6875751B2 (en) 2000-06-15 2005-04-05 Idenix Pharmaceuticals, Inc. 3′-prodrugs of 2′-deoxy-β-L-nucleosides
US7115585B2 (en) 2000-08-21 2006-10-03 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Compositions for treating epithelial and retinal tissue diseases
JP3692927B2 (ja) 2000-11-07 2005-09-07 日本電気株式会社 ファクシミリ装置
WO2002070500A1 (en) * 2001-03-02 2002-09-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Alkoxycarbonylamino benzoic acid or alkoxycarbonylamino tetrazolyl phenyl derivatives as ip antagonists
MXPA04001785A (es) * 2001-09-14 2004-07-08 Bayer Ag Benzofurano y derivados de dihidrobenzofurano utiles como agonistas de beta-3 adrenoreceptores.
EP1300403A1 (en) * 2001-10-02 2003-04-09 Aventis Pharma S.A. Process for the manufacture of hypoxyxylerone derivatives
GB0123780D0 (en) 2001-10-03 2001-11-21 Cancer Res Ventures Ltd Substituted chalcones as therapeutic agents
GB0123777D0 (en) 2001-10-03 2001-11-21 Cancer Res Ventures Ltd Substituted chalcones as therapeutic agents
EP1567169A4 (en) 2002-11-04 2009-10-21 Xenoport Inc GEMCITABINE PROMOTERS, THEIR PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND USES THEREOF
KR20110079783A (ko) 2003-02-19 2011-07-07 예일 유니버시티 항-바이러스 뉴클레오시드 유사체 및 바이러스 감염, 특히 에이치아이브이 감염의 치료방법
ZA200507752B (en) * 2003-03-28 2007-01-31 Threshold Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for treating cancer
CA2548513A1 (en) * 2003-12-04 2005-07-07 Wyeth Biaryl sulfonamides and methods for using same
JP5350591B2 (ja) 2003-12-22 2013-11-27 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー フルオロシチジン誘導体ための方法
EP3075247B1 (en) 2004-02-02 2022-10-12 BioSight Ltd. Conjugates for cancer therapy and diagnosis
GB0421294D0 (en) 2004-09-24 2004-10-27 Angiogene Pharm Ltd Bioreductively-activated prodrugs
KR100874052B1 (ko) 2004-12-17 2008-12-12 일라이 릴리 앤드 캄파니 젬시타빈의 아미드 전구약, 그의 조성물 및 그의 용도
NO322682B1 (no) 2005-03-18 2006-11-27 Clavis Pharma Asa Anvendelse av gemcitabinderivater for fremstilling av orale doseringsformer ved kreftbehandling, samt slike orale doseringsformer
RU2008113210A (ru) * 2005-10-06 2009-10-10 Санофи-Авентис (Fr) 4-окси-n-[1, 3, 4]-тиадиазол-2-илбензолсульфонамиды, способы их получения и их применение в качестве фармацевтических средств
CA2640463A1 (en) 2006-02-06 2007-10-18 Dr. Reddy's Laboratories Ltd. Preparation of gemcitabine
US20080004237A1 (en) 2006-02-23 2008-01-03 Tam Joemy C Polysacchocride prodrug of 5-fluorouracil (5-FU) with enhanced target specificity for galectin-3 expressing cancers
US20070225248A1 (en) 2006-03-21 2007-09-27 Clavis Pharma As Oral dosage forms of gemcitabine derivatives
GB0722769D0 (en) * 2007-11-21 2008-01-02 Biolipox Ab New compounds
CA2681222C (en) 2007-03-19 2016-07-26 State Of Oregon Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon Mannich base n-oxide drugs
CN100475832C (zh) 2007-05-31 2009-04-08 南京卡文迪许生物工程技术有限公司 一种新颖的高立体选择性合成吉西他滨工艺及中间体
JO2778B1 (en) 2007-10-16 2014-03-15 ايساي انك Certain vehicles, installations and methods
EP2217247A4 (en) 2007-11-06 2011-12-28 Pharmaessentia Corp NEW SYNTHESIS OF BETA NUCLEOSIDES
GB0907551D0 (en) 2009-05-01 2009-06-10 Univ Dundee Treatment or prophylaxis of proliferative conditions

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0247381A2 (en) * 1986-04-30 1987-12-02 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. 5-flurorouracil derivatives
EP0363796A1 (de) * 1988-10-13 1990-04-18 BASF Aktiengesellschaft Heterocyclische substituierte Alkoxycumarine, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende therapeutische Mittel
CN1894244A (zh) * 2000-12-08 2007-01-10 3M创新有限公司 芳基醚取代的咪唑并喹啉化合物
WO2006009826A1 (en) * 2004-06-18 2006-01-26 3M Innovative Properties Company Aryloxy and arylalkyleneoxy substituted thiazoloquinolines and thiazolonaphthyridines
CN101094830A (zh) * 2004-12-30 2007-12-26 塞诺菲—安万特德国有限公司 用作cxcr2抑制剂、治疗炎症的稠合双环甲酰胺衍生物

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102993157A (zh) * 2012-11-21 2013-03-27 上海交通大学 α-萘黄酮衍生物及其制备方法、用途
CN112135635A (zh) * 2018-02-02 2020-12-25 马福瑞克斯肿瘤学股份有限公司 吉西他滨衍生物的新型小分子药物偶联物
CN112135634A (zh) * 2018-02-02 2020-12-25 马福瑞克斯肿瘤学股份有限公司 单磷酸吉西他滨的小分子药物偶联物
CN115697971A (zh) * 2020-06-10 2023-02-03 美国安进公司 环丁基二氢喹啉磺酰胺化合物
CN112409368A (zh) * 2020-11-23 2021-02-26 昆明医科大学 一类c-4位取代香豆素类化合物及其制备方法和应用

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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

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