CN102439455B

CN102439455B - 作为肺癌标志物的cybp

Info

Publication number: CN102439455B
Application number: CN201080018804.4A
Authority: CN
Inventors: H.安德列斯; J.卡尔; J.克洛伊克纳; M.罗伊斯勒; M.塔克; M.希尔罗尔夫
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2009-05-15
Filing date: 2010-05-17
Publication date: 2015-01-07
Anticipated expiration: 2030-05-17
Also published as: JP5571171B2; CN102439455A; ES2493069T3; CA2761873A1; EP2430450A1; JP2012526976A; EP2430450B1; US8951738B2; WO2010130839A1; WO2010130839A4; HK1165204A1; US20120196303A1

Abstract

本发明涉及肺癌的评估。它公开了蛋白CYBP在肺癌评估中的用途。它还涉及使用自个体衍生的液体样品在体外评估肺癌的方法，其通过测量所述样品中的CYBP来进行。CYBP的测量可以例如用于肺癌患者的早期检测或随访。

Description

作为肺癌标志物的CYBP

本发明涉及帮助评估肺部癌症或肺癌(＝LC)，且特别是帮助评估非小细胞肺癌(NSCLC)的方法。它公开了“钙周期蛋白结合蛋白”(CYBP)作为LC，特别是NSCLC的标志物的用途。此外，它特别涉及从自个体衍生的液体样品来评估肺癌的方法，其通过测量所述样品中的CYBP来进行。例如，CYBP的测量可以用于肺癌的早期检测或经历手术的患者的监护。

尽管在检测和治疗方面有进展，癌症仍然是主要的公共卫生挑战。在各种类型的癌症中，LC是西方世界常见的癌症，并且是癌症相关死亡的最常见原因之一。这很大部分由于疾病的早期检测的诊断缺口。LC在它的早期阶段中主要是无症状的。所有肺癌的大多数在晚期阶段时检出，此时疾病已经变得不能手术。

大部分LC肿瘤可以分成小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。SCLC占所有肺癌病例的约20-25％。SCLC是LC的攻击性神经内分泌类型，并且具有非常差的预后，即使在早期阶段中被检出。SCLC很少能通过切除术来治愈性治疗。由于疾病进展的速度，SCLC一般仅用两期来分类：即，有限的和大范围的疾病，而不用更复杂的TNM分期系统(见下文)。约75-80％的LC病例被分组到NSCLC的类别中，包括鳞状细胞癌(癌＝CA)、腺CA(包括腺泡CA、乳头状CA、支气管肺泡肿瘤、实体瘤和混合亚型的亚类)、和大细胞癌(包括巨细胞瘤、透明细胞CA、腺鳞CA和未分化的CA的亚类)。如果在晚期阶段时检出，NSCLC也具有非常差的预后。癌症的分期是疾病就程度、进展、细胞类型和肿瘤级别而言的分类。它将癌症患者分组，从而关于预后和治疗选择可以进行普遍化。

当今，TNM系统是根据癌症的解剖学程度最广泛使用的分类系统。它代表了国际公认的、统一的分期系统。其中有三种基本变量：T(原发性肿瘤的程度)、N(区域性淋巴结的状态)和M(远距离转移的存在或缺失)。由UICC(国际抗癌联合会)编，1997(Sobin，L.H.和Fleming，I.D.，TNM 80(1997)1803-4)出版了TNM标准。

原发性肿瘤的外科切除术作为早期NSCLC的选择治疗是广泛接受的。随着NSCLC的进展，且更具体地，从IIIa(T3N1M0、T1N2M0、T2N2M0、T3N2M0)到IIIb(T4N0M0、T4N1M0、T4N2M0)期的转变，促成了内科医生的方法方面的显著变化。然而，如果在更早期阶段期间检出癌症(Ia-IIIa；优选最多到T3N1M0期)，五年存活率在35％和80％之间变化。在Ia期((T1N0M0)；小肿瘤大小，无转移)检出具有明显最好的预后，五年存活率达80％。

如果有的话，手术很少用于NSCLC的IIIb-IV期的管理。IV期对应于远距离转移，即疾病扩散超出肺和区域淋巴结。在后面的III和IV期五年存活率分别跌至小于15％和1％之间。

特别重要的是，NSCLC的早期诊断翻译为好得多的预后。在早至Ia(T1N0M0)、Ib(T2N0M0)、IIa(T1N1M0)、IIb(T3N0M0)、和IIIa(T3N1M0)期诊断的患者，如果适当地治疗，有高达80％的机会诊断后存活5年。这必须与一旦已存在远距离转移诊断的患者低于1％的5年存活率相比较。

在本发明的意义上，LC的早期评估是指在Ia和IIIa之间的肿瘤阶段的评估，如上文所定义的。

优选的是，在Ia和IIIa之间的阶段评估LC。

大多数肺癌在它们变得有症状时检出。当前的检测方法包括胸部x-射线、螺旋式计算机断层摄影术、痰细胞学和支气管镜检术。然而，对于这些手段用于大规模筛查的适用性存在争论。

肺癌的许多血清肿瘤标志物处于临床使用之中。细胞角蛋白19的可溶性30kDa片段(CYFRA21-1)、癌胚发生抗原(CEA)、神经元特异的烯醇酶(NSE)、和鳞状细胞癌抗原(SCC)是最主要的LC标志物。然而，它们无一满足筛查工具所需要的灵敏性和特异性的标准(Thomas，L.，Labor und Diagnose(2000)TH Books Verlagsgesellschaft，Frankfurt/Main，Germany)。

为了具有临床实用性，作为单一标志物的新的诊断标志物应当与本领域已知的其它标志物相当，或更好。或者，新的标志物应当产生诊断灵敏性和/或特异性方面的进展，如果分别地单独使用或与一种或多种其它标志物组合使用的话。测试的诊断灵敏性和/或特异性通过它的接受者操作特征来最好地评定，其将在下文详细描述。

全血、血清或血浆是在临床常规中最广泛使用的样品来源。会帮助可靠的癌症检测或提供早期预后信息的早期LC肿瘤标志物的鉴定可以产生将大大地帮助这种疾病的诊断和管理的方法。因而，存在着急迫的临床需求来改善LC的体外评估。改善LC的早期诊断是特别重要的，因为与在疾病的进展期诊断的那些患者相比，早期诊断的患者存活机会要高得多。特别地，迫切需要可靠地监测LC治疗、在LC方面筛选个体及在LC治疗后测试肺癌复发的方法。

近来已经综述了生物化学标志物在肺癌中的临床实用性(Duffy，M.J.，Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences 38(2001)225-262)。

当前认为CYFRA 21-1是目前已知的最好的肺癌肿瘤标志物。虽然没有器官特异性，它主要地在肺组织中发现。在针对其它良性肺部疾病的95％的特异性时，CYFRA21-1对于肺癌的灵敏性被描述为在46％-61％之间。CYFRA 21-1的血清水平升高还与显著的良性肝病、肾机能不全和侵入性膀胱癌相关。CYFRA 21-1测试推荐用于手术后的治疗监护。

CEA属于癌胚抗原的组，通常在胚胎发生期间产生。CEA不是器官特异性的，并且主要用于结肠直肠癌的监测。除了恶性肿瘤之外，还有几种良性的疾病诸如硬化、支气管炎、胰腺炎和自体免疫性疾病与升高的CEA血清水平有关。在针对良性肺部疾病的95％的特异性时，它对肺癌的灵敏性报告为29-44％。CEA的一个优选用途是肺癌的治疗监护。

NSE是SCLC的肿瘤标志物。一般地，发现升高的NSE血清水平与神经外胚层和神经内分泌肿瘤关联。还在具有良性肺部疾病和脑部疾病，诸如脑膜炎或脑部的其它炎性疾病，以及对头部的外伤性损伤的患者中发现升高的血清水平。虽然在95％特异性时对SCLC的灵敏性报告为60-87％，但是NSE测试对于NSCLC的性能是差的(7-25％的灵敏性)。NSE推荐用于SCLC的治疗监护。

proGRP是在SCLC的检测和监测中有用的肿瘤标志物。还在患有非恶性肺部/胸膜疾病，诸如特发性肺纤维化或结节病的患者中发现升高的血清水平。虽然proGRP在SCLC领域中的灵敏性(在95％特异性时)报告为47-86％，但是proGRP测试在NSCLC领域中的性能是差的，因为灵敏性报告为10％以下。

SCC最初在宫颈的鳞状细胞CA中鉴定。SCC对LC的灵敏性一般是低的(18-27％)。因此，认为SCC测试不适合于筛查。然而，由于对鳞状细胞CA的更高的灵敏性，SCC的一个优选用途是治疗监护，虽然CYFRA 21-1一般表现得更好。

在免疫组织化学调查中，Zhai等(Journal of Histochemistry andCytochemistry，第56卷(8)：765-772，2008)已经通过用单克隆抗CacyBP抗体的免疫组织化学染色分析了一大批人正常组织和癌中的CacyBP蛋白表达谱。在此研究中，在多个腺癌和鳞癌中观察到CacyBP染色。阳性染色的百分比在鼻咽癌(71％)、胰腺癌(70％)、乳腺癌(63％)、和骨源性肉瘤(63％)中最高。比较而言，仅约45％的肺腺癌样品和50％的肺鳞癌样品得到染色。

关于标志物谱和针对改善的肺癌诊断，公开了一种方法(Schneider，J.等Int.J.Clin.Oncol.7(2002)145-151)，其使用基于模糊逻辑的分类算法来组合CYFRA 21-1、NSE和作为一般炎症标志物的C-反应性蛋白(CRP)的血清水平。作者报告了在95％的特异性时92％的灵敏性。然而，在此研究中，例如CYFRA21-1作为单一肿瘤标志物的灵敏性报告为在95％特异性时的72％，其显著高于许多其它报告的研究。Duffy，M.J.，于Critical Reviews in ClinicalLaboratory Sciences 38(2001)225-262报告了46％和61％之间的灵敏性。这种由Schneider等实现的异乎寻常的高性能引起了一些怀疑，并且可能是由于几个事实。首先，对照患者的集体似乎比患者集体年轻，即，组不是良好地年龄匹配的，而且患者集体包含了许多的晚期。第二且更为关键的是，算法的性能是对于如下的训练集(training set)的样品检查的，所述训练集的样品用于模糊逻辑合格者的确定。因此，这些合格者严格来说是对这个集合“修整得到的”，并且不能应用于独立的验证集。在正常的情况下，必须预期的是，同样的算法适用于更大的、独立的以及良好平衡的验证集会产生显著降低的总体性能。

本发明的任务是调查是否可以鉴定出可以在评估LC中使用的生物化学标志物。

令人惊讶地，已经发现了标志物CYBP(钙周期蛋白结合蛋白、CacyBP、Siah-相互作用蛋白、S100A6-结合蛋白)，特别是人CYBP(hCYBP)的使用可以至少部分克服当前本领域现有技术已知的标志物的一些问题。

本发明涉及体外评估肺癌的方法，包括测量样品中CYBP的存在和/或浓度，以及将所述测量结果，特别是所测定的浓度用于肺癌的评估。

在优选的实施方案中，可以出于监测及筛选目的而使用新的标志物CYBP。

在患者监测中使用时，依照本发明的诊断方法可以帮助评估肿瘤负荷、治疗的功效和患者随访中的肿瘤复发。CYBP的水平升高与肿瘤负荷正相关。在化学疗法后，CYBP的短期(几小时至14天)的升高可以充当肿瘤细胞死亡的指标。在患者的随访(3个月至10年)中，可以使用CYBP的升高作为肿瘤复发的指标。

在一个优选的实施方案中，可以出于筛选目的而使用依照本发明的诊断方法。即，使用它来评估没有LC的先前诊断的受试者，其通过测量CYBP的水平，并将测量到的水平与LC的存在或不存在相关联来进行。

本发明还涉及通过生物化学标志物来在体外评估LC的方法，包括测量样品中CYBP和一种或多种其它LC标志物的存在和/或浓度，并将测量结果，特别是测定到的浓度用于LC的评估。优选的是，所述一种或多种其它LC标志物选自CYFRA 21-1、CEA、NSE、proGRP和SCC。

本发明还涉及包含CYBP和一种或多种其它标志物的标志物组在LC评估中的用途，其中优选的其它标志物选自CYFRA 21-1、CEA、NSE、proGRP和SCC。

在一个优选的实施方案中，本发明还涉及至少包含CYBP和CYFRA 21-1的标志物组在LC评估中的用途。

本发明还涉及至少包含CYBP和CEA的标志物组在LC评估中的用途。

本发明还涉及至少包含CYBP和SCC的标志物组在LC评估中的用途。

本发明进一步涉及进行依照本发明的方法的试剂盒，其至少包含特异性测量CYBP所需要的试剂和任选地用于进行所述测量的辅助试剂。

本发明还提供了进行依照本发明的方法的试剂盒，其至少包含分别特异性测量CYBP和CYFRA 21-1所需要的试剂和任选用于进行所述测量的辅助试剂。

本发明还提供了进行依照本发明的方法的试剂盒，其至少包含特异性测量CYBP和一种或多种其它肺癌标志物所需要的试剂。

本发明还提供了进行依照本发明的方法的试剂盒，其至少包含分别特异性测量CYBP和CEA所需要的试剂和任选用于进行所述测量的辅助试剂。

本发明还提供了进行依照本发明的方法的试剂盒，其至少包含分别特异性测量CYBP和SCC所需要的试剂和任选用于进行所述测量的辅助试剂。

在一个优选的实施方案中，本发明涉及体外评估肺癌的方法，包括测量样品中a)CYBP，和b)任选地一种或多种其它肺癌标志物的存在和/或浓度，并c)在肺癌评估中使用测量结果，特别是步骤(a)和任选地步骤(b)中测定到的浓度。

术语“测量”包括样品中CYBP的定性的或定量的测量。在优选的实施方案中，所述测量是定性的或半定量的测量，即，测定CYBP是存在还是缺乏，或者测定CYBP的浓度是高于还是低于截留值。如熟练技术人员会领会的，在是-(存在)或否-(缺乏)测定法中，测定法灵敏性通常设置为匹配所述截留值。例如，截留值可以从一组健康个体的测试来确定。优选的是，所述截留设置为产生90％的特异性，还优选的是所述截留设置为产生95％的特异性，或还优选的是所述截留设置为产生98％的特异性。例如，存在高于截留值的值可以指示肺癌的存在。在进一步优选的实施方案中，所述测量是定量测量。在此实施方式中，CYBP的浓度与基础的诊断问题如疾病的阶段、疾病进展或对治疗的响应相关。

钙周期蛋白(S100A6)是一种属于S100蛋白家族的钙结合蛋白(综述于Zimmer等，Brain Res.Bull.37(1995)，417-429；Heizmann和Cox，Biometals 11(1998)，383-397)。它的基因基于其细胞周期依赖性表达而发现(Calabretta等，J.Biol.Chem.261(1986)，12628-12632)。此基因在细胞周期的G₀到S期之间的转变期间以其最高水平表达，但是其表达在急性髓样白血病中脱调节(Calabretta等，Proc.Natl.Sci USA 83(1986)，1495-1498)。自埃列希腹水肿瘤(Ehrlich ascites tumor，EAT)细胞第一次纯化并表征该蛋白质(Kuznicki和Filipek，Biochem.J.247(1987)，663-667；Kuznicki等，Biochem.J.263(1989)，951-956)。后来，发现钙周期蛋白在成纤维细胞和上皮细胞中、在具有高增殖活性的细胞、及那些经历分化的细胞中以高水平表达(Leonard等，Mol.Cell.Biol.7(1987)，3156-3167；Guo等，Cell Growth Differ.1(1990)，333-338；Tonini等，Cancer Res.S1(1991)，1733-1737；Kuznicki等，Exp.Cell.Res.200(1992)，425-430)。

已经鉴定出钙周期蛋白的数种可能的蛋白质靶物。已经显示了钙周期蛋白在体外以Ca²⁺-依赖性方式与甘油醛-3-磷酸脱氢酶、膜联蛋白II(Filipek等，Eur.J.Biochem.195(1991)，795-800)、膜联蛋白VI(Zeng等，Int.J.Biochem.25(1993)，1019-1027)、膜联蛋白XI(Tokumitsu等，Biochem.Biophys.Res.Comm.186(1992)，1227-1235)、钙调结合蛋白(Mani等，Biochemistry 2(1993)，11217-11223)、和CacyBP(钙周期蛋白结合蛋白)(Filipek和Kuznicki，J.Neurochem.70(1998)，1793-1798；Filipek和Wojda，Biochem.J.320(1996)，585-587)相互作用。虽然已经确定了在没有和存在钙的情况中的钙周期蛋白的三维结构(Potts等，Nat.Struct.Biol.2(1995)，790-796)，但是靶物相互作用的结构基础及其在细胞中作为钙传感器的推断的作用仍然不清楚。

最初自EAT细胞鉴定、纯化、并表征CacyBP(Filipek和Wojda(1996)，见上文)。对胰凝乳蛋白酶片段的氨基酸测序提示了，它是一种新的蛋白质，因此将CacyBP自小鼠脑cDNA文库克隆，并测序(Filipek和Kuznicki(1998)，见上文)。人CYBP的氨基酸序列(Swiss PROT Q9HB71)以SEQ ID NO：1描述。除了最近提交的假设的蛋白质(其明显是CacyBP的人同系物)外，CacyBP的核苷酸序列揭示了与标准数据库中保存的任何其它序列没有同源性。在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达重组CacyBP，并且显示了在生理钙浓度发生它与钙周期蛋白的相互作用(Filipek和Kuznicki(1998)，见上文)。最近的研究揭示了CacyBP以高水平存在于小鼠和大鼠脑中，特别在神经元细胞中(Jastrzebska等，J.Histochem.Cytochem.48(2000)，1195-1202)。

CYBP可以牵涉钙依赖性泛素化及随后的对靶蛋白的蛋白体降解。它可能充当泛素E3复合物中的分子桥。它参与泛素介导的对β-联蛋白(CTNNB1)的降解。

CYBP在生理钙浓度与S100家族S100A1、S100A6、S100B、S100P和S100A12的蛋白质相互作用。它是一些大的E3复合物的一种构件，所述E3复合物至少由UBE2D1、SIAH1、CACYBP/SIP、SKP1、APC和TBL1X构成。它与SIAH1、SIAH2和SKP1直接相互作用。

CYBP位于低钙浓度的胞质及细胞核中。在神经母细胞瘤细胞中，在视黄酸(RA)诱导和钙升高后，它位于细胞核和胞质两者中。细胞核部分可以是磷酸化的。

本领域中没有提示组织提取物和体液中的CYBP的灵敏性且特异性测定会容许肺癌的评估。令人惊讶地，在本发明中发现了，组织溶胞物样品和/或体液中的CYBP的存在和/或量的测定容许肺癌的评估。可以在体液诸如血液、血清或血浆中以高灵敏性测量CYBP。此外，发明人发现了LC的可靠评估通过测量来自个体的液体样品内的CYBP是有可能的，即在使用蛋白质CYBP作为标志物时在LC的诊断中不需要组织和活组织检查样品。甚至更令人惊讶地，发现了如自个体的体液测量的CYBP的水平升高与肺癌有关。

如对于熟练技术人员明显的，本发明不应解释为受限于SEQ ID NO：1的全长蛋白质CYBP。本发明还涵盖CYBP的生理学或人工片段、CYBP的二级修饰、及CYBP的等位变体。优选地，人工片段涵盖以合成方式或通过重组技术生成的肽，其包含至少一个诊断上感兴趣的由至少6个连续的氨基酸组成的表位，如自SEQ ID NO：1中所公开的序列衍生的。有利地，可以使用此类片段来生成抗体或者在免疫测定法中作为标准品使用。更优选地，人工片段包含适合于建立三明治式免疫测定法的至少两个感兴趣表位。

如本文中所使用的，下列每项术语具有此部分中与其有关的意义。

冠词“一个”和“一种”在本文中用于指冠词的一个/种或超过一个/种(即，至少一个/种)的语法宾语。举例而言，“一种标志物”意指一种标志物或超过一种标志物。术语“至少”用于指明任选地可以存在一个或多个别的宾语。举例而言，至少包含(标志物)CYBP和CYFRA 21-1的标志物组可以任选地包含一种或多种其它标志物。

表述“一个/种或多个/种”表示1至50，优选地1至20，还优选的是2、3、4、5、6、7、8、9、10、12或15。

如本文中所使用的，术语“标志物”或“生物化学标志物”是指用作目标用于分析患者的测试样品的分子。在一个实施方案中，此类的分子目标的例子是蛋白质或多肽。用作本发明中的标志物的蛋白质或多肽预期包括所述蛋白质的天然存在的变体以及所述蛋白质或所述变体的片段，特别是免疫学可检测的片段。免疫学可检测的片段优选地包含所述标志物多肽的至少6、7、8、10、12、15或20个连续的氨基酸。本领域的技术人员会认识到，例如，在炎症期间由细胞释放的或细胞外基质中存在的蛋白质可能受到损伤，并可能被降解或切割成此类片段。某些标志物以无活性的形式合成，其随后可以通过蛋白酶解来活化。如熟练技术人员会领会的，蛋白质或其片段也可以作为复合物的一部分存在。此类复合物也可以用作本发明意义上的标志物。标志物多肽的变体由相同的基因编码，但是例如由于可变mRNA或前-mRNA加工，在它们的等电点(＝PI)或分子量(＝MW)、或这两方面可以不同。变体氨基酸序列与相应的标志物序列是95％相同或更相同。另外/或者，标志物多肽或其变体可以携带翻译后的修饰。优选的翻译后修饰是糖基化、酰化和/或磷酸化。

优选地，通过使用特异性结合剂来自样品特异性测量标志物CYBP。

特异性结合剂是，例如，CYBP的受体、结合CYBP的凝集素或CYBP的抗体。特异性结合剂对它相应的目标分子至少具有10⁷l/mol的亲和力。特异性结合剂优选地对它的目标分子具有10⁸l/mol、或还优选的10⁹l/mol的亲和力。如本领域技术人员会领会的，术语特异性用于指示样品中存在的其它生物分子没有显著地结合对CYBP特异的结合剂。优选地，结合与目标分子不同的生物分子的水平产生如下的结合亲和力，其是与目标分子的亲和力的最多仅10％或更小、仅5％或更小、仅2％或更小或仅1％或更小。优选的特异性结合剂会满足亲和力和特异性的上述两种最小标准。

特异性结合剂优选地是与CYBP反应的抗体。术语抗体是指多克隆抗体、单克隆抗体、此类抗体的抗原结合片段、单链抗体以及包含抗体的结合域的遗传构建体。

可以使用保留特异性结合剂的上述标准的任何抗体片段。抗体通过现有技术的规程来生成，例如，如记载于Tijssen(Tijssen，P.，Practice and theory ofenzyme immunoassays，11，Elsevier Science Publishers B.V.，Amsterdam，全书，具体的是第43页-第78页)的。另外，熟练的技术人员都知道基于免疫吸附剂的方法，其可以用于抗体的特异性分离。通过这些手段，多克隆抗体的质量以及由此它们在免疫测定法中的性能可以得到增强(Tijssen，P.，见上文，第108页-第115页)。

对于如本发明中所公开的成果，可以使用兔中生成的多克隆抗体。然而，明显的是，还可以使用来自不同物种，例如大鼠或豚鼠的多克隆抗体，以及单克隆抗体。由于单克隆抗体可以以恒定的性能以任何所需要的量生成，它们代表了临床的常规测定法的开发中的理想工具。针对CYBP的单克隆抗体的生成和在依照本发明的方法中的用途分别还代表其它优选的实施方案。

如熟练技术人员现在会领会的，CYBP已经被鉴定为在肺癌的评估中有用的标志物，各种免疫诊断规程可以用于实现与本发明的成果相当的结果。例如，可以使用生成抗体的备选策略。此类策略包括使用代表CYBP的表位的合成肽来免疫，等等。或者，可以使用DNA免疫，又称为DNA疫苗接种。

对于测量，可以将自个体获得的样品在适合于结合剂CYBP-复合物形成的条件下与CYBP的特异性结合剂一起温育。不需要规定此类条件，因为熟练技术人员无需任何创造性的工作便可以容易地鉴定此类合适的温育条件。测量结合剂CYBP-复合物的量并用于肺癌的评估中。如熟练技术人员会领会的，存在着许多方法来测量特异性结合剂CYBP-复合物的量，所有都在相关的教科书中详细描述了(参见例如，Tijssen P.，见上文，或Diamandis，E.P.和Christopoulos，T.K.(编)，Immunoassay，Academic Press，Boston(1996))。

优选地，在三明治型测定形式中检测CYBP。在此类测定法中，使用第一特异性结合剂来在一侧捕捉CYBP，并在另一侧使用经标记以直接或间接可检出的第二特异性结合剂。

在一个优选的实施方案中，通过使用三明治式免疫测定法来实施样品中的CYBP的测量，其中使用经链霉亲合素包被的微量滴定板。在此三明治式测定法中，使用针对CYBP的生物素化多克隆抗体作为捕捉抗体，并使用针对CYBP的洋地黄毒苷化(digoxigenylate)多克隆抗体作为第二特异性结合配偶。最后，通过抗洋地黄毒苷辣根过氧化物酶缀合物和适合的过氧化物酶底物来显现所形成的三明治式复合物。

如上文所提及的，可以从自个体样品获得的液体样品测量CYBP。在LC的诊断中应用标志物CYBP不需要组织和活组织检查样品。

在一个优选的实施方案中，依照本发明的方法用血浆作为液体样品材料来实施。

在本发明的意义上的“肺癌标志物”是在与标志物CYBP组合时添加LC评估中的相关信息的任何标志物。对于LC的评估，如果在给定特异性时的灵敏性，或如果在给定敏感性时的特异性分别可以通过将所述标志物纳入已经包含标志物CYBP的标志物组合中来改善，该信息被认为是相关的或具有附加价值。优选地，分别在灵敏性或特异性方面的改善在p＝.05、.02、.01或更低的显著性水平上是统计学上显著的。优选地，所述一种或多种其它LC标志物选自CYFRA 21-1、CEA、NSE、proGRP和SCC。

如本文中所使用的，术语“样品”是指为了体外评估的目的获得的生物学样品。在本发明的方法中，样品或患者样品优选地可以包括任何体液或组织提取物。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、痰和支气管灌洗液。优选的样品是全血、血清、血浆、支气管灌洗液或痰，血浆是最优选的。

术语“评估肺癌”用于指示依照本发明的方法会(单独地或与其它标志物或变量，例如由UICC列出的标准(参见上文)一起)，例如，帮助内科医生建立或确认LC的不存在或存在，或在预后、复发的检测(手术后患者的随访)、筛选和/或监测治疗、特别是化学疗法方面帮助医师。

如熟练技术人员会领会的，在体外进行任何此类评估。后来丢弃患者样品。患者样品仅仅用于本发明的体外诊断方法，并且患者样品的材料不转移回患者体内。通常，所述样品是液体样品，例如全血、血清或血浆。

在一个优选的实施方式中，本发明涉及通过生物化学标志物来在体外评估LC的方法，包括测量样品中CYBP的浓度并将测定到的浓度用于LC的评估。

本发明的发明人令人惊讶地能够在显著百分比的自LC患者衍生的样品中检出标志物蛋白质CYBP。甚至更令人惊讶地，他们已经能够证明，可以使用自个体获得的此类样品中的CYBP的存在和/或浓度来评估肺癌。

诊断的理想情况会是如下的情况，其中单一的事件或过程会引起相应的疾病，例如在传染性疾病中。在所有其它情况下，正确的诊断可以是非常困难的，特别是当疾病的病因不被完全了解时，如LC的情况。如熟练技术人员会领会的，对于给定的多因素疾病，例如LC，没有生物化学标志物是具有100％特异性同时具有100％灵敏性的诊断性的。然而，生物化学标志物，例如CYFRA21-1、CEA、NSE、proGRP、SCC或如在此所显示的CYBP可以用于以某些可能性或预测价值评估，例如，疾病的存在、缺乏或严重程度。因而，在常规临床诊断中，一般地，各种临床症状和生物标志物在潜在的疾病(underlying disease)的诊断、治疗和管理中一起考虑。

生物化学标志物可以分别地测定，或在本发明的优选的实施方案中，它们可以使用基于芯片或珠的阵列技术同时测定。然后，为每个标志物使用单独的截留值独立地解释生物标志物的浓度，或组合它们用于解释。

在进一步优选的实施方案中，依照本发明的LC评估以如下的方法进行，所述方法包括测量样品中a)CYBP、和b)一种或多种其它肺癌标志物的存在和/或浓度，并c)将所述测量结果，例如步骤(a)和步骤(b)中分别测定的浓度用于肺癌的评估。

在LC的评估中，标志物CYBP在下列一个或多个方面中会是有利的：筛查、诊断辅助、预后、疗法例如化学治疗、放射治疗和免疫治疗的监测。

筛选：

筛选定义为测试的系统性应用以鉴定个体，例如有风险的个体的疾病的指示物，例如肺癌的存在。优选地，筛选群体由已知具有比肺癌的平均风险更高风险的个体构成，如吸烟者、戒烟者、以及暴露于铀、石英或石棉的工作者。在一个优选的实施方案中，使用痰作为肺癌筛选中的样品。

对于许多疾病，在循环中总是没有单一的生物化学标志物会满足筛选目的所需要的灵敏性和特异性标准。这看起来对于肺癌也是成立的。不得不预期的是，会不得不在LC筛选中使用包含多种标志物的标志物组。本发明中建立的数据指明，标志物CYBP会形成适合于筛选目的的标志物组的必备的一部分。因此，本发明涉及CYBP作为LC标志物组(即，包含CYBP和一种或多种其它用于LC筛选目的的标志物的标志物组)的一种标志物的用途。优选的其它标志物选自：CYFRA 21-1、CEA、NSE、proGRP和SCC。

诊断辅助：

标志物可以帮助特定器官中良性对恶性疾病的区别诊断，帮助区分肿瘤的不同组织学类型、或建立手术前的基线标志物值。

今天，在肺癌的检测中使用的重要方法是放射学和/或计算机断层摄影(CT)扫描。小的结节，即，疑似组织的小的区域可以通过这些方法来显现。然而，这些结节中的许多(在CT的情况中超过90％)代表良性的组织变化，而仅少数结节代表癌性组织。标志物CYBP的使用可以帮助良性和恶性结节的区别。

在一个优选的实施方案中，在免疫组织学方法中使用标志物CYBP以建立或确认LC的不同的组织学类型。

由于CYBP作为单一标志物可能优于其它LC标志物，如CEA或NSE，不得不预期的是，CYBP会作为诊断辅助使用，特别是通过建立手术前的基线值进行。如此，本发明还涉及CYBP用于为LC在手术之前确定基线值的用途。

预后：

预后指示物可以定义为癌症患者和他们的肿瘤的临床的、病理学的、或生物化学的特征，其以某些可能性预测疾病结果。它们主要用途是帮助合理地规划患者管理，即，分别避免攻击性疾病的处理不足和无痛性疾病的过度处理。Molina R等，Tumor Biol.(2003)24：209-218评估了CEA、CA 125、CYFRA 21-1、SSC和NSE在NSCLC中的预后价值。在他们的研究中，标志物NSE、CEA、和LDH(乳酸脱氢酶)的异常血清水平看起来指示了更短的存活。

由于单独的CYBP显著地有助于LC患者与健康对照的区分，不得不预期的是，它会帮助评估患有LC的患者的预后。手术前CYBP的水平会最可能与一种或多种其它LC标志物和/或TNM分期系统组合。在一个优选的实施方案中，在LC患者的预后中使用CYBP。

化学疗法的监测：

Merle，P.等，Int.J.of Biological Markers(2004)19：310-315已经评估了用诱导化学疗法治疗的局部晚期NSCLC患者中的CYFRA 21-1血清水平变化。他们断定，CYFRA 21-1血清水平的早期监测可以是III期NSCLC患者中肿瘤响应和存活的有用的预后工具。另外，报道已经描述了CEA在监测LC患者的治疗方面的用途(Fukasawa T.等，Cancer & Chemotherapy(1986)13：1862-1867)。大多数这些研究是回顾性的、非随机的，并含有少量的患者。如在用CYFRA 21-1研究的情况中，CEA研究提示了：a)当接受化学疗法时具有CEA水平降低的患者比CEA水平未能降低的患者具有更好的结果，和(b)对于几乎所有患者，CEA水平的升高与疾病进展有关。

预期的是，对于化学疗法的监测，CYBP会是至少分别与CYFRA21-1或CEA一样好的标志物。因而，本发明还涉及CYBP在化学疗法下的LC患者的监测中的用途。

随访：

经历目的在于癌性组织的完全除去的外科切除术的大部分LC患者以后形成复发性或转移性疾病(Wagner，H.，Chest(2000)117：110-118；Buccheri，G.等，Ann.Thorac.Surg.(2003)75：973-980)。大多数这些复发发生在手术后前2-3年内。因为如果检出太晚的话复发性/转移性疾病总是致死的，相当多的研究已经集中于在早期并且如此是潜在可治疗阶段时的LC复发。

因此，许多LC患者经历手术后的监护计划，其常常包括CEA的常规监测。外科切除术之后一年的CEA连续监测已经显示了在大约97％的特异性下以大约29％的灵敏性检出早期术后复发/转移性疾病，甚至在没有怀疑的症状或病征的情况下(Buccheri，G.等，Ann.Thorac.Surg.(2003)75：973-980)。如此，LC患者在手术后的随访是合适的生物化学标志物的用途的最重要的领域之一。由于CYBP在所调查的LC患者中的高度灵敏性，有可能的是，单独的或与一种或多种其它标志物组合的CYBP会大大帮助LC患者的随访，特别是手术后的LC患者。包含CYBP和一种或多种其它LC标志物的标志物组在LC患者的随访方面的使用代表了本发明的进一步优选的实施方案。

本发明在一个优选的实施方案中涉及CYBP分别在LC的诊断领域中或在LC的评估中的用途。

在又进一步优选的实施方式中，本发明涉及与一种或多种肺癌标志物分子组合的CYBP作为肺癌的标志物分子在获自个体的液体样品的肺癌评估中的用途。可以与CYBP的测量组合的优选的其它选定LC标志物是CYFRA21-1、CEA、NSE、proGRP、和/或SCC。再进一步优选的是，在LC的评估中使用的标志物组包含CYBP和选自CYFRA 21-1和CEA的至少一种其它标志物分子。

如本领域技术人员会领会的，存在着许多方法来使用两种或更多种标志物的测量以改善所调查的诊断问题。在十分简单的、但尽管如此常常有效的方法中，如果样品对于调查的至少一种标志物呈阳性，假定阳性结果。例如，当诊断传染性疾病如AIDS时，这可以是该情况。

然而，经常地，评估标志物的组合。优选地，对标志物组的标志物，例如对CYBP和CYFRA 21-1测量的值在数学上组合，组合的值与基础的诊断问题相关联。可以通过任何适合的现有技术数学方法来组合标志物值。将标志物组合与疾病相关联的公知的数学方法采用了一些方法，如，辨别分析(DA)(即，线性的、二次的、正规化的DA)、Kernel方法(即，SVM)、非参数方法(即，k-最近邻分类法)、PLS(偏最小二乘方)、基于树的方法(即，逻辑回归、CART、随机Forest法、Boosting/Bagging法)、一般化的线性模型(即，逻辑回归)、基于主分量的方法(即，SIMCA)、一般化的加法模型、基于模糊逻辑的方法、基于神经网络和遗传算法的方法。熟练技术人员在选择合适的方法来评估本发明的标志物组合方面将没有困难。优选地，在将本发明的标志物组合与例如LC的不存在或存在相关联中使用的方法选自DA(即，线性的、二次的、正规化的辨别分析)、Kernel方法(即，SVM)、非参数方法(即，k-最近邻分类法)、PLS(偏最小二乘方)、基于树的方法(即，逻辑回归、CART、随机Forest法、Boosting法)或一般化的线性模型(即，逻辑回归)。关于这些统计方法的细节参见下列参考文献：Ruczinski，I.等，J.of Computational andGraphical Statistics，12(2003)475-511；Friedman，J.H.，J.of the AmericanStatistical Association 84(1989)165-175；Hastie，Trevor，Tibshirani，Robert，Friedman，Jerome，The Elements of Statistical Learning，Springer Series inStatistics，2001；Breiman，L.，Friedman，J.H.，Olshen，R.A.，Stone，C.J.(1984)Classification and regression trees，California：Wadsworth；Breiman，L.，RandomForests，Machine Learning，45(2001)5-32；Pepe，M.S.，The StatisticalEvaluation of Medical Tests for Classification and Prediction，Oxford StatisticalScience Series，28(2003)；及Duda，R.O.，Hart，P.E.，Stork，D.G.，PatternClassification，Wiley Interscience，第2版(2001)。

本发明的优选的实施方案是使用关于生物标志物的潜在组合的优化的多变量截留，以及辨别状态A与状态B，例如患病与健康。在此类型的分析中，标志物不再是独立的，而是形成标志物组。

通过诊断方法的接受者运行特征(ROC)最好地描述了诊断方法的精确性(特别参见Zweig，M.H.和Campbell，G.，Clin.Chem.39(1993)561-577)。ROC图是在所观察数据的整个范围里连续改变判断阈值产生的所有的灵敏性/特异性对的图。

实验室测试的临床性能取决于它的诊断精确性，或正确地将受试者分类到临床上相关的亚群中的能力。诊断精确性衡量了所述测试正确地区分所调查受试者的两种不同状况的能力。此类状况例如健康和患病，或者良性对恶性疾病。

在每种情况中，通过在判定阈值的完整范围上标绘出灵敏性对1-特异性，ROC图描绘了两种分布之间的重叠。在y-轴上是灵敏性，或者真阳性分数[定义为(真阳性测试结果的数目)/(真阳性的数目+假阴性测试结果的数目)]。这也被称为存在疾病或状况的阳性。它单独地从受影响的亚群中计算。在x-轴上是假阳性分数，或1-特异性[定义为(假阳性结果的数目)/(真阴性的数目+假阳性结果的数目)]。它是特异性的指数，并且完全从未受影响的亚群中计算。因为使用来自两个不同亚群的测试结果完全分开地计算真阳性和假阳性分数，ROC图独立于样品中的疾病患病率。在ROC图上的每个点代表了对应于特定的判断阈值的灵敏性/1-特异性对。具有理想辨别力(在结果的两个分布中没有重叠)的测试具有穿过左上角的ROC图，那里真阳性分数是1.0，或100％(理想的灵敏性)，而假阳性分数是0(理想的特异性)。没有辨别力的测试的理论图(两个组的结果分布相同)是从左下角到右上角的45°对角线。大多数图落入这两个极端之间。(如果ROC图完全落入45°对角线以下，这容易通过将“阳性”的标准从“大于”转换成“小于”来补救，或者反之亦然。)定性地，图越靠近左上角，测试的总体精确度越高。

量化实验室测试的诊断精确性的一个优选的方式是通过单个数值表示它的性能。例如，此类总体参数是所谓的“总误差”或备选地“曲线下面积＝AUC”。最常见的全局度量是ROC图下的面积。按照惯例，这个面积永远大于等于0.5(如果不是，可以反转判断规则使它如此)。数值范围为1.0(两个组的测试值的理想分离)和0.5(在测试值的两个组之间没有明显的分布差异)之间。该面积不仅取决于图的特定部分，诸如最靠近对角线的点或在90％特异性下的灵敏性，还取决于整个图。这是ROC图多么接近理想的图(面积＝1.0)的定量的、描述性的表述。

在一个优选的实施方案中，本发明涉及改善相对于健康对照的LC诊断精确度的方法，其通过分别测量样品中至少CYBP和CYFRA 21-1的浓度，以及任选地CEA、proGRP、NSE、和/或SCC的浓度，并且将测定到的浓度与LC的存在或不存在相关联，与基于任何单独调查的单一标志物的分类法相比，所述改善使得更多的患者被正确地分类为患有LC对健康对照。

在依照本发明的优选的方法中，分别至少测定生物标志物CYBP和CYFRA 21-1的浓度，并在LC的评估中使用标志物组合。

在依照本发明的进一步优选的方法中，分别至少测定生物标志物CYBP和CEA的浓度，并在LC的评估中使用标志物组合。

在依照本发明的进一步优选的方法中，分别至少测定生物标志物CYBP、CYFRA21-1和CEA的浓度，并在LC的评估中使用标志物组合。

在依照本发明的进一步优选的方法中，分别至少测定生物标志物CYBP、CYFRA21-1和proGRP的浓度，并在LC的评估中使用标志物组合。

在依照本发明的再进一步优选的方法中，分别至少测定生物标志物CYBP、CYFRA21-1和SCC的浓度，并在LC的评估中使用标志物组合。

提供以下的实施例和附图来帮助理解本发明，它们的真实范围在所附权利要求书中列出。应当理解的是，可以在不背离本发明的精神的前提下在所列的规程中进行修改。

实施例

实施例1

针对肺癌标志物蛋白质CYBP的抗体的生成

生成针对肺癌标志物蛋白质CYBP的多克隆抗体制备物以通过免疫检测测定法，例如Western印迹和ELISA在测量CYBP的血清和血浆和血液水平中进一步使用抗体。

在大肠杆菌中的重组蛋白表达：

为了生成针对CYBP的抗体，在大肠杆菌中生成重组抗原：因此，使用合适的正向和反向引物自编码如SEQ ID NO：1中所规定的227个氨基酸的全长CYBP-cDNA克隆PCR扩增CYBP编码区。

正向引物的特征在于(除EcoRI克隆和核糖体结合位点外)以符合读码框的方式引入CYBP多肽的编码N端MRGSHHHHHHIEGR肽延伸物(SEQ IDNO：2)的寡核苷酸。将经EcoRI/BamHI消化的PCR片段连接到相应的pQE-30(Qiagen，Hilden，Germany)载体片段中，随后将其转化入大肠杆菌XL1-blue感受态细胞中。在序列分析后，遵循制造商的指令将质粒转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中以在pQE载体系列的IPTG诱导型T5启动子下表达。

对于MRGSHHHHHHIEGR-CYBP融合蛋白的纯化，通过离心来将11过夜诱导的细菌培养物成团粒，并将细胞团粒在20mM磷酸钠缓冲液、500mM氯化钠，pH 7.4(其含有1mg/ml溶菌酶和Complete^TM无EDTA蛋白酶抑制剂片剂)中重悬浮。通过超声波处理来破坏细胞，通过离心来使不溶性材料成团粒，并将上清液应用于Ni-次氮基三乙酸(Ni-NTA)金属-亲和层析：用数个床体积的裂解缓冲液清洗该柱，接着用20mM磷酸钠缓冲液、500mM氯化钠、20mM咪唑，pH 7.4清洗。最后，用20mM磷酸钠缓冲液、500mM氯化钠，pH 7.4中的20至500mM的咪唑梯度洗脱结合的抗原，并将其在75mM HEPES-缓冲液，pH 7.5，100mM氯化钠、1mM EDTA、6.5％蔗糖中于4℃贮存。

多克隆抗体的生成：

a)免疫

对于免疫，制备1∶1比率的蛋白质溶液(100μg/ml蛋白质CYBP)和完全弗氏佐剂的新鲜乳状液。在第1天、第7天、第14天和第30天、第60天和第90天用1ml乳状液免疫每只兔。抽取血液，并使用所得的抗CYBP血清，如下文所描述的。

b)通过用辛酸和硫酸铵的序贯沉淀来从兔血清纯化IgG(免疫球蛋白G)

用4个体积的乙酸盐缓冲液(60mM，pH 4.0)来稀释1个体积的兔血清。用2M Tris-碱来将pH调节至4.5。在有力搅拌下逐滴添加辛酸(25μl/ml稀释的样品)。在30分钟后，将样品离心(13 000x g，30分钟，4℃)，弃去团粒，并收集上清液。通过添加2M Tris-碱来将上清液的pH调节至7.5。

在有力搅拌下通过逐滴添加4M硫酸铵溶液至终浓度2M来使上清液中的免疫球蛋白沉淀。通过离心(8000x g，15分钟，4℃)来收集沉淀的免疫球蛋白。

弃去上清液。将团粒在10mM NaH₂PO₄/NaOH，pH 7.5，30mM NaCl中溶解，并彻底透析。将透析液离心(13000x g，15分钟，4℃)，并过滤(0.2μm)。

c)多克隆兔IgG的生物素化：

使多克隆兔IgG在10mM NaH₂PO₄/NaOH，pH 7.5，30mM NaCl中达到10mg/ml。每ml IgG溶液添加50μl生物素-N-羟基琥珀酰亚胺(DMSO中的3.6mg/ml)。在于室温30分钟后，将样品在Superdex 200(10mMNaH₂PO₄/NaOH，pH 7.5，30mM NaCl)上层析。收集含有生物素化的IgG的级分。

d)多克隆兔IgG的洋地黄毒苷缀合：

使多克隆兔IgG在10mM NaH₂PO₄/NaOH，30mM NaCl，pH 7.5中达到10mg/ml。每ml IgG溶液添加50μl洋地黄毒苷-3-O-甲基羰基-ε-氨基己酸-N-羟基琥珀酰亚胺酯(Roche Diagnostics，Mannheim，Germany，产品目录编号1333054)(DMSO中的3.8mg/ml)。在于室温30分钟后，将样品在Superdex200(10mM NaH₂PO₄/NaOH，pH 7.5，30mM NaCl)上层析。收集含有洋地黄毒苷化的IgG的级分。

实施例2

测量人血清和血浆样品中的CYBP的ELISA

对于检测人血清或血浆中的CYBP，开发出三明治式ELISA。为了捕捉抗原，将抗CYBP多克隆抗体(参见实施例1)与生物素缀合，并固定化于经链霉亲合素包被的表面上，并且为了检测抗原，将抗CYBP多克隆抗体与洋地黄毒苷缀合。

将经链霉亲合素包被的微量滴定板与每孔100μl生物素化的抗CYBP多克隆抗体(1μg/ml)于室温一起温育10分钟。随后，用PBS、0.05％Tween 20将平板清洗三次。然后，将孔与作为标准抗原的连续稀释的重组蛋白(参见实施例1)或与来自患者的稀释的EDTA-血浆样品及5μg/ml缀合有洋地黄毒苷的抗CYBP多克隆抗体一起温育2小时。温育在温育缓冲液(包含0.1％Tween20，1％BSA的PBS)中进行。此后，将平板清洗三次以除去未结合的成分。在下一步中，将孔与20mU/ml抗生物素-洋地黄毒苷-过氧化物酶缀合物一起温育60分钟。随后，用相同的缓冲液将平板清洗三次。为了检测结合的抗原-抗体复合物，将孔与200μl TMB(四甲基联苯胺)溶液(Roche DiagnosticsGmbH，Mannheim，Germany，产品目录编号120 344 25 001)一起温育15分钟，通过添加50μl 1N硫酸来停止，并用ELISA读板仪以450nm(以620nm为参照波长)测量OD。

实施例3

研究群体

使用自60名充分表征的NSCLC患者(30名腺-CA，30名鳞状细胞CA)衍生的样品。

评估LC样品中的CYBP、CEA和CYFRA21-1的水平。

表1中显示了结果：

表1：

凭借9.29μg/ml的截留值，在所有LC样品中的CYBP的灵敏性是82％，分别为对于腺癌样品的83％和对于鳞状细胞癌样品的80％。此灵敏性是令人惊讶的，而且显著高于CEA和CYFRA21-1的灵敏性。

Claims

1.特异性测量CYBP所需要的试剂在制备用于在体液样品中体外评估肺癌的试剂盒中的用途，其中检出升高水平的CYBP指示肺癌。

2.权利要求1的用途，其中指示肺癌的升高水平的CYBP是与从一组健康个体获得的预先确定的截留值相比。

3.特异性测量CYBP和一种或多种其它肺癌标志物所需要的试剂在制备用于在体液样品中体外评估肺癌的试剂盒中的用途，其中检出升高水平的CYBP指示肺癌。

4.权利要求3的用途，其中指示肺癌的升高水平的CYBP是与从一组健康个体获得的预先确定的截留值相比。

5.依照权利要求3的用途，其中所述其它肺癌标志物选自下组：CYFRA21-1、CEA、NSE、proGRP和SCC。

6.依照权利要求4的用途，其中所述其它肺癌标志物选自下组：CYFRA21-1、CEA、NSE、proGRP和SCC。

7.依照权利要求5的用途，其中所述其它肺癌标志物是CYFRA 21-1。

8.依照权利要求6的用途，其中所述其它肺癌标志物是CYFRA 21-1。

9.依照权利要求5的用途，其中所述其它肺癌标志物是CEA。

10.依照权利要求6的用途，其中所述其它肺癌标志物是CEA。

11.依照权利要求5的用途，其中所述其它肺癌标志物是SCC。

12.依照权利要求6的用途，其中所述其它肺癌标志物是SCC。

13.依照权利要求1至12中任一项的用途，其中所述体液是血浆。

14.依照权利要求1至12中任一项的用途，其中特异性测量CYBP所需要的试剂是CYBP的受体、结合CYBP的凝集素或CYBP的抗体。

15.依照权利要求1至12中任一项的用途，其中所述体液是血浆，且其中特异性测量CYBP所需要的试剂是CYBP的受体、结合CYBP的凝集素或CYBP的抗体。