CN102433336A - 用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰rna及其制备方法和应用 - Google Patents
用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰rna及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102433336A CN102433336A CN2010102965010A CN201010296501A CN102433336A CN 102433336 A CN102433336 A CN 102433336A CN 2010102965010 A CN2010102965010 A CN 2010102965010A CN 201010296501 A CN201010296501 A CN 201010296501A CN 102433336 A CN102433336 A CN 102433336A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glioma
- apoptosis
- seq
- sequence
- small molecules
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 title claims abstract description 60
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 title abstract 4
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 title abstract 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 title abstract 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims abstract description 28
- 238000013461 design Methods 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 20
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 19
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 claims description 18
- 101150099493 STAT3 gene Proteins 0.000 claims description 15
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 7
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 6
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 5
- 101100175482 Glycine max CG-3 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 claims 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 abstract 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 22
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 6
- 201000010915 Glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 5
- 208000000172 Medulloblastoma Diseases 0.000 description 5
- 208000005017 glioblastoma Diseases 0.000 description 5
- 206010003571 Astrocytoma Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 206010014967 Ependymoma Diseases 0.000 description 4
- 208000024055 brain glioblastoma Diseases 0.000 description 4
- 201000011609 brain glioblastoma multiforme Diseases 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 201000010133 Oligodendroglioma Diseases 0.000 description 2
- 108010017324 STAT3 Transcription Factor Proteins 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 102000005869 Activating Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010005254 Activating Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000003164 Diplopia Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010022773 Intracranial pressure increased Diseases 0.000 description 1
- 101150068332 KIT gene Proteins 0.000 description 1
- 208000009277 Neuroectodermal Tumors Diseases 0.000 description 1
- 208000037064 Papilloma of choroid plexus Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000007641 Pinealoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000004495 STAT3 Transcription Factor Human genes 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 208000030239 cerebral astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003161 choroid Anatomy 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003059 ependyma Anatomy 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 201000009941 intracranial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 208000030883 malignant astrocytoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000007971 neurological deficit Effects 0.000 description 1
- 230000021603 oncosis Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 208000024724 pineal body neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000004123 pineal gland cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000004862 vasculogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000009978 visual deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA、其制备方法及其应用。该小分子干扰RNA为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的碱基序列。本发明设计对抑制胶质瘤增殖并促其凋亡有作用的基因的小分子干扰RNA，应用胶质瘤细胞模型研究其对胶质瘤增殖的抑制作用和其对胶质瘤凋亡的促进作用，为胶质瘤的基因治疗提供了一种新方法。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种小分子干扰RNA(即shRNA)，尤其涉及一种用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA；另外，本发明还涉及该小分子干扰RNA的制备方法和应用。
背景技术
STAT3蛋白作为信号转导和转录激活因子家族(STATs)的一个重要成员，对细胞的存活，侵袭和凋亡及血管生成起到了重要的调控作用，并与多种恶性肿瘤密切相关。
胶质瘤是发生于神经外胚层的肿瘤，故亦称神经外胚层肿瘤或神经上皮肿瘤。肿瘤起源于神经间质细胞，即神经胶质、室管膜、脉络丛上皮和神经实质细胞，即神经元。大多数肿瘤起源于不同类型的神经胶质，但根据组织发生学来源及生物学特征类似，对发生于神经外胚层的各种复查肿瘤病，一般都称为神经胶质瘤。
胶质瘤的分类方法很多，临床工作者往往采用的是分类比较简单的Kernohan分类法。各型胶质瘤中，以星形细胞瘤最多，其次为胶质母细胞瘤，其后依次为髓母细胞瘤、室管膜瘤、少枝胶质瘤、松果体瘤、混合性胶质瘤、脉络丛乳头状瘤、未分类胶质瘤及神经元性肿瘤。各型胶质瘤的好发部位不同，如星形细胞瘤成人多见于大脑半球，儿童则多发在小脑；胶质母细胞瘤几乎均发生于大脑半球；髓母细胞瘤发生于小脑蚓部；室管膜瘤多见于第4脑室；少枝胶质瘤大多发生于在脑半球。
胶质瘤以男性较多见，特别在多形性胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤，男性明显多于女性。各型胶质母细胞瘤多见于中年，室管膜瘤多见于儿童及青年，髓母细胞瘤几乎都发生在儿童。胶质瘤的部位与年龄也有一定关系，如大脑星形细胞瘤和胶质母细胞瘤多见于成人，小脑胶质瘤(星形细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤)多见于儿童。
胶质瘤大多缓慢发病，自出现症状至就诊时间一般为数周至数月，少数可达数年。恶性程度高的和后颅窝肿瘤病史较短，较良性的或位于静区的肿瘤病史较长。肿瘤若有出血或囊变，症状会突然加重，甚至有类似脑血管病的发病过程。胶质瘤的临床症状可分两方面，一是颅内压增高症状，如头痛、呕吐、视力减退、复视、精神症状等；另一是肿瘤压迫、浸润、破坏脑组织所产生的局灶症状，早期可表现为刺激症状如局限性癫痫，后期表现为神经功能缺失症状如瘫痪。
胶质瘤的诊断，根据其生物学特征、年龄、性别、好发部位及临床过程进行分析，在病史及体征基础上，采用电生理、超声波、放射性核素、放射学及核磁共振等辅助检查，定位正确率几乎是100％，定性诊断正确率可在90％以上。
RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指由双链RNA介导的细胞内与其序列同源的mRNA发生特异性降解，从而导致基因表达沉默的现象，这是一种转录后水平的基因沉默机制。RNA干扰(RNAi)的基本原理是利用具有同源性的双链RNA(dsRNA)迅速阻断序列特异的目标基因的表达活性，是实验室中是一种有效的阻断基因表达的工具。
目前，尚未见有关用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的STAT3基因的小分子干扰RNA的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题之一是提供一种用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA。
本发明要解决的技术问题之二是提供该小分子干扰RNA的制备方法。
本发明要解决的技术问题之三是提供该小分子干扰RNA的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：
在本发明的一方面，提供一种用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA，其对应的序列为：
正义链：5’-ACA CCG AGT CAA GGA GAC ATG CAA TTG CTT GAA TTG CAT GTCTCC TTG ACT CT-3’，如SEQ ID NO.1所示；
反义链：5’-AAA AAG AGT CAA GGA GAC ATG CAA TTC AAG CAA TTG CAT GTCTCC TTG ACT CG-3’，如SEQ ID NO.2所示。
在本发明的另一方面，提供一种制备上述用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA的方法，该方法的具体步骤为：
步骤一、根据SilenCircle TM RNAi Transcription Kit中载体设计的具体要求，设计对应于STAT3基因780-798位，即：GAG TCA AGG AGA CAT GCA A的shRNA的寡核苷酸序列(各为53bp)并进行合成；所述的shRNA的寡核苷酸序列为：如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的碱基序列；
步骤二、根据SilenCircle TM RNAi Transcription Kit基因质粒构建试剂盒中载体设计的具体要求，将设计的shRNA的寡核苷酸序列引物和SilenCircle质粒进行连接，得到用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA。
在本发明的另一方面，提供一种上述小分子干扰RNA在制备抑制胶质瘤增殖及促其凋亡的药物中的应用。
本发明设计对胶质瘤增殖与凋亡有关联的基因STAT3基因的RNAi，并应用胶质瘤细胞模型研究其对抗胶质瘤增殖并促其凋亡的促进作用，为RNAi在胶质瘤的治疗应用提供了一种新方法。经实验验证，转染Stat3RNA干扰质粒组中的肿瘤生长受到抑制，细胞凋亡显著增加，该实验结果表明，本发明的小分子干扰RNA能下调胶质瘤中的Stat3基因表达，能够明显抑制胶质瘤的生长并促进诱导胶质瘤的凋亡。
附图说明
图1是本发明shRNA的寡核苷酸序列引物和PSilenCircle质粒的连接示意图。
图2是本发明实施例中Stat3-RNAi对脑胶质瘤细胞增殖的影响示意图，其中，Control表示转染空载体组；Stat3 RNAi表示转染Stat3 RNA干扰质粒组。
图3是本发明实施例中Stat3-RNAi对脑胶质瘤细胞凋亡的影响示意图，其中，mock表示未转染组；empty vector表示转染空载体组；Stat3 RNAi表示转染Stat3 RNA干扰质粒组。
具体实施方式
以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1
一、胶质瘤细胞的培养：
胶质瘤细胞U251细胞系(购买自中国科学院上海生命科学院细胞资源中心)培养于37℃，5％CO2恒温培养箱。对数生长期的细胞用胰酶消化脱壁，之后加入适量培养液并反复吹打以混匀细胞；将得到的细胞悬液移入15ml离心管中，1500rpm离心3min；去上清；用5ml无菌1×PBS将细胞悬起，吹打混匀；加约1ml细胞悬液于装有5ml新鲜培养基的新培养瓶中，放入37℃，5％CO2培养箱中培养，约2天左右传代1次(主要查看细胞有无铺满培养瓶)。
二、人脑胶质瘤细胞的分离：
取人脑胶质瘤手术标本，浸入4℃的KRBB溶液(普通Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液)中，清洗二次，然后将标本剪成小块，转移至盛有5mL消化酶液的三角瓶中，于恒温摇床中37℃保温，摇床转速100r/min，每10min玻璃管反复吹打一次，放置30min。将该悬液离心500-1000rpm，5min，最后剩下为胶质瘤细胞。用细胞培养液悬起沉淀，在黑背景的显微镜下观察可发现到呈圆形的胶质瘤细胞。
三、STAT3-RNAi质粒的设计和转染：
1.STAT3-RNAi质粒的设计：
根据SilenCircle TM RNAi Transcription Kit(购自Allebe Biotechnology公司)中载体设计的具体要求，设计对应于STAT3基因780-798位，即：GAG TCAAGG AGA CAT GCA A的shRNA的寡核苷酸序列，各为53bp，送生工生物工程(上海)有限公司进行合成。
STAT3-RNAi对应的序列为：
Sense(正义链)：5’-ACA CCG AGT CAA GGA GAC ATG CAA TTG CTT GAATTG CAT GTC TCC TTG ACT CT-3’，如SEQ ID NO.1所示；
Anti-sense(反义链)：5’-AAA AAG AGT CAA GGA GAC ATG CAA TTC AAG CAATTG CAT GTC TCC TTG ACT CG-3’，如SEQ ID NO.2所示；
根据SilenCircle TM RNAi Transcription Kit(购自Allebe Biotechnology公司)中载体设计的具体要求，将设计的STAT3-RNAi的干扰片段和SilenCircle质粒(购自Allebe Biotechnology公司)连接，参见图1，然后转染进胶质瘤细胞。图1为SilenCircleTM质粒原理的图解，它使用基于RNA的U6聚合酶III启动子和优化的终止子，从而在靶细胞内可精确地形成小分子干扰RNA(shRNA)。shRNA的表达质粒是一个预切好的备用载体。通过质粒上携带的筛选标记，进行哺乳动物细胞的共转染，建立shRNA表达的稳定细胞系。通过两个SilencircleTM质粒各自与正义的DNA插入片段及反义的DNA插入片段相连接，便可介导shRNA的产生。或者单个质粒与一个具有发夹结构的DNA插入片段相连接，也可介导shRNA的产生。无论哪种方法，首先必须合成两段互补的DNA片段。而U6启动子(U6 Promoter)则控制着shRNA的生成(参见图1)。对于需要进行干扰的目的基因，选择一段靶序列为A2GN17C的DNA片段(靶序列的正义序列)，其GC含量(在DNA4种碱基中，鸟嘌呤和胞嘧啶所占的比率称为GC含量)接近50％。
2.STAT3-RNAi质粒的转染：
转染前一天，在含有5ml无抗生素的DMEM生长培养基(DMEM生长培养基是一种在MEM培养基的基础上研制的，含各种氨基酸和葡萄糖的细胞培养基)的60-mm培养皿里种上2×106个胶质瘤细胞(胶质瘤细胞由上述一、培养得到)。铺板后第二天准备转染：首先用500μl无血清的培养基(DMEM)溶解8.0μg的STAT3-RNAi表达载体，用500μl培养基(DMEM或RPMI1640)溶解阳离子脂质体LipofectamineTM2000(20μl)，轻轻地混匀，室温孵育5分钟。孵育后，为促使shRNA表达载体与LipofectamineTM2000充分结合，将它们轻轻混匀，室温孵育20分钟，以形成DNA-LipofectamineTM2000的复合物。将DNA-LipofectamineTM2000复合物加入到60mm培养皿，之后将含有DNA-LipofectamineTM2000复合物的细胞培养皿放入37℃，5％CO2培养箱内培养6小时，换上正常细胞培养液。
四、实验分组与检测指标
正常对照组：胶质瘤细胞，培养液为胶质瘤细胞培养液；
RNAi组：转染过STAT3-RNAi的胶质瘤细胞，培养液为胶质瘤细胞培养液。
胶质瘤细胞增殖与凋亡的检测：将1mL用于转染的各组细胞悬液置于24孔板中，置于37℃，5％CO2的培养箱中培养，采用MTS实验检测3d后各组细胞增殖的情况，如图2；转染3d后用TUNEL法检测各组细胞凋亡的情况，如图3。
图2表示Stat3-RNAi对脑胶质瘤细胞增殖的影响，图2为统计学分析图。由图2可知，转染Stat3RNA干扰质粒组的细胞增殖显著低于转染空载体组的细胞增殖率(**p＜0.01)。图2中Control-转染空载体组；Stat3RNAi-转染Stat3RNA干扰质粒组。
图3表示Stat3对脑胶质瘤细胞凋亡的影响，图3为统计学分析图。由图可知，转染Stat3 RNA干扰质粒组的细胞凋亡率高于未转染组和转染空载体组的细胞凋亡率(**p＜0.01)。图3中mock-未转染组；empty vector-转染空载体组；Stat3 RNAi-转染Stat3 RNA干扰质粒组。
五、实验结果：
转染Stat3 RNA干扰质粒组中的肿瘤生长受到抑制，细胞凋亡显著增加。该实验结果表明，通过RNAi技术下调胶质瘤中的Stat3基因表达，能够抑制胶质瘤的生长并促进诱导胶质瘤的凋亡。
序列表
<110>上海生博生物医药科技有限公司
<120>用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA及其制备方法和应用
<130>NP-10-14597
<160>2
<170>PatentIn version 3.4
<210>1
<211>53
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc_RNA
<222>(1)..(53)
<223>shRNA
<400>1
acaccgagtc aaggagacat gcaattgctt gaattgcatg tctccttgac tct 53
<210>2
<211>53
<212>RNA
<213>人工序列
<220>
<221>misc_RNA
<222>(1)..(53)
<223>shRNA
<400>2
aaaaagagtc aaggagacat gcaattcaag caattgcatg tctccttgac tcg 53
Claims (3)
1.一种用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰RNA，其对应的序列为：
正义链：5’-ACA CCG AGT CAA GGA GAC ATG CAA TTG CTT GAA TTG CAT GTCTCC TTG ACT CT-3’，如SEQ ID NO.1所示；
反义链：5’-AAA AAG AGT CAA GGA GAC ATG CAA TTC AAG CAA TTG CAT GTCTCC TTG ACT CG-3’，如SEQ ID NO.2所示。
2.一种根据权利要求1所述的小分子干扰RNA的制备方法，其特征在于，该方法的具体步骤为：
步骤一、根据SilenCircle TM RNAi Transcription Kit中载体设计的具体要求，设计对应于STAT3基因780-798位，即：GAG TCA AGG AGA CAT GCA A的shRNA的寡核苷酸序列并进行合成，所述的shRNA的寡核苷酸序列序列为：如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的碱基序列；
步骤二、依据SilenCircle TM RNAi Transcription Kit中载体设计的要求，将设计的shRNA序列和SilenCircle质粒进行连接，得到用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的一种小分子干扰RNA。
3.根据权利要求1所述的小分子干扰RNA在制备抑制胶质瘤增殖与促其凋亡的药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010296501.0A CN102433336B (zh) | 2010-09-29 | 2010-09-29 | 用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰rna及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010296501.0A CN102433336B (zh) | 2010-09-29 | 2010-09-29 | 用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰rna及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102433336A true CN102433336A (zh) | 2012-05-02 |
| CN102433336B CN102433336B (zh) | 2015-02-18 |
Family
ID=45981682
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201010296501.0A Active CN102433336B (zh) | 2010-09-29 | 2010-09-29 | 用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰rna及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102433336B (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103007292A (zh) * | 2012-12-30 | 2013-04-03 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 靶向小胶质细胞的miR-30b复合物及其制备方法和应用 |
| CN103773767A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-07 | 华东理工大学 | 靶向adgb的抑制性rna及其在制备抗肿瘤药物中的应用 |
| CN104561004A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-04-29 | 上海生博生物医药科技有限公司 | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰tgm2基因的小分子rna及其制备方法和应用 |
| CN104561003A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-04-29 | 上海生博生物医药科技有限公司 | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰mcm7基因的小分子rna及其制备方法和应用 |
| CN111607616A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-09-01 | 宁夏医科大学 | 一种靶向沉默stat3对人脑胶质瘤u251细胞缺氧诱导影响的研究方法及其应用 |
-
2010
- 2010-09-29 CN CN201010296501.0A patent/CN102433336B/zh active Active
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LI ET AL: "Knockdown of STAT3 expression by RNAi suppresses growth and induces apoptosis and differentiation in glioblastoma stem cells"", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 》 * |
| SCHIMKE ET AL: "NM_139276.2", 《GENBANK》 * |
| 高玲等: "脑胶质瘤治疗新策略) ) ) STAT3 RNA干扰结合传统放疗", 《军事医学科学院院刊》 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103007292A (zh) * | 2012-12-30 | 2013-04-03 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 靶向小胶质细胞的miR-30b复合物及其制备方法和应用 |
| CN103007292B (zh) * | 2012-12-30 | 2014-01-15 | 中国人民解放军第三军医大学第二附属医院 | 靶向小胶质细胞的miR-30b复合物及其制备方法和应用 |
| CN103773767A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-05-07 | 华东理工大学 | 靶向adgb的抑制性rna及其在制备抗肿瘤药物中的应用 |
| CN103773767B (zh) * | 2014-01-24 | 2016-01-20 | 华东理工大学 | 靶向adgb的抑制性rna及其在制备抗肿瘤药物中的应用 |
| CN104561004A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-04-29 | 上海生博生物医药科技有限公司 | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰tgm2基因的小分子rna及其制备方法和应用 |
| CN104561003A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-04-29 | 上海生博生物医药科技有限公司 | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰mcm7基因的小分子rna及其制备方法和应用 |
| CN104561004B (zh) * | 2015-01-16 | 2019-03-22 | 上海生博生物医药科技有限公司 | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰tgm2基因的小分子rna及其制备方法和应用 |
| CN104561003B (zh) * | 2015-01-16 | 2019-03-22 | 上海生博生物医药科技有限公司 | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰mcm7基因的小分子rna及其制备方法和应用 |
| CN111607616A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-09-01 | 宁夏医科大学 | 一种靶向沉默stat3对人脑胶质瘤u251细胞缺氧诱导影响的研究方法及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102433336B (zh) | 2015-02-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hu et al. | Antisense oligonucleotide against miR-21 inhibits migration and induces apoptosis in leukemic K562 cells | |
| CN102433336A (zh) | 用于抑制胶质瘤增殖并促其凋亡的小分子干扰rna及其制备方法和应用 | |
| CN102421899A (zh) | 用于治疗急性骨髓性白血病的方法 | |
| CN108467891A (zh) | Snhg5在乳腺癌诊断及评估和疗效预测中的应用 | |
| CN102304538A (zh) | 胃癌靶向STAT3基因的siRNAs表达载体的构建、筛选及其用途 | |
| CN102181445A (zh) | 一种靶向lin28基因的干扰小分子rna及其抗胶质瘤增殖的用途 | |
| CN101353656B (zh) | 抑制表皮生长因子受体基因表达的siRNA及其应用 | |
| CN101457224A (zh) | miR-21反义寡聚核苷酸及其应用 | |
| Simion et al. | LentiRILES, a miRNA-ON sensor system for monitoring the functionality of miRNA in cancer biology and therapy | |
| KR101286154B1 (ko) | 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 줄기세포로부터 연골세포 분화 촉진용 및 항암 약제학적 조성물 | |
| CN104561003B (zh) | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰mcm7基因的小分子rna及其制备方法和应用 | |
| CN101353655B (zh) | 抑制血管内皮生长因子受体基因表达的siRNA及其应用 | |
| CN101921763B (zh) | 抑制PAR-1基因表达的siRNA及其应用 | |
| CN103215270B (zh) | 具有抑制脑胶质瘤细胞迁移与侵袭功能的dna片段及其应用 | |
| CN101096670A (zh) | 干扰人甲胎蛋白基因的siRNA及重组腺病毒 | |
| CN101892235B (zh) | 用于诱导白血病细胞分化的小分子rna及其应用 | |
| CN102453715A (zh) | 一种高效抗胶质瘤新生血管生成的小分子干扰rna、其制备方法及其应用 | |
| CN101787368B (zh) | 抑制人Z38基因表达的siRNA及其在制备抗乳腺肿瘤药物中的应用 | |
| Zong et al. | Emerging roles of noncoding micro RNAs and circular RNAs in bovine mastitis: Regulation, breeding, diagnosis, and therapy | |
| CN113262304B (zh) | miR-4435-2HG和/或GDAP1基因抑制剂在制备治疗AML药物中的应用 | |
| CN104561004B (zh) | 一种用于抑制胶质瘤增殖的干扰tgm2基因的小分子rna及其制备方法和应用 | |
| CN101220359B (zh) | 一种抑制bak基因表达的siRNA序列 | |
| CN101200482B (zh) | 一个促进癌细胞凋亡的shRNA及其用途 | |
| CN102653762A (zh) | 具有抑制胃癌细胞bgc-823增殖功能的基因及其制备方法 | |
| CN110184271A (zh) | 一种mRNA-like ncRNA、抑制其表达的反义RNA及两者的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |